胡萝卜组织培养的教案

胡萝卜组织培养的教案（精选8篇）

胡萝卜组织培养的教案 篇1

胡萝卜组织培养教学设计

小组成员：何家会、宋亚伟、冯海艳、尹化、黄洁、牛伟坤

一、教学目标

1、知识目标：

说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行胡萝卜的组织培养。

2、能力目标：

掌握培养基制备、外植体消毒、接种、培养、移栽以及栽培等基本操作技术。

3、情感目标：

关注植物组织培养技术在实践生活中的运用，养成严谨的科学素养。

二、实验目的

1、掌握植物组织培养过程中的愈伤组织诱导和生根培养技术。

2、掌握植物组织培养过程中使用的无菌技术。

三、实验原理

植物组织培养：

指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。

植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。

• • 外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的那部分材料。愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则薄壁细胞，多在植物体切面上产生。

• 脱分化：已分化好的组织细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。或者说是由高度分化的植物组织或器官产生愈伤组织的过程。• 再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。或者说是由愈伤组织再生出小植株的过程。

• 植物体的任何一个细胞都具有全能性。分化了的植物根、茎、叶等组织器官在一定的条件下进行离体培养，给于一定的营养和激素，可以脱分化为愈伤组织。愈伤组织在不同的营养和激素的作用下，又可以再生出完整的小植株。植物的脱分化和再分化培养，证明分化了的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全套基因。

四、实验材料与方法

实验材料 • • • 胡萝卜（新鲜幼嫩）

MS培养基+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA 70%酒精2.5%NaCLO无菌水超净工作台、光照培养架、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡器、打孔器、小刀、培养皿、解剖刀、镊子、植物组培试剂盒。实验方法 • • • 培养基的配制。

小麦籽粒用无菌水浸泡10小时。取材、消毒和接种。

五、实验过程

胡萝卜愈伤组织的诱导

1、外植体消毒

用清水洗干净胡萝卜直根，用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。先用70%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钠溶液消毒10min（或用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍，再用无菌水浸泡30min），放入无菌水中漂洗2~3次，用无菌吸水纸吸干待用。

2、外植体接种

把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm的小长块。为了操作简便、快速，外植体美观，建议使用打孔器切取胡萝卜外植体。

具体操作方法: 把消毒好的胡萝卜直根放于无菌培养皿中(建议使用一次性塑料培养皿)，用小刀将其切成2-3cm的小段，用灭过菌的打孔器沿着形成层穿入胡萝卜中，取得一段含有形成层的2-3cm的圆柱体，然后用无菌解剖刀片将其切成厚1mm的小薄片。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心以避免封口膜接触瓶口的一面被污染，左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取胡罗卜直根，插入培养基中，插入时应注意方向不要倒插，每瓶接种6-8块外植体，接种后将封口膜重新扎好。

3、培养

接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒放于黑暗处25℃条件下进行暗培养，50d后长出淡黄色愈伤。

4、愈伤组织转移到生根培养基

将愈伤组织转移到生根培养基，长出根后，壮苗，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。

六、注意事项

1、培养基消毒、外植体消毒、超净台消毒和操作者无菌操作是否符合规范，是防止菌类污染的关键；

2、每剥离接种完一个胚，接种工具均要在点燃的酒精灯上进行烧灼消毒。

3、每一步操作都不要远离酒精灯火焰无菌区。

4、注意防火（盛有酒精用于浸泡接种工具的器皿要远离酒精灯）。

5、接种结束后，清理和关闭超净工作台。

七、预期实验结果

胡萝卜的离体组织经植物组织培养技术长成完整植株。

八、结果分析与评价

1、接种3-4天后，观察外植体的生长情况，统计有多少外植体被污染，有多少能正常生长。分析外植体被污染的原因。

2、一周后观察愈伤组织的分化情况，填好实验记录表，并及时分析结果。

3、幼苗移栽到露地后，能够正常生长吗？

胡萝卜组织培养的教案 篇2

笔者经过多年的C语言教学活动, 根据多年的教学经验, 组织以下的指针技术教案并加以应用, 此教案只是WORD版, 在PPT教案中, 还加上了动画, 引起了学生浓厚的学习兴趣, 学生们的学习效果不错, 对指针技术不再害怕, 而且对学习计算机技术更有兴趣了。

一指针技术介绍

1. 指针原理

指针其实是计算机内存条中内存字节的物理地址, 之所以称为指针是因为有给CPU指示访问内存条的位置 (CPU访问内存条是以内存字节的物理地址为访问的目的地) 的作用, 即指示方向的作用, 见图1。

2. 指针技术

C语言允许程序员在程序中使用计算机内存字节的物理地址, 即指针。那程序员又如何在程序中使用呢?程序员要想在程序中熟练地运用指针技术, 必须掌握以下三点知识: (1) 指针数据的存储空间的申请方式是什么?——指针变量的定义。 (2) 指针数据的存储如何实现?——指针变量的赋值。 (3) 指针数据如何应用?——内存的间接访问技术。

第一, 指针变量的定义。变量定义的目的是向内存条申请内存字节来存储我们程序中的数据。同样, 程序中当需要使用指针数据时, 程序员也必须将它们存储在内存中, CPU才能访问与使用这些数据 (因为CPU主要是从内存条中获取数据和存储数据) , 见图2。用于申请内存字节来存储指针数据的变量, 就称为指针变量。

程序中, 指针变量的定义格式为:

第二, 指针变量的赋值。指针变量的主要功用是给CPU提供访问其他内存空间 (可称为目标空间) 数据的地址, 目标空间可以采用变量定义方式静态申请得到, 或是在程序被CPU运行时动态申请得到, 见图3。

(1) 当目标空间是静态申请方式得到, 可用取地址运算符 (&) 获取它的地址, 并赋值给相同类型的指针变量。例如:

(2) 当目标空间是在程序被CPU运行时动态申请得到, 在赋值时, 则要注意进行强制类型转换。例如:

第三, 内存空间的间接访问方式。内存空间的间接访问方式是指CPU访问内存空间时, 没能直接访问到目标内存空间, 而是先访问某一块内存空间获取目标内存空间的首地址后, 才能访问到目标内存空间的访问方式。这种访问方式需要使用到间接访问运算符:*。

格式如下, 分为两种情形: (1) 间接读取目标内存空间的数据:*指针变量。 (2) 间接往目标内存空间存储数据:*指针变量=表达式。

例1, 内存空间的间接访问方式举例, 内存空间的变化过程见图4。

二指针技术的高级应用

指针变量主要应用于以下三方面的编程。

第一种应用:在函数之间传递内存空间的物理地址, 突破局部变量内存空间作用域的限制。

例2, 下面程序的功能是交换两块内存空间中的数据, 分析它所使用的技术及此种技术的特点。

分析:程序采用模块化设计, 交换算法组成一个函数, 以代码的重用, 又可增强程序的可读性, 而将被交换数据的两块目标内存空间是在主函数 (main) 申请得到, 它们的作用域就在主函数内, 此时就必须将这两块目标内存空间的地址传递过来, 才能实现对这两块内存空间的访问, 要接收地址数据, 在swap () 函数的形参表中, 就需要定义指针变量才能接收函数调用 (主函数中的语句:swap (&a, &b) ;) 时传递过来的地址。这就是指针变量的主要应用之一。

第二种应用:字符串的存储与访问, 字符串长度的不确定性, 决定了在程序中不适于用变量定义, 即静态方式来申请内存空间存储字符串字符, 较好的方法是实时根据字符串的长度申请合适的内存空间, 这需要指针变量配合使用才能实现。

例3, 使用指针变量来实现字符串的存储与处理。

解析:“student”是一个字符串常量, 它保存在计算机的一个内存区域。用该字符串对字符指针变量p1初始化, 就是把字符串首字符的物理地址赋给p1, 见图5。

与数组配合使用, 以实现控制CPU对数组空间的灵活访问。

例4, 使数组循环移位。有n个整数, 使其前面各数字顺序向后移动m个位置, 最后m个数字变成最前面m个数字, 见图6。写一个函数实现以上功能, 在主函数中输入n个数, 并输出调整后的n个数字。

算法分析:可采用循环移位的方法, 将数组元素值向后移1位, 位于数组末尾的元素值被移出后, 将其放到数组的第一个元素中。重复该移位操作m次后, 就实现了题目所要求的功能。另外, 对于上述移位操作我们利用一个递归函数的形式实现。

代码如下:

/*形参变量array表面上是数组, 实质上它是指针变量, 接收来自主函数数组number空间的首地址*/

三结束语

指针技术是C语言的一大特色, 它增强了C语言编程的技术手段, 若能熟练地掌握及运用, 可提高编程效率以及整个程序的综合效率, 但需要认真研究与领悟, 才能做到这一点。

摘要：计算机语言中的数组技术应用广泛, 是一种计算机内存空间的使用形式, 它是大批量数据存储、字符数据存储、二维表数据存储的基础支撑技术。本文展示了数组技术在程序中的应用, 体现了数组技术的强大, 也指出了数组技术的一般应用。

关键词：指针,指针变量,间接访问方式,课堂教学 (班级教学)

参考文献

[1]谭浩强.C程序设计[M].北京:清华大学出版社, 2009

[2]郑阿奇、丁有和.C教程[M].北京:电子工业出版社, 2010

[3]罗朝盛.C程序设计使用教程[M].北京:人民邮电出版社, 2007

[4]徐翠霞.数据结构案例教程[M].北京:北京大学出版社, 2009

胡萝卜组织培养的教案 篇3

关键词：萝卜；激素；直根；愈伤组织；诱导率

中图分类号： Q943.1；S631.104+.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0060-03

收稿日期：2014-04-01

基金项目：发酵资源与应用四川高校重点实验室项目（编号：2012KFJ002）；宜宾学院青年基金（编号：2012Q14）。

作者简介：胡伟（1981—），男，宁夏吴忠人，硕士，讲师，主要从事有机农业及作物生产系统模拟与决策研究。E-mail：wh_1981225@163.com

通信作者：陈豫，博士，副教授，主要从事农村沼气及生态农业研究。E-mail：chenyu@nwsuaf.edu.cn。萝卜（Raphanus sativus）是中国主要的大众化蔬菜作物之一，在民间有“小人参”之美称，具有较高的食用价值和医用价值。萝卜采用常规育种手段需时长且劳动强度大，通过组织培养能够大量扩繁原种，并能更好地保持萝卜良种的性状。关于萝卜组织培养的研究，国内外都有大量报道[1-9]，但大多数研究中应用的激素种类比较单一，外植体的类型从萝卜的带柄子叶、子叶、下胚轴、花药等进行研究，但未涉及外植体萝卜根部对愈伤组织的影响。本试验旨在研究不同激素浓度配比下，以萝卜根部形成层为外植体进行愈伤组织的培养，分析不同激素配比对萝卜愈伤组织形成的影响及愈伤组织的生长情况，找出萝卜组织培养过程中适宜的激素配比浓度范围，为萝卜的组培技术提供理论参考。

1材料与方法

1.1试验材料

选用生长健壮、体型匀称、表面无伤痕的市场销售的新鲜萝卜。试验所用的3种激素为分裂素6-BA（6-苄氨基嘌呤）和生长素2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、NAA（萘乙酸）。

1.2试验方法

1.2.1诱导培养基的配制在MS培养基中添加3%蔗糖、0.8%琼脂和不同激素浓度配比（表1），作为本试验诱导愈伤组织的培养基。配制好培养基后，用0.1 mol/L的NaOH或0.1 mol/L的HCl溶液在灭菌前将培养基pH值调至5.8～60，然后将培养基分装到100 mL的三角培养瓶中，用封口膜封好瓶口，在121 ℃下湿热灭菌30 min，灭菌后冷却待用。

1.2.2愈伤组织的诱导用自来水将萝卜直根表面污物冲洗干净，用小刀切成小段放入烧杯中。先用75%乙醇对萝卜小段消毒5 min，用无菌吸水纸吸干，再用0.2%氯化汞溶液消毒3 min，放入无菌水中漂洗2～3次，用无菌吸水纸吸干。在无菌操作台上操作，把消毒好的萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的解剖剪将萝卜的形成层切成0.5 cm3左右的小块，置于含有不同激素浓度配比的愈伤组织诱导培养基上，25 ℃暗培养，无需光照。外植体培养每隔3～5 d观察1次，并记录萝卜切块愈伤组织的产生情况，25～30 d后统计诱导率，计算公式如下：诱导率=形成愈伤组织的外植体数/接种的外植体数×100%。

2结果与分析

2.1不添加任何激素时萝卜愈伤组织的诱导率

在不添加任何激素的MS培养基上，萝卜愈伤组织诱导率为6%，且愈伤组织出现的时间较晚，大约为19 d，其形态为白色疏松状（表2）。

2.2不同浓度6-BA和NAA配比对萝卜愈伤组织诱导率的影响

由表2（MS2至MS17）可以看出，无菌根形成层接种到不同浓度6-BA和NAA配比的MS培养基中，大部分培养基上的根在接种后4 d少部分膨大，1周后全部膨大，大多数外植体在14 d后开始出现愈伤组织，愈伤组织颜色为淡黄色，质地较为紧密。与不添加任何激素相比，萝卜愈伤组织诱导率有了明显的提高，且愈伤组织出现的时间缩短了5 d。当 6-BA 和NAA浓度均为0.025 mg/mL时其诱导率最低，为20%；当NAA为0.075 mg/mL、6-BA浓度为0.1 mg/mL时，愈伤组织诱导率最高，为31%。同时可以看出，6-BA和NAA配比下，当NAA浓度不变时，随着6-BA浓度增大，萝卜愈伤组织的诱导率明显增大。

2.3不同浓度6-BA和2，4-D配比对萝卜愈伤组织诱导率的影响

由表2（MS18至MS33）可以看出，添加不同浓度6-BA与2，4-D配比的MS培养基对萝卜外植体进行培养，大约在10 d后开始出现愈伤组织，愈伤组织颜色为淡黄色，质地较为紧密。与不添加任何激素相比，萝卜愈伤组织诱导率有了明显的提高，且愈伤组织出现的时间缩短了9 d。当6-BA和2，4-D浓度均在0.050～0.075 mg/mL时，愈伤组织诱导率在40%以上，在此范围内，随着激素浓度的升高，诱导率也随之升高；但超过其浓度临界点以后，诱导率随着激素浓度的升高有一定下降。

变更加严重[16]。李冬杰等研究红豆杉细胞培养中的褐化问题时，认为细胞分裂素类中6-BA有刺激多酚氧化酶（POO）活性提高、加重褐变的作用[17]。

本试验以萝卜的根为外植体，6-BA分别与NAA、2，4-D配比诱导萝卜愈伤组织，研究表明2，4-D较NAA更适于诱导萝卜愈伤组织，且当6-BA和2，4-D浓度均在0050～0.075 mg/mL时，愈伤组织诱导效果最好。本研究结果与龙雯虹等[18]不同，可能是由供試材料的基因型和外植体的不同引起的，可见，萝卜愈伤组织的再分化仍然是一个需努力探索的问题。

nlc202309012228

参考文献：

[1]Jeong W J，Min S R，Liu J R. Somatic embryogenesis and plant regeneration in tissue cultures of radish（Raphanus sativus L.）[J]. Plant Cell Reports，1995，14（10）：648-651.

[2]Pua E C，Sim G E，Chi G L. Synergistic effect of ethylene inhibitors and putrescine on shoot regeneration from hypocotyl explants of Chinese radish（Raphanus sativus L. var. longipinnatus Bailey）in vitro[J]. Plant Cell Report，1996，15（9）：685-690.

[3]武剑，龚义勤，邓波，等. 萝卜雄性不育组织培养的研究[J]. 贵州农业科学，2003，31（5）：8-11.

[4]张丽，赵秋菊，付传翠，等. 萝卜花药培养技术研究[J]. 华北农学报，2006，21（6）：55-58.

[5]王绍辉，高遐虹，程继鸿，等. 萝卜花药愈伤组织诱导及褐变因素初探[J]. 中国农学通报，2008，24（11）：350-354.

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[7]龙雯虹，杨荣萍，王建飞，等. 萝卜诱导愈伤组织较适外植体及激素的筛选[J]. 河南农业科学，2006（2）：93-95.

[8]王辉，田义轲，刘维信，等. 萝卜组织和器官的离体培养[J]. 青岛农业大学学报：自然科学版，2009，26（2）：109-112.

[9]龙雯虹，许彬，张丽萍，等. 萝卜诱导愈伤组织的影响因素[J]. 西南农业大学学报：自然科学版，2006，28（1）：131-133，138.

[10]姜灵敏，徐有明，张冬梅，等. 红刺玫愈伤组织诱导再生体系的建立[J]. 江苏农业学报，2012，28（4）：914-916.

[11]刘浩，李胜，马绍英，等. LED不同光质对萝卜愈伤组织诱导、增殖和萝卜硫素含量的影响[J]. 植物生理学通讯，2010，46（4）：347-350.

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[14]张宁宁，夏明霞，张琼，等. 卡特兰组织培养研究进展[J]. 江苏农业科学，2013，41（4）：42-44.

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[17]李冬杰，张进献，魏景芳，等. 培养基和培养条件与红豆杉细胞培养中褐化的关系[J]. 植物生理学通讯，2005，41（1）：95-98.

[18]龙雯虹，许 彬，张丽萍，等. 萝卜诱导愈伤组织的影响因素[J]. 西南農业大学学报：自然科学版，2006，28（1）：131-133，138.

胡萝卜组织培养的教案 篇4

【活动设计】

根据《幼儿园工作规程（试行）》的规定，幼儿健康关系到幼儿各方面的发展，在这节活动中让幼儿通过游戏的方式了解和掌握消化器官的名称和作用。提高幼儿对食物消化的兴趣，从而培养幼儿不挑食的好习惯。

【活动目标】

1、掌握消化器官的名称。

2、了解食物的消化过程。

3、发挥想象力和合作精神。

4、帮助幼儿了解身体结构，对以后的成长会具有一定的帮助。

5、知道检查身体的重要性。

【活动准备】

1、消化器官图卡。

2、人体的挂图。

3、人体消化器官透视图。

4、玩具胡萝卜、盘子。

5、录音机、磁带和消化器官图头饰。

【活动过程】

一、讲述故事。

师：出示实物胡萝卜，请幼儿品尝，引出故事情节。

二、提问故事情节。

师：老师把故事讲完了，现在我要请大家想一想故事中的小白兔最爱吃什么？

幼：胡萝卜

师：对的，现在请大家想一想什么东西把胡萝卜弄的痒痒的？

幼：舌头

师：胡萝卜都去过那些地方？

幼：嘴、食道、胃、小肠、大肠

师：最后胡萝卜变成了什么东西，又到了哪去？

幼：胡萝卜最后变成了大便，进了厕所里。

教师强调上完厕所要冲水，还要洗洗小手，做一个讲卫生的好宝宝。

三、出示人体大挂图。

（一）出示消化器官图卡，以我认识新朋友的游戏组织孩子认识器官名称。

教师把消化器官图卡藏在身后，作神秘状拿出图卡。

教师带领幼儿按消化图回忆故事，同时引导幼儿能和老师一起说出胡萝卜在旅行过程中都去国那些地方。（加深幼儿对器官名称的了解）

（二）出示人体大挂图组织孩子把器官图卡按顺序贴在大挂图上。

师：大家刚才都和这些器官宝宝交了好朋友，那现在它们有一点困难了，它们找不到自己的家了，怎么办啊？

幼：我们来把他送回家吧。

师：好，现在我们就帮忙把它们送回家，但是大家一定要想好在我刚才将的故事里它们的邻居都是谁，千万不能送错啊。

教师选几个幼儿来完成这项活动。

（三）教师组织幼儿每人一份来完成贴图。

四、组织游戏，体验乐趣

师：在大家的努力下，器官宝宝都找到了自己的家，它们非常高兴想和大家来玩游戏，一会我们就变成器官宝宝来找自己的家。

把幼儿分成五组，每组幼儿分别扮演牙齿、胃、小肠、大肠和食物，播放音乐，幼儿随音乐按消化系统顺序排成两排，剩下的幼儿和教师一起扮演胡萝卜在器官中随音乐做动作，在音乐中结束。

【活动延伸】

安排一次美术活动课教师组织幼儿把器官消化图能按自己的理解完整的画出来。并且在以后还要进一步让孩子了解各器官的功能和作用，让他们知道应该多吃哪些食物才会对身体有好处，并教育孩子不挑食，做个健康宝宝。

【教学反思】

在整个活动中，孩子比较感兴趣，孩子们听完故事后，很快知道食物消化的整个过程，食物经过嘴巴、接着到胃，胃把食物嚼得更碎、更小、再到小肠，小肠把食物中的营养吸收，再把没用的残渣送到大肠去，最后变成大便送出体外。特别在出示消化系统图时，孩子们特别好奇，这时，要借助一个模拟人体器官，让幼儿去摸区感受，这样效果就会更好些。

“菊花的组织培养”教学设计 篇5

在实践当中利用植物的组织培养技术, 不但能实现植物优良品种的快速的大量的繁殖, 还能培养出不含病毒的植物幼苗, 从而实现植物的连续快速生产, 缩短育种周期等。下面主要讲述初步掌握植物组织培养的基本操作原理及基本操作技术。

为体现学生的主体地位, 培养学生的参与意识, 在引导学生学习“植物组织培养的基本过程”时以案例开始, 通过学生的阅读进行资料的收集与整理, 从而提炼归纳出基本概念和基本操作流程。同样这种思想在“影响植物组织培养的因素”中也得到了体现。所不同的是, 这部分内容鼓励学生积极思考与讨论, 发表自己的见解, 学会在合作中学习, 在合作中提高。关于“实验操作”部分, 由于学校缺少这方面的仪器与设备, 而且本课题耗时太长 ( 近一个月) , 不好实际操作, 就借助录像资料短片进行教学, 效果也还好。

二、教学目标

1. 知识目标: 识记细胞分化、脱分化、再分化的概念; 说明植物组织培养的基本原理; 了解植物组织培养的基本技术操作流程。

2. 能力目标: 充分利用提供的材料, 培养学生快速阅读并收集和分析资料的能力, 促使学生综合能力的提高。发挥学生的积极性、自觉性和创造性, 引导他们进行科学实验的探究。

3. 情感态度与价值观目标: 结合生产生活实际, 通过学习植物组织培养技术, 激发学生热爱自然、热爱科学的兴趣与热情, 砥砺科学精神, 端正科学态度, 提高学生的综合实践能力。

三、教学重点与难点

重点: 植物组织培养的基本原理和植物组织培养过程中使用的无菌技术。

难点: 植物组织培养过程中使用的无菌技术。

四、教学过程

1. 创设情景, 导入新课

马铃薯的块茎能够发芽生根, 秋海棠的叶片能够长成新的植株。自然界的这些现象促使科学家去思考、解释。植物的体细胞或一小部分组织也能像受精卵那样发育为新的个体吗? 这节课我们就来探究这一问题。

2. 目标展示, 明确任务

以菊花的组织培养为例, 这节课我们来完成以下学习目标:

( 1) 说明植物组织培养的基本原理;

( 2) 识记细胞分化、脱分化、再分化的概念;

( 3) 了解植物组织培养的基本技术操作流程。

请大家快速阅读课本32页的内容, 尝试解决以上三个问题。

3. 检查提问, 知识点拨

( 学生自学后小组讨论, 五分钟后边提问边探讨深入)

师: 什么是植物细胞的全能性?

生: 已分化的植物细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。

师: 很好。那么, 植物细胞全能性的物质基础是什么呢?

生: 生物体的每一个细胞都含有本物种所特有的全套遗传物质, 都有发育成完整个体所必需的全套基因。

师: 你认为植物组织培养的理论依据是什么?

生: 植物细胞的全能性。

师: 好。既然每一个细胞的遗传物质一样, 为什么在以后的发育过程中逐渐在形态、结构和功能等方面出现了差异? 这是一种什么现象?

生: 是细胞的分化。植物个体发育过程中, 细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异, 形成这些差异的过程叫做细胞的分化。细胞分化的实质是特定基因在一定的时间和空间选择性表达的结果。

师: 细胞分化后细胞内的遗传物质并不发生改变, 但形成不同的RNA和蛋白质。因此细胞的结构和功能变得不一样。通过阅读资料, 你能总结出脱分化的概念及脱分化所需要的条件吗?

生甲: 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程, 称为植物细胞的脱分化, 或者叫去分化。

生乙: 脱分化所需要的条件有营养物质如水、无机盐、植物激素、特殊有机小分子等。

生丙: 还需要适宜的PH值、温度、光照等条件。

生丁: 还需要将植物组织或细胞进行脱离母体处理以及整个操作过程的无菌技术。

师: 大家答的非常全面, 非常好。那么谁能说说离体组织或细胞脱分化后形成了什么? 它具有怎样的特点?

生: 离体的组织或细胞脱分化后形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则, 是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。

师: 很好。脱分化形成的愈伤组织继续进行培养, 又可以重新分化成根或芽等器官, 这个过程叫做再分化。谁能总结植物组织培养的大致过程?

( 一生板写) 离体的植物器官、组织或细胞→愈伤组织→芽根→植物体

师指导说明两点: 1用于离体的植物器官或组织片段, 叫做外植体。2愈伤组织经诱导先生出芽再生根, 如果反过来先诱导生根, 则生芽很困难, 植物组织培养不易成功。

4. 提出问题, 启发探究

在进行植物组织培养实验时, 会有哪些影响实验成功的因素呢? 阅读课本33页内容, 然后用简洁精练的语言总结出至少4项影响因素。 ( 五分钟后, 小组讨论交流, 组长回答)

生: 我们认为影响植物培养的因素有以下几条: 1植物材料的选择; 2配制适宜的培养基; 3恰当使用植物激素; 4适宜的PH值、温度、光照等。

师: 非常好。其他小组有没有需要补充的内容?

生: 我们认为无菌操作是关系植物组织培养是否成功的关键。

师: 很好。如果我们进行菊花的植物组织培养应该选择什么部位的材料? 为什么? 如果让你自选材料, 你打算选择什么植物呢? ( 小组讨论。2分钟后, 小组长发言)

生: 应选用菊花的未开花的茎上部新萌生的侧枝。原因是该部位生长快, 生理状况好, 遗传性状稳定, 且易脱分化, 产生愈伤组织。如果让我们自选材料, 我们将选择容易进行扦插或嫁接等无性繁殖的植物, 如: 芦荟、月季等。

师: 回答的非常好。将选取的植物材料进行消毒后接种在适宜的培养基上, 进行脱分化诱导, 那么进行植物组织培养的MS培养基与实验室培养微生物的培养基在组成上有什么不同吗?

( 生回忆前面学过的内容, 进行比较得出结论)

生: 微生物培养基以有机营养为主, 如牛肉膏、蛋白胨固体培养基, 而MS培养基则需提供大量无机营养并添加植物激素。

师: 很好。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。阅读课本33页表格及旁栏内容, 体会植物激素在植物组织培养中的作用。

( 教师准备播放录像, 2分钟后师生观看菊花的组织培养的实验操作过程录像约10分钟)

师: 录像看完了, 大家思考问题: 为什么要对外植体进行消毒? 如何消毒? 在菊花的植物组织培养过程中师如何到无菌操作的?

生甲: 植物材料小、抗性差, 外植体上残留的杂菌与之争夺营养并可能产生有害物质, 造成培养物死亡。

生乙: 先用流水冲洗再用软刷轻轻刷洗……

5. 课堂小结, 达标练习

师: 这节课我们共同探讨了菊花的植物组织培养原理及其过程, 下面我们进行5分钟的达标练习。5分钟后展示学生答案并进行讲评。

五、板书设计

专题三课题1———菊花的组织培养

1. 重要概念: 1细胞的全能性; 2细胞分化; 3脱分化; 4愈伤组织; 5再分化

2. 原理

3. 过程: 离体的植物器官、组织或细胞→愈伤组织→芽根→植物体

六、教后反思

红花长寿花的组织培养 篇6

长寿花 ( Kalanchoe blossfeldiana ) 为景天科伽蓝菜属多年生常绿肉质植物, 原产非洲马达加斯加岛, 别名圣诞伽蓝菜、寿星花、假川莲、圣诞伽。长寿花植株矮小, 株形紧凑, 叶肉质, 叶色碧绿, 花小, 为圆锥状聚伞花序, 排列紧密拥簇成团, 花期从12 月下旬开始, 可持续到第2 年5 月初, 故名长寿花。性喜温暖湿润的环境, 喜阳光充足, 也能耐半荫, 不耐寒, 属于比较好养的盆栽花卉。长寿花品种繁多 (单瓣、重瓣) , 色彩丰富 (大红、黄色、橘黄色、粉色、玫粉色、白色等) , 栽培管理简单, 花盛期正值圣诞、元旦、春节, 可为喜庆节日增添欢乐气氛, 开花时把不同花色品种组合在一起, 更具观赏价值, 还可以用在公共场所的花槽、橱窗、大厅等栽培, 因此应用广泛, 在花卉中具有广阔发展前景。传统的繁殖方法有扦插繁殖 (茎插、叶插) 和播种繁殖, 这些方法容易导致病毒的积累、品种退化、繁殖率低, 影响长寿花的产量和品质, 从而严重制约了其商品化生产。本次试验用花色为红色的长寿花茎段、叶片进行组织培养, 目的是找出长寿花组织培养前消毒剂的最佳配比和最佳消毒时间, 以及最适合诱导长寿花茎段、叶片产生愈伤组织和不定芽增殖、生根培养的激素配比, 对优良品系的保存和扩增提供理论数据支持, 利用组培方法可快速大量繁殖。

2材料与方法

2.1 实验材料

使用材料取自盆栽红色长寿花的叶片和茎段。

2.2 实验材料处理

2.2.2 取样与消毒灭菌处理

组织培养前, 先从室内培养的盆栽植株上取生长旺盛的长寿花叶片和嫩茎作外植体, 取材后放入烧杯里, 用洗衣粉水洗去表面尘土和微生物后, 放到自来水管下进行冲洗60min, 然后放入到瓶中, 在超净工作台上再迅速用无菌蒸馏水冲洗2 遍后等分为2 份。每个消毒剂处理各接15 瓶, 每瓶接种4 块, 处理方法见表1。最后用无菌蒸馏水冲洗6 次后, 将叶片横切和纵切后切成1cm×1cm大小, 将嫩茎切成1cm左右的茎段作外植体用。

2.2.3 接种

在无菌条件下, 按照消毒处理Ⅱ的方法处理材料后, 按植物生长方向接种到不同激素浓度的初代培养基1~6上, 每种培养基各接20 瓶, 每瓶接种4 块, 其中叶片和茎段各10 瓶, 然后置于培养室内培养, 接种10d后观察记录愈伤组织以及不定芽的发生情况。从初代培养基培养出的不定芽中选择形成较好的材料, 接种到增殖培养基7~8 上, 每个处理20 瓶, 每瓶接种3 块, 15d后开始统计不定芽生长形成情况。从增殖培养基培养出的生长健壮的无根丛生芽中选择生长较好的材料, 接种到生根培养基9~10 中, 每瓶2 苗, 接种20 瓶, 20d后注意观察根形成情况并统计各处理生根数目。以上接种过程必须保证每一步在无菌条件下, 尽可能减少污染率。

2.2.4 培养基配比

基本培养基为MS, 琼脂为6g, 蔗糖浓度为3%, p H值为5.8。初代培养基为:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L; 增殖培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。 生根培养基为:1/2MS+NAA 0.1mg/L;1/2MS+NAA0.2mg/L。培养室内温度为25℃±2℃, 光照强度1500~2000Lux, 每天光照12 h, 补光灯在光照不够的条件下及时补光。

3结果与分析

3.1 不同消毒剂处理的消毒效果

进行初代培养10d后对120 瓶培养情况进行统计, 结果见表2。处理Ⅰ、处理Ⅱ的消毒效果差异明显, 处理Ⅱ的消毒效果是处理Ⅰ的约17 倍, 因此单独使用酒精对长寿花外植体进行消毒处理, 污染率高, 效果不太好;而用75%酒精 (0.5min) +0.1% Hg Cl2 (8min) 对长寿花外植体消毒效果明显。

3.2 不同外植体诱导愈伤组织的时间

经过初代培养10d后对每种培养基中茎段和叶片愈伤组织形成情况进行统计, 从表3 可看出, 由于培养基配比不同, 如果培养基配比合适, 长寿花叶片在第10 天就可以形成愈伤组织, 而茎段需要在第15 天左右才能形成, 其诱导时间比用叶片作为外植体的时间要长约5d左右。

3.3 激素对初代培养的影响

将经过消毒组合Ⅱ处理好的外植体接种到初代培养基1~6, 培养10d后, 大部分叶片的切块边缘首先开始膨大, 长出淡绿色的愈伤组织, 并呈疏松的颗粒状;有部分叶片在切口处直接产生不定芽;接种20d后愈伤组织表面出现绿色芽点, 开始分化出0.2~0.5cm的不定芽;35d后顶芽萌动并长出侧芽和分枝。

表4 是第36 天出芽的外植体统计数, 激素的影响由表4 中可以看出。在培养过程中还发现, 当6-BA 2.0mg/L 、NAA0.1mg/L时, 在后期出现部分芽苗玻璃化、失绿现象;当NAA0.2mg/L、6-BA 2.0mg/L时, 分化出的不定芽形态明显弱小;当6-BA 1.0mg/L、NAA0.2mg/L时, 诱导率较高, 而且芽苗生长健壮, 芽苗利用率也好。因此, 初代培养的最适培养基配比为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.2mg/L。

3.4 激素对增殖培养的影响

将初代培养得到的芽丛和分枝切割成带1~2 个节的小段, 转接到培养基7~8 上, 约15d后, 就可以不断长出大量的芽和分枝, 培养基7 和8 中的芽都有增殖, 但是培养基配比8 的效果好, 分化丛生芽芽体健壮, 数量多, 长势良好, 适合叶、茎段的继代培养。当NAA为0.1mg/L时, 有部分芽生长良好, 但部分芽体长势较略差, 长不高, 影响丛生芽的大量继代增殖 (见表5) 。

3.5 激素对生根培养的影响

切取分化增殖所得到的高约2~3cm生长健壮的丛生芽苗, 将分枝切成带有2 个节的茎段, 转接种到添加不同浓度NAA的生根培养基9~10 中。在生根培养进行到第30 天的时候, 对丛生芽的生根情况进行了统计, 结果见表6。

当在1/2MS基本培养基中添加NAA浓度为0.1mg/L (培养基9) 时, 生根率为85%, 平均生根数达到12.6 条, 根长为1. 0cm左右。当添加NAA浓度为0.2mg/L (培养基10) 后, 诱导的丛生芽生根率升高, 达到97.5%, 平均生根数有13.8 条左右, 并且根粗壮, 苗长势良好, 根长为1.4cm左右。

4炼苗和移栽

打开瓶口炼苗2~3d, 除高温高湿的夏季移栽容易泛滥死亡外, 其他季节只要温度在15-25℃范围均可进行。用镊子小心挖出试管苗, 放入温水中浸泡20min左右, 再于温水中清洗掉根部残留的培养基, 除不掉的培养基可在水管下冲洗干净。移栽到经过消毒河沙或蛭石盆内, 每隔2~3d浇1 次水, 使基质保持半干状态, 经过2 周的过度, 即可上盆定植。盆土选用腐叶土、原土、河沙为4:4:2 的混合配制较好, 每隔3~5d用浇水1 次, 保证半干状态, 移栽成功率高, 如果此期间缺水, 则会出现移栽后干枯的现象, 降低移栽成活率。待2~3月后植株长势良好、根系发育正常后, 可进入粗放式常规管理。

5结论与讨论

由于长寿花叶片肉质光滑, 易于表面灭菌消毒, 无菌操作简单, 切割过程也容易操作, 瓶苗移栽后管理较粗放, 组培繁殖极易见效率, 经济效益亦是可观的。

因为植物体表明常附有各种各样的微生物, 无菌操作过程中, 对于植物材料的表面的消毒的尤为重要, 因为一旦带进培养基, 微生物就会迅速滋生造成植物材料死亡。75%酒精 (0.5min) +0.1% Hg Cl2 (8min) 的消毒处理有更强的杀菌能力和穿透力, 而且有湿润作用, 对长寿花叶片和茎段的消毒处理效果明显。

植物激素的种类和配比, 是使植物组织分化出苗和快速增殖的重要因素, 通过此次不同梯度培养基配比, 发现虽然都能使植物分化出苗和增殖, 但是低浓度和高浓度的激素配比使植物分化出苗较慢, 同时细胞分裂素和生长素比例过高, 导致玻璃化苗的产生, 其中MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L激素配比最佳, 利于长寿花愈伤组织的生长和分化, 进行初代培养;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L是最有利于增殖的培养基;最适生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L。

同株植物不同器官及不同着生部位, 往往繁殖能力也有所不同, 长寿花叶片较其茎段容易形成愈伤组织, 叶片内部的植物激素水平能够在接种后得以维持, 在进行组织培养快繁时, 考虑到市场和生产成本, 适合作为外植体, 缩短整体培养时间。长寿花的组织培养相对于扦插繁殖, 获得的幼苗差异不大, 繁殖速度快, 易于批量生产和管理方便, 可以段时间内获得更多的生根苗, 使优良品种在短短数年内, 保留品种, 实现长寿花工厂化批量生产。

摘要：本试验以长寿花 (Kalanchoe blossfeldiana) 叶片、茎段作为外植体, 进行了初代组织培养, 并进行增殖、生根培养和炼苗移栽, 在建立长寿花组织培养无菌体系的基础上, 对比了外植体不同灭菌方法对灭菌效果的影响, 以及不同激素浓度对长寿花叶片、茎段芽分化、不定芽增殖及其生根的影响。结果表明:75%的酒精 (0.5min) +0.1%升汞 (8min) 具有很好的消毒作用;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L是不定芽分化的最佳培养基配比;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L是不定芽增殖的最佳培养基配比;1/2MS+NAA0.2 mg/L是生根的最佳培养基配比。

关键词：外植体,长寿花,培养基,愈伤组织,增殖,生根

参考文献

[1]孙男, 李青.长寿花组织培养技术[J].中国观赏园艺研究进展, 2010 (7) :287

[2]黄海帆, 李保印, 李平.影响长寿花离体培养及植株再生的几个因素[J].中国农学通报, 2004, 20 (2) :12-14

[3]周南翎, 洪军孟.长寿花快速繁殖技术[J].农业科技通讯, 2001 (11) :15.

[4]吴丽芳, 屈云慧, 杨春梅.长寿花的组培快繁[J].云南农业科技, 2001 (4) :21.

[5]孙新政, 李庆伟, 梁明勤.白花长寿花组培快繁技术研究[J].中国农学通报, 2006, 22 (2) :39-42.

[6]高建莉, 王定开.云南农业科技[J].2009 (5) :13

[7]陈梅, 莫饶.长寿花离体快繁研究[J].安徽农业科学, 2007, 35 (32) :10336-10337.

北五味子组织培养的研究 篇7

1 材料与方法

1.1 样品及激素

北五味子种子, 购自通化市通化县集安种子公司。6-苄氨基腺嘌呤 (6-BA) 、萘乙酸 (NAA) , 购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。

1.2 样品的处理

用纯化水洗净北五味子种子, 同时利用水选法漂去空粒、秕粒, 然后用75%乙醇消毒1 min;以无菌水清洗2次后, 再用0.1%升汞浸泡8~10 min;无菌水冲洗5次, 每次3~5 min[3]。将消毒后的种子接种于MS基础培养基上, 培养温度控制在26℃左右, 光照强度是2 000~3 000 lx, 每日光照12~16 h。要求培养室清洁卫生, 紫外线消毒, 减少污染。

1.3 外植体的获取

剪去没被杂菌污染、生长健壮、无黄叶幼苗的3~5 cm嫩茎的叶片和叶柄, 切取0.8~1.0 cm的带有1个腋芽的茎段, 并快速接种到无菌的诱导芽的培养基上;置组织培养室中, 培养温度为25℃, 光照强度为2 000~3 000 lx, 每日光照12~16 h[4]。

1.4 继代培养

将长至2 cm的芽从茎上切下, 接种到6-BA浓度为2.0 mg/L, NAA浓度分别为0.10, 0.20, 0.40 mg/L的继代培养基上培养。确定出最有利于北五味子芽增殖的NAA浓度;然后用该浓度的NAA与浓度分别为1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 mg/L的6-BA进行组合, 找出更有利于北五味子芽增殖的6-BA浓度。最后继续培养在这2种最佳浓度激素下所培养出来的芽。培养温度为20~25℃, 每日光照10 h, 光照强度为800~1 000 lx, 4周后可长成芽丛, 将芽切下继续扩大繁殖, 直到所需数量。

1.5 生根培养

将生长健康、无黄叶、高度大于3 cm的苗转接于NAA浓度分别为0.05, 0.10, 0.20, 0.30, 0.40 mg/L的生根培养基上。培养温度为20~25℃, 每日光照14 h, 光照强度为2 000~3 000 lx, 4~6周后可生根。

1.6 炼苗与移栽

将生长健壮、苗高度达到3 cm、生根数为3条以上、根长达1 cm以上并有须根的苗的瓶口打开, 置正常光照、室温环境下锻炼3 d;然后将苗取出, 洗净根部培养基, 栽植于花盆中, 花盆中的栽培介质是经过消毒的腐质土。保持相对湿度为85%, 培养温度为20~25℃, 置正常光照条件下培养, 1周后可逐渐降低相对湿度至自然条件, 4~5周后当苗长出新叶及新根可进行移栽。

1.7 培养基的准备

初代培养基MS+6-BA:6-BA浓度分别为1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 mg/L, p H值控制在5.6~6.0之间。

继代培养基MS+6-BA+NAA:第1组继代培养基中6-BA浓度为2.0 mg/L, NAA浓度分别为0.10, 0.20, 0.40 mg/L;第2组继代培养基中NAA浓度为0.2 mg/L, 6-BA浓度分别为1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 mg/L;p H值控制在5.8~6.0之间。

生根培养基MS+NAA:NAA浓度分别为0.05, 0.10, 0.20, 0.30, 0.40 mg/L, p H值控制在5.8~6.0之间。

2 结果与分析

2.1 不同浓度激素对腋芽诱导的影响 (结果见表1)

由表1可知, 腋芽萌发数先是随着6-BA浓度的升高而增加, 在浓度达到2.0 mg/L时腋芽的萌发率为52%, 当进一步升高6-BA浓度反而对腋芽的萌发有一定抑制作用。因此, 不是激素浓度越高对腋芽的萌发越有利。对于北五味子来说, 促使其腋芽萌发的6-BA的最佳浓度为2.0 mg/L。

2.2 不同浓度激素对芽增殖的影响

在NAA浓度分别为0.10, 0.20, 0.40 mg/L的条件下, 切口处产生的愈伤组织随着NAA浓度的升高而增多。但是如果产生的愈伤组织数量过大反而会影响芽的生长和分化。当NAA浓度为0.20 mg/L时, 切口处产生的愈伤组织适量, 据资料表明, 此时期的NAA浓度有利于芽的增殖。因此, 采用浓度为0.20 mg/L的NAA与不同浓度的6-BA组合。不同浓度6-BA对芽增殖的影响见表2。

由表2可知, 随着6-BA浓度的不断升高, 芽增殖倍数也随之增大。虽然在6-BA浓度为3.0 mg/L时芽的增殖倍数最大, 但在这种情况下茎节间距会缩短, 叶皱缩。因此, 在芽增殖培养过程中, 6-BA的最佳浓度选为2.0 mg/L。

2.3 不同浓度激素对生根培养的影响 (结果见表3)

由表3可知, 当NAA浓度低于0.05 mg/L或高于0.40 mg/L时, 完全抑制幼苗生根, 在浓度为0.10 mg/L和0.30 mg/L的情况下, 虽然可以生根, 但生根数量低于浓度为0.20 mg/L时所培育出来的幼苗。

2.4 炼苗与移栽

将长有3条以上根且长度达到1 cm的幼苗栽植于营养盆中 (营养盆中的栽培介质为经过消毒的腐质土) 。保持相对湿度为85%, 逐渐过渡到自然条件, 培养20 d后移栽, 幼苗成活率可达到90%以上。

3 结论

通过对五味子组织培养的探究, 得出这样的结论:以带腋芽的北五味子嫩茎为外植体, 在MS+2.0 mg/L 6-BA培养基中, 诱导芽的效果最好;在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA培养基中, 芽的分化率及增殖倍数最佳, 苗体健壮;在MS+0.20 mg/L NAA培养基中, 试管苗的生根率达96.2%;当苗高度为3 cm, 每株生根数为3条以上, 根长达1 cm以上时, 栽种于经过消毒的土壤中, 且保持一定湿度, 再经过20 d的培养后移栽, 五味子幼苗的成活率可达到90%以上。

参考文献

[1]李时珍.本草纲目[M].北京:人民卫生出版社, 1975.

[2]宋万志, 马林, 黎莲娘.兴山五味子的质量研究[J].中国中药杂志, 1991, 16 (4) :204-207.

[3]周鑫.五味子的组织培养[J].中国林副特产, 2001, 11 (4) :6-7.

3个品种红掌的组织培养研究 篇8

1材料与方法

1.1取材及消毒

供试材料为A1特伦萨、A2火鹤、A3粉冠军。取幼嫩的带腋芽茎段、尚未展开的幼嫩叶片,用洗衣粉轻轻洗净材料表面。在自来水下冲洗30min左右,在超净工作台内用75%酒精泡30S,再用0.1%的升汞浸泡7~9min,然后用无菌水洗5次,每次5min,切成1×1cm小块接种到诱导培养基。

1.2供试培养基及培养条件

愈伤组织诱导培养基:1#1/2MS+BA1.0mg/L+KT0.1mg/L+2,4-D0.2mg/L和2#1/2MS+KT2.0mg/L+NAA0.2mg/L;芽分化培养基:3#1/2MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L和4#1/2MS(NH4NO3400mg/L)+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;生根培养基:5#1/2MS+NAA0.5mg/L、6#1/2MS+AC0.5mg/L和7#1/2MS,以上培养基p H5.8,琼脂为6g/L,于121℃杀菌20 min。培养条件:愈伤组织诱导及扩大培养温度25℃±1℃;小苗分化和生根为光照14h,黑暗10h,光源由LED灯提供,光强1500 Lx。

2结果与分析

2.1愈伤组织诱导研究

诱导培养15d后,叶片边缘逐渐膨胀出现愈伤,茎段变粗,暗培养比光照下生长快,光照下叶片容易褐化死亡。愈伤诱导率最高的品种为A3,最低的是A2,最佳培养基为1#,茎段愈伤诱导率最高达100%,叶片最高达90%(表1)。

2.2芽分化研究

经过诱导培养的愈伤组织多次转接,即可达到一定基数。选取黄绿色质硬的愈伤组织块进行分化培养,20d后逐渐长出密集芽点,60d后能形成完整的植株。不同品种生长势有很大区别,分化率不同,A3品种表现为较强的分化能力。3#培养基分化芽少,叶片较大,茎粗;4#培养基分化芽丛多,整体苗小,平均每个愈伤块分化苗7.5个。通过使用2次4#培养基再使用1次不加激素的4#培养基交替培养芽丛,得到的苗生长健壮。

2.3生根培养研究

将获得的小苗接种于生根培养基中,10d后逐渐有新根长出,生长迅速。5#培养基根系生长过快,苗生长慢,不利于壮苗。7#培养基可能由于细胞分裂素残留部分茎段愈伤化。6#培养基能实现根茎叶同比例生长,最佳的定植培养基为1/2MS+AC0.5mg/L。红掌组培苗生根较容易,不需加太多的生根剂和诱导生根的物质。

3讨论

红掌叶片愈伤组织诱导是成功的关键一步,可通过尽量减少消毒时间、暗培养、降低无机盐含量等方式提高诱导率。愈伤分化阶段主要是防止变异苗的产生,在达到增殖倍数的情况下,尽量降低激素浓度。红掌组培苗生根相对容易,主要目标是达到壮苗效果同时带有2-3条根。基因型是影响红掌组培成功的重要因素,每个品种的再生率差异很大[3],对每个品种适应的最佳培养基需要继续深入研究。

参考文献