液质联用法

液质联用法（精选7篇）

液质联用法 篇1

摘要：依据《饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》GB/T 23214-2008,通过液相色谱-串联质谱法测定饮用水及源水中中敌百虫的含量

关键词：液相色谱—串联质谱法,敌百虫

敌百虫属于有机磷农药磷酸酯类型的一种，多用于杀虫剂，在农业领域被广泛适用。《饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》GB/T23214-2008

中规定了用液质联用法测定生活饮用水及其水源水中敌百虫的检测方法。

第一部分，检测方法和原理：

检测方法：经过萃取剂萃取并且富集的手段，用液质联用仪正模式下测定的方法。

第二部分，使用到的试剂以及仪器：

A.仪器

1、美国安捷伦公司6430型液质联用仪

检测器型号：6430 Triple Quad LC/MS:;

色谱柱型号：Agilent SB-C18柱，3.5·2.1·100mm；

自动进样器型号:1260型；

B.试剂

1、载气：液氮；

2、流动相A：甲醇（进口）；

3、流动相B：超纯水；

4、乙酸胺（分析纯);(配成5.0毫摩尔乙酸胺待用）

5、乙腈（色谱纯）；

6、甲酸（进口）；

7、敌百虫标准溶液(进口标准）；

第三部分，检测方法的确认步骤：

A.方法检测条件定性以及优化步骤：

配制高浓度敌百虫标准，通过液质联用仪检测，根据色谱峰形状和峰面积对方法进行优化，确定检测条件如下：

按照优化后的检测条件进样检测，确定敌百虫保留时间为4.46min。

B.标准曲线的测定

分别取0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL敌百虫标准使用溶液，溶于10mL甲醇水（1:1）溶液中，配制的浓度值分别为（ug/l):100,200,400,600,800。测定后峰面积分别为：4431,6202,18541,30868,40179。此外标法线性的相关系数为0.991。

C.精密度的测定

配制敌百虫中间浓度的标准溶液，重复进样7次，测得结果如下表（ug/l):

利用Grubbs检验法进行检验，判断无异常值

D.检测限计算

配制敌百虫，重复进样11次，测得结果如下表(ug/L):

利用Grubbs检验法进行检验，以判断是否有异常值。

DL=SD×t(n-1,0.01）。[t(n-1,0.01）是单侧显著性水平，t取2.764]DL为仪器检出限（单位：mg/L):

定量检出限一般为仪器检出限的5倍，并对数据圆整。

水样检测限（单位：mg/L）的确定：水样在测定时，取250mL水样进行固相萃取，最后得1mL洗脱液，所以水样检测限是定量检测限1/250。最后将数据取整后，得敌百虫检出限为0.0004mg/L。

E.定量检测限的验证

配制浓度接近仪器定量检出限的标准溶液，进样2次，结果如下：

F.高低浓度回收率的确认

配制高浓度和低浓度敌百虫标准溶液并重复进样2次，测得结果如下：

低浓度人回收率：

高浓度回收率：

第四部分，结论：

1.《饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》GB/T 23214-2008

中提出了水中敌百虫的最大允许浓度可以满足该规范对水质检测的要求。

2.《饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》GB/T 23214-2008

包含了液质联用分离检测水中敌百虫的检测方法。这次方法确认工作表明此检测过程可以复现。

参考文献

《饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》GB/T 23214-2008

液质联用法 篇2

关键词：液质联用,2-巯基苯并噻唑,检测

2 - 巯基苯并噻唑,纯品为淡黄色粉末,有微臭和苦味,溶于丙醇、乙醇、氯仿、氨水、氢氧化钠和碳酸钠等碱性溶液,微溶于苯,不溶于水和汽油,主要用作橡胶的硫化促进剂,也用作农药杀菌剂,又可用作腐蚀抑制剂。

2 - 巯基苯并噻唑作为通用型硫化促进剂,合成研究报道很多[1,2],广泛用于各种橡胶。对于天然橡胶和通常以硫磺硫化的合成胶具有快速促进作用。但使用前需要氧化锌、脂肪酸等活化。常与其他促进剂体系并用,如与二硫代秋兰姆和二硫代氨基甲酸碲并用可作丁基胶的促进剂; 与三盐基顺丁稀二酸铅并用,可用于浅色耐水的氯磺化聚乙烯胶料,在胶乳中常与二硫代氨基甲酸盐并用。

2 - 巯基苯并噻唑在橡胶中易分散、不污染,但具有一定的毒性。因此,建立适当的检测方法来测定2 - 巯基苯并噻唑的含量是非常有必要的。目前,对于2 - 巯基苯并噻唑的检测主要采用气相色谱和高效液相色谱法[3,4,5,6],本研究利用2 - 巯基苯并噻唑溶于丙酮的特点,对样品用丙酮进行萃取,由于2- 巯基苯并噻唑具有紫外吸收,且在碱性条件下容易电离,选用超高效液相色谱- 二极管阵列- 质谱联用技术来快速分析塑胶制品中2 - 巯基苯并噻唑。

1 实验

1. 1 样品的前处理

从样品干净部位取样,剪碎至2 mm × 2 mm × 2 mm以下,称取1 g ± 0. 1 g( 精确至0. 1 mg) 的样品于60 m L玻璃反应瓶中,加入10 m L的丙酮,萃取60 min,反复以上操作一次,合并两次的提取液,混匀,用旋转蒸发仪浓缩至少量剩余,再慢慢氮吹至干,然后用丙酮定容至1m L,最后将样品通过0. 22 μm微孔滤膜过滤,得到待测试样,UPLC - PDA - MS分析测试。

1. 2 检测方法

1. 2. 1 仪器设备

ACQUITY UPLC H - CLASS SQD2 液相色谱- 二极管阵列-质谱联用仪( UPLC - PDA - MS) ,美国Waters公司; 2300HT超声波清洗器,上海安谱科学仪器有限公司; H1650 台式高速离心机,长沙湘仪离心机仪器有限公司; V - 850 旋转蒸发仪,瑞士BUCHI公司; XW - 80A漩涡混合器,上海精科实业有限公司; X205BDU十万分级分析天平,瑞士METTLER TOLEDO公司; AL204 万分级分析天平,瑞士METTLER TOLEDO公司。

1. 2. 2 实验材料

UPLC级丙酮,上海安谱科学仪器有限公司; 2 - 巯基苯并噻唑标准品,德国Dr. Enrenstorfer。

1. 2. 3 标准溶液的配制

用十万分级分析天平准确称取0. 01 g的2 - 巯基苯并噻唑标准品,加入10 m L容量瓶中,用丙酮溶解定容,配成1000 mg / L的标准储备液,然后逐级稀释成0. 1、0. 5、1、2、5、10 mg / L的标准工作溶液。

1. 2. 4 液相色谱- 二极管阵列- 质谱检测器条件选择

1. 2. 4. 1 液相色谱条件:

色谱柱: ACQUITY UPLC( R) BEH C181. 7 μm,2. 1 × 100mm Column; 保护柱: ACQUITY UPLC( R) BEH C181. 7 μm,2. 1× 5 mm Van Guard Pre - Column; 流动相A: 10 mmol / L乙酸铵水溶液,流动相B: 乙腈; 分析时间: 4 min; 流速: 0. 2 m L/min; 柱温: 40 ℃ ; 进样量: 1 μL。具体的洗脱程序见表2。

1. 2. 4. 2 二极管阵列检测器条件

波长扫描范围: 190 ~ 400 nm; 扫描通道: 324 nm; 采集速率: 20 点/秒; 采集时段: 0 ~ 4 min。

1. 2. 4. 3 质谱检测器条件

电离方式: ESI-; 载气: 液氮; 毛细管电压: 2. 0 k V; 锥孔电压: 50 V; 脱溶剂气温度: 500 ℃; 脱溶剂气流速: 1000 L/h;扫描方式: SCAN和SIR; SCAN离子范围( m/z) : 80 ~ 300;SIR离子( m / z) : 166. 2。

1. 2. 5 定性定量方法

通过PDA光谱图和MS质谱图同时对待测物质进行定性,采用外标法按PDA最大吸收波长324 nm处吸光度的峰面积或MS中SIR离子166. 2 的响应值进行定量。

1. 3 检测结果

1. 3. 1 2 - 巯基苯并噻唑的出峰情况及定量波长和定量离子的选择

在上述条件下,2 - 巯基苯并噻唑能够得到很好分离,基线平稳,峰形对称,达到了很好的试验结果。

1. 3. 2 标准工作曲线

从图3 中2 - 巯基苯并噻唑的PDA和MS标准工作曲线可以看出,在0. 1 ~ 10 mg/L的线性范围内,2 - 巯基苯并噻唑的PDA和MS线性相关系数均达到0. 999 以上,完全能满足测试要求。

1. 3. 3 检出限确定

在该方法条件下,对不同浓度的标样进行分析,可得出2- 巯基苯并噻唑的PDA和MS检出限( 3 倍信噪比) 均能达到0. 1 mg / L,可以满足2 - 巯基苯并噻唑的测试要求,如图4 所示。

1. 3. 4 精密度实验

在该方法条件下,取中间浓度点2 mg/L的2 - 巯基苯并噻唑标准样品,连续测定7 次,可得相对标准偏差< 5% ,精密度较好。结果见表5。

1. 3. 5 准确度实验

在该方法条件下,在空白样品中分别加入浓度为0. 05 mg/L,2 mg / L,10 mg / L的标样,每一个浓度点做三次平行试验,计算加标回收率。通过加标测试,得到2 - 巯基苯并噻唑的回收率在90% ~ 110% 之间,可见该方法准确度较高。结果见表6。

2 结论

( 1) 本研究建立了一种超高效液相色谱- 二极管阵列- 质谱联用法测定塑胶样品中2 - 巯基苯并噻唑的分析测试方法。该方法串联了PDA和MS两种检测器,能更好地对待测物质进行定性定量分析。

( 2) 该方法简便快速,选用丙酮作为萃取剂,通过两次超声萃取后就能达到很好的萃取效果,在优化的分析条件下,2- 巯基苯并噻唑在4 min时间内可以得到很好的色谱峰,并能获得很好的分离效果。

( 3) 该方法检测限低,重现性好,加标回收率高,用PDA和MS同时对2 - 巯基苯并噻唑进行定量分析,在0. 1 ~ 10 mg/L的浓度范围内线性良好,线性相关系数均能达到0. 999,检出限达到0. 1 mg/L,相对标准偏差< 5% ,样品加标回收率为90% ~ 110% .

参考文献

[1]陈江,陈春光.橡胶硫化促进剂2-巯基苯并噻唑的合成进展[J].精细石油化工进展,2011,12(12):43-46.

[2]奚国辉,王晓华.2-巯基苯并噻唑合成反应工艺研究[J].石化技术与应用,2003,21(4):259-261.

[3]赵建宏,张梅梅,程相林,等.高效液相色谱法同时测定反应液中的苯并噻唑和2-巯基苯并噻唑[J].郑州大学学报,2015,36(1):37-40.

[4]毛树禄,吕培其,张元金,等.高效液相色谱法测定橡胶制品中2-巯基苯并噻唑[J].理化检验(化学分册),2014(10):1242-1244.

[5]翁文婷,郑志福,林世杰,等.超声波辅助固相萃取高效液相色谱法测定橡胶中的MBT[J].商丘师范学院学报,2012,28(12):67-69.

液质联用法 篇3

1993年,BIPM(国际计量局)、ISO(国际标准化组织)、IFXX(国际临床化学联会)等七个国际组织联合制定了《测量不确定度表示指南》[1],将测量不确定度定义为:“与测量结果相关联的一个参数,用以表征合理地赋予被测量之值的分散性”,即不确定度用于表达测量结果的分散程度,是一个可用数字描述的定量概念[2]。,测量的水平越高,试验质量越高,则测量不确定度越小;反之亦然。测量不确定度评定的包括以下几步:第一,规定被测量;第二,识别不确定度的来源;第三,不确量化定度分量;第四,计算合成不确定度;第五,报告不确定度[3]。随着时代的发展,检测手段和检验方法的逐步完善,为了更合理、科学地控制质量,测量不确定度被引入食品药学领域[3]。

液相-质谱联用技术(Liquid Chromatography-Massspectrometry)是20世纪发展起来的一门综合分析技术,该技术在天然药物化学成分分离和鉴定、药物动力学和药物代谢产物研究、蛋白质分离和鉴定、残留物分析、临床诊断研究等方面都具有广泛的应用[4]。作为目前最重要的分离和鉴定分析方法之一的技术,其不确定度的评定也理所应当受到充分重视。近年来液质联用测定的不确定度评定也有不少文献报道,但由于液质联用测定不像传统光谱或高效液相色谱法测定参数简单、重现性好,不同仪器、不同参数、不同目标物质……甚至不同分析时间均产生不同误差,因此不确定度的评定也相对复杂。

本文综述了近年来发表的在食品药品等领域液质联用法评定不确定度的主要文献。

1 液质联用法的测量不确定度评定

张清华、杨劲、贺英等[5]采用液相色谱-串联质谱联用法测定曲克芦丁血药浓度,用自底向上法与方法学验证数据相结合的方法,计算相对标准不确定度和合成相对不确定度。结果:提取回收率和标准曲线是最主要不确定度分量。其中,标准曲线分量大小与浓度范围和重复次数密切相关。

杨杰、谭洁,邹建军[6],评价了液相色谱串联质谱法测定氯吡格雷羧酸代谢物SR26334血药浓度的不确定度,结果20μg/L的SR26334的标准不确定度为0.816μg/L,扩展不确定度为1.63μg/L。结论是样品前处理和标准曲线拟合是浓度测定结果的主要的不确定度来源。

武利庆、王晶[7]比对了直接流动注射电喷雾质谱法和液质联用电喷雾质谱法测定牛血清白蛋白相对分子质量的测量不确定度:直接流动注射法较液质联用法测定扩展不确定度高。作者认为:液质联用电喷雾质谱法测定结果的中心值与理论值更为接近主要是由于在直接流动注射分析时样品中残留的缓冲盐和少量的多肽等杂质可能与牛血清白蛋白形成加合物,使相对分子质量测定结果发生偏差;而液质联用测定时经过色谱柱的分离和脱盐,杂质对相对分子质量测定结果的影响大大降低。

徐淑暖、韩媛媛、陈砚朦等通过超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素的残留[8]量,内标法定量。结果:不确定度的来源主要是标准溶液浓度、标准曲线拟合、待测样品的制备时、回收率和样品测定的重复性等。作者对测量不确定度较大的原因进行了讨论,并对计算方法进行简化,认为样品中氯霉素的含量低,对照品稀释步骤较多,引入贡献最大。并且待测样品基底和前处理复杂,造成回收率偏低,引入的不确定度较大。作者将与天平称量操作的重复性、定容体积重复性和移液体积重复性这几项重复性分量合并为总测量过程的一个分量,由测量结果的重复性表示,不再单独计算。

任雪冬、刘成雁、林雪征等[9]对畜禽肉中十种磺胺类兽药残留检测的不确定度进行了分析和评定。结果:标准品的配制、稀释,标准曲线校准,样品回收率对样品的相对不确定度贡献较大。作者同样认为样品前处理中样本制备、提取、净化等环节带来的污染或损失,基质干扰,仪器进样、检测器响应等误差均可以通过增加回收率实验考察不确定度贡献。

2 结果与讨论

测定不确定度与测量误差既有区别,又有联系。误差是客观存在的测量结果与真值之差。但由于真值往往不知道,无法准确得到。测量不确定度是说明测量分散性的参数,由分析和评定得到,因而与人的认识程度有关[10]。测量误差很小,但对不确定度的认识不足,计算的不确定度可能较大;反之分析估计不足,给出的不确定度比实际偏小。因此,科学的评估方法是关键。

高效液相色谱法评估测量不确定度的文献较多,鉴于液质联用法与普通高效液相色谱法的主要区别:测量浓度范围低和基质效应。采用液质联用法评定测量不确定度的文献多得出结论:不确定度来源主要为标准曲线和前处理。这主要是由于低浓度需要更多的稀释步骤,减少基质效应需要更复杂的样品前处理步骤,更需要进行回收率的验证;为了消除前处理回收率的变化,可以引入内标定量,而内标物质的回收率和基质效应又需要进一步验证。因此,采用液质联用法评定测量不确定度时应着重关注基质效应和回收率的问题,并且避免重复计算。

摘要：目的:提高液质联用法的测量不确定度的普及与运用水平。方法:精选汇总了近年来国内采用液质联用法评定不确定度方面发表的论文。结果与讨论总结不确定度评定的主要参数,指出了目前研究中存在的主要问题,以期为今后的研究提供基础资料。

关键词：不确定度,液质联用,研究进展

参考文献

[1]顾志荣,金岩,师富贵.不确定度评定在中药质量控制中的应用研究进展[J].亚太传统医药,2014,10(04):79-81.

[2]中国实验室国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南[M].北京:中国计量出版社,2002:11-32.

[3]陆明,范国荣,汪杨,陈桂良,杨美成,陈祝康.测量不确定度在药品检测领域的研究进展[J].中国药事,2013,27(05):485-492.

[4]雷勇胜,宋丽明,蒋庆峰.液质联用技术在药物的有关物质分析中的应用[J].现代仪器,2011,17(04):9-13+8.

[5]张清华,杨劲,贺英,汤丽玲,杜迎翔.对液相色谱-串联质谱测定曲克芦丁血药浓度的不确定度评价[J].中国临床药理学杂志,2010,26(01):68-70.

[6]杨杰,谭洁,邹建军.液相色谱-串联质谱法测定氯吡格雷羧酸代谢物SR26334血药浓度的不确定度评价[J].中国新药与临床杂志,2013,32(08):664-668.

[7]武利庆,王晶.电喷雾质谱法测定牛血清白蛋白相对分子质量及测定结果的不确定度评估[J].化学分析计量,2007,16(1):20-25.

[8]徐淑暖,韩媛媛,陈砚朦,彭寨玉,张少彬.超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素残留量的不确定度评定[J].华南预防医学,2014,40(05):454-458.

[9]任雪冬,刘成雁,林雪征,赵海波.液相色谱-串联质谱法测定畜禽肉中十种磺胺类兽药残留的不确定度评定[J].中国兽药杂志,2011,45(05):20-25.

液质联用法 篇4

关键词：液质联用法,氯霉素,不确定度

依据GB/T 23214-2008饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定[1]对水中氯霉素采用液相色谱-串联质谱法进行测定,参考JJF1059.1-2012测量不确定度评定与表示[2]及化学分析中不确定度评估指南[3]对其进行不去定都评定。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Waters ACQUITY UPLC/TQD。氯霉素标准溶液:100 mg/L,农业部环境保护科研监测所提供。超纯水为Millipore纯水机制备。

1.2 试验方法

1.2.1 标准溶液配制

移取0.5 m L氯霉素标准溶液于50.0 m L容量瓶,纯水定容。此标准使用液浓度为1.0 mg/L。

取1.0 mg/L标准使用液1 m L于10.0 m L容量瓶,纯水定容,此标准使用液浓度为0.1 mg/L。

分别使用0.1、1.0 mg/L的标准使用液配制成浓度为0.0005、0.001、0.002、0.005、0.01、0.02、0.05 mg/L的标准溶液。

1.2.2 分析条件

色谱柱选用ACQUITY UPLCBEH C18柱(1.7μg,2.1 mm×50 mm)。流动相:A为含0.01%甲酸和0.05%氨水的超纯水,B为乙腈。进样量为5μL。

质谱采用电喷雾电离源(ESI-),多反应监测(MRM)模式,定量离子为320.9>256.95,定性离子为320.9>151.95,碰撞电压分别为10 V、18 V。流动相梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2 结果与不确定度报告

2.1 被测量及数学模型

样品中氯霉素的含量即为被测量,计算公式:

式中:C———样品中氯霉素的质量浓度,mg/L

C'———从拟合的标准曲线上读取得样品中氯霉素的浓度,mg/L

2.2 测量不确定度的来源

根据检测方法,不确定度的来源主要有标准溶液配制产生的不确定度u(1)和仪器测定样品溶液浓度的不确定度u(2)。

2.3 不确定度分量的评定

2.3.1 标准溶液及配制产生的不确定度urel(1)。

2.3.1.1根据标准物质证书,氯霉素标准溶液(100 mg/L)的扩展不确定度为0.11 mg/L,相对扩展定度为0.11%,按正态分布评定,k=2,则相对标准不确定度urel(11)=0.00055。

2.3.1.2标准溶液配制引入的不确定度urel(12)

(1)在标准溶液配制过程中,共使用了1个50.0 m L单标线容量瓶(A级)和8个10.0 m L单标线容量瓶(A级)。根据各自的最大允差,按照均匀分布,,相对标准不确定度分量见表2。

表2 标准系列溶液配制过程中玻璃量具误差引起的不确定度

由表2合成的相对标准不确定度为:

(2)在标准溶液的配制过程中,使用了10~100μL和100~1000μL的可调移液器。根据各自的允许误差,按照均匀分布,,相对标准不确定度分量见表3。

表3 可调移液器误差引起的不确定度

由表3合成的相对标准不确定度为:

标准溶液配制过程中引入的不确定度urel(12)为:

标准溶液及配制产生的不确定度urel(1)为:

2.3.2 仪器测定样品溶液浓度不确定度urel(2)

2.3.2. 1 样品重复性测定引入的相对不确定度urel(21)

在相同的条件下对样品进行了8次测定,测量结果见表4。

表4 样品重复性测量结果

测量结果

样品测量结果的标准差为(共测量8次,p=8):

2.3.2. 2 线性拟合过程中引入的测量相对标准不确定度urel(22)

利用测量结果,根据最小二乘法拟合得到标准曲线方程y=29.2207x-2.22594,R2=0.9995,=12.643μg/L。

表5 标准溶液测量结果

则峰面积测量的标准偏差为:

式中:yi———由仪器检测各点的相应峰面积

yfi———由校准曲线方程计算出的峰面积

N———测量标准溶液的总次数

标准溶液的的平均值=12.643μg/L,浓度的方差和:

当对样品进行测量时,被测量的样品浓度是由实验数据(峰面积)通过最小二乘法拟合的直线得到的,因此由校准曲线拟合引入的测量结果的相对标准不确定度u(22)为:

由线性拟合过程中引入的测量相对标准不确定度为:

2.3.2. 3 仪器数据处理系统引入的测量相对标准不确定度urel(23)

对于UPLC/TQD,面积重现性表明,误差=1.56%,按均匀分布计,则此项相对标准不确定度为:

微量进样器的进样误差小于1.0%,按均匀分布,此项相对标准不确定度为:

仪器测定样品溶液浓度不确定度urel(2)

2.3.3 合成标准不确定度

各分量相对标准不确定度汇总见表6。

表6 输入量及相对标准不确定度

由于样品测量时,因此氯霉素测定过程中标准不确定度:

2.3.4 扩展不确定度U(氯霉素)

取包含因子k=2,其扩展不确定度U(氯霉素)为:

2.4 不确定度报告

本次实验,样品中的氯霉素含量为:

3 结论

在用UPLC-MS/MS测定水样中的氯霉素的不确定度测定中,标准溶液配制为不确定度主要引入因素。

参考文献

[1]国家质量监督检验检疫总局.GB/T 23214-2008饮用水中450种农药及相关化学品残留量的测定[S].北京:中国计量出版社,2009.

[2]国家质量监督检验检疫总局.JJF1059.1-2012测量不确定度评定与表示[S].2013.

液质联用法 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取经本院小儿神经内科门诊确诊的癫痫患者168例, 其中男102例, 女66例, 年龄3~14岁, 平均8.5岁, 平均体重30 kg。所有患者的确诊均以病历、脑电图及临床发作表现、部分患者结合CT为依据。癫痫发作类型参照国际抗癫痫联盟 (ILAE) 2001年修订的癫痫发作分类法:112例全面性发作, 39例为单纯局灶性发作, 17例为难以分类的复杂部分发作。全部患者一月内未服用抗癫痫药, 一周内未服用任何其他药物。经体检, 血常规、血小板、出凝血时间、肝肾功能、生化检查及心电图均正常。实验前两周至整个实验过程未用过任何其他药物, 且所有取样患者均签署了知情协议。

1.2 试剂与仪器

卡马西平对照品购自中国药品生物制品检定所, 甲醇、乙腈均为色谱纯, 其他试剂均为分析纯, 水选用超纯水。

质谱仪为ISQQuantum Discovery MAX质谱仪 (美国Thermo Finnigan公司) , 液相色谱仪为Agilengt 1100型液相色谱仪, 配备Agilent EZChrom软件进行数据处理, 并配有自动进样器、紫外检测器、电喷雾离子源。

1.3卡马西平对照品溶液的配制

精密称取适量卡马西平, 加甲醇溶液稀释制成0.1 mg/L的卡马西平溶液作为标准液储备使用。

1.4 血样处理

取血清100μL置于0.5 mL离心管中, 加入甲醇200μL混匀并涡旋1 min, 10000转/min进行离心5 min, 取上清液60℃水浴中N2吹干, 用甲醇200μL溶解混匀并涡旋1 min, 10000转/min进行离心5 min, 然后取离心上清液10μL进样。

1.5 色谱及质谱条件

色谱柱:Waters C18 (150 mm×2.1 mm, 5 um) ;流动相:甲醇-0.1%醋酸铵溶液 (40∶60) , 流速为0.3 mL/min, 进样量为10μL, 检测波长280 nm。

质谱条件:ESI扫描范围100~600 amu;毛细管电压:4 kV;鞘气:30 rab, 辅气:10 rab;毛细管温度:350℃;采用正离子扫描模式, 分别进行一级质谱全扫描和选择离子。

2 结果

2.1 专属性试验

见图1。从图1可见卡马西平与内源性物质分离良好。

注:A、B、C分别为卡马西平标准品、空白血清+卡马西平对照品、患者血清样品

2.2 线性范围

取空白血清1.0 mL, 加入卡马西平贮备液适量, 依次配制成浓度为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、16.0、20.0、40.0 mg/L的样品绘制标准曲线。以待测物浓度X为横坐标, 待测物峰面积Y为纵坐标进行回归运算, 求得直线回归方程为Y=209X+2.09×105 (相关系数r=0.9967) , 卡马西平血药浓度在位于2.0~40.0 mg/L区间范围内线性关系良好, 下限为2.0 mg/L。

2.3 精密度试验

取空白血清, 加入卡马西平贮备液配成血药浓度为4.0、10.0、20.0 mg/L的血清样品各5份, 于同1 d内进样5次测定, 求得日内RSD。连续测定5 d, 求得日间RSD。数据见表1。

2.4 回收率试验

取空白血清, 加入卡马西平贮备液配成血药浓度为4.0、10.0、20.0 mg/L的血清样品各5份, 用随行的标准曲线回归方程计算样品浓度, 并以测定值的平均值与配制的理论浓度比较, 计算得相对回收率。由血清样品测得的峰面积与相同浓度卡马西平对照品溶液测得峰面积之比, 计算绝对回收率。结果见表1。

%

2.5 LC-MS扫描结果

见图2。

2.6 患者血药浓度测定

168例卡马西平血药浓度监测结果比较:以卡马西平血药浓度正常范围为4~12 mg/L, 将结果按照不同浓度范围分为3组, 见表2。

168例癫痫患者中有104例的CBZ血药浓度为4~12 mg/L, 其中81例显效或有效、22例效果不明显, 有效率为77.9%。48例患者的CBZ血药浓度<4 mg/L, 占全部患者28.6%, 其中15例患者有效, 其余无效;16例患者的CBZ血药浓度>12 mg/L全部有效, 但有4例患者发生了头晕、乏力、震颤、叠影等不良反应, 在调整给药剂量后症状逐渐减轻, 3 d后相应症状完全消失。

3 讨论

治疗药物监测 (therapeutic drug monitoring, TDM) 是一门新兴边缘科学, 其目的是通过测定血中药物浓度并利用药代动力学原理和公式, 使给药方案个体化, 以提高疗效, 避免或减少中毒;同时也为药物过量、中毒诊断和处理提供理论依据。癫痫药物TDM是临床医学上最先进最活跃的也是最有成效的领域[12]。在此之前, 治疗是经验性的, 而开展以后, 医生能积极主动地以药代动力学的观点去制定和调整用药方案, 以提高抗癫痫药物治疗的安全性, 避免对机体造成危害。

卡马西平血药浓度在大于12 mg/L时, 其治疗有效率大大提高, 这充分说明了治疗效果不佳时, 患者应重视血药浓度监测[13]。此外, 在结果高于治疗浓度范围的高限时, 亦有服用丙戊酸钠患者效果不好, 提示医师应该换药或联合用药。而卡马西平不出现此情况, 是否与例数太少有关, 值得进一步探讨。但由于卡马西平较大的毒性, 患者应在医师的指导下, 在控制病情的前提下, 降低血药浓度, 以减少不良反应。

在临床对癫痫患者进行联合用药时, 由于药物的相互作用, 时常出现干扰药物监测结果及疗效的判断。因此在进行联合用药应增加监测次数, 以防剂量不足所致无效或剂量过剩致中毒。本研究168例患者中有104例血药浓度位于4~12 mg/L的正常范围, 约占60.5%。总体来看虽然此数据与文献报道略有差异[14], 但造成这种差异的原因可能与卡马西平的个体用药差异有关。剂量与稳态血药浓度之间的关系存在明显的个体差异。临床医师并不十分清楚每位患者治疗前所需要维持的最低有效血药浓度, 所以进行血药浓度监测可以帮助患者找出最佳控制浓度, 以达到最佳疗效并缩小不良反应至最小[15]。

本组中所采用的LC-MS液谱质谱联用法具有专属性强、灵敏度和准确度高等优点, 将传统上测定药物制剂含量只限于大剂量、高浓度的视野转移至小剂量、低浓度、高精度的检测方向上来, 用一种更为精确的质量分析方法来服务于药物制剂含量的测定。该方法的定量下限已达到2.0 mg/L, 可较为有效地满足临床测定血药浓度的要求。

摘要：目的:建立液谱质谱联用法 (LC-MS) , 对卡马西平 (CBZ) 进行血药浓度监测, 同时探究卡马西平血药浓度与癫痫疗效的关系。方法:以本院小儿神经内科的168例癫痫患者作为研究对象, 采用高效液相色谱质谱 (liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS) 方法对其血药浓度进行监测。结果:卡马西平血药浓度在2.0~40.0 mg/L的范围内线性关系良好 (r=0.9967) 。168例癫痫患者中有104例的CBZ血药浓度为4~12 mg/L, 其中81例显效或有效, 23例效果不明显, 有效率为77.9%。48例患者的CBZ血药浓度<4 mg/L, 占全部患者的28.6%, 其中15例患者有效, 其余无效;16例患者的CBZ血药浓度>12 mg/L, 全部有效。结论:本文中LC-MS方法专属性强, 灵敏度、准确度以及重现性均较好, 易于操作, 可用于癫痫患者血清中卡马西平血药浓度的监测。卡马西平治疗癫痫的疗效以及不良反应和CBZ血药浓度密切相关。

液质联用法 篇6

西吡氯铵 (Cetylpridinium Chloride, 1-十六烷基吡啶氯化物, 分子式为C21H38Cl2N) , 是含氮阳离子表面活性剂, 一般用作杀菌消毒剂, 是防牙菌膜漱口水的有效成分。医学研究发现, 0.1%西吡氯铵含漱液对单纯性牙龈炎患者牙菌斑形成具有抑制作用[1,2];对牙龈炎、牙周炎具有明显疗效[3];对口腔白色念珠菌感染的患者具有辅助治疗作用[4];西吡氯铵片剂治疗复发性阿弗他溃疡, 能够明显促进溃疡面愈合[5,6]。文献[7]用毛细管区带电泳法测西吡氯铵片剂中的含量, 但毛细管电泳法准确度较低, 重现性较差, 不宜推广使用。三重四级杆液质联用法是近年来快速发展的定量方法, 具有灵敏度高、检测限低、选择性好的优点, 在体外药物测定、杂质检测以及体内代谢测定等方面应用广泛[8~16]。本实验采用三重四级杆液质联用法 (TSQ-HPLC-MS/MS) 测定漱口水中的西吡氯铵含量。

1 试验部分

1.1 仪器与装置

TSQ Quantum Ultra三重四级杆液质联用仪:美国Finnigan公司产品, 配有电喷雾离子源 (ESI) 及LCquan 2.6数据处理系统;p H计:Mettlter Toledo Delta 320;移液枪:2-20μL, 20-200μL, 大龙兴创实验仪器 (北京) 有限公司;纯水仪:Millipore公司, 18.2Ω;天平:Sartorius BT-125D (d=0.01mg) 。

1.2 材料与试剂

西吡氯铵对照品 (上海德默医药科技有限公司, 纯度为98%) , 西吡氯铵含漱液 (130302, 杭州民生药业有限公司) , 冷酸灵迅康抗敏感漱口水 (121114110230, 重庆登康口腔护理用品股份有限公司) , 高露洁-贝齿全面护理-10功能合一 (1264TH1133, 高露洁棕榄中国有限公司) , 高露洁-贝齿清新茶健 (3047TH1133, 高露洁棕榄中国有限公司) , 高露洁-贝齿鲜果薄荷味 (2198TH1123, 高露洁棕榄中国有限公司) , 乙腈 (色谱纯, Fisher公司) , 乙酸铵 (色谱纯, Dima公司) , 甲醇 (色谱纯, Fisher公司) , 乙酸 (色谱纯, Fisher公司) 。

1.3 试验条件

1.3.1 色谱条件

液相条件:Kinetex C18 (100 mm×2.1mm, 2.6μm) , 流动相 (A) 为乙腈, (B) 为乙酸铵/乙酸缓冲溶液 (5 mmo L, p H=3.5) (A:B=80:20) , 流速0.3 m L/min, 柱温30℃, 进样量1μL。

1.3.2 质谱条件

电喷雾离子源 (ESI) , 喷雾电压3000k V, 鞘气压力35 arb, 辅助气压力为10 arb, 毛细管温度350℃, 蒸发气温度为300℃, Tube lens补偿电压为100 V, 正离子模式, 选择离子监控模式 (SRM) , 西吡氯铵的裂解电压为28 V, 用于定量的母离子为m/z 304.297[M-Cl]+, 定量子离子为m/z 80.090, 进样量为1μL。

1.4 溶液配制

1.4.1 对照品溶液

准确称取西吡氯铵对照品溶液1.07mg, 置于200 m L的容量瓶中, 加50%甲醇-水溶解并定容至刻度, 摇匀, 即得对照品储备液。分别取该储备液0.5 m L, 1.0 m L, 2.0 m L, 4.0 m L, 8.0 m L分置5个10 m L的容量瓶中, 加50%甲醇-水溶解并定容至刻度, 摇匀, 配置成浓度分别为0.268μg/m L, 0.535μg/m L, 1.07μg/m L, 2.14μg/m L, 4.28μg/m L的系列对照品。

1.4.2 供试品溶液

取100μL漱口水, 置于100 m L容量瓶中, 以50%甲醇-水溶解并定容至刻度, 即得供试样品。

2 结果

2.1 线性关系考察

取1.4.1项下溶液各1μL注入色谱仪, 按照1.3项下色谱质谱条件进样, 测定峰面积, 以西吡氯铵的浓度 (X) 为横坐标, 峰面积 (Y) 为纵坐标, 进行线性回归, 得回归方程Y=18471.3X-732985, r=0.9987。结果表明, 西吡氯铵在0.268-4.28μg/m L范围内线性关系良好。

2.2 精密度实验

准确吸取对照品溶液, 按照1.3项下色谱质谱条件, 连续进样5次。结果显示RSD=1.90%, 提示该方法精密度良好。

2.3 重复性试验

平行制备5份对照品溶液, 按照1.3项下色谱质谱条件进行测定, 结果为RSD=0.27%, 说明该方法的重复性符合要求。

2.4 稳定性试验

取新配置的标准品溶液, 按照1.3项下色谱质谱条件, 分别在0, 2, 4, 8, 12, 24 h进行测定, 结果, RSD=2.61%, 说明该溶液的稳定性符合要求。

2.5 回收率实验

取已知含量的漱口水5份, 精密加入西吡氯铵对照品储备液0.5 m L, 按照1.4项下制备溶液, 按照1.3项下色谱质谱条件测定, 计算回收率, 结果西吡氯铵平均加样回收率为102.2%, RSD=2.49%。

2.6 检测限测定

取最低浓度 (0.268μg/m L) 的西吡氯铵对照品溶液, 分别稀释至不同浓度, 按1.3项下色谱质谱条件, 在正离子模式下使用单反应监测西吡氯铵, 测定其最小检测限 (S/N=3) 。结果最小检测值为0.150 pg/m L。

2.7 样品测定

分别吸取2个不同浓度的对照品和不同厂商的漱口水各3份, 按照1.4.2项下配制供试品溶液, 按1.3项下色谱质谱条件测定, 计算样品中的西吡氯铵的含量见表1。

3 讨论

在液相色谱条件优化时, 通过调整流动相组成、比例以及缓冲液的类型以及p H值, 得到正态、对称的谱图, 确定了液相色谱最佳测定条件。在质谱条件优化的过程中, 通过正负离子检测模式、不同离子源、裂解电压等质谱参数进行比较, 发现在电喷雾电离正离子模式下灵敏度高, 噪音小, 从而确定质谱条件。

对5个不同来源的漱口水中的西吡氯铵的含量进行比较, 发现民生药业的含漱液含量最高, 高露洁的3款产品含量相近, 冷酸灵品牌的含量最低。

采用三重四级杆液质联用法测定漱口水中西吡氯铵的含量, 检测限可达0.150 pg/m L, 远远低于采用毛细管电泳法时的10.27μg/m L[7]。该方法灵敏度高, 选择性好, 检测限低, 操作方便, 可以推广作为西吡氯铵含量的评价方法。

摘要：目的 建立漱口水中西吡氯铵含量测定的方法。方法 采用三重四级杆液质联用法 (TSQ-HPLC-MS/MS) , 色谱柱Kinetex C18 (100×2.1 mm, 2.6μm) , 流动相 (A) 为乙腈, (B) 为乙酸铵/乙酸缓冲溶液 (5 mmoL, pH=3.5) (A:B=80:20) , 流速0.3 mL/min。质谱采用电喷雾离子源, 正离子模式, 选择离子监控模式 (SRM) 。结果 西吡氯铵在0.268-4.28μg/mL范围内线性关系良好, r为0.9987, 平均加样回收率为102.2%, RSD为2.44%。结论 该方法快速简便, 灵敏度高, 重复性好, 可用于西吡氯铵的质量控制。

液质联用法 篇7

1 测量方法

按照GB 29688-2013 《牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》［4］,试料中残留的氯霉素,经乙酸乙酯提取、正己烷除脂、C18柱净化后,用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证,内标( 标准曲线) 法定量。测定步骤如下:

提取: 取试料( 10±0. 05) g,于50 m L离心管中,加氘代氯霉素内标工作液250 μL,再加乙酸乙酯20 m L,振荡15 min,6000 r / min离心10 min,取乙酸乙酯层液于鸡心瓶中。再加乙酸乙酯20 m L重复提取一次,合并两次提取液于鸡心瓶中,于45 ℃ 水浴旋转蒸发至干。用4% 氯化钠溶液5 m L溶解残留物,加正己烷5 m L振荡混合1 min,静置分层,弃正己烷液。再加正己烷5 m L,重复提取一次。取下层液备用。

净化: C18柱依次用甲醇5 m L和水5 m L活化,取备用液过柱,控制流速1 滴/( 3 ~ 4 s) ,用水5 m L淋洗,抽干,用甲醇5 m L洗脱,收集洗脱液,于50 ℃ 氮气吹干。用50% 乙腈1. 0 m L溶解残余物,涡旋混匀,滤膜过滤,供液相色谱-串联质谱测定。

标准曲线的制备: 精密称取氯霉素标准品10 mg,于100 m L量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100 μg/m L的氯霉素标准储备液。用移液器移取100 μL氯霉素标储备溶液于100 m L量瓶中,用50% 乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100 μg/L的标准工作液。再用移液器移取10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL标准工作液分别于5 支10 m L容量瓶中,均加入250 μL氘代氯霉素内标工作液,定容至刻度,配制成氯霉素浓度为0. 10、0. 50、1. 0、2. 0、5. 0 μg/L,氘代氯霉素浓度为5 μg/L的系列标准溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定。

2 建立数学模型

氯霉素被测量的数学模型为:

式中: X———试样中被测组分的含量,μg/kg

c———样品溶液浓度,μg/kg

V———样品最终定容体积,m L

m———样品质量,g

———回收率校正因子

fQ———LC-MS/MS仪器定量校准影响因子

3 不确定度分量的主要来源及其分析

测量不确定度的来源为: 最小二乘法拟合曲线的不确定度; 样品质量所引入的不确定度; 样品前处理过程及仪器波动、重现性等因素引起的不确定度; 样液定容体积引入的不确定度; 校准标准溶液配制及稀释时所产生的不确定度; LC-MS仪器定量校准引入的不确定度。试验过程中各分量不确定度来源见图1。

4 不确定度的评定

4. 1 校准过程引入的不确定度urel( c)

4. 1. 1 标准物质引入的不确定度

4. 1. 1. 1 氯霉素标准储备液( 100 μg / m L) 的不确定度

准确称取氯霉素标准品10 mg,于100 m L容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度。标准纯度带来的不确定度u( P) 。根据标准证书,纯度氯霉素为98. 6% ±0. 5% ,氯霉素标准品的纯度误差为±0. 5% ,按照均匀分布计算,由纯度引起的相对不确定度分别为:

据检定证书,试验所用天平允许误差为±0. 1 mg,按照均匀分布计算,由称量氯霉素标准物质所引入的不确定度和相对不确定度分别为:

100 m L容量瓶定容体积引入的不确定度: 100 m L容量瓶( V1) A级单标线容量允许差是±0. 1 m L,根据矩形分布计算,其标准不确定度为:。实验室的温度为( 20±5) ℃ ,由温度波动引起的体积变化,呈均匀分布,,甲醇的体积膨胀系数为1. 19 ×10－3℃－1,故100 m L容量瓶温度波动引起的体积不确定度为。合成100 m L容量瓶定容体积引入的相对不确定度为:

4. 1. 1. 2 标准溶液配制过程产生的不确定度

4.1.1.2.1容量瓶引入的不确定度u(V容)

( 1) 根据JJG 196-2006 《常用玻璃量器》［5］规定,20 ℃ 时100 m L A级容量瓶示值允差为±0. 10 m L,10 m L A级容量瓶示值允差为±0. 02 m L,按矩形分布则:

( 2) 温度波动引起的体积变化,温度波动范围为( 20±5) ℃,呈均匀分布,,50% 乙腈水溶液体积膨胀系数为1. 37 ×10－3℃－1,故温度波动引起的体积不确定度为:

( 3) 100 m L容量瓶和10m L容量瓶体积的不确定度分别为:

( 4) 100 m L容量瓶和10 m L容量瓶体积的合成不确定度为:

4. 1. 1. 2. 2 移液器引入的不确定度u( V器)

根据根据JJG646 - 2006 《移液器》［6］,100 μL的移液器10 μL、50 μL、100 μL的检定点的容量允差误差分别为 ±8. 0、±3. 0、±2. 0,1000 μL的移液器200 μL、500 μL的检定点的容量允差误差分别为±2. 0、±1. 0。按矩形分布,,则不同规格移液器移取不同移液点体积所引入的相对不确定度为:

式中: Vi———不同移液点体积,μL

ti———容量允差误差

V器———移液器规格,μL

各相应移液点体积的容量允差、分布及不确定度计算如表1。

移液器引入的合成不确定度为:

故合成标准物质配制产生的不确定度为:

4. 1. 2 标准工作曲线拟合产生的不确定度urel( c0)

分别取以上5 种不同浓度的标准溶液供液相色谱-串联质谱仪测定。测定结果见表2。

式中: S( A) ———标准曲线的标准差

p———样品溶液的测定次数,p=3

N———标准溶液的测定次数,N=9

a———标准曲线的截距

b———标准曲线的斜率

c0———样品溶液中待测物的浓度,μg/L

c———标准溶液浓度的平均值,μg/L

ci———校准标准溶液的浓度

cj———由校准曲线方程求得的标准溶液的浓度值,μg/L

Ai———单次标准溶液的响应值

合成校准过程产生的相对不确定度为:

4.2测量重复性产生的不确定度urel()

对牛奶空白样品进行同一浓度的加标回收试验,加标量为5. 00 μg / kg,加标样品重复测定结果见表3。氯霉素的平均含量为4. 63,标准偏差S( ) 为0. 0248,故重复测量引入的不确定度和相对不确定度分别为:

4. 3 回收率产生的不确定度urel( R)

测量回收率结果见表3,按A类评定,由测量回收率其引入的标准不确定度和相对标准不确定度为:

4. 4 样品称量产生的不确定度urel( m)

称取10 g奶粉样品,所用天平最大允许误差为±0. 01 g,按照矩形分布计算,其标准不确定度和相对标准不确定度分别为:

4. 5 样品定量体积产生的不确定度urel( V样)

移液器引入的不确定度: 根据JJG 646-2006 《移液器》规定,20 ℃ 时1000 μL移液器容量允差为±1. 0% ,按矩形分布:

温度波动引起的体积不确定度: 温度波动( 20±5) ℃ ,所引起的体积变化呈均匀分布,,50% 乙腈水溶液体积膨胀系数为1. 37×10－3℃－1,故温度波动引起的体积不确定度为:

样品定量体积产生的相对不确定度为:

4. 6 液质联用仪校准引起的不确定度urel( Q)

根据仪器校准证书: u = 5% ,取均匀分布() ,则相对标准不确定度为:

5 标准不确定度的合成

将上述各分量合成相对标准不确定度为:

样品中氯霉素的含量为4. 63 μg/kg,合成标准不确定度为:

6 扩展不确定度及测定结果报告

95% 置信概率下取包含因子k = 2,将合成标准不确定度乘以包含因子计算得到氯霉素测量结果的扩展不确定度为:

故液质联用法测定牛奶中氯霉素残留量结果报告表示为:( 4. 63±0. 360) μg/kg,k=2

7 结论

从各不确定度分量的贡献率分析( 见表4) 可知,试验过程中,测量不确定度主要来源于两个方面,一是仪器本身仪器定量校准引入的不确定度,二是来自人员操作,如标准溶液配制、测量重复性及测量回收率等因素引入的不确定度。因此,我们在试验过程中即要对设备精心护理,加强日常维护和管理,又要规范操作、掌握实验要领,以减少称量、定容及样品前处理过程所产生的不确定度。

摘要：建立液质联用法测定牛奶中氯霉素残留量不确定度评定的数学模型,对测量过程中的不确定度来源进行分析评定,计算各不确定度分量、相对合成不确定度和扩展不确定度,得到了牛奶中氯霉素残留量测定结果的不确定度报告。评定结果表明,质联用法测定牛奶中氯霉素残留量相对扩展不确定度为0.360,不确定度主要影响因素主要来源于校准溶液配制和仪器定量校准引入的不确定度。