高效液相色谱-紫外法

高效液相色谱-紫外法（共12篇）

高效液相色谱-紫外法 篇1

二硫氰基甲烷是一种优异的非氧化性广谱杀菌灭藻剂,对各种真菌、藻类和细菌,包括好气菌与厌气菌均有良好的杀灭效果[1]。它的分子结构式为SCN—CH2—SCN,被广泛应用于各类产品的防腐防霉中。在分析领域中,高效液相色谱测定法已见报道[2],但尚未见用紫外分光光度法分析的报道。本文分别用高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度计法(UV)测定二硫氰基甲烷的含量,并将结果进行比较。

1 仪器与试剂

岛津UV-240紫外分光光度计;戴安U3000高效液相色谱仪。二硫氰基甲烷样品(08011701、08011702、08011601三个批号),二硫氰基甲烷对照品(由样品经5次重结晶获得),甲醇(分析纯),乙腈(HPLC级),重蒸水(自制)。

2 高效液相色谱法(HPLC)测定

2.1 测定波长的确定

取某一浓度二硫氰基甲烷对照品的甲醇溶液在190～400 nm范围内利用紫外分光光度计进行扫描,可得二硫氰基甲烷的吸收波长—响应值的紫外吸收光谱图(见图1)。从图上可看出二硫氰基甲烷的最大吸收波长为245 nm。但在此波长时,流动相和杂质对基线的影响较大,当我们选择254 nm为检测波长时,基线平稳,产品中各杂质在此波长时不影响产品的测定,故我们选择254 nm作为最佳检测波长。

2.2 色谱条件

ODS柱型色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈/水=40/60(体积比)的流动相,流速为0.9 mL·min-1,检测波长254 nm,进样量20 μL。

2.3 线性关系考察

准确称取二硫氰基甲烷对照品0.05 g(精确至0.0001 g)于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取适量上述对照品溶液,用甲醇稀释成50 mg·L-1、100 mg·L-1、150 mg·L-1、200 mg·L-1、250 mg·L-1、300 mg·L-1的供试液,过滤。分别进样,测定结果见表1。以峰面积(A)为纵坐标,浓度c(mg·L-1)为横坐标作回归分析。线性回归方程为:A=0.0725 c,相关系数为r=0.9999。

表1结果表明,二硫氰基甲烷在53.0～318.0 mg·L-1范围内,峰面积与浓度成线性关系。

2.4 精密度试验

取二硫氰基甲烷对照品适量,在线性范围内,用甲醇配成一定浓度二硫氰基甲烷溶液,从称样开始,重复分析6次,结果见表2。相对标准偏差RSD为0.127%,结果表明该方法精密度良好。

2.5 样品测定

分别称取二硫氰基甲烷08011701、08011702、08011601 三批次的样品0.05 g(精确至0.0001 g),于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,并分别量取5 mL于25 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,过滤。进样测定,每个样平行测定3次。由回归方程计算含量。结果08011701、08011702、08011601 三批号的含量分别为95.54%、95.60%、95.58%。

2.6 回收率试验

精密称量二硫氰基甲烷样品0.05 g(精确至0.0001 g)于50 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别量取5.0 mL于6个50 mL容量瓶中,再分别加入浓度为500 mg·L-1的二硫氰基甲烷对照品 的甲醇溶液0、1、2、3、4、5 mL,用甲醇稀释至刻度。在上述色谱条件下进行测定,得平均回收率为99.23%,RSD为0.057%(n=5)。

3 紫外分光光度法(UV)测定

3.1 线性关系考察

取2.3中的6个不同浓度的二硫氰基甲烷对照液,在254 nm处,以纯甲醇为参比液,分别测定其吸光度,以浓度c(mg·L-1)为纵坐标,吸光度A为横坐标作线性回归,得回归方程为:c=350.77A-6.51,相关系数为r=0.9996(n=6)。结果(见表3)表明在53～318.0 mg·L-1范围内,二硫氰基甲烷吸光度与浓度呈良好的线性关系。

3.2 精密度测定

取二硫氰基甲烷对照品适量,在线性范围内,用甲醇配制成一定浓度的溶液,从称样开始,重复分析6次,结果见表4。吸光度平均值为0.6772,RSD为0.183%(n=6)。

3.3 样品测定

取2.5中配置的三个批号的样品溶液,以甲醇为参比液,分别在254 nm处测定吸光度,计算08011701、08011702、08011601 三个批号的样品含量分别为96.01%、95.98%、96.04%。

3.4 回收率试验

取2.6中配制的6个供试样品,在254 nm处测定二硫氰基甲烷的吸光度,测得平均回收率为100.77%,RSD为0.214%(n=5)。

4 结果

用HPLC和UV法测定同一份二硫氰基甲烷含量,共测定6份平行操作的样品,结果见表5。 HPLC法和UV法的RSD分别为0.16%和0.19%。用配对t检验来对两种方法的结果进行检验,t=1.74,查表[3]得t0.05,10=2.23,t< t0.05,10,结果无显著性差异。

5 讨论

本研究结果表明,HPLC法和UV法均可作为二硫氰基甲烷含量的测试方法,两种方法获得的结果无统计学差异,但HPLC法的RSD小于UV的RSD,即HPLC法离散度小于UV法,故HPLC法的精密度更高,但UV法相对于HPLC法,又具有操作方便,分析成本低,速度快,仪器更普及等优点,在日常监测中又具有不可替代的优点。因此,应充分利用两种方法的差异在日常工作中灵活应用两种分析测试方法。

参考文献

[1]朱勇,葛涌涛,陈晓峰.对杀菌剂二硫氰基甲烷分解的测定[J].净水技术,1994,49(3):29-32.

[2]陈楚涛,曾振生.二硫氰基甲烷的高效液相色谱法分析[J].广东化工,2003,(3):46-47.

[3]武汉大学.分析化学(第2版)[M].北京:高等教育出版社,1982.

高效液相色谱-紫外法 篇2

免疫亲和色谱-高效液相色谱法测定土壤中氯磺隆残留

采用碳酰二咪唑(CDI)将Sepharose CL-4B活化并与纯化的抗氯磺隆抗体共价偶联,合成免疫亲和吸附剂并制备对氯磺隆具有特异性亲和力的免疫亲合色谱(IAC)柱.对IAC条件进行优化,选择0.02 mol・L-1 pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积分数)甲醇水作洗脱剂.结果表明,在实验条件下,IAC柱对氯磺隆的.动态柱容量达2.6 μg・mL-1床体积.当标样溶液中氯磺隆含量为2.0 ng・mL-1时,经IAC柱富集后浓度提高近250倍.土壤中添加氯磺隆0.10 μg・g-1、5.0 ng・g-1,提取液以IAC柱分离富集,洗脱液采用高效液相色谱(HPLC)法测定,5次重复实验的平均回收率分别为92.9%、94.8%,相对标准偏差分别为8.46%、8.41%.成功建立了氯磺隆IAC-HPLC分析技术并用于土壤中痕量残留氯磺隆的测定.

作 者：冯大和 邵秀金 韦林洪 刘曙照 FENG Da-he SHAO Xu-jin WEI Lin-hong LIU Shu-zhao 作者单位：扬州大学环境科学与工程学院,江苏,扬州,225009刊 名：农业环境科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF AGRO-ENVIRONMENT SCIENCE年，卷(期)：25(6)分类号：X592关键词：免疫亲合色谱(IAC) 高效液相色谱(HPLC) 土壤 氯磺隆

高效液相色谱-紫外法 篇3

关键词：氟康唑;高效液相色谱法；血药浓度

中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1673-2197（2007）12-033-03

氟康唑(Fluconazole，FCZ)是新型三唑类抗真菌药物,能特异、有效地抑制真菌的甾醇合成，口服及静脉注射(静注)对各种动物真菌感染，如念珠菌感染、新生隐球菌感染、小孢子菌属感染及毛癣菌属感染均有效。据文献报道,本品口服吸收良好,生物利用度可达静注给药的90%以上。口服1～2h后,一般血药浓度可达峰值,血浆消除半衰期约为30h,血药浓度与剂量成正比。血浆蛋白结合率较低,一般为11%～12%,给药剂量的80%以原型药随尿液排除。患者一般对本药能很好地耐受,常见的副作用有恶心、腹痛、腹泻、胃肠胀气、皮疹等,亦可产生肝酶升高。目前,国内已有多家药厂生产。本研究运用高效液相色谱法(HPLC)对氟康唑血药浓度进行了测定,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与药品

仪器:日本岛津公司LC-10A泵,KromailC18色谱柱(4.6mm×250mm),SiL-10A全自动进样器,SPD-10A型紫外可见分光光度检测器(190～600nm),NC-2000型色谱工作站，TCL-16G高速台式离心机,超声波发生器,YKH-Ⅱ型液体快速混合器(江西医疗器械厂)。试剂:甲醇色谱纯(山东省禹王实业总公司化工厂),其它试剂均为分析纯,水为重蒸馏水,氟康唑对照品由中国药品生物制品检定所提供。内标溶液(0.25mg/mL):精密称取非那西丁适量,加水溶解并稀释成0.25mg/mL,摇匀,置冰箱中冷藏备用,临用时稀释成0.25μg/mL。标准溶液(0.25mg/mL):精密称取氟康唑适量,加水溶解并稀释为0.2mg/mL,摇匀,置冰箱中冷藏备用,临用时稀释成1.0、5.0、25.0、50.0和100.0μg/mL的应用液。 

1.2 血浆中氟康唑HPLC测定法

1.2.1 色谱条件 色谱柱:KromailC18色谱柱(4.6mm×250mm),流动相:0.1mol/L磷酸-磷酸二氢钾缓冲液-甲醇(50∶50,v/v,pH7.0);流速:1.0mL/min;检测波长:210nm;柱温:30℃。检测器灵敏度0.01AUFS,20μL定量环进样。

1.2.2 血浆样品处理方法 精密吸取血浆样品1.0mL置于具塞离心管中,加100μL非那西丁内标溶液(0.25μg/mL),200μL氢氧化铵溶液(1.5mol/L),乙酸乙酯7.0mL,置于YKH-Ⅱ型液体快速混合器中混匀30s,离心5min(4000r/min),分离有机相置于55℃水浴上以氮气吹干,残余物以甲醇100μL溶解,取20μL进样分析。

1.2.3 方法的专属性 将受试者服药前空白血浆、空白血浆加内标和氟康唑标准品及受试者服药后血浆样品同法处理后进样,见谱图1。

1.3 分析方法

1.3.1 血浆标准曲线的绘制 取空白血浆1.0mL5份分置于具塞离心管中,依次加入上述FCZ标准系列溶液100.0μL,按血浆样品处理方法处理后经HPLC测定,以氟康唑峰面积和内标峰面积比(Y)对氟康唑浓度(X)回归分析,方程:Y=0.1769X－0.0449,r=0.9995(n=7),线性范围为:0.3204～20mg/L。

1.3.2 回收率试验 用空白血浆和标准液制成浓度分别为10.0mg/L、2.5mg/L、0.625mg/L的样品各5份,同法操作,进样,氟康唑峰面积为A1,另取相应氟康唑标准液进样,氟康唑的峰面积为A2。按公式：提取回收率(F)=(A1/A2)×100%计算;用空白血浆与标准液制成浓度分别为10.0mg/L、2.5mg/L、0.625mg/L的样品各5份,同法操作,以测得值除以实际浓度值计算方法回收率。测得提取回收率结果分别为(89.2±2.63)%、(91.1±5.03)%、(88.9±2.88)%,方法回收率分别为(97.2±3.13)%、(99.1±2.03)%、(100.9±2.31)%。低、中、高浓度时,提取与方法回收率均符合生物样品分析的要求。

1.3.3 精密度试验 在同一日内,用空白血浆与标准液制成浓度分别为10.0mg/L、2.5mg/L、0.625mg/L的样品各5份,同法操作,计算;同法配制浓度为10.0mg/L、2.5mg/L、0.625mg/L样品,同法测定,连测5ｄ,计算。结果见表1。低、中、高浓度时,该方法的精密度符合生物样品分析的要求。

1.3.4 稳定性试验 用空白血浆与标准液制成浓度分别为5.0mg/L^-1、2.5mg/L^-1、0.625mg/L^-1的样品,于室温(25℃)放置8ｈ后,同法操作,计算;于-40℃冰箱中冷冻24ｈ后,取出完全融化,反复冻融3次(3ｄ)后,同法操作,计算;于-40℃冰箱中放置7、14、21、28、35ｄ后,同法测定，计算。本试验样品稳定性符合生物样本分析过程要求。结果见表2。

2 讨论

本试验采用高效液相色谱法,用醋酸乙酯提取血浆中氟康唑,快速混合1min,一次提取,能有效提取氟康唑并减少了其它物质的干扰,提取回收率高,基线平稳,杂质峰少,分析时间缩短。试验中发现,适当增加非那西丁的用量,可以使内标色谱峰面积加大,结果更准确,更有利于分析。检测波长为260nm时,对浓度为0.3125mg/L的样品测定,灵敏度达不到分析要求。将同一样品在不同波长(260nm,210nm)处进行测定,可知,血浆样品在260nm时,样品峰很小,积分困难;而在210nm处样品峰很大,容易积分。光谱图扫描亦可知,样品在260nm处吸收很不明显,而在210nm处有明显吸收。经过多次试验,选择甲醇-磷酸盐缓冲液(50∶50,ｖ/ｖ)作为流动相,检测波长选择在210nm处,一改以往文献中采用乙腈-磷酸为流动相、检测波长在260nm附近的色谱条件。在本试验色谱条件下,能很好地分离内标、氟康唑及内源性杂质,峰形良好,且缩短了分析时间。

综上所述，本实验所用的测定氟康唑血药浓度的方法与GC、HPLC及其它生物学方法相比,大为优化,完全能满足人体药动学及生物等效研究的要求，可以作为此方面研究的可靠分析方法。

参考文献：

［1］ 白林,张志萍,陈秀兰.高效液相色谱法测定氟康唑血药浓度［J］.药物分析杂志,1994,14(2):22.

［2］ 孙春华,刘蕾,刘风琴.国产氟康唑片在人体生物利用度研究［J］.中国临床药理学杂志,1998,14(3):161.

［3］ 岗艳云,伍斌,许向阳.人体内氟康唑的药代动力学及其生物利用度［J］.中国临床药理学杂志,1999,15(1):29.

［4］ Hosotsubo K K，Hosotsubo H,Iishijima M K.Rapid determination of serum levels of a new antifungal agent，fluconazole，by high performance liquid chromatography［J］.Chromatogr ,1990 （52）:223.

高效液相色谱-紫外法 篇4

关键词：紫外检测器—高效液相色谱法,复方氨基酸注射液,山梨醇,含量测定

过树脂后高碘酸盐法测定复方氨基酸注射液(18AA)中山梨醇的含量,方法简便,适用于药品的中间体控制,但专属性没有紫外检测器—高效液相色谱法(UV-HPLC法)强。本文旨在探讨UV-HPLC法测定18AA中山梨醇含量的精确性。

1仪器与试药

1.1 仪器

Waters515/717/2489高效液相色谱仪;Empower 2色谱工作站;Aminex HPX-87H Column,300×7.8mm,Biorad 125～0140;Aminex Micro-Guard Cation H Refill Cartridge,30×4.6mm,Biorad 125～0129;Standard Cartridge Holder for Micro-Guard 30×4.6mm,Biorad 125～0131;梅特勒托利多XS 205分析天平。

1.2 试药

山梨醇工作对照品(法国盖罗特公司,含量:100.0%,批号:E7352);浓硫酸(德国Merck公司,浓度:95%～97%);乙腈(德国默克公司,色谱纯);注射用水(0.20μm微孔滤膜滤过)。

2方法与结果

2.1 流动相的配制

将6.5ml浓硫酸用注射用水稀释至2000ml。

2.2 对照品储备液的制备

按处方量精密称取山梨醇工作对照品适量,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度。

2.3 样品溶液制备

精密量取18AA样品1ml,置10ml量瓶中,加水稀释至刻度。

2.4 色谱条件

流动相:50mmol/L H2SO4;波长:210nm;流速:0.6ml/min;运行时间:35min;柱温:29℃;进样体积:20μl。

2.5 系统适用性试验[1]

2.5.1 分离度试验:

按样品溶液制备处理18AA样品溶液,进样20μl,记录色谱图(见图1),山梨醇与其他峰间的分离度>1.5。

2.5.2 精密度试验:

精密量取山梨醇对照品储备液1ml,置10ml量瓶中,加水稀释至刻度。进样20μl,连续测定5次。测得山梨醇对照峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.7%。结果表明:山梨醇对照进样重复性良好。

2.6 线性试验

精密量取对照品储备液1.5、2.0、2.5、3.0和3.5ml,分别置于25ml量瓶中,加水稀释至刻度。进样20μl,记录色谱图,分别以峰面积与对照品浓度作曲线。测得峰面积与对照品浓度作曲线的回归方程为:Y=3.4251X-1297,相关系数r=0.999。结果表明:山梨醇在2999.52～6998.88μg/ml浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好。

2.7 回收试验

精密量取对照品储备液1.5、2.5、3.5ml,分别置于50ml量瓶中,各加18AA样品溶液2.5ml,加水稀释至刻度。进样20μl,记录色谱图,各测定3次。根据线性试验回归方程计算山梨醇的含量。测得山梨醇的回收率分别为104.13%、100.58%、100.86%,101.79%、101.96%、101.19%,99.65%、98.01%、97.62%,平均回收率为100.6%,RSD为1.9%。结果表明:本方法测定18AA中山梨醇含量回收率良好。

2.8 重复性试验

取18AA样品按“2.10项”下操作,同一样品重复测定6次,记录色谱图,计算山梨醇含量的RSD。测得同一样品中山梨醇含量分别为101.99%、101.04%、101.37%、101.57%、101.42%、98.58%,含量的RSD为1.2%。结果表明:山梨醇含量测定重复性良好。

2.9 溶液稳定性试验

取18AA样品按“2.10项”下操作,每隔一定时间进样,考察样品溶液的稳定性。结果表明:样品溶液用水稀释后在常温下可稳定24h。

2.10 样品测定

按处方量精密称取山梨醇对照品适量,置于100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度。精密量取18AA样品及对照品溶液各1ml,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度。进样20μl,记录色谱图。根据线性试验回归方程计算山梨醇的含量。

3过树脂后高碘酸盐法

3.1 供试品溶液的制备

精密量取18AA 5ml,加至离子交换柱内(交换柱内径为10mm、高度为25cm,内填经转型并处理至中性的钠型磺酸盐阳离子交换树脂约10g),以每分钟1.5～2.0ml的流速通过柱。收集流出液于250ml量瓶中,再用水洗柱3次,每次10ml,最后用水60ml快洗,合并洗液与流出液,用水稀释至刻度,摇匀,备用。

3.2 测定法

精密量取上述供试品溶液5ml,置量瓶中,精密加高碘酸钠硫酸溶液[取硫酸溶液(1→20)80ml与已用硫酸酸化的高碘酸钠溶液(1→1000)120ml,混合制成]50ml,置水浴上加热15min,放冷。加碘化钾1g,密塞,放置5min,用硫代硫酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液2ml,继续滴定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。每毫升硫代硫酸钠滴定液(0.05mol/L)相当于0.9109mg的C6H14O6。

42种方法测定山梨醇含量比较

分别用过树脂后高碘酸盐法与UC-HPLC法测定3种批号18AA中山梨醇的含量。A、B和C三批样品用过树脂后高碘酸盐法测得山梨醇含量分别为106.6%、105.5%和105.9%;用UV-HPLC法测得山梨醇含量分别为102.0%、103.3%和103.8%。结果表明:用过树脂后高碘酸盐法比UV-HPLC法测定复方氨基酸注射液(18AA)中山梨醇含量高2.1%～4.6%,但均符合18AA国家药品标准的要求,说明过树脂后高碘酸盐法专属性没有UV-HPLC法强。

5讨论

通过系统适用性试验、线性试验、回收试验、重复性试验、溶液稳定性试验证明UV-HPLC法回收率、线性和重复性试验良好,溶液稳定,可以准确测定18AA中山梨醇的含量。另外,通过过树脂后高碘酸盐法和UV-HPLC法同时测定3批样品中山梨醇含量的比较,结果表明2种方法测定山梨醇的含量没有明显差异。

参考文献

高效液相色谱-紫外法 篇5

应用高效液相色谱法(HPLC),选用Kromasil SIL柱,以甲醇/异丙醇/正已烷(60/35/5,V/V)为流动相,采用紫外检测器(205nm)对卵磷脂进行了测定.结果表明,大豆卵磷脂的保留时间为26.035min,定量线性范围2.06～30.9μg(r=0.9999),精密度和稳定性实验相对标准偏差均小于5%,加样回收率达97.41%,表明建立的`大豆卵磷脂检测方法灵敏度高、稳定性和重现性好.

作 者：张德权 陈卫涛 张柏林 ZHANG De-quan CHEN Wei-tao ZHANG Bo-lin 作者单位：张德权,ZHANG De-quan(中国农业科学院农产品加工研究所,北京,100094)

陈卫涛,CHEN Wei-tao(中国农业科学院农产品加工研究所,北京,100094;河北农业大学食品科技学院,河北,保定,071001)

张柏林,ZHANG Bo-lin(北京林业大学生物科技学院,北京,100083)

高效液相色谱-紫外法 篇6

关键词高效液相色谱；药物分析；应用

中图分类号R917文献标识码B文章编号2075-2156(2009)04-0107-01

高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等，是一种高压、高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快的分离分析技术，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域。高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。在中国药典中主要用于药物的含量测定、有关物质检查和鉴别等。

1 高效液相色谱法在药物含量测定中的应用

天然药物的来源有动物、植物和矿物之分。由于化学成分复杂，有效成分可能有一个，也可以有多个，因此精确测定各有效成分的含量对药品质量控制，建立质量标准具有重要的意义。高效液相色谱法可对天然药物的成分进行分离鉴定，并测定有效成分的含量。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、抗心率失常、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿瘤等多种药理作用。刘宁等采用HPLC法测定四川粉葛中葛根素的含量，结果显示该方法简便易行，结果准确，可用于四川粉葛药材的质量控制。中药复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分，各有效成份的含量决定了药物的治疗效果。高效液相色谱法适合分子量较大、难气化、对热敏感的等物质的分离分析，因此在中药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到广泛的应用。秦丽惠等采用高效液相色谱法测定了金麦胶囊中绿原酸含量，结果显示该方法测定样品分离度佳，灵敏度高，操作简便，结果准确可靠。

2HPLC在药物鉴别中的应用

中药材是加工中药饮片和生产中成药的原料药，其品种的真伪、质量的优劣直接影响到临床用药的安全有效。中药鉴别是一切重要生产，应用，研究至关重要的第一步。在平时的监督检查中发现许多中药材伪劣品、混淆品出现的频率较高，伪劣品、混淆品与正品药物存在外观相似，但来源不同、性状和功效差异较大，价格相差往往也很大。根据对象的不同，常不能仅从形态上鉴别。而在HPL C法中，因保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别，在中国药典中就有大量的药物采用此法进行鉴别。随着高效液相色谱技术的发展和在药典中的重要性不断提高，出现了一些采用高效液相色谱法鉴别药物的新方法。例如，岗梅等7种冬青属中草药、18种石斛类生药、南北五味子、蜂胶的鉴别。通过对样品各有效成分的组分和含量的测定，从根本上鉴定药物真伪优劣，确定有效性，这无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。

3HPLC在添加违禁药物检查中的应用

近年来，食品，药品，保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件。一些药品和保健品为了让消费者服用后产生显著效果，居然也在其中非法添加不允许的西药成分，这类成分往往对患者造成病情不受控制，药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。对这类非法添加违禁药物的治理与打击，很大程度上依赖于分析检测方法的效能。高效液相色谱法在对添加违禁药物的日常检验工作中，正发挥着越来越重要的作用，为打击药品造假和保障人民用药安全、有效。提供了有力的技术支持。例如，饲料中三聚氰胺的含量测定，降糖类中成药和保健品中是否非法添加降糖成分鉴定。通过HPLC分离样品，用极管阵列检测器检测，可基本确定样品中是否含有某一化学成分，有条件者更可以再采用HPLC-MS联用等手段深入分析，可进一步确保结果的准确无误。在以后的检测工作中有针对性的进行检测，就可以更快更准地发现非法添加物质，为监管部门提供技术支持，为人们的身体健康提供更有效的保证。

高效液相色谱-紫外法 篇7

关键词：高效液相色谱,实验教学,本科生,药物分析

以培养具有创新性思维和较强动手能力、适应我国21世纪新药研究开发需要的药学人才为指导思想, 药物分析课程旨在通过教学使学生了解新药质量标准制订的基本原理, 掌握对已知结构的药物进行定性和定量测定的常见分析方法并在此基础上熟悉一些药物分析的新方法、新技术。实验教学是药物分析的重要环节, 占有较大的比重, 实验教学质量对学生加深理解和巩固所学的理论知识, 正确熟练地掌握实验的基本操作和技能, 培养学生良好的实验习惯、实事求是的科学态度和严谨细致的工作作风, 培养学生掌握药物的质量控制和质量保证能力将起到重要作用[1,2]。因此, 在药物分析的整个学习过程中要求学生既重视药品质量分析的基础理论知识的学习, 又要重视实验技能的训练。我校药物分析教学始于1958年, 在长期的教学过程中, 我们不断总结教学过程, 寻找问题, 实施实验教学改革。

一、实验目的

通过高效液相色谱测定维生素A中视黄醇、视黄醛、视黄酸、维生素A醋酸酯的含量, 了解高效液相色谱的测定原理以及与传统三点校正法相比较之下的优越性, 熟悉高效液相色谱的使用, 引导、培养学生的创新意识。

二、实验原理

高效液相色谱法[3,4] (high performance liquid chromatography, HPLC) 是在20世纪60年代末期迅速发展起来的用于有机物定量分析的仪器分析方法。HPLC是在经典液相 (柱) 色谱的基础上, 采用了由全多孔或非多孔高效微粒 (1.7~10μm) 固定相制备的色谱柱, 由高压输液泵输送流动相, 用高灵敏度检测器进行检测, 实现了高柱效、高选择性、高灵敏度的快速分析, 并成为有机物定量分析的主要分析工具。

三、实验

1. 仪器和试剂。

日本岛津LC-15C高效液相色谱仪, UV 2401-PC紫外分光光度计, 维生素A醋酸酯标准品 (Dr.Ehrenstorfer) , 美国sigma公司视黄醇、视黄醛、视黄酸标准品, 甲醇 (色谱纯) , 异丙醇 (分析纯) , 环己烷 (分析纯) 试药维生素A软胶囊 (上海东海制药) , 实验用水为去离子水。

2. 溶液的配制。

(1) 供试品溶液, 取样品20丸, 挤出内容物, 取0.1463g于10ml容量瓶, 异丙醇溶解并定容至刻度, 用甲醇稀释成14.63μg/ml进样分析。 (2) 对照品溶液, 精密称取视黄醇、视黄醛、视黄酸和维生素A醋酸酯对照品适量, 置容量瓶中, 加异丙醇溶解并用甲醇定容至刻度, 配制成各对照品浓度约为12μg/m L的混合对照品溶液。

3. 实验内容。

(1) 对东海制药生产的维生素A软胶囊, 按上述色谱条件测定, 用外标法以峰面积计算含量, 同时按照药典执行标准采用紫外分光光度法测定含量。2种方法测定结果见表1。 (2) 人工用对照品模拟样品, HPLC法测定结果见表2。

但是UV法只能测得Va醋酸酯含量, 不能测得视黄醇、视黄醛和视黄酸的含量, 具有一定的局限性。

四、总结

通过高效液相测定维生素A醋酸酯的含量与中国药典收录的三点校正法[7]的比较, 发现HPLC法和三点校正法都能测定维生素A软胶囊中维生素A醋酸酯的含量, 但是两种方法在应用范围上存在一定的区别。三点校正法适合纯度比较高的维生素A醋酸酯[5], 通过三点校正法虽然可消除某些杂质的影响, 使得该法在Va制剂含量测定中始终发挥着重要作用, 但是不能够单独测出维生素A中杂质的含量。HPLC法更适合纯度比较低的维生素A, 而且能够单独测出某种特定的杂质的含量。在最新的研究发现, 农药草达灭对大鼠体内维生素A代谢产物产生影响, 因此对睾丸造成一定的毒性。HPLC法可以对动物体内维生素A及其代谢产物即视黄醇、视黄醛、视黄酸进行含量测定[6], 但是紫外三点校正法明显不行。因此HPLC法显示出其特有的优越性。HPLC法专属性更强, 检测灵敏度更高, 能更好对样品进行质量控制。分析实验课中开设高效液相色谱法和三点校正法测定维生素A含量的实验, 可对同种目标分析物的不同分离方法进行比较, 以加深学生对两种分离方法的理解, 从而提高学生灵活运用分离分析方法的能力。目前国内相关院校已经相继给本科生开设了毛细管电泳的实验, 但是关于该类教学实验的详细、全面报道很少。我们在积极给本科生开设了相关实验的同时, 不断结合自己的科研成果, 使其成为一个开放式实验, 取得了较好的教学效果。

参考文献

[1]于世林.高效液相色谱法技术与应用[M].北京:科学出版社, 2009.

[2]詹益兴.实用色谱法[M].科学技术文献出版社, 2008.

[3]黄琦, 周孝瑞, 蒋成君等.面向应用型人才培养的药物分析改革与实践[J].安徽医药, 2011, 15 (5) :655-658.

[4]付支锋, 王琳.药物分析实验教学改革的探索与实践[J].山西医科大学学报, 2010, 12 (2) :191-192.

[5]钱玲慧, 廖佳宇, 李亚妮等.测定维生素A的三种方法比较[J].实验技术与管理, 2012, 29 (5) .

[6]Fabiola G, Zuno-Floriano, Dirk Holstege, et al.Determination of Vitamin A and its Metabolites in Rat Testis:Possible Involvement of Vitamin A in Testicular Toxicity Caused by Molinate[J].Bull Environ Contam Toxicol (2012) 88:1038-1042

高效液相色谱-紫外法 篇8

皮革毛皮的强制性标准GB20400- 2006 《皮革和毛皮有害物质限量》[1]对甲醛含量检测进行了具体要求。GB/T19941- 2005《皮革和毛皮化学试验甲醛含量的检定》[2]中对甲醛检测提供了两种方法:液相色谱法与分光光度法。

在这两种方法中,基于成本与效率考量,目前较多实验室采用分光光度法, 但标准要求在仲裁时要采用液相色谱法,本文主要是对这两种方法进行对比实验,对实验结果进行分析,找出两种方法的主要干扰因素及解决方法。

1 实验部分

1.1样品

分别选取了不同材质的皮料样品见表1。

1.2仪器和试剂

1.2.1 仪器

安捷伦1290 型高效液相色谱仪,岛津UVmini- 1240 分光光度计(波长412 nm)。

1.2.2 试剂

甲醛标准溶液、2,4- 二硝基苯肼(DNPH)、乙腈、纳氏试剂、十二烷基硝酸钠。实验用试剂为分析纯,色谱法所用水为超纯水。

1.3实验

将上述14 个样品,依照标准GB/T19941- 2005的要求分别用色谱法和分光光度法两种方法进行测试,结果见表2。

2实验现象

从表2 可以看出,粘附有PU膜的皮革样品,两种方法检测结果相差较大。把这几个样品单独列出见表3。

3实验结果差异分析

由于在GB/T19941- 2005 发布之前,皮革中甲醛一般都是参照GB/T2912.3[3]进行检测,所以先根据这两个标准的前处理差异性进行分析。

3.1衍生液

分光光度法衍生化是在乙酸铵的缓冲溶液中进行,液相色谱法是在强酸性条件下进行,为了考察衍生液的因素,实验对比了GB/T19941 与GB/T2912.3衍生液配制溶剂,发现利用GB/T2912.3 中的衍生液检测出的结果与分光光度法刚好对上,同时测得利用两种不同溶剂配制的衍生液衍生后的p H值相差较大,GB/T19941 测得的p H值为1.1,GB/T2912.3测得的p H值为3.7,具体检测数据见表4。

3.2衍生条件

对同一皮革样品,同一衍生液,对比了GB/T19941 与GB/T2912.3 衍生条件,发现在这两种不同的衍生条件下,得到的检出结果接近,具体数据见表5。

3.3衍生时间

GB/T19941 中衍生后放置时间规定为:放置60min,但最多不能超过180min,时间范围较宽,所以考察了检测结果随着放置时间的不同的一个变化情况,发现在60min至180min之间,检出值随着放置时间的变长而明显增加,180min后增加较为平缓,趋势图如图1。

3.4样品

为了考察样品的影响,同时对毛皮、仿毛皮进行了对比实验,发现毛皮、仿毛皮用这两种方法检测,数据也都接近,且随放置时间变化不大,具体数据见表6。

此外,对另取的8 种粘附有PU膜的皮革样品进行对比实验,发现用这两种方法检测时都是液相色谱法检测值比分光光度法大,只是不同的样品增大值不一样。具体检测值见表7。

4结论

从以上差异分析可以看出只有粘附有PU膜的某些皮革样品用GB/T19941- 2005 检测时,液相色谱法检测结果比分光光度法大,另外在强酸性条件下衍生化后随着放置时间的增加,检出值也随之增加。

通过查阅文献[4]初步猜测可能是聚氨酯材料中间掺杂了一些甲醛的聚合物如酚醛树脂或脲醛树脂,而由于在液相色谱法的衍生方法里加了磷酸,这个强酸性的环境会导致酚醛树脂分解生成了单体的甲醛,即而再生成甲醛和2,4- 二硝基苯肼的衍生物。除此之外,也可能与这类特殊的皮革样品加工工艺有关。比如在甲醛鞣制过程中,主要是基于胶原分子上的氨基或亚氨基与甲醛分子上的羰基发生亲核加成反应, 并因此产生交联作用。该反应是可逆的, 因此在强酸性条件下会逐渐释放出甲醛。另外,样品涂饰后用的固定剂是从甲醛和氮化合物中制造来的, 反应中形成弱的C—N键, 发生在水中的亲核反应导致这些键的裂解, 特别是在强酸性条件下, 更容易分解出甲醛。此外皮革在直接染料和活性染料染色后的固色处理以及涂料印花浆料等工艺过程中, 甲醛作为交联剂使用时发生可逆反应释放甲醛。

5建议

5.1 液相色谱法

根据以上实验现象分析,为了保持实验结果的一致性,建议GB/T19941- 2005 中衍生液利用0.5%的醋酸乙腈溶液配制。为了节约检测时间,建议甲醛衍生化条件改为“在60℃水浴中静置反应30min,经过滤膜过滤后进行色谱确定”。

5.2分光光度法

在采用分光光度法的检测中,皮革、毛皮在萃取过程中经常会有很严重的褪色干扰,如果在测试过程中有吸光度值超过曲线范围了,就要将萃取液进行稀释,稀释到吸光度值在曲线范围内才可以,不然结果会有很大的差异。而且一定要将萃取液自身的吸光度同时进行稀释(即EP、Ee值同时稀释),并要用双甲酮进行下确认。

在采用分光光度法时,萃取液中会有很多细小的颗粒和悬浮物,因此萃取液不能直接用于显色试验,而是要经过过滤处理。萃取液经过过滤后,要尽可能地确保溶液清澈,在显色过程中,经常会出现浑浊现象,是由于萃取液中的某些物质可能和显色剂中的乙酸胺发生了反应,出现浑浊现象,如果显色后的溶液出现浑浊现象要用0.45μm聚酰胺过滤膜多次过滤,再进行测试,避免因浑浊而使吸光度值增大,产生正偏。

参考文献

[1]GB 20400-2006,《皮革和毛皮有害物质限量》.

[2]GB/T 19941-2005,《皮革和毛皮化学试验甲醛含量的检定》.

[3]GB/T 2912.3-2009,《纺织品甲醛的测定高效液相色谱法》.

高效液相色谱-紫外法 篇9

关键词：高效液相色谱法,利福霉素钠,含量测定

利福霉素钠属安莎类抗生素,是半合成的利福霉素中的广谱抗生素,也是国内惟一供注射用的利福霉素类药物,对金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌有较强的杀菌作用。是临床九大抗结核药物的首选药物。由于利福霉素钠结构复杂、不稳定、容易产生降解杂质,主要杂质为利福霉素S与利福霉素B,使用高效液相色谱法测定利福霉素钠的含量。该方法简便、快速、精密、准确。

1 仪器与色谱条件

采用岛津LC-6A型高效液相色谱仪;岛津SPD-6AV紫外检测器;Kromasil-C8色谱柱(250×4.6mm,5um)(瑞典NobelLEka生产),甲醇(0.075mol/L):磷酸二氢钾溶液(1.0mol/L):枸橼酸溶液(60:26:4)为流动相,检测波长为254nm,流速1.0ml/min,柱温35℃,进样量10μl。

2 方法与结果[1,2,3,4]

2.1 标准溶液的制备

利福霉素标准品(批号0333—200606,832μg/mg)、利福霉素S (130539?200601)和利福霉素B(130540?200601)均由中国药品生物制品检定所提供;利福霉素钠原料由四川制药股份有限公司提供,批号分别为2005-10-21,2005-10-22,2005-10-23,2005-10-25,2005-10-28与200605001、200605002、200605003;注射用利福霉素钠(批号为051128,规格0.25g)由海南三元阳普医药有限公司提供;培养基为I号6.0～6.5,批号:051112(北京三药科技开发公司生产,中国药品生物制品检定所监制);菌种为藤黄微球菌[CMCC(B)2800 1](中国药品生物制品检定所);甲醇与乙腈为Merck公司生产(色谱纯),其余试剂均为分析纯。精密称取对照品0.2g,加入5ml甲醇使溶解并稀释到100ml,精密量取0.6ml,0.8ml,1.0ml,1.2ml,1.5ml,2.0ml分别加流动相稀释到25 ml摇匀备用。

2.2 标准曲线的绘制

按1项下的色谱条件,取2.1项下的标准溶液分别进样测得的结果见表1。

回归方程:Y=1578749-64917,r=1.0001。说明利福霉素浓度和色谱峰面积的线性关系良好

2.3 溶液稳定性试验

取2.1项下的标准溶液于不同时间进样,每样20?l,在室温下放置12h分别在(0、2、4、8、12)h取样测定,其平均峰面积为1473250,表明本品在甲醇:乙腈:0075mol/L磷酸二氢钾溶液:1.0 mol/L枸橼酸溶液中稳定。结果表明利福昔明溶液在12小时内是稳定的。

2.4 精密度试验

精密称取利福霉素对照品0.2g,精密称定6份,分别加5ml甲醇使溶解并稀释到100ml,精密量取1.0ml,分别加流动相稀释到25 ml摇匀,分别进样,每样20?l,结果见表2。

RSD=1.56%结果表明:本法精密度较好

2.5 样品含量测定

精密称取细粉取利福霉素1.623g,置100ml量瓶中,加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密吸取续滤液5ml置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,照高效液相色谱法中(中华人民共和国药典2005年版二部)方法测定,取20μl注入液相色谱仪中,记录色谱。另精密称取于105℃干燥至恒重的利福霉素对照品0.8g,置100ml量瓶中,加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5ml置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,同法测定。按外标法以峰面积计算,结果见表3。

依据试验结果,规定含量限度为90.0%～105.0%

3 讨论

采用高效液相色谱法测定利福霉素的含量,我们用高效液相色谱法,色谱柱为KromasilC8,(甲醇:乙腈:0075 mol/L磷酸二氢钾溶液:1.0 mol/L枸橼酸溶液)=50:22.5:22.5:5为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为240nm,利福霉素在(41.02～164.08)μg/mL范围内线性关系良好(r=0.99997),平均回收率为99.79%,RSD为0.2%,该方法准确、灵敏、可靠,能有效地控制该制剂的质量,可作为该制剂含量测定的检测方法。

参考文献

[1] 张兵.Rp-HPLC测定利福昔明的含量及有关物质[J].华西药学杂 志,2003,18(4) :281．

[2] 吴小英,童成亮,钟淮滨.利福昔明中有机溶剂残留量的测定[J].安 徽医药,2004;02:45-46

[3]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(第二部附录Ⅳ) [s].2005版.北京:化学工业出版社.2005,65

高效液相色谱法测定兰索拉唑含量 篇10

兰索拉唑不耐酸, 目前比较普遍给药方式为口服的兰索拉唑肠溶片和肠溶胶囊, 起效较慢, 而改变给药途径为静脉给药的注射用兰索拉唑提高了兰索拉唑的生物利用度, 缩短了起效时间。为保证产品质量, 我们拟用高效液相色谱法对其含量测定方法进行研究。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪;Alltima TM C18色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ;MS105型精密电子天平 (梅特勒) ;兰索拉唑对照品 (批号:100709-201304, 含量为99.8%, 中国食品药品检定研究院) ;注射用兰索拉唑 (30mg, 以C16H14F3N3O2S计, 自制) ;甲醇、三乙胺、磷酸均为色谱纯, 水为注射用水。

2 含量测定方法

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, Alltima TM C18色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ;流动相:甲醇-水-三乙胺-磷酸 (600:400:5:1.5) [用磷酸溶液 (1→10) 调节PH值至7.3], 检测波长为284nm;流速为1.0m L/min;柱温30℃;进样量20μL。调节流动相比例使兰索拉唑峰的保留时间约为16min。

2.2 测定法

精密称定样品, 约含兰索拉唑15mg, 置100m L容量瓶中, 加0.1mol/L氢氧化钠溶液5m L与甲醇-水 (60:40) 溶液适量, 超声使溶解, 用甲醇-水 (60:40) 溶液稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液20μL注入液相色谱仪, 记录色谱图;另取兰索拉唑对照品, 同法测定, 按外标法以峰面积计算, 即得。

3 方法学试验

3.1 准确度试验

按照制剂处方, 分别称取1 8 m g、15mg、12mg的兰索拉唑对照品各3份, 分别加入处方量的辅料于同一100m L容量瓶中, 加0.1 m o l/L氢氧化钠溶液5 m L与甲醇-水 (60:40) 溶液适量, 超声使溶解, 用甲醇-水 (60:40) 溶液稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 续滤液分别作为测定浓度120%、100%、80%的供试品溶液, 按外标法以峰面积计算测得量和回收率, 试验结果见表1。

结果表明:含量测定平均回收率为100.08%, RSD为0.42%, 准确度试验符合测定要求。

3.2 线性范围试验

储备液的制备:称取兰索拉唑对照品15mg, 置50m L容量瓶中, 加0.1mol/L氢氧化钠溶液5m L与甲醇-水 (60:40) 溶液适量, 超声使溶解, 用甲醇-水 (60:40) 溶液稀释至刻度, 作为储备液。

精密量取上述溶液3 m L、4 m L、5 m L、6m L、7m L, 分别置10m L容量瓶中, 加甲醇水 (60:40) 溶液稀释至刻度, 作为线性试验溶液。分别精密量取20μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。以兰索拉唑浓度与相应峰面积计算线性回归方程, y=13263x-368.8, 相关系数r=0.9994。结果表明, 兰索拉唑浓度在0.09~0.21mg/m L范围内, 具有良好的线性关系。

3.3 重复性试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 重复测定6次, 计算其平均值。

结果表明:6次测定的平均含量为标示量的101.98%, RSD为0.21%, 平行性好, 重复性试验符合测定要求。

3.4 溶液稳定性试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 每隔1h测定一次, 共测定5次, 计算其平均值。

结果表明:兰索拉唑平均含量为标示量的101.44%, RSD为0.36%, 供试品溶液在室温条件下5 h内稳定。

3.5 进样精密度试验

取供试品溶液, 精密量取20μL, 注入液相色谱仪, 连续进样6次。

结果表明:兰索拉唑平均峰面积为11891.5, RSD为0.56%, 该方法进样精密度良好。

3.6 中间精密度试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 变动因素为不同日期, 不同人员。计算其平均值。

结果表明:兰索拉唑平均含量为标示量的101.48%, RSD为0.41%, 该测定方法中间精密度良好。

4 样品含量测定

取三批供试品, 照含量测定方法分别进行测定。结果表明:三批供试品含量均为98.0%~102.0%之间。

5 讨论

建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、溶液稳定性试验、进样精密度试验及中间精密度试验等方法学试验, 表明该含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点, 可有效控制注射用兰索拉唑的含量。

摘要：目的 采用高效液相色谱法建立兰索拉唑含量测定方法。方法 Alltima TM C18 (4.6mm×250mm, 5μm) 为色谱柱;流动相为甲醇-水-三乙胺-磷酸 (600:400:5:1.5) [用磷酸溶液 (1→10) 调节PH值至7.3];检测波长为284nm;流速为1.0m L/min。结果 该方法加样回收率测定平均回收率为100.08%, RSD为0.42% (n=6) 。准确度试验符合测定要求。兰索拉唑浓度在0.09mg/m L0.21mg/m L范围内, 具有良好的线性关系。重复性、中间精密度、进样精密度试验均符合方法学试验要求。供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。结论 该方法简便、快速、准确、重复性好, 可有效控制注射用兰索拉唑的含量。

关键词：高效液相色谱法,兰索拉唑,含量测定

参考文献

[1]兰索拉唑质量标准.中国药典2010年版第一增补本, 281.

[2]杨艳, 谢俊霞, 李冰, 等.HPLC测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量和有关物质[J].中国药学杂志, 2006, 41 (7) :538-540.

高效液相色谱-紫外法 篇11

关键词：高效液相色谱法；斑蝥黄；水产品

中图分类号：O657.7+2 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0308-02

斑蝥黄（astaxanthin）化学名称β-胡萝卜素-4，4′-二酮，亦称角黄素，分子式为C40H52O2。天然的斑蝥黄具有抗氧化、消除自由基的作用，在生物体内的含量甚微。随着人工合成斑蝥黄的工业化，其在饲料、食品、化工、医药等行业得到了广泛的应用^[1]。然而，近年来的研究结果表明，人体吸收斑蝥黄后会积累在视网膜上，从而造成视力减退等眼疾。为此，欧盟于2003年出台法规将饲料中的斑蝥黄最高含量从原来的80 mg/kg降低到25 mg/kg^[2]。日本于2006年5月29日实施的“肯定列表制度”规定：禽蛋和猪、牛、水产品等动物源性食品中角黄素最大残留限量为0.1 mg/kg。2008年我国农业部1126公告即《饲料添加剂品种目录》中规定，斑蝥黄被允许添加在家禽养殖饲料中，而不允许在水产饲料中添加。斑蝥黄重要用途之一是作为蛋黄着色剂饲喂产蛋家禽，使蛋黄变成人们喜爱的橙红色，但不法商贩将着色剂超量饲喂家禽现象依然存在。虽然在水产养殖中禁止使用斑蝥黄，但是由于其具有较好的着色效果，喂养后的鱼类色泽更好、销售价格更高，违规使用的现象较多。给水产品质量安全带来了隐患。目前，斑蝥黄的检测方法主要有色谱法^[3-6]、分光光度法^[7]、薄层色谱法^[8]，但主要是针对饲料或者家禽类产品。由于水产品的特殊性，在检测技术上要求更高。本研究设立了水产品中斑蝥黄的高效液相色谱测定方法，有效消除了脂类及其他杂质对待测物的干扰，降低了损耗，减少了有机溶剂用量，提高了回收率、准确度和精密度。该方法满足水产品质量安全检测的需要，对于应对日本肯定列表制度，克服技术性贸易壁垒，增加出口，保护渔民和消费者权益具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Thermo Accela PDA液相色谱仪（美国Thermo公司），配紫外检测器；电子天平（瑞士梅特勒公司），感量0.000 1 g；SK3300LH超声仪（上海科导仪器公司）；TDD-4离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）；B-490旋转蒸发仪（美国 BUCHI公司）。

标准物质斑蝥黄，纯度≥98%，由德国Dr. Ehrenstorfer公司生产。乙腈为色谱纯，购自国药集团化学试剂有限公司。滤膜：0.22 μm。

1.2 斑蝥黄标准溶液配制

1.2.1 标准贮备液

准确称取斑蝥黄标准物质10 mg（精确到0.1 mg），用乙腈溶解，转入容量瓶定容至100 mL，摇匀，配成浓度为100 μg/mL的标准贮备液，4 ℃以下避光保存，有效期3个月。

1.2.2 标准中间液

准确吸取斑蝥黄标准贮备液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容，摇匀，配成浓度为10.0 μg/mL的标准中间液。临用前配制。

1.2.3 标准工作溶液

在室温下，分别取标准中间液0、10、20、50、100、200、500、1 000 μL，各置10 mL容量瓶中用乙腈稀釋定容，摇匀。该标准系列浓度分别为0、0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL。临用前配制。

1.3 样品前处理

称取5 g均质后的水产品样品于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，超声提取2 min，匀浆提取30 s，以4 000 r/min离心5 min。另取一支50 mL离心管加10 mL乙腈，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，涡旋混合30 s，超声提取 2 min，以4 000 r/min离心5 min；合并上清液，旋转蒸发至干，用乙腈定容至10 mL，过0.22 μm滤膜，待上机分析。

1.4 色谱分析条件

色谱柱：Hypersil GOLD C18液相色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.9 μm），流动相：A相为乙腈，B相为水，梯度洗脱程序见表1；流速：200 μL/min；柱温：30 ℃；样品盘温度 15 ℃；进样量：20 μL；检测波长：475 nm。

2 结果与分析

2.1 标准溶液色谱图

在“1.4”节规定的色谱条件下，斑蝥黄标准溶液的色谱图如图1所示，浓度为2.00 μg/mL。

2.7 方法检出限

以空白水产品为基质加标，按照3倍信噪比（S/N≥3）估算最低检出限，本方法检测限为10 μg/kg。

3 结语

本研究采用乙腈萃取，流动相为乙腈和水，萃取率高，出峰快，峰形良好；该方法简便，准确度和精密度好，灵敏度高，检出限低，满足水产品质量安全检测分析的要求。

参考文献：

[1]汪洪涛，徐学明，金征宇. 角黄素的性质与开发应用[J]. 粮食与饲料工业，2003（6）：31-32.

[2]EU. Animal Feed-Brighter Eyesight or Brighter Salmon？ Commission Decides New Rules on Colouring Feed Additive[EB/OL]. （2002-01-27）[2013-09-03]. http：//www.foodlaw.rdg.ac.uk/news/eu-03009.htm.

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[4]余孔捷，钱 疆，杨 方，等. 高效液相色谱法测定动物源性食品中角黄素、虾青素的研究[J]. 食品与发酵工业，2008，34（3）：145-148.

[5]王全林，史萍萍，张书芬，等. 反相高效液相色谱法同时测定咸鸭蛋黄中的斑蝥黄和苏丹红[J]. 色谱，2007，25（6）：864-866.

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高效液相色谱法测定洛伐他汀 篇12

洛伐他汀 (Lovastatin) 又名美降脂、罗华宁、洛之达等。是新型调整血脂药, 为甲基羟戊二酰辅酶A (HMG-GoA) 还原酶抑制剂, 能抑制内源性胆固醇合成, 降低血清总胆固醇 (TC) 、血甘油三酯 (TG) 、低密度脂蛋白 (LDL) 、升高高密度脂蛋白 (HDL) 水平。主要用于治疗原发性高胆固醇血症, 以高胆固醇为主要异常的高脂血症;防治冠状动脉粥样硬化, 延缓硬化进程、减少梗塞病的发生。其独特的疗效, 被誉为治疗心血管系统疾病的里程碑, 深受广大患者的欢迎。洛伐他汀片被确定为《国家基本医疗保险药品目录》中的循环系统用药, 列为我国国家基本药物, 是目前国际流行的新型调整血脂药。

1 实验方案

1.1 洛伐他汀样品由华北制药集团有限责任公司生产;对照品由北京生物化学制药厂提供;乙腈为色谱纯缓冲液:称取3.45gNaH2PO4溶于900ml水中, 用H3PO4调整p H值到4.0, 然后转入1000ml容量瓶中, 加水定容到刻度。

1.2 色谱条件

色谱柱XDB-C18, 5μm, 25cm×4.5mmI.D., 流动相为乙腈+缓冲液+甲醇 (5+3+1) , 柱温45℃, 流速1.5ml/min, 检测波长为231nm, 进样量20μl。

1.3 系统适应性实验

称取洛伐他汀对照品适量, 加流动相溶解并制成每1ml中分别含0.1mg的溶液, 摇匀, 进样20μL, 记录色谱图。二者的分离度应符合药典要求。

2 实验结果

2.1 检测波长的选择

取洛伐他汀对照品适量, 以流动相溶解后配成0.1g/l溶液, 测得的紫外吸收谱在231nm处有最大吸收, 所以检测波长定为231nm。

2.2 色谱条件的选择

经筛选, 本实验中采用的流动相体系可使二者实现有效分离, 满足药典规定要求。适当提高柱温, 可降低流动相粘度, 提高柱效, 利用恒定的温度可以避免环境温度变化而引起的保留时间的变化, 提高实验的重复性。本实验中采用的柱温为45℃。

3 实验数据处理与分析讨论

3.1 线性关系

精密称取洛伐他汀对照品10mg, 置50ml量瓶中, 加流动相溶解后稀释至刻度, 摇匀。精密量取该溶液0.5、2.5、5.0、7.5、10ml分别置于10ml量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 分别进样20μl, 记录色谱图。以峰面积对溶液质量浓度进行线性回归 (见图1) , 得到回归方程为:A=0.38249C+2342.54, 相关系数为:r=0.9995 (n=5) 即样品质量浓度在10~200mg/l范围内, 浓度与峰面积呈现良好的线性关系。

3.2 精密度

取同一份对照品溶液, 照样品测定项下方法, 重复进样6次, 记录峰面积, 结果如表2:

3.3 重现性

取同一份对照品溶液, 分别于3个不同日间测定其含量, 结果如表3。从表3可以看出, 方法的重现性良好。

3.4 回收率的测定

精密称取5份已测知含量的洛伐他汀样品10mg各置于200ml量瓶中, 分别加入精密称定的洛伐他汀对照品4、8、10、12、16mg, 用流动相溶解后稀释至刻度, 过滤, 弃去初滤液, 分别进样20μl, 记录色谱图。其结果如表4。

3.5 稳定性实验

取样品适量, 用流动相配成供试液, 分别在0, 1, 2, 3, 4h注入色谱仪, 记录峰面积, 洛伐他汀5次含量的RSD分别为0.2%, 0.3%, 0.2%, 0.6%, 并没有含量下降的趋势, 表明样品在流动相中稳定。

3.6 样品测定

取洛伐他汀对照品适量, 精密称量, 加流动相溶解并制成每1ml中约含0.1mg洛伐他汀的溶液, 作为对照品溶液;另称取样品适量, 加流动相溶解并制成每1ml中约含0.1mg洛伐他汀的溶液, 作为供试品溶液;分别进样20μl记录色谱图, 每份检品各做2个平行样, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算, 结果见表5。

参考文献

[1]李发胜.高效液相色谱法测定希舒美中阿齐霉素的含量[J].光谱实验室, 2001, 18 (2) :183～184.

[2]母昭德, 尚京川, 李亚平等.反相高效液相色谱法测定盐酸阿朴吗啡[J].西南师范大学学报 (自然科学版) , 2001, 26 (3) :360～362.