猪带绦虫（精选5篇）
猪带绦虫 篇1
猪绦虫病是由猪绦虫引起的寄生虫病及猪绦虫卵引起的囊虫病, 是主要的人畜共患寄生虫病。猪绦虫卵也可在人体内发育成囊尾蚴, 即成囊尾蚴病或囊虫病。人是唯一的终宿主, 猪和人都可成为中间宿主。
“米猪肉”又叫“豆猪肉”是猪绦虫的幼虫———囊尾蚴寄生在猪的肌肉内造成的, 在有囊尾蚴寄生的猪瘦肉上, 可见黄豆大小白色半透明的囊状物, 囊内充满液体, 并有米粒大小的头节, 其上有小钩和吸盘, 囊尾蚴在猪体的寄生部位以腿、腰、肩、心、舌、颈处的肌肉为多见, 人吃了生的或未熟的米猪肉后, 囊尾蚴的头节受消化道内胆汁的刺激而翻出, 借助头节的小钩固着于小肠壁上, 经2～3个月后发育为成虫称猪带绦虫, 由其引起的疾病称猪绦虫病。猪带绦虫长2～3m, 由700～1 000片断 (节片) 粒衔接而成, 以肠腔中的营养物质为主, 轻者引起腹部不适, 消化不良等, 重者可因头节上的小钩损伤肠道壁造成肠穿孔甚至引起腹膜炎。
1 临床症状
猪绦虫病的潜伏期为2～3个月, 短膜壳绦虫病潜伏期为2～4周, 由于虫体吸取营养并刺激肠壁及其代谢产物的毒性作用, 使部分猪出现腹痛, 腹胀, 恶心及乏力等症状。猪肉绦虫的节片一般随粪便排出, 不自动从肛门溢出, 半数患有腹痛, 一般为上腹或全腹隐痛, 少数患有腹泻, 食欲亢进。
2 诊断
猪轻度感染时一般不易被发现, 感染严重时, 头部、颈部、肩部、舌根、眼睑有突出的囊尾蚴, 有时呼吸急促, 常伴有打呼噜声等。剖检时, 切开咬肌、心肌、舌肌等处可找到囊虫。严重感染时表现消瘦、贫血、肚腹膨大、下痢, 粪中带有白色或黄色的绦虫节片, 有时还出现痉挛或回旋运动等神经症状或引起虫性肠梗阻。
用饱和盐水漂浮法镜检粪便, 发现虫卵或用彻底洗净法找到节片即可确诊。
3 预防与治疗
3.1 预防
做到“人有厕, 畜有圈”, 禁止随地大小便, 防止畜禽乱跑, 避免畜禽吃人粪。加强肉品的卫生检验工作, 对猪囊虫肉严格按兽医卫生条例处理。牲畜每年进行2次驱虫 (春秋两季各1次) 。
3.2 治疗
治疗可服丙硫咪唑片 (30mg/kg) 。也可用硫双二氯酚, 猪0.08～0.10g/kg, 1次空服。氯硝柳胺, 猪50～70mg/kg, 配成悬浊液灌服。
中药可用苏木、肉蔻、茯苓、贯众、龙胆草、木通、泽泻各25g, 甘草20g、厚朴30g、槟榔15g研末, 灌服 (猪可用1/4量) 。
3.3 公共卫生
人体的猪囊尾蚴病的危害性很大, 远超过其成虫猪带绦虫对人的危害。人感染猪囊尾蚴有三种方式。一是体内自身感染, 是由于绦虫病人因恶心;呕吐或胃肠道逆蠕动时, 脱落的孕节或虫卵返回胃内被消化, 在十二指肠内孵出六钩蚴, 随血液循环至全身各部肌肉。这种病人往往发病严重, 体内寄生囊尾蚴数量多。二是体外自身感染, 绦虫病人便后不洗手沾染自身绦虫的虫卵, 再用手直接拿食物吃, 经口吞入而引起。据统计, 有16%～25%的猪带绦虫病患者伴有猪囊尾蚴病, 而囊尾蚴病患者中约半数同时有成虫寄生。因此, 自身感染是人体感染猪囊尾蚴的重要方式。三是外来感染, 人吃了猪带绦虫虫卵污染的瓜果、蔬菜、饮水等而感染猪囊尾蚴, 这类例子也很多见。所以流行地区必须严格肉食品卫生检验, 应注意食品与个人卫生, 改变不良饮食习惯, 不食生的或未煮熟的猪肉, 切生菜和热菜的砧板分开, 蔬菜、瓜果必须洗净, 饭前便后洗手, 以防自身感染和外来感染。
肥胖带绦虫的形态学观测与描述 篇2
寄生部位:在终宿主人体内的寄生部位是小肠;在中间宿主牛的寄生部位是横纹肌, 主要分布于左心肌、咬肌、舌肌等部位。
地理分布:肥胖带绦虫呈世界性分布。我国多见于内蒙古、西藏等喜吃生牛肉或烤肉的地区, 其他地区散发或偶有感染。
材料采集:本次观测材料采自齐齐哈尔北部的黄牛。
种的描述:成虫体长6 525.0～7 155.0 mm, 平均6 840.0 mm (据记载, 最长可达25 000 mm) ;体宽11.0～12.0 mm, 平均11.5 mm, 虫体整个链节由986～1 031 (平均1 008) 个体节组成。头节长1.702 mm、宽1.651 mm, 没有吻突和角质小钩, 只有4个圆形吸盘, 吸盘直径为0.464～0.696 mm, 平均0.58 mm;颈节长3.044～6.450 mm, 平均4.747 mm, 宽1.083～1.651 mm, 平均1.367 mm。成熟节片长5.418～7.013 mm, 平均6.217 mm, 宽4.432～5.598 mm, 平均5.017 mm, 节内有睾丸924个, 生殖孔左右不规则, 分布在节片两侧中后部距节片前缘2.500～3.741 mm, 平均3.120 mm, 距后缘2.528～2.915 mm, 平均2.721 mm;节片内的卵巢只有分叶, 没有中间小叶 (不同于链形带绦虫) , 位于生殖孔一侧的分叶为小叶, 长1.419～1.573 mm, 平均1.496 mm;位于生殖孔对侧的分叶为大叶, 长1.625～2.012 mm, 平均1.818 mm, 宽0.748～1.186 mm平均0.967 mm;孕节长20.0～28.0 mm, 平均24.0 mm。宽7.0～10.0 mm, 平均8.5 mm, 孕节内子宫分为30～34个侧枝, 平均32个侧枝。
猪带绦虫 篇3
1 材料
1.1 虫卵来源
对贵州都匀、从江两地带绦虫病流行区的有带绦虫感染症状者采用口服槟榔-南瓜籽法驱虫，收集虫体，经形态学、分子生物学鉴定为亚洲带绦虫和牛带绦虫后取虫体末端6～10个孕节，参照李宝华等[2]的方法解剖、分离、计数及制备虫卵悬液(120 000个/m L)。
1.2 试验动物
选取贵阳市正泰养殖场健康三元杂交乳猪(Duroc-Yorkshire-Landrace株，DYL)18头，20日龄，未进生食。经粪检和间接血凝集试验(IHA)检测囊尾蚴抗体证实无囊尾蚴感染。
2 方法
将乳猪随机分为3组:亚洲带绦虫和牛带绦虫感染组各8头，分别以两种虫卵(120 000个/头)灌胃感染;对照组2头，以等体积生理盐水灌胃。3组动物分别封闭饲养，饲喂熟食，防止自然感染。于感染虫卵后4,10,20,40,50,60,70,80天宰杀，剖检全身各器官，并取肝组织做H.E.染色，观察。
3 结果
3.1 乳猪囊尾蚴的感染和分布情况
三元杂交乳猪对亚洲带绦虫卵易感，感染率为100%;对牛带绦虫的感染稍差，感染率为71.4%;对照组无感染。所得囊尾蚴数量也有明显差别，亚洲带绦虫感染组猪肝脏中可见较多囊尾蚴，一般在数十个到数百个不等，且发育较好，有明显的发育阶段性;而牛带绦虫感染组猪肝脏中囊尾蚴数量较少，一般在几个到十几个不等，发育缺乏明显的阶段性，囊尾蚴发育及存活时间短，早期即见大量的钙化灶，少见发育成熟的囊尾蚴，囊尾蚴体积也较在牛体内小。两种带绦虫囊尾蚴仅分布于乳猪肝脏，其他脏器和肌肉内未见囊尾蚴寄生。
3.2 病理学观察
3.2.1 肉眼标本观察
(1)感染组。感染4 d,乳猪肝脏均无明显改变,肝脏组织中未见囊尾蚴结构。10～20 d,乳猪肝脏均轻度充血、肿胀,可见白色细小点状改变,未见清晰囊尾蚴结构,其中以亚洲带绦虫感染组改变明显。40～60 d,肝脏轻度肿大或肿大不明显,可见散在分布点状和米粒大小的囊尾蚴结构,其中亚洲带绦虫感染组囊尾蚴数量较多,大部分囊液清晰,囊壁较薄,可见向内翻转的头节,钙化囊尾蚴少见(见图1);而牛带绦虫感染组囊尾蚴数量较少,发育成熟的数量很少,外有较厚纤维组织包裹(见图2)。70～80 d,亚洲带绦虫囊尾蚴大部分钙化,仅见少数几个成熟囊尾蚴保留,而牛带绦虫感染组肝脏表面囊尾蚴几乎完全钙化,触钙化处有细小结节样改变。
(2)对照组。未见囊尾蚴寄生，肝脏大小适中，触之质软光滑，无结节及其他异常结构(见图3)。
3.2.2 病理组织学观察
(1)感染组。感染4 d,肝脏组织切片均未见囊尾蚴结构。亚洲带绦虫感染组可见部分肝细胞轻度肿大,肝血窦扩张,内有嗜酸性粒细胞聚集;牛带绦虫感染组肝细胞无明显水肿,肝组织中可见散在炎性细胞浸润。
10～20 d，肝组织切片均显示囊尾蚴结构，虫体坏死且周围见大量淋巴细胞、中性粒细胞、散在嗜酸性粒细胞围绕，外围纤维组织增生;肝细胞水肿进一步加重，胞浆疏松化明显，部分细胞呈气球样变(见图4);小血管扩张，肝血窦充血，炎性渗出明显，汇管区纤维组织增生。其中亚洲带绦虫感染组病变较重，切片显示仅有少数囊尾蚴有囊泡样结构，而大部分囊尾蚴变性坏死，肝细胞呈小片状坏死。
40～60 d，肝组织内均可见成熟囊尾蚴。亚洲带绦虫感染组切片显示囊尾蚴结构清晰，可见头节和吸盘结构，囊壁与肝组织分界清晰，纤维组织外膜较薄或厚薄不均，内有大量成纤维细胞增生，炎性细胞较少见(见图5);邻近虫体肝细胞水肿明显，远离虫体肝细胞水肿则相对较轻。牛带绦虫感染组囊尾蚴少见，偶见成熟囊尾蚴，囊壁厚，并见大量炎性细胞浸润(见图6)，虫体周围肝细胞水肿较轻。
70～80 d，亚洲带绦虫感染组肝组织内囊尾蚴大部分钙化，而牛带绦虫感染组囊尾蚴几乎完全钙化、吸收。两种绦虫感染组钙化灶内均可见炎性细胞聚集形成肉芽肿结构;完全钙化、吸收处可见假小叶结构形成;炎性反应周围纤维组织增生明显，汇管区纤维增生变宽，局部肝小叶有早期肝硬化改变(见图7);肝细胞水肿较70 d前明显减轻。
(2)对照组。肝小叶结构完整，小叶间由少量纤维结缔组织分割，界限清晰，无纤维组织增生;汇管区、中央静脉、肝血窦无扩张、淤血;肝细胞无水肿。
4 讨论
试验以两种带绦虫卵感染三元杂交乳猪，发现家猪对两种带绦虫均易感，并造成宿主不同程度的病理损害，其中以亚洲带绦虫的病理损害严重。
结合Fan P C等[3]、Eom K S等[4]、莫兴泽等[5]的试验研究，无论是台湾小耳猪、种猪、二元杂交猪还是三元杂交猪等家猪对亚洲带绦虫均普遍易感。亚洲带绦虫是近30年发现的一种新型人兽共患病病原，幼虫寄生于猪肝脏中，人生食或食用未煮熟的内脏后感染。传统的观念认为牛带绦虫的中间宿主是牛，但此次研究表明牛带绦虫既可感染牛，也可感染猪，因而在牛带绦虫流行区除了加强对牛的检验、检疫外，还应该重视对猪的检验。
“种”分为形态学中和生物学种。形态学种以形态特征为主要的分种依据，生物学种则强调种间生殖隔离。形态学种应用方便，但形态特征常有个体变异，并不总是反应事物的本质;而生物学种虽抓住了生殖隔离的本质，更具有客观性，但对于雌雄同体的带绦虫来说，实际应用较为困难。因而，现代生物分学中提出了多维性种的概念，分类主要依据形态学、流行病学、生活史、宿主与地理分布、生理与生化、分子遗传学等方面的特征[6]，对物种进行客观地分析。试验对两种带绦虫的生长发育规律及其对中间宿主的病理损害做了部分比较研究，为亚洲带绦虫的科学分类提供了一定参考。
亚洲带绦虫的分类学地位一直是争论的焦点，Ito A等[7]和Eom K S等[4]根据其形态学上与牛带绦虫的差异将其定为独立的新种，称亚洲带绦虫，认为它是牛带绦虫的姊妹虫种;而Fan P C等[8]和Bowles J等[9]根据分子生物学等分析认为，将它作为牛带绦虫的亚种更合适，称之为牛带绦虫亚洲亚种。本研究发现，猪对两种带绦虫卵均具有普遍的易感性，亚洲带绦虫囊尾蚴在家猪体内寄生数量多，囊尾蚴各阶段发育良好，具有明显的阶段性，表明家猪是该虫的适宜中间宿主;而牛带绦虫在家猪体内寄生数量较少，各期发育不明显，囊尾蚴也较在牛体内发育及存活时间短、体积小等，这与朱武军等的研究结果一致，提示牛带绦虫在猪体内发育受到明显抑制，虽然牛带绦虫囊尾蚴能在家猪体内寄生，但并不是其适宜的中间宿主。病理组织切片也显示，两种带绦虫对同一中间宿主的病理损害也存在差异，因而将亚洲带绦虫视作一个新的物种可能比作为牛带绦虫的亚种更为合适。
参考文献
[1]令狐艳,朱武军,包怀恩,等.牛带绦虫亚洲亚种感染乳猪肝脏的病理学和组织化学观察[J].贵阳医学院学报,2006,31(4):296-300.
[2]李宝华,包怀恩,牟荣,等.猪带绦虫卵实验感染家猪后囊尾蚴在家猪体内发育的观察[J].中国人兽共患病学报,2008,24(9):803-806.
[3]FAN P C,CHUNG W C,LIN C Y,et al.Pig as a favorable animalforTaenia saginataasiatica infection[J].Kaohsiung J Med Sci,2006,22(1):1-13.
[4]EOMK S,JEON HK,KONG Y,et al.Identification ofTaenia asi-aticain China:molecular,morphological and epidemiological analy-sis of a Luzhai isolate[J].J Parasitol,2002,88(4):758-764.
[5]莫兴泽,包怀恩,戎聚全,等.贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究[J].中国寄生虫病防治杂志,2004,17(6):335-337.
[6]谢明权,李国清.现代寄生虫学[M].广州:广东科技出版社,2003:1-3.
[7]ITO A,WANDRA T,YAMASAKI H,et al.Cysticercosis/taeniasisin Asia and the Pacific[J].Vector Borne Zoonotic Dis,2004,4(2):95-107.
[8]FAN P C,LIN C P,CHUNG W C,et al.Comparative morphologicalstudies ofTaenia saginataasiatica and saginata[C].Proceedings ofthe Sixth Asian-Pacific Congress for Parasitic Zoonoses,2000:65-80.
猪带绦虫 篇4
1 材料
1.1 虫体
亚洲带绦虫和链状带绦虫, 采自云南省大理白族自治州凤仪镇的近期有排绦虫节片史病人, 以槟榔-南瓜子法驱虫, 虫体用自来水、0.85%氯化钠溶液漂洗后, 保存于灭菌的25%甘油水溶液中运送至实验室, 经形态学和带绦虫线粒体细胞色素氧化酶亚单位1基因 (cox1) 片段的PCR和测序分别鉴定为亚洲带绦虫和链状带绦虫[1]。
1.2 试验动物
健康三元杂交乳猪9头 (30日龄, 试验前经粪检确定无绦虫感染) , 由贵州省贵阳市东新良种猪养殖场提供。
1.3 主要试剂
2%戊二醛及1%四氧化锇、血液增菌培养基 (有氧培养用, 批号1022899) , 法国梅里埃公司产品;血液-D乳酸比色法定量检测试剂盒, 购自上海杰美基因医药科技有限公司;哥伦比亚琼脂, 购自上海晶纯试剂有限公司;无菌绵羊血, 贵阳医学院实验动物中心提供;显色基质鲎试剂盒, 购自厦门鲎试剂实验厂有限公司;其余试剂均为国产分析纯。
2 方法
2.1 虫卵的处理
按照参考文献[2]介绍的方法收集和处理虫卵。
2.2 乳猪感染前外周血的采集和细菌学检查
感染前以无菌操作经前腔静脉采集乳猪清晨空腹静脉血10 mL, 将5 mL血液接种至血液增菌培养基, 置CO2培养箱内于37 ℃培养, 逐日观察生长现象至第4天, 取0.1 mL增菌培养液接种至含8%绵羊血的哥伦比亚血琼脂平板, 继续置CO2箱内于37 ℃培养24 d;若有细菌生长, 则进行革兰染色镜检和分离、培养、鉴定;若培养3 d仍无细菌生长, 则判为细菌培养阴性。其余5 mL血液置于4 ℃冰箱内过夜, 再以 2 000×g离心15 min分离血清, 贮存于-80 ℃超低温冰箱内, 备用。
2.3 乳猪的感染
将处理的亚洲带绦虫和链状带绦虫的虫卵用灭菌生理盐水稀释成5×105/mL, 分别将10 mL虫卵混合于0.1 kg乳猪饲料后饲喂乳猪, 亚洲带绦虫虫卵感染3头, 链状带绦虫虫卵也感染3头, 另用3头作为对照。
2.4 外周血的细菌培养
感染第4天清晨, 以无菌操作经前腔静脉采集感染组和对照组乳猪空腹静脉血10 mL, 进行细菌培养和分离血清, 备用。
2.5 血清D-乳酸的检测
按试剂盒说明书进行各份血清样本D-乳酸的酶标板测定, 以酶标仪检测各样本孔和对照孔 340 nm处的吸光度值, 并按说明书提供的公式计算血清D-乳酸的含量。
2.6 血清内毒素的检测
内毒素含量采用鲎试剂基质偶氮显色定量法检测, 以分光光度仪检测545 nm处的吸光度值, 以Excel表绘制标准曲线法, 根据回归方程计算各样品中的内毒素含量。
2.7 小肠组织的组织学检查
处死感染组和对照组乳猪, 立即取十二指肠、空肠、回肠各2 cm, 经PBS洗净后纵切剖成两份:其中一份置10%中性甲醛固定并进行常规石蜡切片和H.E.染色、镜检, 并参照Chiu法对小肠黏膜损伤进行分级[3];另一份对应的小肠组织样本置2%戊二醛内, 于4 ℃冰箱贮存, 备用。选择经H.E.染色、镜检观察到明显病变的对应的经戊二醛固定的小肠组织, 以预冷的PBS洗3次后, 置于1%四氧化二锇内固定1 h, 然后进行常规脱水、包埋、超薄切片、铀铅染色, 透射电镜观察。
3 结果
3.1 外周血细菌培养结果
对照组乳猪的双份外周血及6头感染组乳猪感染前的外周血培养至第4天仍为阴性。6头感染组乳猪感染后的外周血有4份细菌培养结果为阴性, 2份为阳性, 采自1头亚洲带绦虫感染组乳猪和1头链状带绦虫感染组乳猪, 分别检出大肠埃希菌和变形杆菌。
3.2 感染前后血清D-乳酸含量的检测结果
感染前后的乳猪和对照组乳猪血清D-乳酸含量见表1。
注:与感染前比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) ;与对照组比较, 数据肩标&表示差异显著 (P<0.05) ;与亚洲带绦虫组比较, 数据肩标$表示差异不显著 (P>0.05) 。
由表1可见, 亚洲带绦虫感染组和链状带绦虫感染组的乳猪感染后血清D-乳酸含量较感染前和对照组高 (两样本平均数比较的t检验) , 差异显著 (P<0.05) 。两组感染后血清D-乳酸含量差异无统计学意义 (P>0.05) 。
3.3 感染前后血清内毒素含量检测结果
感染前后的乳猪血清和对照组乳猪血清内毒素含量见表1。亚洲带绦虫感染组和链状带绦虫感染组的乳猪感染后血清内毒素含量较感染前和对照组高 (两样本平均数比较的t检验) , 差异显著 (P<0.05) 。两组感染后血清内毒素含量差异无统计学意义 (P>0.05) 。
3.4 小肠组织的组织学观察结果 (见182页彩图1, 2)
对照组小肠组织为正常黏膜绒毛结构 (见182页彩图1A) 。感染后两组乳猪的肠黏膜绒毛顶端上皮破损, 局部上皮坏死、脱落, 绒毛上皮下间隙明显增大并与固有膜剥离 (见182页彩图1B) , 黏膜下层出血明显 (见182页彩图1C) 。Chiu法的分级标准:Ⅰ级, 肠黏膜绒毛顶端上皮下间隙增高;Ⅱ级, 肠绒毛上皮下间隙进一步扩大, 绒毛尖端上皮抬高与固有膜剥离;Ⅲ级, 绒毛两边上皮成块脱落;Ⅳ级, 上皮完全脱落, 仅有固有膜结构;Ⅴ级, 黏膜固有膜崩解, 出现出血和溃疡。本试验中感染组乳猪肠黏膜损伤判为Ⅱ～Ⅳ级[3]。透射电镜观察对照组小肠上皮细胞间紧密连接呈嵴状突起条索, 表面光滑, 粗细均匀, 并横向相连形成网状结构, 线粒体结构正常, 微绒毛排列整齐 (见182页彩图2A) 。对照组小肠上皮细胞间条索断裂, 细胞间隙增宽, 线粒体肿胀、破裂, 微绒毛排列紊乱甚至缺失 (见182页彩图2B) 。
4 讨论
已知3种人体带绦虫六钩蚴均是通过肠黏膜侵入中间宿主的, 然而其入侵的机制尚不清楚。M.Verastegui等[4]通过体外黏附试验观察到链状带绦虫六钩蚴可通过布满体表的微毛黏附至体外培养的猪小肠组织、人结肠癌上皮细胞和苍鼠卵巢细胞, 认为与其他病原生物相同, 六钩蚴对宿主细胞的黏附是感染的首要步骤。黏附至肠黏膜的病原体还必须突破宿主的肠黏膜屏障, 才能侵入血液循环和/或淋巴循环而移行至特定的组织器官生长繁殖并引起疾病;因此破坏宿主肠黏膜屏障功能是六钩蚴入侵的关键步骤和对宿主产生的首次损伤。关于人体带绦虫六钩蚴入侵中间宿主是否造成肠黏膜的损伤和屏障功能的降低, 目前尚未见文献报道。
正常的肠黏膜屏障可阻止肠道内的各种细菌以及细菌的代谢产物内毒素和D-乳酸进入血液循环, 肠黏膜屏障功能降低时, 肠道细菌可穿过上皮细胞或其间隙进入固有层, 发生细菌移位, 并且由于肠黏膜通透性增高, 细菌的代谢产物内毒素和D-乳酸等可大量进入血液循环。本试验在检测亚洲带绦虫和链状带绦虫六钩蚴对乳猪肠黏膜屏障功能影响时发现, 两种带绦虫六钩蚴感染的乳猪均可发生细菌移位, 血液中检出的细菌为肠道常驻菌;感染后乳猪血清D-乳酸和内毒素含量均较感染前和对照组高 (P<0.05) , 而亚洲带绦虫和链状带绦虫感染组之间, 血清D-乳酸和内毒素含量差异不显著 (P>0.05) , 说明亚洲带绦虫和链状带绦虫六钩蚴均可导致乳猪肠黏膜通透性增高。组织病理学观察结果也证实, 2种带绦虫六钩蚴均对肠黏膜造成了损伤。
综上所述, 在宿主消化道内受消化液作用孵化出的两种带绦虫六钩蚴均可损伤宿主肠黏膜屏障功能从而侵入血液或淋巴循环。而六钩蚴如何导致肠黏膜的损伤, 除了机械刺激外, 可能还与六钩蚴分泌的酶或代谢产物有关。体外培养试验结果证实, 牛带绦虫六钩蚴能够合成并分泌肽酶, 包括丝氨酸和半胱氨酸肽酶、氨基肽酶[5];M.Verastegui等[4]发现, 黏附至组织或细胞的链状带绦虫六钩蚴表面出现分泌泡, 这些酶或结构在人体带绦虫六钩蚴入侵中间宿主肠黏膜时所发挥的作用目前尚不清楚, 这将是进一步研究六钩蚴入侵机制的重要内容之一。
参考文献
[1]陈峥宏, 包怀恩, 牟荣, 等.云南、贵州两省38条人体带绦虫的分子鉴别[J].中国病原生物学杂志, 2010, 5 (4) :263-265.
[2]陈峥宏, 吴晓娟, 包怀恩, 等.人工感染的亚洲带绦虫六钩蚴在幼猪体内分布和致病的观察[J].黑龙江畜牧兽医:科技版, 2010 (5) :17-19.
[3]朱玉华, 杨广林, 蒋波健.胃肠粘膜屏障功能的检测方法[J].海南医学, 2004, 15 (6) :107-108.
[4]VERASTEGUI M, GILMAN R H, ARANA Y, et al.Taenia soliumoncosphere adhesion to intestinal epithelial and Chinese hamster ova-ry cells in vitro[J].Infect Immun, 2007, 75 (11) :5158-5166.
猪带绦虫 篇5
以自然感染途径, 即从消化道入侵机体的亚洲带绦虫六钩蚴为何只在肝脏定植发育成囊尾蚴并造成肝脏病变呢?其经小肠黏膜侵入血液循环沿门静脉侵犯肝脏后是否可从肝静脉出肝脏而分布到其他组织器官呢?这些和亚洲带绦虫幼虫的入侵机制密切相关的问题目前尚未解决。试验分别采用静脉注射和灌胃方式, 使亚洲带绦虫六钩蚴入侵幼猪, 通过观察六钩蚴在幼猪体内各组织器官的定植、发育和引起病变的情况, 了解其移行和发育是否具有肝趋向性和组织选择性, 现报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本
亚洲带绦虫采自云南省大理白族自治州凤仪镇的近期有排绦虫节片史的病人, 以槟榔-南瓜子法驱虫, 虫体用自来水、生理盐水漂洗后保存于灭菌的25%甘油水溶液中并运送至实验室, 经形态学和亚洲带绦虫线粒体细胞色素氧化酶亚单位1基因 (cox1) 片段的PCR[3]和测序鉴定为亚洲带绦虫。
1.1.2 试验动物
二元杂交幼猪3头, 雄性去势, 60日龄, 由贵州省清镇种猪养殖场提供。
1.1.3 主要试剂
胃蛋白酶、胰蛋白酶, 上海生工生物工程技术服务有限公司产品;血液/细胞/组织DNA提取试剂盒、2×Taq PCR MasterMix、DNA Mar-ker V, TIANGEN公司产品;percoll细胞分离液, Pharmacia公司产品。
1.2 方法
1.2.1 虫卵的预处理
将新鲜、成熟的孕卵节片用灭菌生理盐水洗净, 置于灭菌的PBS (pH值为7.4, 内加400 U庆大霉素) 中作用1 h;将节片剪碎, 经0.106 mm孔径 (150目) 不锈钢筛网过滤;滤液以1 575 g/min离心10 min, 沉淀用1体积PBS和2体积percoll细胞分离液混匀;4 ℃、1 600 g/min离心60 min, 弃上清液, 沉淀用PBS洗3次以除去percoll细胞分离液。
1.2.2 六钩蚴的孵化
以消化酶法[4]孵育虫卵。将孵化的六钩蚴用灭菌生理盐水洗涤并重悬, 然后以1∶5的比例加到percoll细胞分离液中, 4 ℃、1 600 g/min离心60 min以纯化六钩蚴, 仔细吸出percoll细胞分离液和生理盐水交界面处的液体, 用生理盐水洗3次并重悬。
1.2.3 幼猪的感染和囊尾蚴在幼猪体内定植的观察
(1) 感染。
分别取浓度为1.5×105个/mL虫卵悬液1 mL灌胃感染幼猪 (1头) , 取浓度为5×103个/mL六钩蚴1 mL由耳静脉注射感染幼猪 (1头) , 另取1头作为对照, 饲喂膨化饲料, 饲养35 d。
(2) 囊尾蚴在幼猪体内定植的观察。
感染后第35天分别剖检感染猪和对照猪, 肉眼观察病变情况并剥离囊尾蚴压片镜检。
(3) 病变组织的病理学检查。
取各病变组织分别置于10%甲醛内固定后进行常规石蜡切片, H.E.染色, 镜检。
(4) 囊尾蚴和病变组织的亚洲带绦虫特异性PCR。
以cox1为目的基因, 参照参考文献[3]合成引物 (鼎安生化公司合成) :For 5′-ACGGTTGGATTAGATGTTAAGACTA-3′和Rev 5′-GACATAACATAATGAAAATG-3′, 其中正向引物为亚洲带绦虫cox1 片段的特异性引物。取各器官病变组织和囊尾蚴以及对照猪的肝脏分别用DNA提取试剂盒提取DNA, 进行cox1 片段的PCR扩增。
2 结果
2.1 猪体内囊尾蚴的分布及各组织器官的病变
经剖检, 在经静脉感染六钩蚴的幼猪肝脏表面及实质可见数个散在分布的囊尾蚴或结节 (见图1) , 囊尾蚴呈椭圆形或近圆形, 囊体透明, 囊壁薄, 囊内充满液体, 压片镜检可见未成熟头节。静脉感染的幼猪肺脏内可见大量颗粒样结节, 质感实;在前肢骨骼肌也检出颗粒样结节, 结节大小为2～5 mm;颈部皮下也见到直径约为3 cm的囊肿, 囊内为黄绿色黏稠液体, 剥离囊肿后皮下见10余个1～2 mm的疣状物;肾脏被膜表面可见大量小于0.5 mm的白色小点;心脏、脾脏、脑未见明显病变。经灌胃感染的幼猪仅在肝脏出现异常, 病变特征与静脉感染者相似, 可见结节和未发育成熟的囊尾蚴, 其他组织器官未见异常。对照组幼猪各器官组织未见异常。
2.2 病变组织的病理学检查
静脉感染和灌胃感染的幼猪肝脏均可见部分肝细胞水肿, 组织内较多嗜酸性粒细胞聚集, 并出现嗜酸性变, 囊尾蚴周围有大量炎性细胞包绕 (见图2) 。静脉感染的幼猪肺组织结节、皮下和肌肉组织的结节内 (见图3) 均可见细胞坏死和嗜酸性粒细胞浸润以及浆细胞、淋巴细胞和类上皮细胞, 结节周围组织表现为肉芽肿性炎;肾单位结构未见异常, 但肾皮质内见嗜酸性结节, 肾小管和肾小体间有炎性细胞浸润。
2.3 囊尾蚴和幼猪各组织的亚洲带绦虫特异性PCR
灌胃感染幼猪的肝囊尾蚴和静脉感染幼猪的肺脏、肌肉、皮下及肾组织内结节均扩增出大小约为250 bp的DNA片段, 与亚洲带绦虫成虫DNA的扩增产物大小一致 (见图4) 。对照猪的肝组织PCR结果为阴性。
1.亚洲带绦虫孕节DNA;M.DNA 分子质量标准 (各条带对应的分子大小依次为200, 400, 600, 800, 1 000, 1 500 bp) ;2, 3.灌胃感染幼猪肝囊尾蚴、肝结节的DNA;4～9.依次是静脉感染幼猪肝囊尾蚴和肝脏、肺脏、肾脏、肌肉及皮下结节的DNA;10.对照组幼猪的肝组织DNA。
3 讨论
亚洲带绦虫广泛分布于东亚及东南亚国家和地区, 包括我国西南地区, 并且已成为亚太国家人体带绦虫的优势虫种。猪是亚洲带绦虫的自然中间宿主, 与猪带绦虫不同, 亚洲带绦虫的幼虫往往寄生在猪的肝脏, 而鲜见引起其他组织器官的病变[1,2]。经口感染中间宿主的亚洲带绦虫虫卵在宿主小肠内孵化出六钩蚴, 进入宿主肠壁静脉, 随血流汇入门静脉, 最后进入肝脏发育成为囊尾蚴[5]。在本试验中, 经消化道入侵的亚洲带绦虫六钩蚴仅侵犯猪的肝脏, 在肝外的其他组织器官未见六钩蚴的定植或引起宿主的病理改变;经静脉入侵的亚洲带绦虫六钩蚴虽然经血循环可分布于肺脏、肾脏、肌肉和皮下组织, 但也仅在肝脏发育成囊尾蚴, 在其他组织器官却不能发育, 仅引起以嗜酸性肉芽肿为主要特征的炎性病变。结果表明, 亚洲带绦虫的幼虫具有肝趋向性和组织选择性。
与亚洲带绦虫明显不同, 猪带绦虫六钩蚴在中间宿主家猪普遍引起的是全身感染, 除感染肝脏外还可以随肝静脉出肝脏, 再分布到肝脏外的其他组织器官, 通常在全身肌肉、皮下发育成囊尾蚴而引起皮肌型囊虫病, 亦可引起脑囊虫病[5]。因此, 猪带绦虫六钩蚴比亚洲带绦虫六钩蚴对血管壁的破坏作用和在组织内移行的能力强。猪带绦虫六钩蚴的小钩具有较强的活动能力, 可以不时地摆动和旋转运动[6], 亚洲带绦虫六钩蚴小钩却不能运动, 这可能是二者穿透血管壁和在组织中移行能力差异的原因之一。试验经静脉注射而分布到肌肉和皮下的亚洲带绦虫六钩蚴, 并不能像猪带绦虫那样发育为囊尾蚴而表现肝组织选择性, 这种差异可能与猪带绦虫和亚洲带绦虫产生和释放的生物毒素、侵袭性酶及免疫逃逸相关蛋白有关。二者对宿主入侵机制的差异包括免疫逃避机制尚需进行更深入和广泛的研究。
摘要：亚洲带绦虫是以猪为中间宿主的人体带绦虫, 为了研究其幼虫的肝趋向性和组织选择性, 试验分别用亚洲带绦虫虫卵灌胃和酶法孵化出六钩蚴后以静脉注射方式感染幼猪, 35d后剖检, 观察六钩蚴在猪体内的分布、发育和引起病变的特征。结果表明:两种途径入侵家猪的亚洲带绦虫六钩蚴都仅在肝脏发育成囊尾蚴;经静脉感染的幼猪肝脏、肺脏、肾脏、肌肉和皮下组织可检出以嗜酸性肉芽肿为主要特征的病变;经灌胃感染的幼猪则仅见肝脏出现病变, 其他组织器官未见明显病变。
关键词：亚洲带绦虫,六钩蚴,囊尾蚴
参考文献
[1]EOM K S, RIM H J.Morphologic descriptions ofTaenia asiatica sp.N[J].Korean J Parasitol, 1993, 31:1-6.
[2]EOMK S, JEON H K, KONG Y.Identification ofTaenia asiatica in China:Molecular, Morphological, and epidemiological analysis of a Luzhai isolate[J].J Parasitol, 2002, 88:758-764.
[3]陈峥宏, 郎书源, 吴小娟, 等.用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫[J].贵阳医学院学报, 2009, 34 (3) :239-241.
[4]赵艳兵.猪带绦虫卵体外孵化方法的比较[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, 24 (1) :75-76.
[5]包怀恩.绦虫[M]//赵慰先.人体寄生虫学.2版.北京:人民卫生出版社, 1994:561-595.