超高液相色谱法

超高液相色谱法（共12篇）

超高液相色谱法 篇1

种子贮藏蛋白的4种组分并不是纯一的组分, 而是多种蛋白质组分的聚合体。特别是醇溶蛋白, 现已知道至少有5O余种蛋白质组分组成。这种蛋白质组分的多态性是由于基因的重复和非致死突变所致。不同品种的贮藏蛋白组分具有高度的特异性, 而且每类蛋白质的比例也不一样。因此, 可以根据贮藏蛋白的分离图谱来区别不同的基因型。一些研究结果显示, 不同品种的蛋白质组分完全由遗传因素决定, 几乎不受环境条件的影响。因此, 贮藏蛋白的分离图谱便构成品种的“指纹”特征。可见, 利用种子蛋白的特异性鉴定作物品种是可靠的。

高效液相色谱 (HPLC) 是7O年代开始发展起来的分析蛋白质的一项新技术, 目前已广泛用于蛋白质化学领域。使用RP—HPLC能有效进行种子贮藏蛋白的分离, 它的原理是根据不同蛋白质组分的表面疏水性的差异将其分离开, 与蛋白质分子量及所带电荷数无关;而蛋白电泳技术是依据分子大小和电荷的不同来分离的, 因此, 二者的原理不同, 其蛋白分离图谱可以相互印证, 互为补充。[1,2]而超高效液相色谱 (UPLC) 与HPLC相比, 大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度, 因而具有更高的效率和更强的分离能力。目前为止利用UPLC分析孜然芹种子醇溶蛋白的研究还未见报道。因此, 本试验借鉴HPLC的方法, 以新孜然1号为实验材料, 研究洗脱时间、色谱柱温度等对孜然芹醇溶蛋白超高效液相色谱分离的影响, 确立孜然芹种子醇溶蛋白超高效液相色谱法 (UPLC) 分离的最佳实验条件, 为孜然芹种子醇溶蛋白分离分析建立一种有效的方法;然后对比研究10个品种贮藏蛋白的色谱图, 评价使用这种方法作为品种鉴定手段的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料见表1。

1.2 种子蛋白提取

单粒种子研磨15 min, 加入0.5 mL的70% (v/v) 甲醇溶液浸泡2 h[3]。样品继续研磨10 min后, 12000 r/min离心10 min, 通过0.45μm孔径的滤膜后进样上柱分析。

1.3 反相高效液相色谱

色谱分析选用Waters Acquity Ultra performance LC分析系统, 溶剂输送选用Waters高压泵, 自动进样。Waters Acquity Ultra performance LC TUV紫外检测器210nm检测洗脱蛋白。

2 结果与分析

2.1 色谱分离条件选择:

用含0.10%的三氟乙酸的乙腈和0.05%的三氟乙酸水溶液作为溶剂A和溶剂B, 随时间改变溶剂A和B的浓度梯度变化, 来优化色谱分离条件。结果, 使用Waters Acquity UPLC BEH C18粒径1.7μm的反相色谱柱 (2.1×50 mm) , 溶剂A以10%～35%的流速梯度、0.30 mL/min的流速洗脱19 min, 孜然芹种子主要贮藏蛋白在此条件下能够得到分离。

2.2 色谱柱温度对分离结果的影响

由色谱理论可知, 在一定范围内, 随着温度的升高分离效率将逐渐提高, 但温度太高会缩短色谱柱寿命, 使蛋白质变性。为确立温度对UPLC分离孜然芹种子醇溶蛋白的影响, 本试验设计40℃、50℃、55℃三个对比温度, 测定结果见图1。

由图1可以看出, 随着温度的升高特征峰出现的越早, 但总的峰数没有随着温度的升高而发生变化。结合仪器的使用情况, 我们认为40℃柱温最好。

2.3 洗脱时间对分离效果的影响

洗脱时间是影响色谱分离的主要因素之一。前人研究HPLC所用的洗脱时间在40～60 min之间, 而超高效液相色谱 (UPLC) 较HPLC效率高, 为明确洗脱时间对色谱分离的影响, 本试验设计40 min进行试验。从试验结果 (见图2) 来看, 在20 min以后基本没有较明显的特征峰出现。经过重复试验, 我们选择20 min洗脱时间为试验的优选条件。

2.4 不同品种间UPLC色谱图

由图3可以看出, 10个孜然芹品种的醇溶蛋白蛋白洗脱峰顺序较相似, 无显著的特征峰, 只是在含量上有些差别, 不能说明孜然芹品种间的纯度的差异;但是, 小茴香的色谱图与孜然芹有很大差异, 可以很容易把它与孜然芹种子区分开来。

3 结果与讨论

(1) 孜然芹种子醇溶蛋白UPLC分析技术受孜然芹及近缘种测定对象的影响, UPLC分析孜然芹醇溶蛋白的标准方法必须根据实际情况进行反复试验才能确定。本研究结果表:明流速0.3 mL/min、柱温40℃下, 流动相A液在16 min内由10%升至35%, 通过210 nm波长检测紫外吸收为孜然种子醇溶蛋白UPLC分离的最佳条件。

(2) UPLC技术分析孜然芹种子醇溶蛋白与A-PAGE相比, 具有如下优点: (1) 试验速度快, 试验周期短, 一个样品只需20 min。 (2) 试验条件稳定, 易于控制重复性高。 (3) 图谱清晰, 数据分析准确可靠, 易于比较。 (4) 能实现自动化控制, 节省人力。UPLC技术的分辨率和定量性优于单向电泳, 这样就有可能对某些用单向电泳不能鉴定的育种系谱相近的品种进行鉴定。

(3) UPLC分析中, 温度是最重要的影响因素。不同色谱柱的性能指标有差异, 在实际应用中必须因地制宜, 结合蛋白质的特性确定最适温度。洗脱时间对实验效率有一定的影响, 根据孜然芹及近缘种的倍性及组成差异, 进行相应的改进, 从而缩短实验时间, 节省成本, 提高工作效率。

(4) 由于10个孜然芹品种的醇溶蛋白蛋白各组分疏水性相近, 在该方法中没有完全分开, 洗脱峰顺序较相似, 无显著的特征峰, 只是在含量上有些差别, 不能说明孜然芹品种间的差异。但是, 小茴香的色谱图与孜然芹有很大差异, 在今后研究中还应继续研究其他提取蛋白的色谱图, 找出品种间的有显著差异的洗脱峰。

摘要：本刊2011年第5期第28～33页刊登的《孜然芹种子醇溶蛋白超高压液相色谱分离方法初探》和《关于玉米制种籽粒灌浆成熟规律的研究》两篇论文, 因印刷厂制版时疏忽出现严重失误, 所有坐标图都漏印了变化曲线。待我部发现时, 凡在当地邮局订阅的杂志都已寄出, 无法更改, 现将上述两篇文章在本期第28～33页重新刊登, 以资弥补。在此深表歉意并敬请原谅!

参考文献

[1]晏月明, 刘保国, 杨长寿.反相高效液相色谱在作物品种鉴定中的应用[J].中国农学通报, 1993, (9) 3:41～44.

[2]赵龙刚, 宋希云, 史雪辉等.小麦胚乳醇溶蛋白反相高效液相色谱 (RP-HPLC) 分离方法的建立[J].现代仪器, 2006, (06) :78～80.

[3]王强, 阮晓, 陈贺, 等.甜瓜种子醇溶蛋白的反相HPLC分析鉴定 (英文) [J].作物学报, 2005, (02) :177～182.

超高液相色谱法 篇2

高效液相色谱法测定氟灭酸的含量

建立测定氟灭酸含量的高效液相色谱分析方法.采用Symmetry C18色谱柱(3.9 mm×150 mm,5μm),以含1%乙酸的甲醇-水(80:20)为流动相,流速为1.0 mL・min-1,紫外检测波长为287 nm,柱温35℃,进样量10 μL.实验结果表明:线性范围为0.5～50.0 mg・L-1(r=0.9997),检出限为22 μg・L-1,方法平均回收率99.8%,RSD为0.98%.本方法简便,快速,适合于氟灭酸的`定量控制分析.

作 者：雷小明 武宏科 史鸿鑫 LEI Xiao-ming WU Hong-ke SHI Hong-xin  作者单位：浙江工业大学,绿色化学合成技术国家重点实验室培育基地,浙江,杭州,310032 刊 名：浙江工业大学学报  ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY OF TECHNOLOGY 年，卷(期)：2007 35(6) 分类号：O657.7 关键词：高效液相色谱法   氟灭酸   分析  

超高液相色谱法 篇3

材料与方法

仪器。戴安3000；旋涡混合器；离心机。

试剂。甲基氰（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）；NaCl（分析纯）；脱氢乙酸（99.9%）。

测定方法。①色谱条件：流动相为15：85的甲基氰（0.02mol/ml）、乙酸铵溶液；流速为1.0 mL/min；进样量为10μL；柱温为35℃。②实验方法：实验样品为市售不同品牌的果汁、酱菜、糕点，分别做如下处理。果汁：准确称量5.00g于50mL离心管中；酱菜、糕点：预先均匀，称取2～3g于50mL离心管中，加入饱和NaCl溶液5mL，1：1的盐酸溶液1mL，在旋涡混合器中混合处理1min，精确添加甲基氰10 mL，再次混合处理3min，然后以3000转/min的速度离心处理15min，取上清液，用0.45μm规格的过滤器进行过滤，待用。③色谱分析：根据上述色谱条件，利用外标法分析样液，保留时间定性，根据峰面积定量，计算脱氢乙酸含量（mg/mL）。

结果与讨论

检测波长的确定。由扫描结果得知，脱氢乙酸在230nm处出现强吸收，但基体干扰较多；在297nm处出现次强吸收，基体干扰较少，因此，选择297nm作为检测波长。

流动相的选择。以甲基氰+水作为流动相时，色谱峰出现拖尾，以0.02mol/L的乙酸铵替代水时，峰形明显改善。甲基氰的比例对出峰时间和响应有一定影响，比例较低时，保留时间长，响应也比较低，反之则出峰时间短，响应较高。经多次试验得出，当甲基氰与乙酸铵（0.02mol/L）的比例为15：85时，可以取得较好的效果。

提取液的选择。脱氢乙酸对水难溶，但脱氢乙酸钠易溶，通常利用水、NaOH溶液、NaCO3溶液等作为提取液，但提取后需要先净化后才能使用。本文研究中，以甲基氰作为提取液，原因是脱氢乙酸可以溶于甲基氰，且甲基氰的水溶性有助于将酸性样液中的脱氢乙酸彻底溶解，而且甲基氰能够沉淀蛋白质，与脂肪不溶，通过离心即可获得纯度较高的提取液。

色谱分离。在上述色谱条件下，脱氢乙酸的保留时间为5.775min，峰形和组分的分离情况比较好，色谱图如下：

标准曲线。将70%的甲基氰水溶液作为溶剂，制作不同浓度的脱氢乙酸标准液，得到若干测定结果（见表1）。利用峰面积对脱氢乙酸的浓度做回归方程分析，得Y=2.39X×108-1.33×105，R=0.9997，线性结果良好。然后，对各浓度标准液连续进样5次，所得峰面积及保留时间的相对标准偏差依次为0.35%和0.24，表明此测定方法具有较高的定性及定量准确度。

回收率及精密度试验。取未添加脱氢乙酸的腐乳样品3份，每份3g，分别加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脱氢乙酸标准液，利用1.3所述方法及步骤进行处理，最终测定结果显示，加标回收率为96.1～99.5%，平均回收率为98.5%。

取含有脱氢计算的腐乳样品1份，以同样的方法和步骤测定6次，得到下列测定值：0.192、0.195、0.194、0.198、0.195、0.193g/kg，相对标准偏差为1.08%。

样品测定。利用该法对市售不同品牌的果汁、酱菜、糕点等食品中的脱氢乙酸含量进行测定，共检测10份，其中7份为未检出，3份检测出脱氢乙酸，浓度依次为0.052g/kg，0.131g/kg，0.088g/kg，与国际标准气相色谱法的测定结果相一致，表明该法测定结果良好，值得推广使用。

（作者单位：毕节市质量技术监督检测所）

超高液相色谱法 篇4

高效液相色谱 (HPLC) 是7O年代开始发展起来的分析蛋白质的一项新技术, 目前已广泛用于蛋白质化学领域。使用RP—HPLC能有效进行种子贮藏蛋白的分离, 它的原理是根据不同蛋白质组分的表面疏水性的差异将其分离开, 与蛋白质分子量及所带电荷数无关;而蛋白电泳技术是依据分子大小和电荷的不同来分离的, 因此, 二者的原理不同, 其蛋白分离图谱可以相互印证, 互为补充。[1,2]而超高效液相色谱 (UPLC) 与HPLC相比, 大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度, 因而具有更高的效率和更强的分离能力。目前为止利用UPLC分析孜然芹种子醇溶蛋白的研究还未见报道。因此, 本试验借鉴HPLC的方法, 以新孜然1号为实验材料, 研究洗脱时间、色谱柱温度等对孜然芹醇溶蛋白超高效液相色谱分离的影响, 确立孜然芹种子醇溶蛋白超高效液相色谱法 (UPLC) 分离的最佳实验条件, 为孜然芹种子醇溶蛋白分离分析建立一种有效的方法;然后对比研究10个品种贮藏蛋白的色谱图, 评价使用这种方法作为品种鉴定手段的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料见表1。

1.2 种子蛋白提取

单粒种子研磨15 min, 加入0.5 mL的70% (v/v) 甲醇溶液浸泡2 h[3]。样品继续研磨10 min后, 12000 r/min离心10 min, 通过0.45μm孔径的滤膜后进样上柱分析。

1.3 反相高效液相色谱

色谱分析选用Waters Acquity Ultra performance LC分析系统, 溶剂输送选用Waters高压泵, 自动进样。Waters Acquity Ultra performance LC TUV紫外检测器210nm检测洗脱蛋白。

2 结果与分析

2.1 色谱分离条件选择:

用含0.10%的三氟乙酸的乙腈和0.05%的三氟乙酸水溶液作为溶剂A和溶剂B, 随时间改变溶剂A和B的浓度梯度变化, 来优化色谱分离条件。结果, 使用Waters Acquity UPLC BEH C18粒径1.7μm的反相色谱柱 (2.1×50 mm) , 溶剂A以10%～35%的流速梯度、0.30 mL/min的流速洗脱19 min, 孜然芹种子主要贮藏蛋白在此条件下能够得到分离。

2.2 色谱柱温度对分离结果的影响

由色谱理论可知, 在一定范围内, 随着温度的升高分离效率将逐渐提高, 但温度太高会缩短色谱柱寿命, 使蛋白质变性。为确立温度对UPLC分离孜然芹种子醇溶蛋白的影响, 本试验设计40℃、50℃、55℃三个对比温度, 测定结果见图1。

由图1可以看出, 随着温度的升高特征峰出现的越早, 但总的峰数没有随着温度的升高而发生变化。结合仪器的使用情况, 我们认为40℃柱温最好。

2.3 洗脱时间对分离效果的影响

洗脱时间是影响色谱分离的主要因素之一。前人研究HPLC所用的洗脱时间在40～60 min之间, 而超高效液相色谱 (UPLC) 较HPLC效率高, 为明确洗脱时间对色谱分离的影响, 本试验设计40 min进行试验。从试验结果 (见图2) 来看, 在20 min以后基本没有较明显的特征峰出现。经过重复试验, 我们选择20 min洗脱时间为试验的优选条件。

2.4 不同品种间UPLC色谱图

由图3可以看出, 10个孜然芹品种的醇溶蛋白蛋白洗脱峰顺序较相似, 无显著的特征峰, 只是在含量上有些差别, 不能说明孜然芹品种间的纯度的差异;但是, 小茴香的色谱图与孜然芹有很大差异, 可以很容易把它与孜然芹种子区分开来。

3 结果与讨论

(1) 孜然芹种子醇溶蛋白UPLC分析技术受孜然芹及近缘种测定对象的影响, UPLC分析孜然芹醇溶蛋白的标准方法必须根据实际情况进行反复试验才能确定。本研究结果表:明流速0.3 mL/min、柱温40℃下, 流动相A液在16 min内由10%升至35%, 通过210 nm波长检测紫外吸收为孜然种子醇溶蛋白UPLC分离的最佳条件。

(2) UPLC技术分析孜然芹种子醇溶蛋白与A-PAGE相比, 具有如下优点: (1) 试验速度快, 试验周期短, 一个样品只需20 min。 (2) 试验条件稳定, 易于控制重复性高。 (3) 图谱清晰, 数据分析准确可靠, 易于比较。 (4) 能实现自动化控制, 节省人力。UPLC技术的分辨率和定量性优于单向电泳, 这样就有可能对某些用单向电泳不能鉴定的育种系谱相近的品种进行鉴定。

(3) UPLC分析中, 温度是最重要的影响因素。不同色谱柱的性能指标有差异, 在实际应用中必须因地制宜, 结合蛋白质的特性确定最适温度。洗脱时间对实验效率有一定的影响, 根据孜然芹及近缘种的倍性及组成差异, 进行相应的改进, 从而缩短实验时间, 节省成本, 提高工作效率。

(4) 由于10个孜然芹品种的醇溶蛋白蛋白各组分疏水性相近, 在该方法中没有完全分开, 洗脱峰顺序较相似, 无显著的特征峰, 只是在含量上有些差别, 不能说明孜然芹品种间的差异。但是, 小茴香的色谱图与孜然芹有很大差异, 在今后研究中还应继续研究其他提取蛋白的色谱图, 找出品种间的有显著差异的洗脱峰。

参考文献

[1]晏月明, 刘保国, 杨长寿.反相高效液相色谱在作物品种鉴定中的应用[J].中国农学通报, 1993, (9) 3:41~44.

[2]赵龙刚, 宋希云, 史雪辉等.小麦胚乳醇溶蛋白反相高效液相色谱 (RP-HPLC) 分离方法的建立[J].现代仪器, 2006, (06) :78～80.

超高液相色谱法 篇5

高效液相色谱法测定饮用水中甲萘威

摘要：参照卫生部制定的<生活饮用水卫生规范>,采用高效液相色谱法对饮用水中的甲萘威进行了检测,并对检测方法进行了线性方程、精密度和准确度实验:其线性相关系数等于0.999 6,相对标准偏差为0.326%,不同浓度的`样品加标回收率均高于92.0%.方法操作简便、准确可靠、灵敏度较高,适合于地表水及饮用水中甲萘威的检测.作 者：高庚申 谢蔚嵩 彭晓渝 段雁威 GAO Gengshen XIE Weisong PENG Xiaoyu DUAN Yanwei 作者单位：贵州省环境科学研究设计院,贵州,贵阳,550002期 刊：环保科技 Journal：ENVIRONMENTAL PROTECTION AND TECHNOLOGY年，卷(期)：,16(2)分类号：X703.1关键词：甲萘威 高效液相色谱 饮用水

超高液相色谱法 篇6

关键词：乳品检测 有机酸 酸奶 高效液相色谱法

中图分类号：TS207文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）18-0026-01

离子色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法是目前常用三种有机酸检测办法，其中高效液相色谱法因其操作简单、准确度高等优点运用最为广泛。高效液相色谱法能同时检测食品中9种有机酸，对于乳品中有机酸的检测非常方便，具有实用价值，本文谈谈高效液相色谱法的研究情况。

1 材料与方法

（1）仪器与器材。高效液相色谱仪（PE-200型）超声波振荡仪（KQ-250型）可见分光光度计（UV-260）离心机。（2）试剂。乳酸、乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、丁二酸、丙酸，浓度分别为：10.0mg/ml，抗坏血酸20.0mg/ml，苹果酸40.0mg/ml，于冰箱保存作为贮备液，抗坏血酸标准溶液临用新配。（3）实验方法：①色谱条件。色谱柱为C18柱（5μm，250×4.6mm）；柱温：25℃；流动相：甲醇：0.01mol/L（NH4）2HPO4缓冲溶液pH2.8；流速：0.7ml/min；可见光-紫外检测器，检测波长215nm。②酸奶样品处理及测定。称取搅匀的酸奶样品2g于10ml比色管中，用超纯水稀释至10.0ml，混匀后超声脱气，取400μL稀释酸奶于Eppendof管中，加入100μL超纯水、3.5mol/L高氯酸25μL，混匀，离心（12000r/m，6min）使蛋白充分沉淀，取上清液过0.45μm滤膜作为样液。样液、混合标准应用液均取10μL进样，以保留时间定性，峰高增量法确认，标准曲线法定量。

2 结果与讨论

高效液相色谱法（HPLC）分析是1970年代迅速发展一种高效分离技术，小说和快速分析。由于不同的分离机制，可以分为以下几种类型：液固色谱法、液相色谱法、离子交换色谱、离子色谱、色谱法应该使用更多，占70% - 80%的高效液相色谱法（HPLC）。高效液相色谱法（HPLC）具有以下突出优点和特点：

高效液相色谱法（HPLC），高电压，高效液相色谱法（HPLC）液体，液体作为流动相，称为载体。由于加载流体流经色谱柱时，压力比较大，为了使液体迅速通过色谱柱，必须携带流体压力，压力一般150～350x 105pa。高速度：高效液相色谱法（HPLC）与高压、携带液速度快，因此分析所需的时间远低于经典液相色谱，超过十分钟至数十分钟才能完成。效率高：高效液相色谱柱效率非常高，可以达到超过30000板/m。灵敏度高：由于检测器的灵敏度高，自动操作，分析精度高、所需样本量较少。高分辨率，可以选择固定相，流动相以达到最佳的分离效果。高适用范围：百分之七十以上的有机化合物用高效液相色谱法（HPLC）分析，特别是高沸点、大分子化合物，极性强、热稳定性差的分离和分析，显示了优势。

高效液相色谱的缺点。需要高压力：一般可以达到150～350x105pa.2。柱效应：在注入器和检测器之间，除了任何死亡空间，其他职位如取样器，柱接头、连接管和细胞，如果流动相的流型的变化，分离物质的任何扩散和保留会造成色谱峰显著扩大，柱效率较低。

高效液相色谱（HPLC）的分类根据不同的分离机制，高效液相色谱（HPLC）法可分为：（1）分配色谱固定相是液体，使用液体固定相对于组件的样品溶解能力不同，样品的各种组件在液相固定相分配系数的差异，并实现样品的设置点色谱分离。根据不同的相对极性固定相和液相，可分为正相分配色谱和反相色谱法。（2）分配色谱法或逆转阶段。吸附色谱法，使用固体吸收剂作为固定相，用不同极性溶剂作为流动相，基于每个组件的样本实现分离。（3）吸附剂吸附性能的差异。离子交换色谱法，离子交换剂为固定相。

成分的高效液相色谱（HPLC）（1）高压泵、高效液相色谱法（HPLC）使用色谱柱是很薄（1～6毫米），使用的固定相粒径非常小（几微米到几微米），所以流动相在柱中的流动阻力很大，在一般情况下，流动相流速非常慢，效率低，耗费时间。为了实现快速、高效分离，将流动相的压力很大，加速流动的列。因此，必须使用高压高压输液泵。（2）梯度洗脱装置：梯度洗脱是携带流体包含两个（或更多）不同极性的溶剂剂，按照一定程序分离的过程中不断变化的负载电压和极性溶剂的液体，通过携带液体改变极性变化分离组件分离的因素，为了提高分离效率。（3）色谱柱：是最重要的组件的色谱仪。通常使用后壁玻璃管或不锈钢管的内表面抛光，腐蚀的一些样品，需要高压电阻、铜管、铝管或聚（四氟乙烯管。发展趋势是减少包装大小和柱直径为了提高柱效率。（4）样本设备：注射器灌装设备跟踪样本注射器和抽样方法时，气相色谱方法。注射压力小于150x105pa，当注射压力大于150x105pa，停止流入必须使用样本。（5）检测设备：主要用于监控组件的色谱柱分离后的浓度的变化，并记录仪器绘制光谱进行定性和定量分析。（6）数据处理设备：高效液相色谱法（HPLC）分析的结果除了可用光谱数据记录器地图，微处理器和色谱数据工作站也可以用来记录和色谱分析数据处理。合成和天然高分子化合物等，涉及石油化工产品、食品、药物合成和生物化工产品和环境污染等，约占80%的有机化合物，其余20%的有机化合物，包括永久气体、挥发性低沸点和中分子量化合物只能气相色谱分析。

3 结语

采用乙酸锌-亚铁氰化钾、硫酸锌-亚铁氰化钾、硫酸铜-氢氧化钠等来沉淀奶制品中的蛋白质，此类方法在国内外较为常用，但是它操作步骤多，耗费时间长。然而本文通过用3.5mol/L高氯酸来沉淀奶制品中的蛋白质，操作简便，不影响待测组分的测定。综上所述，高效液相色谱法在乳品检测中应用广泛，它可对食品质量的监管与食品加工工艺的研究提供技术支持，具有使用价值。

参考文献

超高液相色谱法 篇7

对苹果、番茄、水稻、马铃薯和棉花等多种作物的炭疽病、霜霉病及白粉病等病害具有较好的防效[2]。其主要作用机理是妨碍病原真菌的呼吸过程。目前有关克菌丹多种色谱分析法的比较尚未见报道。本文采用气相色谱法和高效液相色谱法, 分别对有效成分进行分析和定量, 结果都满足农药分析方法验证的要求, 都适用于克菌丹原药及其制剂的分析。两种方法各具特点, 因此在检测时可根据实际情况进行选择。

1 实验部分

1.1 气相色谱分析法

1.1.1 材料与试剂

甲苯:色谱纯 (CNW) ;克菌丹标样 (纯度98.5%±1.0%, 德国Dr.Ehrensorfer公司) ;50%克菌丹可湿性粉剂试样。

1.1.2 仪器与设备

分析天平:梅特勒-托利多XP205;气相色谱仪:Thermo Trace 1310GC-ECD;检测器:ECD;亲水PTFE针式过滤器:滤膜孔径为0.22μm。

1.1.3 气相色谱操作条件

色谱柱:1701 (规格:30m×0.25mm×0.25μm) ;进样口温度:250°C;进样模式:不分流 (衬管去掉玻璃棉) ;恒流:1.5m L/min;ECD检测器温度:280°C;升温程序:80°C保持1min, 以30°C/min升至260°C保持5min;流速:1.5m L/min;进样体积:1.0μL;保留时间:9.147min;气相色谱图详见图1。

1.1.4 实验溶液配制

称取克菌丹标样0.02g (精确至0.0001g) , 置于100m L容量瓶中, 用甲苯溶解并定容至标线, 摇匀, 即为标样溶液。

称取50%克菌丹可湿性粉剂试样0.02g (精确至0.0001g) , 置于100m L容量瓶中, 用甲苯定容至标线, 摇匀, 即为试样溶液。

1.2 液相色谱分析法

1.2.1 材料与试剂

水:超纯水;甲醇:色谱纯 (CNW) ;磷酸:色谱纯 (CNW) ;克菌丹标样 (纯度98.5%±1.0%, 德国Dr.Ehrensorfer公司) ;50%克菌丹可湿性粉剂试样。

1.2.2 仪器与设备

分析天平:梅特勒-托利多XP205;高效液相色谱仪:Thermo Ulti Mate 3000;检测器:紫外检测器 (UV) ;亲水PTFE针式过滤器:滤膜孔径为0.22μm。

1.2.3 液相色谱操作条件

色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18 (规格:4.6×100mm, 粒径:3.5μm) ;流动相:0.1%磷酸溶液:甲醇=40.0:60.0 (V:V) ;流速:0.800m L/min;检测波长:220nm;柱温:30.0℃;进样体积:10μL;保留时间:约3.25min;高效液相色谱图详见图2。

1.2.4 实验溶液配制

称取克菌丹标样0.02g (精确至0.0001g) , 置于100m L容量瓶中, 用甲醇溶解并定容至标线, 摇匀, 即为标样溶液。

称取50%克菌丹可湿性粉剂试样0.02g (精确至0.0001g) , 置于100m L容量瓶中, 用甲醇定容至标线, 摇匀, 即为试样溶液。

2 结果与讨论

2.1 气相色谱分析法

2.1.1 分析方法的线性相关测定

配制克菌丹浓度均为0.00200mg/L、0.00500mg/L、0.0100mg/L、0.0500mg/L、0.100mg/L的一系列标样溶液, 在上述操作条件下进行测定, 以标样溶液浓度为横坐标, 以峰面积的值为纵坐标, 建立坐标系进行线性分析, 克菌丹的线性方程:Y=5.87195X+0.00395, 相关系数r:0.9999 (详见图3) 。

2.1.2 分析方法的精密度试验

对浓度为0.100mg/L的标样进行6次重复测定, 在0.100mg/L浓度下, 克菌丹的标准偏差为0.00555, 相对标准偏差为0.874%。

2.1.3 分析方法的准确度试验

于空白样品中分别加入不同浓度的克菌丹标准品, 按照本文的方法和操作条件进行重复测定, 测得克菌丹回收率为84.4%~92.8%。

2.2 液相色谱分析法

2.2.1 分析方法的线性相关测定

配制克菌丹浓度均为0.500mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的一系列标样溶液, 在上述操作条件下进行测定, 以标样溶液浓度为横坐标, 以峰面积的值为纵坐标, 建立坐标系进行线性分析, 克菌丹的线性方程:Y=0.0109X-0.0006, 相关系数r:0.9992 (详见图4) 。

2.2.2 分析方法的精密度试验

对浓度为10.0mg/L的标样进行6次重复测定, 在10.0mg/L浓度下, 克菌丹的标准偏差为1.91, 相对标准偏差为1.95%。

2.2.3 分析方法的准确度试验

于空白样品中分别加入不同浓度的克菌丹标准品, 按照本文的方法和操作条件进行重复测定, 测得克菌丹回收率为86.7%~91.2%。

2.3 气相色谱法与高效液相色谱法的比较

分别用气相色谱法和高效液相色谱法检测分析克菌丹的含量, 并将两种分析方法进行线性相关、精密度、准确度试验, 从结果看出两种方法的线性相关系数、相对标准偏差、回收率均符合农药分析方法验证的要求。证明这两种方法都可用于克菌丹原药及其制剂的分析。

此外, 气相色谱法的检出限:0.000971mg/L, 定量限:0.00324mg/L;高效液相色谱法的检出限:0.170mg/L, 定量限:0.568mg/L。证明气相色谱法的检出限与定量限均明显低于高效液相色谱法, 灵敏度较高。

由图1、图2看出, 气相色谱法和高效液相色谱法的保留时间分别是9.147min和3.25min, 证明高效液相色谱法出峰时间更短, 检测效率较高。

3 结语

本文采用了优化的气相色谱条件和高效液相色谱条件, 建立了能有效检测克菌丹的气相色谱法和高效液相色谱法。综上所述, 气相色谱法检出限与定量限都较低, 灵敏度较高, 样品含量低也能检出;高效液相色谱法出峰时间较短, 检测效率较高, 节约时间。两种方法各具特点, 因此生产企业与质检机构在对克菌丹原药及其制剂进行质量监督与控制时可根据实际情况进行选择。

参考文献

[1]李智文.克菌丹在苹果及土壤中的残留动态及最终残留研究[D].杨凌:西北农林科技大学农药学, 2003.

超高液相色谱法 篇8

关键词：高效液相色谱法,利福霉素钠,含量测定

利福霉素钠属安莎类抗生素,是半合成的利福霉素中的广谱抗生素,也是国内惟一供注射用的利福霉素类药物,对金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌有较强的杀菌作用。是临床九大抗结核药物的首选药物。由于利福霉素钠结构复杂、不稳定、容易产生降解杂质,主要杂质为利福霉素S与利福霉素B,使用高效液相色谱法测定利福霉素钠的含量。该方法简便、快速、精密、准确。

1 仪器与色谱条件

采用岛津LC-6A型高效液相色谱仪;岛津SPD-6AV紫外检测器;Kromasil-C8色谱柱(250×4.6mm,5um)(瑞典NobelLEka生产),甲醇(0.075mol/L):磷酸二氢钾溶液(1.0mol/L):枸橼酸溶液(60:26:4)为流动相,检测波长为254nm,流速1.0ml/min,柱温35℃,进样量10μl。

2 方法与结果[1,2,3,4]

2.1 标准溶液的制备

利福霉素标准品(批号0333—200606,832μg/mg)、利福霉素S (130539?200601)和利福霉素B(130540?200601)均由中国药品生物制品检定所提供;利福霉素钠原料由四川制药股份有限公司提供,批号分别为2005-10-21,2005-10-22,2005-10-23,2005-10-25,2005-10-28与200605001、200605002、200605003;注射用利福霉素钠(批号为051128,规格0.25g)由海南三元阳普医药有限公司提供;培养基为I号6.0～6.5,批号:051112(北京三药科技开发公司生产,中国药品生物制品检定所监制);菌种为藤黄微球菌[CMCC(B)2800 1](中国药品生物制品检定所);甲醇与乙腈为Merck公司生产(色谱纯),其余试剂均为分析纯。精密称取对照品0.2g,加入5ml甲醇使溶解并稀释到100ml,精密量取0.6ml,0.8ml,1.0ml,1.2ml,1.5ml,2.0ml分别加流动相稀释到25 ml摇匀备用。

2.2 标准曲线的绘制

按1项下的色谱条件,取2.1项下的标准溶液分别进样测得的结果见表1。

回归方程:Y=1578749-64917,r=1.0001。说明利福霉素浓度和色谱峰面积的线性关系良好

2.3 溶液稳定性试验

取2.1项下的标准溶液于不同时间进样,每样20?l,在室温下放置12h分别在(0、2、4、8、12)h取样测定,其平均峰面积为1473250,表明本品在甲醇:乙腈:0075mol/L磷酸二氢钾溶液:1.0 mol/L枸橼酸溶液中稳定。结果表明利福昔明溶液在12小时内是稳定的。

2.4 精密度试验

精密称取利福霉素对照品0.2g,精密称定6份,分别加5ml甲醇使溶解并稀释到100ml,精密量取1.0ml,分别加流动相稀释到25 ml摇匀,分别进样,每样20?l,结果见表2。

RSD=1.56%结果表明:本法精密度较好

2.5 样品含量测定

精密称取细粉取利福霉素1.623g,置100ml量瓶中,加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密吸取续滤液5ml置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,照高效液相色谱法中(中华人民共和国药典2005年版二部)方法测定,取20μl注入液相色谱仪中,记录色谱。另精密称取于105℃干燥至恒重的利福霉素对照品0.8g,置100ml量瓶中,加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5ml置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,同法测定。按外标法以峰面积计算,结果见表3。

依据试验结果,规定含量限度为90.0%～105.0%

3 讨论

采用高效液相色谱法测定利福霉素的含量,我们用高效液相色谱法,色谱柱为KromasilC8,(甲醇:乙腈:0075 mol/L磷酸二氢钾溶液:1.0 mol/L枸橼酸溶液)=50:22.5:22.5:5为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为240nm,利福霉素在(41.02～164.08)μg/mL范围内线性关系良好(r=0.99997),平均回收率为99.79%,RSD为0.2%,该方法准确、灵敏、可靠,能有效地控制该制剂的质量,可作为该制剂含量测定的检测方法。

参考文献

[1] 张兵.Rp-HPLC测定利福昔明的含量及有关物质[J].华西药学杂 志,2003,18(4) :281．

[2] 吴小英,童成亮,钟淮滨.利福昔明中有机溶剂残留量的测定[J].安 徽医药,2004;02:45-46

[3]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(第二部附录Ⅳ) [s].2005版.北京:化学工业出版社.2005,65

超高液相色谱法 篇9

关键词：高效液相色谱法,微囊藻毒素,测定

微囊藻毒素测定中HPLC的应用极为常见, 其可直接引入如HPLC- FL、HPLV- UV或HPLC- CL等方式, 其中前两种方式在应用中尽管可满足pg级检测限要求, 然而整个操作过程中较为复杂, 且有较多的杂质干扰, 所以不具备较强的实用性。而后者在应用中较为简便易行, 但因藻毒素在识别中容易因干扰问题而影响测定准确度。因此, 本文在试验过程中对HPLC的应用考虑将这三种方式进行配合应用, 可使水中微囊藻毒素得以有效检测。

1水中微囊藻毒素检测中的HPLC应用试验分析

1.1试剂与仪器的选择与色谱条件设定

试验中在试剂选择方面, 主要以MC- YR、MC- RR、MC- LR为标样, 且选取相应的双蒸水、甲醇、三氟乙酸等作为试剂。在仪器选用方面, 可将Agilent1100型设备引入, 并将其他相应的超声波仪器、萃取柱以及可调氮吹仪等仪器引入。另外, 试验中所设定的色相分析条件主要为, 色谱柱恒温箱、进样量分别设定在25℃与20u L, 而甲醇主要以45:55 (V/V) 为主, 且在流动相方面, 使水溶液包含0.05%的三氟乙酸。同时, 做好紫外检测波长的设定, 在此基础上使MC- YR、MC- RR、MC- LR等峰面积能够在谱图中体现出来, 最后根据标样峰面积与谱图中显示的峰面积比值, 便可判定藻毒素在水样中的浓度[1]。

1.2相关标准液的制备

试验过程中, 可选择2.00m L甲醇, 使其与0.100mg藻毒素进行相溶, 对于该溶液应保证在放置中做好避光冷冻工作, 其可作为储备液。因在标准液制备中, 完全选用甲醇, 将存在测定时间较短问题, 容易影响最终结果。所以可考虑, 在甲醇水溶液方面控制于55%, 这样藻毒素测定中, 可使其出峰时间保持适中, 且测定结果准确度较高。

1.3实际样品的制备

在样品制备中, 主要需考虑到铜绿微囊藻冷冻、藻毒素提取以及样品制备等问题。如在铜绿微囊藻方面, 需将其置于一定环境下进行冷冻干燥, 确保其在离心后能够使沉淀物形成干藻粉。 而在提取藻毒素过程中, 需选择10m L蒸馏水, 将干藻粉置于其中, 此时通过超声波仪器完成清液的提取, 并对清液做好存储工作。另外, 在制备样品过程中, 主要需将制备好的清液进行过滤, 在此基础上使10m L甲醇加入滤液中。此时需将萃取柱引入, 使水样按照一定的流速从的萃取柱进行流过, 以此达到富集浓缩的目标。完成这些操作后, 要求对样品利用甲醇水进行净化, 直至萃取柱被吹干后, 将过滤后的溶液收集于瓶内。最后, 对甲醇水溶液进行分析, 完成微囊藻毒素浓度判定过程[2]。

2 HPLC测定微囊藻毒素的结果分析

2.1流动相选择与灵敏度判断

通过试验测定分析, 在等度洗脱情况下, MC出峰在甲醇体积具有较高的分数时较早, 以MC- RR为典型, 其受到的干扰较为明显, 但在甲醇体积分数减小情况下, 出峰时间较晚, 尤其MV- LR较为明显。另外, 当流动相中甲醇体积分数为其55%情况下, 无论MC- YR、MC- RR或MC- LR, 在谱图中都保持平滑的谱线, 且分离效果较为明显, 杂质对测定结果的干扰影响较小。而从灵敏度情况看, 根据试验中的色谱分析条件, 测定中可发现三种藻毒素都具有较高的分离度, 假定以3为信噪比, 可测得的绝对量检测限可达到1ng。由此可见, 在流动相、灵敏度等方面, HPLC测定方法的应用都可起到明显的效果。

2.2样品处理优化效果分析

试验过程中选取甲醇水溶液进行杂质的清除, 能够判定在甲醇水溶液具有较高浓度的情况下, 很容易使微囊藻毒素流失, 不利于检测结果准确性的提高。所以在试验中考虑所选用的甲醇溶液水控制在10%用量上。另外在洗脱液方面, 试验中主要以100% 甲醇为主, 这样可使浓缩时间得以缩短, 杂质干扰问题因此得到解决, 同时回收率与准确度等都可得到保障。所以HPLC方法运用下, 样品处理优化效果也较为明显。

2.3 HPLC方法精密度分析

在微囊藻毒素测定过程中, HPLC方法运用下可对其加标回收率进行判定, 可得到MC- YR、MC- RR、MC- LR都超出94.0%的回收率。另外, 在样品分析过程中也可发现, HPLC方法测定微囊藻毒素过程中, 检测限可维持在0.01ug/L~0.05ug/L。由此得出HPLC在精密度、回收率等方面都较高[3]。

3结语

微囊藻毒素的测定是保证水质的关键所在。实际测定中高效液相色谱法的应用可取得良好的效果, 由文中试验可发现, HPLC方法应用下, 流动相、灵敏度、样品处理优化以及精密度等方面都可得以保障, 有利于微囊藻毒素的准确测定。

参考文献

[1]施俭, 景澍闽, 陆峰, 向华.在线固相萃取-二维高效液相-串联质谱法测定水中微囊藻毒素-LR[J].净水技术, 2013, 03:52-54+58+66.

[2]林瑶, 张琼, 李一丹.固相萃取-高效液相色谱法测定水中痕量微囊藻毒素[J].中国卫生检验杂志, 2010, 09:2174-2175.

高效液相色谱法测定洛伐他汀 篇10

洛伐他汀 (Lovastatin) 又名美降脂、罗华宁、洛之达等。是新型调整血脂药, 为甲基羟戊二酰辅酶A (HMG-GoA) 还原酶抑制剂, 能抑制内源性胆固醇合成, 降低血清总胆固醇 (TC) 、血甘油三酯 (TG) 、低密度脂蛋白 (LDL) 、升高高密度脂蛋白 (HDL) 水平。主要用于治疗原发性高胆固醇血症, 以高胆固醇为主要异常的高脂血症;防治冠状动脉粥样硬化, 延缓硬化进程、减少梗塞病的发生。其独特的疗效, 被誉为治疗心血管系统疾病的里程碑, 深受广大患者的欢迎。洛伐他汀片被确定为《国家基本医疗保险药品目录》中的循环系统用药, 列为我国国家基本药物, 是目前国际流行的新型调整血脂药。

1 实验方案

1.1 洛伐他汀样品由华北制药集团有限责任公司生产;对照品由北京生物化学制药厂提供;乙腈为色谱纯缓冲液:称取3.45gNaH2PO4溶于900ml水中, 用H3PO4调整p H值到4.0, 然后转入1000ml容量瓶中, 加水定容到刻度。

1.2 色谱条件

色谱柱XDB-C18, 5μm, 25cm×4.5mmI.D., 流动相为乙腈+缓冲液+甲醇 (5+3+1) , 柱温45℃, 流速1.5ml/min, 检测波长为231nm, 进样量20μl。

1.3 系统适应性实验

称取洛伐他汀对照品适量, 加流动相溶解并制成每1ml中分别含0.1mg的溶液, 摇匀, 进样20μL, 记录色谱图。二者的分离度应符合药典要求。

2 实验结果

2.1 检测波长的选择

取洛伐他汀对照品适量, 以流动相溶解后配成0.1g/l溶液, 测得的紫外吸收谱在231nm处有最大吸收, 所以检测波长定为231nm。

2.2 色谱条件的选择

经筛选, 本实验中采用的流动相体系可使二者实现有效分离, 满足药典规定要求。适当提高柱温, 可降低流动相粘度, 提高柱效, 利用恒定的温度可以避免环境温度变化而引起的保留时间的变化, 提高实验的重复性。本实验中采用的柱温为45℃。

3 实验数据处理与分析讨论

3.1 线性关系

精密称取洛伐他汀对照品10mg, 置50ml量瓶中, 加流动相溶解后稀释至刻度, 摇匀。精密量取该溶液0.5、2.5、5.0、7.5、10ml分别置于10ml量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 分别进样20μl, 记录色谱图。以峰面积对溶液质量浓度进行线性回归 (见图1) , 得到回归方程为:A=0.38249C+2342.54, 相关系数为:r=0.9995 (n=5) 即样品质量浓度在10~200mg/l范围内, 浓度与峰面积呈现良好的线性关系。

3.2 精密度

取同一份对照品溶液, 照样品测定项下方法, 重复进样6次, 记录峰面积, 结果如表2:

3.3 重现性

取同一份对照品溶液, 分别于3个不同日间测定其含量, 结果如表3。从表3可以看出, 方法的重现性良好。

3.4 回收率的测定

精密称取5份已测知含量的洛伐他汀样品10mg各置于200ml量瓶中, 分别加入精密称定的洛伐他汀对照品4、8、10、12、16mg, 用流动相溶解后稀释至刻度, 过滤, 弃去初滤液, 分别进样20μl, 记录色谱图。其结果如表4。

3.5 稳定性实验

取样品适量, 用流动相配成供试液, 分别在0, 1, 2, 3, 4h注入色谱仪, 记录峰面积, 洛伐他汀5次含量的RSD分别为0.2%, 0.3%, 0.2%, 0.6%, 并没有含量下降的趋势, 表明样品在流动相中稳定。

3.6 样品测定

取洛伐他汀对照品适量, 精密称量, 加流动相溶解并制成每1ml中约含0.1mg洛伐他汀的溶液, 作为对照品溶液;另称取样品适量, 加流动相溶解并制成每1ml中约含0.1mg洛伐他汀的溶液, 作为供试品溶液;分别进样20μl记录色谱图, 每份检品各做2个平行样, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算, 结果见表5。

参考文献

[1]李发胜.高效液相色谱法测定希舒美中阿齐霉素的含量[J].光谱实验室, 2001, 18 (2) :183～184.

[2]母昭德, 尚京川, 李亚平等.反相高效液相色谱法测定盐酸阿朴吗啡[J].西南师范大学学报 (自然科学版) , 2001, 26 (3) :360～362.

超高液相色谱法 篇11

【关键词】 咪达唑仑高效液相色谱法血药浓度

【中国分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0491-01

咪达唑仑（咪唑安定）是一个短效的水溶性苯二氮卓类药物，是咪唑苯二氮卓衍生物之一。与地西泮的油溶液相比，水溶性可将注射疼痛及血栓性静脉炎的发生降低到最小，咪达唑仑常于手术局麻时作为镇静催眠药，较高剂量则用于全身麻醉诱导剂［1］由于其较短的消除半衰期（1.5~2.5h）［2］,并且临床上缺乏理想的长效制品，这就使咪达唑仑更适合作为镇静剂长时间推注。值的注意的是，在使用高剂量作诱导麻醉时，在反应上有个体差异，有资料显示，给予咪达唑仑0。3mg.kg-1iv，从开始给药致意识丧失的时间存在着个体差异，50a以上患者意识丧失比年轻人快［1］，本文采用高效液相色谱法测定血浆中咪达唑仑的方法，为临床进一步研究其血药浓度与药效学之间的关系，探索合理有效的给药剂量提供一定帮助。

1 材料与方法

1．1仪器与试药waters515HPLC pamp；waters2487紫外检测器；杭州英谱HS色谱数据工作站；80-2离心沉淀相，咪达唑仑水针剂（江苏恩华制药有限公司，批号B363MFD191998）；地西泮（北京益民制药厂，批号9801017）甲醇（HPLC，上海吴泾化总厂）；二乙胺（上海化学试剂总厂附属上海试剂三厂）乙腈（HPLC级，上海方可唯寄生物化学技术有限公司）；乙醚、磷酸均为分析纯。

1．2溶液配制：咪达唑仑溶液精取咪达唑仑水针剂1mL，量100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成0.05mg.mlL1的标准溶液备用，地西泮内标溶液，精称地西泮10mg置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制成0.1 mg.mL-1的内标溶液备用。

1.3色谱条件: 色谱柱：waters Nov-pak G18（4um.3.9mm×150mm）；Alltech保护柱C1830μn。检测波长：225nm。灵敏度：2AUFS。流动相：甲醇一水（60：40，V/V）,含乙腈1%、二乙胺0.1%、磷酸0.05%。流速：0.6 mL.min-1。

1.4样品预处理：取含有咪达唑仑的人血清0.5mL。置于10mL具塞试管中，加地西泮内标溶液5uL，涡旋混和加3mol.L-1Naoh溶液0.5mL，涡旋振荡，加提取液乙醚3mL，涡旋振荡2min，以4000r. min-1转速离心分离2 min，取上层提取液重复提取一次，合并提取液，以40℃氮气吹干，加甲醇50μL回提，取回提取液20μL进样。

2、结果

2．1咪达唑仑及内标色谱，用上述提取方法及色谱条件得到血清色谱图见图1显示咪达唑仑与内标峰完全分离，保留时间分别为（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min见图Ⅰ

2．2标准曲线取人血清0.5mL,加适量标准液，配成浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2. 0ug.mL-1的标准血清，加地西泮内标液5μL，按上述提取方法及色谱条件进行测定。以咪达唑仑浓度为χ轴，以测定的咪哒唑仑与地西泮的峰面积比为Y轴进行线性回归。结果表明，样品在0.1~0.2 ug.mL-1范围内线性良好，回归方程为：Y=P×10-4X－9.17×10-2，r=0.9998。最低检测浓度为0.05 ug.mL-1。

2.3精密度及回收率.日内精密度及回收率:在同1d内配置3种不同浓度咪达唑仑的血清样品,按上述方法提取,分别测定5次,计算的内平均浓度,RSD及相对回收率,结果见表Ⅰ。 日间精密度及回收率：取3种不同浓度的咪达唑仑血清样品分别在3d内提取，测定结果见表Ⅰ

3 讨论

咪达唑仑的化学名为8-氯-6-（2-氟苯）-1-甲基-4H-咪唑［1.5-a］［1.4］苯丙二氮卓，以盐酸或马来酸盐形式存在。本方法根据其结构特点，先碱化使其以分子形式存在，再用有机溶剂提取，挥干后以甲醇回提。用分析纯的乙醚提取，杂质峰多选用蒸溜乙醚提取后，减少了杂质峰的干扰，而且乙醚来源易的，价廉毒性较低。流动相的摸索过程中，先后选用了不同配比的甲醇和水作为流动相，发现甲醇一水（60：40V/V）含乙腈1%，磷酸0.05%的比例较好,但咪达唑仑和内标峰分离不太理想,峰型稍有拖尾,加入二乙胺期望改善峰形。经比较含二乙胺0.1%流动相能使内标峰和咪达唑仑峰完全分离,且峰形致改善。

碱化过程中,先后对不同浓度的Na oH及不同用量作了比较,发现无明显差别为保证咪达唑仑碱化完全,我们选用了3mol.L-1NaoH,,用量以0.5mL为宜.。

本文用高效流相色谱法测定血清中咪达唑仑的浓度,提取方法简便,提取溶剂,流动相价廉易的,毒性低,方法线性良好重现性理想,适合临床进行诱导麻醉剂量的探索研究及药动学的研究.

参考文献

［1］Dandee jn,Haliday Nj Harper KW et al Midaxolam;areview of its Pharmacological properties and therapeutic use［1］Drags 1984.28 519

超高液相色谱法 篇12

关键词：高效液相色谱法,凝胶色谱法,高分子平均分子量,数均分子量

高分子化合物不是单一结构物质, 具有分子量多分散性[1]。以往我们使用渗析计测试数均分子量Mn, 以解释其延展性, 用光散射计测试重均分子量Mw以解释其可锻性, 或使用软性凝胶柱分离不同分子量蛋白质与酶, 用于生命科学研究, 方法烦琐耗时。20世纪70年代高效液相色谱法问世后人们一直致力于研制刚性凝胶柱, 研究其色谱行为[2]。在大量新型的高效凝胶色谱柱投入市场后, 我们建立了高效凝胶色谱法, 快速高效地获得具各种统计意义的高分子平均分子量[3], 在生命科学及新材料研究, 表征其分子量及分子特性提供了可靠科学依据。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

高效液相色谱仪, P230泵, RI201H示差折光检测器, 7725i进样器, EC2000GPC色谱工作站, 依利特分析仪器公司产。色谱柱GPC K-804L￠8.0 mm×300 mm, 聚苯乙烯单分散性标准品, 日本Shodex公司产。氯仿, 色谱纯天津科密欧。

1.2 试剂配制

按以下方式配制3组混合标样 (用氯仿溶解, 各标准品浓度:5 mg/m L) :

标准品1:PS2分子量:3070PS6分子量:133000;

标准品2:PS3分子量:7210PS7分子量:275000;

标准品2:PS4分子量:19600PS8分子量:560000。

1.3 色谱条件

流动相流速:1 m L/min;检测器:内置温度, 40℃、进样量:20μL。

2 结果

2.1 标准品重叠图

分别测试标准品1、2、3, 三张图重叠如上, 按PS8至PS2依次排列, PS8超出色谱柱排阻极限, 丢弃不用。

2.2 凝胶色谱校正曲线

按PS7至PS2, 三图, 5个峰, 作3次拟合曲线, 相关系数为0.99998。

2.3 聚酯类样品分子量测试结果

测试了生物降解法制备的聚酯类高分子化合物, 获得凝胶色谱图, 分子量分布图及各种统计意义的平均分子量。

聚酯类样品分子平均分子量如下:

组份名:PS, 数均分子量Mn:8375.32, 重均分子量Mw:13131.83, 峰位分子量Mp:14108.24, Z均分子量Mp:17369.50, 粘均分子量:12047.11。

3 讨论

3.1 色谱条件的优化

3.1.1 系统稳定性

凝胶色谱以色谱峰保留时间为定量依据, 流动相流量稳定性决定测试准确性。实验前, 以C18色谱柱, 流动相甲醇 (1 m L/min) 系统, 丙三醇 (2 mg/m L) 10μL为标样, 6次重复进样, 峰保留时间RSD=0.02%, 确认系统稳定可靠。

3.1.2 系统安全性

流动相氯仿易吸收空气中水分, 经光照产生光气, 会严重腐蚀仪器。实验前应检查氯仿质量, 发现变质氯仿应重蒸使用。

4 结论

本文建立聚酯类高分子化合物分子量分布测试方法, 系统稳定性RSD小于0.02%, 校正曲线相关系数0.99998, 方法可靠, 正确。

参考文献

[1]林尚安, 陆耘, 梁兆熙.高分子化学[M].北京:科学出版社, 2000.290, 771.

[2]Juris L Ekmanis.GPC analysis of polymers with an on-line viscometer detector.International GPC Symposium, 1989 (10) :1-4.