二联三价灭活疫苗

二联三价灭活疫苗（精选4篇）

二联三价灭活疫苗 篇1

摘要：本研究旨在通过将不同种免疫增强剂与正常抗原含量及减量抗原含量的新城疫 (La Sota株) , 禽流感 (H5N1亚型Re-6株、Re-7株) 5倍浓缩抗原按一定比例混合, 制备成新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗, 分别免疫SPF鸡。同时用不加免疫增强剂的新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗免疫SPF鸡作为对照组。结果表明, 通过监测鸡免疫后不同天数的血清抗体水平, 经方差分析得知, 相比于对照组的抗体水平, 其中添加有囊素多肽、黄芪多糖、灰树花多糖的疫苗免疫鸡后产生的抗体水平均呈显著提高, 而香菇多糖与猪苓多糖则与对照组无显著性差异。结果提示, 在抗原含量正常或减量的情况下, 囊素多肽、黄芪多糖、灰树花多糖能起到抗体增强的效果, 使其达到既能增强抗体又能降低成本的实用效果。

关键词：免疫增强剂,新城疫-禽流感,二联三价灭活疫苗,抗体滴度

新城疫 (Newcastle disease, ND) 和禽流感 (Avian influenza) 是危害禽类的重大疾病, 其病原分别是新城疫病毒和禽流感病毒, 都属于高度接触性传染病, 给世界养禽业造成了巨大的经济损失[1,2,3]。目前, 新城疫和禽流感的预防主要是接种疫苗[4,5], 鸡新城疫疫苗主要有弱毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、基因工程苗[6,7], 而弱毒疫苗为目前市场上最常见的疫苗。禽流感现阶段常见的疫苗为全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组活载体疫苗[8,9]。虽然使用常规疫苗免疫接种可以防制新城疫、禽流感, 但在实际情况下常规单苗存在免疫繁琐、免疫效果不尽理想、成本高等缺点, 针对市场的需求, 进而研制出既节约成本又增强免疫效果的免疫增强剂。

免疫增强剂即广义上的佐剂, 都是通过调动免疫系统的功能, 提高机体的病原微生物的特异性反应来发挥其作用, 是治疗和预防疾病的重要物质, 特别是对疫苗发挥保护性作用起独特的效果, 能有效影响免疫反应的质量 (型的控制、局部免疫以及细胞类型的控制) , 稳定、便宜而且容易生产和保存[10,11]。本研究所用到的多种免疫增强剂, 涉及小分子多肽类、多糖类等免疫增强剂能显著提高机体免疫系统功能, 增强疫苗的免疫效果, 减少疾病发生[12,13]。探讨各种免疫增强剂对鸡体感染新城疫, 禽流感的免疫调节作用, 为应对新城疫、禽流感能够达到更加理想的免疫预防奠定了理论依据。

1 材料与方法

1.1抗原及试验动物抗原由乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂提供, 包括新城疫 (La Sota株) 5倍浓缩抗原HA为11 log2, 禽流感Re-7株5倍浓缩抗原HA为10 log2, 禽流感Re-6株5倍浓缩抗原HA为10 log2。125只SPF鸡 (28日龄) 均由乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂动物房SPF种蛋孵化。

1.2 主要试剂及仪器 囊素三肽购自上海淘普生物科技有限公司。黄芪多糖、香菇多糖、猪苓多糖、灰树花多糖均购自浙江方格药业有限公司。注射用白油由法国MARCOL52注射白油提供。硬脂酸铝购自上海远航试剂厂。司本-80和吐温-80均购自广东省肇庆市超能实业有限公司。无菌检验培养基由乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂提供。台式微型剪切机T-18型购自德国IKA公。LS900激光颗粒粒度分析仪购自青岛欧美克公司。八道移液器购自德国艾本德公司。

1.3 水相的制备 (1) 将1组事先配制好的囊素三肽溶液加入事先配置好的水相中;使浓度达到每1 000 m L疫苗中含囊素三肽10 mg, 囊素三肽含量达到1%。 (2) 将2组黄芪多糖、3 组灰树花多糖、4 组香菇多糖、5组猪苓多糖原粉按一定比例溶于注射用水中制成相对应的黄芪多糖、灰树花多糖、香菇多糖、猪苓多糖溶液加入事先配置好的水相中, 使其浓度达到疫苗总量的3%。

1.4 油相的制备将注射用白油、司苯-80、硬脂酸铝按一定比例经高压灭菌混匀制成油相。

1.5 乳化将配制好的油相先与含有囊素三肽的水相用德国IKAT18型高速剪切机先进行预乳化, 待将水相加入完全后, 按一定转速、时间乳化结束, 分装于100 m L瓶中备用动物试验。分别将预先配置好的含有黄芪多糖的水相、灰树花多糖水相、猪苓多糖水相、香菇多糖水相溶液经高压灭菌后按一定比例加入5 倍浓缩灭活抗原充分混匀后, 缓缓加入油相, 用德国IKAT18型高速剪切机预乳, 待将水相加入后, 按一定转速, 时间乳化结束, 分装于100 m L瓶中备用动物试验。

1.6 剂剂型型取1清洁吸管, 吸取少量疫苗滴于冷水中, 应呈油滴状不扩散。

1.7 稳定性 取10 mL疫苗于离心管中, 经3500 r/min离心15 min, 应不出现分层现象;疫苗在37 ℃左右条件, 放置21 d不应有破乳现象。

1.8黏度用下口内径为1.2 mm、上口内径为2.7 mm的1 mL移液吸管在25 ℃左右的条件下吸取疫苗1 mL, 令其垂直流出, 记录流出0.4 mL所需的时间。

1.9 颗粒度取5 μL疫苗混匀于10 mL白油中, 置于LS900激光粒度分析仪中检测。

1.10 无菌检验疫苗抽样, 分别取硫乙醇酸盐培养基2支, 琼脂培养基2支, 葡萄糖培养基1支, 每支接种疫苗0.2 mL分别放置于37 ℃、25 ℃培养箱中做无菌检验。

1.11 效力检验28 日龄SPF鸡125 只分为12 组, 每组10 只;第1~5 组免疫添加含免疫增强剂及含有正常抗原含量的新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗0.3 mL;第6 组免疫添加不含免疫增强剂及含有正常抗原含量的新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗0.3 mL;第7~11 组免疫添加含免疫增强剂及含有1/5 正常抗原含量的新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗0.3 mL;第12组免疫添加不含免疫增强剂及含有1/5 正常抗原含量的新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗0.3 mL;另取5 只作为空白对照。分别在免疫后的第14、21、28 天采血收集血清, 检测抗体, 经spss对各个数据的方差分析统计。

2 结果

2.1 检验结果

2.1.1疫苗物理性状及无菌检验

2.1.2抗体检测结果见表1。

2.2 数据分析

2.2.1 抗原正常含量的情况下 (Re-6 株) 在14 d、21 d时相比于对照组的抗体水平, 黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 囊素多肽组显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在28 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组、灰树花多糖组均极显著提高, 黄芪多糖组显著提高, 香菇多糖组、猪苓多糖组均与对照组无显著性差异。

2.2.2 抗原含量为正常含量1/5 的情况下 (Re-6 株) 在14 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组, 黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在21 d、28 d时相比于对照组的抗体水平, 黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 囊素多肽组显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。

注:显著性水平α=0.05, *表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) 。

注:显著性水平α=0.05, *表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) 。

2.2.3 在抗原正常含量的情况下 (Re-7株) 在14 d时相比于对照组的抗体水平, 黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 囊素多肽组显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在21 d时相比于对照组的抗体水平, 黄芪多糖极显著提高, 囊素多肽组与灰树花多糖组均显著提高, 而香菇多糖与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在28 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组、黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。

注:显著性水平α=0.05, *表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) 。

2.2.4在抗原含量为正常含量1/5的情况下 (Re-7株) 在14 d、21 d时相比于对照组的抗体水平, 黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 囊素多肽组显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在28 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组与黄芪多糖组均显著提高, 灰树花多糖组显著提高, 香菇多糖组与猪苓多糖均无显著提高。

2.2.5在抗原正常含量的情况下 (La Sota株) 在14 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组、黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 而香菇多糖与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在21 d时相比于对照组的抗体水平, 灰树花多糖组极显著提高, 囊素多肽组与黄芪多糖组显著提高, 香菇多糖组与猪苓多糖组均无显著提高;在28 d时囊素多肽组、黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。

2.2.6在抗原含量为正常含量1/5的情况下 (La Sota株) 在14 d、21 d时相比于对照组的抗体水平, 囊素多肽组、黄芪多糖组与灰树花多糖组均极显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。在28 d时囊素多肽组、黄芪多糖组、灰树花多糖组、香菇多糖组与猪苓多糖组均无显著提高。

3讨论

疫苗物理性状方面, 囊素三肽组疫苗的颜色无改变, 呈乳白色, 无分层现象, 黏度、颗粒度也和普通疫苗无明显差异, 但黄芪多糖、灰树花多糖、香菇多糖、猪苓多糖组疫苗颜色均有不同程度的改变, 黏度、颗粒度也有不同程度的增加, 并且在高速离心后稳定性不理想, 并且伴有沉淀析出。

相比于对照组的抗体水平, 在抗原含量正常情况下, 其中, 添加有囊素多肽、黄芪多糖、灰树花多糖的疫苗免疫鸡后产生的抗体水平均呈显著提高, 而香菇多糖组与猪苓多糖组则与对照组无显著性差异。且在抗原含量减量的情况下其中添加有囊素多肽、黄芪多糖、灰树花多糖的疫苗免疫鸡后产生的抗体水平相比于添加香菇多糖、猪苓多糖及未添加免疫增强剂的抗体水平呈显著提高, 使其达到既能增强抗体又能降低成本的实用效果。

综合以上疫苗物理性状与抗体水平的分析结果来看, 囊素三肽比较适合做新城疫-禽流感二联三价灭活疫苗的免疫增强剂。

二联三价灭活疫苗 篇2

1 提高菌种的抗原性

1.1 菌种标准

1.1.1 形态和生化特性

菌株应具有大肠埃希菌的典型形态和生化特性。为革兰阴性无芽孢的直杆菌, 大小0.4～0.7μm×2～3μm, 两端钝圆, 散在。本菌为需氧菌, 在普通培养基上生长良好, 最适生长温度为37℃, 最适生长pH值为7.2～7.4。

1.1.2 培养特性

接种适宜改良Minca琼脂平板上, 在36～37℃培养20 h, 菌落光滑圆整。在改良Minca汤中, 36～37℃培养20 h, 呈均匀混浊, 用相应的K88、K99、987P因子血清做平板凝集反应, 应达到强阳性反应。

1.1.3 血清学特性

用O抗原定型血清和K88、K99、987P因子血清对菌株进行血清型鉴定, 均应符合菌株的抗原结构。C83549为O149:K88ac、C83644为O68:K99、C83710为O9:987P、C83902为O8:K88ac、C83912为O-:K99、C83917为O9:987P。

1.2 菌种的选择

一级菌种的选择:用低倍镜选取光滑圆整单个菌落, 然后做凝集试验, 达到++++单个菌落, 作为一级菌种。

二级菌种的选择:一级菌种划斜面进行培养, 将斜面做凝集试验, 达到++++的作为二级菌种备用。

三级菌种的选择:将凝集达到++++的二级菌种接入用改良Minca汤中, 振荡培养, 培养结束做凝集试验, 达到++++的作为三级菌种备用。

2 提高菌液培养的抗原性

2.1 培养温度的选择

由于培养需要的是纤毛, 纤毛必须在37℃、需氧培养时才产生或表达, 而18℃则不产生。因此培养温度应控制在37℃, 上下幅度不超过0.2℃。

2.2 搅拌转速的选择

由于大肠杆菌极易生长, 但是纤毛不易产生或表达, 如果增加搅拌速度, 纤毛产生或表达时同时也在脱落, 然后由新的纤毛产生或表达, 提高了菌液的抗原性。

2.3 原材料的选择

在生产过程发现, 同样的原材料不同的产地, 有不同的凝集效果。如在C83902菌种的培养时发现, 用不同产地的琼脂有自凝现象发生, 作为一个检验用菌种, 是不允许有自凝现象产生的。

2.4 通气量的选择

大肠杆菌在培养初期由于细菌数量较少并且尚未适应培养环境, 细菌几乎不增殖, 因而耗氧量较少, 通气量可以适当小一点。随着发酵时间的增加, 发酵液中的细菌逐渐增多, 代谢增强, 耗氧量增加, 需要加大通气量以提高溶氧量, 满足细菌对氧气的需求。

3 改进结果

通过以上改进方法生产了大肠杆菌病三价灭活疫苗原液, 并对改进前后抗原单位进行了比较, 结果见表1。

4 结语

(1) 试验结果表明, 仔猪大肠杆菌病三价苗的抗原单位大幅度提高, 但是就其中的987P、K88抗原单位与K99相比, 还有很大的提高幅度空间。

二联三价灭活疫苗 篇3

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验用抗原福州大北农生物技术有限公司生产的未浓缩的新城疫抗原、不同浓缩倍数的流感抗原。

1.1.2试验用疫苗鸡新城疫、禽流感(H9N2 HP株)二联灭活疫苗由福州大北农生物技术有限公司用试验抗原乳化而成,批号:SY2015003。

1.1.3试验用鸡21日龄SPF鸡40羽。SPF蛋由济南斯帕法斯家禽有限公司提供,福州大北农生物技术有限公司自行孵化。

1.2试验方法

1.2.1疫苗的制备使用生产中的新城疫和禽流感抗原,新城疫抗原为收获的未浓缩的抗原,禽流感抗原为收获的未浓缩的抗原、进行3倍浓缩的抗原、进行6倍浓缩的抗原。将新城疫抗原与各组禽流感抗原加入4%吐温作为水相,按水相与油相比为1:3的比例,使用试验型高速剪切机,将水相加入油相中进行剪切、乳化制成油包水剂型的单苗,然后将新城疫单苗与各组禽流感单苗等量混合均匀作为不同组的鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗;流感抗原未浓缩的疫苗样品为A组,流感抗原3倍浓缩的疫苗样品为B组,流感抗原6倍浓缩的疫苗样品为C组。

1.2.2试验分组SPF蛋进行孵化,出壳的雏鸡由本公司自行养至21日龄。选择健康有活力的鸡40羽,随机选10羽编为A组,免疫A组疫苗样品;随机选10羽编为B组,免疫B组疫苗样品;随机选10羽编为C组,免疫C组疫苗样品;余10羽编为D组,为空白对照组。并对每羽鸡打上翅标编号,试验鸡在免前、免后均在隔离器内喂养。

1.2.3免疫方法分别将A、B、C组新-流二联灭活疫苗样品免疫21日龄SPF鸡,每羽颈部皮下注射0.3 m L;空白对照组均不免疫。

1.2.4抗体监测各免疫组与对照组均于20日龄(即免前)及免后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫与禽流感抗体。

1.2.5抗体检测方法抗体检测应用红细胞凝集抑制试验的方法,具体步聚:用PBS将待检血清做2倍系列稀释,加入含4HAU血凝素抗原液,并设PBS和4HAU血凝素抗原液对照,充分振摇后,置室温下至少20 min或在2~8℃下40~60 min,再加入1%鸡红细胞悬液,置室温20~40 min或置2~8℃下40~60 min,当红细胞对照孔中的红细胞呈显著钮扣状时判定结果,以使红细胞凝集被完全抑制的血清最高稀释度作为判定终点。

2结果

从新城疫、禽流感抗体监测结果可以看出(见表1、图1-图2),对照组新城疫、禽流感抗体在各日龄均为阴性,免疫组新城疫、禽流感抗体均从免后7 d开始迅速上升,免后21 d上升至峰值,然后开始逐渐下降。由于各免疫组疫苗的新城疫抗原含量一样,所以,免后各时间的抗体基本一致。而不同组的流感抗原含量不一样,免后14 d、21 d的抗体有较大的差别,浓缩倍数越高,两个时间段的抗体值越高;免后28 d及以后,各组流感抗体又非常接近。

3结论与讨论

1)目前市场上对新城疫、禽流感疫苗的免疫效果评价不一,与各厂家疫苗的质量有一定的关系。各厂家疫苗中所含的抗原病毒含量有较大的差异,有的厂家抗原效价低,有的抗原效价高,部分厂家的抗原进行了不同倍数的浓缩。本试验免疫不同浓缩倍数流感抗原制备的疫苗后,抗体水平结果可以反映不同组疫苗免疫效果的确有一定的差别。在郑世兰等[8]的研究中提到,提高单位体积的抗原含量是联苗生产的技术关键,而抗原浓缩是达到此目的的理想办法;在张健等[9]的研究也说明这一点,生产鸡用联苗尤其是生产四联苗,单位体积内抗原含量是关键,而单纯改变疫苗乳化工艺中的油水比例以及通过改变病毒增殖条件均不能达到多联苗生产所需要的抗原含量。因此,寻求一种抗原浓缩的方法使每羽份疫苗中含有足够的抗原,同时使免疫剂量尽量减小,是四联苗生产中的重要一环。还有一些关于不同免疫剂量的免疫效果的研究也同样说明疫苗中抗原病毒含量的重要性,如温志芬等[10]研究结果显示,0.5m L/羽剂量的免疫效果比0.1 m L/羽和0.3 m L/羽剂量的免疫效果好,免疫剂量大表明注射到机体中的抗原含量也相对多,免疫效果更好。

2)新城疫、禽流感抗体的产生与抗原毒价(病毒含量)呈正相关,抗原毒价越高,抗体产生水平越高,持续期长[11]。因此,在生产中提升疫苗中的抗原病毒含量是关键,作为疫苗厂家可以通过不同的方法提升抗原的病毒含量,如通过抗原生产工艺改进来提升抗原的效价、通过抗原的浓缩提升抗原的病毒含量等。本试验结果表明,禽流感早期抗体的产生与抗原的病毒含量呈正相关,在免疫后期抗体趋于一致。

3)目前,禽流感感染禽很大一部分在早期,如一个月内的小鸡,甚至是10日龄左右的雏鸡。而用现有灭活疫苗免疫后,产生抗体较缓慢,不能产生可保护的抗体水平,所以,在小日龄鸡上免疫效果不佳。从本试验结果可以看出,通过浓缩提升抗原病毒含量,免疫后14~21 d的抗体有相应的提升,有更好的免疫效果,但是从生产成本上核算,成本增加了不少,很多厂家难以接受。目前也有很多厂家在寻找更好的方法,如在疫苗中添加免疫增强剂来提升免疫效果,这也是一种很好的方法。赵占民等[12]、陆新浩等[13]在研究中提到,免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质,可增强机体的免疫功能,缓解由环境造成的免疫功能紊乱,有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。

摘要：将未浓缩的新城疫抗原分别与未浓缩的、浓缩3倍、浓缩6倍的禽流感抗原混合,并制备成三组鸡新城疫、禽流感(H9N2 HP株)二联灭活疫苗(简称新-流二联灭活疫苗),分别免疫21日龄SPF鸡,每羽0.3 m L,同时设置未免疫的空白对照组,免疫组与对照组均在免疫前及免疫后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫和禽流感抗体。结果发现,各免疫组在免后不同日龄的新城疫抗体基本一致,禽流感病毒抗原浓缩倍数越高(即禽流感病毒含量越高)的新-流二联灭活疫苗,免后14、21 d的抗体也越高;从免后21 d开始,各免疫组的禽流感抗体水平差异逐渐减小,免疫后禽流感抗体水平的高低可以反映该疫苗的免疫效果。试验结果表明,该疫苗可以通过浓缩提高抗原病毒含量的方法来提高免后早期抗体水平,取得良好的早期免疫效果。

二联三价灭活疫苗 篇4

1 材料及方法

1.1 试验用疫苗新法宝, 福州大北农生物技术有限公司 (以下简称福州大北农) 生产, 生产批号2014001, 有效期至20150603。

1.2 试验用鸡

1.2.1 SPF鸡试验组SPF种蛋购自北京梅里亚维通试验动物有限公司, 自行孵化出雏后置隔离器内饲养至所需日龄。 小鸡出壳后随机分组, 3 组免疫组, 每组20 羽, 另设40 羽作为对照组。 分组完成后将每羽雏鸡用翅标进行编号。第1 组20 羽于1 日龄免疫, 第2 组20 羽于7 日龄免疫, 第3 组20 羽于14 日龄免疫。 3 组免疫组每羽鸡均颈部皮下注射新法宝0.2 m L;另40 羽不免疫, 作为对照。 上述各组鸡按组别在不同隔离器内喂养, 除免前采血外, 1 日龄免疫组25 日龄时采血测抗体和攻毒, 7 日龄免疫组30 日龄时采血测抗体和攻毒, 14 日龄免疫组35 日龄时采血测抗体和攻毒。3 组均于50 日龄时再次采血测抗体和攻毒。

1.2.2商品白羽肉鸡试验组1 日龄商品白羽肉鸡100 羽, 购自福建森宝鸡场, 购回后在隔离器中饲养。 将雏鸡随机分组, 3 组免疫组每组20 羽, 另设40 羽作为对照组。 分组完成后将每羽雏鸡用翅标进行编号。 其中第1 组20 羽于1 日龄免疫; 第2 组20 羽于7 日龄免疫;第3 组20 羽于14 日龄免疫。3 组免疫组每羽鸡均颈部皮下注射新法宝0.2 m L;另40 羽不免疫, 作为对照。 上述各组鸡按组别在不同隔离器内喂养, 除免前采血外, 第1 组 (1 日龄免疫组) 25 日龄时采血测抗体和攻毒, 第2 组 (7 日龄免疫组) 30 日龄时采血测抗体和攻毒, 第3 组 (14 日龄免疫组) 35 日龄时采血测抗体和攻毒, 3 组均于50 日龄时再次采血测抗体和攻毒。

1.3 检验用材料鸡传染性法氏囊病ELISA抗体试剂盒, 生产厂家IDEXX, 批号:MAR-2014;鸡传染性法氏囊病 (HQ株) 抗原, 基础种子由河南农业大学禽病研究所提供, 福州大北农生产, 批号为BS2015001; 攻毒用强毒为法氏囊病病毒BC6-85株, 购自中国兽医药品监察所, 批号为200208。

1.4 抗体测定方法法氏囊病中和抗体 (以下中和抗体均指法氏囊病中和抗体) 检测方法为法氏囊病微量中和试验, 按2010 版《中华人民共和国兽药典》附录中和试验进行[2], 在96 孔微量细胞培养板上操作, 采用固定抗原稀释血清的 β 微量法, 抗原用200个TCID50;鸡传染性法氏囊病ELISA抗体按试剂盒说明书要求操作。

1.5 攻毒试验按中华人民共和国农业部公告第326 号效力检验鸡传染性法氏囊病部分的攻毒法进行。 第1 组在25 日龄, 第2 组在25 日龄, 第3 组在30 日龄及第1、2、3 组在第50 日龄时进行攻毒;攻毒时各免疫组随机选取10 羽, 连同挑对照组鸡10 羽, 经口接种鸡传染性法氏囊病病毒BC6-85 强毒株, 每羽0.2 m L (含2×104BID50) , 72 h后全部剖杀, 检查各组法氏囊病的病变, 在对照组鸡至少9/10有病变的情况下判定各免疫组的保护率。 每组在攻毒前采血。

2 结果

2.1 SPF鸡试验组抗体动态与攻毒保护4 组鸡免前中和抗体均为0。 第1 组 (1 日龄免疫组) 25 日龄时中和抗体几何平均值为15.5 log2, 对照组 (第4 组) 中和抗体为0;免疫组攻毒保护10/10, 对照组攻毒保护0/10。 第2 组 (7 日龄免疫组) 30 日龄时中和抗体几何平均值为14.8 log2, 对照组中和抗体为0;免疫组攻毒保护10/10, 对照组攻毒保护0/10。 第3 组 (14 日龄免疫组) 35 日龄时中和抗体几何平均值为15.4 log2, 对照组中和抗体为0;免疫组攻毒保护10/10, 对照组攻毒保护0/10。 50 日龄时3 个免疫组中和抗体几何平均值依次为16.0 log2、16.1 log2、15.9 log2, 对照组中和抗体为0;攻毒保护3 个免疫组均为10/10, 对照组攻毒保护均为0/10。 结果见表1-表2。

2.2 商品肉鸡试验组抗体动态与攻毒保护白羽肉鸡免疫前带有较高的母源抗体, 4 组鸡免前中和抗体几何平均值为11.0 log2~12.6 log2。 第1 组 (1 日龄免疫组) 25 日龄时中和抗体几何平均值为12.4 log2, 对照组中和抗体几何平均值为5.5log2;免疫组攻毒保护8/10, 对照组攻毒保护0/10。 第2 组 (7 日龄免疫组) 30 日龄时中和抗体几何平均值为15.0 log2, 对照组中和抗体几何平均值为3.7log2;免疫组攻毒保护10/10, 对照组攻毒保护1/10。 第3 组 (14 日龄免疫组) 35 日龄时中和抗体几何平均值为14.2 log2, 对照组中和抗体几何平均值为4.1log2;免疫组攻毒保护9/10, 对照组攻毒保护1/9。 50 日龄时3 个免疫组中和抗体几何平均值依次为16.2 log2、15.7 log2、15.5 log2, 3 个免疫组攻毒保护均为10/10, 对照组攻毒保护为1/10。 结果见表1-表2。

3 讨论

1) 试验结果表明, SPF鸡试验组在1、7、14 日龄免疫新法宝后抗体迅速上升, 免后25 d中和抗体几何平均值分别为15.5 log2、14.8 log2、15.4 log2, 攻毒保护均为10/10, 而未免疫的SPF对照鸡攻毒保护为0/10; 免疫组50 日龄时中和抗体几何平均值更高 (15.9 log2~16.1 log2) , 攻毒全部10/10 保护, 对照组攻毒保护为0/10。 带有母源抗体的商品肉仔鸡在1、7、14 日龄免疫新法宝后25 日龄中和抗体几何平均值分别为12.4 log2、15.0 log2、14.2 log2, 攻毒保护依次为8/10、10/10、9/10, 而未免疫的对照鸡中和抗体几何平均值下降至5.5 log2~3.7 log2, 攻毒保护为0/10~1/9。 3 组免疫鸡在50 日龄时中和抗体几何平均值更高 (16.2 log2~15.5 log2) , 攻毒全部10/10 保护。试验结果显示, 新法宝对无母源抗体的雏鸡很快产生法氏囊病的主动免疫, 对带有母源抗体的商品肉鸡能迅速突破母源抗体干扰, 两者均可在免疫后3~4 周产生主动免疫抗体, 抵抗法氏囊病强毒感染。

2) 活毒疫苗免疫受母源抗体干扰, 因病毒抗原与母源抗体结合影响病毒复制, 可不产生抗体反应, 导致免疫失败。如采用高毒力的法氏囊病活苗, 则虽可突破母源抗体, 但往往引起法氏囊的损伤, 造成免疫抑制, 且污染养殖环境。 试验显示用新法宝免疫SPF鸡后, 抗体持续上升, 而免疫有母源抗体的商品肉鸡, 抗体先稍下降而后持续上升, 显示灭活苗免疫也受母源抗体干扰[3,4,5]。 新法宝是采用新的工艺制备法氏囊病抗原病毒液, 改原代细胞培养为传代细胞培养, 改转瓶培养为生物反应器培养, 疫苗中的鸡传染性法氏囊病病毒抗原含量由法定标准规定的106.8TCID50/0.1m L提高至108.5TCID50/0.1m L。 抗原效价提高使免疫效力大大提高, 从而可克服母源抗体干扰, 在免疫后3~4 周迅速产生有效的免疫保护。

3) 缩短免疫空白期, 产生更快、更高、更持久的有效免疫是防控疫病的关键。 用法氏囊病灭活疫苗或联苗代替活毒疫苗 (或复合疫苗) 主动免疫雏鸡可避免因活毒苗受母源抗体干扰造成的免疫失败或因毒力过强造成的免疫抑制, 亦可减少环境中法氏囊病病毒污染和频繁免疫对鸡群的应激。 因此, 宣传和推广新型、高效灭活疫苗有很大的实用价值, 有望逐步控制和消灭鸡传染性法氏囊病。

摘要：用鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗 (La Sota+HQ株) 分别免疫1、7、14日龄SPF雏鸡, 1日龄免疫组于25日龄采血, 法氏囊病中和抗体几何平均值为15.5log2, 攻毒保护10/10;7日龄免疫组于30日龄采血, 法氏囊病中和抗体几何平均值为14.8log2, 攻毒保护10/10;14日龄免疫组于35日龄采血, 法氏囊病中和抗体几何平均值为15.4log2, 攻毒保护10/10。3组在50日龄时法氏囊病中和抗体几何平均值依次为16log2、16.1log2、15.9log2, 攻毒保护均为10/10。用鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗 (La Sota+HQ株) 免疫带有母源抗体的1、7、14日龄商品肉鸡, 免后25 d血清法氏囊病中和抗体几何平均值分别为12.4log2、15log2、14.2log2, 攻毒保护分别为8/10、10/10、9/10;3组在50日龄时法氏囊病中和抗体几何平均值依次为16.2log2、15.7log2、15.5log2, 攻毒保护均为10/10。

关键词：免疫,中和抗体,攻毒保护

参考文献

[1]王泽霖, 王川庆, 赵军, 等.用新型、高效灭活疫苗控制和消灭鸡传染性法氏囊病[C].中国畜牧兽医学会2014年学术年会暨中国畜牧兽医学会禽病学分会第九次全国会员代表大会论文集 (广州) , 2014:25-26.

[2]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2010版:第三部[S].北京:中国农业出版社, 2010.

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[4]张评浒, 唐应华, 赵永忠, 等.H5N2与H5N1禽流感油乳剂灭活疫苗免疫鹅对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰[J].中国兽医学报, 2005, 26 (3) :268-274.