B、P杂质（精选3篇）
B、P杂质 篇1
阿司匹林、氯吡格雷及西洛他唑是临床上最常用于缺血性心脑血管病预防和治疗的抗血小板药物。然而，这些药物存在一定的副作用，如消化道出血甚至颅内出血，而且还可能会出现抗血小板药物抵抗[1]。近年来，国外学者开始研发新型抗血小板药物[2]，如三氟柳、Parsugrel、坎格雷洛等，这些新型抗血小板药物价格昂贵、临床应用经验不成熟，而且仍然不能克服出血的副作用。传统中药丹参被证实可以有效地抑制血栓形成[3]，且无明显副作用，价格低廉，但丹参各种成分的抗血栓机制尚未明确。丹酚酸B(salvianolic acid B,SA-B）是丹参最主要的水溶性有效成分，在丹参总酚酸中含量最高，约占70%。本研究利用流式细胞技术测定血小板膜P-选择素阳性百分率的方法，观察不同浓度SA-B对经胶原作用的小鼠体外血小板膜P-选择素表达的影响，探讨SA-B对小鼠血小板活化功能的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及分组
雄性昆明小鼠（8周龄，体重35g～40g），清洁级，50只，由南方医科大学实验动物中心提供，随机分为5组：对照组，模型组，低浓度SA-B组、中浓度SA-B组、高浓度SA-B，每组10只。
1.1.2 主要药品及试剂
丹酚酸-B，淡黄色粉针剂，纯度大于98%，中国药品生物制品检定所/临用前用生理盐水配制成不同浓度：1 200mg/L,2 400mg/L,3 600mg/L；胶原（美国Sigma公司产品）；藻红蛋白标记的抗小鼠IgG(IgG-PE），异硫氰酸荧光素标记的抗小鼠CD61单克隆抗体（CD61-FITC），藻红蛋白标记的抗小鼠CD62P单克隆抗体（CD62P-PE）（美国BD公司）。
1.1.3 主要仪器
流式细胞仪（Epics XL型，美国Beckman Coulter公司），隔水式恒温培养箱（型号GNP-9160，上海雷韵试验仪器制造公司）。
1.2 方法
1.2.1 采血
采用眼球摘除法取全血于3.8%枸橼酸钠抗凝EP管中。
1.2.2 胶原激活
取对照组小鼠全血10μL加入生理盐水10μL（分别取2管），混匀，37℃孵育15min；分别取其余各组小鼠全血10μL加入200μg/mL胶原10μL（美国Sigma公司，胶原终浓度为100μg/mL，分别取2管），混匀，37℃孵育15min。
1.2.3药物作用
在低浓度SA-B组全血加入1 200 mg/L SA-B 10μL(SA-B终浓度为400mg/L），在中浓度SA-B组加入2 400mg/L SA-B 10μL(SA-B终浓度为800mg/L），在高浓度SA-B组加入3 600 mg/L SA-B 10μL(SA-B终浓度为1 200mg/L），模型组加入等量的生理盐水，37℃孵育30min。
1.2.4 流式细胞检测
在上述经过处理的标本中，对照管加入抗小鼠CD61-FITC、抗小鼠IgG-PE，试验管加入抗小鼠CD61-FITC、CD62P-PE。混匀室温避光孵育20 min，然后再加入1mL冷的磷酸缓冲液（PBS）。采用流式细胞仪检测，以CD61-FITC和侧散射光散点图设血小板门，测定血小板膜CD62P(P-选择素）表达阳性百分率。
1.3 统计学处理
采用SPSS 17.0进行分析，数据以均数±标准差表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析（one way ANOVA），组间均数比较采用LSD-t检验。
2 结果
模型组P-选择素高于对照组（P<0.01）；低浓度SA-B组、中浓度SA-B组、高浓度SA-B组P-选择素均低于模型组（P<0.05）；不同浓度SA-B组P-选择素随SA-B浓度的增加而减少（P<0.05）。详见表1。
%
3 讨论
传统中药丹参被证实可以有效抑制血栓形成，对心血管、神经细胞具有保护作用，且无明显副作用，价格低廉，广泛应用于治疗缺血性心脑血管疾病[3]。丹参的主要化学成分包括脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合物，丹参各种成分的抗血栓机制尚未明确[4]。丹酚酸B是丹参最主要的有效活性成分[5]。
静息状态下，P-选择素主要存在于血小板α颗粒内，血小板活化后，α颗粒与血小板质膜融合，P-选择素表达血小板质膜表面[6]，成为血小板活化的一个特征性指标。本研究发现，加入胶原后，血小板膜P-选择素阳性率明显升高，提示胶原可刺激血小板活化。胶原是启动血小板黏附、聚集过程最强有力的血管壁成分。血小板有2个受体在血小板-胶原相互作用起重要作用，即糖蛋白Ⅵ（GPⅥ）和整合素α2β1。血小板特异性GPⅥ（62kDa）是血小板胶原特异的信号转导蛋白，它与胶原的亲和力低，不能单独介导稳定的血小板黏附，但对血小板稳定的黏附到胶原上起关键作用，因为它通过结合的FcRγ链诱导强大的信号途径；整合素α2β1经过活化后由低亲和力构象转化为高亲和力构象，胶原结合到整合素α2β1促进血小板活化和紧密黏附途径的下游步骤的进行。
本研究发现不同浓度的SA-B组P-选择素均低于模型组，P-选择素随SA-B浓度的增加而减少，不同浓度的SA-B对胶原引起的血小板活化具有抑制作用，SA-B浓度越高，这种抑制作用越强。因此，可以认为，SA-B抗血栓的机制可能与其抑制胶原引起的血小板活化有关。另外，P-选择素与其配体结合后起信号转导作用，活化靶细胞或改变其功能状态，从而介导白细胞-内皮细胞、白细胞-血小板间反应，最终导致组织损伤[7],SA-B对P-选择素具有抑制作用，减少炎症反应对心血管、神经细胞的损伤。
本研究的不足之处在于仅测定P-选择素，而未检测血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa纤维蛋白原受体。目前标记小鼠GPⅡb/Ⅲa纤维蛋白原受体的荧光抗体为JON/A-PE或JON/A-FITC[8]，该试剂价格较为昂贵且不易获得，这是本研究不能检测GPⅡb/Ⅲa纤维蛋白原受体的原因。GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原的结合是血小板聚集的最后通路[9]。GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原结合，引起血小板聚集，促进血栓形成，在脑缺血缺氧性损伤起重要的作用。
参考文献
[1]Linden MD,Tran H,Woods R,et al.High platelet reactivity and antiplatelet therapy resistance[J].Semin Thromb Hemost,2012,38(2):200-212.
[2]Briasoulis A,Tousoulis D,Bakogiannis C,et al.Novel anti-platelet agents for the treatment of stable angina pectoris[J].Curr Pharm Des,2013,19(9):1581-1586.
[3]方芳,王平珍,段芸.中药丹参的临床应用进展[J].内蒙古中医药,2012,31(19)81-82.
[4]邓翠娥.丹参的药理作用与临床应用研究进展[J].时珍国医国药,2003,14(12):776-777.
[5]Ho JH,Hong CY.Salvianolic acids:Small compounds with multiple mechanisms for cardiovascular protection[J].J Biomed Sci,2011,18:30.
[6]Merten M,Thiagarajan P.P-selectin in arterial thrombosis[J].Z Kardiol,2004,93(11):855-863.
[7]Htun P,Fateh-Moghadam S,Tomandl B,et al.Course of platelet activation and platelet-leukocyte interaction in cerebrovascular ischemia[J].Stroke,2006,37(9):2283-2287.
[8]Bergmeier W,Schulte V,Brockhoff G,et al.Flow cytometric detection of activated mouse integrin alphaⅡbbeta3with a novel monoclonal antibody[J].Cytometry,2002,48(2):80-86.
[9]Schneider DJ.Anti-platelet therapy:GlycoproteinⅡb-Ⅲa antagonists[J].Br J Clin Pharmacol,2011,72(4):672-682.
B、P杂质 篇2
一、导入
欢迎来到一（2）班的拼音课堂，同学们马上要跟随老师去字母花园游玩了，大家说好不好？
我们本节课学习第二单元第三课，声母bp，以及基本的拼读方法。
二、学习声母b 展示PPT，小姐姐听广播，b的发音和“播”相似，但是声母的发音要轻而且短。展示b的发音方法，师示范，讲解，不送气，气流较小。展示b的写法，b占第一和第二格，先写一竖，再写右半圆。师巡视指导学生，评价更正。
三、学习声母p 展示PPT，小哥哥把水泼，p的发音比“泼”要轻要短，展示p的发音规则，找学生试读。展示p的写法：占中格和下格，强调书写规则，师示范，学生学习p的写法。
讲解bp写法的区别：右下半圆bbb，右上半圆ppp,左拇指朝上bbb，左拇指朝下ppp.出示字母卡片，学生区分读。
四、复习学过的声母和韵母
分放字母花篮，区分学过的声母和韵母。
五、学习基本拼读方法
1、引导学生观察图画，看看图上画的是什么景物。图上的人物在做什么。引导学生讲图意：“我”和爸爸、妈妈去游览观赏古迹，在山坡上看到大佛。教师相机板书：ｂà ｂɑ。领读两遍，并告诉学生ｂà ｂɑ是一个音节词。
2、分析音节，教学声母。
(1)先告诉学生：ｂà ｂɑ这个词是由两个ｂɑ组成的。一个ｂɑ就是一个音节。(2)分音。教师拉长声调慢读ｂɑ，让学生听后辨出ｂɑ是ｂ和ɑ组成的，分出声母ｂ。(3)ｂ的发音。发音轻短，注意双唇成圆形，重在示范，让学生看教师口形，教师领读，学生齐读、分组读、指名读。3声韵连读，训练直呼。
(1)学生观察ｂ—ɑ相碰的过程，形象感受“猛一碰”的意思。(2)引导学生试读，体会声韵相碰。先告诉学生声韵连读时，要把声母读得越轻越短越好。直呼时，先慢后快，逐渐达到脱口而出(补充板书：ｂ—ɑ→ｂɑ)。教拼音口诀：“前音轻短后音重，两音相连猛一碰。”教师示范、领读、指名读，反复训练。
4、举一反三，培养能力。
《声母b p》教学设计 篇3
第一阶段：
一、组织教学
1.小朋友们，准备上课了！上课的时候要坐端正，双手放在膝盖上（老师示范一下），看看，谁坐得最端正？……
2.让小朋友作自我介绍：
师：下面，请每位小朋友向大家作个自我介绍（我的名字叫×××，今年×岁了，在××幼儿园上学，……），看看，谁说的最好！谁先说？（让发言者站在老师旁边，面向小朋友们）
……
二、复习六个单韵母和六个词语
小朋友们，前面我们已经学习了六个单韵母a o e i u ü，下面，大家一起来复习一下：
师：请小朋友们看黑板（老师逐一出示复习卡片）…… 师：请一位小朋友上来当小老师，谁先来？（让小老师用教鞭指着卡片说：请小朋友们跟我读……）；……
师：现在课间休息5分钟，要小便的去卫生间小便…… 第二阶段：
一、学习声母b p 师：小朋友们，继续上课了！今天老师又要给你们带来汉语拼音的两个新朋友，大家猜猜看，他们会是谁呢？
师：（出示菠萝和女孩泼水两幅图片）请小朋友们认真看看，这幅图上画的是什么啊？谁来说？……
师：对了，是菠萝和女孩泼水（要突出“菠萝”和“泼水”的发音）。
师：今天老师要给你们带来的两个新朋友啊就藏在这两幅画中，他，他们是汉语拼音的声母b和p，出示b、p字母卡片：
①师范读，并示范发音口型；
②小朋友们跟老师读……齐读……个别读……
师：小朋友看看，b和p长得像不像啊？有什么不一样？（一个肚子大，一个头大。）
出示卡片：右下半圆b b b，右上半圆p p p。请跟老师一起读……
二、学习词语
师：逐一出示卡片，范读→跟读→齐读→指名读
bai tu bo cai ba ba ping guo pu tao pao bu 白 兔，菠 菜，爸 爸，苹 果，葡 萄，跑 步
三、游戏：找伙伴
师：小朋友们，b、p和他们的词语同伴走失了，现在要请小朋友们帮助他们把伙伴找回来。大家再看看这六个词语，哪些是b的伙伴，哪些是p的伙伴？请小朋友把他们找出来并送回b和p的身边。
方法：将字母卡片贴在黑板上，让小朋友找出词语卡片，先读一读，再找伙伴。
师：在小朋友的帮助下，b和p都找齐了各自的词语小伙伴，现在他们要和小朋友说再见了。请小朋友们一个一个读出他们的名字，并与他们说再见。
（课间休息5分钟）
第三阶段：
一、学习儿歌《我们爱祖国》
小朋友们，谁能告诉大家十月一日什么节日啊？ 对，是国庆节。国庆节是谁的生日呢？ 对，是祖国妈妈的生日。
今年啊是祖国妈妈的63岁生日了，老师这里啊给祖国妈妈准备了一份礼物，我们一起送给祖国妈妈好不好？
出示儿歌：《我们爱祖国》
小草的妈妈是大地，星星的妈妈是天空，浪花的妈妈是大海，我们的妈妈是祖国。小草爱大地，星星爱天空，浪花爱大海，我们爱祖国。
老师范读后，教小朋友一句一句跟读，再让小朋友齐读，最后个别读，达到让每个小朋友都能读出来的效果。
二、游戏：找妈妈
根据上面儿歌内容准备8张图画：小草，大地，星星，天空，浪花，大海，小朋友，祖国
小朋友们，看看黑板上的图，画得是什么呢？根据我们刚刚学习的儿歌，我们来为他们找找妈妈吧。先读一遍儿歌，让小朋友们上来找，并说出一句儿歌。
三、课堂小结
小朋友们，今天我们认识了声母b和p，请大家一起读“右下半圆b b b，右上半圆p p p”。