SOD、MDA

SOD、MDA（共7篇）

SOD、MDA 篇1

CAG是一种常见病、多发病,其发病率占胃镜检查者的7.5%～13.8%,发病率随着年龄增长而有所升高[1],16～30岁仅9%,而51～65岁可达53%,年龄增加10岁发病率增加14%[2]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一种抗氧化酶。本实验观察胃痞消对慢性萎缩性胃炎大鼠胃粘膜恢复的作用通过血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影响, 研究胃痞消对慢性萎缩性胃炎大鼠的治疗作用, 并进一步探讨该方治疗该病的作用机理。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 实验动物

SPF级SD大鼠,雄性,体重180～220g,由广东省医学实验动物中心提供,实验动物生产许可证号SCXK(粤)2008-0002,实验动物质量合格证号NO.0085938。动物实验环境: 广东省中医研究所SPF级动物实验室,设施使用许可证号SYXK(粤)2010-0059。

1.1.2 药品与试剂

N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),由东京化成工业株式会社提供,批号ZG4T1-FP;维酶素片由北海阳光药业有限公司提供,批号110310;超氧化物歧化酶测定试剂盒、丙二醛测定试剂盒,南京建成生物工程研究所提供,货号A001-1。胃痞消方具有健脾益气、化瘀解毒等功效。该方主要由黄芪、白术、太子参、丹参、白花蛇舌草等组成。

1.2 实验方法

1.2.1 CAG大鼠模型复制

先用灭菌自来水将MNNG配制成10mg/L浓度的储存液避光冷藏保存。临用时将其配成150μg/mL的饮用液,装入200mL的饮水瓶中,外贴黑色避光纸,整个过程全部避光操作,75只SPF级SD大鼠随机分对照组(10只)、模型组(17只)、维酶素组(12只,按0.2g/kg灌胃2mL/只/天)、胃痞消高剂量组(12只,按30g/kg·d-1,相当于临床用量的15倍同其它组等量灌胃)、中剂量组(12只,按20g/kg·d-1,相当于临床用量的10倍等量灌胃)和胃痞消低剂量组(12只按10g/kg·d-1,相当于临床用量的5倍等量灌胃)。除空白对照组外所有大鼠均采用MNNG饮用液自由用法复制CAG大鼠模型,连续12周,空白对照组予以正常饮食。

1.2.2 给药方法与标本制备

于造模后第9周从模型组随机抽取5只大鼠,取胃黏膜组织,制作病理切片,确认胃黏膜有大肠上皮化生后开始灌胃给药,连续灌胃4周。于造模后第12周,末次灌胃给药前空腹12h,末次给药后2h用乌拉坦对大鼠进行麻醉, 每只大鼠经腹动脉插管取血5mL,血样静置2h后用离心机离10min,3 300转/min,取血清,保存在-20℃的低温环境下,待取样测SOD、 MDA含量。

1.2.3 测定方法

血清SOD活力及MDA含量检测:取血清分成两份,一份加入超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂,混匀后,室温下放置10min后于波长550nm处测定管的吸光度值,并通过公式[SOD活力(μ/mL)=(对照管吸光度-测定管吸光度)×2×反应体系稀释倍数×样本测试前的稀释倍数/对照管吸光度]计算可求出被测样品中的SOD活力。一份加入丙二醛(MDA)测定试剂,混匀后试管口用保鲜膜扎紧,用针头刺小孔,95℃水浴40min,取出后流水冷却,然后3 500～4 000转/min,离心10min。取上清液于532nm处测各管吸光度值,再通过计算公式[血清中MDA含量=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)×标准样品浓度(10nmol/mL)×样品测试前稀释倍数/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)] 可计算出样品中MDA的含量。

1.3 统计学处理

SPSS13.0软件包行统计学分析,采用χ2检验和四格表精确概率法,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

由表1可知,模型组与正常对照组相比,模型对照组大鼠中SOD活力明显下降(P<0.05或P<0.01),MDA值明显增高(P<0.05 或P<0.01),维霉素组和胃痞消三个剂量组与模型对照组比较,SOD活力明显升高(P<0.05),MDA值明显降低(P<0.05)。胃痞消三个剂量组之间,SOD活力、MDA值没有明显差异(P>0.05)。

图1、图2显示,胃痞消各剂量组及维酶素组对大鼠的慢性萎缩性胃炎癌前病变胃粘膜的保护具有较好的治疗作用,且胃痞消各剂量组间有明显的量效关系,综合比较胃痞消各剂量组对大鼠的慢性萎缩性胃炎癌前病变的治疗作用相对于维酶素组较明显,尤其以胃痞消高剂量组更为明显。

注:①与正常对照组相比,**P<0.05或P<0.01;与模型对照组比较,&P<0.05。②胃痞消三组给药组间对比,#P<0.05。

3 讨论

正常情况下人体内的自由基处于不断产生与清除的动态平衡。生理状态下自由基的浓度很低,不仅不会损伤机体,而且还显示出独特的生理作用:吞噬细胞杀灭外来病原微生物,参与合成某些重要的生物活性物质,参与许多酶促反应,参与解毒作用[3]。

自由基非常活泼,化学反应性极强,参与一系列的连锁反应,引起细胞生物膜上的脂质过氧化,造成细胞损伤。MDA是脂质过氧化反应形成的产物,检测MDA是了解体内脂质过氧化最常用的方法。本实验也显示模型组MDA升高表现大鼠慢性萎缩性胃炎有细胞损害,维酶素组和胃痞消三个剂量组MDA都降低表明胃粘膜有恢复现象。SOD是自由基清除防御系统最重要的标志酶之一,在胃壁细胞内活性很高,可在一定程度上反映机体清除自由基能力的大小。现代研究认为脂质过氧化是氧自由基引起组织损伤的主要机理,氧自由基的代谢失衡在胃肠黏膜损伤中起着重要作用。慢性胃炎患者胃黏膜组织中的SOD活力降低已被公认[4]。有报道认为在慢性胃炎黏膜组织中氧自由基水平升高,造成对胃黏膜的损害,可能是慢性胃炎的重要发病机制[5]。

胃痞消有健脾益气、活血化瘀解毒的作用。方中黄芪、白术、太子参有益气健脾作用;太子参皂苷可降低血中MDA含量,提高血中SOD活力;白术健脾燥湿,白术水煎液可显著提高老年小鼠全血GSH-PX活力,显著降低红细胞中MDA含量。黄芪有抗氧化作用,可降低动物血清中过氧化脂质和肝脏脂褐素含量。有研究表明过氧化氢损伤中国仓鼠肺细胞(V79)引起SOD活性降低,黄芪总黄酮有回升SOD活性的作用,可减少脂质过氧化物对生物膜的损害。本研究表明模型组血清SOD水平明显降低,MDA水平均明显升高,表明过氧化脂质损害增强,而抗氧化能力减弱,胃黏膜受到损害,进一步证明了自由基代谢异常在慢性胃炎发病中起着重要作用。经胃痞消治疗后,大鼠血清SOD含量明显升高,MDA含量明显下降并接近正常,表明胃痞消通过升高SOD含量、降低MDA含量来实现对本病的治疗作用。

参考文献

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SOD、MDA 篇2

1材料

1.1 动物

昆明种雄性小鼠, 体重32～38g;雌鼠, 体重28～32g;由山东大学实验动物中心提供, 合格证号:鲁动饲字:20001003。

1.2 药品与试剂

CBB-G250:中国医药集团上海化学试剂公司。BSA:山东爱博科技贸易有限公司进口分装。NO、NOS、SOD、MDA检测试剂盒:南京建成生物工程研究所。

1.3 主要仪器

JA1003型电子天平:上海天平仪器厂。DY89-Ⅱ型匀浆机:宁波新芝生物科技股份有限公司。LD5-2A型低速离心机:北京医用离心机厂。220A型分光光度计:日立日本。

2方法

2.1 “劳倦过度、房事不节”肾阳虚小鼠模型复制、动物分组及给药方法 参见文献[1]。

2.2 动物处理 实验4周后, 称动物体重, 迅速摘取一侧睾丸, 称重, 制备10%匀浆。

2.3 指标测定 睾丸匀浆的蛋白定量:Bradford法。睾丸匀浆NO和总NOS活性测定:酶法。睾丸匀浆SOD总活力测定:黄嘌呤氧化酶法。MDA含量测定:TBA法。各指标均按试剂盒说明进行规范操作。

2.4 统计学处理 数据资料以undefined表示, 采用两组比较t检验判断差异显著性。用SPSS11.0软件包进行数据处理。

3结果 见表1。

与正常组比较*P<0.05, **P<0.01;与模型组比较△P<0.05, △△P<0.01

4讨论

哺乳动物和人在新陈代谢过程中会产生一定量的自由基, 其中95%以上是氧自由基。在正常情况下, 睾丸中可生成一定程度受控的自由基, 它与精子的生理功能有关。当自由基的产生超出了抗氧化系统的清除能力时, 则会攻击精子, 对精子及生物大分子产生各种毒性作用影响睾丸的生精功能。生殖细胞中自由基生成与清除系统的动态平衡是维持生殖细胞功能正常的必要条件。

NO是一种具有广泛生物学活性的信使分子, 是一种不稳定的小分子, 其结构存在未配对电子, 具很强的自由基氧化特性。NOS催化L-精氨酸合成NO。NO、NOS广泛存在于哺乳动物的生殖系统内, 对各种生殖活动起重要作用[2]。低浓度NO刺激睾酮分泌, 高浓度则起抑制作用, NO对精子的发生、成熟和运动具有调节作用[3], 过量的NO导致生精障碍, 从而导致不育[4]。近年来发现, NO对下丘脑促性腺激素释放激素[5]、垂体促性腺激素[6]及睾丸间质的内分泌功能[7]都具有调节作用。

超氧化酶歧化酶 (SOD) 对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用, 此酶能清除超氧阴离子undefined保护细胞免受损伤。SOD活力的高低反映了机体清除氧自由基的能力。机体产生的自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸, 引发脂质过氧化反应, 并因此形成脂质过氧化物。如:醛基 (如丙二醛MDA) 、酮基、羟基、羰基以及新的氧自由基等。MDA含量的高低反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度, 也反映了细胞受损程度[8]。

从本实验结果可以看出, 模型小鼠睾丸组织内自由基生成增多, 自由基清除能力下降, 肾气丸可以提高模型小鼠睾丸组织SOD活力, 降低NOS活力及MDA和NO含量, 从而为精子的发生与成熟提供一个优良的抗氧化环境, 由此改善了模型小鼠的生精功能, 有效提高了精子活动力, 佐证肾阳虚模型制备的合理性。

摘要：目的:以“劳倦过度、房事不节”肾阳虚小鼠为模型, 观察该模型小鼠睾丸NO、NOS和MDA、SOD的变化。方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度, 以Colldege效应诱导雄性小鼠房事不节, 建立肾阳虚小鼠模型。造模4周后, 检测睾丸组织匀浆中NO和MDA含量以及NOS和SOD活力。结果:造模组睾丸中NO含量和NOS活力显著增强 (P<0.01) , MDA含量上升 (P<0.05) , SOD活力下降 (P<0.05) ;肾气丸干预组NOS活力显著降低 (P<0.01) , NO和MDA含量明显减少 (P<0.05) , SOD活力升高 (P<0.05) 。结论:肾阳虚小鼠睾丸组织内自由基生成增多, 自由基清除能力下降。

关键词：肾阳虚/中医药疗法,金匮肾气丸/治疗应用,睾丸/酶学,超氧化物歧化酶类/代谢,一氧化氮合酶/代谢,一氧化氮/代谢,丙二醛/代谢,小鼠

参考文献

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SOD、MDA 篇3

1 材料与方法

1.1 中药复方

将当归40 g、川芎40 g、桃仁20 g、红花20 g、益母草60 g、炮姜20 g、甘草15 g (以上中药购自青海大学农牧学院动物医院) 、红糖 (市购) 100 g、黄酒 (市购) 50 mL、牦牛胎盘 (采自青海省海西州天峻县) 20 g水煎, 过滤出的药液在电炉上浓缩至500 mL。

1.2 试验动物分组及处理

6～8周龄昆明种小鼠60只, 雌雄各半, 由青海地方病研究所实验动物中心提供。常规饲养3 d, 观察无异常后备用。将小鼠随机分为D-半乳糖药物组、D-半乳糖对照组和对照组, 每组20只。D-半乳糖药物组和D-半乳糖对照组小鼠背部皮下注射D-半乳糖0.15 mL/d, 对照组注射生理盐水0.2 mL/d;D-半乳糖药物组口腔灌服中药复方0.2 mL/d, D-半乳糖对照组和对照组灌服生理盐水0.2 mL/d;15 d后脱颈椎处死所有小鼠, 取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏备用。

1.3 试剂

D-半乳糖 (批号为080711) , 购自上海蓝季科技发展有限公司;SOD试剂盒 (批号为091231) 、MDA试剂盒 (批号为091231) , 均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 组织匀浆的制备

取小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各0.3 g制成10%组织匀浆, 备用。

1.5 SOD活性和MDA含量的测定

按照试剂盒说明分别测定衰老小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中SOD活性和MDA含量。

1.6 统计学分析

应用SPSS统计软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 中药复方对衰老小鼠体重的影响

给药前分别称取各组小鼠体重, 15 d后再分别称取各组小鼠体重, 结果15 d后D-半乳糖药物组和对照组与D-半乳糖对照组相比差异显著 (P<0.05) , 给药前后各组小鼠体重变化结果见表1。

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

2.2 中药复方对衰老小鼠部分组织中SOD活性的影响 (结果见表2)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表2可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能提高衰老小鼠其他组织中SOD的活性 (P<0.05或P<0.01) 。

2.3 中药复方对衰老小鼠部分组织中MDA含量的影响 (结果见表3)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表3可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能降低衰老小鼠其他组织中MDA含量 (P<0.05或P<0.01) 。

3 讨论

以D-半乳糖制备亚急性衰老模型的方法是目前国际上公认的建模方法[8], 该模型使机体细胞内半乳糖浓度增高, 在醛糖还原酶催化下还原成半乳糖醇。这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在体内影响正常渗透压, 导致细胞代谢紊乱, 破坏机体抗氧化防御系统使自由基积聚, 导致衰老[9,10]。在衰老机制研究中, 超氧自由基学说已受到广泛的关注, 在动物衰老的过程中, 体内超氧自由基含量不断增多、机体自身的抗氧化系统活性降低是机体衰老的主要原因之一[11,12]。

SOD、MDA 篇4

关键词：依达拉奉,脑出血,自由基,SOD,MDA

脑出血 (ICH) 是指脑实质的血管发生破裂出血, 因其发病急、进展迅速以及高致残率和高致死率等特点, 被临床医生高度重视。研究证明, 急性脑出血后生成大量自由基, 造成脑组织不可逆的损伤, 导致神经功能障碍加重。依达拉奉是自由基清除剂, 临床应用对脑出血具有确切疗效[1]。该实验于2013年5月—2013年10月在辽宁医学院生理实验室完成。通过检测实验大鼠脑出血经依达拉奉治疗后SOD、MDA含量, 观察大鼠脑出血急性期应用依达拉奉治疗后血肿周围脑细胞自由基清除情况, 为探讨依达拉奉在脑出血急性期应用提供理论依据。

1 实验动物与药品、仪器

实验动物:90只清洁级SD大鼠, 3~4月龄, 雌雄不限, 重200~300 g, 常规室温25℃, 正常进食、饮水。 (辽宁医学院实验动物中心提供, 批号033) 。实验过程遵循《关于善待实验动物的指导性意见》[2]。药物:依达拉奉注射液 (易达生, 吉林省博大制药有限责任公司, 国药准字:H20051992) , SOD、MDA试剂盒 (购自南京建成生物工程研究所, 试剂为国产分析纯级) 。主要仪器:脑立体定位仪 (美国Ridge Tool公司) ;微量进样器 (淄博库仑分析仪器有限公司) 。

2 方法

2.1 分组和给药

90只大鼠随机分成假手术组, 脑出血组和依达拉奉治疗组, 各30只;3组大鼠均为雌雄各半, 年龄为3~4个月, 假手术组平均体重为 (71±2.0) g, 脑出血组平均体重为 (72±1.5) g, 依达拉奉组平均体重为 (73±1.4) g, 且3组健康状况均良好, 正常进食和饮水, 无明显差异, 具有可比性。治疗组造模后立即尾静脉注射依达拉奉, 用量为每次3 mg/kg, 2次/d。脑出血组造模后立即向大鼠尾静脉注射同等量生理盐水, 假手术组不注血, 其余方法与脑出血组相同。

2.2 模型的制备

按照Xue[3]所提供的方法制成脑出血模型。在立体定位仪引导下以25 u L/min速度向大鼠右侧尾状核 (矢状缝向右旁开3.0 mm, 前囟后方0.2 mm, 取深度5.8 mm) 注入自体尾静脉血50 u L;2 min内注完;停针10 min。假手术组不注血, 其余方法与脑出血组相同。

2.3 按照Longa评分标准进行评分

0分:无神经系统功能缺损的体征;1分:左侧前肢不能完全伸展;2分:爬行时, 大鼠向左侧追尾转圈;3分:爬行时, 大鼠向左侧倾倒;4分:无自发性活动或伴有意识障碍。神经功能评分等于3分的大鼠入选本实验[4]。

2.4 取材及SOD、MDA测定

各组大鼠均于造模后48 h处死, 迅速取针道后脑组织标本称重, 将脑组织与生理盐水按1 g∶10 m L比例在冰水中用匀浆机充分匀浆, 4 000 r/min离心, 15 min后取上清液, 配成10%的脑组织匀浆, 黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性, 改良的硫代巴比妥酸法测定MDA。

2.5 统计方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析及处理。计量资料采用t检验, 用均数±标准差 (±s) 表示, 多组间比较用方差分析。

3 结果

假手术组和脑出血组相比, SOD含量明显减少, 说明SOD活性明显降低, 而MDA含量显著增多, 表明MDA活性明显升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;依达拉奉组与脑出血组比较, SOD含量明显增高, 差异有统计学意义 (t=17.624, P<0.05) 。而MDA含量明显降低, 差异有统计学意义 (t=5.246, P<0.01) 。见表1。

注:脑出血组与假手术组比较, *P<0.05;依达拉奉治疗组与脑出血组比较, #P<0.01。

4 讨论

脑出血后神经细胞损伤是多种原因综合作用的结果, 其中自由基产生是引起神经细胞损伤重要因素之一。依达拉奉亲脂性强, 在血脑屏障中的透过率达到60%[5], 具有较强的自由基清除能力。由以上表1可知, 在3组中, 脑出血组SOD值 (57.35±7.56) 与假手术组SOD值 (70.06±3.98) 比较, SOD活性显著降低, 而脑出血组MDA值 (4.98±0.43) , 假手术组为 (1.31±0.13) , 相比含量增加 (P<0.05) , 依达拉奉治疗组SOD含量为 (65.05±8.96) 与脑出血组 (57.35±7.56) 相比, 神经细胞SOD明显增高 (P<0.05) , 而MDA含量, 依达拉奉组为 (2.24±0.38) , 脑出血组为 (4.98±0.43) , 明显减低, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 由此可推断, 在脑出血急性期, 应用依达拉奉可清除血肿周围的脑细胞自由基, 避免脑组织的不可逆损伤, 此研究结果与刘春寒, 薛慎伍等[6]在关于依达拉奉对慢性脑缺血大鼠神经功能损伤的保护和MDA、SOD的影响中的研究结果相一致, 其意义如下所示。

4.1 SOD在3组中的变化及意义

该研究结果显示:脑出血组与假手术组比较SOD活性显著降低, 说明ICH后血肿周围脑组织氧化抗氧化平衡紊乱, 有大量自由基产生, 可能是清除自由基系统受到消耗或抑制。依达拉奉治疗组与ICH组比较SOD活性显著增加, 说明依达拉奉具有清除血肿周围脑组织中自由基, 减轻自由基对脑组织的病理损伤作用。

4.2 MDA在3组中的变化及意义

MDA是脂质过氧化的终产物, 其含量间接反映细胞受自由基攻击的严重程度。本研究结果显示:ICH组血肿周围脑组织MDA含量明显高于假手术组, 说明ICH后血肿周围脑组织氧化抗氧化平衡紊乱, 有大量自由基产生, 可能是清除自由基系统受到消耗或抑制。而依达拉奉组血肿周围脑组织MDA含量显著低于ICH组, 说明依达拉奉具有抑制血肿周围脑组织中自由基产生, 提高自由基清除能力, 对抗脂质过氧化作用。

综上所述, 依达拉奉具有增加SOD活性, 清除自由基、抗脂质过氧化、减轻脑水肿的作用, 在脑出血急性期应用效果明显。其可能的作用机制为通过抑制次黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶的活性, 降低甚至清除患者体内的氧自由基, 从而抑制神经细胞发生迟发型损伤, 使脑出血患者的神经功能得到改善[7,8]。研究表明, 依达拉奉有减轻脑水肿和脑组织损伤程度的作用[9], 其机制也与清除氧自由基, 抑制脂质过氧化及脑细胞过氧化作用有关。依达拉奉尚能通过刺激前列环素生成, 减少炎性介质白三烯生成, 而降低自由基浓度, 阻断自由基的级联反应, 同时抑制脂质过氧化, 阻止脑细胞凋亡, 促进神经功能的修复[10]。

该实验仅从依达拉奉清除自由基, 增加SOD活性, 减轻脂质过氧化单一角度探讨其作用机制, 存在局限性, 在实验条件充裕情况下, 应进一步研究依达拉奉多种作用机制综合作用结果, 为其临床应用提供全面, 透彻理论依据。

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SOD、MDA 篇5

1 材料和方法

1.1 材料

痢菌净, 山东华牧药业有限责任公司;医用生理盐水, 哈药集团制药六厂;肝素, 重庆市道生生化有限责任公司;考马斯亮蓝、SOD、MDA、T-AOC测定试剂盒, 均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 试验动物分组

将购买的海蓝蛋鸡预饲40d, 选择健康且体重相近的45只鸡随机分为3组 (对照组、低剂量组和高剂量组) , 于40日龄开始试验, 对照组饲喂基础日粮 (见表1) , 痢菌净低剂量组饲喂基础日粮+痢菌净400mg/kg, 痢菌净高剂量组饲喂基础日粮+痢菌净600mg/kg, 分笼常规饲养, 连续饲喂3d, 饲养期内观察鸡的临床表现。

1.3 血液样品的采集与处理

43日龄时, 将对照组、低剂量组和高剂量组3组试验鸡进行心脏采血, 分离血清;采血后剖杀试验鸡, 记录剖检变化, 采集胸腺、脾脏、法氏囊组织各0.5g, 冰浴下快速进行组织匀浆, 用于SOD、MDA和T-AOC的检测。

注:营养成分中代谢能及非植磷酸含量为计算值, 其余为实测值;每千克饲粮中添加维生素A 7 500IU、维生素D33 000IU、维生素E20mg、维生素K 1.5mg、维生素B110mg、维生素B23.0mg、维生素B63.0mg、维生素B120.01mg、泛酸8.0mg、烟酸20mg、叶酸0.25mg、氯化胆碱500mg、锰600mg、锌25mg、铜8.0mg、碘0.5mg、硒0.2mg、钴0.1mg、钠0.15mg。

1.4 检测项目及方法

SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化法;MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸法;T-AOC的测定采用化学比色法。

1.5 数据处理

应用SAS软件Anova方法进行数据的统计、处理与分析。

2 结果

2.1 临床表现及剖检变化

临床表现:病鸡缩颈呆立, 羽毛蓬乱、无光泽, 翅膀下垂, 喙、爪及面部发绀;饮欲和采食减少或废绝, 喜饮;排出的粪便呈黄白色或水样, 但无恶臭;个别雏鸡发出尖叫声, 乱飞, 乱跳, 腿软无力, 步态不稳;有的头后仰、扭颈、旋转, 神经症状明显, 最后倒地, 肌肉震颤, 抽搐而死。病程随中毒程度不同表现为长短不同, 短则数分钟, 长则1h, 个别鸡还表现为数小时。

剖检变化:死亡后的雏鸡全身脱水, 肌肉呈暗紫色;腺胃肿胀, 乳头暗红;肌胃皮质层脱落、出血、溃疡;肺脏瘀血、肿大;肠道有弥漫性小出血点;肝脏肿大, 呈暗红色, 质脆易碎;肾脏出血;心脏松弛, 心内膜及心肌有散在出血点。

2.2 组织和血清中超氧化物歧化酶的检测结果 (见表2)

注:同行数据肩注大写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 小写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 大写字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表2可见:脾脏、胸腺、法氏囊和血清中的超氧化物歧化酶活性随着痢菌净添加量的增加而下降;痢菌净低剂量组和高剂量组与对照组比较差异均极显著 (P<0.01) ;痢菌净低剂量组与高剂量组间比较除血清差异显著 (P<0.05) 外, 脾脏、胸腺和法氏囊差异均极显著 (P<0.01) 。

2.3 组织和血清中MDA的检测结果 (见表3)

注:同行数据肩注大写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 小写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 大写字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表3可见:脾脏、胸腺、法氏囊和血清中的MDA含量随着痢菌净添加量的增加而升高;脾脏、法氏囊的痢菌净低剂量组与对照组比较差异不显著 (P>0.05) , 痢菌净高剂量组与对照组比较差异均极显著 (P<0.01) ;胸腺的痢菌净低剂量组与对照组比较差异显著 (P<0.05) , 痢菌净高剂量组与对照组比较差异极显著 (P<0.01) ;血清的痢菌净低剂量组和痢菌净高剂量组与对照组比较差异均极显著 (P<0.01) 。痢菌净低剂量组与痢菌净高剂量组组间比较, 脾脏和血清差异均极显著 (P<0.01) , 法氏囊和胸腺差异均显著 (P<0.05) 。

2.4 组织和血清中T-AOC的检测结果 (见表4)

注:同行数据肩注大写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 小写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 大写字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表4可见:脾脏、胸腺、法氏囊和血清中的T-AOC活性随着痢菌净添加量的增加而下降;痢菌净低剂量组和痢菌净高剂量组与对照组比较差异均极显著 (P<0.01) ;痢菌净低剂量组与痢菌净高剂量组组间比较除胸腺差异显著 (P<0.05) 外, 脾脏、法氏囊和血清差异均极显著 (P<0.01) 。

3 讨论

根据此次鸡群发病经过、临床症状及病理变化等确诊鸡发生痢菌净中毒。

机体内存在一个自由基生成与消除的动态平衡系统, 在正常情况下, 机体代谢所产生的活性氧能被体内的抗氧化防御体系所清除, 维持细胞氧化—还原的自稳态。但是有研究者认为, 机体药物中毒时, 过量的药物中有害物质可迅速转化为活性极强的自由基, 使体内自由基增多。过多的自由基最易与细胞膜中的不饱和脂肪酸作用形成脂质自由基, 对生物膜类脂结构破坏性极大。自由基还可以氧化蛋白质, DasN等的研究表明:自由基对蛋白质的氧化损伤具有选择性, 氧化损伤可以引起特定生物功能的丧失;自由基可以与DNA、RNA反应, 引起主链断裂、碱基降解、氢键破坏、基因突变、细胞老化, 导致机体疾病的发生与发展。

在抗氧化系统中SOD可以清除O 2-, 而保护机体细胞免受损伤, 其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力。因而, SOD经常被用作环境胁迫与水域污染的潜在指标。MDA是脂质过氧化的产物, 常用MDA含量表示机体内脂质过氧化的程度, 间接反映出细胞氧化损伤的程度。T-AOC的大小可代表和反映机体抗氧化酶系统和非酶系统的综合状态, 也是反映机体抗氧化功能的一个良好指标。因此, 试验选择了SOD、MDA、T-AOC 3项指标作为评价痢菌净中毒鸡肝脏抗氧化系统功能的变化情况。

试验结果显示, 痢菌净可引起脾脏、胸腺、法氏囊和血清中SOD、T-AOC下降和MDA含量增加。SOD活性的下降表明机体可能受到了氧自由基的攻击, 而血清内该酶活性的下降, 则进一步表明了整个机体受到超氧游离基的攻击造成了细胞损伤。MDA含量在试验中均呈升高趋势, 表明动物机体在毒物进入机体后抗氧化能力降低, 发生了脂质过氧化反应。T-AOC是近几年研究发现的用于衡量机体抗氧化系统功能状况的综合性指标, 试验中T-AOC的降低更加说明痢菌净中毒能够引起细胞发生脂质过氧化反应, 导致机体的组织器官受到损害。

SOD、MDA 篇6

本试验以牦牛胎盘为原料, 提取胎盘肽, 研究其对衰老小鼠部分组织中超氧化物歧化酶 (SOD) 活性和丙二醛 (MDA) 含量的影响, 探讨其抗衰老的作用机制。

1 材料与方法

1.1 胎盘来源

自然分娩排出的牦牛胎盘, 采自青海省大通种牛场。

1.2 牦牛胎盘肽的制备

将冷冻的胎盘常温解冻, 洗净血液后用生理盐水冲洗胎盘, 取牦牛胎盘的子叶去除血管和筋膜, 将其剪碎 (1.0~1.5 cm3) , 于-20℃冻融3次;用高速组织捣碎匀浆机以12 000 r/min离心3 min, 共离心10次;再用高速冷冻离心机以8 000 r/min离心20 min;取上清液用0.45μm的滤器进行微滤, 以除去不溶物质。

1.3 药品

D-半乳糖 (批号为080711) , 上海蓝季科技发展有限公司生产。

1.4 试验动物分组及处理

将30只健康小鼠 (由青海省实验动物中心提供) 适应性饲养3 d, 称量体重为18~22 g, 随机分为药物组、阳性对照组和阴性对照组, 每组10只。药物组小鼠每日腹腔注射胎盘肽0.2 m L及颈背部皮下注射D-半乳糖0.2 m L, 阳性对照组小鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖0.2 m L, 阴性对照组小鼠每日腹腔注射生理盐水0.2 m L, 注射均按照无菌操作进行, 持续15 d后处死小鼠, 取心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏备用。

1.5 主要试剂

SOD试剂盒 (批号为130410) 、MDA试剂盒 (批号为130409) 、蛋白定量测试盒 (批号为130403) , 均由南京建成生物工程研究所提供。

1.6 组织匀浆的制备

取小鼠的心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各0.3 g, 制成10%组织匀浆, 备用。

1.7 SOD活性和MDA含量的测定

按照相应试剂盒说明书分别测定衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中SOD活性和MDA含量。

1.8 统计学分析

采用SPSS统计学软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 牦牛胎盘肽对衰老小鼠体重的影响

给药前称取各组小鼠体重, 15 d后再称取各组小鼠体重, 给药前后各组小鼠体重的变化情况见表1。

g

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表1可知, 给药后各组小鼠体重均增加, 且差异显著 (P<0.05) 。

2.2 牦牛胎盘肽对衰老小鼠部分组织中SOD活性的影响 (结果见表2)

U·mg-1

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表2可知, 药物组与阳性对照组相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏SOD活性均显著增强 (P<0.05) 。

2.3 牦牛胎盘肽对衰老小鼠部分组织中MDA含量的影响 (结果见表3)

由表3可知, 药物组与阳性对照相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏MDA含量均减少, 其中心肌、肝脏、脾脏、肾脏差异显著 (P<0.05) 。

nmol·mg-1

注:同列数据肩标字母相同表示差异不显著 (P>0.05) , 字母不同表示差异显著 (P<0.05) 。

3 讨论

衰老是生物体在生命周期中随着年龄的增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过程。随着衰老的发生, 动物表现为生产能力下降, 抵抗力下降, 血液中一些酶的活性降低[5]。研究表明, 随着年龄的增长, 机体内SOD的活性降低, 清除超氧自由基的能力逐渐下降。动物体内超氧自由基与脂类过氧化物又发生一系列的反应, 最终产物是MDA, 动物体内MDA含量不断增加, 又会加速机体的衰老。D-半乳糖衰老模型是目前较常用的一种人工催老模型, 具有衰老变化明显、模型稳定的特点。D-半乳糖造成衰老的原因是, 机体产生大量超氧自由基, 降低机体抗氧化能力, 脂质水平增加从而引起亚急性衰老[6]。在衰老机制研究中, 超氧自由基学说已受到广泛关注, 在动物衰老过程中, 体内超氧自由基含量不断增多、机体自身的抗氧化系统活性降低是机体衰老的主要原因之一[7,8]。

本研究发现, 药物组与阳性对照组相比, 衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏SOD活性均增强 (P<0.05) ;而衰老小鼠心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏MDA含量均减少, 其中心肌、肝脏、脾脏、肾脏差异显著 (P<0.05) 。表明牦牛胎盘肽能够提高衰老小鼠部分组织中SOD活性, 而SOD活性升高能够减轻组织细胞过氧化损伤, 降低脂类过氧化物的形成和分解过多的过氧化物, MDA含量降低, 从而具有一定的抗衰老作用。

参考文献

[1]刘月新, 李勋楚, 段茂芳, 等.一种新的免疫调节剂——胎盘因子的制备与研究[J].中国免疫学杂志, 1985, 1 (5) :51-54.

[2]丰慧根.胎盘免疫调节肽对免疫抑制状态小鼠的免疫调节作用[J].新乡医学院学报, 1995, 12 (2) :134-137.

[3]丰慧根, 任太芳, 韩金红, 等.胎盘免疫调节肽联合化疗药物抗肿瘤作用的研究[J].中国生化药物杂志, 1999, 20 (3) :129-131.

[4]王善辉, 葛利江.山羊胎盘肽对幼犬免疫功能和抗氧化功能的影响[J].西南农业学报, 2007, 20 (1) :123-127.

[5]HARMAN D.Free radical T heory of aging:free radicals in biology (Vol.15) [M].New York:Academic Press, 1982.

[6]崔旭, 李文彬, 张炳烈, 等.D-半乳糖对神经元和成纤维细胞拟老化作用的实验研究[J].中国应用生理学杂志, 1997, 13 (2) :131-133.

[7]李文楚, 章羽, 陈芳艳.超氧化物歧化酶研究及应用概况[J].广东蚕业, 2008, 24 (1) :45-49.

SOD、MDA 篇7

1 材料

1. 1 试验动物

选用六枝特区毛口乡( 海拔550 m) 临床健康南江黄羊12 只( ♀) ,体重( 20. 31 ± 1. 75) kg,作为试验动物。

1. 2 仪器与试剂

MDA试剂盒( 批号为20121011 ) 、SOD试剂盒( 批号为20121011 ) 、GSH - Px试剂盒( 批号为20121010) 及CAT试剂盒( 批号为20121011) 均购于南京建成生物工程研究所; 采血针、采血管市购; UNICO UV - 2000 紫外可见光光度计实验室提供。

2 方法

2. 1 试验动物处理及样品采集

随机挑选临床健康的南江黄羊12 只( ♀) 引入1 600 m高原,按常规方法饲养。分别在引入高原前( 第0 天) 、引入高原后第5 天、10 天、15 天、20 天、25 天采集静脉血液,冷藏,备测。

2. 2 测定方法

MDA、SOD、GSH - Px及CAT均按试剂盒说明书进行测定。

2. 3 统计学处理

使用SPSS 17. 0 软件进行统计处理,采用配对T检验分析数据差异显著性,数据用均数 ± 标准误( ± s) 表示,P < 0. 05 表示差异具有统计学意义。

3 结果

山羊引入高原前后,MDA、SOD、GSH - Px及CAT指标的检测结果见表1,与平原时相比,MDA在引入高原第5 天时显著增加( P < 0. 05) ,之后逐渐下降,在引入高原第15 天时接近平原时期值,有恢复趋向; GSH - Px值在引入高原后与在平原时相比变化最明显,在引入高原第5 天、第10 天时显著增加( P < 0. 05) ,在引入高原第5 天时达最高值后逐渐下降,在第25 天时与平原时期差异不显著( P > 0. 05) ;其他指标无统计学上的差异( P > 0. 05) 。

注: 与平原时比较,* 表示差异显著( P < 0. 05) 。

4 讨论

氧化应激是指在体内外环境有害条件刺激下,体内产生活性氧自由基( OFRs) 和活性氮自由基所引起的细胞和组织的生理和病理反应[3]。机体代谢自由基产生的方式繁多,但在体内自由基清除系统对抗下,处于不断产生与清除的动态平衡中,其中SOD、CAT、GSH - Px等酶在自由基清除中发挥重要作用。当体内氧化和抗氧化系统动态平衡失调,氧自由基大量积蓄不能及时清除时,极其容易使许多重要的生物大分子发生脂质过氧化反应,其中会产生典型的分解产物MDA,引起细胞和组织的损伤[4]。

有研究表明,不同海拔下自由基代谢存在差异,在组织缺氧或缺血期间抗氧化酶活力降低,而氧自由基和脂质过氧化产物增多。拉萨藏族正常人血清中SOD值低于西安汉族正常成人,而脂质过氧化物MDA高于西安汉族正常人[5]; 马森[6]报道,高海拔牦牛血清的总SOD、NO均显著高于海拔较低的耗牛;脂质过氧化物MDA则显著低于低海拔地区的耗牛。本研究中,山羊在进入高原后第5 天的MDA显著高于平原时水平,可能是由于高原应激使体内自由基增多,致使体内脂质过氧化反应增强,而使其脂质过氧化产物MDA含量显著增加。在生理状态下GSH -Px是防止自由基反应的酶防御系统,对机体产生的自由基进行清除,保护机体免遭损伤。本研究中,GSH - Px活力在引入高原第5 天、第10 天时显著高于平原时水平,与张西州等[7]报道相同。MDA在引入高原第10 天时降低至平原时水平,GSH - Px活力在引入高原第15 天随着恢复至正常水平,可能是由于MDA的增多诱导GSH - Px活力升高,在清除体内MDA中消耗了抗氧化酶,使得GSH - Px随着MDA降低而恢复正常水平。本研究中SOD、CAT在进入高原前后变化不大,可能与海拔差异幅度、试验动物品种有关,还需进一步研究。

以上研究表明,在低压缺氧、寒冷干燥、日照时间长、太阳辐射大的高原环境应激下,造成机体氧化与抗氧化系统失衡。因此,测定与氧化应激相关物质,可作为评估机体氧化损伤的程度和探讨轻症高原病发病机制的一种途径。

摘要：为了解山羊初进高原(25 d内),高原应激对丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)的影响,分析在高原习服过程中上述指标的变化规律及意义。选用临床健康山羊12只,引入1 600 m高原,分别在引入高原前(第0天)、引入高原后(第5天、10天、15天、20天、25天)采集静脉血液,进行MDA、SOD、GSH-Px及CAT检测。结果各指标与平原时期水平相比较,MDA在第5天显著上升,在第15天时接近平原时期水平;GSH-Px在第5天、第10天时显著增加(P<0.05),在第25天时差异不显著(P>0.05)。其他指标在进入高原后和平原时期水平比较无统计学上的差异(P>0.05)。结果提示,山羊引入高原会引起自由基代谢紊乱,应在引入高原前后做好抗应激措施。