EDTA-K2抗凝论文

EDTA-K2抗凝论文（共4篇）

EDTA-K2抗凝论文 篇1

0引言

体液(body fluid),细胞内液与外液的总称,主要包括脑脊液、胸腹水、关节液等。临床上产生胸腹水的病因主要有肝硬化、肝静脉闭塞、心脏衰竭、肾脏疾病、营养不良、厌食症、肿瘤、癌症等疾病[1,2,3]。计数胸腹水中的细胞含量可帮助临床研究疾病的发病机制,鉴别渗出液、漏出液,鉴别自发性细菌性腹膜炎等疾病[4,5,6]。检测关节液有助于区分关节肿胀为炎性或非炎性状态,计数脑脊液中的白细胞、红细胞含量可辅助诊断脑膜炎、脑炎、中枢神经系统疾病[7,8,9,10]。总之,精确计数体液对于疾病的鉴别诊断、病情预后评估具有十分重要的意义。随着临床检验医学技术的发展,传统手工计数体液细胞已不能满足临床需要,具有体液测定功能的仪器已逐渐应用于医疗领域[11,12,13,14]。临床工作中,体液标本受患者病情、采集时间、检测条件等多种因素影响,导致体液标本不能及时检测,同时体液标本易发生自凝、细胞溶解现象, 影响细胞计数,使检测结果准确性降低,延误临床诊断与治疗。EDTA-K2具有良好抗凝作用,本文对是否可以在标本采集时加入EDTA-K2来保护体液中的细胞成分,提高细胞计数的准确性进行研究,现将结果报告如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1标本来源

110份体液标本均取自2013年11月至2014年6月河北北方学院附属第一医院住院、门诊患者的体液标本。其中,男58例,女52例;年龄15~81岁, 平均(45.3±16.2)岁;胸水标本64例,腹水标本24例,脑脊液标本22例。标本由临床医师按标准操作规范采集后及时送检,所有患者均知情同意,符合本院医学伦理委员会标准。

1.1.2仪器与试剂

日本Sysmex XE-5000血细胞分析仪及配套试剂、校准品、质控品;EDTA-K2抗凝管。

1.2方法

1.2.1添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响

标本由临床医师按标准操作规范采集并及时送检,每份体液标本取1、2、4、2 m L,依次加入3支EDTA-K2抗凝剂及1支不含抗凝剂试管中,选用Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪测定白细胞 (WBC)、红细胞(RBC)、单个核细胞(MN)、多个核细胞(PMN),分析添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响。

1.2.2体液标本采集后不同时间细胞数量变化

收集体液标本,送检后及时测量,结果为对照组数据。由于脑脊液标本临床每次采集量较少,所以测量后的体液标本分装于EDTA-K2抗凝剂及无抗凝剂试管中各2 m L,置于4 ℃ 冰箱冷藏,分装后2、4、 6、12 h分别测量细胞含量,分析体液标本采集后在不同时间细胞数量的变化趋势。

1.2.3统计学方法

采用Excel 2007、IBM SPSS Statistics 19统计软件对数据进行统计处理,计量资料采用均数±标准差表示,即±s,选用Wilcoxon符号秩和检验进行分析,P<0.05为有统计学差异。

2结果

2.1EDTA-K2抗凝体液细胞计数结果

实验中选用胸水12例、腹水10例。经处理的体液标本进行测量后记录结果,WBC范围(48~12 422)×106/L,RBC范围(0~128)×109/L。无抗凝剂体液为对照组,加入3支EDTA-K2抗凝管的体液依次记为实验组1、2、3。经正态性检验P<0.05,数据属于偏态分布,选用IBM SPSS Statistics 19统计软件进行Wilcoxon符号秩和检验,结果见表1。

注:实验组与对照组无统计学差异(P>0.05)

结合表1及统计结果,对照组WBC与实验1、2、 3组经Wilcoxon符号秩和检验,Z值依次为-1.804、 -1.098、-1.883,RBC的Z值依次为 -2.060、-0.412、 -1.134,MN的Z值依次为 -0.550、-0.863、-1.255, PMN的Z值依次为-1.688、-1.138、-1.374,P均大于0.05,体液添加EDTA-K2抗凝剂各组相对于对照组细胞计数均无统计学差异。

2.2体液标本采集后不同时间细胞数量变化

实验选用胸水52例、腹水14例、脑脊液22例, 送检后立即进行检测,WBC范围(5~466 027)×106/L、 RBC范围(0~794)×109/L,检测结果作对照组数据, 分装后2、4、6、12 h检测的非抗凝、抗凝体液标本依次记为实验组2-N、2-E、4-N、4-E、6-N、6-E、12-N、 12-E,选用Wilcoxon符号秩和检验分析,结果见表2。用各时段抗凝组、非抗凝组细胞计数均值占对照组百分比作图,如图1~4所示。由图表可知,放置时间为4 h时,无抗凝剂组WBC、MN为91.1%、92.4%, 减少8.9%、7.6%,相对于对照组具有统计学差异 (ZW BC=-2.108、ZMN=-2.250,P <0.05);6 h后,WBC减少13.7%、MN减少11.7%、PMN减少22.8%(ZWBC= -3.515、ZMN=-2.830、ZPMN=-2.537,P<0.05);12 h后WBC减少22.3%、MN减少15.9%、PMN减少32.3% (ZWBC=-3.975、ZMN=-4.673、ZPMN=-3.512,P<0.05)。 抗凝组各时段WBC数量变化与对照组无统计学差异 (P>0.05),抗凝组、非抗凝组标本中各时段RBC数量与对照组均无统计学差异(P>0.05)。

注:*与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)

3讨论

随着现代医学的发展,体液常规检测日益受到临床工作人员重视,其对疾病的诊断及病情的评估及预后意义重大。手工计数体液红白细胞工作耗时费力,而体液细胞计数自动化可规避手工法的缺点[15], 使临床检验工作便捷、快速、精确。

由实验可知,临床采集体液标本时添加EDTAK2抗凝剂不会影响体液细胞数量测定的准确性。未添加抗凝剂标本送检后不及时测定,标本中的WBC数量会随放置时间延长出现下降趋势。在标本送检2 h后 ,WBC、MN、PMN检测数量 为原始对 照的95.5%、95.2%、95.6%,检测数值减少4.5%、4.8%、 4.4%(P>0.05);4 h后减少8.9%、7.6%、11.1%,其中, WBC、MN数量减少具有统计学差异(P<0.05);6 h后减少13.7%、11.7%、22.8%(P<0.05);12 h后减少22.3%、 15.9%、32.3%(P<0.05)。RBC数量变化无统计学差异(P>0.05)。由于EDTA-K2可有效保护体液细胞成分,实验中添加EDTA-K2抗凝剂后,WBC计数随着放置时间的延长下降趋势较小,标本采集后4 ℃ 保存12 h后WBC数量仅下降1.8%,RBC数量无明显变化。

胸腹水计数的准确性对于渗出液、漏出液的鉴别以及结核性胸、腹膜炎,化脓性细菌感染,恶性肿瘤等疾病的诊断具有十分重要的意义。对于脑脊液标本,由于其细胞含量相对较低,参考值范围较窄 (正常范围(0~10)×106/L),脑脊液细胞计数准确对于鉴别中枢神经系统疾病具有重要意义,检测结果不准确则严重影响临床诊断和治疗。因此,建议临床采集体液标本计数时,应抽取2~4 m L加入EDTAK2抗凝管中送检,以减缓体液标本中细胞数量因不能及时检测所造成的下降趋势,夜间急诊或不能及时检测的标本,可放置4 ℃ 冰箱冷藏,12 h内测定不影响计数结果的准确性。如未添加抗凝剂,则应在标本采集后2 h之内完成细胞计数,若检测时间延长, 则会导致白细胞计数减少、准确性降低,延误病情的诊断和治疗。

摘要：目的:研究添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响。方法:由临床送检的110份体液中取1、2、4、2 m L依次加入3支EDTA-K2抗凝剂及1支不含抗凝剂试管中,选用Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪测定白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、单个核细胞(MN)、多个核细胞(PMN),分析添加EDTA-K2抗凝剂对体液细胞计数的影响;另收集体液,送检后及时测量并分装EDTA-K2抗凝剂及无抗凝剂试管中各2 m L,4℃冷藏2、4、6、12 h分别测量细胞含量,分析体液采集后不同时间细胞数量的变化趋势。结果:体液添加EDTA-K2抗凝剂各组相对于对照组细胞计数均无统计学差异;体液抽取后如无抗凝剂,随放置时间延长,白细胞计数出现下降趋势,EDTA-K2抗凝体液则无下降趋势。结论:体液中添加EDTA-K2抗凝剂可提高体液细胞计数的准确性,减小临床体液标本不能及时检测对细胞计数的影响。

关键词：体液,EDTA-K2抗凝剂,细胞计数

EDTA-K2抗凝论文 篇2

1 材料与方法

1.1 标本来源

8例PTCP为我院的血小板假性减少的患者, 其中男5例, 女3例, 平均年龄43岁。在这8例患者中上呼吸道感染2例, 肺炎1例, 孕妇1例, 糖尿病1例, 骨折1例, 前列腺癌1例, 红斑狼疮1例。该8例患者查体无瘀斑、瘀点及其他出血症状, 但血常规检查都有PLT明显减少特点。另设对照组40例, 其中男24例, 女16例, 为健康体检者。

1.2 材料

S y s m e x X T-1 8 0 0 i血液分析仪, 奥林巴斯显微镜, 抗凝剂为EDTA-K2、枸橼酸钠。

1.3 方法

1.3.1 EDTA-K2抗凝血仪器计数

我们采集患者及对照者静脉血3.0mL于EDTA-K2抗凝管中, 在Sysmex XT-1800i血细胞分析仪上按操作规程操作[2]。

1.3.2 枸橼酸钠抗凝血仪器计数

采集患者及对照者静脉血3.0m L于枸橼酸钠抗凝管中, 如上操作。

1.3.3 手工法

我们用手工法采集患者指血20μL, 加入0.38mL草酸铵稀释液中, 显微镜下计数PLT。

1.3.4 染色法

采集指血, 涂片, EDTA-K2抗凝血也做血涂片, 瑞-姬氏染色后, 观察血小板分布情行。

1.4 统计学方法

本试验统计数据用均数±标准差表示, 组间采用t检验。

2 结果

2.1 8例PTCP患者EDTA-K2抗凝血PLT计数明显低于枸橼酸钠抗凝血和手工法 (P<0.001) , EDTA-K2与枸橼酸钠抗凝血PLT计数, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 而手工法和枸橼酸钠抗凝血PLT计数结果相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 其数据见表1。

2.2 40例对照者结果见表2。

8例患者的EDTA-K2抗凝血涂片中存在着的PLT聚集现象, 并且聚集的PLT数量不等, 体积不同。而指血无PLT聚集, 片中PLT分布均匀。

3讨论

EDTA依赖性血小板假性减少症是由于用EDTA盐作为抗凝剂的抗凝血在血细胞计数仪上检测时, 发生假性血小板计数减少, 而更换枸橼酸钠抗凝剂后重新抽取静脉血计数血小板恢复正常的现象。检验界同仁们应注意EDTA依赖性血小板假性减少症与真性血小板减少的鉴别。真性血小板减少为由疾病引起的血小板减低, EDTA盐抗凝血和枸橼酸钠抗凝血所测得的血小板均减低[3]。

PTCP临床发生率约为0.09%～0.21%[4]。EDTA依赖性血小板假性减少症 (PTCP) 的机制, 有观点认为由于乙二胺四乙酸盐作用于血液, 使血液中出现冷抗PLT自身抗体, 这种免疫介导的冷抗PLT自身抗体直接作用于PLT膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上, 产生卫星现象, 导致PLT产生互相凝集现象。EDTA依赖性血小板假性减少症多发生在糖尿病、孕妇、肿瘤患者、自身免疫性疾病、炎症及一些不明原因的疾病中。

如果发现患者的血小板计数在血液分析仪检测非常低, 检验人员要积极与医师沟通, 询问血小板减少的患者有无瘀斑、瘀点和其他出血的临床症状, 同时可用枸橼酸钠抗凝或用手工法计数血小板, 还可直接涂片染色镜检观察血小板聚集分布情况。另患者可以加做凝血象检查:凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原等项目, 以排除出血倾向[5]。

摘要：目的 探讨EDTA-K2引起血小板假性减少的因素及解决办法。方法 对8例假性血小板减少症 (PTCP) 患者分别用EDTA-K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血进行血细胞分析仪检测血小板 (PLT) , 同时手工法PLT计数。结果 EDTA-K2抗凝血PLT计数明显低于枸橼酸钠抗凝血和手工法 (P<0.001) , EDTA-K2抗凝血与枸橼酸钠抗凝血PLT计数结果差异有统计学意义 (P<0.01) , 而枸橼酸钠抗凝血PLT计数和手工法结果相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 EDTA-K2可引起PTCP。

关键词：EDTA-K2,血小板假性减少,血小板计数

参考文献

[1]徐志明, 祁慧, 李丰平.乙二胺四乙酸三钾导致血小板假性减少分析[J].检验医学与临床, 2008, 5 (9) :539-540.

[2]叶应妩, 王毓三, 申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社, 2006:11.

[3]吴卫, 崔巍, 李薇, 等.血小板聚集体计数在真性和假性血小板减少鉴别中的应用[J].中华检验医学杂志, 2009, 32 (5) :557-561.

[4]陈言伟, 张一民, 董娟.EDTA依赖性假性血小板减少症1例分析[J].中国误诊学杂志, 2011, 11 (4) :849.

EDTA-K2抗凝论文 篇3

1 材料与方法

1.1 材料

本院门诊患者和健康体检者43例,随机取样。按常规方法分别采血至2个真空玻璃试管中各3 ml,其中1管不抗凝,另外1管为EDTA-K2抗凝。抗凝血浆取血充分混匀后即刻离心分离血浆,不抗凝血清室温放置1 h后血清析出离心分离血清供检。

1.2 仪器与试剂

全自动化学发光免疫分析仪(美国贝克曼库尔特公司)UniCel DxI800 Access。血清总三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、TSH、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)检测试剂均为原装进口配套试剂

1.3 方法

为保证实验结果的准确性及可比性,所有样品有专人负责测定,仪器校准并用质控品做质控,将EDTA-K2血浆以及血清样本放入同一UniCel DxI800 Access化学发光仪进行检测。

1.4 统计学方法

用SPSS20.0统计学软件处理数据,EDTA-K2血浆与血清的甲状腺激素及TSH检测结果为计量资料,经Kolomgorov-Smirnov检验,血清的T3、T4、FT3、FT4和EDTA-K2血浆的T3、T4、FT3为正态分布数据,以均数±标准差(±s)表示,实施t检验,用Pearson相关分析分析血浆与血清结果间的相关性,r>0.700为高度正相关[1];EDTA-K2血浆和血清的TSH以及EDTA-K2血浆的FT4为偏态分布,以中位数表示,EDTA-K2血浆与血清的检测结果的比较采用Wilcoxon检验,用Spearman相关分析分析EDTA-K2血浆与血清结果间的相关性,r>0.700为高度正相关[1]。P<0.05表示两组间差异有统计学意义且高度相关,采用回归模式建立回归方程。

2 结果

EDTA-K2血浆与血清进行甲状腺激素及TSH测定并将结果进行统计学处理。见表1。

注：两种样本比较,P<0.05

2.1 资料表明的结果

EDTA-K2血浆与血清结果比较可见,甲状腺激素及TSH的水平差异有统计学意义(P<0.05)T3、T4、FT3、FT4血浆值高于血清值,TSH血浆值低于血清值。相关分析显示甲状腺激素及TSH检测结果血浆与血清均具有高度正相关关系。

2.2 回归方程计算结果

血清T3浓度(Y)与EDTA-K2血浆T3浓度(X)的回归方程为Y=0.488X+0.513,(r2=0.547)；血清T4浓度(Y)与EDTA-K2血浆T4浓度(X)的回归方程为Y=0.858X+8.505,(r2=0.909)；血清FT3浓度(Y)与EDTA-K2血浆FT3浓度(X)的回归方程为Y=0.880X-1.879,(r2=0.835)；血清FT4浓度(Y)与EDTA-K2血浆FT4浓度(X)的回归方程为Y=0.797X+1.750,(r2=0.926)；血清TSH浓度(Y)与EDTA-K2血浆TSH浓度(X)的回归方程为Y=1.237X-0.006X2+0.028(r2=0.996)。

3 讨论

UniCel DxI800 Access分析仪是将包被单克隆抗体的顺磁性颗粒和待测标本加入反应管中标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合,再加入碱性磷酸酶标记的抗体,经温育后形成固相包被抗原-抗体-酶标记抗体复合物；在电磁场中洗涤分离,再加入底物发光剂,发光剂被结合在磁性离子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因,生成不稳定的中介体,中介体分解,发射光子。为快速准确的向临床提供检测结果。本文对比测定了EDTA-K2血浆与血清的甲状腺激素及TSH,并将检验结果进行统计学分析。本实验显示EDTA-K2血浆甲状腺激素及TSH与血清结果差异有统计学意义(P<0.05),T3、T4、FT3、FT4血浆高于血清,TSH血浆低于血清。Glendenning[2]报道,在样本、试剂混合液中加入过量EDTA,导致金属阳离子螯合,影响化学发光反应中碱性磷酸酶标记的活性。而本实验EDTA-K2血浆值与血清值存在差异,推想可能由于样本中的EDTA-K2影响化学发光反应中碱性磷酸酶标记的活性。另外观察本实验发现：EDTA-K2血浆的T3、T4、FT3、FT4、TSH与血清结果差异均有统计学意义(P<0.05),且高度正相关,这些项目可以用血浆代替血清,但需要建立回归方程将血浆值换算成血清值或者建立血浆参考体系。但目前的参考体系源于血清,如果再建立血浆参考体系就会造成2种参考值在临床同时使用,容易产生混乱[3]。鉴于此种原因,认为可以将EDTA-K2血浆的T3、T4、FT3、FT4、TSH的测定结果利用回归方程转换为血清值,然后以血清值的形式发放报告。为了证实此方法的可靠性,用回归方程转换后的43例EDTA-K2血浆的T3、T4、FT3、FT4、TSH的血浆值与血清值同时进行配对样本t检验和Wilcoxon检验,结果差异无统计学意义(P>0.05)。

综上所述,EDTA-K2血浆适合甲状腺激素及TSH项目的测定,但EDTA-K2血浆的T3、T4、FT3、FT4、TSH的测定结果需要建立回归方程将血浆值换算成血清值。

参考文献

[1]胡良平.检验医学科研设计与统计分析.北京:人民军医出版社,2004:150.

[2]Glendenning P.Preanalytical factors in the measurement of intact parathyroid hormone with the DPC IMMULITE assay.Clin chem,2002,48(3):566-567.

EDTA-K2抗凝论文 篇4

1.1 一般资料

2011年8月至2012年10月间, 全自动血细胞分析仪计数PLT<60×109/L, 血涂片观察血小板分布情况与计数结果明显不符, 用非EDTA-K2抗凝剂其他方法复检血小板计数均正常范围, 发现确定假性血小板减少3例。

1.2 方法

1.2.1 仪器

为美国贝克曼LH750全自动五分类血细胞分析仪, 美国贝克曼AC·T 5diff全自动五分类血细胞分析仪和日本MEK 7222K五分类血细胞分析仪, 试剂、校准物、质控物均为仪器配套试剂。

1.2.2 方法

对近一年间, 我们检验科用全自动血细胞分析仪检测PLT<60×109/L, 同份血涂片, 经瑞-姬氏染色镜检:血涂体尾交界区域极少见血小板, 片尾部血小板呈大片状聚集分布, 血小板大小、形态正常。对此类情况的患者, 我们及时与临床联系, 一方面尽量多了解病例资料, 首先排除护士抽血技术因素。一方面与患者沟通, 取得患者同意, 我们亲自到床旁重新抽血、采集标本:毛细血管血 (无名指指端内侧) 20μL加入2mL日本MEK 7222K五分类血细胞分析仪配套稀释液, 毛细血管血涂片2张, 枸橼酸钠抗凝静脉血2mL (血凝标本管采血) , 保证10min内[1]用贝克曼全自动五分类血细胞分析仪进行检测, EDTA-K2抗凝静脉血2m L。

2 结果

3 例患者复查结果如表1。

从复检结果我们看出:用EDTA-K2抗凝剂, 血小板计数明显再次减低;枸橼酸钠抗凝及毛细血管血计数血小板计数均正常范围, 结果基本无差异。而涂片染色镜检:EDTA-K2抗凝血涂片血小板分布异常, 片状聚集;末梢血涂片血小板分布正常, 聚集、散在易见。而患者又无血小板减少的其他临床症状和体征。由此证实患者是EDTA-K2依赖性假性血小板减少。我们把检验信息及时正确的报告给了临床。

3 讨论

EDTA-K2介导的血小板体外黏附、聚集, 全自动血细胞分析仪不能正确识别、计数, 导致血细胞分析仪计数血小板结果假性减少的现象, 即所谓的“EDTA-K2依赖性假性血小板减少症”。其发生率为0.07%～1.00%[2]。据文献报道[3]:血小板黏附、聚集的机制是由于EDTA-K2作为抗凝的前提下, 出现了免疫介导的冷抗血小板自身抗体, 这种抗体可直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上。同时这种血小板结合的自身抗体Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合, 出现“卫星”现象。这种外源性诱导剂引起的血小板聚集反应, 标本放置时间越长, 室温越低, 血小板黏附、聚集越严重。EDTA-K2致假性血小板减少多发生在肿瘤患者、自身免疫性疾病、肺心病、肝病、晚期孕妇等, 此现象是其他疾病的伴随现象, 随疾病的好转而消失, 没有临床治疗意义。EDTA-K2引起假性血小板减少的病例日见增多, 工作中我们应该高度重视, 全自动血细胞分析仪筛选出的明显异常结果, 我们一定要首先涂片染色镜检, 观察血小板大小、形态、分布及聚集性。初步评估血细胞分析仪计数结果是否相符, 与临床联系, 了解病人信息和护士抽血情况, 当怀疑是假性血小板减少时, 根据实际情况换用其他抗凝剂, 用不同方法进行复检。保证检验结果的时效性, 准确性, 避免误诊。

参考文献

[1]童敏, 方颖, 王永才.纠正EDTA-K2抗凝剂依赖引起的假性血小板减少的方法学探讨[J].中国医疗前沿, 2009, 4 (20) :1673-5552.

[2]孙杨, 丘江.抗凝剂乙二胺四乙酸致血小板假性减少[J].检验医学与临床, 2008, 5 (8) :504.