芦荟大黄素

芦荟大黄素（共3篇）

芦荟大黄素 篇1

通腑胶囊是医院制剂,主要由大黄、胆南星、赤芍等中药组成,具有通腑泻热,活血化痰。用于中风闭证痰热腑实。本实验采用高效液相色谱法对通腑胶囊中的大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素的含量进行测定,结果表明,该方法重复性好,简便可靠,可为通腑胶囊质量控制提供参考依据。

1 仪器与试剂

戴安Ultimate3000高效液相色谱仪(配Chromeleon工作站,紫外检测器);色谱柱:Waters C18(250×4.6mm,5μm)。

芦荟大黄素对照品批号:110795-200504、大黄酸对照品批号:110757-200206、大黄素对照品批号:110756-200110、大黄酚对照品批号:110796-200513、大黄素甲醚对照品批号:110758-200610均购自中国药品生物制品检定所,通腑胶囊(批号:090701、100224、100715)甲醇、磷酸为色谱纯,水为乐百氏纯净水。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Waters C18(250×4.6mm,5μm),以0.1%磷酸:甲醇(15∶85),流速为1.0µL/min,检测波长为254nm[1],柱温为35℃,进样量:10μL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品储备液的制备

精密称取大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素5种对照品适量,加甲醇分别制成每1µL含大黄素80.8μg、大黄酸79.6μg、大黄酚82μg,大黄素甲醚40μg、芦荟大黄素101.6μg的溶液;分别精密量取上述对照品溶液各2µL,混匀,即得混合对照品溶液(每1µL中含大黄素16.16μg、大黄酸15.92μg、大黄酚各16.40μg,含大黄素甲醚8.0μg、芦荟大黄素20.32μg)。

2.2.2供试品溶液制备

取通腑胶囊内容物,研细混匀后,精密称取0.8g,置具塞圆底烧瓶中,精密加入甲醇30µL,称定重量,加热回流1h后,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液10µL置圆底烧瓶中,减压蒸干,残渣加8%盐酸溶液10µL,超声处理5min,再加三氯甲烷10µL,加热回流1h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,合并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液再用三氯甲烷提取3次,每次15µL,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇使溶解,转移至10µL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除大黄以外的其余药材,按通腑胶囊制备工艺制备,按2.2.2项下方法制备阴性对照溶液。将供试品溶液,阴性对照溶液以及对照品溶液,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定。结果,阴性无干扰,见图1。

2.3适用性试验

取供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素5成份的色谱峰与相邻色谱峰的分离度均>1.5,理论塔板数按大黄素计算不低于5000。

2.4线性关系考察

分别精密吸取上述混合对照品溶液1、3、5、10、15、20μL,按上述色谱条件测定。以进样量(μL)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程分别为:大黄素y=1.2311x-0.152(R=0.9999);大黄酸y=1.0778x-0.1696(R=0.9999);大黄酚y=1.3672x-0.2075(R=0.9999);大黄素甲醚y=0.4303x-0.0682(R=0.9999);芦荟大黄素y=1.6315x-0.195(R=0.9999)。结果表明,大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素进样量分别在0.0162~0.323μg、0.016~0.318μg、0.0164~0.328μg、0.008~0.16μg、0.020~0.406μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取同一对照品溶液,按上述色谱条件,重复进样6次,计算大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素色谱峰面积的RSD分别为为0.95%、0.85%、0.18%、0.32%、0.56%。

2.6重复性试验

取同一批号的样品,按2.2.2项方法平行制备6份样品按上述色谱条件进样分析,计算大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素含量的RSD分别为1.05%、0.81%、0.96%、1.02%、1.54%(n=5)。

2.7稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、12h注入液相色谱仪,依法测定。计算大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素色谱峰面积的。RSD分别为1.18%、0.95%、1.04%、1.28%、1.68%(n=6)。结果表明,样品溶液在12h内稳定。

2.8回收率试验

取已知含量的供试品0.4g(批号:100224)6份,精密称定,分别加入各对照品溶液适量(大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素分别为1.5µL、1.5µL、4µL、2µL、0.5µL),按上述方法测定分析,大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素平均回收率分别为:99.0%、99.0%、99.2%、98.3%、99.4%;RSD分别为:0.90%、0.93%、1.16%、1.37%、1.62%(n=6)。

2.9含量测定

取3批供试品(按2.2.2项操作)在上述条件下进样分析,记录色谱峰面积,采用外标一点法计算大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素的含量。结果见表1。

3 讨论

3.1实验色谱条件采用药典方法[1]即达到较好的分离大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素的效果,且重复性好,检测波长曾考察过290nm、279nm,结果以药典方法254nm波长下较好,故测定波长选择254nm。

3.2样品处理考察了甲醇超声提取,结果甲醇超声30min及40min提取率比回流提取略低,故仍按药典方法采用回流提取。

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定通腑胶囊中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素含量的方法。方法 采用HPLC法,色谱柱:Waters C18(250×4.6mm,5μm),以0.1%磷酸:甲醇(15∶85)为流动相,流速1.0μL/min,检测波长:254nm,柱温:35℃。结果 大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素进样量分别在0.01620.323μg、0.0160.318μg、0.01640.328μg、0.0080.16μg、0.0200.406μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,平均回收率分别为:99.0%、99.0%、99.2%、98.3%、99.4%(n=6)。结论 该方法专属性强,重现性好,可用于通腑胶囊中蒽醌类成分的含量测定。

关键词：高效液相色谱法,大黄素,大黄酸,大黄酚,大黄素甲醚,芦荟大黄素,通腑胶囊

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2010:22.

芦荟大黄素 篇2

1 仪器与试药

仪器:LC-10ATVP高效液相色谱仪, UV DETECTOR K-2501紫外检测器, N3000工作站;FA1004电子分析天平 (上海良平仪表有限公司) 。

试药:芦荟大黄素对照品 (供含量测定用, 批号:110795-201007, 购于中国药品生物制品检定所) , 甲醇 (色谱纯) , 重蒸水 (自制) , 其余试剂均为分析纯。

2 含量测定

2.1 色谱条件

Dikma Diamonsil C18色谱柱 (Rp18 4.6mm×250mm, 5μm) , 甲醇-0.1%磷酸 (85∶15) 为流动相, 流速1.0mL/min;检测波长:254nm[1];柱温为室温。理论塔板数不低于3000 (以芦荟大黄素峰计算) 。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芦荟大黄素对照品适量, 加色谱纯甲醇制成每1mL含80μg的溶液, 摇匀即得。

2.3 供试品溶液的制备

取伤痛宁片10片, 研碎, 精密称取粉末约1.0000g, 置100mL具塞烧瓶中, 精密加入色谱纯甲醇25mL, 密塞, 称定重量, 加热回流1h, 放冷, 再称定重量, 用色谱纯甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液5mL, 置烧瓶中, 挥去溶剂, 加8%盐酸溶液10mL, 超声处理2min, 再加三氯甲烷10mL, 加热回流1h, 放冷, 置分液漏斗中, 用少量三氯甲烷洗涤容器, 并入分液漏斗中, 分取三氯甲烷层, 酸液再用三氯甲烷提取3次, 每次10mL, 合并三氯甲烷液, 减压回收溶剂至干, 残渣加色谱纯甲醇溶解, 移至10mL容量瓶中, 加色谱纯甲醇至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液, 再用0.45μm的微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.4 阴性供试液的制备

取缺大黄的伤痛宁片阴性样品, 依上述2.3法同法操作, 制得阴性供试液。

2.5 系统适用性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液各20μL, 按2.1色谱条件分别进样测定并记录色谱图。结果理论塔板数以芦荟大黄素峰计算不低于3000, 供试品液色谱中, 在与芦荟大黄素对照品溶液色谱峰出峰时间处有色谱峰, 而阴性供试溶液在对照品溶液的出峰时间处无色谱峰出现, 说明阴性无干扰, 对照品、供试品、阴性样品色谱图分别见图1、图2、图3。

2.6 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液12.5mL至100mL容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取2.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0μL对照品溶液分别注入液相色谱仪测定, 记录峰面积, 以峰面积 (Y) 对进样量 (X) 进行线性回归, 芦荟大黄素的回归方程为:y=3×106 X-10767, r=0.9994, 表明芦荟大黄素在0.020~0.2000μg范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验

按2.1色谱条件, 精密吸取同一供试品溶液10μL, 连续进样6次, 分别测得各次峰面积。结果芦荟大黄素6次平均峰面积为213073.24, RSD值为1.83%, 表明本法精密度良好。

2.8 稳定性试验

取同一批供试品溶液, 室温放置, 分别在0, 2, 4, 8, 10, 12h时进样1次, 测定芦荟大黄素峰面积。结果芦荟大黄素峰面积RSD为1.79%, 表明供试品溶液在12h内稳定。

2.9 重复性试验

取批号为100901的样品, 按2.3供试品溶液制备方法, 平行制备6份, 依2.1色谱条件测定, 结果芦荟大黄素平均含量为0.1479 mg/g, RSD=2.37%, 表明该方法的重复性好。

2.10 加样回收试验

精密称取本品粉末 (批号:100901, 芦荟大黄素含量:0.1479mg/g) 0.3600g, 共6份, 精密加入芦荟大黄素对照品溶液 (80μg/mL) 1.0、2.0、3.0mL, 按2.3供试品溶液制备方法制备供试液, 依2.1色谱条件进行含量测定并计算回收率[2]。结果见表1。

2.11 样品含量测定

取10批伤痛宁片样品, 按2.3供试品溶液制备方法制备样品液, 依2.1色谱条件进行含量测定, 按线性回归方程计算样品中芦荟大黄素的含量[3]。结果见表2。

3 讨论

伤痛宁片为益阳市人民医院中医科多年常用经方制剂, 经过二十余年临床实践表明其具有活血祛瘀、消肿止痛的功效及治疗跌打损伤、促进骨折愈合的作用, 其制剂方法为依处方量称取土鳖虫、延胡素等饮片, 双人核对无误后, 60℃电热恒温鼓风干燥20~36h, 控制含水量≤5%。粉碎、制粒, 干燥筛分后压成片重为0.3g的素片, 用Co60 (强度>4.0kGy) 辐射灭菌8h, 检验合格后按每瓶30片的规格分装而成。其以前质量控制方法为薄层定性, 没有成分定量质量控制方法, 本文研究结果结合临床疗效结果表明:采用HPLC法测定制剂中芦荟大黄素、延胡素乙素的含量, 结合三七、土鳖虫的薄层色谱鉴别和三七、土鳖虫、大黄的显微鉴别可有效的控制该制剂的质量。

摘要：目的 建立伤痛宁片中芦荟大黄素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定, Dikma Diamonsil C18柱, 以甲醇-0.1%磷酸 (85∶15) 为流动相, 流速1.0mL/min, 柱温:30℃, 检测波长:254nm。结果 芦荟大黄素的线性范围为0.02000.2000μg;平均回收率为98.41%, RSD为0.07% (n=6) 。结论 所用方法测定样品灵敏度高, 重复性好, 可用于伤痛宁片的质量控制。

关键词：伤痛宁片,芦荟大黄素,HPLC

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[M].北京:化学工业出版社, 2010:22.

[2]熊原, 赵子剑.高效液相色谱法测定人血浆中头孢噻肟[J].中国医疗前沿, 2011, 6 (17) :63-66.

芦荟大黄素 篇3

关键词：急性胰腺炎,芦荟大黄素,血小板活化因子,白介素-6,肿瘤坏死因子

大黄的游离单蒽醌类化合物包括大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和芦荟大黄素等,是其主要的有效成分。急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种并发症多、病死率高的严重危害人类健康的疾病,其发病机制复杂,有多种因素和炎性因子参与,一些细胞因子及炎性递质在急性胰腺炎的发生及发展中起重要作用[1,2]。本实验主要研究芦荟大黄素对大鼠急性胰腺炎炎性介质PAF、TNF-α及IL-6的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康SD大鼠54只,雌雄兼用,质量200~300 g,术前禁食12 h,自由进水。

1.2 实验药品与试剂

芦荟大黄素购自陕西森弗生物技术有限公司;牛磺胆酸钠,PAF标准品购自美国Sigma公司;大鼠IL-6 ELISA试剂盒、TNF-αELISA试剂盒购自武汉博士德公司。

1.3 实验动物分组

随机将大鼠分为3组(n=18):假手术组、AP模型组和芦荟大黄素治疗组(20 mg/kg)。各组大鼠分别于术后3、6、12 h取材。

1.4 大鼠急性胰腺炎模型的制作

大鼠于术前12 h禁食,自由饮水,戊巴比妥溶液2 mg/100 g行腹腔内麻醉,固定。经上腹正中正中切口入腹,提起十二直肠以小号血管夹分别夹住十二指肠段和肝门部胰胆管。在肝门处用TB针(4.5号针头,1 ml注射器)穿刺胰胆管,注射牛磺胆酸钠5 mg/100 g,持续1 min,停留5 min,然后拔出针头,去除血管夹,可观察大鼠胰腺组织明显水肿、出血,缝合腹壁各层。假手术组打开腹腔,翻动胰腺组织后关腹。芦荟大黄素治疗组于术后5 min将芦荟大黄素溶液通过股静脉给药。

1.5 标本采集

各组分别于术后3、6、12 h再次麻醉,经原腹部切口入腹,抽出腹腔积液,记录其量和性质。从下腔静脉采血2 ml,注入试管内凝固后,离心分离血清。TNF-α及IL-6以ELISA法测定。

1.6 统计学方法

数据以均数±标准差表示,组间比较用SPSS 13.0软件行t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-6的变化

术后3、6、12 h模型组血清IL-6水平较假手术组显著升高(P<0.01),术后12 h重症急性胰腺炎模型组血清IL-6水平是术后3 h的2.1倍。与模型组比较,芦荟大黄素组血清细胞因子IL-6的水平显著降低(P<0.01),见表1。

2.2 TNF-α的测定

术后3、6、12 h模型组TNF-α水平较假手术组显著升高(P<0.05)。芦荟大黄素组与模型组比较,血清肿瘤坏死因子水平明显降低,有显著性差异(P<0.05),见表2。

2.3 PAF的测定

术后3、6、12 h模型组血清PAF持续升高,与假手术组各时段比较差异有统计学意义(P<0.01),芦荟大黄素组与模型组比较血清PAF水平的降低程度差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

AP的发病机制十分复杂,早期胰腺细胞损伤可导致局部的炎症反应,随着疾病的进展,全身炎症反应综合征严重时可出现多脏器功能不全甚至多脏器功能的衰竭,病死率很高[3]。

IL-6在血中出现早、易检测,具有较高灵敏度和特异性,是判断TNF-α预后的重要指标。TNF-α是AP发生时体内重要的细胞因子之一,是导致胰腺及胰外器官组织释放其他炎性介质、细胞因子的重要启动因子,其与AP的严重程度密切相关[4]。急性坏死性胰腺炎时TNF-α子可作为始发因子[5]在细胞核亚细胞水平上激发一系列反应,诱导IL-1、IL-6等的基因表达,活化PLA2,使花生四烯酸分解产生PGE、TXA2等炎性介质。它还能促进多形核粒细胞和内皮细胞的黏附,从而促使内皮细胞炎症、核通透性增加,加剧炎症性损伤。在AP中,PAF作为较强的血小板聚集剂及血管活性脂类递质,是重要的增加血管通透性的炎性介质[6]。

本实验研究结果表明,PAF、IL-6、TNF-α水平明显低于重症急性胰腺炎模型组。因此,笔者认为,PAF、IL-6和TNF-α水平的降低可能与芦荟大黄素对它们的抑制作用有关。

参考文献

[1]Komatsu K,Shimosegawa T,Uchi M,et al.Erythropoietic protoporphyria with severe liver dysfunction and acute pancrcatitis[J].J Gastroenterol,2000,35(5):391-395.

[2]史学深,方驰华,朱明德,等.重症急性胰腺炎大鼠DDFA对肺损伤细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响[J].第四军医大学学报,2006,27(12):1093-1096.

[3]Raraty MG,Cormor S,Criddle DN,et al.Acute pancrcatifisand organ failure:pathophysiology,natural history and management strategies[J].Curt Gastroenterol Rep,2004,6(2):99-103.

[4]Pooran N,In&ram A,Singh P,et al.Cytokines(IL-6,IL-8,TNF-α):early and reliable predictors of severe acute pancreatitis[J].J Clin Gas-troenterol,2003,37(3):263.

[5]Mckay CJ,Gallagher G,Brooks B,et al.Increased monocyte cytokine production in association with systemic complication inacute pancreatitis[J].Br J Surg,1996,83(7):919-923.