三价灭活苗（精选7篇）
三价灭活苗 篇1
传染性法氏囊病 (IBD) 是由传染性法氏囊病病毒引起的一种急性、高度接触性、致死性传染病, 以破坏法氏囊未成熟的B淋巴细胞导致严重的免疫抑制为特征, 是严重威胁鸡养殖业发展的传染病之一。20世纪80年代末, 在欧洲及日本的鸡群中爆发了以高死亡率为特征的传染性法氏囊病, 其死亡率高达60%～100%。
为降低传染性法氏囊病病毒对当地养殖业的危害, 试验选择了具有代表性的YX08、YX12和YB02 3个地方野毒株进行了鸡胚接种和三价油乳灭活苗的研制, 并对三价油乳灭活苗免疫效果进行了检测, 以期为传染性法氏囊病的防制提供可靠的保障。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 种毒、抗原和活疫苗
标准强毒株BC6/85 (中国兽药监察所) , 毒价为1×10-5.88ELD50/0.2 mL;YX08、YX12和YB02为分离于河南省洛阳市和安阳市的传染性法氏囊病发病鸡群中的基因结构具有代表性的地方野毒株, 均以第10代作为种毒, 毒价分别为1×10-5.85ELD50/0.2 mL、1×10-4.73ELD50/0.2 mL和1×10-6.24ELD50/0.2 mL;传染性法氏囊病抗原, 由河南科技大学动物科技学院禽病研究室应用多株地方野毒株的法氏囊组织悬液制备, AGP效价为26;中等毒力的活疫苗为B87毒株冻干活疫苗。
1.1.2 传染性法氏囊病标准阳性血清
购自中国兽药监察所, 其AGP效价为27。
1.1.3 IBD-IgG、免抗鸡IgG酶标抗体
均由河南科技大学动物科技学院禽病研究室制备, 保存。
1.1.4 鸡胚
9～10日龄鸡胚, 来源于未进行过传染性法氏囊病免疫、处于自然隔离饲养的土种鸡种蛋 (测其传染性法氏囊病抗体为阴性) , 自孵至所需日龄。
1.1.5 供试鸡
1日龄健康罗曼雏公鸡, 由洛阳市新安机械化养鸡场提供, 自养至所需日龄。
1.2 方法
1.2.1 制苗病毒液的培养
分别取由地方野毒株YX08、YX12和YB02所培养的第10代种毒的鸡胚绒毛膜和尿囊液, 用含青霉素、链霉素各4 000 IU/mL的生理盐水作100倍稀释;经尿囊腔途径接种于10日龄无传染性法氏囊病母源抗体的鸡胚, 0.2 mL/枚;37 ℃继续孵化, 每天照蛋2次;弃掉24 h内的死亡胚;之后随死随取, 至96小时不论死亡与否均取其尿囊液和羊水, -20 ℃冻存, 备用。制苗时将灭活的3株地方野毒株尿囊液按1∶1∶1的比例进行混合。
1.2.2 AGP法检测传染性法氏囊病抗原
按照参考文献[1]中的方法进行。
1.2.3 Dot-ELISA法检测传染性法氏囊病抗原
按参考文献[2]中的方法进行。
1.2.4 油乳佐剂灭活苗的制备
按照参考文献[3]中的方法进行。
1.2.5 免疫效力的检测与比较
取480只15日龄的健康罗曼雏公鸡 (传染性法氏囊病抗体为阴性) , 随机分成3组, 每组160只。A组为鸡胚毒三价油乳灭活苗免疫组;B组为鸡胚毒三价油乳灭活苗和活疫苗联合免疫组;C组为活疫苗免疫组。分别用制备的地方野毒株三价油乳灭活苗于颈部皮下接种A组、B组罗曼雏公鸡, A组0.5 mL/只, B组0.3 mL/只;B组和C组罗曼雏公鸡用2倍量的B87活疫苗经口灌服。每组于接种后第10, 20, 30, 60, 90天各取5只罗曼雏公鸡用塑料管于翅下静脉处引流采血, 分离血清, 检测AGP抗体效价。
1.2.6 攻毒试验
在接种后第30, 60天, 各组随机选取60只罗曼雏公鸡, 再随机分成4个处理组, 每组15只, 分别用标准强毒株BC6/85、地方野毒株YX08、YX12和YB02的病毒液通过口、鼻、肌肉注射途径进行攻击, 连续观察10 d, 分别记录各组罗曼雏公鸡发病、死亡情况。
2 结果
2.1 鸡胚接种地方野毒株
YX08、YX12 和YB02的第10代鸡胚毒后收获物的检测结果 (见表1)
注:“++”表示病毒呈强阳性, “+”表示病毒呈阳性或弱阳性, “-”表示病毒呈阴性。
由表1可知, 在接种3个地方野毒株的鸡胚收获物 (绒毛膜和尿囊液) 中, 病毒含量均较稳定, Dot-ELISA法检测全部呈强阳性, AGP法检测多数呈阳性。从总的检测结果来看, 对于鸡胚毒的检测仅用AGP法并不能正确评价病毒培养的成功与否。
2.2 免疫效力的测定结果 (见表2)
注:“-”表示抗体呈阴性, “+”表示抗体呈阳性;括号内的数表示抗体呈阳性的罗曼雏公鸡所占的比例。
由表2可知:接种三价油乳灭活苗的罗曼雏公鸡AGP效价最高达22.8 (在接种后30天出现) , 至接种后第90天仍有2/5的罗曼雏公鸡抗体呈阳性;A组与C组相比, 除了在接种后第10天稍逊于C组外, 其他各时期所产生的抗体效价均明显高于C组;C组在接种后第60天时抗体呈阴性, 而此时A组AGP效价仍为21.8;B组在接种后第10, 20天时所产生的抗体效价明显高于A组, 第30天与A组持平, 第60, 90天稍逊于A组。
2.3 攻毒试验的结果 (见表3)
由表3可知, A组和B组的罗曼雏公鸡对标准强毒株BC6/85和3个地方野毒株YX08、YX12和YB02的攻击在第30天时的保护率达93.3%～100%, 第60天时保护率分别高于80.0%和73.3%, 且组间差异不大, 但都明显高于C组。
3 讨论
用地方野毒株YX08、YX12和YB02的第10代鸡胚毒接种鸡胚所制备的三价油乳灭活苗经检测和攻毒试验证明:三价油乳灭活苗的免疫效果在接种早期 (第10天) 稍逊于活疫苗, 在接种后第30天检测时免疫效果已明显优于活疫苗, 在接种后第60天对于标准强毒株和地方野毒株的攻击均可达80.0%以上的保护率;鸡胚毒灭活疫苗和活疫苗联合的免疫效果在前30天明显优于单纯鸡胚毒灭活疫苗和活疫苗。因此, 在实际生产中将三价油乳灭活苗与活疫苗联合应用, 二者可互为补充, 取长补短, 共同发挥作用, 抵抗病毒侵袭。
摘要：将分离于河南省的YX08、YX12和YB02野毒株的第10代鸡胚传代毒作为种毒接种鸡胚, 用收获的鸡胚绒毛膜尿囊液试制出三价油乳灭活苗, 并对其进行检测和免疫效果比较。结果表明:三价油乳灭活苗和三价油乳灭活苗与活疫苗联合免疫效果均明显优于活疫苗免疫组, 平均AGP效价分别达到22.8和23.0;当活疫苗免疫组鸡血清中已无可测性抗体时, 三价油乳灭活苗免疫组和联合免疫组仍具有21.8和21.2的AGP效价。在接种后第30, 60天, 分别用传染性法氏囊病病毒标准强毒株BC6/85、地方野毒株YX08、YX12和YB02进行攻毒试验。在接种后第30天, 三价油乳灭活苗和联合免疫疫苗对这4个毒株的攻击可提供93.3%100%的保护;单独的活疫苗可提供60.0%80.0%的保护;在接种后第60天, 三价油乳灭活苗、联合免疫疫苗和活疫苗分别能提供80.0%93.3%、80.0%93.3%和40.0%53.3%的保护。
关键词：传染性法氏囊病病毒 (IBDV) ,鸡胚毒,三价油乳灭活苗,免疫效果
参考文献
[1]汤生玲, 房海, 林范泽.兽医生物制品技术[M].北京:中国农业出版社, 1995.
[2]张春杰, 郑祥海, 程相朝.鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Dot-ELISA诊断法的建立及应用[J].中国兽医学报, 1994 (2) :164-167.
[3]王明俊.兽医生物制品[M].北京:中国农业出版社, 1996.
三价灭活苗 篇2
1 活苗的优点
活苗的免疫效果比灭活苗好。由于活苗接种机体后可在体内进行繁殖, 产生的抗原量要比一次接种灭活苗的抗原量多很多, 另外活苗的抗原被破坏程度要比灭活苗轻, 所以活苗的免疫效果要比灭活苗要好。其产生免疫力快, 接种后3~5d可产生免疫力。免疫力强, 免疫时间长, 有效免疫期1~2年;活苗用量少、接种途径多、使用方便;价格低, 易推广。
2 活苗的缺点
有一定毒性和副作用, 如果脱毒不好易引起一定的不良反应, 特别是强毒苗使用后易造成人为的感染和扩散;活苗的稳定性差, 需要在真空、干燥、低温、适宜的环境中保存。
3 灭活苗的优点
毒性小、使用安全, 不会造成人为的感染和扩散;性质稳定、易保存, 需在2~8℃冷藏保存。
4 灭活苗的缺点
免疫效果差。产生免疫力晚, 注苗后需2~3周才能产生免疫力。免疫力不如活苗强, 免疫有效期短, 一般为4~6个月;灭活苗用法单一, 只能注射免疫;使用剂量大、次数多、需要加佐剂、造价贵;有的佐剂对局部有刺激性可引起局部发炎、过敏等不良反应。
5 使用活苗时注意事项
(1) 由于活苗有一定毒性和感染性, 所以使用前要做好安全试验, 特别是未使用过的新疫苗, 在确保安全后再推广使用。注苗时要做好针头、注射器、注射部位等的消毒。使用过的空瓶不宜随意丢弃, 要进行消毒和无害化处理, 以免污染环境。
(2) 由于活苗宜在干燥、真空、低温、避光保存, 所以运输、保存过程中应在低温、避光条件下进行。使用前要逐瓶检查, 检查瓶是否破裂、盖是否松动、疫苗的理化性状是否改变, 对于失空、性状改变的均不宜使用。疫苗开封后应在规定时间内用完, 特别是炎热的夏季。
(3) 活苗稀释时要使用规定的稀释液按比例稀释, 不宜使用凉水、蒸馏水, 特别是含有消毒药的自来水稀释, 以免影响活苗的存活繁殖而影响免疫效果。
(4) 使用活苗免疫前后5d内不宜使用活苗敏感的抗生素, 以免抑制或杀死活苗而影响免疫效果。
6 使用灭活苗时注意事项
(1) 灭活苗宜在2~8℃避光保存, 所以在运输、保存时应在冷藏、避光条件下进行。禁止冷冻, 以防冻结时破坏抗原的结构而影响免疫效果。
(2) 灭活苗在使用前应在室温下放置10min进行复温, 以免对机体产生不良刺激。抽苗前应摇匀, 使疫苗在稀释液中分布均匀。注苗时由于剂量大, 有的刺激性强, 所以宜深部肌注, 以防注射局部起包。
(3) 为确保灭活苗的免疫效果, 注射的剂量要充足, 一般在首免间隔一个月后再强化免疫一次。
三价灭活苗 篇3
目前很多猪场通过化学药物和菌苗接种对猪大肠杆菌病进行防治。由于长期使用大量抗菌药物，导致产生了许多耐药性菌株，对本病的治疗效果也越来越差。不同猪场的大肠杆菌血清型不同，对药物的敏感性也不一样，并导致药物治疗效果并不理想。因此，采用菌苗接种预防本病的发生十分重要。但由于大肠杆菌血清型多，各地血清型不相同[5]，对本病的预防效果差异非常大。
近年来，湘中某中型猪场持续暴发仔猪黄白痢病，用外购疫苗预防和药物治疗效果不佳，给猪场带来严重经济损失。为此，本研究从该猪场分离筛选出地方优势致病性大肠杆菌菌株制成铝胶灭活苗，经临床应用后，该猪场仔猪黄白痢得到了有效的控制。本研究为中小规模猪场大肠杆菌病进行生物防治技术研究具有十分积极的现实指导意义。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 分离菌株
分离菌株取自湖南娄底某猪场患黄(白)痢表现严重腹泻症状的哺乳仔猪直肠中致病性大肠杆菌，用于菌苗的制造。
1.1.2 试验动物
45头妊娠母猪和458头哺乳仔猪(26日龄左右断奶)，由娄底某大型养猪场提供;体重为20g左右的15只小白鼠由本校实验室提供。
1.1.3 培养基
本试验采用麦康凯琼脂培养基、普通琼脂培养基、血液琼脂培养基等，配方参照《分子克隆(第三版)》。
1.2 方法
1.2.1 菌株采集
对表现严重腹泻症状的哺乳仔猪在直肠内用灭菌棉签采集病料，接种于普通琼脂糖培养基上，37℃培养24h后，挑取表面隆起、圆形、湿润的粉红色菌落接种到血液琼脂培养基上，37℃培养24h后观察菌落形态及溶血等特征，挑取较好的菌落涂片后用革兰氏染色镜检，初步确认为大肠杆菌，再接种于胰蛋白酶黄豆琼脂斜面培养基上，37℃培养24h，作为制苗用菌种。4℃冰箱保存。
1.2.2 自家灭活苗的制备
将制苗用菌种接种于肉汤培养基中，37℃振荡培养24h，在培养4h以后每间隔2h测定一次p H值，并不断调整pH至7.6,24h后按培养液的0.5%加入无菌葡萄糖液。边轻轻振荡边滴加福尔马林，使其终浓度为0.3%,37℃灭活。然后进行无菌检验，观察有无细菌生长。无任何细菌生长才是合格菌。将安全合格的菌液按10mg/mL先加入灭菌氢氧化铝胶，再加入0.1g/L的柳硫汞，充分摇匀后用已灭菌的玻璃瓶分装，即制成猪大肠杆菌自家灭活苗，可用于实验，或4℃冰箱保存。
1.2.3 自家灭活苗安全性检验
10只小白鼠作为实验组，每5只为一组，每只腹腔注射灭活苗0.2mL;5只健康小白鼠作为对照组。连续观察7d～14d，如3组小白鼠均无异常反应，则证明疫苗安全性检验合格。
1.2.4 自家灭活苗效力临床检验
选用同一饲养条件下孕期60d前未接种仔猪黄白痢菌苗的临床健康母猪45头进行预防试验，随机分为三组，每组15头，两组分别用自家灭活苗和外购大肠杆菌苗进行预防，另一组为未免疫空白对照组。自家灭活苗预防组分别于产前28d和14d肌肉注射自家灭活苗5mL，仔猪在7日龄每头腹腔注射自家灭活苗2mL;外购苗预防组同样在产前28d和14d各肌肉注射外购苗5mL，所产仔猪7日龄每头腹腔注射外购苗2mL。对照组不进行免疫接种。
2 结果
2.1 细菌形态和培养特性
从发病仔猪分离出的大肠杆菌菌株，在麦康凯琼脂培养基上生长出边缘整齐、表面光滑湿润、稍隆起、直径在1.5～2mm之间的粉红色的圆形菌落;且在营养琼脂培养基上形成表面光滑湿润、半透明的灰白色圆形菌落，证明可能是大肠杆菌。
通过分离菌株、涂片、革兰氏染色，镜检后见有粗短、两端钝圆的杆菌，其长约1～3μm，宽约0.4～0.7μm，且呈单个散开，个别成双排列。镜检中未发现芽孢和革兰氏阴性菌，符合大肠杆菌的典型形态特征。
2.2 自家灭活苗安全性检验结果
用自制的大肠杆菌灭活苗接种小白鼠，连续观察10～14d，小白鼠均无异常反应和死亡。
2.3 自家灭活苗效力的临床试验结果
通过菌苗效力临床试验观察哺乳仔猪腹泻发病率和死亡率，记录每组母猪产下的哺乳仔猪腹泻发病率和死亡率。见表1。
从表中可知，自家灭活苗预防组仔猪腹泻发病率为5.80%，外购菌苗预防组为23.02%，对照组为46.71%，表明大肠杆菌自家灭活苗对仔猪腹泻有明显的预防效果。从死亡情况上看，自家灭活苗预防组致死率为11.11%，外购菌苗预防组致病率为17.14%、对照组致死率为21.13%。由此可见，使用大肠杆菌自家灭活苗可以显著降低仔猪大肠杆菌性腹泻发病率，提高仔猪成活率，显著降低治疗费用。
3 讨论
3.1我国各地分离的致病性大肠杆菌优势血清型种类差异较大，不同养猪场的血清型差异也很大，在不同血清型之间的抗原交叉保护性较弱，用标准菌株制造的菌苗得不到预期理想的预防效果。因此，用湘中丘陵区本地猪场分离的菌株，制备相应的佐剂灭活菌苗，菌苗针对性强，安全性好，预防猪大肠杆菌病效果好。
3.2大肠杆菌是条件性致病菌，防制该病的关键是要以预防为主，平时要加强母猪饲养管理，搞好环境卫生，提高仔猪抗病能力，定期消毒，消除各种发病诱因。
摘要：为研究大肠杆菌自家灭活苗的效果,选用从湘中丘陵区某中小型养猪场发病仔猪分离到的致病性大肠杆菌进行培养,制成猪大肠杆菌自家灭活苗,妊娠母猪于产前28d和14d各肌肉注射自家灭活苗5mL,所产仔猪于7日龄腹腔注射自家灭活苗2mL。试验结果证明,该灭活苗对仔猪黄白痢有较好的预防作用。
关键词：大肠杆菌,仔猪黄白痢,自家灭活苗
参考文献
[1]斯特劳.猪病学(第八版)[M].北京:中国农业大学出版社,2009:445~483.
[2]王多福,魏玉明,冯国廷.仔猪大肠肝菌灭活苗的研制及效果观察[J].中国动物检疫,2000,17(5):29~30.
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三价灭活苗 篇4
1 材料与方法
1.1 材料
样品来自太谷某规模化鸡场，无菌分离培养后由太谷县畜牧兽医中心分离鉴定为大肠杆菌，抗原血清型分别是O2和O78[3];麦康凯琼脂和营养肉汤，由杭州天和微生物试剂有限公司生产;10号白油，广州市衡发化工有限公司生产;司班-80、吐温-80，武汉市洪山中南化工试剂有限公司生产;硬脂酸铝，由天津市天大化工实验厂生产;JY98-IIIDN型超声波细胞粉碎机，宁波新艺超声设备有限公司生产;胶体磨，由沈阳市双环机械厂生产;健康试验鸡由太谷某种鸡场提供;小白鼠购自山西医科大学动物实验中心。
1.2 方法
1.2.1 致病性试验：
将鉴定后的菌株肉汤培养物，分别接种成年小白鼠，每株接种10只，腹腔注射0.5 mL/只。10只成年小白鼠注射无菌生理盐水作对照，隔离饲养观察，选择全部致死小白鼠的大肠埃希氏菌菌株为该场致病菌株。
1.2.2 菌株的扩大培养与稀释：
将分离的菌株接种于麦康凯琼脂，挑选典型菌落接种于普通肉汤，37℃培养24h，经菌落计数，测定其含菌数为6.8×1012个/mL，用灭菌生理盐水将菌液稀释至6.8×1010个/mL。
1.3 大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的制备
1.3.1 水相制备:
将以上制苗用的大肠杆菌肉汤培养物用超声波细胞粉碎机充分破碎，无菌条件下加热到37℃，然后加入4%的吐温-80，搅拌使其充分溶解，并加入浓度为0.4%的甲醛溶液37℃灭活48 h，每3 h振摇1次。经灭活检查合格，即为制苗水相[4]。
1.3.2 油相制备：
取10号白油92份、司班-80 6份、硬脂酸铝2份。配制时先取少量白油与硬脂酸铝混合，加热溶解，再与全量司班-80及白油混合均匀，116℃灭菌30 min备用[5]。
1.3.4 菌苗配制：
取灭活菌液与油相按1∶2比例混合，搅匀。搅拌时先将油相加入胶体磨进料漏斗中，以油相2份缓慢加入1份水相，然后再加入硫柳汞使最终浓度为0.01%，转动搅拌维持5 min[5]。
1.4 油乳剂灭活疫苗质量的检测
1.4.1 疫苗的无菌检验:
取适量灭活苗，均匀涂布于普通琼脂和麦康凯琼脂平板上，37℃培养48 h，观察培养情况。
1.4.2 疫苗物理性状的检测：
(1) 眼观检验在4℃下观察灭活苗颜色; (2) 稳定性检测：将疫苗置离心管中，3 000 r/min离心10 min，观察有无分层或破乳; (3) 乳化情况检验用滴管取灭活苗少许，滴于冷水表面，观察其扩散情况。
1.4.3 安全性检查：
取10只成年小白鼠，于背部皮下分别注射菌苗0.5 mL/只;取7日龄非免疫健康鸡10只，于颈部皮下分别注射菌苗0.5 mL/只;同时设灭菌生理盐水对照组各10只，观察96 h内生长情况。
1.4.4 灭活苗免疫剂量试验:
选100只10日龄非免疫健康鸡分为免疫1组、2组、3组、阴性对照组、阳性对照组，每组20只。免疫1组、2组、3组分别接种0.3、0.6、0.9 mL灭活苗，阴性对照组、阳性对照组经背部皮下每只注射0.5 mL灭菌生理盐水和肉汤培养物，接种后第14 d所有组用上述强毒每只100亿个攻击, 阴性对照组经背部皮下每只注射0.5 m L灭菌生理盐水，观察96 h。
2 结果
2.1 致病性实验
分离菌株接种实验动物后，发现小白鼠于注射后精神萎靡，24 h内死亡17只。对死亡小白鼠解剖观察发现心脏出血、淤血, 肝、脾出血坏死，肠壁变薄，有出血点。取其病料抹片染色镜检及分离培养均为大肠杆菌。
2.2 油乳剂灭活疫苗的质量检测
2.2.1 疫苗的无菌检验：
将上述疫苗接种于两种培养基后，37℃培养48 h均无细菌生长。
2.2.2 疫苗的物理性状：
所配制的灭活疫苗外观呈乳白色，滴于蒸馏水表面，不向四周扩散，油包水型为稳定的乳白色体;疫苗经3 000 r/min离心10min后，无分层、破乳的情况。
2.2.3 疫苗的安全性：
试验小白鼠和实验鸡分别经背部皮下、颈部皮下分别注射菌苗0.5 mL/只，观察96 h均无不良反应，剖检其注射部位也无异常，说明该剂量的油乳剂疫苗对试验小白鼠是安全的[6]。
2.3.4 免疫效力试验：
阳性对照组于24后死亡17只，48 h全部死亡，免疫一组于48 h内死亡13只，阴性对照组有1只死亡，结果详见表1。结果表明，接种0.6 mL以上疫苗具有免疫保护作用。
3 小结与讨论
3.1 试验研制的鸡大肠杆菌灭活疫苗，免疫后7 d可产生坚强的免疫力，免疫保护期为4～5个月以上，产生坚强的血清抗体时间早，血清循环抗体高且维持时间长，免疫保护期长。
3.2 大肠杆菌致病性血清型较多，且不同血清型间缺乏交叉保护，从该区分离的大肠杆菌制备的灭活苗用于另一地区其免疫效果可能就差。还因灭活方法和佐剂的不同而异，一般认为超声灭活多价油苗较好。另外，雏鸡在2周龄内，由于免疫系统尚未健全，其保护力主要来源于经卵黄获得的母源抗体，故产蛋母鸡的免疫不容忽视。雏鸡首次免疫宜在3周龄左右, 待20周龄左右再强化免疫1次。免疫效力试验中，免疫组和阴性对照组死亡1只，原因可能是个体差异造成[7,8]。
3.3 自家苗由于制备的质量良莠不齐，不能过分的依赖[9]。加强饲养管理、消毒等各项工作，减少大肠杆菌病的发生，保证健康养殖和绿色养殖。
摘要：从太谷某鸡场分离到疑似鸡大肠杆菌2株, 经分离培养鉴定确认为大肠杆菌, 血清型分别是O2和O78, 将分离菌株经过致病性试验、增菌培养, 制备了大肠杆菌灭活苗, 经试验证明, 本疫苗安全、有效。每只鸡免疫接种0.6mL以上临床无不良反应, 对地方性鸡大肠杆菌病有较好的预防作用。
关键词：大肠杆菌,油乳剂灭活苗,鸡
参考文献
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[4]薛俊龙, 王采先, 詹丽娥, 等.两种物理方法破碎大肠杆菌比较试验.山西农业科学, 2005, 33 (4) :77-78.
[5]吕建存, 李清艳, 刘荣欣.鸡肠杆菌多价灭活油乳疫苗的研制.四川畜牧兽医, 2004 (6) :31-33.
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[8]王双山, 欧阳素贞.豫北地区肉鸡大肠杆菌分离鉴定及其蜂胶灭活苗的研究.中国预防兽医学报, 2006, 28 (3) :351-355.
三价灭活苗 篇5
1 临床症状和病理变化
来宾市合山某肉鸡个体户覃某养殖场三个鸡舍分别育有10日龄、25日龄、50日龄大黄鸡各7 000羽, 2013年12月中旬, 其25日龄鸡舍鸡群出现异常症状, 鸡群发病率为70%。主述:病鸡出现精神沉郁、张口呼吸、呼吸困难、咳嗽、气管啰音、不食、拉绿色稀粪、口鼻有黄色带泡沫的黏液等病症, 剖检发现病鸡腹腔内有白色胶动样渗出物, 且多脏器病变, 畜主当即用多种抗生素混合拌料饲喂, 但病情有加重趋势, 故而送检。
笔者视检病鸡羽毛蓬松、翅膀下垂、肉髯乌黑、昏睡、怕冷。经剖检, 病变有:死鸡喉头、气管和支气管黏膜肿胀、充血、出血;喉头、气管可见带血的黏性分泌物或条状血凝块, 鼻腔有大量带血黏液, 肺出血、瘀血。
2 诊断
根据养殖户口述的症状, 通过流行病学特征、临床症状和剖检病理病变, 可初步诊断为鸡传染性支气管炎。
3 治疗措施
3.1 立即对病鸡进行分群隔离, 降低饲养密度, 加强饲养管理, 鸡舍保温通风、清换垫料, 做好防潮保温, 同时定期消毒。
3.2 自家灭活苗的制备及应用
养殖户要求使用自家苗作全群免疫。应要求, 笔者为其配制自家灭活苗, 并按相应程序为鸡群免疫。
无菌采集病鸡病变典型的肺、肾等组织器官, 用无菌剪刀剪碎, 按1:5的比例加入PBS, 然后放入组织搅碎机中匀成稀泥状, 置入冰箱反复冻融3次, 用纱布边过滤边搅拌悬液, 不断过滤滤液3次。最后收集滤液加入0.3%的甲醛, 混匀, 在37℃灭活24 h, 每2 h振荡1次, 以充分灭活。灭活后, 取液体分别接种血液和肉汤培养基进行无菌检验;取液体接种SPF鸡胚3枚进行安全检查均合格, 加入佐剂氢氧化铝胶充分混匀, 使其终浓度为20%, 分装到灭菌的玻璃瓶中, 封存好, 4℃保存。
取此灭活苗注射10只未免疫健康鸡, 3只注射生理盐水作对照, 7只肌肉注射1 m L疫苗液, 观察10 d, 无过敏, 无发病等症状出现。
对于发病鸡紧急免疫自家苗, 同时配合抗菌药物和多种维生素进行治疗, 强力霉素10~15 mg/ (kg体重) 双黄连口服液、喉毒清按0.2%比例饮水, 同时补充多种维生素, 连用5 d。
应用此灭活苗于此鸡场进行免疫注射, 10~15日龄进行首免, 肌注0.5 m L/只, 45日龄后进行2免, 肌注1 m L/只。
4 结果
经过以上措施, 鸡群的疫病得到了控制。7 d后鸡群无疑似本病症状鸡出现, 鸡群采食、精神状况、生长发育情况良好。至鸡群二免15 d后回访, 养殖户称鸡群生产已恢复, 疫病已经消除。应用此自家灭活苗免疫后, 此鸡场至今再未发生鸡传染性支气管炎。
5 体会
现已报道的鸡传染性支气管炎有30多个血清型传, 血清型之间经常缺乏交叉保护或交叉保护性不强, 因此可以使用自制灭活苗进行免疫, 可以获得较好的保护力。在实际工作中应用自家灭活疫苗防制肉鸡传染性支气管炎曾有过报道, 天津的王文彪在蛋鸡场暴发传染性支气管炎时采用自制灭活苗, 同时配合抗菌药物和多种维生素进行治疗, 结果取得了良好的治疗效果。也有研究发现, 用本地分离出毒株致弱后制成的疫苗进行免疫治疗, 免疫效果更加理想。但在文献上鲜有报道, 本次病例中应用自家灭活疫苗结合化学药物联合治疗取得很好效果, 具有一定参考价值。
参考文献
[1]王文彪.肾型传染性支气管炎及组织灭活油苗效果观察.中国家禽, 1994 (04) :7-8.
三价灭活苗 篇6
目前徐州地区养猪业普遍使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗和猪O型口蹄疫高效灭活苗两种疫苗进行常年防疫。猪O型口蹄疫合成肽疫苗是以人工合成肽为抗原的口蹄疫合成肽疫苗, 不含感染因子, 具有较高的生物安全性, 抗原为纯化的中和性抗原多肽, 无杂质干扰, 具有免疫的高效性, 并且该疫苗不含任何多肽以外的异体蛋白, 该苗具有较好的免疫原性, 免疫副反应较小;猪O型口蹄疫灭活苗是采用细胞培养法对病毒进行培养, 然后是用灭活剂灭活病毒, 加油佐剂混合乳化而成, 但灭活苗免疫后常出现食欲减退、体温升高等不良反应, 免疫效价持续时间不长。
本次试验采用徐州市鼓楼区赵某猪场, 应用猪口蹄疫O型合成肽疫苗、猪口蹄疫O型灭活疫苗进行免疫试验。通过观察猪群免疫后临床反应和测定免疫前和首次免疫后14d、28d及二次免疫后7d、14d、28d、60d抗体效价水平, 对猪口蹄疫O型合成肽疫苗及猪口蹄疫O型普通灭活疫苗免疫猪群后的免疫原性、安全性、以及抗体水平和变化规律进行比较, 为我市疫苗选购提供依据。
1 材料和方法
1.1 试验动物
选择徐州市鼓楼区赵某猪场相同待生产日期、生产性能相近的5头母猪, 对其生产的仔猪按其免疫程序进行初免、二免。对每一头仔猪唯一编号。并在徐州市鼓楼区、泉山区等地选择了中小规模的猪场的不同类型的免疫
1.2 试验疫苗
猪O型口蹄疫灭活浓缩苗 (206佐剂) , 猪合成肽O型口蹄疫苗。 (生产厂家或批号略)
1.3 检测试剂盒
O型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒 (批号2011101701中国农科院兰州兽医研究所) , 口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒。 (上海优耐特生物医药有限公司20101206)
2 方法
2.1 分组
在鼓楼区赵某猪场试验的每头母猪所生的仔猪归为一组, 一共是5组。3组做合成肽疫苗免疫组, 另2组设灭活疫苗免疫组。
2.2 免疫时间和剂量
口蹄疫40日龄首免, 90日龄二次免疫;采用推荐剂量, 由场兽医实施免疫, 其它疫苗按常规免疫程序进行。
2.3 血样采集
首先测定种猪的抗体水平和所产仔猪的母源抗体水平。在首次免疫后3周、4周采血, 之后分别在二免后2周、5周、9周、12周采集血样, 以后每隔4周采血一次, 直至上市前一周。
2.4 检测方法
按试剂盒说明书进行。
3 结果
3.1 判定标准
按照农业部《2008年高致病性禽流感和口蹄疫等主要动物疫病免疫方案》 (农医发[2008]5号) 进行, 猪O型抗体液相阻断ELISA的抗体效价≥26判为合格, VP1结构蛋白抗体ELISA的抗体效价≥25判为合格。
3.2 检测结果
(1) 用猪口蹄疫VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂对两种疫苗免疫后的血清进行检测, 从表1可以看出, 合成肽疫苗首免后3周平均抗体水平较高, 且抗体平均合格率达80%以上, 二免2周后抗体一直维持在较高水平, 且合格率达100%。
(注:本次试验阳性的OD值判定界定为>0.35)
(2) 用液相阻断ELISA试剂盒对灭活浓缩疫苗免疫后的血清进行检测, 由表2可以看出, 首免后3周抗体水平仍处于较低水平且抗体合格率也较低, 二免2周后抗体水平升高, 但抗体水平及检测的抗体合格率并不是很理想。
(注:抗体效价≥64, 判为抗体阳性)
(3) 随机挑选出5份经合成肽疫苗二免后血清, 按不同稀释度进行检测, 平均稀释度可达到1:2048。
(4) 不同地区的试验结果参考:
鼓楼区、云龙区、开发区、泉山区分别在本区域的规模场内做了口蹄疫免疫的有关试验, 经我站检测的结果见表3。
4 小结和分析
4.1 从本次试验数据看出, 合成肽疫苗一免后, 试验猪体内很快产生较高抗体, 二免后抗体合格率长时间维持在高水平, 合成肽组在同等条件下免疫合格率高于206浓缩苗组。而206浓缩苗抗体水平反应迟缓且较低, 表明猪O型口蹄疫合成肽疫苗较灭活疫苗抗体水平上升快, 免疫持续期长。
4.2 不同地区随机采样检测, 合成肽免疫效果高于浓缩苗免疫。由表3可以看出用合成肽苗免疫4周后抗体合格率均达到了80%以上, 而由浓缩苗免疫二免4周后抗体水平未达80%, 这也与我们上面试验结果一致。
三价灭活苗 篇7
关键词：猪O型口蹄疫,高效灭活苗,普通灭活苗,免疫程序,免疫效果
每年进行的春秋两季重大动物疫病防控工作, 国家、省、市、县都要投入大量的人力、物力、财力进行抽样检测, 评估重大动物疫病免疫抗体水平, 其中猪O型口蹄疫抗体水平是必检之一, 农业部规定免疫抗体合格率达70%以上为合格。当前预防猪口蹄疫的常用疫苗主要为灭活油乳剂疫苗, 还有弱毒疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗等新型疫苗。本试验比较的是猪O型口蹄疫高效灭活苗和政府招标的普通灭活苗的免疫效果, 目前市场上普遍反应猪O型口蹄疫高效灭活苗比普通灭活苗免疫效果好、抗体滴度高, 为了让广大疫苗使用者对猪O型口蹄疫高效灭活苗和普通灭活苗有一个正确的认识, 探求猪O型口蹄疫高效灭活疫苗与政府招标普通灭活疫苗的免疫效果是否存在差异、寻求合理的免疫程序, 展开本次试验。
1 材料与方法
1.1 试验动物
试验于2015年4~10月在冷水江市和双峰县两个规模猪场进行。选择饲养管理条件好的初生日龄接近48 h的健康仔猪各35头。
1.2 供试疫苗
试验采用的猪O型口蹄疫高效灭活苗分别由A、B公司生产 (批号:1410003、H150207J) , 政府招标的猪O型口蹄疫普通灭活苗由B公司生产 (批号:H141058J) 。
1.3 检测试剂
O型口蹄疫病毒结构蛋白抗体检测试剂盒购自兰州兽医研究所 (批号:20150912009-4, 抗原批号:15080401) 。
1.4 操作方法和判定标准
GB/T18935-2003, O型口蹄疫病毒采用酶联免疫吸附实验。
1.5 试验方法
1.5.1 试验分组。
按试验要求随机分成10组, 即冷水江某猪场使用A公司高效苗, 即A1高效苗减量组、A2高效苗微量组、A3高效苗微量3免组、A4政府招标苗推荐免疫程序组、A5政府招标苗三免组, 双峰某猪场使用B公司高效苗, 即B1高效苗减量组、B2高效苗微量组、B3高效苗微量3免组、B4政府招标苗推荐免疫程序组、B5政府招标苗三免组。免疫程序和免疫剂量见表1。
1.5.2 采血日龄。
分别于50、80、110、200日龄采血, 每次采血2m L, 采集后凝固分离血清并冷冻保存, 等全部血样采集完成后一并检测。
1.6数据分析
数据采用SAS3.0.1软件进行单因素方差分析。
2试验结果
2.1减量组与招标苗全量免疫组抗体效价比较
A、B公司高效苗减量组与政府招标苗全量免疫组抗体效价比较, 见表2、表3。
由表2可以看出, A公司高效苗A1组 (初免1m L、加强2m L) 与政府苗招标苗A4组 (初免2m L、加强2m L) 比较, 在初免1个月、加强1个月和200日龄平均抗体水平差异不显著 (P>0.05) 。由表3可以看出, B公司高效苗B1组 (初免1m L、加强2m L) 与政府招标苗B4组 (初免2m L、加强2m L) 比较, 在初免1个月时差异显著 (P<0.05) 。高效苗1m L比政府苗2m L免疫抗体水平低, 加强后免疫抗体差异不显著。
2.2微量组与招标苗全量组抗体效价比较
由表4、5可以看出, A、B公司生产的高效苗初免0.5m L, 加强1m L达不到免疫保护效果。高效苗加强后30天及200日龄与政府招标苗推荐免疫程序比较, 差异显著或极显著 (P<0.01) 。
2.3高效苗微量三免组与政府苗全量三免组抗体比较比较结果见表6、表7。
由表6、表7可以看出, 高效苗微量三免组 (0.5m L, 1 m L, 1 m L) 难以达到免疫保护效果, 政府招标苗全量三免组 (2 m L, 2 m L, 2 m L) 在加强免疫后免疫抗体水平与高效苗微量三免组 (0.5 m L, 1 m L, 1 m L) 差异极显著 (P<0.01) 。
政府招标苗在50日龄初免 (剂量2m L) 、65日龄加强 (剂量2m L) 、80日龄三免 (剂量2 m L) 在110日龄至200日龄, 免疫抗体水平高, 能达到群体免疫保护水平。
3结果分析
3.1减少免疫剂量, 影响免疫效果。无论是高效苗还是政府招标苗, 减少免疫剂量后按规定程序免疫, 与按规定免疫剂量、规定免疫程序免疫, 免疫抗体合格率差异显著。因此, 做好疫苗免疫必须严格遵守技术要求, 才能确保免疫效果[1]。
3.2无论高效苗还是政府招标苗间隔半个月进行加强免疫和三免, 免疫抗体合格率与间隔1个月进行加强免疫的免疫抗体水平在110日龄时差异显著, 尽管进行了三重免疫, 其抗体水平不如按规定程序和规定剂量加强免疫。说明间隔半个月进行二免, 存在免疫抑制作用, 所以并未达到预期的免疫效果, 试验证实间隔一个月二免免疫效果好于间隔半个月进行二免。
3.3高效苗与政府招标苗的免疫效果 (免疫原性) 差异不显著。本试验政府招标苗50日龄初免、65日龄加强、80日龄三免, 从110日龄到200日龄免疫抗体效价高。从本实验可以看出, 经过二免、三免后抗体合格率明显提高, 这与朱中武[2]、陈才[3]等报道基本一致, 证实口蹄疫灭活苗至少进行二免后才能起到较好的抗体保护效果, 三免后抗体保护力可直至猪出栏。
3.4由于试验未排除试验猪场基础疫病、母源抗体、个体差异、免疫应激等多因素影响, 试验结果可能存在一定的偏差。
参考文献
[1]林章辉.提高猪口蹄疫免疫效果的技术要点[J].福建畜牧兽医, 2011, 33 (2) :51-52.
[2]朱中武, 鲁杏华, 吕晓星, 等.集约化养猪场口蹄疫免疫程序探讨[J].中国兽医杂志, 2008, 44 (6) :34-35.