番石榴中VC的高效液相色谱分析

番石榴中VC的高效液相色谱分析（通用16篇）

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇1

采用高效液相色谱法,以0.1%的磷酸作为流动相,采用三种不同的提取液(3%的偏磷酸、3%的偏磷酸+8%乙酸、0.1%的草酸)对番石榴不同的果实部位的VC(L-抗坏血酸)含量进行了测定,结果表明:3%的`偏磷酸+8%乙酸作为浸提液效果最好,对于三次取样的结果相对标准偏差最低(RSD=1.6%),回收率最高为98.5%;3%的偏磷酸提取效果次之;0.1%的草酸溶液提取效果最差,RSD=28.4%,回收率也很低(72.5%).此外,不同部位的番石榴果肉VC含量也不一致,以靠近果皮的果肉含量最高,其次为果心,中部果肉含量最低.

作 者：刘胜辉 臧小平魏长宾 LIU Sheng-hui ZANG Xiao-ping WI Chang-bin 作者单位：中国热带农科院南亚热带作物研究所,广东,湛江,524091刊 名：食品科学 ISTIC PKU英文刊名：FOOD SCIENCE年，卷(期)：28(4)分类号：O657.72关键词：番石榴 VC 高效液相色谱

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇2

1实验部分

1.1仪器及工作参数岛津-10 A液相色谱仪, 浙大N 2000色谱数据工作, UV-可见紫外检测器, 在线脱气;色谱柱:ODS C18Hypersil5Lm 250@4 mm;流动相:甲醇+0.02 mol/L乙酸铵 (70+30) ;检测波长365 nm;柱温:室温;流速:1.0 ml/min;进样量:20ul。

1.2试剂0.1%2, 4-二硝基苯肼:称1.10 g 2, 4-二硝基苯肼溶于24 ml浓盐酸中, 加水溶解定容至100 ml。甲醛标准液:取甲醛36%~38% (体积分数) 2.8 ml, 用水稀释至1 L, 约为1.0mg/ml标定, 冰箱内保存=。0.02 mo1/L乙酸按:称1.54 g乙酸铵, 加水溶解并稀释至1000 ml经滤膜 (0.45Lm) 过滤。

甲醇 (A.R) , 经滤膜 (0.45Lm) 过滤。

1.3样品和标准的测定串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50 L/min的速度采集10~15L空气[2]。从串联的2支吸收管中各取吸收液1.00 ml于10ml比色管中, 混合;取甲醛标准 (1.00Lg/ml) 0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 ml于10 ml比色管中, 用水稀释至2.00 ml于样品和标准管中各加0.1%2, 4-二硝基苯肼1.00 ml混匀, 室温放置24 h以上, 或在60e水浴中30min, 加1.00 ml二氯甲烷振摇提取2 min, 放置分层, 待下层澄清后, 直接用微量注射器取下层二氯甲烷20ul进样分析。

2结果及讨论

2.1采样效率在采样点, 串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50 L/min的速度采集10~20L空气, 本法的采样效率为94%~96%[2,3]。

2.2检测波长的选择衍生试剂2, 4-二硝基苯肼的最大吸收波长在265nm[4]左右, 经实验, 与甲醛反应生成的2, 4-二硝基苯腙的最大吸收波长在365 nm[5,6]。对甲醛的紫外衍生测定, 选用365nm波长。

2.3流动相的选择用甲醇+水作流动相, 低浓度甲醛的色谱分离图有拖尾现象。选用甲醇+0.02 mol/L乙酸铵 (70+30) 作流动相, 从低浓度0.050Lg/ml甲醛标准的色谱图基线平直, 色谱峰型对称, 未被衍生的2, 4-二硝基苯肼出峰在前, 2, 4-二硝基苯肼与甲醛反应生成的2, 4-二硝基苯腙能完全分离。

2.4萃取液的选择及保存时间萃取剂可选择三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷等, 浓度较高时, 使用正己烷提取不完全, 其衍生试剂 (2, 4-二硝基苯肼) 的色谱峰延后。选用三氯甲烷或二氯甲烷一次萃取, 都能满足0~50.0Lg甲醛衍生物的测定。我们选用1.0 ml二氯甲烷作萃取剂。经实验, 样品衍生后稳定, 室温放置72 h再萃取或萃取后在室温下放置72 h, 测定结果无变化。

2.5衍生试剂的选择甲醛的衍生试剂可选择硫酸肼或2, 4-二硝基苯肼。甲醛与硫酸肼形成的衍生物 (甲腙) 相对分子质量小, 出峰时间快, 检测的灵敏度低, 抗干扰能力差;甲醛与2, 4-二硝基苯阱的紫外衍生反应, 能迅速定量地生成2, 4-二硝基苯肼。过量的衍生试剂 (2, 4-二硝基苯肼) 通过选定的色谱柱能与2, 4-二硝基苯肼完全分离, 不干扰甲醛的测定。

2.6萃取方式经实验证实, 按本法操作, 样品和标准一次萃取即可。这样可省去多次萃取、分离、挥干、溶解等烦琐步骤, 从而减少工作量, 提高工作效率。

2.7线性范围与最低检出量甲醛在0~2.0Lg范围内, 浓度C与峰面积呈直线相关, n=6, r=0.9986, a=-26.0, b=773.6。方法最低检出量:以峰面积=30计, 方法最低检出量为0.072Lg。按本法操作, 串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50L/min的速度采集10 L空气, 在标准状态下, 最低检出浓度为0.036 mg/m3。如果样品中的甲醛浓度较高, 可将甲醛标准扩展至0~50.0Lg, 浓度与峰面积仍呈直线相关关系。甲醛为0、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00Lg时其峰面积为0、51.7、109.2、319.5、791.8和1511.3。

参考文献

[1]中国室内装饰协会室内环境监测中心.室内环境质量及检测标准汇编.北京:中国标准出版社, 2003:297.

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇3

关键词高效液相色谱；药物分析；应用

中图分类号R917文献标识码B文章编号2075-2156(2009)04-0107-01

高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等，是一种高压、高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快的分离分析技术，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域。高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。在中国药典中主要用于药物的含量测定、有关物质检查和鉴别等。

1 高效液相色谱法在药物含量测定中的应用

天然药物的来源有动物、植物和矿物之分。由于化学成分复杂，有效成分可能有一个，也可以有多个，因此精确测定各有效成分的含量对药品质量控制，建立质量标准具有重要的意义。高效液相色谱法可对天然药物的成分进行分离鉴定，并测定有效成分的含量。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、抗心率失常、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿瘤等多种药理作用。刘宁等采用HPLC法测定四川粉葛中葛根素的含量，结果显示该方法简便易行，结果准确，可用于四川粉葛药材的质量控制。中药复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分，各有效成份的含量决定了药物的治疗效果。高效液相色谱法适合分子量较大、难气化、对热敏感的等物质的分离分析，因此在中药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到广泛的应用。秦丽惠等采用高效液相色谱法测定了金麦胶囊中绿原酸含量，结果显示该方法测定样品分离度佳，灵敏度高，操作简便，结果准确可靠。

2HPLC在药物鉴别中的应用

中药材是加工中药饮片和生产中成药的原料药，其品种的真伪、质量的优劣直接影响到临床用药的安全有效。中药鉴别是一切重要生产，应用，研究至关重要的第一步。在平时的监督检查中发现许多中药材伪劣品、混淆品出现的频率较高，伪劣品、混淆品与正品药物存在外观相似，但来源不同、性状和功效差异较大，价格相差往往也很大。根据对象的不同，常不能仅从形态上鉴别。而在HPL C法中，因保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别，在中国药典中就有大量的药物采用此法进行鉴别。随着高效液相色谱技术的发展和在药典中的重要性不断提高，出现了一些采用高效液相色谱法鉴别药物的新方法。例如，岗梅等7种冬青属中草药、18种石斛类生药、南北五味子、蜂胶的鉴别。通过对样品各有效成分的组分和含量的测定，从根本上鉴定药物真伪优劣，确定有效性，这无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。

3HPLC在添加违禁药物检查中的应用

近年来，食品，药品，保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件。一些药品和保健品为了让消费者服用后产生显著效果，居然也在其中非法添加不允许的西药成分，这类成分往往对患者造成病情不受控制，药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。对这类非法添加违禁药物的治理与打击，很大程度上依赖于分析检测方法的效能。高效液相色谱法在对添加违禁药物的日常检验工作中，正发挥着越来越重要的作用，为打击药品造假和保障人民用药安全、有效。提供了有力的技术支持。例如，饲料中三聚氰胺的含量测定，降糖类中成药和保健品中是否非法添加降糖成分鉴定。通过HPLC分离样品，用极管阵列检测器检测，可基本确定样品中是否含有某一化学成分，有条件者更可以再采用HPLC-MS联用等手段深入分析，可进一步确保结果的准确无误。在以后的检测工作中有针对性的进行检测，就可以更快更准地发现非法添加物质，为监管部门提供技术支持，为人们的身体健康提供更有效的保证。

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇4

高效液相色谱法测定糠醛废水中的糠醛含量

采用HPLC方法,以Symmetry 5 μm C18(3.9 mm×150 mm)为色谱柱,在流动相V(甲醇)∶V(水)=70∶30,流速1.0 mL/min下,采用双波长紫外检测器,利用外标法在275 nm下测定糠醛废水中糠醛的含量.此法相对标准偏差RSD＜4.84%(n=6),r=0.999 9,实际样品的平均加标回收率为96.9%～112.5%.

作 者：康春莉 唐晓剑 于宏兵 林学钰 Kang Chunli Tang Xiaojian Yu Hongbing Lin Xueyu  作者单位：吉林大学环境与资源学院,吉林,长春,130012 刊 名：工业水处理  ISTIC PKU英文刊名：INDUSTRIAL WATER TREATMENT 年，卷(期)：2007 27(6) 分类号：O657.7 关键词：糠醛   高效液相色谱   废水处理  

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇5

高效液相色谱法测定纺织品和皮革中的甲醛

通过与2,4-二硝基苯肼发生反应,经液相色谱分离、紫外光谱定性,可对纺织品和皮革提取液中的甲醛进行准确的`定性定量测定.对阳性样品的有色提取液测定比较表明,液相色谱法在定性检测、抗干扰能力、稳定性上都高于常用的乙酰丙酮比色法.

作 者：丁友超 吴浩 田姝 刘玉婷 DING You-chao WU Hao TIAN Shu LIU Yu-ting 作者单位：江苏出入境检验检疫局,江苏南京,210001刊 名：印染助剂 ISTIC PKU英文刊名：TEXTILE AUXILIARIES年，卷(期)：24(10)分类号：O657.7+2关键词：甲醛 纺织品和皮革 液相色谱 检测

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇6

高效液相色谱-质谱法测定废水中芳香胺类化合物

本文建立了一种高效液相色谱-质谱联用方法,用于测定废水中联苯胺、苯胺、对甲苯胺、对硝基苯胺、甲萘胺等芳香胺类化合物的.含量.色谱柱为Kromasil C18柱(250×4.6 mm i.d.,5 μm),以甲醇-5 mmol/L甲酸铵缓冲溶液(pH=3.0)为流动相,流速为1.0 mL/min,采用梯度洗脱,分流进样.质谱采用电喷雾电离源正离子模式,以各种化合物的选择离子[M+H]+监测模式进行定量分析.实验发现,联苯胺、苯胺、对甲苯胺、对硝基苯胺、甲萘胺有良好的线性关系,它们的线性范围分别为:7.03～281.30 μg/L、10.65～213.10μg/L、11.91～238.20μg/L、12.39～247.90μg/L和14.55～291.10 μg/L.回收率为92.7%～101.4%.方法检出限为1.7～3.2μg/L.该分析方法灵敏度高、前处理简便、所测浓度范围宽,适用于废水中芳香胺环境污染物的快速测定.

作 者：黄丽芳 李来生 刘超 HUANG Li-fang LI Lai-sheng LIU Chao 作者单位：南昌大学分析测试中心,南昌,330047刊 名：分析科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE年，卷(期)：24(3)分类号：O657.63关键词：高效液相色谱-质谱法 芳香胺类化合物 环境污染物 废水

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇7

1 材料和方法

1.1 主要仪器

Waters高效液相色谱仪系列 (Waters510型输液泵、U6K型进样阀、AST型数据处理仪、3800型打印机、UV Waters 486型紫外检测器) , Waters公司生产;色谱柱 (Scienhome Kromasil ODS-1 250 mm×4.6 mm, 5 μm) , 天津市琛航科技仪器有限公司生产;离心过滤器, 天津开发区富集色谱技术发展公司生产。

1.2 主要试剂

菌灭标准品、苯甲酰环丙沙星标准品、甲醇 (色谱纯) 、双蒸水, 市购;1%肝素钠溶液, 自行配制;其他试剂均为国产分析纯。

1.3 标准液的配制

用少量N, N-二甲基甲酰胺分别将菌灭和苯甲酰环丙沙星溶解, 用甲醇定容, 配制成100 μg/mL菌灭标准储藏溶液。取100 μg/mL菌灭标准液5 mL置于50 mL棕色容量瓶中, 用甲醇定容, 配制成10 μg/mL菌灭标准应用溶液。

1.4 血浆中蛋白质的处理

取菌灭标准应用液, 加入不含菌灭的奶牛血浆0.2 mL, 使菌灭含量为0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100 μg/mL (加血浆前向20, 50, 100 μg/mL离心管中吹入氮气, 使药液体积约为20 μL) , 漩涡混匀;加入25 μL苯甲酰环丙沙星标准溶液, 漩涡混匀;加入0.8 mL甲醇, 漩涡混匀, 以4 000 r/min离心15 min;所得上清液于42 ℃水浴, 并用氮气将上清液挥干;向残渣中加入0.4 mL流动相, 漩涡振荡5 min;所得溶液用0.45 μm过滤膜过滤。

1.5 色谱条件

色谱柱:Scienhome Kromasil ODS-1 250 mm× 4.6 mm, 5 μm;流动相:甲醇∶水 (64∶36, 用85%磷酸调pH值为3.0) , 使用前超声脱气;流速:1 mL/ min;柱温: (30.0 ±0.5) ℃;紫外检测波长:278 nm。

1.6 回归方程

取1.4项下处理所得的溶液20 μL上样。以菌灭与内标的峰面积比值作为横坐标, 以标准血药浓度作为纵坐标, 应用最小二乘原理进行线性回归分析, 得出菌灭与内标物峰面积比值-菌灭浓度标准曲线。

1.7 定量限的确定

于空白血浆中添加菌灭, 将信噪比为10的检测量定为定量限。

2 结果

2.1 方法专属性

菌灭峰tR=6.62 min, 苯甲酰环丙沙星峰tR=17.25 min, 各峰获得完全分离, 内源性物质峰tR=2.56 min, 对测定无干扰。高效液相色谱吸收峰见图1。

1.杂质峰;2.菌灭峰;3.内标峰。

2.2 标准曲线与线性范围

血浆中菌灭浓度在0.05～100 μg/mL范围内, 标准曲线方程为y = 5.962 x + 0.400 9, R2 = 0.994 6, 其中x为菌灭与内标物的峰面积比值, y为标准血药浓度。

2.3 方法精密度与准确度

高、中、低3个浓度的回收率相对误差均小于15%, 日内及日间相对标准差均小于10%。

2.4 方法定量限 (见表1)

以标准曲线的最低浓度为方法定量限 (S/N=10) , 该浓度的回收率相对误差 (RE) 为-6.4%, 批内精密度 (RSD) 为7.5%, 批间RSD为9.8%。

3 讨论

(1) 紫外检测器是目前液相色谱检测方法中最常见的检测器。

经测定菌灭溶液在220, 278 nm处均有紫外吸收峰。而在血浆样品中, 220 nm处杂质峰较多, 而 278 nm处的吸收最大且空白血浆无干扰, 故选择该波长为检测波长。

(2) HPLC分析法中的定量方法有内标法和外标法。

内标法是生物体液样品中药物及其代谢产物常用的方法, 此法与外标法相比可提高分析结果的精密度和准确度, 并可简化样品预处理过程。

(3) 去除内源物质的干扰并提取出菌灭是该试验的关键步骤。

菌灭不含碱性基团, 按照环丙沙星的处理方法不能得到满意效果。由于菌灭的分子结构中有羧基, 去除蛋白质后再以碱性的溶剂系统溶解结果较好。本试验用甲醇去除蛋白质, 产生绒毛状沉淀, 便于离心分离, 上清液澄清, 沉淀不会带走药物。

(4) 内标的选择对于HPLC分析法检测药物浓度也很重要。

苯甲酰环丙沙星与菌灭同属环丙沙星衍生物, 理化性质相对比较接近, 在HPLC柱中的分离度较大, 且在测定药物浓度时无干扰物存在。因此, 以苯甲酰环丙沙星作为内标比较理想。

参考文献

[1]李剑勇, 李宏胜, 周绪正, 等.新兽药“菌灭”抑菌试验初报[J].动物医学进展, 2006, 27 (8) :83-85.

试论高效液相色谱分析技术的应用 篇8

【关键词】HPLC；高效液相色谱分析；食品检测

1.HPLC在食品添加剂领域的应用

1.1食品甜味剂的检测

采用液相色谱—气相色谱联用技术， SpherigelC18色谱柱，电喷雾负离子采集模式，甲醇-甲酸-三乙胺缓冲盐梯度洗脱，定量测定果冻等食品中安赛蜜、糖精钠和甜蜜素含量，结果加样回收率为93.19%～100.90%，相关标准偏差（RSD）为1.05%～2.04%。该方法选择性好，定性定量准确，分析时间短，同时也适用于饮料等其他食品的定性定量检测。

用高效液相色谱—荧光法（HPLC-FLD）测定食品中的糖精钠，最低检出限在0.005～0.200mg/ml，与高效液相色谱—紫外检测法（HPLC-UV）相比较，HPLC-FLD法重现性好，准确度更高，由于FLD的选择性响应，降低了对色谱柱的性能要求，更适合复杂样品的快速分析，使其具有比UV法更高的可靠性，是一种较为理想的糖精钠检测方法。

1.2食品防腐剂的检测

利用HPLC测定含乳饮料中苯甲酸的含量。用Zn（Ac）2和KFe（CN）3溶液作为沉淀剂进行样品的预处理，磷酸盐缓冲液和甲醇混合溶液为流动相，C18色谱柱，于波长225nm处紫外检测，方法简单快速、灵敏度高，既适用于大部分含乳饮料，也适用于纯牛奶的测定。苏爱梅采用加沉淀剂沉淀法对火腿肠样品进行预处理，过滤后用RP-HPLC法测定火腿肠中防腐剂苯甲酸和山梨酸的含量。色谱柱为Symetry-C18，以0.02mol/L乙酸铵-甲醇（97∶3）为流动相，检测波长为230nm。苯甲酸和山梨酸浓度在0～0.05g/L范围内线性很好（r=0.9996）；山梨酸最低检出限为0.024g/L，平均回收率为100.4%，RSD为0.68%。

1.3食品色素的检测

采用HPLC法测定保健食品黄金搭档包衣片中食用合成色素，样品前处理用粉碎提取法和漂洗法，聚酰胺吸附纯化LichrospherC18柱，甲醇-乙酸铵流动相梯度洗脱，单波长或多波长测定柠檬黄、靛蓝和诱惑红3种色素。其线性范围宽（0～100g/ml），回收率高（91.3%～103.1%），重现性好（RSD=2.11%～5.63%），最低检出限为2～11ng。其中，尤以粉碎提取法，梯度洗脱，多波长检测效果更佳。

1.4食品抗氧化剂的检测

采用RP-HPLC法测定油炸薯条没食子酸内酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、羟基茴香醚（BHA）、4-已基间苯二酚（4HR）、二丁基羟基甲苯和2246含量。其中，PG、TBHQ用50%甲醇（RP-HPLC体积分数1%的冰醋酸）作流动相，BHA、4HR、BHT和2246用80%甲醇作流动相，检测波长为280nm，相关系数在0.9983～0.9996，最低检出限为1.0～2.0μg/g，平均回收率均在85%以上。

采用基质固相分散萃取植物油中抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ和PG，经HPLC法进行分离。结果通过基质固相分散技术，可减少有机溶剂的用量，缩短分析时间，提高分析效率，回收率为85.8%～94.3%，最低检出限为2ng。

2.HPLC在食品营养成分领域的应用

2.1碳水化合物的检测

对于碳水化合物的测定，HPLC法操作简便，灵敏度高，可同时测定各种糖，国际上已将HPLC法作为酒类糖分含量测定的仲裁法。

2.2氨基酸的检测

氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元，准确灵敏地测定食物中氨基酸的含量具有十分重要的意义。目前，柱前衍生化高效液相色谱法以其灵活和易于推广的特点。

采用邻苯二甲醛（OPA）-9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）进行氨基酸柱前衍生，RP-HPLC法测定氨基酸含量。3个不同浓度梯度的氨基酸标准溶液线性关系良好，样品保留时间绝对误差小于0.1min，重现性RSD值低于4%，加标回收率均在90%～110%。

2.3脂肪酸的检测

脂肪酸是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链，是有机物。饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸和三脂酰苷油磷脂卵磷脂等，对人体的健康起到了重要的作用。用HPLC法与基质辅助激光解吸电离飞行时间技术联用，分析蛋黄中磷脂粗提物。将从蛋黄中提取的多种磷脂通过HPLC预先分离，收集各组分后分别进行MALDI-TOF-MS分析得到比较清晰的质谱图。选用RP-HPLC与电容耦合非接触电导检测（C4D）结合的方法分离测定肉蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸与亚油酸5种未衍生化长链脂肪酸，采用HypersilODSC18色谱柱，以甲醇-1mmol/L醋酸钠（78∶22，V/V）为流动相，结果表明，硬脂酸在5～200μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其他4种酸线性范围为2～200μg/ml。将此种方法用于检测南瓜、大豆、米糠及棕榈油中脂肪酸，与标准气相色谱检测方法相比，简单、快速、灵敏度高。

3.HPLC在食品污染物领域的应用

3.1食品农药、兽药残留的检测

农药残留是由于使用农药而导致的在食品、农产品或动物饲料中残留的一定物质，国家相关标准都有明确的药物最大残留量，超过其值有可能对人体造成危害。运用HPLC柱后衍生荧光检测法，测定苹果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果样品中涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、克百威和甲萘威7种氨基甲酸酯类农药的残留量，结果7种农药3种不同浓度平均添加回收率在72.5%～116.2%，最低检出限为0.0037～0.0074mg/kg。

3.2食品中其他来源化学污染物的检测

环境污染物以及在工业生产中所产生的有毒有害化学物，如包装材料等均可通过植物或动物进入食物链，并引起人类的疾病或健康问题。

3.3食品中霉菌毒素的检测

食品中存在多种霉菌毒素，主要的霉菌毒素有黄曲霉毒素、镰刀菌毒素和玉米赤霉烯酮等。粮食及食品由于霉变不仅会造成经济损失，有些还会造成误食人畜急性或慢性中毒，甚至导致癌症。

4.小结

目前在食品安全检测高标准的情况下，HPLC分析技术以其分辨率、灵敏度及定量精度高等特点，已被广泛应用于食品检测领域。现今科学技术日益更新，高效液相色谱仪器也在不断地更新发展，并且与各种检测技术的联用越来越普遍，包括液相色谱（LC）和质谱仪（MS）及核磁共振谱仪的集成（LC-MS-NMR）、气相色谱-液相色谱联用（GC-HPLC）、固相微萃取-液相色谱联用（SPME-HPLC）、聚焦微波辅助萃取-液相色谱联用（FAME-HPLC），大大拓宽了HPLC的应用范围，提高了检测水平，在今后HPLC也会有更广阔的发展空间。

【参考文献】

[1]贺家亮，李开雄，刘海燕.高效液相色谱法在食品分析中的应用[J].食品研究与开发，2008，29（11）：175-177.

[2]赵青山，冯志彪.高效液相色谱在食品分析领域的应用[J].生命科学仪器，2005，3（6）：21-24.

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇9

超高效液相色谱测定鸡蛋中11种磺胺类化合物

目的:建立超高效液相色谱(UPLC)-PDA检测器快速测定鸡蛋中11种常用磺胺类化合物(磺胺、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺甲二唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪、磺胺二甲异恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉)的方法.方法:固相萃取和超高效液相色谱相结合,Waters Aequity BEH C18柱(1.7 um,2.1 mm×100 mm),0.02 mol/L醋酸胺水溶液(pH=4.2)+乙腈=80+20为流动相,流速0.3 ml/min,柱温为40℃,使用PDA二极管阵列检测器检测定量,检测波长为265 nm.结果:提取方法计算的最低检测限磺胺、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪和磺胺二甲异恶唑为4 ug/kg,磺胺多辛、磺胺甲二唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉为6 ug/kg,回收率能达到80.3%～96.2%,相对标准偏差小于5%.结论:本方法操作简单、准确、快速,满足日常大批量快速分析要求.

作 者：刘莉治 林玉娜 罗晓燕 周洪伟 杨阳 Liu Li-zhi Lin Yu-na Luo Xiao-yan Zhou Hong-wei Yang Yang  作者单位：广州市疾病预防控制中心,广州,510080 刊 名：中国卫生检验杂志  ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)：2008 18(12) 分类号：O657.7+2 关键词：磺胺类化合物   起高效液相色谱   鸡蛋   固相萃取  

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇10

高效液相色谱法测定微量全血中维生素A

建立了反相高效液相色谱法测定微量全血样品中维生素A的方法. 取全血50 μL, 用100 μL无水乙醇沉淀蛋白后, 加入400 μL×2正己烷漩涡混匀提取维生素A, 高速离心分层后取正己烷层在弱氮气流下挥干, 加100 μL甲醇溶解后用反相色谱柱C8 (150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)分离, 紫外检测波长325 nm, 外标法定量. 色谱条件: 柱温, 60 ℃;流动相为V(甲醇)∶V(水)=92∶8;流速: 0.8 mL/min. 用本法同时测定了27例成人微量全血及其血清中的维生素A. 标准曲线的相关系数大于0.999;相对标准偏差(RSD)小于5%. 对于50 μL全血, 方法检出限为0.02 μg/mL. 加标回收率为88%～115%. 成人血清与其全血中维生素A含量之比为2.907±0.160 (±s). 方法适合于微量全血中维生素A的.测定, 并可以通过测定全血中维生素A含量推算血清中维生素A的含量.

作 者：陈东 张瑞云 杨柳桦 孙成均 CHEN Dong ZHANG Rui-yun YANG Liu-hua SUN Cheng-jun 作者单位：四川大学华西公共卫生学院,成都,610041刊 名：分析试验室 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYSIS LABORATORY年，卷(期)：27(3)分类号：O657.7关键词：维生素A 高效液相色谱法 微量 全血

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇11

一、液相色谱法的概念及特点

（一）液相色谱法的概念

流动相为液体的色谱法称为液相色谱法。液相色谱法包括传统的柱色谱、薄层色谱和纸色谱。在20世纪60年代末期，在经典液相色谱和气相色谱法的基础上，在液相柱色谱中，采用极细颗粒的高效固定相，全部分离过程由计算机控制完成，由此发展起来的新型分离技术，称为高效液相色谱法（简称HPLC）。

（二）液相色谱法的特点

上世纪60年代末期液相色谱开始飞速发展，在各领域中都得到广泛使用。它的复兴既借鉴了气相色谱的成功经验，也因气相色谱的缺点与不足而促进发展。液相色谱和气相色谱相比较，具有几下个方面的特点：

1. 气相色谱法分析的样品限于气体和沸点较低的具有挥发性的化合物。而液相色谱法分析的样品不受样品挥发性和热稳定性的限制，适合于分离生物大分子、不稳定的天然产物、离子型化合物以及高沸点的高分子化合物。而这类化合物占有机物总数的大多数。

2. 气相色谱采用的流动相是惰性气体，它对被分离组分不产生相互作用力，仅起到运载作用。而液相色谱中的流动相可选用多种多样的不同极性的液体，它对被分离组分可产生一定的作用力，这就为提高分离效能比气相色谱多了一个可选择的参数。而且液相色谱中具有独特效能的柱填料（固定相）的种类较多，这样就使固定相的选择余地更大，从而增加了分离的可能性。

3. 气相色谱法反洗一般在较高的温度下进行，而高效液相色谱法经常在室温条件下工作，分子间的相互作用在低温时更为有效，因此降低温度一般会提高色谱分离效率。

4. 和气相色谱相比，液相色谱对样品的回收比较容易，而且是定量的，样品的各个组分很容易被分离出来。因此，在很多场合，液相色谱不仅作为一种分析方法。而且可以作为一种分离手段，用以提纯和制备具有中等纯度的单一物质。

二、高效液相色谱在农药残留中的技术应用

（一）氨基甲酸酯类农药具有品种多、药效好、分解快、残留期短、低毒、高效、选择性强等特点。这类农药正逐渐替代有机氯农药和部分替代有机磷农药，但这类农药不易挥发，热定性差，因此不适合用气相色谱测定。刘长武等采用氨基固相萃取分离净化，用ODS-C18柱在梯度淋洗条件下对10种氨基甲酸酯类农药及代谢物进行分离，通过柱后衍生化，荧光检测器激发波长330纳米，发射波长465纳米，柱温42℃，方法的检出限0.008～0.02毫克/千克，将10种氨基甲酸酯类农药混合标准溶液在0.05毫克/升、0.10毫克/升、0.50毫克/升三个水平添加到蔬菜和水果样品中进行方法的精密度试验，方法的添加回收率为70%～120%，变异系数小于20%。

（二）1996年，黄彩海等报道了用高效液相色谱法测定环境水中的嘧磺隆。他们研究了萃取剂及溶剂的选择、酸度、摇动时间、萃取次数、静置时间及萃取机理对萃取效率的影响。同时选择最佳萃取条件，取1升水样于1升分液漏斗中萃取。在甲醇+水=85+15，柱温28℃，流速1.0毫升/分钟和采用C18色谱柱的条件下，用紫外吸收检测器检测。结果表明，最低检测量为2微克，最低检出质量浓度为4微克/升。用本法对实际样品测定，加标回收率为93%～107%，方法具有可靠的准确度和较高的精密度。

（三）2009年陈铭学等用高效液相色谱法测定蔬菜和水果中的多菌灵、甲基硫菌灵，在色谱柱C18柱和甲醇+离子对试剂=40+60，柱温45℃，进样量40微升，检测波长275纳米，流速1.0毫升/分钟，用可调波长紫外检测器，外标法定量，用本法对实际样品测定，当添加水平在0.125毫克/千克时，添加回收率为75%～85%，添加水平在0.25毫克/千克时，添加回收率为90%～105%，方法具有可靠的准确性。

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇12

测量结果的不确定度有多种因素确定, 如称量引起的不确定度 (包括天平本身和重复测量) , 定容引起的不确定度 (包括容量瓶和温度) , 标准储备液的配制与稀释, 进样器, 样品重复检测, 标准曲线的拟合等, 现就以上等各因素对糖精钠的不确定度所产生的贡献进行分析。

1. 测量方法

依据GB/T 5009.28—2003[2]《食品中糖精钠的测定》的方法进行。称取10.0 g样品, 除去二氧化碳和乙醇, 定容后, 经0.45tan滤膜过滤, 高效液相色谱仪测定 (配有紫外检测器) , 进样20μL, 波长230nm, 以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性, 以其峰面积求出样液中被测物质的含量。

2. 数学模型

x——样品中糖精钠的含量, g/Kg;

A——查曲线值糖精钠的含量, mg/ml;

m——试样质量, g;

250——稀释液总体积, ml。

3. 各标准不确定度分量的计算

3.1 样品称量引起的不确定度

3.1.1 电子天平校准产生的不确定度

按检定证书给出的在95%置信概率时为±0.1 mg, B类不确定度

3.1.2 样品重复称量引起的不确定度采用清零法, U3.1.2=0.058mg样品称样量为10.210 8 g,

3.2 样品定容引起的体积不确定度

3.2.1 250 ml容量瓶引起的体积不确定度容量允许误差为±0.2ml, B类不确定度,

3.2.2 溶液温度与校准时温度不同引起的体积不确定度

假设为±4℃, 对水体积膨胀系数为2.1×10-4/℃, 则95%置信概率时体积变化引起的体积不确定度为B类不确定度

3.3 标准储备溶液配制引起的不确定度

3.3.1 标准品称量引起的不确定度

U3.1=0.082 mg标准溶液质量0.0851g

3.3.2 标准品定容引起的体积不确定度

3.3.2.1 100 ml容量瓶引起的体积不确定度容量允许误差为±0.1 ml, B类不确定度,

3.3.2.2 溶液温度与校准时温度不同引起的体积不确定度

假设为±4℃, 对水体积膨胀系数为2.1×10-4/℃, 则95%置信概率时体积变化引起的体积不确定度为B类不确定度。

3.4 标准溶液稀释引起的不确定度

3.4.1 10.0 ml吸管引起的体积不确定度

容量允许误差为±0.02 ml, B类不确定度,

3.4.2 溶液温度与校准时温度不同引起的体积不确定度

假设为±4℃, 对水体积膨胀系数为2.1×10-4/℃, 则95%置信概率时体积变化引起的体积不确定度为B类不确定度

3.4.3 100 ml容量瓶引起的体积不确定度

3.5 进样量20μl进样器引起的体积不确定度

3.5.1 容量允许误差为±0.O1 ul, B类不确定度,

3.5.2 溶液温度与校准时温度不同引起的体积不确定度

假设为±4℃, 对水体积膨胀系数为2.1×10-4/℃, 则95%置信概率时体积变化引起的体积不确定度为B类不确定度

3.6 样品测量重复性产生的不确定度A类不确定度。

在相同条件下, 对被测样品进行6次独立重复测定, 测定值为0.128、0.127、0.126、0.119、0.118、0.120 g/kg。则测定结果的平均值=0.123 0 g/kg, 标准偏差s=0.0045

3.7 标准曲线拟合产生的不确定度

3.7.1 用高效液相色谱仪测定标准溶液的峰面积每个浓度测3次, 结果见表1。

用最小二乘方法计算得回归方程

Y=-3767+3057847X, r=0.9992, a=-3767, b=3057847。其中, a为标准曲线的截距, b为标准曲线的斜率, r为相关系数。

3.7.2 计算回归曲线的标准偏差s

式中:Yij:仪器的各点响应值;Yi:回归曲线的计算值;n:测量点数目;m:每测量点重复测量次数。计算s=4 018.6

3.7.3 计算X浓度的差方和

式中:Xi:第几个标准曲线浓度点 :标准曲线各浓度点的平均值。计算Sxx=0.004 88。

3.7.4 计算标准曲线相对标准不确定度

式中:s:回归曲线的标准偏差:x:样品溶液浓度mg/L;b:标准曲线斜率;n:测量点数目;m:每测量点重复测量次数 :标准曲线各浓度点的平均值mg/mL;Sxx:浓度的差方和。

4. 合成不确定度的计算

5. 扩展不确定度的计算

取包含因子k=2, 则U=2×0.016=0.032

6. 测量结果的不确定度报告

糖精钠含量:0.123g/kg, U=0.032, k=2

7. 讨论

检测实验室应有能力对每次有数值要求的测量结果进行测量不确定度评定。本文分析了高效液相色谱法测定食品中糖精钠的误差性质和来源, 确定不确定度的主要因素包括:直线回归曲线斜率的标准差、样品取样量的称量误差、样品测量值的标准偏差、使用标准溶液浓度的不确定度等。

摘要：“不确定度”的概念越来越被重视, 本文结合实际检测工作, 根据国家技术监督局发布的“测量不确定度评定和表示” (JJF1059—1999) [1]规范要求, 对食品中糖精钠的测定进行了不确定度评定, 以探讨这类测定方法的不确定度的计算方法和步骤, 在实际工作中体现其实用价值。

关键词：食品,糖精钠,高效液相色谱测定法,不确定度

参考文献

[1]JJF1059—1999.《测量不确定度评定与表示》

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇13

固相萃取-高效液相色谱法测定水源水中痕量双酚A

摘要：利用固相萃取-高效液相色谱建立了检测水源水中痕量双酚A的方法.同时,考察了C18小柱的.最佳洗脱条件.此方法的色谱分析条件是:流动相为0.01 mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=4)与乙腈之比等于55:45(体积比),色谱柱温度为25 ℃,流速为1 mL/min,检测波长为278 nm.该方法的线性范围为50～1000μg/L,检出限(S/N=3)为0.5μL,不同加标水平的双酚A回收率为95.07%～98.53%.最佳固相萃取条件为:水样pH=3、用体积分数为75%的乙腈溶液作为洗脱剂、过样流速为5 mL/min.用此方法测定实际水源水,结果准确、操作简便.作 者：龚清杰 GONG Qingjie 作者单位：东华大学环境科学与工程学院,上海,20期 刊：环保科技 Journal：ENVIRONMENTAL PROTECTION AND TECHNOLOGY年，卷(期)：,16(2)分类号：X830.2关键词：固相萃取 高效液相色谱 双酚A

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高效液相色谱法测定卷烟主流烟气中甘露糖和葡萄糖含量

[目的]建立高效液相色谱测定卷烟主流烟气中甘露糖和葡萄糖含量的方法.[方法]采用超声萃取吸附卷烟烟气总粒相物的`剑桥滤片,经固相萃取柱纯化,1-苯基-3-甲基-5毗唑啉酮衍生,高效液相色谱-紫外检测.采用KH2PO4-NaOH(0.05 mol/L,pH=6.8)/乙腈=85/15等梯度洗脱,在HP Hypersil ODS(125 x4 mmi.d.,5 μm)柱上检测了两种单糖成分.[结果]甘露糖在0.5-8.0μg/ml、葡萄糖在5-50μg/ml范围内线性关系良好(R2>0.999),检测限均为0.14μg/ml(s/N=3),RSD均小于3%,回收率95.8%～99.8%.[结论]该方法能准确地同时检测卷烟烟气中甘露糖和葡萄糖的含量.

作 者：侯冰 齐祥明 徐海涛 胡苏林 周仕禄 吕健 盛志艺 刘丽丽 马强 王青海  作者单位：侯冰,齐祥明(中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛,266003)

徐海涛,胡苏林,周仕禄,吕健,盛志艺,刘丽丽,马强,王青海(山东中烟工业公司技术中心,山东青岛,266101)

刊 名：安徽农业科学  ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)：2008 36(26) 分类号：O657.7+2 关键词：高效液相色谱   卷烟主流烟气   甘露糖   葡萄糖  

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关键词：白芍提取物,芍药苷,反相高效液相色谱法,含量分析

白芍是中药中一种具有很强的补血功效, 还有敛阴养血、柔肝祛痛、平抑肝阳、提高免疫等作用, 较常用于肝阳上亢、肝阴不足、脾虚肝郁, 血气虚弱、或血热阴虚、盗汗、失血等症[2]。芍药苷为中药芍药主要发挥作用的成分。依据国内外研究报道, 证明芍药提取物中, 芍药苷的主要作用为增强自由基修复及抗损伤, 抵抗神经毒性损害及调节细胞内钙离子含量等作用, 在进行实验室检查时发现其具有预防血小板聚集、血液黏度下降、调节微血管循环、增加血管扩张及抗氧化能力、预防及治疗惊厥等功效。现经医学专家的深入研究证明, 其具有良好的保护神经作用。

中医中药是我国发展的特色性的疾病治疗方法, 在我国也得到了很深入的研究, 中药天然物利用其特有的功能进行疾病的治疗和预防, 其生长环境的差异及生长温度的不同, 采摘及制作工序、制作方法的差异等各种原因影响, 都会导致其疗效和作用产生显著的差异。进行不同产地及品种的药效控制相同是非常困难的。所以, 进行中药提取物的含量深入的研究及探索为现代中医药学的主要发展方向之一, 准确的控制中药提取物中的有效含量, 也是中药现代化研究的重要方法。在近些年的《中国药典》中仅进行少量中药品种, 提取物及其含量的研制方式、方法。其浸膏及流浸膏仅仅应用了渗漉的方式制备。但使用渗漉方法进行中药的制备操作复杂、消耗时间长, 浪费较多的溶剂。为求更好的制备方法, 本文选取对不同的白芍中药制剂, 使用煎煮的方法, 依据流浸膏的制备过程进行制备白芍的提取物。并根据相关的研究, 制定高效液相色谱法检测白芍提取物中的主要有效成分芍药苷的含量控制定量方法, 已达到白芍提取物的含量精准的控制。实验研究证明, 此方法具有简单、迅速、精密度高, 重复性好的优点, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 仪器及材料

选用岛津液LC2010高效相色谱仪, Agilent色谱工作站, 频率25kHz的KQ2200DA型数控超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公司产品) [1]。

1.1.2 材料选用

芍药苷对照购自中国药品生物制品检定所, (批号为110736-20933) 。色谱纯甲醇 (美国Tedia试剂公司) ;水为重蒸馏去离子水。生白芍选取 (天津饮片厂生产) , 白芍的泡制品 (按照天津市中药饮片泡制规范自制产品) [3]。

1.2 方法

1.2.1 白芍炮制方法

酒白芍:清水洗净后浸泡2d, 按照1∶10的比例, 用10kg黄酒, 喷洒在100kg的白芍片上, 搅拌均匀, 浸润浸透, 后晒干。将麸皮炒热同白芍片一起炒, 直至稍有发黄, 并有香味散发, 使用筛子筛干净麸皮即可。醋白芍制作:依据2∶10的比例, 使用米醋20kg, 喷洒在100kg, 的白芍片上, 搅拌均匀, 浸润浸透, 后采用文火进行炒干放凉即可。炒白芍:将麸皮先放入锅中炒热, 后同白芍片一起炒, 直至稍有发黄, 并有焦斑时, 使用筛子筛干净麸皮即可。

1.2.2 色谱的条件

色谱柱为:Aichrom Bond-AQ C18 (150mm×4.6mm) , 流动相:乙醇0.1%, 磷酸溶液 (14∶86) 。柱温30℃, 进样量20μL, 流速1.0mL/min。理论板数按照芍药峰约4000。

1.2.3 白芍提取物的制作方法

在制作完成的白芍饮片制品中, 各取0.1g, 放置在真空干燥箱内温度设置在80℃, 之后放凉, 取出放置在容量为50mL的烧杯内, 注入乙醇溶液稀释到指定的浓度, 摇匀静置后取上清液, 使用微孔膜过滤, 配制成1.0mg/mL的乙醇溶液, 作为实验使用的溶液。主要成分为乙醇、芍药苷。

取对照品的芍药苷适量, 精准称量, 使用甲醇定容到5mL烧杯内, 搅拌均匀, 制成1.0mg/mL的溶液, 即为对照品甲醇溶液。主要成分:甲醇、芍药苷。

1.2.4 芍药苷检测方法

采用对照品溶液5μL, 供试品溶液10μL, 输入液相色谱仪内, 依据色谱的条件测定, 样品的含量依据干燥品的计算方法计算, 采用外标法进行芍药苷的含量计算。另外本品还采用超声的方法进行了检测。

2 结果

反相高效液相色谱法测定的含量分析后含量最高的是生白芍, 其次是酒白芍同芍药片的含量, 最少的是醋白芍及炒白芍含量, 其中RSD的变化大致相同, 详见表1。超声的检测方法检测的芍药苷的含量测定同反相高效液相色谱法测定的含量无明显差别。

3 讨论

中药含量的精准控制一直以来成为困扰中药学研究的重大难题, 是严重影响中医药学的现代化进步发展严重的障碍。中药学专家教授研究, 采用多种方法尽量进行控制中药中有效成分的含量, 最主要性的操作及控制技术, 难关还没有得到解决, 没有显著的进展和提高。近些年来, 进行中药提取物的研究, 中间产性物已经成为中医药学的热点研究, 但还未取得解决问题的方法, 例如单味药的含量控制方法, 进行中药方剂配伍中的成分相互的药理功效及其机制、及怎样从技术理论上, 明确进行表达等基本问题的处置。虽然也会有部分的研究报道, 采用各种办法进行蒲公英、金银花等中药提取物中有效成分的含量控制研究, 因为采用的中药部位不同、产地及生长环境的差异等不同方面的问题, 采用渗漉的制备方法不确定能进行中药中有效成分的完全性提取;改用有机性溶剂, 也仅能提取一部分的单一有效成分。本文的研究方法用水为试验溶剂, 使用传统的煎煮的方法, 参照浸膏及流浸膏的过程进行制备其提取物, 供试验, 不仅能提取现有明确的有效成分含量, 还可以保持传统中医药学理论中所提出的起综合性作用的成分不会被丢失;不仅能延伸传统的中医药学整体思维及预防完全性按化学成分对中药进行研究的弊端, 还可以按中医药学理论最大限度的保证原始药材的药理功效性质, 尤其是用来控制单味的中药含量的标准。

白芍为毛茛科植物芍药Paeonialactiflora Pall.的干燥根主要采挖的季节是春季和秋季, 采挖后祛除头尾和细根, 放置于滚开的沸水中祛除外皮, 或是去除外皮后进行再煮后晒干。古代医学者觉得生白芍的制备是原药进行去除后切片, 可以生入药, 其主要功效有柔肝养血、滋阴平肝的疗效。在西医药学研究认为其主要功效是, 镇静、安神、抗菌、退热、止痛、抗惊厥、提高机体免疫力等。还具有减少胃酸的分泌、降低血小板聚集、预防血栓形成、保护肝脏的疗效[4,5]。进行加工炮制后的酒白芍是采用黄酒及白芍炮制而成, 具有综合寒性行散补中的疗效;炒白芍以白芍及麸皮混合炒制而成具有和络养血及止痛健脾的疗效。中药白芍药中的主要有效成分为芍药苷, 其含有五没食子酰葡萄糖、芍药苷内酯、没子酸甲酯等, 其具有良好的抗痉挛作用。其主要用途是行经腹痛、月经不调、崩漏、盗汗、自汗, 其肝气不和导致的腹痛、胁痛及手足抽搐疼痛, 肝阳亢盛导致的眩晕、头痛等症[6]。本研究中反相高效液相色谱法测定的含量分析后含量最高的是生白芍, 其次是酒白芍同芍药片的含量, 最少的是醋白芍及炒白芍含量, 结果证明炮制的方法会对白芍提取物中的芍药苷的有效成分含量存在一定的影响。

综上所述, 采用反相高效液相色谱法测定白芍提取物中芍药苷的含量, 具有准确、方便、简单、安全的优点, 适宜使用及推广, 更能有利的对白芍制药的方法进行测定。更能推动中医中药的发展及进步。

参考文献

[1]周德, 王芳, 文永兰.白芍药材中芍药苷含量比[J].医学信息, 2011, 24 (5) :2995.

[2]莫可丰.白芍芍药苷含量测定方法的研究[J].广西中医药, 2003, 26 (2) :6-7.

[3]刘浩.反相高效液相色谱法测定白芍提取物中芍药苷的含量[J].时珍国医国药, 2010, 21 (9) :2392-2393.

[4]李越峰, 杨武亮, 沈菲, 等.高效液相色谱测定白芍中芍药苷的含量[J].时珍国医国药, 2008, 19 (2) :438-439.

[5]林康, 刘放.芍药及芍药苷含量的研究[J].浙江中西医结合杂志, 2003, 13 (5) :321-322.

番石榴中VC的高效液相色谱分析 篇16

关键词： 厚朴树叶；厚朴酚；含量；高效液相色谱法；测定

中图分类号： O657 7+2；R284 2 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0311-03

厚朴（Magnolia officinalia）是木兰科木兰属的一种高大落叶植物 [1]，别名川朴、紫油厚朴，树高15～20 m，广泛地分布于湖北西部、四川西南部、陕西南部、甘肃南部、江西、安徽、浙江、福建、湖南等地 [2]，厚朴树皮是我国传统中药材，称为中药厚朴，始载于《神农本草经》，列为中品，其后历代本草均有记载，厚朴的树皮、根皮、花、籽及嫩芽均能入药 [3]，有燥湿消痰、化湿导滞、消除腹胀便秘、治疗痰饮喘咳、驱风镇痛等功效，还具有抗菌、抗病毒、抗过敏、影响胃肠活动、松弛肌肉和中枢抑制等作用，以厚朴树皮为主，将其作为中药材或深加工的原料使用。厚朴酚是厚朴中的活性物质之一 [4]，有抗菌、镇静中枢神经、松弛肌肉、抗溃疡、抗氧化、预防龋齿等药理作用 [5]，最近研究表明厚朴酚还有抑制癌细胞的作用 [6]，厚朴酚应用广泛，是一些中成药如保和丸、藿香正气水等的主要成分。目前，厚朴酚主要是从厚朴树皮提取，厚朴树皮资源有限，厚朴树一般要生长15年才能符合药用需要，挖根剥皮，一次性使用，而厚朴树叶资源却非常丰富 [7]。人们对厚朴树叶的开发利用研究报道较多 [8]，不同产地和不同季节厚朴叶中厚朴酚以及和厚朴酚含量存在差异 [9-11]，用高效液相色谱法检测厚朴树叶中厚朴酚的含量，不同提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚含量不同 [12-13]，厚朴树叶提取物对植物病原真菌有抑菌活性 [14]，厚朴树叶中含有和厚朴树皮中相同的成分，可用厚朴树叶提取厚朴酚，厚朴树叶的利用前景广阔。陕西南部秦巴山区有丰富的厚朴资源，本研究采用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，进行定性鉴定，用反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量 [15]，可为开发利用厚朴树叶资源提供技术支撑。

1 材料与方法

1 1 材料、试剂和仪器

1 1 1 试验材料 厚朴树叶于2012年11月上旬收集于陕西南部秦巴山区，经陕西理工学院植物学专家赵桦教授分析和辨认，为木兰科木兰属植物厚朴的叶子。置于烘箱50 ℃烘干至恒质量，用中草药粉碎机粉碎过60目筛，密封保存备用。

1 1 2 试剂 厚朴酚标准品（中国药品生物制品检验所），色谱甲醇（色谱纯，进口分装），乙腈（色谱纯TEDIA，进口分装）。乙醇、甲醇、三氯化铁、间苯三酚、苯、香草醛、硫酸、盐酸、羧甲基纤维素钠均为国产分析纯，由天津市天力化学试剂有限公司生产。薄层层析硅胶GF254（分析纯，青岛海洋化工厂）。 1%香草醛硫酸显色剂配制：100 mL无水乙醇、1 g香草醛和10 mL浓硫酸，混合均匀。5%的三氯化铁甲醇水溶液配制：甲醇和水体积比1 ∶ 1混合，按质量百分数称取三氯化铁，混合均匀。间苯三酚盐酸溶液：称取间苯三酚0 1 g，加无水乙醇1 mL，再加盐酸9 mL，混匀，用时新配。水为二次蒸馏水。

1 1 3 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），SL二极管阵列检测器（美国安捷伦公司），Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm，重庆中谱科技有限公司）。超声清洗机（浙江省宁波新芝生物股份有限公司），中草药粉碎机（F117型，天津市泰斯特仪器有限公司），电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司），循环式真空泵（SHZ-Ⅲ型，河南省巩义市予华仪器有限责任公司），电子分析天平（GR-200，日本），薄层色谱扫描仪（北京化学科技有限公司），旋转蒸发仪（河南巩义仪器厂），Soxhelt提取器。

1 2 试验方法

1 2 1 从厚朴树叶中提取厚朴酚 （1）超声辅助提取法：准确称取0 200 0 g粉碎好的厚朴树叶粉末置于带塞锥形瓶中，加入25 mL甲醇，超声30 min，浸渍24 h。提取液呈深棕色浑浊液体，用真空泵减压抽滤，滤液呈透亮棕色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到25 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液 2 5 mL 于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为超声提取待测样品溶液。（2）索氏回流提取法：准确称取厚朴树叶细粉2 000 0 g，用滤纸包好放置于Soxhelt提取器的提取管中，加入250 mL甲醇回流提取48 h，至回流液澄清。提取液呈棕黑色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到250 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液2 5 mL于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为索氏提取待测样品溶液。

1 2 2 厚朴酚定性鉴定 （1）厚朴酚定性检测：分别取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体2 mL各2份于小试管中，再分别加入三氯化铁甲醇水溶液3滴和间苯三酚盐酸溶液3滴，摇匀，进行显色反应。（2）厚朴酚的薄层色谱法检测：取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体，另取厚朴酚标准品储备液，按照《中国药典》2010年版一部附录中薄层色谱法，用毛细管吸取3种溶液，分别点于同一个硅胶薄层板上，以苯 ∶ 甲醇=27 ∶ 1为展开剂，展距8 cm，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸溶液后，在100 ℃下烘烤2～3 min，取出冷却，在日光下和薄层色谱扫描仪下分别观察。

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1 2 3 厚朴树叶中厚朴酚含量的测定 标准品溶液的制备：准确称取厚朴酚标准品1 500 mg，以色谱甲醇为溶剂，定容于10 mL棕色容量瓶中，配制成含厚朴酚0 150 mg/mL的标准品储备液。用厚朴酚标准品储备液精确配5个浓度梯度的标准品待测溶液，厚朴酚含量分别是0 012 5、0 025 0、0 037 5、0 050 0、0 062 5 mg/mL，在色谱条件下进样检测，确定线性标准工作曲线。色谱条件：用Kromasil C18色谱柱，分别以乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22为流动相进行分析测试，流速为1 mL/min，检测波长294 nm，进样量20 μL，保留时间8 min，柱温30 ℃。将超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液与测试标准品待测溶液在同样色谱条件下测试。

2 结果与分析

2 1 提取方法选择

用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，索氏回流提取法需要48 h才能提取完全，提取时间长，且长时间加热回流容易引起有效成分的氧化变质，使得提取液呈棕黑色，对实际操作中的提纯和含量测定都会带来很大的影响。超声辅助提取法温度低，一般控制在 50 ℃ 以下，所需时间短，约30 min，操作简单，由于提取温度低，有效成分不易损失，能耗低，一般可选用超声辅助提取法。

2 2 厚朴酚的定性分析

超声提取物和索氏提取物分别加三氯化铁甲醇水溶液，均呈现蓝黑色，是厚朴酚的酚羟基反应，发生了显色反应；超声提取物和索氏提取物分别加间苯三酚盐酸溶液，出现红色沉淀，是厚朴酚的丙烯基反应，说明有厚朴酚被提取出来。厚朴酚的薄层色谱板在日光下和薄层色谱扫描仪下，超声提取物和索氏提取物的色谱图和标准品相应的位置上，均显棕红色斑点，如图1所示的薄层板分析图谱，说明厚朴树叶提取液中含有厚朴酚，还有其他有机物被提取出来。

2 3 工作曲线的制作

检测浓度梯度的不同标准品待测溶液，以含量（mg/mL）为纵坐标、色谱峰面积为横坐标来绘制工作曲线图（图2）。当厚朴酚浓度为 0 012 5 mg/mL时，峰面积为421 489 90；浓度为0 025 0 mg/mL时，峰面积为822 312 62；浓度为 0 037 5 mg/mL 时，峰面积为1 264 469 70；浓度为 0 050 0 mg/mL 时，峰面积为1 665 953 74；浓度为 0 062 5 mg/mL 时，峰面积为2 055 781 55。由此可见，峰面积与厚朴酚含量建立了良好的线性关系。厚朴酚含量（y）与峰面积（x）的回归方程为：y=3 006×10 -5x+1 449 1×10 -5（r=0 999 9），线性范围在0 012 5 ～0 062 50 mg/mL。

2 4 厚朴树叶中厚朴酚的含量

在高效液相色谱（HPLC）测定过程中，流动相分别用乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22进行比较，测[CM（25]定结果如图3所示是以乙腈 ∶ 水体积比为65 ∶ 35作流动

相得到的图谱，图4是以甲醇 ∶ 水体积比为78 ∶ 22作为流动相得到的图谱。从图3中可以看到，以乙腈和水为流动相时出峰时间较早，厚朴酚的保留时间为3 935 min，各组分不能有效分离，分离度差，干扰严重，峰形不规则。从图4中可以看到以甲醇和水为流动相时出峰时间合理，厚朴酚的保留时间为4 528 min，各组分分离度好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差会减小，在测定厚朴树叶中厚朴酚的含量时使用甲醇和水（体积比78 ∶ 22）为流动相较好。利用HPLC测定超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液，归一化法得到峰面积，经过转化，表明超声提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，索氏提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 725%，可见，不同的提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚的含量是存在差异的。和按照《中国药典》2010年版中的方法测定厚朴树叶中厚朴酚的最高含量为0 32%相比较，高出了1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法能显著提高厚朴酚的得率，超声提取法相对更好一些。

3 结论

用超声辅助提取法和索氏回流提取法提取秦巴山区野生厚朴树叶中的厚朴酚，能显著提高得率，比按照《中国药典》2010年版中的方法提取和检测厚朴酚的含量高出1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法均能提高厚朴酚的得率，前者比后者会更适合工业化生产，超声法提取天然产物中的有效成分已得到广泛应用，可加快浸取速度，提取率高，操作简单方便。用显色法和薄层色谱法对提取的厚朴酚进行定性鉴定，厚朴树叶中含有厚朴酚，可从厚朴树叶中提取厚朴酚。反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量，以 Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm）为固定相，以甲醇和水体积比78 ∶ 22为流动相，检测波长294 nm，流速为 1 mL/min，进样量20 μL，测得厚朴酚的保留时间为 4 528 min，厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，分离效果好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差小，结果满意，适合于厚朴树叶中厚朴酚含量的测定。本试验仅是对厚朴树叶中的厚朴酚进行定性和定量检测，厚朴树叶中的其他酚性物质检测和分析还需要进一步深入研究。

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