HPLC测定法

HPLC测定法（通用12篇）

HPLC测定法 篇1

辣椒碱是辣椒果实中辛辣的主要化学成份,具有多种复杂的生理药理学活性[1],辣椒碱和二氢辣碱等辣味成分能促进血液循环,可作为健胃剂[2],并可以治疗各种神经源性疼痛及相关症状[3],同时辣椒碱软膏治疗关节痛有效,安全,迅速[4]。辣椒碱的含量测定主要采用凯式定氮法[5]、薄层层析法、气-质联用测定法[6]、液一质联用测定法、高效液相色谱法[7]等。我们于2008年2月～2009年2月期间,以辣椒精为原料,在前人的基础上进行了改进简化了样品前处理过程,以甲醇为溶剂,酸、碱提取,获得的辣椒碱粗品并通过HPLC测定相关含量,较以往文献所提供的辣椒碱类化合物的检测方法更佳,准确检测出样品中主要组分的含量,具有快速、简便、经济等特点。

1 实验部分

1.1 试剂和仪器

岛津高效液相色谱仪LC-6A型;TOSOHUV-8010紫外检测器和C-R6A数据处理机。辣椒精中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用;辣椒碱标准品由贵州五贝子发展有限公司提供,甲醇为HPLC级,水为二次蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

1.2 辣椒碱的提取

取辣椒精50g,加入0.5mol/L NaOH 500mL超声辅助提取30min,过滤,滤液,加入1mol/L HCL 25mL及500mL甲醇摇匀,浓缩,0.01%Na2CO3调至中性,摇匀,静置,离心,取上清液,经0.44μm滤膜过滤即可进样操作[8]。

1.3 标准品溶液及样品溶液的配置

精密称取辣椒碱标准品称取10mg于100mL容量瓶中,加甲醇溶解稀释至刻度,摇匀,配成的溶液备用。

1.4 HPLC条件的确定

色谱分析条件:色谱柱:C18反相柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.01%磷酸(18:2:1);流速1mL/min;柱温为室温;TOSOHUV-8010紫外检测器,检测波长为280nm;进样量为20μL,理论塔板数按芒果苷计算应不低于5 000,结果见图1。

2 结果与讨论

2.1 回归方程、线性范围及最低检出限

分别精密量取对照品溶液1、2、3、4、5mL标准品溶液于25mL容量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述辣椒碱对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,在上述色谱条件下测定峰面积,以A为色谱峰总面积,B(μg/mL)为辣椒碱含量线性回归得回归方程方程为:A=1.29×21B-1.32,r=0.9998。结果表明辣椒碱在(8.9～87)μg/mL的浓度范围内,与其峰面积呈良好线性关系,以3倍信噪比的进样量求得最低检出限为0.07μg。

2.2 流动相的选择

本实验参考了前人的实验方法,流动相:甲醇-水(80:20[9]、甲醇-0.1%磷酸水溶液(V:V=75:25)[10],前者分离效果不明显,并出现拖尾现象,后者没有明显的拖尾现象,但分离效果不太明显,在此条件下,本试验加入极性较强的乙腈,结果显示主峰与杂质峰仍能明显分离,且峰形拖尾较好,且出峰时间较快,峰形较好,故选择本系统为流动相。

2.4 检测波长选择

取辣椒碱对照品溶液进行光谱扫描,在230nm和28nm附近有两个强吸收峰,由于甲醇、乙睛作为检测辣椒碱的流动相组分的紫外截止波长均在210nm左右,若在230nm处进行测定会有较多的干扰因素,故选择280nm作为辣椒碱的检测波长。

2.5 稳定性实验

按样品测定方法制备供试品溶液,在室温下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h,精密取样品按上述色谱条件测定峰面积,计算相对偏差,得RSD为0.12%,说明样品液中的辣椒碱在24h内稳定,该实验方法有一定得实用性。

2.6 HPLC重现性实验

精密吸取样品溶液20μL,注入液相色谱仪,进样1次,同一处理方式平行5份,色谱测定,辣椒碱含量(mg/g)检测结果分别为2.00,1.98,2.01,2.03,2.02,平均含量为1.80mg/g,RSD%为0.12%,重现性良好。

2.7 精密度试验

精密吸取辣椒碱对照品溶液20μL,注入液相色谱仪,连续进样5次,测得峰面积,结果辣椒碱的RSD的0.18%(n=5),结果表明仪器精密度良好。

2.8 回收率实验

精密称取样品0.2g于1 00mL容量瓶中,分别加入标准品0.1g、0.2g、0,3g、0.4g、0.5g,加入甲醇溶解并稀释至刻度,超声振荡,摇匀,经0.44μm滤膜过滤,静置,精密吸取上述溶液20μL注入液相色谱仪,每个操作5个平行,计算加样平均回收率(n=5),结果表明回收率分别达到98.12%、97.37%、99.12%、98.78%、97.36%,RSD分别为0.13%、0.27%、0.32%、0.17%、0.16%,平均回收率为98.15%。

2.9 样品的测定

按照本方法的测定条件,分别测定3批样品,分别进样20μL,每个样品进样2次,测定样品中辣椒碱的平均峰面积,用标准曲线方程计算样品中辣椒碱的含量,采用外标一点法计算辣椒碱的含量。

3 结论

辣椒碱是一种含酚经基的生物碱,为辣椒中引起辛辣味的主要化学物质,是多邻甲氧基酚的衍生物,重要的是辣椒碱,约占46%～77%,其次是二氢辣椒碱,约占21%～40%,二者占90%以上;此外还含有少量降二氢辣椒碱、高二氢辣椒碱、高辣椒碱[11]辣椒碱作为调味品和药物使用已有几百年的历史,全世界近1/4的人口经常食用。我国是最早将辣椒作为药物使用的国家之一,中医用辣椒治疗胃寒、风湿等症,所以辣椒碱的测定具有能一定的实际意义。

供试品的制备:辣椒碱为弱极性的含酚羟基的生物碱,易溶于乙醚、甲醇、三氯甲烷、乙醇等溶剂,辣椒碱含量测定常用提取溶剂分别为乙醚、甲醇、三氯甲烷和乙醇,由于三氯甲烷毒性较大,因此采用甲醇、乙醇和乙醚三种溶剂进行试验比较。结果表明,在相同提取条件下,三种溶剂测得结果相近,但是甲醇提取后,辣椒碱显示稳定性较好,所以采用甲醇作为提取溶剂,同时考虑到辣椒碱的酚羟基的影响,采取0.5mol/L NaOH500mL超声辅助提取通过1mol/L HCL调整pH至中性,最终通过甲醇提取获得总辣椒碱,结果显示提取率较好。

采用高效液相色谱法测定辣椒提取液中辣椒碱含量,试验中采用甲醇-乙腈-0.01%磷酸(18:2:1;v/v)为流动相进行色谱分析,所出峰形尖锐,时间短,该方法的准确度、精密度、重现性、回收率都较高,它将对生产上最佳提取工艺的确定和生产质量的控制有着重要指导意义。试验表明,用HPLC法测定辣椒碱的含量,其峰形对称,分离完全,图谱简单,方法简便、快速,准确度高,重现性好,可用于辣椒碱生产的质量控制。

摘要：目的:建立HPLC法测定辣椒碱的含量。方法:采用C18反相柱(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇-乙腈-0.01％磷酸(18:2:1;v/v)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280nm,柱温为30℃。结果:辣椒碱在线性范围8.9～87μg/mL内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为98.15％,RSD=0.27％。结论:所建方法准确可靠,操作简便,稳定性好,可用于辣椒碱生产的质量控制。

关键词：辣椒碱,HPLC,含量

参考文献

[1] 张志栋.辣椒碱的研究进展[J]天津药学,1997;9(2) :24～26

[2] 唐胜球,董小英,邹晓庭.辣椒素研究及其应用[J].江西饲料,2003;14(1) :13～16

[3] 郭峰.辣椒素局部给药于大鼠眶下神经对初级传入神经的影响[D].第二军医大学,2001

[4] 李小霞,黄旭,张红宇.辣椒碱与双氯芬酸二乙胺治疗关节痛疗效的比较研究[J].首都医科大学学报,2003;24(3) :293～295

[5] 郑新荣,袁西恩,胡宜亮,等.辣椒及其制品中辣味辣椒含量测定法[J].河南科学,1991;9(1) :63～66

[6] 朱晓兰,刘百战,宗若雯.辣椒油化学成分的气相色谱-质谱分析[J].分析测试学报,2003;22(1) :67～70

[7] 孙永华,王日勇.辣椒碱的提取、检测及其在有害生物防治中的应用[J].辣椒杂志,2005;(1) :45～46

[8] 彭书练,单扬,丁芳林.辣椒碱的制取、纯化及应用研究[J].辣椒杂志,2005(3) :123～125

[9] 彭书练.辣椒功能成分的综合提取技术研究[D].湖南农业大学,2007

[10] 罗春丽.辣椒精中辣椒碱类化合物的提取与纯化[D].北京化工大学,2007

[11] 许秀兰.辣椒碱提取纯化及感官性质研究[D].西南大学,2006

HPLC测定法 篇2

HPLC-ELSD法测定甘草中单糖的含量

建立一种高效快速的高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定中药甘草中单糖--果糖及蔗糖含量的`方法.采用CHROMATOREX NH2柱为固定相;以乙腈:水为85:15(V/V)为流动相;流速1.0mL/min;漂移管温度为84℃;氮气流速为2.5 L/min.在上述色谱条件下,果糖和蔗糖的线性范围分别为1.422～3.318μg及12.028～60.140 μg;且该二种单糖的检测限分别(信/噪=3)为4.74 ng和3.31 ng.该方法用于传统中药甘草中单糖的分离及含量测定,结果令人满意.

作 者：郑春英 李庆勇 祖元刚 Zheng Chunying Li Qingyong Zu Yuangang 作者单位：东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室,哈尔滨,150040刊 名：东北林业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY年，卷(期)：34(2)分类号：Q946.88关键词：甘草 HPLC-ELSD 果糖 蔗糖

HPLC测定法 篇3

[关键词] 高效液相色谱法；盐酸二甲双胍片；含量

[中图分类号] R927.2   [文献标识码] B   [文章编号] 2095-0616（2011）23-113-02

Content determination of metformin hydrochloride tablets by HPLC

CHEN Yupu

Institute for Food and Drug Control of Jiaozuo City in Henan Province,Jiaozuo 454000,China

[Abstract] Objective To establish a method to determine the content of metforminhy drochloride tablets. Methods HPLC instrument with C18 chromatographic column(250 mm×6.0 mm，5μm）was used .The mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid;The wavelength for detection was 218 nm. Results The linear range of hydrochlorothiazide was 8.07 ~80.74μg/mL(r=0.999 1). The average recovery was 98.02%.RSD was 0.76%. Conclusion The method is simple,rapid，accurate and specific.It can be used as the quantitative determination of metformin hydrochloride tablets.

[Key words] HPLC;Metformin hydrochloride tablets;Content

盐酸二甲双胍片是一种双胍类口服降糖药，具有提高2型糖尿病患者的血糖耐受性，降低基础和餐后血糖的作用，是饮食和运动不能控制的2型糖尿病患者的首选处方药，也是国家基本药物目录中收载的品种。中国药典2010年版二部所记载的盐酸二甲双胍片含量测定检测方法为紫外分光光度法[1]，盐酸二甲双胍中的辅料会对含量测定有干扰，杂质也会影响检测结果。笔者查找文献，在对多种色谱体系进行筛选的基础上，建立了测定盐酸二甲双胍的高效液相色谱法，优于药典的紫外分光光度法，可用于该品种的质量控制。

1 仪器与试药

UV-2550型紫外分光光度计（日本），92SM-202A双量程电子天平（瑞士梅特勒公司），日本岛津高效液相色谱仪（LC-10ADVP泵；SPD-10AVP紫外检测器；CS-Light Potrun Analysis数据处理系统，7725i型进样阀）；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号100664-200602，供含量测定用，105℃干燥2 h后用，含量100%）；盐酸二甲双胍片（江苏方强制药厂有限责任公司，H20033458，批号：20110423；北京中惠药业有限公司，H19983069，批号：20110302；上海衡山药业有限公司，H31021359，批号：110415；规格均为0.25 g）；实验用水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱Shim-Pack CLC vp-ODSC18柱（250 mm×6.0 mm，5μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（内含0.015 mol/L高氯酸，pH为3.0）；流速：1.00 mL/min；檢测波长218 nm；柱温：30℃；进样量：20μL；AVFS=0.01。

2.2 实验检测波长的选择

笔者选用对照品溶液，用UV-2550型紫外分光光度计，在180~400 nm的波长范围，以流动相为空白，进行波长扫描，从扫描结果可以看出，盐酸二甲双胍在218 nm波长处有最大吸收，故选择218 nm作为检测波长。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取105℃干燥2 h后的盐酸二甲双胍对照品50.46 mg，置50 mL量瓶中，加水适量，超声处理20 min，使盐酸二甲双胍对照品溶解并用水稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。浓度为201.84 μg/mL。精密量取储备液5 mL，置10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品液。浓度为100.92μg/mL。

2.4 供试品溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细，精取细粉适量（约相当于盐酸二甲双胍100 mg），置100 mL容量瓶中，加水适量，超声处理20 min，使盐酸二甲双胍溶解并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液适量，用水定量稀释制成每1 mL中含盐酸二甲双胍10μg的溶液，即得供试品溶液。

2.5 专属性试验

去掉盐酸二甲双胍，其他按处方和工艺制成阴性对照，按照供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。遵照指定的色谱条件，分别准确进样20μL，进行图谱分析。从色谱图上看出，在该色谱条件下，在保留时间（tR）4.1 min处，供试品和对照品溶液中出现色谱峰，而阴性对照溶液未见此色谱峰，从而验证了这种方法进行的盐酸二甲双胍的含量测定是不受其他杂质峰影响的。见图1。

2.6 线性关系的考察

精密量取对照品储备溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。按照2.1的色谱条件，分别准确进样20μL于液相色谱仪中，记录其峰面积，并以对照品进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=19 671.6X+1 104.7，r=0.999 1（n=5），线性范围为8.07 ~80.74μg/mL。

2.7 精密度试验

精密量取对照品溶液，，按照2.1的色谱条件，分别进行6次进样，测定峰面积，结果显示，盐酸二甲双胍RSD=0.62%，说明本试验仪器的精密度良好。

2.8 重复性试验

取北京中慧药业有限公司，批号20110302的样品，按照供试品溶液的制备方法制成后，分别进行6次进样，测定峰面积，结果盐酸二甲双胍RSD=0.71%。说明该方法的重现性良好。

2.9 稳定性试验

取重复性试验所用的供试品溶液，按照2.1的色谱条件，分别在0、4、8、12、16、20、24 h取该溶液进样，测定峰面积，结果RSD=0.95%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

取北京中慧药业有限公司，批号20110302的样品，分别取约0.128 8 g 6份，精密称定后，分别置100 mL容量瓶中，分别加入按照对照品溶液的制备方法制成对照品溶液10.0 mL，用水超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，用快速滤纸滤过，取续滤液，按色谱条件测定。见表1。

2.11 样品中盐酸二甲双胍的含量测定

取3批样品各20片，精密称定，研细，精取细粉适量（约相当于盐酸二甲双胍100 mg），置100 mL容量瓶中，加水适量，超声处理20 min，使盐酸二甲双胍溶解并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液适量，用水定量稀释制成每1 mL中含盐酸二甲双胍10μg的溶液。分别准确进样20μL，按上述色谱条件，以峰面积计算。见表2。

3 讨论

选用流动相时，笔者曾做过比较，结果显示选用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（内含0.015 mol/L高氯酸，pH为3.0）作为流动相，此时出峰时间适宜，峰形比较理想[2]。

本研究结果证明，杂质和辅料对盐酸二甲双胍的含量测定几乎无影响，阴性对照无干扰，结果准确，可用于盐酸二甲双胍片的含量测定[3]。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中国药典（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：624-625.

[2] 赵素珍，宋卫云.高效液相色谱法测定清热止泻合剂中葛根素的含量[J].中国医药导报，2007，4（30）：87-88.

[3] 许建平.HPLC法测定布洛芬胶囊的含量[J].中华中西医学杂志，2010，3：6-7.

HPLC测定法 篇4

仪器:高效液相色谱仪;试药:叶酸对照品 (中国药品生物制品检定所) ;实验样品 (市售样品) ;乙腈为色谱纯;其它试剂为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱:C18柱 (250×4.6mm, 5μm) ;流动相:A液:0.10mol·L-1KH2PO4+5%乙腈;B液:70%乙腈水溶液;按照下列梯度进行: (表1) ;检测波长:270nm;进样量:10μL。

3 对照品溶液、供试品溶液的制备

3.1 对照品溶液的制备:

准确称取10.0mg叶酸对照品, 置100m L棕色容量瓶中, 加1mol·L-1盐酸溶液50m L溶解后, 放冷, 用水稀释至刻度, 摇匀, 精密量取5m L, 置10m L棕色容量瓶中, 用混合液 (1mol·L-1盐酸与水按1:1配比) 稀释至刻度, 摇匀。

3.2 供试品溶液的制备:

取本品50片, 研细, 取约2.0g, 精密称定, 置100m L棕色容量瓶中, 加1mol·L-1盐酸50m L, 置80℃水浴中加热5分钟, 振摇使溶解, 放冷, 用水稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液。

4 线性关系考察

精密称取对照品12.95mg, 置50m L棕色容量瓶中, 加入1mol·L-1盐酸25m L溶解后, 放冷, 用水稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各1.0、3.0、5.0、7.0、9.0m L, 分别置25m L棕色容量瓶中, 用混合液 (1mol·L-1盐酸与水按1:1配比) 稀释至刻度, 摇匀, 照上述色谱条件, 分别精密吸取10μL注入液相色谱仪, 记录色谱图。以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 对叶酸进行线性回归, 见表2。

回归方程为:y=20.661x+0.445R=0.99998

结果表明, 叶酸在9.4380μg·m L-1~84.9416μg·m L-1浓度范围内线性关系良好。

5 精密度试验

取线性试验项下浓度为47.1898μg·L-1的对照品溶液, 照上述色谱条件, 精密吸取10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 连续进样6次, 考察峰面积, 见表3。

结果表明, 连续测定6次的相对标准偏差小于2.0%, 精密度良好。

6 重复性试验

取同一批次样品, 按供试品溶液制备方法配制6份相同浓度的供试品溶液, 照上述色谱条件, 精密吸取10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。见表4。

结果表明, 重复性试验相对标准偏差小于2.0%, 本法测定叶酸含量的重复性良好。

7 回收率试验

按处方比例分别精密称取对照品约4.39mg, 5.49mg, 6.59mg (相当于2.0g样品中叶酸含量的80%、100%、120%) 各3份, 分别加入相应的辅料, 置100m L棕色容量瓶中, 加1mol·L-1盐酸50m L, 置80℃水浴中加热5分钟, 振摇使溶解, 放冷, 用水稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液制备同前。按上述色谱条件, 分别精密吸取上述两种溶液10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 计算回收率。见表5。

结果表明, 各浓度下的叶酸平均回收率均在98~102%之间, 9个回收率数据的相对标准偏差小于2.0%, 该方法准确可靠, 误差在允许的范围内。

8 讨论

保健食品功效成分检测方法中测定叶酸采用酶解法, 价格昂贵, 检验成本高, 而且实验过程繁琐, 不易控制, 本方法采用1mol·L-1盐酸溶液溶解样品, 实验步骤简单, 方法学验证试验表明该方法准确、灵敏。

参考文献

HPLC测定法 篇5

SPE-HPLC法测定芦荟排毒胶囊中芦荟苷的含量

目的.:检测芦荟排毒胶囊中芦荟苷的含量.方法:芦荟排毒胶囊经甲醇超声萃取后C18小柱预处理,采用反相高效液相法,选用含60%甲醇+40%水作为流动相,流速0.7 ml/min,经Zorbax SB-Aq(5 um,4.6×150 mm)反相色谱柱分离,柱温为室温,使用紫外检测器检测定量,检测波长为357 nm,外标法测定芦荟苷含量.结果:本法测定线性范围为0.004～0.040 g/L,线性相关系数为0.9996,最低定量检测限为0.0014 g/L,方法检测限为0.0004 g/L,回收率能达到91.6%～98.7%,相对标准偏差小于5%.结论:本方法简单快捷、灵敏,满足日常分析要求.

作 者：刘莉治 杨阳 林玉娜 周洪伟 罗晓燕 Liu Li-zhi Yang Yang Lin Yu-na Zhou Hong-wei Luo Xiao-yan  作者单位：广州市疾病预防控制中心理化科,广州,510080 刊 名：中国卫生检验杂志  ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)： 18(12) 分类号：O657.7+2 关键词：芦荟苷   芦荟排毒胶囊   高效液相   SPE  

HPLC测定法 篇6

【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定消化胶囊中橙皮苷的含量。方法：采用十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-水（20∶80）为流动相，流速为1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm。结果：橙皮苷含量在10.15～81.20μg（r=0.9995）范围内与峰面积呈良好线性关系；平均回收率为98.50%（RSD为0.46%）。结论：本方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于消化胶囊中橙皮苷的含量测定。

【关键词】消化胶囊；橙皮苷；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2016）07-0019-02

Abstract：Objective To establish high performance liquid chromatography （HPLC） determination of hesperidin in digestive capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （4.6mm×250mm，5μm）； With acetonitrile - water （0） were as mobile phase， flow rate of 1.0ml/min； Column temperature：30℃； detection wavelength 284 nm.Results Concentration of hesperidin in 10.15～81.20μg （r=0.9995） range and peak area showed a good linear relationship. The average recovery rate was 98.5% （RSD was 0.51%）.Conclusion This method is simple and reliable， rapid， accurate and stable results and can be used for determination the content of hesperidin in digestive capsule.

Keywords：Digestive capsule； hesperidin； HPLC

消化胶囊是曲靖市第一人民医院的医院制剂，由陈皮、炒枳壳、厚朴、木香等九味药经过粉碎、过筛、混合后装入胶囊制得。临床用于治疗胸腹胀满、食欲不化、呕吐腹泻腹痛等症状。消化胶囊质量标准[1]中以两项薄层色谱来鉴别其中部分药材，未建立制剂中中药成分含量测定方法。处方中陈皮、炒枳壳两味药均含橙皮苷[2]，本文采用高效液相色谱法对其中橙皮苷进行含量测定，为有效控制“消化胶囊”质量提供可靠且简便易行的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；PURELAB Flex 3超纯水仪（英国ELGA公司）。

1.2 材料 橙皮苷对照品（批号：110721-201115，中国食品药品检定研究院）；消化胶囊（批号：201409102、20140302、201109151，曲靖市第一人民医院）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（20∶80）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm；进样量10μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液制备 取本品装量差异项下内容物，混匀，取约0.2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声（频率：45KHz；功率：240W）60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取橙皮苷对照品20.30mg置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（作为加标溶液，浓度为1.015mg/ml），再精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，摇匀，制得浓度为0.203mg/ml的对照品储备液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按原处方制备不含炒枳壳、陈皮的阴性样品，并按“2.2.1”项下制备阴性样品溶液。

2.3 专属性试验 将阴性样品溶液按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。色谱图中在橙皮苷的保留时间处，无其它成分干扰。

2.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.2”项下橙皮苷对照品储备液0.5、1、2、3、4ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得橙皮苷的回归方程Y=16.9963X+9.0488（r=0.9995）。结果表明：橙皮苷含量在10.15～81.20μg范围内具有良好线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取同一质量浓度的橙皮苷对照品溶液在“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，RSD为0.8%。

2.6 重复性试验 取同一批消化胶囊5份，按“2.2.1”项下的方法处理，考察方法的重复性。供试品中橙皮苷含量RSD为1.2%。

2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液（批号：201409102），分别于0、2、4、8、12、24h按“2.1”项下色谱条件进行分析。结果橙皮苷的RSD为1.3%。表明供试品溶液在室温下放置24h基本稳定。

2.8 回收率试验 分别取已知含量的同一批消化胶囊（批号201409102）约0.1g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为1.015mg/ml）1ml，按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率。平均回收率为98.50%，RSD为0.46%。见表1。

2.9 样品含量测定 取不同批号的供试品3批按“2.2.1”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算橙皮苷含量。见表2。

3 讨论

3.1 流动相的选择 实验先后试用文献[3]中甲醇-醋酸-水不同比例作为流动相测定，对照品及样品中橙皮苷的峰形及与其他杂质的分离效果均不满意。结果选用文献[4]的乙腈-水（20∶80）为流动相，能得到对称性较好的橙皮苷峰，并且样品中橙皮苷与其它杂质能很好地分离，故选用乙腈-水（20∶80）为流动相。

3.2 提取方法的选择 ①提取方法的确定：试验比较了甲醇水浴回流提取和超声提取，结果回流提取杂质较多，超声处理简便快速，杂质较少，且加标回收率较好，故选用超声提取。②超声时间的确定：精密称取样品（批号201409102）5份，每份约0.2g，精密加入甲醇50ml，分别超声（频率：45KHz；功率：240W）处理20、30、50、60、70 min，结果超声50 min后，橙皮苷含量基本不变，证明样品超声处理50min后，能将样品中的橙皮苷提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：240W）时间确定为60 min。

3.3 结论 该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于消化胶囊中橙皮苷的含量测定。

参考文献

[1] 云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S].云南：云南科学技术出版社，2005：543.

[2] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1996：327-328.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：176-177.

[4] 苏红，刘淇，薛平.橘叶中陳皮苷含量测定[J].中国现代中药，2006（4）：19-20.

HPLC测定法 篇7

用HPLC法同时参照卫生部药品标准WS-034 (X-002) -97用经典的生物关键人物效价测定法对3批阿奇霉素散剂进行含量测定。发现2种方法间差异无显著性。根据中国药典的精神, H P L C法因其具有高效、精确、快速的优点有逐步取代微生物效价法之趋势, 因而建议采用H P L C法作为阿奇霉素含量测定的质量标准。

1 仪器、试药和试剂

仪器:Aglient1100色谱仪系统:Eclipse XDB-C8柱 (5µm·4.6mm×150mm) 。

试药:阿奇霉素对照品 (130352-200304, 946μ/mg, 中检所提供) ;红霉素对照品 (130307-200215, 923μ/mg中检所提供) ;阿奇霉素散剂 (0.25g) 由安徽安科药业股份有限公司生产。

试剂:水为纯化水, 乙腈为色谱纯, 磷酸二氢胺为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱:Eclipse XDB-C8 (5µm·4.6mm×150mm) 。

流动相:磷酸二氢胺:乙腈 (2:1) , 三乙调pH至7.35;检测波长210nm, 流速1mL·min-1;柱温:30℃。

2.1 线性关系

精密称取阿奇霉素对照品, 加流动相溶解并分别稀释, 摇匀, 作为储备液。分别精密量取储备液适量, 用流动相制成浓度依次为33.52, 67.04, 134.08, 335.20, 670.40, 1340.80, 2011.20, 3351.99mg·L-1的溶液, 并分别进样30μL (n=8) , 记录色谱图和峰面积 (表1) 。以阿奇霉素对照品溶液浓度为横坐标, 色谱峰面积为纵坐标进行线性回归方程, 得回归方程为y=0.3607 x-1.7513, r=1.0000。

由表1和图1说明阿奇霉素浓度在33.52~3351.99mg·L-1线性关系良好。

2.2 精密度与稳定性实验

以同一份对照品2.17g·L-1, 连续进样5次, 按上述色谱条件测定峰面积, RSD为0.07%。分别放置0、1、4、6、8h后测定, 其峰面积基本一致。

2.3 加样回收实验

精密称取3份已知含量的同一批号的样品, 各置5 0 m L量瓶中, 分别加入精密称定的阿奇霉素对照品, 用流动相溶解并稀释至刻度, 分别进样3 0μL记录色谱图。如表2。

2.4 分离度实验

分别称取阿奇霉素对照品和红霉素对照品适量加流动相配成相同浓度 (2.16g·L-1) 的混合溶液, 按上述色谱条件进行进样测定, 测定分离度为3.3 1, 说明阿奇霉素和红霉素在此色谱条件下能达到完全分离。

2.5 样品含量测定试验

取阿奇霉素散剂10袋, 称定装量后, 取内容物混合均匀, 精密称取适量 (约相当于阿奇霉素100mg) 置50mL量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 用滤膜过滤, 取续滤液3 0μL注入液相色谱仪, 记录色谱图。另取阿奇霉素对照品同法测定。按外标法计算其含量, 并与中国药典规定的微生物法比较, 见表3, 说明2种方法测定结果基本相符。

2.6 破坏性试验

分别取阿奇霉素对照品适量, 加甲醇溶解后, 分别加0.1mol·L-1的HCL液, 双氧水, NaOH液, 制成约2g·L-1的溶液, 按上述色谱条件进样记录图谱;另取含量测定项下的对照液置100℃水浴中1h后, 冷却, 同样测定。各图谱中的各杂质峰和阿奇霉素主峰均能较好分离, 不干扰主药含量测定。

3 讨论

3.1 波长和柱温的选择

阿奇霉素为大环内酯类抗生素, 紫外吸收较弱, 取其末端吸收2 1 0 n m波长处测定, 得到响应值。柱温较低时峰形拖尾, 在4 5℃时明显改善。

3.2 结果分析

用本法测定阿奇霉素散剂的含量, 快速简便, 精密度高, 分离度好, 结果准确, 重复性试验及回收率的RSD均<1.5%。

3.3 降解物干扰

阿奇霉素散剂在加入0.1mol·L-1的HCL液, 双氧水, N a O H液后, 同法测定各图谱中的杂质峰和阿奇霉素主峰均能较好分离, 说明在酸性、碱性、氧化性的条件下不能干扰主药的含量测定。

3.4 分离度考察

取阿奇霉素对照品和红霉素对照品按上述色谱条件进样测定, 测定分离度为3.3 1, 说明阿奇霉素和红霉素在此条件下能达到完全分离。

摘要：目的采用HPLC法测定阿奇霉素散剂的含量。方法用EclipseXDB-C8柱 (5μm·250mm×4.6mm) , 以磷酸二氢胺-乙腈 (2:1) , 三乙胺调pH至7.35为流动相;检测波长为210nm。结果阿奇霉素散剂在33.52～3351.99mg·L-1范围内呈良好的线形关系, 回归方程为y=0.3607x-1.7513 (r=1.0000) ;平均回收率为100.6%, RSD=1.15% (n=9) 。结论所用方法简便、准确、专属性好, 可用于阿奇霉素的含量测定。

关键词：HPLC法,阿奇霉素散剂,含量

参考文献

HPLC法测定氟康唑胶囊的含量 篇8

1 所用仪器与试药

1.1 仪器

Lc-10atvp岛津高效液相色谱仪、spd-10avp检测器、Auw220岛津分析天平均产于日本。kq-2200型超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 、co-202columu oven柱温箱 (天津正通科技有限公司) 。

1.2 试药

氟康唑对照品:中国食品药品研究院提供, 批号100314-200503供含量测定用, 用前需要在105℃烤2 h方可使用。

甲醇[HPLC (色谱) 级, 天津威晨化学试剂科贸有限公司生产, 批号为20101110];磷酸二氢钾分析纯 (天津威晨化学试剂科贸有限公司生产, 批号为20090415) ;氢氧化钠分析纯 (天津威晨化学试剂科贸有限公司生产, 批号为20100617) 。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为天津兰博C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) , 流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液 (pH 7.0) (45∶55) , 检测波长为261 nm, 流速为1.0 m L/min, 柱温为30℃, 进样量为每次20μL。

2.2 对照品配制

精密称取氟康唑对照品约0.050 g, 实际称取0.049 38 g, 置50 m L量瓶中, 加流动相溶解并稀释到刻度, 即制成每1 m L中含氟康唑0.987 6 mg的对照品储备溶液, 滤过, 取续滤液2倍稀释作为对照品液。

2.3 供试品的配置

取本品装量差异项下的内容物, 研细, 精密称取约相当于氟康唑50 mg, 置100 m L量瓶中, 加流动相超声溶解并稀释至刻度, 滤过, 取续滤液作为供试品液。

2.4 线性关系考察

分取上述对照品储备液适量, 置10 m L容量瓶中, 加流动相至刻度, 配制成浓度分别为每1 m L中含氟康唑0.987 6, 0.740 7, 0.493 8, 0.246 9, 0.123 4 mg的溶液, 按上述色谱条件测定, 进样20μL。以对照品溶液浓度 (X) 为横坐标, 与其相应的峰面积 (Y) 为纵坐标, 得回归方程Y=2 579.96+1 462 930.061X, r=0.999 2, 结果表明:线性范围为0.123 4～0.987 6 mg/m L, 在此范围内峰面积值与进样量有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液 (批号:101001) 在上述色谱条件下, 连续进样6次, 测得平均峰面积 (608 085.188, 600 657.438, 605 965.813, 606 291.125, 601 021.375, 606 747.188) 为604 794.687 8, RSD=0.5%n=6, 表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液 (批号:101001) , 在上述色谱条件下, 分别在0, 2, 4, 6, 8, 12 h时进样, 测得峰面积平均值为607 056.844, RSD=0.7%, 表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品约50 mg (n=6) , 加流动相溶至10 m L, 取此液1 m L, 用流动相稀释至10 m L, 分别加入对照品溶液0.2 m L, 在上述色谱条件下测定峰面积, 计算加样回收率, 结果见表1。

2.8 样品测定

按供试品溶液制备项下方法制备, 分别精密量取对照品溶液和供试品溶液, 在上述色谱条件下测定, 按面积外标法计算样品中氟康唑的含量, 结果见表2。

3 讨论

3.1 流动相的选择

采用《中国药典》2010年版二部中氟康唑片含量测定的流动相, 结果表明:以甲醇-磷酸盐缓冲液 (pH 7.0) (45∶55) 进行洗脱, 色谱峰峰形好, 柱效高, 可得到理想的色谱图。

3.2 检测波长的选择

对氟康唑在200 nm～300 nm范围内进行紫外扫描, 在261 nm波长处有最大吸收, 因此选择该波长为检测波长。

3.3 柱温的选择

分别选择25, 30, 35℃的柱温进行比较, 对比各种柱温下所得色谱图发现, 柱温在30℃时, 氟康唑有较好的峰形, 所以确定30℃为HPLC分析时的柱温。

HPLC法测定清脑降压片含量 篇9

1 仪器与试药

便携式p H计CP-401 (深圳市朗诚实业有限公司) ;KQ-500DB数控台式超声波清洗器 (上海楚定分析仪器有限公司) ;AE124C电子分析天平 (北京联合科仪科技有限公司) ;ULABO实验室温度控制器 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ;LC-100数字化电脑智能控制高效液相色谱仪 (上海伍丰科学仪器有限公司) ;UV-5500型紫外可见分光光度计 (上海元析仪器有限公司) ;ELGA超纯水器 (上海澜锐仪器科技有限公司) ;HH-601超级恒温水浴 (江苏金坛市亿通电子有限公司) 。阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈 (沃尔吉明 (北京) 技术开发院) 、甲醇 (天津威赛诺科技发展有限公司) 、三乙胺 (萨恩化学技术 (上海) 有限公司) 、冰醋酸 (天津威赛诺科技发展有限公司) 、磷酸 (天津威赛诺科技发展有限公司) 、醋酸钠 (沃尔吉明 (北京) 技术开发院) 、磷酸二氢铵 (南京恒泽化工有限公司) 。

2 含量测定

2.1 色谱条件:

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为 (4.6 mm×250 mm, 5um) ;乙腈-0.08%磷酸溶液 (17:83) 为流动相;检测波长为316nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取清脑降压片, 研细, 精密称取, 精密加入70%甲醇30m L, 加热回流30分钟, 放冷, 过滤, 滤液转移至50毫升容量瓶内用70%甲醇定容, 摇匀, 即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品约5mg, 用70%甲醇溶解并稀释成每1ml中含20μg的溶液, 作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

依照处方取黄芩、夏枯草、槐米、磁石 (煅) 、钩藤、决明子、珍珠母、牛膝、地黄、丹参、水蛭、地龙, 按样品制备工艺制成阴性对照样品, 照供试品溶液的制备方法制成阴性液, 依上述方法测定, 结果在阿魏酸出峰处阴性液无色谱峰, 结果阴性试验没有干扰, 表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为5、10、20、60、80、100、120μg·m L-1的对照品溶液, 分别精密吸取10μL注入HPLC, 记录色谱图。以峰面积积分值A (μg) 为横坐标, 进样量为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。试验表明, 阿魏酸对照品在5~120μg·m L-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.4项下制备对照品溶液, 精密吸取阿魏酸对照品溶液10μL重复进样6次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.68%。结果表明, 本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批清脑降压片样品6份, 分别依照2.3项下供试品制0.69%, 结果表明, 此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液, 分别在0, 2, 4, 8, 10小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪, 进样测定, 供试品阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明阿魏酸至少在10小时内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的阿魏酸对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为99.8%, RSD为0.66%。

2.1 0 样品含量测定

依照上述含量测定方法, 测定清脑降压片三批样品中阿魏酸的含量, 含量为53μg/片、55μg/片、52μg/片。

3 讨论

分别考察0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.02) , 甲醇-乙腈-p H6.5磷酸盐缓冲液 (20∶20∶60) , 乙腈-0.08%磷酸溶液 (17:83) , 乙腈-1%冰醋酸溶液 (20∶80) 甲醇-0.08%磷酸溶液 (25:75) , 水-甲醇-三乙胺 (60∶40:0.01) , 水-乙腈-三乙胺 (80∶20:0.01) , 乙腈-0.08%磷酸溶液 (20:80) 不同比例的流动相, 结果以乙腈-0.08%磷酸溶液 (17:83) 为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用乙腈-0.08%磷酸溶液 (17:83) 为流动相。此方法简便、准确、重现性好, 可用于清脑降压片中阿魏酸的含量测定。清脑降压片中阿魏酸的含量不少于50μg/片。

参考文献

[1]孙红梅.当归药材资源调查与品质特征的研究[D].北京:中国协和医科大学, 2010.

[2]祁晶.当归多糖的结构分析及其对大鼠复发性阿弗他溃疡模型影响的研究[D].兰州:兰州大学, 2011.

[3]刘雪东.当归CO2超临界萃取物保护血管内皮细胞的物质基础研究[D].南京:南京中医药大学, 2010.

[4]周慧君, 杨积武.氧自由基与冠心病及其中医药研究[J].辽宁中医学院学报, 1999 (02) .

[5]郭乾初, 欧仕益.阿魏酸在大豆分离蛋白制备可食性膜中的应用[J].食品工业科技, 2002 (01) .

HPLC测定法 篇10

关键词：HPLC,郁福来胶囊,芦丁,含量测定

前言

郁福来胶囊是由藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘经乙醇回流提取,减压回收乙醇至稠膏状,再经真空干燥制得的纯中药浸膏制剂,主治轻中度抑郁症。贯叶金丝桃中主要含有苯并二蒽酮类、蒽醌类(金丝桃素、伪金丝桃素等)、黄酮类(芦丁、金丝桃苷、懈皮素等)及间苯三酚类(贯叶金丝桃素、加贯叶金丝桃素等)化合物[1]。过去大多数研究者认为金丝桃素是贯叶金丝桃抗抑郁的主要有效成分[2,3],但随着研究的进展,发现贯叶金丝桃抗抑郁作用是蒽醌类、黄酮类及间苯三酚类成分协同作用的结果(其中贯叶金丝桃素极不稳定,难以定量)。本文建立贯叶金丝桃中黄酮类成分芦丁含量的高效液相色谱法测定方法,目前尚未见相关报道[4,5]。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

HP-1100高效液相色谱仪,配有紫外检测器和色谱数据处理工作站(美国惠普公司);CQ-250型超声波清洗仪。

芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0080-9705);郁福来胶囊(解放军第102医院制剂中心生产);乙醇、甲酸为分析纯;乙腈为色谱纯。

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS-3.5μm 150×4.6mm;保护柱:Security Guard Guard Cartridge Kit;流动相:乙腈-1%甲酸(19∶81);检测波长:360 nm,柱温:30 ℃。

1.2.2 溶液的制备

系列对照品溶液:取105℃干燥至恒重的芦丁对照品约10mg,精密称定,为10.95mg,置50 mL量瓶中,用75%乙醇溶解并稀释至刻度,得每1mL含芦丁219μg的对照品贮备液。分别精密吸取1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0 mL于10 mL量瓶中,用75%乙醇定容,摇匀。

供试品溶液:取本胶囊内容物约0.3g,精密称定,置50mL量瓶中,加75%乙醇溶液40mL,超声处理30min,冷却,加75%乙醇溶液至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤。

阴性对照溶液:取当归,按本品的制备工艺制成不含贯叶金丝桃成分的颗粒,取该颗粒适量,按供试品溶液制备方法进行操作,制得阴性样品溶液。

1.2.3 系统适用性试验

分别吸取浓度为0.1095mg·mL-1的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL注入,按“1.2.1”色谱条件记录色谱图(见图1-A,B,C),按芦丁峰计算,理论塔板数为3000以上。在本色谱条件下,芦丁峰的测定无干扰,芦丁峰的保留时间约为10.5 min,芦丁峰与邻近峰的分离度良好R>1.5。

1.2.4 标准曲线及线性范围

分别准确吸取对照品溶液各10μL,进样。按“1.2.1”色谱条件测定芦丁的峰面积。以进样量(μg)为横坐标,芦丁峰面积为纵坐标进行线性回归,得回归方程:Y =1338.45X-13.08(r =0.9998),在0.219～2.19 μg/mL范围内,芦丁峰面积值与进样量有良好的线性关系。

1.2.5 精密度试验

准确量取浓度为0.1095 mg·mL-1的对照品溶液10μL,重复进样5次,芦丁峰峰面积的RSD为0.98%。

1.2.6 稳定性试验

准确量取新制供试品溶液10 μL,按“1.2.1”色谱条件,分别于0h,2h,4h,8h,12 h,注入,测定芦丁的峰面积,其峰面积的RSD=1.0%,结果表明样品的供试品溶液在12 h内稳定。

1.2.7 重复性试验

对同一批样品(批号030401),分别取样6份,按供试品溶液的制备方法进行制样,按“1.2.1”项下方法检测,该批样品的芦丁含量为3.21 mg·g-1,RSD为1.2%。

1.2.8 回收率试验

准确称取已知含量的样品(批号030401,含量:3.21 mg·g-1)共9份,每份约0.15 g,分别加入0.95 mg·mL-1对照品溶液1.6mL,2mL,2.4mL,每种浓度各3份,按供试品溶液的制备方法进行制样,准确量取10 μL按“1.2.1”色谱条件进样测定,3个浓度的均回收率分别为98.4%,98.1%,98.8%;RSD分别为:1.2%,1.1%,1.1%。

1.2.9 样品测定

分别取不同批次郁福来胶囊各l0粒,称重,取出内容物,再称定空心胶囊,计算平均粒重。将胶囊内容物混匀,按“1.2.2”溶液的制备方法,制备对照品溶液与供试品溶液。分别精密量取上述溶液各10μL,注入液相色谱仪,按“1.2.1”条件检测,以标准曲线法计算样品中芦丁的含量。共测定4批样品(见表1)。

2 讨论

2.1 供试品溶液的制备选取甲醇及75%乙醇2种溶剂进行考察;提取方法考察超声及回流两种提取方式。结果表明,75%乙醇所提取的芦丁含量较甲醇更高,故采用75%乙醇作为样品供试液的提取溶剂;超声30min与回流1h效果相当,为实验简便,采用超声提取。

2.2 在流动相的选择上,分别采用甲醇-水、甲醇-磷酸、乙腈-水、乙腈-磷酸等多种条件,结果发现,乙腈-1%甲酸作为流动相分离效果最理想。

2.3 本文建立用HPLC测定郁福来胶囊中芦丁含量的方法,方法快速、灵敏、准确,样品处理简便易行,该法适用于郁福来胶囊中芦丁含量的质量分析。

参考文献

[1]殷志琦,叶文才,赵守训.贯叶连翘的化学成分研究〔J〕,中草药,2001,32(6):487~488

[2] Butterweck V,Wall A,Lieflander-Wulf U,et al.Effects ofthe total extract and fractions of Hypericum perforatum in an-imal assays for antidepressant activity〔J〕,Pharmaco2psychiatry.1997,30(Suppl 2):117

[3] Calapai G,Crupi A,Firenzuoli F,et al.Effects of Hyperi-cum perforatum on levels of5-hydroxytryptamine,noradrena-line and dopamine in the cortex,diencephalon and brain-stem of the rat〔J〕.J Pharm Pharmacol,1999,51(6):723~728

[4]张博.HPLC法测定贯叶连翘中贯叶金丝桃素含量〔J〕,中草药,2001,32(4):321~322

[5]瞿发林,赵汉清,刘桂永等.郁福来胶囊中金丝桃素的含量测定及稳定性试验〔J〕,中国药师,2004,7(10):775~777

HPLC测定法 篇11

【摘 要】 目的：建立逍遥散中芍药苷的测定方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（Durashell C18柱；250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃。结果：芍药苷在0.0423～0.4234μg范围内呈现良好的线性关系，r=0.9996，平均回收率为99.95%（RSD=1.73%，n=6）。结论：本方法专属性强，准确度高，重现性良好，可用于逍遥散的质量控制。

【关键词】 逍遥散；含量测定；芍药苷；HPLC

【中图分类号】R286.0 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）11-0017-02

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Xiaoyao Powder. Method Eighteen using C18 column chromatography （Durashell C18 column；250×4.6mm，5μm）；The mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution （16∶84）；Detection wavelength： 230nm；Flow rate： 1.0ml/min；column temperature：30℃.Result Paeoniflorin in 0.0423μg ～ 0.4234μg range showed a good linear relationship（r=0.9996），The average recovery was 99.95% （RSD=1.73%， n=6）.Conclusion The method has strong specificity and high accuracy，Good reproducibility， can be used for the quality control of Xiaoyao Powder.

Keywords：Xiaoyao Powder；Determination； Paeoniflorin； HPLC

逍遥散为云南省个旧市中医院制剂，执行标准为滇ZJGF/2005-721.逍遥散由柴胡、当归、白芍、薄荷等七味药制备而成，具有疏肝解郁、健脾和胃的功效。处方中白芍为方中主药，白芍的主要活性成分为芍药苷，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，为保证该制剂的内在质量，研究采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中白芍主要活性成分芍药苷进行定量研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子天平，奥豪斯AR224CN电子天平。

1.2 试药 芍药苷对照品（批号：110736-201438，中国食品药品检定研究院）；逍遥散（批号：20150814、20151013、20151108、20151215，云南省个旧市中医院）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Durashell C18 （4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长[1]：230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含芍药苷40μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备[1] 取本品约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超声处理（功率240W，频率45KHz）30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 取缺白芍的阴性样品0.3g，按“2.3”项供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果供试品色谱中呈现与對照品保留时间一致的色谱峰，阴性样品在与芍药苷对照品相同的保留时间处未显色谱峰，可见其他原辅料对主成分无干扰。（见图1）。

2.6 线性关系考察 分别精密吸取2.2中对照品溶液（每1ml含芍药苷42.3389μg）1、2、4、8、10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以芍药苷峰面积为纵坐标，进样量为横坐标作线性回归，结果峰面积Y与其进样量X（μg）之间呈良好的线性关系，芍药苷的线性范围为：0.0423～0.4234μg，回归方程为：Y=1265.48236X-8.172520，r=9996。

2.7 稳定性试验 取同一逍遥散供试品溶液按上述色谱条件分别在0、1、2、4、8、12h时进样测定，测得芍药苷峰面积分别为472.49792、476.46701、476.68494、476.56143、475.38214、477.20706，RSD为0.37%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 精密度试验 精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定5次，测得芍药苷峰面积分别为：537.34906、537.89551、538.09821、538.14862、538.51733、527.16009，RSD为0.83%，结果表明精密度良好。

2.9 重复性试验 取同一批号（批号20150814）样品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，芍药苷的平均含量为6.2130mg/g，RSD为0.76%，结果表明重复性良好。

2.10 回收率试验 精密称取6份供试品（批号：20150814，已测芍药苷含量为6.2130mg/g），每份约0.15g，按1∶[KG-*2]1比例加入芍药苷对照品，即加入芍药苷对照品溶液（芍药苷浓度0.2117mg/ml）4.5ml，挥去溶剂。然后按供试品溶液处理方法同法处理，将处理好的供试品溶液按含量测定方法同法测定，计算回收率，芍药苷的平均回收率为99.95%，RSD为1.73%。结果见表1。

2.11 样品含量测定 取4批逍遥散样品，按供试品溶液的制备方法操作，按“2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 芍药苷[2] 具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。芍药苷是处方中主药白芍的主要活性成分，且其含量也相对较高，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，通过试验用HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量。

3.2 方中白芍直接粉碎入药，参照2015年版《中国药典》一部白芍含量测定项 下的提取方法，用稀乙醇超声30min提取白芍中芍药苷较为完全 。

3.3 经试验，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84），流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：230nm，测得结果比较理想。本法专属性强，操作方便，准确度高，重现性良好，可以用于逍遥散的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：105.

[2]吴春福.芍药及其化学成分的药理学研究概况[J].中药通报，1985，10（6）：43-46.

HPLC测定法 篇12

1 仪器与试药

1.1 仪器

DP-120单冲式压片机 (江苏泰州市制药机械二厂) , 片剂硬度测定仪 (上海恒勤仪器设备有限公司) , BY300A型小型包衣机 (南京天利制药设备有限公司) , 岛津LC-20A高效液相色谱仪 (日本岛津公司) , ODS (250mm×4.6mm, 25μm) 色谱柱。

1.2 试药

胆酸对照品 (中国食品药品检定研究院, 批号:100078-201014) , 天然牛黄 (北京同仁堂) 。

2 方法与结果

2.1 牛黄渗透泵片的制备

片芯的制备:将处方量的牛黄原料药与辅料过100目筛, 混合均匀, 加入适量的无水乙醇制软材, 用16目筛子制粒, 50℃下干燥2h, 30目筛子整粒, 再加入适量的润滑剂硬脂酸镁, 用单冲头压片机压片得到每片含牛黄约30mg、片重约为210mg的单层片芯。

包衣液的制备:将乙基纤维素、适量PEG4 000溶于丙酮溶液 (丙酮∶水=95∶5) 中, 用磁力搅拌器搅拌至完全溶解, 即得包衣液。

包衣与打孔:将制得的片芯置于包衣锅中, 包衣锅转速为40r·min-1, 包衣温度为50~55℃。包衣过后在55℃条件下干燥12h, 用机械方法打孔, 制得牛黄渗透泵片。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

C18柱, 流动相为乙腈-0.15%H3PO4水溶液 (40∶60) , 检测波长为387nm。

2.2.2 供试品溶液的制备

取牛黄渗透泵1片, 去包衣层, 碾碎, 紧密称定约10mg, 加60%的冰醋酸数滴, 研磨, 全部移入100mL量瓶中, 用60%的冰醋酸定容, 摇匀, 过滤, 弃去初滤液, 精密量取续滤液1mL, 至带塞试管中, 加硫酸-水 (50∶65) 混合溶液14.0mL, 70℃水浴10min, 迅速移至冰浴中放置2min。

2.2.3 对照品溶液的制备

精密称取胆酸对照品30.0mg, 放置100mL量瓶中, 加60%的冰醋酸溶解定容作为母液。

2.2.4 线性关系

分别用移液管精密移取母液4、6、8、12、15、20mL至25mL容量瓶中, 均加硫酸-水 (50:65) 混合溶液14.0mL, 70℃水浴10min, 迅速移至冰浴中放置2min, 进样。以进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。结果表明:在48μg/mL~240μg/mL范围内, 胆酸的线性回归方程为Y=87.189X-24.465 (r=0.999 2, n=3) , 线性关系良好。

2.2.5 专属性试验

取牛黄渗透泵片的阴性对照品, 按“2.2.2”项方法操作, 进样。结果显示:在阴性对照品中, 未出现与胆酸相同保留时间的色谱峰, 表明渗透泵片中辅料对胆酸测定无干扰。见图1。

2.2.6 精密度试验

去胆酸对照品, 按“2.2.3”项方法制备溶液, 重复进样6次。结果表明:其RSD值小于1.5%, 符合精密度要求。

2.2.7 稳定性试验

取牛黄粉末, 按“2.2.2”项方法制备溶液, 分别于0、2、4、8、12h进样测定含量。结果表明:不同时间点RSD值小于1.5%。符合稳定性要求。

2.2.8 重复性试验

取牛黄渗透泵片6片, 按“2.2.2”项方法制备供试品溶液, 分别进样。结果表明:各峰面积RSD值小于1.5%, 符合重复性要求。

2.2.9 加样回收试验

精密称取牛黄供试品适量 (相当于胆酸约5mg) , 置于100mL量瓶中, 再精密称取胆酸对照品约5mg, 加入60%的冰醋酸数滴, 研磨, 定容, 摇匀, 过滤, 弃去初滤液, 精密量取续滤液1mL, 至带塞试管中, 加硫酸-水 (50∶65) 混合溶液14.0mL, 70℃水浴10min, 迅速移至冰浴中放置2min, 平行进样3次, 测定含量。结果显示:胆酸回收率为99.60%, RSD为0.87%。见表1。

2.2.1 0 样品含量测定

取牛黄渗透泵片, 按“2.2.2”项方法制备供试品溶液, 按“2.2.1”项条件进样, 测定其中胆酸含量。结果见表2。

3 讨论

目前, 牛黄的标准测定方法为糠醛比色法, 该方法受反应温度和反应时间影响较大, 重现性较差。在192nm波长处测定胆酸含量, 多种溶剂有吸收, 会干扰测定结果。本实验用60%的冰醋酸溶解后, 以一定浓度的硫酸溶液水浴方法对胆酸进行处理, 胆酸在387nm处有吸收峰。通过专属性试验证明, 该辅料和溶剂无干扰作用, 可准确测定胆酸含量, 为本实验室自制的牛黄渗透泵片含量测定及后期释放度测定提供了方法学依据。

摘要：目的:采用HPLC法测定自制牛黄渗透泵片中胆酸含量。方法:用冰醋酸溶解自制牛黄渗透泵片, 经硫酸-水混合溶液70℃水浴处理后, 采用HPLC法测定, 色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, 乙腈-0.15%磷酸水溶液 (40∶60) 为流动相, 检测波长为387nm。结果:胆酸在48μg/mL240μg/mL (r=0.999 2, n=3) 浓度范围内呈良好线性关系, 平均回收率为99.60%, RSD=0.87%。结论:该方法可用于测定牛黄渗透泵片中胆酸含量, 快速简便, 准确有效。

关键词：牛黄渗透泵片,HPLC,胆酸,含量测定

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社, 2015:53.

[2]许珍珍, 黄一平, 余晶晶, 等.不同提取方法对人工牛黄中胆酸含量的影响[J].中国药房, 2009, 20 (9) :664-665.