TGF-α

TGF-α（共4篇）

TGF-α 篇1

摘要：目的 观察半毒素Saporin联结导向因子TGFα后细胞毒性作用的改变及其生物学鉴定。方法 用SPDP化学联结的方法合成了TGFα-SAP, 通过细胞计数观察TGFα-SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用, 并用3H-leucine掺入法进一步探讨了TGFα-SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响。结果 发现Saporin对于真核细胞的细胞毒性作用很弱, 联结TGFα后构建的TGFα-SAP可明显抑制平滑肌细胞的增殖, 而过量的TGFα可通过竞争抑制逆转TGFα-SAP对平滑肌细胞3H-TdR掺入量的明显抑制作用。结论 细胞毒性药物Saporin联结导向因子TGFα构建的TGFα-SAP通过TGFα的介导已具有较Saporin明显增强的细胞毒性作用。

关键词：转化生长因子α,saporin,纤维母细胞生长因子,平滑肌细胞,再狭窄

Saporin是从植物皂草种子中提取出来的一种半毒素, 它可通过抑制蛋白质合成中伸展因子2 (EF2) 与核糖体60S亚单位的联结而导致细胞死亡。但动物细胞无这种植物蛋白的联结受体, 故在细胞外, 对细胞膜完整的真核生物细胞Saporin并不具明显的毒性作用[1]。本实验拟通过SPDP化学联结的方法, 将生长因子TGFα (即transforming growth factorsα, 转化生长因子α) 和植物毒素蛋白Saporin (即SAP) 进行联结合成了新型的生长因子导向药物—TGFα-SAP, 并通过实验证实联结后的TGFα-SAP较Saporin具有明显增强的细胞毒性。由于增殖平滑肌细胞具有明显上调的TGFα受体EGFR, 故实验将观察Saporin和TGFα-SAP对增殖平滑肌细胞的不同细胞毒性作用。

1 材料与方法

1.1 材料

TGFα和Saporin从Sigma试剂公司购得, 其它常用生化试剂均为进口或国产分析纯。氚标胸腺嘧啶核苷 (3H-TdR) 和氚标亮氨酸 (3H-leucine) 为中国原子能科学研究院产品 (3H-leucine和3H-TdR放射性比活度均为28Ci/mmo1) 。DMEM培养基 (Gibco) , 牛血清 (BCS, 四季青公司) ;放免测定采用3H-TdR液体闪烁计数仪 (LKB1209, RACKBETA) 。新西兰大白兔, 由南华大学医学实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 TGFα与Saporin的联结与提纯

TGFα和Saporin分别从GIBCO和Sigma试剂公司购得。先取400μgTGFα以磷酸缓冲液溶解加入交联剂SPDP (1mg/mL) 乙醇溶液0.1mL孵育30min后用 (4000Da) 分子筛离心洗脱浓缩, 然后再取Saporin 1mg以1mL磷酸缓冲液溶解后加入交联剂SPDP乙醇溶液 (1mg/mL) 0.1mL孵育30min后用0.5mLEppendorf离心过滤管 (4000Da) 以13000g/min离心洗脱多余的交联剂SPDP后浓缩, 再加入DTT (二硫苏糖醇, 50mmol/L) 15μL, 室温下不断搅拌持续反应30min, 再用0.5mLEppendorf离心过滤管 (4000Da) 以13000g/min离心洗脱浓缩, 然后加入TGFα-PDP, 4℃孵育36h, 并不住轻摇, 最后将反应混合物 (含TGFα-SAP及少量残余的Saporin) 以等量0.2mol/L的赖氨酸中止反应, 用0.2mmol/L半胱氨酸室温下处理6h后, 用4mLEppendorf离心过滤管 (10000Da) 以6000g离心洗脱浓缩后, -30℃保存备用。以考马斯亮兰蛋白定量法测定联结终产物的蛋白含量。

1.2.2 SDS-PAGE电泳

取配制的分离胶约3.7mL加入夹层玻璃板中, 小心加入去离子水0.5mL覆盖胶表面, 室温聚合30min;除去水层后加入浓缩胶约1.5mL, 插入样品梳。待胶聚合后取出梳子, 并注意排气泡。电泳时取联结的TGFα-SAP样品20μL (约45μg/mL) , 加样品缓冲液20μL, 100℃煮沸5min, 每孔上样20μL。电压180V下电泳, 45min。取出分离胶, 用染色液10mL, 25℃旋转振摇60rpm, 30min, 弃染色液, 加脱色液10mL, 同样振摇30rnin, 重复脱色一次。脱色后的分离胶置凝胶成像分析仪摄像, 对特异性条带照相。

1.2.3 细胞毒性试验

兔SMCs的原代培养采用ChamLey-Lampbell的酶消化方法[2]。传代平滑肌细胞重悬后计数, 调整细胞密度为1ı105个/mL, 接种于96孔培养板 (直径6.4mm) , 以含10%胎牛血清DMEM培养液培养24h, 使细胞生长进入增殖期, 然后换成含TGFα-SAP (10-7mol/L) 、SAP (10-3mol/L) 及空白的10%胎牛血清DMEM培养液100μL, 共分3组, 每组种植20孔, 于24h后收样计算细胞数, 每孔计算3次。

1.2.4 TGFα-SAP受体结合的竞争抑制实验

选用生长良好的第3代至第4代SMCs悬液接种于96孔培养板, 共分3组。TGFα-SAP组加有TGFα-SAP的DMEM培养液 (含10%胎牛血清) , 培养液中TGFα-SAP终浓度为10-9mol/L, TGFα抑制组在以上处理下另加入TGFα, 使终浓度高出TGFα-SAP浓度100倍 (10-7mol/L) , 并以只含胎牛血清的一组作为阴性对照组, 培养48h后加入3H-TdR使终浓度为1uCi/mL, 继续培养48h后液体闪烁计数仪上测定细胞3H-TdR放射活度。

1.2.5 统计学处理

结果以±S表示, 两组资料之间的比较采用Student's t检验。P<0.05有显著性意义。

2 结果

2.1 TGFα与Saporin的联结与提纯

反应后混合物用Eppendorf离心过滤管进行了初步提纯, 提纯后分子量低于10000Da的杂质少于5%～10%, 而我们所需要的TGFα-SAP (35000Da) 和少量未反应的残余Saporin (30000Da) 获得率可达90%～95%。经蛋白定量测定得到TGFα-SAP联结物的蛋白浓度为44.7μg/mL, 反应后的TGFα-SAP联结物中仍含有少量的残余Saporin, 但为了在以后研究中表达方便, 我们即近似地将这一浓度作为TGFα-SAP的浓度。

2.2 SDS-PAGE电泳结果

SDS-PAGE电泳后, 凝胶用考马斯亮蓝R-250染色, 经凝胶成像分析仪中对特异性条带照相分析, 结果显示:反应后经初步提纯的蛋白中主要是分子量>30000Da的TGFα-SAP和残余Saporin, 而其它小分子杂质含量很少。

2.3 TGFα-SAP对增殖平滑肌细胞的生长的影响

结果显示:TGFα-SAP组、SAP组和空白对照组经细胞计数分别为1.64×106、3.27×106、3.64×106个/mL。TGFα-SAP组和SAP组平滑肌细胞增殖率分别是对照组的45.1%和89.7%。这表明TGFα-SAP (10-7mol/L) 具有明显增强的细胞毒型作用, 与更高浓度的SAP (10-3mol/L) 组相比, 两组之间差异有统计学意义 (P<0.05) 。

2.4 TGFα-SAP受体结合的竞争抑制实验

结果显示:TGFα-SAP对培养的SMCs 3H-TdR掺入量有明显抑制作用, 与对照组比较3H-TdR掺入量降低了39.14% (P=0.0017) , 而当加入TGFα后, TGFα-SAP抑制SMCs DNA合成的作用即明显减弱, 与阴性对照组比较3H-TdR掺入量已无显著性差异 (P=0.229) 。

3 讨论

国外已有人通过FGF、EGF等联结白喉毒素片段、假单孢菌属外毒素 (PE) 或蓖麻毒素A等半毒素去抑制增殖平滑肌细胞、防止再狭窄, 其结果令人鼓舞, 但实验仍存在细胞毒性作用特异性不够强, 全身毒副作用较大及远期效果不理想等问题[1,4]。本实验中我们采用SPDP化学联结的方法, 利用TGFα作为导向因子联结了一种新的细胞毒素Saporin合成了TGFα-SAP。本实验采用的化学联结的方法是利用细胞毒素本身所有的或通过化学偶合剂引入的自由疏基与同样存在自由疏基的生长因子以二硫键相联结。这种联结方法比较简单, 形成的联结物特异性也较高, 但分子间仍可能出现1:1、1:2或2:1的联结, 甚至出现其它一些低聚合物。而这些联结物都有类似的特异细胞毒作用[5]。

Saporin是一种新型半毒素植物蛋白多肽, 可抑制蛋白质合成中伸展因子2 (EF2) 与核糖体60S亚单位的联结而导致细胞死亡。因包括人在内的动物细胞无这种植物蛋白的联结受体, 故在细胞外对完整的真核生物细胞不具毒性。而利用SPDP化学联结的方法, TGFα与毒素蛋白Saporin联结后可不影响其与受体结合的特性, 故联结后的TGFα-SAP即能以TGFα为导向因子, 通过EGF受体将Saporin特异性地转运到表型改变的平滑肌细胞内, 特异性地杀死表型转化后不断增殖的平滑肌细胞。本实验将传代平滑肌细胞诱导进入增殖期建立表型转化的平滑肌细胞的模型, 并发现:TGFα-SAP可明显抑制增殖平滑肌细胞的生长, 细胞增殖抑制率达到了近50%, 而Saporin由于必须在细胞内活化后才具备Saporin的细胞毒性, 故在浓度高出10000倍时, Saporin对平滑肌细胞的增殖也未表现出类似的明显抑制作用, 说明Saporin本身在细胞外表现出的细胞毒性作用很弱, 而TGFα-SAP由于可通过导向因子TGFα与EGF受体结合而转运到胞浆内, 故表现出与Saporin相比明显增强的细胞毒作用。而TGFα-SAP抑制SMCs的DNA合成是通过TGFα介导的, 而由于TGFα可与TGFα-SAP竞争细胞表面的受体, 故实验发现在加入TGFα-SAP再加入过量的TGFα能明显抑制TGFα-SAP对增殖的SMCs的细胞毒性作用。

本实验在国内外首次以SPDP方法联结合成了生物导向药物TGFα-SAP, 同时也证实联结后的TGFα-SAP可通过TGFα介导从而具有了较Saporin明显增强的细胞毒性作用。

参考文献

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TGF-α 篇2

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器

EGF、TGF-αELISA试剂盒:美国R&D systems公司。SDZ-11型华佗牌电针治疗仪:上海医用电子仪器厂;450自动酶标仪:美国佰乐公司。

1.2实验动物与分组

健康清洁级家兔40只, 雌雄各半, 体重1.5~2.5kg, 由湖南中医药大学实验动物中心提供, 动物合格证号:SCXK (湘) 2009-0012。随机分为5组, 每组8只;正常组、模型组、常规针刺组、子午流注戌时取穴结合常规针刺组、子午流注辰时取穴结合常规针刺组。

1.3穴位定位及治疗方法

选择每天辰时 (7:00-9:00) 或戌时 (19:00-21:00) 进行治疗。按照于氏的时区、时差理论, 长沙地方时间比北京时间推后28分钟。

依照纳甲法开穴推算法, 并运用“合日互用”和“井经荥合输纳”的法则补充, 推算出甲日至癸日每日辰时和戌时的开穴。穴位定位: 参考李忠仁主编《实验针灸学》中常用实验动物针灸穴位。

所有家兔捆缚于兔固定板, 正常组不作处理, 其它各组进行造模, 于24 小时后开始针刺, 在每天的相应时间针刺基本穴位 ( 中脘、足三里) , 采用电针针刺, 考虑到子午流注取穴多位于指端末节, 不便电针及留针, 故每日开穴穴位采用埋针1 个时辰, 以加强疗效。正常组: 在相同条件下正常饲养, 不做其他处理; 模型组: 于造模后相同条件下正常饲养, 不施加针药影响, 于造模后第1 个辰时开始, 模拟捉拿、固定、擦拭、酒精消毒; 常规针刺组: 选择在辰时与戌时之间, 大致相当于患者一般来院就诊的时间段, 上午9 ~11 时为常规针刺组的治疗时间, 选穴中脘、足三里, 电针针刺, 留针30 分钟, 每日1 次; 子午流注戌时针刺组: 于造模后第一个戌时开始对子午流注戌时相应开穴埋针一个时辰, 并配合常规针刺穴位电针针刺, 留针30 分钟, 每日1 次; 子午流注辰时针刺组: 于造模后第一个辰时开始对子午流注辰时相应开穴埋针1 个时辰, 并配合常规针刺穴位电针针刺, 留针30 分钟, 每日1 次。电针时间: 每次30 分钟, 每日1 次, 7 天为1 个疗程。刺激参数: 疏密波 ( 疏波4Hz, 密波20Hz) , 脉冲宽度0. 5ms, 输出电压2 ~ 4V, 输出电流4 ~ 6mA。

1.4急性胃黏膜损伤造模方法

采用无水乙醇损伤造模法[2]。动物均禁食不禁水48小时, 正常对照组用生理盐水按2.35mL/kg体重剂量灌胃, 其余各组用无水乙醇按2.35mL/kg体重剂量灌胃, 24小时后恢复普通饮食。根据预试实验结果, 2小时后造模家兔胃黏膜可充血水肿, 出现点状或线状的出血点, 提示造模成功。

1. 5 标本提取及处理方法

空气栓塞法处死家兔, 剖腹取胃, 从胃幽门至贲门处, 沿胃大弯剪开, 生理盐水冲洗胃残留内容物, 计数胃黏膜损伤指数后, 取胃窦部黏膜组织0.2g, 加入9 倍的生理盐水匀浆, 研磨40 ~50 次, 制成10%的胃黏膜组织匀浆, 3500r/min常温离心15 分钟, 取上清液, -20℃低温保存, 待测。

1.6观察指标检测

表皮生长因子 (EGF) 、转化生长因子α ( TGF - α) 测定: ELISA法, 严格按酶联免疫试剂盒说明书进行操作。

1.7统计学方法

所有数据使用SPSS16.0 for Windows软件处理, 数据用均数±标准差 (±s) 表示, 所有资料进行正态性检验及方差齐性检验;符合正态分布者, 多组计量资料采用单因素方差分析 (One-way ANOVA) , 方差齐性用LSD和SNK法, 方差不齐者用Dunnett’s T3法;不符合正态分布, 采用多个独立样本比较的秩和检验 (K Independent Samples) 。

2 结果见表1。

与正常组比较#P<0.05, ##P<0.01;与模型组比较△P<0.05, △△P<0.01;与常规组比较▲P<0.05;与戌时组比较★P<0.05

3讨论

急性胃黏膜损伤发生的机制较为复杂, 主要是由于胃黏膜防御机能相对减弱与胃黏膜损伤因子作用相对增强所致, 而其修复也是一个十分复杂的过程, 整个过程中受多种生长因子及其受体的调控。本课题主要探讨表皮生长因子 (EGF) 、转化生长因子-α (TGF-α) 在胃黏膜损伤中的保护、修复作用。

EGF通过与其特异的受体EGFR结合来发挥生物学作用, EGF到达受损细胞表面时, 与EGFR结合, 形成二聚体, 以调节细胞生长与分化, 参与组织损伤的修复。EGF被认为是调节胃黏膜愈合的中介因子, 对胃黏膜的保护和再生起着重要作用, EGF能直接抑制胃泌素和组胺对胃酸分泌的促进作用; 并且通过与其它胃肠因子的协同作用间接影响胃酸分泌, 还可以通过改善微循环, 促进胃黏膜修复[3,4,5]。

在胃肠道中, TGF -α 参与调节黏膜上皮的更新和黏膜损伤的修复, 发挥黏膜细胞保护作用, 是维持胃肠道黏膜完整性的重要介质。许多研究表明胃液内及黏膜产生的TGF- α 可能参与急性胃黏膜损伤后的修复, 并且对胃肠道黏膜具有明显的细胞保护作用和抗损伤作用[6,7,8]。

子午流注针法系以十二经脉肘膝以下的66 个五输穴为主, 将经脉穴位、阴阳五行、日时干支巧妙结合, 用阴阳五行的生克变化以推算人体气血的开合和所相应的经脉穴位, 依据不同时辰按时开穴, 随气血之开合施以刺灸, 《素问·八正神明论》曰: “凡刺之法, 必候日月星辰, 四时八正之气, 气定乃刺之。”许多研究表明子午流注针法在肩周炎、颈椎病、中风等疾病的治疗中有较好的疗效[9,10,11], 但在文献检索中尚未发现子午流注针法治疗急性胃黏膜损伤的相关研究。

本实验采用酶联免疫法测定家兔胃黏膜EGF、TGF - α含量, 结果显示辰时针刺组的家兔胃黏膜EGF、TGF - α 含量明显高于模型组 ( P <0.01) , 与常规针刺组和戌时针刺组比较具有统计学差异 ( P <0.05) , 提示常规针刺配合子午流注针法是通过促进胃黏膜EGF和TGF - α 的合成与分泌从而达到对胃黏膜的修复作用。

摘要：目的:探讨子午流注针法配合常规针刺对急性胃黏膜损伤家兔胃黏膜的修复作用机制。方法:将40只雌雄各半的家兔随机分为5组, 每组8只, 正常组、模型组、常规针刺组、子午流注戌时取穴结合常规针刺组、子午流注辰时取穴结合常规针刺组。采用无水乙醇造模法制备家兔急性胃黏膜损伤模型, 分组治疗7天后, 剖腹取胃, ELISA法检测家兔胃黏膜表皮生长因子 (EGF) 、转化生长因子α (TGF-α) 含量的变化。结果:与正常组比较, 各造模组家兔胃黏膜EGF、TGF-α含量明显升高, (P<0.01) , 辰时针刺组胃黏膜EGF、TGF-α含量最高, 且高于常规针刺组和戌时针刺组, 具有统计学差异 (P<0.05) ;常规针刺组和戌时针刺组胃黏膜EGF、TGF-α含量高于正常组和模型组。结论:常规针刺配合子午流注针法能够促进胃黏膜EGF和TGF-α的合成与分泌, 对胃黏膜损伤起修复作用。

关键词：@急性胃黏膜损伤,表皮生长因子,转化生长因子α,子午流注,兔

参考文献

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[5]齐晶晶, 王贤斌, 章红波, 等.和中消溃汤对乙酸诱导溃疡模型大鼠EGF表达的影响.中国中医急症, 2009, 18 (3) :420.

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[9]曾奕.子午流注纳甲法针刺治疗肩周炎疗效观察.光明中医, 2008, 23 (4) :封3.

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TGF-α 篇3

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物6周龄SD大鼠 (清洁级, 雄性) 141只, 体重 (180±20) g。

1.1.2 药物百令胶囊, 醋酸地塞米松片。

1.1.3 仪器直线加速器, 试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 动物分组将141只6周龄SD大鼠 (清洁级, 雄性) 随机分为对照组 (n=21) 、模型组 (n=30) 、百令预防组 (n=30) 、治疗组 (n=30) 、地塞米松组 (n=30) 。

1.2.2 模型制作采用直线加速器X线全胸单次照射建立放射性肺损伤大鼠模型, 300cGy/min, 总剂量为20Gy。

1.2.3 给药方法百令预防组大鼠于照射前14天开始灌服百令胶囊, 其余各组均于造模后第2天灌胃, 对照组、模型组灌胃等体积生理盐水, 治疗组灌服百令胶囊混悬液, 地塞米松组灌胃地塞米松混悬液灌胃, 每天1次。

1.3 取材方法及指标检测

对照组分别于照射后第2、4、6周取7只大鼠, 其余各组则随机取10只, 腹腔注射10%水合氯醛麻醉后, 于大鼠心脏采血5mL, 置肝素抗凝管中, 置-20℃冰箱保存待查。采用ELISA (双抗体夹心法) 测定血浆中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量。

1.4 统计学处理

实验数据采用SPSS19.0进行统计学处理, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 采用析因分析, 多重比较采用LSD检验。P<0.05表示差异具有统计学意义, P<0.01为差异具有显著统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠血浆IL-6的含量变化比较

相较于模型组, 百令预防组、治疗组、地塞米松组大鼠血浆IL-6的含量明显下降 (P<0.05) ;百令预防组大鼠血浆IL-6的含量低于地塞米松组和百令治疗组 (P<0.05) , 百令治疗组大鼠血浆IL-6 的含量低于地塞米松组 (P<0.05) 。见表1。

(±s, pg/mL)

2.2 各组大鼠血浆TNF-α的含量变化比较

相较于模型组, 地塞米松组、百令预防组、治疗组大鼠血浆TNF-α含量均显著下降 (P<0.01) ;百令预防组大鼠血浆TNF-α的含量显著低于地塞米松组和百令治疗组 (P<0.01) , 百令治疗组大鼠血浆TNF-α的含量显著低于地塞米松治疗组 (P<0.01) 。见表2。

(±s, pg/mL)

2.3 各组大鼠血浆TGF-β1的含量变化比较

相比于模型组, 地塞米松组、百令预防组、治疗组大鼠血浆TGF-β1含量明显下降 (P<0.01) 。百令预防组低于地塞米松组和百令治疗组 (P<0.01) , 百令治疗组低于地塞米松组 (P<0.01) 。见表3。

(±s, pg/mL)

3 讨论

越来越多研究证据表明, 放射性肺炎及继而出现的肺纤维化可能由肺受照射后启动的细胞因子瀑布 (cytokine cascade) 所致[1]。该种细胞因子是较为复杂的细胞因子网络, 研究[2]表明, 肺受照射后数小时, 肺照射野局部组织内合成、分泌大量细胞因子, 进而增加炎性细胞活性而造成急性放射性肺炎的发生及发展。上述细胞因子主要分为两类:一类是以TGF-β为主参与组织修复和器官纤维化的因子;另一类是以IL-1和TNF-α为主参与局部损伤与炎症反应的因子。因此, 放射性肺损伤的发生可能源于多种细胞因子的协同作用[3]。TNF-α因子被认为是放射性肺炎发生的启动因子, 为强有力的促炎症反应因子。IL-6是多功能细胞因子, 其与放射性肺损伤的发生存在一定关系。TGF-β是强有力的促成纤维细胞分裂因子, 在纤维化的形成过程中起着重要作用。研究发现, SD大鼠照射2h后, 支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞出现TNF-α强表达持续至第4周后呈降低趋势并维持较低水平。

本实验结果显示:与对照组比较, 第2、4、6周模型组大鼠血浆中TNF-α、IL-6、TGF-β1含量均呈明显升高的趋势 (P<0.01) 。与模型组比较, 第2、4、6周百令预防组、治疗组大鼠血浆中IL-6含量均明显降低 (P<0.01) , 地塞米松组大鼠血浆中IL-6含量亦降低 (第2、4周, P<0.01;第6周, P<0.05) 。与模型组比较, 各治疗组大鼠血浆TNF-α、TGF-β1含量均明显降低 (P<0.01) , 地塞米松治疗组、百令治疗组、预防组大鼠血浆TNF-α、TGF-β1含量呈由高到低的顺序。表明百令胶囊对促炎症因子和促纤维化细胞因子具有抑制作用, 相较于西药地塞米松疗效稳定。因此, 百令胶囊可在抑制或减轻放射性肺泡炎性反应的同时抑制肺纤维化进程。

摘要：目的:分析百令胶囊对放射性肺损伤大鼠血浆IL-6、TNF-α、TGF-β1含量的影响, 探讨百令胶囊防治放射性肺损伤效果及可能作用机制。方法:将141只6周龄SD大鼠 (清洁级, 雄性) 随机分对照组 (n=21) 、模型组 (n=30) 、百令预防组 (n=30) 、百令治疗组 (n=30) 、地塞米松治疗组 (n=30) , 各组大鼠均给予X射线全胸单次照射 (20Gy) , 正常对照组除外。每组大鼠分别于第2、4、6周不同时间点随机处死, 心脏采血约5mL, 置肝素抗凝管中, 采用ELISA法检测血浆中TNF-α、IL-6、TGF-β1含量。结果:相较于模型组, 地塞米松组、百令预防组、治疗组大鼠第2、4、6周血浆中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量显著下降 (P<0.01或P<0.05) ;百令预防组大鼠第2、4、6周血浆中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量低于地塞米松组和百令治疗组 (P<0.01) , 百令治疗组大鼠第2、4、6周血浆中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量低于地塞米松治疗组 (P<0.01) 。结论:百令胶囊可抑制或减轻放射性肺泡炎性反应、肺纤维化进程, 可能通过降低血浆中IL-6、TNF-α、TGF-β1等细胞因子的含量实现。

关键词：放射性肺损伤,百令胶囊,炎症因子,IL-6,TNF-α,TGF-β1

参考文献

[1]山广志.百令胶囊加味治疗放射性肺炎的临床观察[J].实用中医内科杂志, 1996, 10 (4) :37.

[2]冯勤付, VUJASKOVIC Z, BRIZEL DM, 等.阿米福汀对单次肺照射的保护作用及TGF-β1活性的影响[J].中华放射肿瘤学杂志, 2004, 13 (3) :222-225.

TGF-α 篇4

1 材料与方法

1.1 实验材料与试剂

前列癃闭通片 (江苏颐海药业有限责任公司, 国药准字:Z20090339) , LPS (北京博奥生物有限公司) , ELISA试剂盒 (Sigma, 美国) 。

1.2 动物模型制备和分组

采用10周龄Wister雄性大鼠20只[哈尔滨医科大学动物实验中心赠, 合格证号:SCXK (黑) 2013-2016动字第20-005号], 清洁级, 体质重 (180±20) g。按照奇偶顺序将大鼠分为实验组和对照组。实验组大鼠造模根据参考文献[1], 对照组大鼠进行正常饲养, 实验组按8.0 g/kg给予灌胃。第31天处死全部大鼠。

1.3 TNF-α、IL-8、TGF-β1的检测方法

处死大鼠, 剪切并称前列腺组织100 mg, 置入1 m L的0.9%氯化钠溶液中, 采用匀浆器搅拌, 制备浆液, 离心取上清液。用ELISA试剂盒按操作步骤检测。

1.4 统计学分析

采用SPPS17.0统计学软件进行数据分析, 计量资料采用±s表示, 组间比较采用t检验, 以P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

应用ELISA法检测两组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-8、TGF-β1的含量。统计结果显示, 实验组TNF-α、IL-8、TGF-β1的含量明显降低, 与对照组比较差异有统计学意义 (P<0.01, 表1) 。

3讨论

慢性前列腺炎多发于成年人, 患者常表现为尿频及疼痛, 或下腹部不适, 疼痛严重者可波及下腹、腰骶及会阴腹股沟区。慢性前列腺炎的病因尚未明确, 研究资料显示体内外多种刺激因素都能导致发病, 如肌肉痉挛、局部炎症、气候变化、饮食刺激以及免疫因素等[2,3]。临床上对于慢性前列腺炎治疗主要有缓解疼痛症状、局部血液循环的改善、精神刺激的控制, 以及使用抗生素治疗等方法, 目前尚无疗效确切的治疗方法。抗生素为口服和注射为主, 但是, 治疗副作用较多, 导致疾病迁久不愈, 增加疾病扩散的机会, 降低生活质量, 患者易产生不良情绪, 身心疲惫。传统的中药治疗在慢性前列腺炎的治疗中发挥了中药的作用, 具有整体治疗、辩证论治的优点, 在保护男性前列腺、抵抗疾病的过程中发挥着重要的作用。

注:与对照组比较, *P<0.01。

前列癃闭通片主要成分为黄芪、土鳖虫、桃仁、淫羊藿、茯苓、桂枝等, 具有活血祛瘀、补肾壮阳、利水渗湿之功效[4]。本研究结果显示, 实验组TNF-α、IL-8、TGF-β1的含量明显降低, 与对照组比较差异有统计学意义 (P<0.01) , 提示前列癃闭通片在治疗慢性前列腺炎中具有显著疗效, 以抑制炎性因子发挥治疗作用。

参考文献

[1]李天赋, 李卫巍.慢性前列腺炎动物模型研究进展[J].中华男科学杂志, 2013, 19 (12) :1124-1128.

[2]吴磊, 罗志刚.III型前列腺炎临床诊断与治疗[J].当代医学, 2010, 17 (1) :24-26.

[3]DELLABELLA M1, MILANESE G, SIGALA S, et al.The role of the prostatic stroma in chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome[J].Inflamm Res, 2009, 58 (12) :829-836.