荞麦黄酮复合物

荞麦黄酮复合物（精选4篇）

荞麦黄酮复合物 篇1

1. 材料

雌性SPF级昆明小鼠 (北京华阜康生物科技股份有限公司) ;唐山市开滦医院检验科提供白色念珠菌临床新分离菌株。荞麦黄酮复合物:采用正交试验法以水加分离剂 (壳聚糖) 提取荞麦黄酮复合物 (成熟技术) , 配伍葛根、天花粉、麦冬、玄参和麻仁的水提物制成;显微镜 (常州锐品精密仪器有限公司) 。

2. 方法

(1) 模型建立与分组。将75只昆明雌性小鼠随机挑出15只做空白对照组。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1 ml·d-1使小鼠处于假发情状态, 6天后将密度为2.5×106cfu·m L-1的菌悬液20μL (即白色念珠菌孢子接种量为5×104cfu) , 灌注入小鼠阴道内。在接种白色念珠菌孢子后第2—5天对小鼠进行模型鉴定:两次分别随机挑选5只进行外阴情况观察、镜检、处死后做阴道病理组织切片。结果发现外阴阴道肿胀并有脓性分泌物, 镜检有大量孢子并有菌丝生成, 观察阴道病理组织切片有充血、红肿即确定造模成功。造模成功后对60只小鼠进行随机分组:模型对照组、西药氟康唑组、中药洁尔阴洗液对照组、荞麦黄酮复合物高剂量组、荞麦黄酮复合物中剂量组、荞麦黄酮复合物低剂量组。

(2) 指标检测。颈椎脱臼处死小鼠后, 取阴道黏膜, Western Blot检测各组IGFBP7蛋白含量。

(3) 统计分析方法。计量资料表示, 所有结果比较均采用SPSS16.0软件进行, 计量资料数据采用方差分析。

3. 结果

如表显示, IGFBP7蛋白于正常对照组阴道黏膜有少量表达。模型组阴道黏膜IGFBP7蛋白含量明显增高 (P<0.01) 。中、西阳性药物及荞麦黄酮复合物高剂量组对IGFBP7蛋白的含量具有抑制作用。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液对照组作用相近 (P<0.01) 。

4. 讨论

念珠菌性阴道炎是一种由念珠菌在阴道内过度繁殖引起的疾病。迄今为止, 临床对本病的治疗重点还是西医抗真菌药物直接杀灭病原菌, 如氟康唑、制霉菌素等。药物的毒副作用和菌株的耐药性成为一个潜在的问题。随着对本病认识的深入以及医学微生态学的研究, 新的替代疗法不断出现:冲洗疗法、乳酸杆菌、硼酸及大蒜素治疗等。近年来, 我国医学不断发展, 许多学者应用念珠菌动物模型, 对中药制剂的安全性及有效性进行了研究。具有非常重要的社会意义、经济效益和极大的开发应用前景。胰岛素生长因子结合蛋白7 (IGFBP7) 是一种新发现的分泌蛋白, 通过结合IGF-iv, 进而对免疫起调控作用。本次在实验研究上, 主要进行了体外抑真菌实验和构建白念珠菌阴道炎小鼠模型以了解药物的疗效, 并探讨上述问题。在以后的工作中, 还可以筛选剂型稳定、效高、价廉、副作用少、顺应性好的药物进行广泛多层次研究, 更好服务于患者。

摘要：目的——观察荞麦黄酮复合物对小鼠白色念珠菌性阴道炎IGFBP7的影响, 评价荞麦黄酮复合物的疗效。方法——苯甲酸雌二醇刺激下构建小鼠白色念珠菌阴道炎模型, 以荞麦黄酮复合物为治疗组, 西药氟康唑和中药洁尔阴作为有效标准对照。以Western Blot法检测各组胰岛素生长因子结合蛋白7 (IGFBP7) 含量。结果——与模型对照组比较荞麦黄酮复合物, 可以抑制IGFBP7的高表达, 其高剂量组作用与中药洁尔阴组相近似, 并且呈一定的剂量依赖性。结论——荞麦黄酮复合物对小鼠白色念珠菌性阴道炎IGFBP7蛋白的高表达具有抑制作用, 具体机制有待进一步研究。

关键词：荞麦黄酮复合物,胰岛素生长因子结合蛋白7 (IGFBP7) ,白念珠菌性阴道炎,Western Blot法

参考文献

[1]梁君儿, 黎小斌, 何成群.香荷药条治疗白念珠菌性阴道炎的实验研究[J].实用医学杂志, 2000, 16 (12) :983—984.

[2]Wajapeyee.N, Serra.R.W, Zhu.X, eta.Oncogenic BRAF Induces Senescence and Apoptosis through Pathways Mediated by the Secreted Protein IGFBP7[J].Cell2008, 132 (3) :363—374.

苦荞麦中总黄酮提取工艺的研究 篇2

荞麦又名三角麦、乌麦、花荞。我国荞麦的种植面积广泛，尤其是四川省的凉山州。由于苦荞麦含有芦丁，所以也称芦西苦荞。苦荞麦的营养价值在于其富含黄酮类化合物，尤其富含芦丁。芦丁具有多种生理功能，能维持毛细血管的抵抗力，降低其通透性及脆性，是医药、食品的重要原料。

我国的荞麦资源虽然非常丰富，但对其工业产品的开发却不多见。目前对荞麦黄酮的粗提已有一些报道，一般采用索氏抽提法、热水提取法、碱提酸沉法以及有机溶剂浸提法。本文研究采用水浸提、乙醇浸提和超声波提取3种方法对苦荞麦中的黄酮类化合物进行提取，并将超声波提取的条件和黄酮类化合物的得率与另两种方法进行比较。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

苦荞麦，四川凉山;芦丁标准品，生化试剂;无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠，均为分析纯。

1.2 仪器

WFZUV-2000紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司;N-1001SWA旋转蒸发仪，上海爱朗仪器有限公司;KQ5200DB超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司;BIOFUGE STRATOS离心机，美国科峻公司;DK-S26电热恒温水浴锅，上海精宏试验设备有限公司;JXFM110锤式旋风磨，上海嘉定粮油仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液的制备和标准曲线的绘制

准确称取芦丁标准品10mg，加少量30%的乙醇，微热使样品溶化，用乙醇定容至50mL，得到浓度为0.2mg/mL芦丁标准储备液。

分别取0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL的芦丁标准储备液于25mL容量瓶中，各加5%的亚硝酸钠0.7mL，摇匀，静置5min，加入10%的硝酸铝0.7mL，摇匀，放置6min后，加入5mL的1%氢氧化钠，最后用30%乙醇溶液定容至25mL，静置10min，以试剂空白作参比，在510nm下测定吸光度，绘制标准曲线。得回归方程A=0.0169C-0.0134，相关系数r=0.9996。

1.3.2 水浸提试验

准确称取5g粉碎后的苦荞麦9份，在单因素试验的基础上，选择浸提温度、料液比和浸提时间3个因素，采用L9 (33)正交设计(表1)。将浸提液过滤，浓缩至10mL，再用30%的乙醇定容至100mL，摇匀，待测定。

1.3.3 乙醇浸提试验

准确称取5g粉碎后的苦荞麦9份，在单因素试验的基础上，选择浸提温度、料液比、浸提时间和乙醇浓度4个因素，采用L9 (34)正交设计(表2)。将浸提液过滤，浓缩至10mL，再用30%的乙醇定容至100mL，摇匀，待测定。

1.3.4 超声提取试验

准确称取5g粉碎后的苦荞麦9份，在单因素试验的基础上，选择提取温度、超声功率、提取时间和料液比4个因素(乙醇70%)，采用L9 (34)正交设计(表3)。将浸提液过滤，浓缩至10mL，再用30%的乙醇定容至100mL，摇匀，待测定。

1.3.5 样品中总黄酮含量的测定

取上述定溶液1mL加入到25mL的容量瓶中，用30%的乙醇补充到12.5mL。加入5%的亚硝酸钠0.7mL，摇匀，静置5min;加入10%的硝酸铝0.7mL，静置6min;再加5mL的1%氢氧化钠，用30%的乙醇定容至25mL，摇匀，静置10min后，以试剂空白作参比，用1cm比色皿在510nm下测定吸光度，根据回归方程得出提取液总黄酮浓度C，然后按下式计算出总黄酮的得率：

得率=(C×100×25)/5×1000

2 结果与讨论

2.1 水浸提试验结果

由表1可知：由于RB>RA>RC，所以水浸提中料液比对提取率的影响最大，而提取时间对提取率的影响最小。根据试验结果，可知水浸提法的最佳条件是A3B3C2，即料液比为1∶30, 85℃下浸提时间为5h。

2.2 乙醇提取试验结果

由表2可知：RD>RC>RA>RB，所以4种因素对苦荞麦中类黄酮提取效果影响的主次顺序为乙醇浓度>提取时间>提取温度>料液比。从结果可以看出，乙醇提取的最佳条件为A2B3C2D1，即提取温度为75℃、料液比为1∶30、提取时间为4h、乙醇浓度为70%。

2.3 超声提取试验结果

由表3可知：最佳条件为A2B3C3D2，即超声温度70℃、超声功率180W、提取时间为80min、料液比为1∶25，乙醇浓度为70%时最佳。从试验结果还可以看出RA>RB>RD>RC，即超声温度的影响最大，超声功率与料液比影响次之，而提取时间的影响最小。

2.4 水浸提法、乙醇浸提法、超声波提取法的比较

分别采用水浸提法、乙醇浸提法及超声波提取法的最佳条件提取苦荞麦黄酮，并对其得率进行比较。水浸提法最佳组合A3B3C2，提取率为0.63%;乙醇浸提法最佳组合A2B3C2D1，提取率为1.55%;超声波提取法最佳组合A2B3C3D2，提取率为1.76%。

由结果可知：在3种提取方法中，超声波提取法类黄酮的得率最高，乙醇浸提法次之，水浸提法中类黄酮的得率最低。而且超声波提取法无论在提取温度、提取溶剂使用量上都要低于水浸提法和乙醇浸提法，尤其是在提取时间上，明显低于另外两种方法。所以，超声波提取法在苦荞麦中类黄酮的提取过程中，表现出了一定的优势。

3 结论

水提法的最佳提取条件是：提取温度80℃、料液比1∶30、提取时间5h，提取率是0.63%;乙醇提法的最佳提取条件是：提取温度75℃、料液比1∶30、提取时间4h、乙醇浓度70%，提取率是1.55%;超声波法的最佳条件是：乙醇浓度70%、提取温度70℃、超声功率180W、提取时间80min、液料比1∶25，提取率是1.76%。

由此可见，在苦荞麦类黄酮的3种提取方法中，超声波提取法的提取效率高于水浸提法和乙醇浸提法，而且超声波提取工艺简单，无任何污染。因此，超声波提取法是一个理想的提取黄酮类物质的方法，具有广阔的应用前景。

摘要：本研究以苦荞麦为原料, 采用了水提取、乙醇提取、超声波提取3种方法提取苦荞麦中的黄酮类化合物。结果表明:超声波提取法的提取效率高于水浸提法和乙醇浸提法, 其最佳提取条件:用浓度70%的乙醇, 料液比为1:25, 在70℃下, 超声功率为180W, 提取时间80min, 黄酮类化合物的得率可达到1.76%。

关键词：苦荞麦,总黄酮,提取工艺

参考文献

[1]曹艳萍.苦荞麦麸皮中总黄酮的乙醇提取工艺研究[J].食品科学, 2005, 26 (3) :99～100.

[2]肖诗明, 张忠, 李勇, 等.苦荞麦麸皮中黄酮的提取工艺条件研究[J].食品科学, 2006, 27 (1) :156～158.

[3]董文斌, 徐颖, 孙建, 等.花生壳中黄酮类的提取工艺条件的研究[J].食品工业, 2003 (1) :45～46.

荞麦黄酮复合物 篇3

影响植物愈伤组织诱导、继代生长和次生代谢产物含量的因素很多, 主要可以分为植物自身因素、培养基因素和环境因素。植物因素包括植物的基因型、外植体的来源、种类及生理状态等;培养基因素包括培养基的种类、成分和配制方法等;环境因素包括培养材料所需的光照、温度、湿度和气体成分等因子。

本研究则系统地研究了多种因素对荞麦愈伤组织诱导、继代生长和黄酮含量的影响, 并获得了高黄酮含量、生长旺盛的荞麦幼叶愈伤组织, 为进一步的荞麦细胞悬浮培养生产荞麦黄酮奠定了坚实的基础。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

荞麦, 吉乌1号, 由本试验室提供;培养基, MS培养基;6-BA, IAA均购于美国Sigma公司。

1.2 试验方法

1.2.1 荞麦愈伤组织的培养

(1) 荞麦种子的采集。直接采集10月中旬到11月份的健壮、饱满的种子晒干后贮存于干燥箱中。种子萌发前于4℃冰箱中预先处理14d。

(2) 荞麦无菌苗的获得。用自来水冲洗荞麦种子并用清水浸泡过夜。剥去种壳, 在75%酒精消毒30s, 无菌洗2次, 再用0.1%升汞消毒5min, 无菌水冲洗5次, 最后用无菌滤纸吸干种子表面水分, 消毒处理的种子接种于无激素的1/2MS培养基上, 暗培养。待种子萌发后移入光照培养箱于25℃培养。

(3) 荞麦茎和叶片愈伤组织的诱导。取无菌苗的茎和叶片作为外植体, 将茎段切成0.5cm2左右长的小段, 将叶切成0.5cm2块, 分别接种于含不同浓度组合的6-BA (mg/L) 和NAA (mg/L) 的Ms固体培养基上愈伤组织, 记录其发生时间并统计诱导率, 确定最佳激素组合。在含最佳激素组合的MS培养基上进行固体继代培养, 每隔20d继代1次。

(4) 高黄酮含量愈伤组织的目视法筛选。采用目视法可初步确定愈伤组织的生长快慢、褐化状况及颜色特征等情况。从MS添加6-BA和NAA的最佳激素组合的固体培养基上连续继代3次的愈伤组织中挑选出生长较快或不易褐化、或颜色为红色 (这类愈伤组织的类黄酮含量可能较高) 的愈伤组织。

(5) 高黄酮含量愈伤组织的分光光度法筛选。将目视法筛选出的愈伤组织用722可见光分光光度计 (上海校光) 对其类黄酮含量测定, 筛选出类黄酮含量高的愈伤系。

1.2.2 标准曲线的获得

愈伤组织类黄酮含量的测定采用紫外分光光度法, 具体如下:精密称取经冷冻真空干燥后的芦丁标准品97.6mg, 用70%的酒精定容于100mL容量瓶中, 得到芦丁标准品溶液。分别吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL芦丁标准品溶液于25mL容量瓶中, 加5%NaNO2溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加10%Al (NO3) 3溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加1mol/L NaOH溶液10mL, 再加去离子水至刻度, 摇匀, 放置15min, 于500nm处测吸光度 (A) 。记录各吸收波长并绘制曲线。

1.2.3 总黄酮含量测定

将荞麦完全展开的叶片及其30d龄的愈伤组织, 流水清洗后沥干, 真空冷冻干燥 (-50℃, 24h) , 研磨后过40目筛。取100mg干粉于100mL容量瓶中, 加入100mL 70%的酒精, 60℃水浴并振荡5h, 过滤, 用70%的酒精定容, 取样品1mL于25mL容量瓶中, 加5%NaNO2溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加10%Al (NO3) 3溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加1mol/L NaOH溶液10mL, 再加去离子水至刻度, 摇匀, 放置15min, 于500nm处测吸光度 (A) 。试剂空白作参比。根据回归方程及测得的吸光度 (Ai) 计算出样品中总黄酮的浓度 (Wi) 。将叶片及其愈伤组织干粉中总黄酮含量定为字母X, 用计算公式表示为:

每种植物随机选取3株, 每株植物测3次, 求得平均值作为衡量该种植物的指标。

2 结果与分析

2.1 荞麦无菌苗的获得

消毒的荞麦种子暗培养2~4d后, 约97%的种子萌发, 25℃条件下, 光照培养10~15d后长成5~6cm高的无菌苗。

2.2 愈伤组织的诱导

愈伤组织的形成, 是已经停止分裂活动的组织细胞产生一种返老还童现象, 并再次呈现其分裂机能的过程。生长素能促进己分化的组织细胞解除分化, 并促进细胞生长。但不同种类, 不同浓度的生长素对于启动细胞恢复分裂的能力是不同的。细胞分裂素最明显的生理作用是促进细胞分裂。细胞分裂素同时具有促进分化, 延迟衰老, 增强蛋白质合成的特点。它常和生长素配合使用, 共同影响愈伤组织形成过程。为此, 在相关文献基础上, 我们选用了生长素NAA和细胞分裂素6-BA进行不同浓度组合诱导愈伤组织。以无菌苗的茎段和叶片作为外植体进行愈伤组织的诱导, 结果见表1。

由表1可知:茎和叶的愈伤组织都容易诱导。在添加2.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA的MS培养基上, 通过14d的诱导, 茎可获得100%的诱导率。叶片愈伤组织在添加l.5mg/L 6-BA和1.0mg/L NAA的MS培养基上诱导16d, 可获得100%的诱导率。

2.3 高黄酮含量荞麦愈伤组织的筛选

2.3.1 目视筛选法

荞麦茎段轴与叶片分别在MS培养基添加2.0mg/L6-BA和0.5mg/LNAA的培养基和MS培养基添加1.5mg L 6-BA和1.0mg/L NAA的固体培养基上经系统诱导并连续继代3次, 获得了大量的稳定愈伤组织。采用目视法初步筛选出生长较快和质地疏松、继代稳定的愈伤系, 结果如图1所示。其中红色和绿色, 质地疏松, 继代稳定的愈伤系主要来源于叶片的诱导;而褐色和白色的愈伤系主要来源于茎段的诱导, 且继代后褐变严重。

2.3.2 分光光度法筛选

标准曲线的绘制:标准曲线的获得愈伤组织类黄酮含量的测定采用紫外分光光度法, 具体如下:精密称取经冷冻真空干燥后的芦丁标准品97.6mg, 用70%的酒精定容100mL容量瓶中, 得到芦丁标准品溶液。分别吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL芦丁标准品溶液于25ml容量瓶中, 加5%NaNO2溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加10%Al (NO3) 3溶液1.0mL, 混匀, 放置6min;加1mol/L NaOH溶液10mL, 再加去离子水至刻度, 摇匀, 放置15min, 于500nm处测吸光度 (A) 。记录各吸收波长并绘制曲线。

3 讨论

植物愈伤组织的诱导是建立植物组织培养和利用植物细胞生产次生代谢产物的第一步。愈伤组织的质量将影响其后期工作的成败。生长速度快、目标次生代谢物质产量高的愈伤组织能大大缩短培养周期、降低工业生产成本, 使利用植物细胞生产次生代谢产物实现商业化成为可能。愈伤组织的形成过程是一个外植体、基本培养基、生长调节物质和外界环境条件等诸因素之间相互作用的复杂过程, 诸因素的作用机制还不十分清楚。一般认为愈伤组织形成过程大致分为3个阶段, 即诱导、细胞分裂和细胞分化。在诱导阶段, 外植体组织受外界条件的刺激改变了原有的代谢方式, 并开始为细胞分裂做准备。随后, 细胞经历了一个“脱分化”的过程转变成类似于分生组织的细胞, 即进入细胞分裂阶段。这时愈伤组织细胞团是拟薄壁组织, 分化程度较低, 进一步培养使愈伤组织进入一个细胞分化时期, 此时有导管成分的出现和某些次生代谢途径的形成。在本试验中, 分别用叶和茎为材料, 选用了不同浓度比例的6-BA和NAA进行荞麦愈伤组织的诱导, 都能较容易快速的获得愈伤, 并且不同质地的愈伤组织连续继代培养后, 最终形成了具有不同颜色和质地硬度不同的生长状态稳定的愈伤组织。

组织来源是影响植物细胞培养物次生代谢产物积累的重要因素之一。一般认为若用次生代谢产物含量高的植物或器官外植体诱导出来的愈伤组织进行培养, 其培养物中次生物质的含量也高。用烟草试验证明, 来自高尼古丁含量的烟草的愈伤组织中其尼古丁含量也高 (KimeSley, 1981) 。在研究长春花组织培养中生物碱的形成时, 也发现高产株产生的愈伤组织, 其生物产量也高 (Zenk, 1977) 。

本试验研究发现愈伤组织培养物中次生代谢产物含量的区别表现在器官类型上, 荞麦花中的黄酮含量是最高的, 叶、茎和根依次次之, 而由幼叶、幼茎和幼根诱导而来的愈伤组织中黄酮含量也依次降低。

以上的研究表明:荞麦组织培养物中黄酮含量与荞麦自身有很大关系, 因此在进行荞麦愈伤组织诱导时, 由叶诱导而来的愈伤组织中黄酮含量高于由茎诱导而来的愈伤组织中的黄酮含量, 所以用优良的幼叶愈伤组织进行了细胞悬浮培养的研究。

参考文献

[1]张长河, 刘幸福, 余龙江, 等.低密度和条件培养对红豆杉细胞生长的影响[J].生命科学研究, 2000, 4 (3) :222-227.

[2]胡赞民, 邓向东.马铃薯脱毒微型薯人工种子工厂化生产技术研究[J].中国科学院院刊, 2001, 16 (5) :361-364.

[3]刘春朝, 王玉春, 欧阳藩, 等.生物反应器技术用于植物组织培养的研究进展[J].化工冶金, 1999, 20 (3) :329-336.

[4]Zhong J.J., Wang S.J..Eeffets of nitorgen soure on the produe-tion of ginseng saponin and polysaccharide by cell cultures of Panxa quinqueflium[J].Poreess Bioehemistty, 1998, 33 (6) :671-675.

[5]Liu S., Zhong J.J..Eeffet of potassiumiononeell growth and pro-dution of ginseng saponin and polysaecharide in suspension cultuers of panax ginseng[J].Jounral of Biote hcnology, 1996 (52) :121-126.

荞麦黄酮复合物 篇4

关键词：荞麦茶,总黄酮,超声,提取

荞麦茶是以荞麦为原料,经杀青、揉捻、干燥等工艺加工而成[1]。荞麦茶中含有丰富的蛋白质、矿物质和黄酮等生物活性物质。黄酮具有抗氧化、改善血液循环、降低胆固醇、改善心脑血管疾病症状、杀菌消炎等功效[2~3]。因此,开展对黄酮类化合物的提取工艺的研究具有十分重要的现实意义。超声提取技术主要是利用超声波的空化作用加速有效成分的浸出提取,同时超声波的次级效应也有利于提取。超声波提取总黄酮具有省时、节能、提取率高等优点。本文采用超声波溶剂法提取总黄酮,以总黄酮含量为考察指标,确定了较优的工艺条件。

1 材料和方法

1.1 材料和设备

荞麦茶:企业提供;芦丁标准品:购于合肥一力生物科技有限公司;无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯试剂。

电子分析天平G238:上海医用激光仪器厂;温压双控微波萃取仪MDS-6型:新仪微波化学科技有限公司;旋转蒸发器R-205型:上海申胜生物技术有限公司;循环水式真空泵SHZ-D(Ⅲ)型:巩义市英峪于华仪器厂;紫外可见分光光度计722型:上海精密科学仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品的制备方法

将荞麦茶粉碎后,准确称取2.5000g荞麦茶粉末于250m L碘量瓶中,加入适量浓度和体积的乙醇溶液,在一定的温度、功率等条件下超声提取一定时间,取出抽滤、干燥后得样品。

1.2.2 总黄酮含量的计算方法

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

通过实验结果绘制得到标准曲线(如图1所示),得吸光度y与总黄酮浓度x(mg/m L)之间的回归方程为:y=0.0124x-0.0034(r=0.9994)

2.2 单因素实验

选择温度、溶剂浓度、固液比、萃取时间等因素考察对提取物总黄酮含量的影响,以确定相关因素及其范围。

2.2.1 溶剂浓度的选择

在一定的提取条件下,分别以45%~95%的乙醇浓度提取总黄酮并测定提取物中总黄酮的含量。图2结果表明:在相同超声提取条件下,65%~95%乙醇对总黄酮的提取效果较好,其他浓度的乙醇提取效果较差。考虑节约成本,最优乙醇浓度为65%。造成这种结果的原因可能是乙醇含水量较多时,提取出了较多的水溶性多糖、色素和果胶等杂质而影响总黄酮的萃取效率。

2.2.2 提取温度的选择

在一定的提取条件下,分别在55~75℃的温度下提取总黄酮并测定提取物中总黄酮的含量。由图3可知,随着温度的升高,总黄酮含量呈先上升再平缓下降的趋势,这说明65℃是总黄酮提取的最佳温度。温度大于65℃时,随温度的升高,一些大分子物质溶出,造成提取液的颜色变深,一些活性成分被破坏,曲线呈平缓下降趋势,即总黄酮含量降低。

2.2.3 提取时间的选择

在一定的提取条件下,分别以10~50min的提取时间提取总黄酮并测定提取物中总黄酮的含量。由图4可知,在相同的超声提取条件下,提取时间对提取率具有显著的影响。在10min~30min范围内,随着提取时间的增长,总黄酮浓度也越高,而30min之后,随着时间的延长,总黄酮浓度有稍微下降的趋势,这就揭示着30min时荞麦茶中总黄酮的提取已经基本达到了平衡,30min是最佳的超声提取时间。

2.2.4 固液比的选择

在一定的提取条件下,分别以1/14~1/22的固液比提取总黄酮并测定提取物中总黄酮的含量。从图5可以看出,在相同超声提取条件下,1:18的固液比是总黄酮提取的一个最佳点,继续增加固液比总黄酮含量已呈下降趋势,而且增大固液比会增加提取成本,因此确定固液比为1:18为最佳点。

2.2.4 超声功率的选择

在一定的提取条件下,分别以50P%~90P%的超声功率提取总黄酮并测定提取物中总黄酮的含量。从图6可以看出,在相同提取条件下,70P%的超声功率是总黄酮提取的一个最佳点,继续增加超声功率总黄酮含量增加不显著,而且增大超声功率会增加提取成本,因此确定70P%的超声功率为最佳点。

3 结论

(1)据实验结果绘制标准曲线,得吸光度值y与总黄酮浓度x(mg/m L)之间的回归方程为:y=0.0124x-0.0034(r=0.9994)。

(2)总黄酮超声提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度65%,提取温度70℃,提取时间30min,料液比1:18,超声功率70P%。

参考文献

[1]林汝法.荞麦的含量测定[J].中国荞麦,1994:26～29.

[2]陈复生,李红良,赵琳.陈皮中抗氧化成分的提取工艺研究[J].郑州工程学院学报,2003,24(1):24～26.