淫羊藿/女贞子

淫羊藿/女贞子（精选7篇）

淫羊藿/女贞子 篇1

支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病[1]。糖皮质激素(glucocorticoids,GC)由于其强大的免疫抑制和抗炎作用,是临床上治疗哮喘的首选药[2],但应用过程中出现的激素依赖、激素抵抗以及局部和全身性副作用却难以避免[3]。课题组前期研究发现,淫羊藿女贞子水煎剂合用布地奈德吸入可抑制哮喘大鼠气道炎症及重塑的病理改变[4];合用地塞米松能增强后者的抗炎作用,并抑制其不良反应[5,6,7]。本研究以淫羊藿女贞子水提物及主要有效成分为研究对象,探讨与地塞米松合用对哮喘大鼠气道病理改变的影响,以期为中西药联合应用治疗哮喘,尤其是难治性哮喘提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物

雄性SPF级SD大鼠42只,月龄为(3±1)个月,体重(120±10)g,合格证号:SCXK(京)2012-0001,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。置于室温为(25±2)℃,湿度为(20±5)%,昼夜明暗交替时间为12 h∶12 h,自由饮水、进食的SPF级动物房内饲养。

1.2 实验药物

淫羊藿水提物(批号:20130155)、女贞子水提物(批号:20130104),均由西安康威生物有限公司提供,提取率为1∶10。淫羊藿有效组分为总黄酮类,女贞子有效组分为总黄酮和齐墩果酸类。淫羊藿有效成分提取物:淫羊藿药材切碎,用90%乙醇提取3次,合并提取液,回收至无醇沉,用石油醚萃取3次(除去叶绿素),弃去石油醚部分,水部分上D-101大孔树脂,水洗到无色后,用90%乙醇洗脱,所得蒸干,即为淫羊藿总黄酮提取物。总黄酮含量以淫羊藿苷计为80%,主要包括淫羊藿苷,淫羊藿次苷Ⅰ,淫羊藿次苷Ⅱ,宝藿苷,朝藿定A、B、C等,提取率为2.5%。女贞子有效成分提取物:女贞子粉粹,75%乙醇加热提取3次,合并提取液,回收到无醇,上AB-8大孔树脂,水洗(除糖),弃去水液,再用75%乙醇冲洗,所得蒸干即为女贞子提取物。有效成分为总环烯醚萜和总黄酮类,含量分别以齐墩果酸和芦丁计总含量>80%,主要包括特女贞苷,女贞苷,橄榄苦苷,木樨榄苷二甲酯,女贞酸,新女贞苷,女贞果苷A、B、C、D,芹菜素-7-O-葡萄糖苷等,提取率为5%。

1.3 主要试剂与仪器

卵蛋白(美国Sigma公司,批号:A5253-100g),氢氧化铝凝胶(美国Sigma公司,批号:A8222-250m L),地塞米松磷酸钠注射液(5 mg/支,国药集团容生制药有限公司,批号:H41020036);尼康(Nikon)ECLIPSE80i生物显微镜及NIS-Elements BR 3.2图像分析软件(北京锐驰恒业仪器科技有限公司)。

1.4 造模及给药方法

SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松组(C组)、淫羊藿女贞子水提物组(D组)、地塞米松合淫羊藿女贞子水提物组(E组)、淫羊藿女贞子有效组分组(F组)、地塞米松合淫羊藿女贞子有效组分组(G组),每组6只。参考文献[8],从第1天开始,除A组外,其余各组均造模。造模成功后,各造模组用1%的卵蛋白(OVA)氢氧化铝溶液雾化30 min,A组雾化生理盐水溶液,每周2次,直至实验结束。实验第22天开始给药,C、E、G组腹腔注射地塞米松注射液(0.5 mg/kg);D及E组灌胃给予淫羊藿女贞子水提物(4∶3,0.35 g/kg生药);F及G组灌胃给予淫羊藿女贞子有效组分(2∶3,100 mg/kg),均每日1次,共计2周。

1.5 样本采集与检测

第36天麻醉处死动物。开胸,暴露心肺,快速取出肺组织连同气管,结扎左组织器官,剪下左肺。切成厚度约3 mm的组织块,置于10%的甲醛溶液内固定24 h。常规石蜡包埋,制片。参考文献[9]行HE染色及Masson染色,参考文献[10]行PAS染色,在光镜下进行观察。

1.6 图像分析软件测量

参考文献[11]拍摄每个样本400倍光镜下的3个视野。通过测量Masson染色后的上皮组织细胞面积及胶原纤维面积,计算标准化胶原纤维面积(胶原纤维面积/上皮组织细胞面积);通过测量HE染色后的图片,计算气管基底膜周径(Pbm)、标准化总管壁厚度(Wat)以及标准化平滑肌厚度(Wam);通过测量PAS染色后的杯状细胞面积及Pbm值,计算单位长度基底膜上的平均杯状细胞面积(标准化杯状细胞面积)。

1.7 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较根据方差齐性检验结果选择LSD-t(方差齐)或Tamhane's T2(方差不齐)检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠胶原增生情况比较

与A组标准化胶原面积[(62.97±16.44)μm2/mm]比较,B组[(93.55±14.74)μm2/mm]大鼠胶原纤维增生明显(P<0.01);与B组比较,各给药组[C组:(59.79±9.91)μm2/mm,D组:(48.01±8.27)μm2/mm,E组:(44.07±7.70)μm2/mm,F组:(43.81±9.76)μm2/mm,G组:(53.92±12.96)μm2/mm]均明显抑制胶原纤维增生(均P<0.01);与C组比较,E组、F组能进一步抑制胶原纤维增生(P<0.05)。见图1。

2.2 各组大鼠Wat和Wam值比较

肺组织HE染色计量结果显示:与A组比较,B组Wat和Wam值均显著性升高(均P<0.01);经药物治疗后,与B组比较,5个给药组均能显著降低Wat及Wam值(P<0.05或P<0.01);与C组比较,E组、F组和G组均能显著降低Wat值(P<0.05)。见表1、图2。

注:与A组比较,**P<0.01;与B组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与C组比较,▲P<0.05

2.3 各组大鼠杯状细胞增生比较

与A组标准化杯状细胞面积[(0.2548±0.0665)μm2/mm2]比较,B组[(0.4067±0.0835)μm2/mm2]大鼠杯状细胞增生显著(P<0.01);与B组比较,5个给药组[C组:(0.2755±0.0634)μm2/mm2,D组:(0.2532±0.0507)μm2/mm2,E组:(0.2255±0.0336)μm2/mm2,F组:(0.2686±0.0787)μm2/mm2,G组:(0.2337±0.0531)μm2/mm2]肺组织杯状细胞增生明显缓解(均P<0.01)。见图3,封三。

3 讨论

哮喘是一种复杂的异质性慢性炎症性疾病,其特点是气道炎症和气道重构,包括杯状细胞和气道平滑肌细胞增生、黏液分泌过多和嗜酸性粒细胞浸润等[12]。GC是目前治疗哮喘的首选药物,但长期应用不可避免产生局部或全身性副作用,甚至激素抵抗的发生,影响激素的抗炎作用。近年有研究发现,在GC应用的同时合用中药,可产生协同增效的抗炎作用,并维持GC作用的敏感性,预防激素抵抗的发生[13,14]。现代学者认为,外源性超生理剂量的GC类同于“壮火”,发越肾气、肾精,致火旺阴伤,日久累及肾阳,最终形成阴阳两亏[15,16],防治GC的不良反应当以补肾中阴阳为基本立法。课题组前期研究发现,平补肾中阴阳的药对淫羊藿女贞子煎剂能够协同激素抗炎,并拮抗激素不良反应[17,5]。本研究以淫羊藿女贞子水提物及有效组分为研究对象,评价药物协同激素对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑相关病理学改变的影响。

实验结果提示,哮喘模型大鼠Masson染色涂片中胶原纤维明显沉积,HE染色中Wat、Wam显著增高,PAS染色中上皮杯状细胞大量增生,表明哮喘模型出现以气管壁及平滑肌增厚、胶原纤维及杯状细胞增生为评价指标的气道炎症及气道重塑的病理改变。经过药物治疗后,5个治疗组均明显抑制胶原纤维沉积及杯状细胞的增生,降低Wam、Wat值,提示各给药组对哮喘气道炎症及气道重塑的病理改变有良好的疗效。且与单用地塞米松相比,合用中药水提物及有效成分均能降低Wat值,合用中药水提物对胶原纤维沉积的抑制显著。提示在激素地塞米松应用的同时,合用平补阴阳中药淫羊藿女贞子水提物或有效成分可产生一定程度的协同抗炎及抑制气道重塑的作用,为今后进一步研究中西医药结合治疗哮喘的作用机制提供了实验基础。

此外,值得注意的是,本研究发现淫羊藿女贞子提取物组对胶原纤维增生和Wat的作用优于地塞米松组。淫羊藿提取物主要为淫羊藿苷,文献报道有类激素样作用,能提高机体免疫力,抗炎,从而减轻哮喘气道炎症,其作用与地塞米松类似[18,19];女贞子提取物中的齐墩果酸等萜类,也具有明确的抗炎作用,对急慢性炎症均有明显抑制作用[20]。提示淫羊藿女贞子提取物具有的良好的抗炎作用可能是其对Wat改善作用的基础。虽然GC由于具有良好的抗炎作用而一直是治疗哮喘的首选药物,但其对于哮喘的典型病理改变———气道重塑的作用并不理想,而气道重塑是哮喘反复发作难以治愈的重要原因。课题组前期研究已证实,淫羊藿女贞子煎剂对哮喘大鼠气道重塑具有明显的改善作用[17]。在本次实验中采用的淫羊藿女贞子水提物及有效成分配伍研究中再次证实了其对胶原纤维的改善作用,尤其是有效成分配伍的作用优势,值得进一步展开研究,探讨其作用机制,以期为研发中药提供依据。

(见内文第6页)

摘要：目的研究淫羊藿女贞子水提物及其有效组分配伍地塞米松全身干预对哮喘大鼠气道病理改变的影响。方法 42只SD大鼠按照随机数字表法随机分为7组,每组6只,正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松组(C组)、淫羊藿女贞子水提物组(D组)、地塞米松合淫羊藿女贞子水提物组(E组)、淫羊藿女贞子有效组分组(F组)、地塞米松合淫羊藿女贞子有效组分组(G组)。卵蛋白致敏并激发建立哮喘模型后给药,C、E、G组腹腔注射地塞米松注射液(0.5 mg/kg);D及E组灌胃给予淫羊藿女贞子水提物(4∶3,0.35 g/kg生药);F及G组灌胃给予淫羊藿女贞子有效组分(2∶3,100 mg/kg),均每日1次,共计2周。通过HE、Masson、PAS染色观察肺组织的病理改变,并测量胶原纤维增生情况、标准化总管壁厚度(Wat)、标准化平滑肌厚度(Wam)以及上皮组织标准化杯状细胞面积。结果 与B组比较,C、D、E、F、G组的Wat、Wam值、标准化胶原面积及标准化杯状细胞面积均显著降低(P<0.05或P<0.01);与C组比较,E、F组对纤维增生有显著改善作用(P<0.05),E、F、G组Wat显著降低(P<0.05)。结论 地塞米松合用淫羊藿女贞子水提物或有效组分对改善哮喘气道病理有一定的协同增效作用。

关键词：哮喘,淫羊藿,女贞子,地塞米松,实验研究,病理学

淫羊藿/女贞子 篇2

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级健康雄性SD大鼠60只,3月龄,体重(200±20)g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格证号:SCXK(京)2012-0001。SPF级动物环境,自由饮水、摄食。

1.2 仪器

流式细胞仪(FACS Calibur,美国BD公司);全自动多功能酶标仪(Multiskan MK3,美国THERMO公司);电热恒温培养箱(DH6000II,天津泰斯特仪器有限公司);低温离心机(Sigma3K15,北京五州东方科技发展有限公司);电子天平(SQP,赛多利斯科学仪器北京有限公司);漩涡振荡器(MH-1,其林贝尔仪器有限公司)。

1.3 药品与试剂

淫羊藿总黄酮类提取物(批号:20150419,含总黄酮以淫羊藿苷计为80%,提取率约为2.5%)、女贞子黄酮和萜类提取物(批号:20150221,含量分别以齐墩果酸和芦丁计,总含量>80%,提取率约为5%)(上海一林生物科技有限公司);淫羊藿、女贞子中药材(北京同仁堂);地塞米松磷酸钠注射液(国药集团容生制药有限公司,批号:1501408-C22);地塞米松荧光素(Invitrogen,批号:1654506);GR单克隆抗体(Abcam,批号:GR138021-1);TRTIC标记荧光二抗(Abcam,批号:709239);FITC-GR二抗(Abcam,批号:ab51379);Ⅰ型胶原酶(Sigma);0.25%胰蛋白酶消化液(凯基生物,批号:20150817);大鼠血清CORT酶免试剂盒(美国BG公司,批号:20150918);大鼠血清GR酶免试剂盒(美国BG公司,批号:20150918)。

1.4 实验方法

1.4.1 分组

SD大鼠适应性喂养1周,按随机数字表法分为6组,每组10只。包括正常对照组(N组),模型对照组(M组),淫羊藿女贞子煎剂高(YN高剂量组)、低剂量组(YN低剂量组),淫羊藿女贞子提取物高(YNE高剂量组)、低剂量组(YNE低剂量组)。

1.4.2 药物制备

淫羊藿水煎液:适量称取淫羊藿饮片,首煎加8倍体积的水浸泡1 h后加热煮沸,文火保持沸腾30 min,搅拌、趁热滤取药液;药渣再加原药量6倍的水加热煮沸,改文火续煎30 min后过滤,合并两次药液,浓缩至含生药0.35 g/m L,4℃保存。女贞子水煎液煎药方法同上。

1.4.3 造模与给药

参考文献[9],除N组外,各组大鼠分别给予两大腿内侧交替肌内注射地塞米松1 mg/kg,每周2次,共计8周,N组大鼠给予等体积的生理盐水。造模的同时,各组动物给予相应的药物,YN高、低剂量组分别给予淫羊藿女贞子(4∶3)煎剂7、3.5 g/kg灌胃;YNE高、低剂量组分别给予淫羊藿女贞子有效成分提取物(2∶3)200、100 mg/kg灌胃;N组、M组,灌服等体积的生理盐水,每日1次。

1.4.4 取材及检测

大鼠禁食16 h后,腹腔麻醉,腹主动脉取血,离心取血清,按照试剂盒说明书,采用ELISA法检测血清CORT、GR含量。完整分离大鼠左侧股骨,剔除所附着的肌肉和结缔组织,用PBS冲洗2次,将骨片剪碎成1 mm×1 mm×1 mm,无EDTA0.25%胰酶37℃水浴消化20~30 min,吸弃上清,骨片加入0.1%Ⅱ型胶原酶,37℃水浴消化2次,每次1 h,收集上清,1000 r/min离心10 min,收集骨细胞沉淀。参考文献[10],以流式细胞术检测骨组织GR蛋白表达量及GC-GR蛋白结合力。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较根据方差齐性检验结果选择LSD-t(方差齐)或Tamhane's T2(方差不齐)检验;相关分析采用Pearson相关法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠血清CORT及GR含量比较

与N组比较,M组血清CORT及GR含量均显著降低(P<0.01);与M组比较,4个给药组血清CORT及GR含量均显著升高(P<0.01)。此外,YN高剂量组血清GR含量较YN低剂量组显著升高(P<0.05)。见表1。

注:与N组比较,**P<0.01;与M组比较,△△P<0.01;与YN低剂量组比较,▲P<0.05;CORT:皮质酮;GR:糖皮质激素受体

2.2 各组大鼠骨组织GR蛋白表达量及GR结合力的比较

与N组比较,M组大鼠骨组织GR蛋白表达量、GR蛋白结合力均显著升高(均P<0.01);与M组比较,4个给药组均能显著抑制骨组织GR蛋白表达量(P<0.01或P<0.05);除YN低剂量组以外,其余3个给药组均能降低大鼠骨组织GR蛋白结合力(均P<0.01)。见表2。

注:与N组比较,**P<0.01;与M组比较,△P<0.05,△△P<0.01;CORT:皮质酮;GR:糖皮质激素受体

2.3 大鼠血清CORT、GR与骨组织GR的相关性分析

相关性分析显示:血清CORT含量与血清GR含量呈显著正相关(r=0.680,P<0.01),与骨组织GR蛋白表达量和结合力呈显著负相关(r=-0.483、-0.559,均P<0.01);血清GR含量与骨组织GR蛋白表达量和结合力均呈显著负相关(r=-0.737、-0.753,均P<0.01);骨组织GR蛋白表达量和结合力呈显著正相关(r=0.648,P<0.01)。见表3。

注:**P<0.01;CORT:皮质酮;GR:糖皮质激素受体

3 讨论

对于GIOP的防治,目前西医并没有理想药物,临床用药常借鉴原发性骨质疏松症(osteorosis pathology,OP)的治疗,大多数学者主张联合使用钙制剂和维生素D,但系统评价远期疗效(36个月后)不显著。中医认为GC为外源性“纯阳”“邪热”之品,长期服用,致火旺伤阴,日久累及肾阳,使肾中阴阳亏损,肾精亏虚无以充实骨骼,诱发OP[11,12]。针对GIOP的中医病机“肾精不足,阴阳两虚”,国家级名老中医李世增教授经多年临床经验筛选具有“阴阳双补,益精壮骨”之功的淫羊藿女贞子药对,用于GIOP的防治,并取得良好的疗效。中药淫羊藿温补肾阳、强筋骨,为补阳药;女贞子滋补肝肾阴精、强腰膝,为补阴药,二药配伍,有“阴阳相济”之妙用。大量研究证实,淫羊藿抗OP作用与其所含的黄酮类物质有关[13,14],女贞子抗OP的主要成分以黄酮类、萜类为主[15,16]。淫羊藿、女贞子均具有药用植物分布广、低毒副作用、价格合理、标本兼治、资源丰富、可长期服用等优点,且组方药味少,有效成分明确。因此,研究淫羊藿女贞子煎剂及其抗OP的有效成分防治GIOP的作用有着良好的开发和应用前景。

GC诱发OP的不良反应主要通过GR介导,抑制成骨细胞增殖分化,影响成骨细胞功能,促进成骨细胞凋亡,属于以骨形成减少为主要特点的低转换型OP类型[17,18]。GR的功能活性由GR的蛋白表达数量和GR的配体亲和力两方面因素决定,对于GR在GIOP发病中的变化目前尚未有文献报道。结合中医的现代研究观点“GR是肾阴、阳虚证的相关共性蛋白[19,20]”认识,本课题主要观察GIOP大鼠体内GR的变化,探讨淫羊藿女贞子煎剂及提取物对GIOP骨组织的保护机制。本实验采用流式细胞术检测骨组织GR蛋白表达量及结合力,结果显示,GIOP大鼠骨组织中GR蛋白表达量及GR结合力均显著升高(P<0.01),提示外源性GC可诱导骨组织高表达GR,且GR与GC的结合敏感性增加。应用淫羊藿女贞子煎剂及提取物治疗,均能显著下调GIOP大鼠骨组织中GR蛋白表达及结合力(P<0.01或P<0.05)。骨中GR蛋白数量及功能的减弱,表明GC对骨组织作用的敏感性降低,防止GC在使用过程中对骨组织产生的不良危害。

文献研究表明,GC类药物的超生理剂量或长期应用可抑制肾上腺皮质功能[21,22],致使机体内源性CORT分泌减少,GR功能减弱,本实验得出相似的结果。大鼠经8周地塞米松造模后,血清CORT、GR含量均显著降低(P<0.01),出现GR功能的显著抑制,从而导致激素用药的敏感性降低及所发挥的抗炎等药理作用减弱。提示激素抵抗的出现,需要加大GC剂量才能够控制病情,甚至大剂量GC应用也不能奏效,反而导致一系列严重的副作用。而应用中药淫羊藿女贞子后,能显著增加GIOP大鼠血清CORT、GR含量(P<0.01),提示药物能够保护内源性GC作用途径,恢复对激素的敏感性,从而可预防激素抵抗的发生,降低激素用量,这可能为临床大量相关免疫性疾病治疗中的激素应用及激素抵抗的预防提供了有益的启示。

GC对血中GR含量的影响主要与激素的药理作用有关,而对骨组织GR的影响作用则与诱导OP的发生有关。上述研究发现,GC长期应用能抑制血清GR含量,却上调骨中GR蛋白表达及结合力,提示GC长期应用,会导致其药理作用的敏感性降低,但对骨代谢的抑制作用反而增强。相关分析的结果提示,血清CORT含量与血清GR含量呈正相关(P<0.01),但与骨组织GR蛋白表达量和结合力均呈显著负相关(P<0.01);血清GR含量分别与骨组织GR蛋白表达量及结合力呈负相关(P<0.01)。进一步验证了当出现激素耐受时,虽然激素药理活性降低,但并不影响对骨代谢的副作用,GC诱导OP的副作用是持续进展的。

综上所述,中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物通过抑制GR在骨组织中的表达,降低GC对骨的危害,防止GIOP的发生。同时,还能明显改善GC对内源性CORT、GR的抑制作用,提高激素作用的敏感性,从而对内源性的GC作用途径有良好的保护作用,减少激素用量,降低GIOP的发生。

摘要：目的 研究淫羊藿女贞子煎剂及其有效成分提取物配伍对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠糖皮质激素(GC)及糖皮质激素受体(GR)的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(N组)、模型对照组(M组)、淫羊藿女贞子煎剂高、低剂量组(7、3.5 g/kg,YN高、低剂量组),淫羊藿女贞子提取物高、低剂量组(200、100 mg/kg,YNE高、低剂量组),每组10只。除N组外,大鼠两大腿内侧交替肌内注射地塞米松(1 mg/kg),每周2次,8周后,采用酶免法检测血清皮质酮(CORT)及GR含量,流式细胞术检测股骨GR蛋白表达量及结合力。结果 与N比较,M组血清CORT及GR含量显著降低(P<0.01),股骨GR蛋白表达量及结合力显著升高(P<0.01)。与M组比较,4个给药组均能显著增加血清CORT及GR含量(P<0.01),下调股骨GR蛋白表达量(P<0.01);YN高剂量组与YNE高、低剂量组能显著降低股骨GR蛋白结合力(P<0.01)。结论 淫羊藿女贞子抗GIOP的作用机制与抑制GR在骨组织的表达、降低GC对骨组织的作用有关。

淫羊藿/女贞子 篇3

1 实验部分

1.1 仪 器

UV2550紫外分光光度计,日本岛津公司;XH-2008智能温控超声合成/萃取仪(频率: 25 kHz),北京祥鹄科技发展有限公司。

1.2 试 剂

淫羊藿药材,采购于达州市药店,产地四川;淫羊藿苷标准品,阿拉丁试剂;其余试剂均为分析纯。

1.3 实验方法与结果

1.3.1 淫羊藿苷标准曲线的绘制

精密称取淫羊藿苷标准品10.8 mg置于100 mL容量瓶中,甲醇溶解并稀释至刻度,得浓度为0.108 μg/mL的标准贮备液;分别贮备液从中取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于25 mL 容量瓶中,使用甲醇定容至刻度。摇匀后用UV2550紫外分光光度计在270 nm处,以甲醇为空白分别测其吸光度值,以淫羊藿苷浓度C对吸光度A进行线性回归(见图1)。回归方程为:C=27.706A+0.4203,在5～25 μg/mL 浓度范围内线性良好(r=0.9999)。

1.3.2 超声波辅助乙醇提取工艺考察

1.3.2.1 正交实验设计

干燥的淫羊藿经中药粉碎机粉碎后准确称取5.0 g 分别按照正交实验L9(34)因素条件(表1)进行提取,提取后进行抽滤除去滤渣,然后将滤液使用甲醇定容于100 mL容量瓶中,然后精密量取0.2 mL 所以甲醇定容于25 mL容量瓶中,摇匀后在270 nm处测其吸光度。

1.3.2.2 正交实验结果

按照表1中正交实验的因子与水平,设计并进行正交实验,根据吸光度计算提取含量所得实验结果如表2所示。

从表2分析可见,四个正交实验因素对淫羊藿苷的提取影响可以看出其中R-B为最大值,说明超声波提取功率为淫羊藿总黄酮提取的关键因素;R-C为最小值,说明提取时间对淫羊藿总黄酮影响最小。综合以上各因素的影响,淫羊藿苷的提取四个因素含量影响大小的顺序为B>A>D>C。并可以确定超声波提取淫羊藿苷总最佳工艺为90%乙醇、900 W超声波功率、60 min回流时间以及1:20的料液比。

2 结果与讨论

2.1 结 果

正交实验结果可以直接看出,超声波的功率对提取效果影响显著,并且提取时间、料液比、超声波功率各因素都对淫羊藿苷的提取有着明显的影响,根据正交实验影响因素的验证,淫羊藿苷的提取四个因素含量影响大小的顺序为: 超声波功率>提取剂乙醇浓度>料液比>提取时间。在实验基础上我们最终确定了超声波辅助法提取淫羊藿中淫羊藿苷的最佳工艺是超声波功率900 W,90%的乙醇,在1:20的料液比下提取60 min,提取含量为6.53%。

2.2 讨 论

我们根据文献发现乙醇提取淫羊藿苷的效果较佳[5],超声波不但对固体样品提取具有明显的效果且能促进提取溶剂提取的能力,缩短提取过程。还能避免常规加热提取造成的目标成分的不稳定而容易被破坏等优点吸引着研究人员的兴趣[6,7,8]。所以我们选择超声波辅助乙醇水溶液进行提取的工艺研究,希望在尽量不破坏目标成分的基础上提高提取效率。而通过实验的结果来看,超声波对中药淫羊藿中淫羊藿苷的提取确实能缩短提取时间,降低提取温度:实际提取温度仅为35 ℃,提取效率高的优点,这些研究可以为淫羊藿苷的超声波提取提供了理论依据和技术基础。

参考文献

[1]王静,李建平,张跃文,等.淫羊藿药理学研究进展[J].中国药业,2009,18(8):60-61.

[2]王昌林,李星,王奥新.淫羊藿及其有效成分的药理研究概况[J].中国中药杂志,1998,23(3):183-184.

[3]张春华,严云良.医药数理统计[M].北京:科学技术出版社,2001:270.

[4]申庆亮,丁涛.正交设计法研究淫羊藿提取工艺条件[J].中国实验方剂学杂志,2001,7(5):5-6.

[5]王成军,邓晓娟.淫羊藿总黄酮提取工艺研究[J].基层中药杂志,2002,16(5):33-33.

[6]杨帆,钟桂雄,赵洪普,等.不同方法提取淫羊藿苷的正交试验研究[J].中国药房,2005,16(6):416-418.

[7]赵丽东,张华峰,董静洲等.淫羊藿苷的超声波强化提取及其稳定性初探[J].西北农业学报,2007,16(6):285-288.

淫羊藿药理作用的研究进展 篇4

1 降血糖及减轻糖尿病并发症

张洁等[2]给小鼠腹腔注射四氧嘧啶造成糖尿病模型, 以淫羊藿总黄酮50mg/kg和100mg/kg的剂量给小鼠灌胃, 结果发现高低剂量的淫羊藿总黄酮均能降低糖尿病小鼠的血糖;淫羊藿苷能改善链脲霉素诱导的大鼠糖尿病视网膜病变[3], 能通过调节转化生长因子β1和IV型胶原蛋白的表达对实验性糖尿病肾病 (链脲佐菌素诱导的) 产生保护作用[4], 包慧兰等[5]用淫羊藿苷灌胃给大鼠, 给药8周后, 发现淫羊藿苷能抑制糖尿病引起的体重下降, 减少了左心室内压最大上升和下降速度, 降低左室舒张末压, 可显著提高糖尿病大鼠的心脏功能。

2 对骨骼系统的影响

淫羊藿可以通过提高性激素水平, 调节骨相关蛋白及RNA的表达等来改善骨损伤, 促进成骨细胞及软骨细胞增殖, 抑制破骨细胞[6]。

3 对生殖系统的影响

淫羊藿的主要成分为淫羊藿苷, 淫羊藿苷为磷酸二酯酶Ⅴ型抑制剂, 可以显著增加一氧化氮 (NO) -环磷酸鸟苷 (c GMP) 信号通路活性, 从而增加阴茎的勃起功能[7]。淫羊藿苷对雌性性腺也具有“助阳”作用, 可以提高雌性激素的水平;淫羊藿苷还可以通过刺激下丘脑和垂体间接提高血清中的睾酮水平, 产生壮阳作用[8]。

4 对心血管系统的作用

淫羊藿具有抗心力衰竭、抗心肌缺血、抗心律失常、降血压的作用[9,10]。

5 抗肿瘤作用及抗氧化作用

王婷等人[11]对六种淫羊藿中的黄酮 (木犀草素、金丝桃苷、朝藿素、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ) 进行了抗氧化与抗肿瘤活性的研究, 以DPPH清除率为指标时, 木犀草素、金丝桃苷和朝藿素具有较强的抗氧化作用, 且抗氧化作用大于维生素C;而离体实验表明, 淫羊藿苷、木犀草素、朝藿素和宝藿苷Ⅰ能抑制人乳腺癌细胞株 (MCF-7) 和人肝癌细胞株 (Hep G2) 的增殖。

6 对血液系统的作用

CFS是促进人或动物骨髓细胞增殖、分化和成熟的一类糖蛋白, 以小鼠为研究对象, 淫羊藿苷能使脾淋巴细胞产生CFS样活性, 提高小鼠的造血功能[12];米健国等人研究发现, 以康力龙为阳性对照药, 淫羊藿能够影响慢性再障模型大鼠的造血调控因子, 从而能够促进大鼠骨髓造血功能的恢复[13]。

7 其他作用

淫羊藿抗骨质疏松症临床研究 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院近年来收治的50例骨折合并骨质疏松患者, 随机分为观察组和对照组各25例。观察组男11例, 女14例, 年龄57~78岁, 平均年龄 (66.47±3.01) 岁。对照组男12例, 女13例, 年龄58~79岁, 平均年龄 (67.14±3.21) 岁。两组患者在性别、年龄、病程等方面差异均无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 方法

观察组常规外科治疗骨质疏松性骨折的同时加服仙灵骨葆胶囊 (贵州同济堂制药公司生产) , 3粒/次, 2次/d, 或益肾继骨片 (本院生产) :5粒/次, 3次/d, 66周周为为11个个疗疗程程。。对照组常规外科治疗骨质疏松性骨折的同时加服钙剂和活性维生素D, 6周为1个疗程。2年后随访。

1.3 监测指标

用双能X线骨密度仪检测腰椎前后位骨密度。

1.4 疗效判断标准

腰背痛明显减轻或基本消失, 腰椎骨密度上升为显效;腰背痛有减轻, 腰椎骨密度上升为好转;腰背痛持续无减轻, 腰椎骨密度继续下降为无效。

1.5 统计学方法

所有数据输入SPSS17.0软件包进行处理, 计数资料采用χ2检验, 计量资料采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后相关指标比较

治疗前, 两组ALP、Ca、P值差异均无统计学意义 (P>0.05) ;两组治疗后ALP、Ca、P值均高于治疗前, 且观察组均高高于于对对照照组组, , 差差异异均有统计学意义 (P均<0.05) 。详见表1。

2.2 两两组组骨骨密密度度比比较较

观察组治疗前骨密度为 (0.689±0.211) g/m2, 治疗后为 (0.754±0.112) g/m2, 治疗后高于治疗前, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;对照组治疗前骨密度为 (0.682±0.197) g/m2, 治疗后为 (0.712±0.147) g/m2, 治疗后高于治疗前, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。治疗后观察组骨密度高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。

2.3 两组疗效比较

观察组25例中, 显效16例 (64.0%) , 好转8例 (32.0%) , 无效1例 (4.0%) , 总有效率为96.0%;观察组25例中, 显效11例 (44.0%) , 好转8例 (32.0%) , 无效6例 (24.0%) , 总有效率为84.0%。观察组总有效率高于对照组, 差异有统计学意义 (χ2=4.15, P<0.05) 。

3 讨论

老年人由于骨质疏松, 易发生骨折, 治疗后易发生再次骨折, 对老年人的身心造成极大伤害。目前骨质疏松性骨折的治疗包括复位、固定和抗骨质疏松药物等。骨折早期, 破骨细胞活跃, 骨吸收增强, 而且骨量因制动或卧床等原因快速丧失, 因此应选用较强的抗骨质吸收方法使骨丢失受到抑制[1,2]。

仙灵骨葆胶囊或益肾继骨片由淫羊藿、续断、补骨脂等组成, 具有滋补肝肾、接骨续筋、强身健骨之功效。现代医学认为淫羊藿能促进机体代谢, 通过促进成骨细胞的生成, 抑制破骨细胞活性与骨吸收, 促进骨的形成和再重建[3];能提高骨密度, 增加钙含量及骨折断端骨痂面积, 镇痛作用明显;淫羊藿中的黄酮类化合物能和骨组织中雌激素B受体结合[4,5], 维持成骨细胞和破骨细胞的动态平衡, 从而有效预防骨质疏松。

老年人由于钙磷代谢障碍, 体内钙储备较低。本研究中, 两组经过治疗后, ALP、Ca、P的含量均为观察组高于对照组, 两组治疗后均高于治疗前, 说明补充钙剂、活性维生素D、服用仙灵骨葆胶囊 (或益肾继骨片) 都能促进钙在体内的储存, 促进成骨和骨重建, 但是服用仙灵骨葆胶囊 (或益肾继骨片) 的作用更明显, 对促进老年人骨折后新骨的生成和钙化作用更大。治疗后观察组骨密度明显高于对照组, 也说明仙灵骨葆胶囊 (或益肾继骨片) 更能改善老年人骨质疏松。观察组治疗后总有效率明显高于对照组, 说明淫羊藿具有较好的镇痛作用和提高骨密度的作用。

总之, 淫羊藿治疗骨质疏松症骨折, 疗效肯定, 并起到整体调节的作用, 且使用安全、无毒副作用, 值得临床推广应用。

参考文献

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淫羊藿总黄酮提取方法的比较研究 篇6

1 材料与方法

1.1 主要仪器、试剂与药材

紫外-可见光分光光度计(UV-BlueStar Plus),购自北京莱伯泰科仪器有限公司;分析天平(AUW120D),日本岛津公司生产;多管架自动平衡离心机(LD550),购自湘仪离心机仪器有限公司;超声波清洗器(KQ-250型),购自昆山市超声仪器有限公司;常规玻璃仪器,市购。

甲醇、乙醇(分析纯),购自天津市光复精细化工研究所;纯化水、超纯水,自制。

淫羊藿,购自兰州黄河药材市场,经鉴定为淫羊藿的干燥地上部分;淫羊藿苷对照品(批号为110737—200414),购自中国药品生物制品检定所。

1.2 检测波长的选择

精密吸取淫羊藿苷对照品0.84 mg,置于50 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,以甲醇作空白对照,在210～400 nm波长范围内进行扫描。

1.3 线性关系考察

精密吸取对照品溶液1,2,3,4,5 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。以甲醇作空白对照,在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度。以吸光度(Y)对淫羊藿苷浓度(X)进行线性回归分析。

1.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液2 mL置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度,连续测定5次。

1.5 供试品溶液的制备

精密称取淫羊藿粉末2 g,平行25份,随机分为5组(水煎组、超声1组、超声2组、超声3组和回流组),每组5个重复。水煎组加纯化水100 mL煎煮30 min,放置至室温,过滤;超声1组、超声2组和超声3组分别加纯化水、甲醇和80%乙醇100 mL超声提取30 min,过滤。回流组加80%乙醇100 mL,回流30 min,放置至室温,过滤。各组滤液均置于200 mL容量瓶中,加提取溶剂至刻度,摇匀,精密吸取0.25 mL置于25 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。

1.6 稳定性试验

精密称取淫羊藿2 g,按1.5中水煎组“供试品溶液的制备”方法制成供试品溶液,在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度,每隔1 h测定1次,共测8次。

1.7 重复性试验

将水煎组的5份供试品溶液在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度,计算样品含量。

1.8 加样回收率试验

精密吸取5份含量为0.532 9 mg/mL的样品溶液0.1 mL,分别加入对照品溶液3.0 mL,置于25 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度,计算样品含量。

1.9 样品总黄酮含量的测定

取供试品溶液,以甲醇作空白对照,在1.2所得最大吸收波长处测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量。

2 结果与分析

2.1 检测波长的确定(见图1)

由图1可见,淫羊藿苷在270 nm处有最大吸收峰,故确定检测波长为270 nm。

2.2 线性关系考察结果

以吸光度(Y)对淫羊藿苷浓度(X)进行线性回归,得回归方程为Y = 35.499X - 0.005 4,R2=0.999 6。表明淫羊藿苷在1.68～8.40 μg/mL范围内线性关系良好。标准曲线见图2。

2.3 精密度试验结果

结果表明,吸光度平均值为0.111 94,相对标准偏差(RSD)为0.18%,表明精密度良好。

2.4 稳定性试验结果

结果表明,吸光度平均值为0.173 02,RSD为1.84%,表明供试品溶液在7 h内稳定。

2.5 重复性试验结果

结果表明,5份样品的平均含量为5.09%,RSD为0.16%,表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验结果(见表1)

由表1可见,平均回收率为99.86%,RSD为1.58%,表明该方法准确性良好。

2.7 样品总黄酮含量(见表2)

注:同列数据肩注大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)。

由表2可见,总黄酮含量依次为回流组>超声3组>超声2组>超声1组>水煎组,回流组和超声3组总黄酮含量极显著高于超声2组、超声1组和水煎组(P<0.01),超声2组总黄酮含量极显著高于超声1组和水煎组(P<0.01),超声1组总黄酮含量极显著高于水煎组(P<0.01),说明采用回流法(用80%乙醇回流)提取淫羊藿总黄酮的提取率最高,水煎法提取率最低。

3 讨论

淫羊藿总黄酮的含量测定多采用紫外分光光度法,主要有以淫羊藿苷为指标性成分,在270 nm波长处测定其含量;使黄酮化合物与铝盐络合后,以芦丁为对照品,在510 nm波长处测定其含量;先用聚酰胺柱层析,以选择性地富集含有酚羟基的黄酮类化合物,再以芦丁为对照品在360 nm波长处测定其含量[4]。其中以淫羊藿苷为指标性成分测定总黄酮含量的方法操作较简便、快速,结果准确,为2010版《中国药典》所载方法。试验采用淫羊藿苷对照品的甲醇溶液在波长210～400 nm之间进行扫描,结果在270 nm处检测到最大吸收峰。因此,选择以淫羊藿苷为指标性成分在270 nm波长处进行了总黄酮的含量测定。淫羊藿总黄酮是从淫羊藿提取的总黄酮成分,淫羊藿苷为主要有效成分。为此,试验以淫羊藿苷为对照品建立标准曲线,进行了不同提取方法提取后淫羊藿中总黄酮含量的测定。

在测定中草药含量时,样品的前处理极为重要,尤其是不同提取方法直接关系到含量测定的准确性和前处理时间的长短。目前,对淫羊藿总黄酮的最佳提取工艺报道较多。王洪锐等[5]用8倍量80%乙醇回流,提取3次,每次30 min,提取效果好;赵燕燕等[6]报道,用20倍量70%乙醇提取3次,每次0.5 h提取效果好。本试验结果表明,用80%乙醇回流提取总黄酮含量最高,水煎提取含量最低,说明测定总黄酮含量时以80%乙醇回流提取最好。80%乙醇超声提取后总黄酮含量略低于回流提取,但二者差异不显著(P>0.05),而超声提取法操作简单,是一种较好的前处理方法。

4 结论

采用回流法提取淫羊藿总黄酮提取率高,操作简便、快速,可作为淫羊藿中总黄酮含量测定的首选提取方法。

摘要：为了比较不同提取方法对中药淫羊藿总黄酮含量的影响,试验采用水煎、超声波和回流法进行总黄酮的提取,采用紫外分光光度法测定其含量。结果表明:回流组和超声3组总黄酮含量极显著高于超声2组、超声1组和水煎组(P<0.01),超声2组总黄酮含量极显著高于超声1组和水煎组(P<0.01),超声1组总黄酮含量极显著高于水煎组(P<0.01)。说明采用回流法(用80%乙醇回流)提取淫羊藿总黄酮的提取率最高,水煎法提取率最低。

关键词：总黄酮,回流,超声波,紫外分光光度法

参考文献

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淫羊藿/女贞子 篇7

关键词：淫羊藿多糖,运动疲劳,糖代谢

植物多糖是一种广泛存在于植物中的天然大分子物质,近几年来人们研究证实,植物多糖主要通过提高机体的免疫能力、 抗氧化能力和调节机体的糖代谢来促进运动疲劳的恢复[1,2]。 淫羊藿为小檗科淫羊属植物, 具有补肾助阳的功效, 淫羊藿多糖( Epimedium Polysaccharide, EP) 被证明具有良好的抗氧化活性和免疫调节活性[3,4]。 为了探索淫羊藿多糖抗运动疲劳的效果和机制, 本研究建立了一个4周的小鼠游泳疲劳模型,通过给动物服用一定剂量的EP,检测了运动前后动物糖原储备、 血糖、 血乳酸等生化指标以及力竭时间。 实验结果可以为EP的开发与应用提供实验数据。

1材料与方法

1.1材料淫羊藿购自当地中药店, 多糖提取过程在陕西师范大学运动营养学实验室进行, 采用了常规的水提醇沉法:淫羊藿干燥破碎,用80%的乙醇浸泡,除去醇溶性小分子物质,药渣用水提取3次( 水温80℃, 料液质量体积比为1:10) ,合并滤液,离心取上清,浓缩至原液的1/3体积,用终浓度为80%乙醇沉淀,依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,冷冻干燥后得到浅黄色的EP粉末,干燥箱保存待用。 实验动物购自西安交通大学医学院动物饲养中心, 陕动证字:SYXK ( 陕) 2010- 001。 品种为2月龄的昆明种雄性小鼠, 共120只,体重22~26 g,平均( 20.0±2.0) g。 动物饲养室的温度为( 23±3) ℃,湿度为( 45±5)%,动物随意摄食饮水,光照随同自然光变化。

1.2动物模型动物适应饲养1周后随机分为4组: 对照组、 低剂量组100 mg/ ( kg·d)( EP- L) 、 中剂量组200 mg/ ( kg·d)( EP- M) 和高剂量组400 mg/ ( kg·d) ( EP- H) ,每组30只。 动物的运动方案见表1。 水池长宽深为65、50、50 cm,水温30~35℃。 各组小鼠采用负重( 尾部系上5%体重的铅丝) 方式游泳,时间为每天下午5点, 灌胃时间为游泳后1 h,EP用时配成小体积水溶液,灌胃体积根据剂量要求,对照组用生理盐水代替。 力竭判断标准为:小鼠沉入水下5 s不能返回水面。

注:a分别于力竭运动前、力竭运动后即刻和力竭运动后3 h采样。

1.3样品测试制备血清, 在全自动化分析仪( ACE, 美国) 上测定血糖、血乳酸( BLA) 的浓度;制备骨骼肌、 肝脏组织匀浆, 采用南京建成生物制剂公司的试剂盒测定肝糖原和肌糖原,操作依据说明进行。

1.4统计学分析所得数据用excel软件进行组间t检验,结果以x±s表示。

2结果

2.1 EP对小鼠力竭时间的影响EP对小鼠力竭时间的影响结果见图1。

注 :EP-L为淫羊霍多糖低剂量组 ;EP-M为中剂量组 ;EP-H为高剂量 。a与对照组相比较 ,P<0.05

从图1结果可以看出,与对照组相比较,中、高剂量EP组小鼠的力竭时间显著延长( P<0.05) ,而低剂量EP对力竭时间影响不大,说明淫羊藿多糖在一定剂量的剂量范围之内,具有抗运动疲劳的作用。

2.2 EP对小鼠血糖和BLA含量的影响小鼠服用不同剂量的EP后,血糖和BLA的含量变化结果见表2。

表2结果显示, 运动后即刻各组小鼠血糖较运动前中、高剂量EP组都有显著性下降( P<0.05) ,运动后3 h各组血糖已恢复至运动前水平。 运动后即刻各组小鼠BLA较运动前都有显著性增加( P<0.05) , 经过3 h恢复后,与运动前相比较,小鼠中剂量EP组和对照组依然显著高于运动前水平。 服用EP组小鼠与对照组平行相比较, 各剂量组小鼠运动后即刻BLA值均显著低于对照组( P<0.05) ,表明一定剂量EP可使BLA产生量降低。

注:EP-L为淫羊霍多糖低剂量组;EP-M为中剂量组;EP-H为高剂量组。a与对照组相比较,P<0.05;b与运动前对比,P<0.05。

2.3 EP对小鼠糖原含量的影响EP对小鼠糖原含量的影响结果见表3。

注:EP-L为淫羊霍多糖低剂量组,EP-M为中剂量组,EP-H为高剂量组。a与对照组相比较,P<0.05;b与运动前对比,P<0.05。

表3结果显示,各组运动后即刻与运动前相比较, 肌糖原含量都显著下降( P<0.05) ,肝糖原含量只有高剂量EP组显著下降,说明力竭运动导致小鼠体内糖原储备减少。 不同剂量EP组小鼠肌糖原与肝糖原含量,在运动前、 运动后即刻与对照组相比较, 均无显著性差异;运动恢复3h后,各组再次与对照组比较,发现EP各组肌糖原与肝糖原都有显著性升高。 说明EP能够促进机体对糖原储备的恢复,这可能是EP各组小鼠在运动时间上的延长的主要原因。

3讨论

长时间大强度运动时, 体内糖原储备的耗竭是导致运动疲劳产生的主要原因之一[5,6,7]。 随着运动强度的增加,糖原代谢的乳酸也会大量生成和堆积[8],促使运动疲劳的产生[9],因此,BLA的含量能够反映机体糖代谢的适应程度[10,11],许多研究表明,植物多糖具有理想的抗疲劳的作用[12,13,14,15]。 本研究结果证明, 服用一定剂量的EP后,小鼠的游泳力竭时间比对照组有显著的延长。 通过一些与疲劳相关指标的检测, 发现各组小鼠血糖浓度的比较差异不大, 这与一般情况下机体的血糖水平会保持动态恒定有关,尽管大强度运动后即刻,血糖值会有较大的变化。 糖原是运动中机体主要能量来源,其储备量决定运动时间的长短[16]。 本实验结果显示,机体运动前的糖原储备也高于对照组,运动后恢复期,不仅糖原恢复效果好于对照组,说明EP具有抗运动疲劳的作用,其机制可能与其增加的机体糖原储备、改善了糖代谢产物有密切关系。 这为进一步开发运动补剂提供了理论依据。