GLP-1类似物

GLP-1类似物（共4篇）

GLP-1类似物 篇1

2009年是令人兴奋的一年, 咱们“修理”糖尿病的“工具箱”里又多了一个好东西, 这就使得我们在“对付”糖尿病的问题上又增加一份底气和信心。那么, 这个好东西究竟是什么呢?她凭借什么样的魅力成为2009年度糖尿病界最耀眼的一颗“新星”呢?

前世今生

这个好东西就叫GLP-1类似物, 也可称她为胰高血糖素样肽-1类似物。说来话长, GLP-1类似物也算是“千年的媳妇, 终于熬成了婆”。科学家很早就发现, 如果经口吃进去的葡萄糖, 经过胃肠道消化的同时, 体内会释放出大量的胰岛素, 来帮助我们降低血糖。但是如果把这些糖直接注射到血管里, 就没有这个现象发生, 说明在肠道里肯定存在一些能够促使胰岛素分泌, 协助降糖的东西。GLP-1就是这其中的一员。天然的G L P-1虽好, 却是“昙花一现”, 在体内很快就会被分解而失去作用。所以就要寻找到一种东西既要具备GLP-1的优点, 又不能像GLP-1那么命短。

科学家们于是兵分两路, 一路人向自然界寻找答案, 发现有种“暴饮暴食”的毒蜥蜴, 尽管生活习惯很糟糕, 但是人家血糖控制得很好, 它用来控制血糖的看家宝正是我们所需要的GLP-1类似物, 这就是今天的艾塞那肽注射液 (也叫百泌达) 。另一路人抱着“改造自然”的态度, 对体内GLP-1的天然结构进行略微改造, 最终也获得了另一种GLP-1类似物, 这就形成了今天的利拉鲁肽。

魅力所在

GLP-1类似物的异军突起, 打破了降糖领域数十年的沉寂, 吸引了诸多的关注。

第一, 智能降糖。GLP-1类似物的降糖被称之为糖依赖性的降糖, 也就是说她的降糖作用与血糖高低有关, 血糖越高, 降糖作用越强, 血糖正常或血糖偏低, 基本上不发挥降糖作用, 这样就大大减少了低血糖反应。

第二, 有加有减。既往降糖药物包括胰岛素在内, 都是单方面地从“加”入手, 如增加胰岛素、增加糖的转化, 这往往使矛盾越积越深, 造成了加大剂量、联合用药的结局。而GLP-1类似物还从“减”入手, 不但通过增加“胰岛素”的分泌来增加降糖作用, 还通过减低胰升糖素的作用来减弱体内的升糖作用, 做到辩证降糖。

第三, 控制源头。很多时候我们胃口大开, 难于抵制美食的诱惑。GLP-1类似物可以抑制胃肠道蠕动延迟胃排空, 产生短暂的食欲下降和饱胀感, 只看不吃的滋味也就没那么难受了。

第四, 标本兼治。GLP-1类似物降糖的同时, 还很注重体内胰岛β细胞的恢复和重建, 她可以不同程度的增加胰岛β细胞数量, 但是最终胰岛β细胞能恢复到什么样的程度, 还需日久见分晓。

量力而行

任何东西再美, 总会有她的不足之处, GLP-1类似物也不例外。对于1型糖尿病、儿童、孕妇及哺乳期妇女不宜使用。有些人使用后还会出现恶心、呕吐、腹泻等不适, 好在随着使用时间的延长, 多数不适症状会有不同程度的改善。此外, GLP-1类似物每月治疗费用在千元以上, 糖尿病治疗并非一日两日, 是个终身问题, 大家还要量力而行。

GLP-1类似物 篇2

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

MIN6小鼠胰岛B细胞株是肉瘤病毒40通过T细胞转染非肥胖糖尿病小鼠(NOD鼠)得到的胰岛细胞瘤株,由上海瑞金医院内分泌重点实验室惠赠。

Exendin-4购自美国Sigma公司,DMEM培养基、青霉素/链霉素液体购自美国Gibco BRL公司,胎牛血清购自美国PAA公司,ATP检测试剂盒购自美国Sigma公司,细胞c AMP含量酶联免疫法检测试剂盒购自美国Parameter公司,胰岛素测定放免试剂盒由美国Linco公司提供。

1.2 仪器与设备

HF90/HF240型二氧化碳培养箱(Heal Force);Quant MQX200酶联检测仪(Bio Tek)。

1.3 试验方法

1.3.1 细胞培养

MIN6细胞接种于24孔培养板,用含4.5 g/L D-萄萄糖,15%胎牛血清,3.49 g/L碳酸氢钠,584 mg/L L-谷氨酰胺,75 mg/L青霉素,50mg/L链霉素,10μL/Lβ-巯基乙醇的DMEM培养基,在37℃,含5%二氧化碳的培养箱中培养。每隔2 d换液,待细胞达到85%融合时用于实验。

1.3.2 细胞分组

将实验用细胞分为两大组:一组为对照组,一组为实验组。对照组按照不同的处理分为低糖(2.8 mmol/L)处理组、正糖(5.6 mmol/L)处理组和高糖(25 mmol/L)处理组;实验组亦按照不同的处理分为低糖(2.8 mmol/L)+Exendin-4(10 nmol/L)处理组、正糖(5.6 mmol/L)+Exendin-4(10 nmol/L)处理组和高糖(25 mmol/L)+Exendin-4(10 nmol/L)处理组。

1.3.3 细胞内ATP水平检测

细胞培养于24孔板,吸出培养基,无糖KRB缓冲液冲洗两遍,加入含0.5%BSA无糖KRB缓冲液,37℃孵育2 h,吸出缓冲液,分别加入含葡萄糖2.8 mmol/L、5.6 mmol/L和25 mmol/L的KRB缓冲液(均含0.5%BSA),37℃孵育4 h,加入或不加入Exendin-4刺激30 min。培养及刺激结束后吸除培养液,加入ATP检测裂解液,裂解细胞。裂解后4℃12 000 g离心5~10 min,取上清。冰浴上溶解待用试剂,把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。加100μL ATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置3~5 min,以使本底性的ATP全部被消耗掉,从而降低本底。在检测孔或检测管内加上20μL样品或标准品,迅速用微量移液器混匀,至少间隔2 s后,立即用luminometer测定RLU,根据标准曲线计算出样品中ATP的浓度。测定样品中的DNA含量,用来标准化ATP产量。每处理组设6复孔。

1.3.4 细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量测定及腺苷酸环化酶活性估计

细胞培养于24孔板,加入含葡萄糖2.8、5.6和25 mmol/L的培养液培养4 h,加入或不加入Exendin-4刺激30 min后,用0.25%胰酶消化细胞,置离心管中,800 r/min离心5 min,弃上清,加入PBS重悬细胞,再800 r/min离心5 min,弃上清;用预冷的PBS将细胞洗涤3次;加入Cell Lysis Buffer重悬细胞,细胞悬浮液置-20℃冷冻后再放入室温溶解,重复冻融3次,用胎盘蓝检测细胞裂解程度,裂解细胞可以被胎盘蓝染色,显微镜下观察为蓝色;将裂解的细胞液以600 r/min离心10 min,取上清液,弃细胞碎片。在96孔板中加入150μLCalibrator Diluent RD5V至NSB孔;加100μL Calibrator Diluent RD5V到0标准孔(B0);加100μL标准液、对照组、样品到相应的孔。每孔加50μLPrimary Antibady Solution(除外NSB孔),除NSB孔外均变成蓝色;每孔加入50μL c AMP Conjugate,除NSB孔外均变成紫色,用黏合纸盖好;室温条件下,水平震荡仪震荡(500±50)r/min(0.12''orbit),培养3 h;吸出每孔的物质,用Wash Buffer清洗每孔,重复清洗3次;每孔加入200μL Substrate Solution,室温避光培养30 min;每孔加入50μL终止液,液体由蓝色变为黄色,使用酶标仪450 nm处检测。每处理组设6复孔。

腺苷酸环化酶的活性为样品与对照反应体系(以事先在沸水中灭活过的等量样品作为对照)中c AMP含量之差除以100μL样品中的蛋白量。

1.3.5 胰岛素的测定

细胞培养于24孔板,吸出培养基,无糖KRB缓冲液冲洗两遍,加入含0.5%BSA无糖KRB缓冲液,37℃孵育2 h,吸出缓冲液,分别加入含葡萄糖2.8、5.6和25 mmol/L的KRB缓冲液(均含0.5%BSA),37℃孵育4 h,加入或不加入Exendin-4刺激30 min,每孔吸出100μL上清,-20℃保存待测;按照Linco胰岛素放免试剂盒说明操作,依次加入标准品/样品100μL,125I标记的胰岛素100μL及胰岛素抗体100μL,充分混匀,4℃孵育24 h;加入沉淀剂1 m L,4℃孵育20 min后离心,弃去上清,沥干试管,γ记数器检测。批内标准曲线误差<5%,批间差异<10%。每处理组设6复孔,蛋白定量校正每孔间细胞数量的差异。

1.4 统计学分析

用SPSS 17.0软件中的单因素方差分析(Oneway ANOVA)进行统计学处理,计量资料用均数±标准差表示,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 不同浓度葡萄糖和Exendin-4对MIN6细胞ATP含量的影响

在高糖(葡萄糖浓度为25 mmol/L)条件下,MIN6细胞中ATP含量较低糖(葡萄糖浓度为2.8 mmol/L)条件相比明显升高(P<0.05)。Exendin-4刺激后,在高糖培养条件下,细胞中ATP含量明显降低(P<0.05);然而在低糖培养条件下,细胞中ATP含量较刺激前没有明显改变(P>0.05);在正糖培养条件下,细胞中ATP含量较刺激前有所下降,但差异无显著性(P>0.05)(图1)。

2.2 Exendin-4对MIN6细胞内cAMP含量及腺苷酸环化酶活性的影响

在2.8 mmol/L葡萄糖培养条件下,Exendin-4刺激后,细胞内c AMP含量无明显增加(P>0.05),细胞内腺苷酸环化酶的活性亦无明显增加(P>0.05);然而在25 mmol/L葡萄糖培养条件下,细胞内c AMP含量明显增加(P<0.05),细胞内腺苷酸环化酶的活性亦明显增加(P<0.05);在5.6 mmol/L葡萄糖培养条件下,细胞内c AMP含量有所增加,细胞内腺苷酸环化酶的活性亦有增加,但差异无显著性(P>0.05)(图2和图3)。

2.3 Exendin-4对MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响

MIN6细胞在2.8 mmol/L葡萄糖培养条件下,Exendin-4刺激后,细胞胰岛素释放量无明显增加(P>0.05),此时Exendin-4无促进胰岛素分泌作用;然而在25 mmol/L葡萄糖培养条件下,细胞胰岛素释放量明显增加(P<0.05),此时Exendin-4具有明显的促进胰岛素分泌作用;在5.6 mmol/L葡萄糖培养条件下,细胞胰岛素释放量稍有增加,但差异无显著性(P>0.05)(图4)。

3 讨论

胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptidel,GLP-1)发现于20世纪80年代中期,是由肠黏膜L细胞分泌的多肽,由30个氨基酸残基组成。GLP-1通过与细胞表面特异性GLP-1受体结合而发挥其生物学作用。目前发现的GLP-1的主要生理作用包括葡萄糖依赖性的胰岛素分泌增加和胰高血糖素的释放受抑,从而发挥其良好的降糖作用。KJEMS[2]等发现,2型糖尿病患者应用GLP-1(7-36)NH2治疗,当GLP-l(7-36)NH2在较低剂量(0.5 pmol/kg·m)时,β细胞对血糖的反应性即呈现明显的剂量依赖性,当葡萄糖浓度低于4.5 mmo L/L时就不促进胰岛素分泌。GLP-1的其他作用还包括刺激胰岛β细胞增殖,诱导胰岛β细胞再生,阻止胰岛β细胞凋亡[3,4,5];减弱胃肠蠕动,延缓胃排空,降低食欲和食物摄入[6,7];增加葡萄糖的利用,改善胰岛素敏感性[8];保护心脏和心血管系统等[9]。因此,GLP-l在糖尿病治疗领域具有广阔的应用前景。但是,由于内源性GLP-1半衰期极短,在体内很容易被二肽基肽酶(DPP-IV)降解,因此临床上难以应用。在此背景下,GLP-1类似物(Exendin-4,Liraglutide)受到了广泛关注[10]。

Exendin-4是一种从毒蜥蜴唾液腺中分离出来的多肽,与哺乳动物GLP-1的氨基酸序列53%同源,与GLP-1受体具有高度亲和性并具有相似的生物学作用。更重要的是它在体内不被DPP-IV降解,可以保持较高活性。对人工合成的Exendin-4多项临床试验证实它可以降低2型糖尿病患者体重,降血糖并改善胰岛素敏感性;尤其是其不同于其他胰岛素促泌剂,具有葡萄糖依赖性的胰岛素分泌增加作用[11,12,13,14,15]。

本实验的研究结果表明Exendin-4的作用相当于葡萄糖感受器。当培养液葡萄糖浓度为25 mmol/L时,葡萄糖代谢产生ATP增多,Exendin-4与β细胞膜上的G蛋白偶联的特异性受体结合,腺苷酸环化酶的活性增加,产生c AMP增加(P<0.05),激活蛋白激酶A以及鸟苷酸交换因子Ⅱ(Epac2)导致多种反应发生,如离子通道活性改变,影响ATP依赖性K-ATP通道(K-ATP通道关闭时导致细胞膜去极化,开放电压敏感的钙离子通道),胞内钙离子流入增强胰岛素的胞吐作用,从而对葡萄糖引起的胰岛素分泌起到扩增作用(P<0.05),而ATP水平亦相应下降。而当葡萄糖浓度为2.8 mmol/L时,葡萄糖代谢产生ATP相应减少,即产生c AMP的底物减少,Exendin-4刺激后,腺苷酸环化酶的活性无明显增加,cAMP含量无增加(P>0.05),故Exendin-4此时无法促使胰岛素分泌(P>0.05)。

本实验通过测定细胞内ATP、c AMP、腺苷酸环化酶活性及细胞分泌胰岛素量的变化,说明c AMP增加是Exendin-4是引起胰岛素释放作用的主要环节,其作用依赖于葡萄糖浓度。GLP-1类似物-Exendin-4,通过葡萄糖依赖性促胰岛素分泌机制,可以模拟人体正常的葡萄糖-胰岛素分泌关系,更加安全有效地控制2型糖尿病患者血糖水平,大大减少了临床中低血糖对患者的危害,也减少了人们对低血糖的担忧,为糖尿病患者血糖安全达标带来了新希望。

摘要：目的 探讨胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物(Exendin-4)对MIN6细胞的葡萄糖浓度依赖性降糖作用机制。方法 检测GLP-1类似物(Exendin-4)在不同葡萄糖浓度下对体外培养的MIN6细胞的ATP水平、cAMP含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量的变化。结果 在2.8 mmol/L葡萄糖培养条件下,Ex-endin-4使细胞三磷酸腺苷(ATP)水平无明显变化,环磷酸腺苷(cAMP)含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量无明显增加(P>0.05);在25 mmol/L葡萄糖培养条件下,Exendin-4使细胞ATP水平明显降低,cAMP含量、腺苷酸环化酶活性和胰岛素分泌量明显增加(P<0.05)。结论 GLP-1类似物(Exendin-4)具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素分泌作用,细胞内cAMP含量增加是其引起胰岛素释放的关键环节。

GLP-1类似物 篇3

1资料与方法

1.1一般资料

该次研究采用艾美捷科技有限公司生产的胰高血糖素样肽-1 受体激动剂-重组醋酸艾塞那肽 (Exendin-4) 为主要注射试剂; 无锡亚肽生物科技有限公司生产的激动剂增加脂肪酸氧化改善高脂诱导的胰岛素抵抗 (PPAR-α) 、内皮素 (ET-1) 试剂为主要测试试剂。

1.2 方法

1.2.1建立动物模型选取45只成年雄性大鼠为研究对象, 大鼠的体重为130~210 g, 平均体重为 (178.65±2.36) g。所有大鼠均给予富含糖分及脂肪食物喂养, 喂养1个月后, 给予其注射40 mg/kg的链脲菌素, 定期对大鼠的血糖变化情况进行观察和密切监测。当大鼠的血糖值超过16.8 mmol/L时, 则可以大鼠为主要研究对象建立糖尿病研究模型。将喂养1个月的大鼠随机分为3组, 分别为小剂量治疗组、大剂量治疗组和糖尿病心肌病组, 每组15只。小剂量治疗组给予4μg/kg的胰高血糖素样肽-1受体激动剂 (Exendin-4) 注射治疗, 大剂量治疗组给予204μg/kg的Exendin-4注射治疗, 糖尿病心肌病组给予等量的磷酸缓冲盐溶液 (PBS缓冲液) 进行皮下注射。治疗2个月后, 将所有大鼠处死, 将其心脏取出, 并对其心室肌组织进行病理学检测, 同时使用苏木精—伊红染色法 (HE染色法) 进行化学染色。

1.2.2苏木精—伊红染色法 (HE染色法) 首先, 将心脏组织切成片状, 心肌组织的厚度约为3μm, 将其放置在温度为60℃以上的电热箱中进行加温烘烤;其次, 使用常规脱蜡水对切片组织进行脱蜡、脱水处理, 进而使用苏木精进行染色, 染色时间持续约5 min左右, 最长不得超过5 min, 并使用自来水冲洗。再次, 使用盐酸酒精进行2 s的分化, 使用氨水进行反蓝处理, 时间为2 s, 使用伊红进行染色, 上色时间为2 min左右。最后, 使用高浓度的酒精进行脱水处理, 并使用中性树胶将切片封存保留。

1.3 统计方法

该组研究中全部数据都选择SPSS17.0 统计软件对数据进行统计, 计量资料利用 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料用%表示, 选择 χ2检验, P<0.05, 差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组大鼠的心脏形态结果对比

小剂量治疗组的心脏形态结果显示: 心肌组织排列较为整齐, 心肌细胞内出现较为清晰的纹路;大剂量治疗组的心脏形态与小剂量治疗组的结果基本相同, 但大剂量组的心肌染色情况改变的更为显著。

2.2 3 组大鼠的治疗后的血糖、血脂变化情况比较

小剂量治疗组和大剂量治疗组的心肌纤维化、血脂、血糖改善情况均优于糖尿病心肌病组, 经对比, 组间有显著差异, 且差异有统计学意义 (P<0.05) ;大剂量治疗组的心肌纤维化、血脂、血糖改善情况均明显优于小剂量治疗组, 经对比, 组间差异有统计学意义 (P<0.05) 。

2.3 3 组大鼠治疗后的PPAR-α、ET-1 表达情况对比

小剂量治疗组和大剂量治疗组的PPAR-α、ET-1阳性表达情况均优于糖尿病心肌病组, 经对比分析, 组间差异有统计学意义 (P<0.05) ;大剂量治疗组的PPAR-α、ET-1 阳性表达情况均明显优于小剂量治疗组, 经对比分析, 组间差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

3 讨论

糖尿病心肌病的主要发病人群为糖尿病患者, 临床上对其发病原因进行总结, 大致分为五方面的原因, 其一是糖尿病患者的收缩蛋白糖基化介导, 导致心肌细胞出现代谢功能性紊乱; 其二是心肌细胞外的葡萄糖水平发生变化对细胞内的钙离子浓度产生一定影响, 但心肌舒张力提高时, 心脏的顺应能力则不断下降, 心肌细胞钙在运转的过程中出现功能性障碍;其三是糖尿病患者的心肌组织有别于健康人, 糖尿病患者存在冠状动脉微血管病变, 继而出现弥漫性的壁内血管性病变;其四为心肌间质发生纤维化, 导致此种现象的原因为糖尿病患者的病情持续时间较长, 长期患病导致糖基化的胶原存在堆积和沉淀的现象, 从而出现组织纤维化;其五是心脏自主神经性病变, 据相关研究报道, 约有80%以上的糖尿病患者均出现心脏自主神经性病变, 可见此种发病原因不容小觑。 通过对相关文献和医学报道的研究[2,3], 发现糖尿病心肌病的发病机制为以代谢功能紊乱为基础上, 在此基础上发生的心肌坏死, 从而导致患者的心肌功能出现亚健康。 最终将会导致患者出现心率衰竭、心源性休克等症状, 严重情况下, 甚至会导致患者发生猝死, 严重威胁患者的生命健康。

糖尿病心肌病不仅是一种特异性心肌病, 同时也是糖尿病患者的主要心脏并发症。 随着临床医学的不断发展, 医学上对心肌纤维化的研究也在不断深入。 相关医学研究结果显示[4,5], 糖尿病心肌病的主要特征表现之一就是心肌纤维化和胶原检质沉积, 其中, 导致心肌纤维化的主要因素之一是ET。ET的位置不局限与血管内皮中, 更是在细胞和多种组织中有较为广泛的分布, 作为调节心血管功能的重要分子, ET可对稳定基础血管张力和心血管系统起到极其重要的影响作用。 此外, 还有研究和医学文献对PPAR-α 进行相关报道[6,7,8], 从报道中可以总结出PPAR-α 为激活因子, 同时借助调控转录因子完成对ET-1 诱导作用的主要心肌反应。

胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 作为脑肠肽的一种, 其主要分布在回肠内进行细胞分泌, 在现阶段临床上广泛用于2 型糖尿病的靶向治疗。 通过对大鼠皮下注射GLP-1 可使其有饱胀感, 且可减少日常的饮食量。 此外, GLP-1 的主要受体刺激物为Exendin-4, Exendin-4从某种意义上来看, 是动物分泌出的GLP-1 类似物, 广泛存在于动物的唾液中。 随着临床医学对GLP-1 研究的不断深入, 发现GLP-1 在心血管疾病的临床治疗上具有特殊的作用可对心血管形成一定的保护作用, 并促使血管内皮功能得到有效改善, 并在此基础上, 对血脂、血压等基本指标进行改善, 最终改善患者的心肌功能和心肌缺血等疾病情况, 提升患者的生存质量。

该研究以成年的雄性大鼠为研究对象, 分别给予不同剂量的Exendin-4 进行治疗, 当所给药物相同时, 则给药剂量越大的研究对象所表现出的PPAR-α 阳性率则越高且ET-1 越低, 反之, 给药剂量小的大鼠, 其PPAR-α 阳性率较低, 且ET-1 较高。 而针对使用同等剂量的磷酸缓冲盐溶液进行皮下注射治疗的大鼠, 其血脂水平、血压水平以及PPAR-α、ET-1 表达情况等各方面均较Exendin-4 治疗组差, 可见Exendin-4 在糖尿病心肌病的临床治疗中仍占据极其重要的作用, 可清晰表达GLP-1 类似物对PPAR-α、ET-1 等情况的影响性作用, 促进心肌纤维化。 此外, 还有研究称[9,10], PPAR-α、ET-1 的表达情况与GLP-1 类似物间存在一定的依赖性和内在联系性, 具有改善糖尿病心肌病纤维化的作用。

该研究结果显示, 小剂量治疗组和大剂量治疗组大鼠的心肌纤维化、血脂、血糖改善情况均优于糖尿病心肌病组, 且PPAR-α 增加、ET-1 降低, 经对比, 3 组组间差异有统计学意义 (P<0.05) ;大剂量治疗组大鼠的心肌纤维化水平、血脂、血糖改善情况及PPAR-α、ET-1表达情况均明显优于小剂量治疗组, 经对比, 3 组组间差异有统计学意义 (P<0.05) 。该研究结果与相关研究结果相符[11,12], 从研究结果中可见看出, 给予治疗将会导致心肌纤维化、血脂和血糖发生变化。 此外, 相对于小剂量用药治疗而言, 增加治疗剂量将会使心肌纤维化、血脂和血糖水平逐渐恢复正常值, 且提升PPAR-α 水平, 降低ET-1 水平, 为临床医学发展提供更多的借鉴, 并为糖尿病心肌病的临床治疗提供更多的治疗依据。

综上所述, GLP-1 类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1 表达具有一定的影响性作用, 且用药剂量越大, 大鼠的心脏组织产生的变化则越大, 在用药剂量的选择上具有一定的依赖性。 但现阶段临床上关于GLP-1 类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1 表达的研究仍存在缺陷, 其发病机制尚不明确, 因此, 仍需要进行深入的临床科学实验进行研究, 为糖尿病心肌病的临床治疗提供更多的治疗方案。

摘要：目的 探析GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响。方法 选取45只注射链脲菌素的成年雄性大鼠为研究对象, 将其随机分为小剂量治疗组、大剂量治疗组和糖尿病心肌病组, 每组15只。回顾性分析GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响。结果 小剂量治疗组和大剂量治疗组的心肌纤维化、血脂、血糖改善情况均优于糖尿病心肌病组, 且PPAR-α增加、ET-1降低 (P<0.05) ;大剂量治疗组的心脏组织情况及PPAR-α、ET-1表达情况均明显优于小剂量治疗组 (P<0.05) 。结论 GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达具有一定的影响性作用, 且用药剂量越大, 大鼠的心脏组织产生的变化则越大, 在用药剂量的选择上具有一定的依赖性。

关键词：GLP-1类似物,糖尿病,PPAR-α、ET-1表达

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GLP-1类似物 篇4

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2012年1月-2013年3月本科住院的2型糖尿病患者40例作为实验组。入选标准: (1) 符合1999年世界卫生组织制定的2型糖尿病诊断标准。 (2) 年龄18~75岁 (含18和75岁) 。 (3) Hb A1c≤10%。 (4) 愿意签署知情同意书, 并通过伦理委员会同意。排除标准: (1) 1型糖尿病患者 (包括LADA) ; (2) 伴有糖尿病急性或慢性并发症 (包括高血压) 的患者; (3) 伴有心、脑、肝、肾、甲状腺、垂体、肾上腺等脏器疾病的糖尿病患者; (4) 伴有其他内分泌代谢性疾病 (包括高脂血症) 、新近发现肿瘤、自身免疫性疾病的糖尿病患者; (5) 妊娠及口服避孕药、哺乳期的女性糖尿病患者; (6) 正在应用他汀类药物、肾素血管紧张素转换酶抑制剂、噻唑烷二酮类降糖药、抗氧化剂、阿司匹林及胰岛素剂量≥40 u/d的患者; (7) 目前暂时应用胰岛素的患者 (如围手术期的患者) ; (8) 禁忌使用利拉鲁肽的患者; (9) 同时或至少3个月内参加过其他研究性或观察研究者。退出标准: (1) 不能耐受利拉鲁肽副作用的患者; (2) 研究期间出现糖尿病并发症的患者; (3) 研究期间出现心、脑、肝、肾、甲状腺、垂体、肾上腺等脏器疾病或肿瘤、自身免疫性疾病的患者; (4) 不能坚持随诊或要求退出的患者。其中男性18例, 女性22例, 平均年龄 (46.9±10.6) 岁。选取同时期健康体检者40例作为对照组。经口服葡萄糖耐量试验排除糖尿病, 亦无高血压、高脂血症病史及糖尿病及高血压病家族史。其中男性17例, 女性23例, 平均年龄 (46.2±9.8) 岁。两组性别和年龄差异无统计学意义。

1.2 主要试剂与仪器

利拉鲁肽 (诺和力) :丹麦诺和诺德公司提供, 规格:3 m L:18 mg, 批号:S20110020;胰岛素放免试剂盒、IL-6和TNF-αELISA试剂盒, 购自河北博海生物科技有限公司;Hb A1c试剂盒:美国BAYER公司生产, 购自河北医科大学生物科技有限公司。Beckman LX20全自动生化分析仪购自美国贝克曼库尔特公司, DCA2000+Hb A1c测定仪购自美国BAYER公司;TECAN酶标仪购自瑞士TECAN公司;快速血糖测定仪及试纸购自美国强生公司。

1.3 方法

1.3.1 标本采集及处理

记录研究对象的一般资料:年龄、性别、体重、收缩压、舒张压。由专人测量, 并计算体重指数 (BMI) =体重 (kg) /身高2 (m2) 。研究对象空腹 (隔夜12 h) 肘正中静脉采静脉血, 测定FPG、FINS、Hb A1c、总胆固醇 (TC) 、甘油三酯 (TG) 、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) , 口服75 g无水葡萄糖后2 h再次采集静脉血, 测定2 h PG, 以稳态模型法计算胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR) =FINS (μIU/m L) ×FPG (mmol/L) /22.5。并留取5 m L静脉血, 室温下自然凝固后, 离心后分离血清, 置于-80℃超低温冰箱保存, 待标本收集完全后同批测IL-6、TNF-α、hs-CRP及脂联素。FPG、2 h PG、TC、TG、LDL-C测定均用全自动生化分析仪 (Beckman LX20) , 血糖测定采用葡萄糖氧化酶法;TC、TG、LDL-C测定采用酶测定法;FINS测定采用放射免疫法;Hb A1c测定采用免疫凝集法;hs-CRP测定采用免疫比浊法;IL-6、TNF-α及脂联素均采用酶联免疫吸附法 (ELISA) 。以上检测均由专人严格按照说明书方法操作, 试剂盒批内变异系数 (CV) 及批间CV<10%。

1.3.2 研究设计

实验组在控制饮食及运动治疗的基础上停用原降糖方案, 改用利拉鲁肽治疗。起始剂量0.6 mg 1次/d, 7 d后如果患者血糖控制不理想, 改为1.2 mg 1次/d, 最大剂量为1.8 mg 1次/d。每周测FPG及2 h PG。第12及24周测FINS、Hb A1c、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、hs-CRP及脂联素。

1.4 统计学分析

所有数据均使用SPSS 19.0统计软件处理, 计量资料用均数±标准差 (±s) 表示。对所测定结果进行正态性及方差齐性检验, 两组间比较采用t检验, 多组间比较采用方差分析, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 利拉鲁肽治疗前各项指标比较

实验组BMI、FPG、2 h PG、Hb A1c、HOMA-IR、IL-6、TNF-α、hs-CRP均显著高于对照组 (P<0.01) ;FINS、脂联素显著低于对照组 (P<0.01) ;收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C差异均无统计学意义 (P>0.05) 。 (见表1)

2.2 利拉鲁肽治疗后实验组各项指标的变化

实验组FPG和2 h PG于治疗后第12周显著下降 (P<0.01) , Hb A1c逐步降低 (P<0.05) , FINS于治疗第12周略有下降, 第24周显著升高 (P<0.01) , HOMA-IR于治疗后第24周显著下降 (P<0.01) ;IL-6、TNF-α、hs-CRP于治疗后12周显著下降 (P<0.01) , 并持续到实验结束, 脂联素于第24周显著升高 (P<0.01) ;治疗过程中实验组BMI、收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C均无显著变化 (P>0.05) 。 (见表2)

2.3 不良反应

实验组5例患者在治疗初期出现恶心, 持续1~2周自行缓解, 无患者因不能耐受其副作用退出实验。实验结束时, 共39例完成实验, 1例因不能坚持随诊退出。

注:1) 与治疗前比较, P<0.01;2) 与第12周比较, P<0.05, 3) 与第12周比较, P<0.01

3 讨论

我国已成为全世界糖尿病患病率增长最快的国家之一, 预计到2025年, 我国糖尿病患病率将增长到4.3%, 患者人数高达4 600万[1]。目前研究显示我国糖尿病患者血糖控制达标率低, 糖尿病相关并发症情况严重[2], 这将严重影响患者的预后和生存质量, 增加医疗费用的支出, 成为我国社会发展的巨大负担。但糖尿病发病机理复杂, 至今尚未完全明了。近年来炎症学说成为研究热点, 其认为糖尿病是由于免疫失调所致的一种长期、慢性的自然免疫和低度炎症性疾病[3], 多种炎症因子及脂肪细胞因子参与了2型糖尿病及其并发症的发生、发展[4,5], 与其发展、转归及预后明显相关。利拉鲁肽属于人GLP-1长效类似物, 作为新一代的降糖药, 其能否改善2型糖尿病患者血清IL-6、TNF-α、CRP和脂联素水平, 目前相关研究不多。本研究通过观察2型糖尿病患者经利拉鲁肽后血清CRP、IL-6、TNF-α、脂联素的变化, 进一步探讨其降糖外作用。

LEAD系列研究[6,7]证实利拉鲁肽在2型糖尿病的不同疾病阶段均可有效控制血糖、降低Hb A1c、改善β细胞功能, 患者耐受性良好。荟萃分析显示应用利拉鲁肽患者体重无明显增加[8]。此外, 利拉鲁肽还能够持续降低收缩压, 并且在基线收缩压较高的患者中尤为明显[9]。本研究显示利拉鲁肽可显著、持续的降低2型糖尿病患者FPG、2 h PG、Hb A1c, 升高FINS, 改善HOMA-IR, BMI无显著增加, 与文献报道一致。本研究中患者收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C无显著变化, 考虑可能与患者入组时基线收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C未显著升高有关。