液相色谱分析（共12篇）
液相色谱分析 篇1
游离植物甾醇在油脂中溶解性较差, 在体内很难被吸收利用, 造成使用上的困难。与植物甾醇相比, 植物甾醇酯具有更优的亲脂性和更佳的降胆固醇效果, 是一种新型功能性食品添加剂。目前, 国内外的少数厂家已能使用植物甾醇等原料合成植物甾醇酯, 对于合成过程中跟踪检测的分析方法却未见报道。
一仪器与试药
Agilent 1100型液相色谱仪, Agilent 1100型紫外检测器;电子天平;梅特勒托利多。
植物甾醇酯对照品购于cognis生物制品有限公司, 经HPLC测定纯度为95.31%, 所用试剂均为色谱纯。
二实验方法
1. 对照品溶液的制备
称取Cognis甾醇酯 (95%) 对照品50mg溶于50m L流动相, 配制成质量浓度为1mg/m L的对照品溶液, 摇匀, 经0.45µm微孔滤膜过滤, 即得对照品储备液, 备用。
2. 样品溶液的制备
向装有温度计的250m L四口烧瓶中加入一定量的植物甾醇和脂肪酸甲酯, 油浴加热, 机械搅拌, 温度达到90℃后继续反应1h, 再加入一定量的甲醇钠, 而后恒温反应4h, 最后将热的反应液转入漏斗中, 经水洗、乙醇洗涤, 脱溶剂后得到样品。
称取合成样品50mg溶于50m L流动相, 配制成质量浓度为1mg/m L的样品溶液, 摇匀, 经0.45µm微孔滤膜过滤, 即得样品储备液, 备用。
3. 色谱条件
色谱柱:硅胶正相柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%;流速:1m L/min;检测波长:210nm;进样量:20μL。
4. 线性关系考察
吸取对照品储备液1、2、4、6、8m L, 分别置于10m L容量瓶中, 使用流动相定容, 摇匀, 得到5个不同浓度的对照品溶液。分别吸取20µL, 按上述色谱条件进样分析。以浓度X (µg/m L) 为横坐标, 峰面积Y为纵坐标, 绘制标准曲线并计算回归方程。回归方程为:Y=187269X+29637, r=0.9987。结果表明:甾醇酯在0.1~0.8mg/m L的浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。
5. 精密度试验
吸取上述标准对照品溶液中的0.6mg/m L 20µL, 按上述色谱条件, 重复进样5次, 测得甾醇酯峰面积的RSD为1.29%。
6. 稳定性试验
取0.4mg/m L对照品溶液, 分别于0、2、6、12、24h, 吸取20µL进样, 测得甾醇酯峰面积的RSD为1.76%。结果表明, 供试品溶液在24h内稳定性较好。
7. 重现性试验
取同一批原料5份, 按供试品溶液制备方法分别制备5份, 测定, 计算甾醇酯的百分含量的RSD为1.94%。
8. 回收率试验
称取已知甾醇酯含量样品5份, 各取5mg分别加入甾醇酯对照品适量, 按供试品溶液的制备方法进行处理, 按上述色谱条件测定, 结果甾醇酯的平均回收率为98.72%, RSD为1.87%。
9. 样品测定
吸取经微孔滤膜 (0.45µm) 滤过后的样品溶液20µL, 在上述色谱条件下进样分析。
三讨论
经实验最后确定流动相为:正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%。加入少量异丙醇能使甾醇快速出峰, 峰型较理想, 加入量过多也会使甾醇与其他峰无法分开。正己烷∶异丙醇=98∶2时峰型较理想;加入甲醇能使甾醇酯与甲酯很好分离。实验还考查了反相液相色谱法对样品测定, 发现甾醇组份能分别出峰, 但甾醇酯不能得到理想峰型。
四结论
本实验对高效液相色谱法进行了系统性分析, 考查了不同色谱柱和流动相, 最后确定了分析三种物质较理想的分析条件:紫外检测器;硅胶正相柱Hypersil CN (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%;流速:1m L/min;检测波长:210nm;进样量:20μL。本方法简便、易行, 而且稳定、重现性好。
摘要：本文研究了植物甾醇酯、植物甾醇和脂肪酸酯的定性、定量分析方法。采用正相高效液相色谱法, 紫外检测器, 结果表明:三种物质10min内出峰, 分离效果好, 此方法快速、准确、简便。
关键词：植物甾醇,植物甾醇酯,高效液相色谱
参考文献
[1]盛漪、华伟、谷文英.植物甾醇降胆固醇生理功能及其研究进展[J].粮食与油脂, 2002 (12) :25～26
[2]唐传核、彭志英.一种新型功能性食品——植物甾醇酯[J].中国油脂, 200l (3) :60～63
液相色谱分析 篇2
采用高效液相色谱法,以0.1%的磷酸作为流动相,采用三种不同的提取液(3%的偏磷酸、3%的偏磷酸+8%乙酸、0.1%的草酸)对番石榴不同的果实部位的VC(L-抗坏血酸)含量进行了测定,结果表明:3%的`偏磷酸+8%乙酸作为浸提液效果最好,对于三次取样的结果相对标准偏差最低(RSD=1.6%),回收率最高为98.5%;3%的偏磷酸提取效果次之;0.1%的草酸溶液提取效果最差,RSD=28.4%,回收率也很低(72.5%).此外,不同部位的番石榴果肉VC含量也不一致,以靠近果皮的果肉含量最高,其次为果心,中部果肉含量最低.
作 者：刘胜辉 臧小平魏长宾 LIU Sheng-hui ZANG Xiao-ping WI Chang-bin 作者单位：中国热带农科院南亚热带作物研究所,广东,湛江,524091刊 名：食品科学 ISTIC PKU英文刊名：FOOD SCIENCE年，卷(期)：28(4)分类号：O657.72关键词：番石榴 VC 高效液相色谱
液相色谱分析 篇3
摘 要 通过超高效液相色谱法同时测定蔬菜中吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素的残留量，确定最佳色谱条件。结果证实，超高效液相色谱法的准确度高、耗时短，特别适用于批量蔬菜样品的农药多残留检测。
关键词 超高效液相色谱法；农药多残留；蔬菜检测
中图分类号：TS255.7 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2016）01--02
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：美国沃特世Acquity UPLC I-Class超高效液相色谱仪、配带二极管阵列检测器、电化学工作站等；超纯水系、高速匀浆机、氮吹仪等。
试剂：吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素等农药标准品，浓度皆为1 000μg/mL；色谱纯CH3OH（德国默克公司）；18.2 MΩ.cm超纯水。
1.2 标准液配制
储备液：准确吸取吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素标准品溶液各1 mL，均加甲醇稀释至10 mL，制备浓度中等的标准储备液，于-18 ℃条件下密封保存。
工作液：取适量储备液，用CH3OH/H2O（体积比为3∶2）作溶剂，分别制取3种不同浓度的标准工作液，经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶，上机检测，做标准曲线，标准曲线法定量。
1.3 样品处理
提取：准确称量25.0 g已备好的样品，加入250 mL锥形瓶中，再加入50.0 mL CH3CN，高速匀浆处理2 min，经过滤后加入100 mL具塞量筒之中，量筒内已提前加入经灼烧处理的氯化钠4 g；用力震荡1 min，然后静置30 min，让乙腈与水彻底分离；于上层乙腈层吸取溶液10 mL，加入150 mL烧杯中，将烧杯放在80 ℃水浴锅上加热，杯内缓缓通过空气流，蒸发近干。加入2.0 mL CH2Cl2/CH3OH（体积比为99∶1），使烧杯瓶内残渣再次溶解。
净化：以4 mL CH2Cl2/CH3OH试剂对LC—NH2 SPE小柱进行预淋洗，将流出液用玻璃刻度试管收集起来，流速以2 mL/min为宜。以2 mL CH2Cl2/CH3OH试剂对烧杯进行洗涤，待SPE小柱中的液面上升至柱床表面后，向其中移入洗涤液，并重复一次；再将盛有淋洗液的刻度试管置于氮吹仪上，在水浴温度50 ℃的条件下，氮吹蒸发至近干，加入1.5 mL CH3OH，然后涡旋处理，加入1 mL水，再次涡旋处理，经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶，留待上机检测。
1.4 色谱条件设定
以CH3OH/H2O为流动相，流速设为0.2 mL/min；采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱，规格为2.1 mm×50 mm，1.7 um i.d.；柱温设定25℃；二极管阵列检测器的检测波长设为255 nm；进样量5.0 μL。
1.5 线性关系及检出限
以CH3OH/H2O（体积比为3∶2）为溶剂制备标准溶液，浓度分别为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 μg/mL，上机检测，作浓度-峰面积标准曲线，得出校正曲线，然后按照信噪比S/N=3算出每种农药的检出限。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的优化
以CH3OH/H2O为流动相实施梯度洗脱时，5种待测组分的分离效果明显，经多次试验，得出最佳洗脱梯度，见表1。经进一步分析比较，用50 nm及100 nm两种不同规格的色谱柱进行洗脱时，分离效果未出现明显差异，但100 nm色谱柱的耗时更长，且柱压接近50 nm色谱柱的2倍，从省时、系统安全等角度考虑，决定选用50 nm色谱柱。在上述优化的基础上，分别得到标准溶液色谱图以及豇豆、西红柿的加标色谱图。
在CH3OH/H2O流动相中，甲醇与水的比例随时间而变化。为消除进样时的溶剂效应影响，防止色谱峰发生漂移、变形等问题，必须确定甲醇与水的合理比例。经多次尝试，最终确定标准工作液中甲醇∶水的比例为3∶2时，待测组分的保留时间相对稳定，所得色谱峰的形状尖锐而对称；而采用纯甲醇或8∶2等比例时，出现保留时间漂移、谱带展宽等问题，其中采用纯甲醇时该问题尤其明显。
2.2 线性关系及检出限
相关性超過0.999，反映线性关系良好；检出范围为0.01～0.06 mg/kg。
根据国家有关规定，吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素5种农药在豇豆、西红柿等蔬菜中的残留限量依次为，1、0.5、1、2、0.05 mg/kg，本试验方法能够满足上述几种农药的检测需求。
2.3 实际样品分析
抽样调取一批蔬菜样品，包括白菜、辣椒和菜花等，通过本方法予以检测，5种农药均有检出，说明此类农药在我国农业生产中的使用较为广泛。尽管检测结果并未超出国家规定的残留上限，但仍然要强化监管，避免因农药残留超标而引发食品安全事故[1]。
3 结论与讨论
根据5种农药的回收率、变异系数及检出限结果可知，该检测方法的准确度及精密度均比较高，且操作容易、检测迅速、易于推广，能够满足当前社会对蔬菜农药多残留的检测需求。
参考文献
[1]李彤.高效液相色谱和超高效液相色谱仪器的一些最新发展[J].色谱，2015（10）.
液相色谱分析 篇4
1实验部分
1.1仪器及工作参数岛津-10 A液相色谱仪, 浙大N 2000色谱数据工作, UV-可见紫外检测器, 在线脱气;色谱柱:ODS C18Hypersil5Lm 250@4 mm;流动相:甲醇+0.02 mol/L乙酸铵 (70+30) ;检测波长365 nm;柱温:室温;流速:1.0 ml/min;进样量:20ul。
1.2试剂0.1%2, 4-二硝基苯肼:称1.10 g 2, 4-二硝基苯肼溶于24 ml浓盐酸中, 加水溶解定容至100 ml。甲醛标准液:取甲醛36%~38% (体积分数) 2.8 ml, 用水稀释至1 L, 约为1.0mg/ml标定, 冰箱内保存=。0.02 mo1/L乙酸按:称1.54 g乙酸铵, 加水溶解并稀释至1000 ml经滤膜 (0.45Lm) 过滤。
甲醇 (A.R) , 经滤膜 (0.45Lm) 过滤。
1.3样品和标准的测定串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50 L/min的速度采集10~15L空气[2]。从串联的2支吸收管中各取吸收液1.00 ml于10ml比色管中, 混合;取甲醛标准 (1.00Lg/ml) 0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 ml于10 ml比色管中, 用水稀释至2.00 ml于样品和标准管中各加0.1%2, 4-二硝基苯肼1.00 ml混匀, 室温放置24 h以上, 或在60e水浴中30min, 加1.00 ml二氯甲烷振摇提取2 min, 放置分层, 待下层澄清后, 直接用微量注射器取下层二氯甲烷20ul进样分析。
2结果及讨论
2.1采样效率在采样点, 串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50 L/min的速度采集10~20L空气, 本法的采样效率为94%~96%[2,3]。
2.2检测波长的选择衍生试剂2, 4-二硝基苯肼的最大吸收波长在265nm[4]左右, 经实验, 与甲醛反应生成的2, 4-二硝基苯腙的最大吸收波长在365 nm[5,6]。对甲醛的紫外衍生测定, 选用365nm波长。
2.3流动相的选择用甲醇+水作流动相, 低浓度甲醛的色谱分离图有拖尾现象。选用甲醇+0.02 mol/L乙酸铵 (70+30) 作流动相, 从低浓度0.050Lg/ml甲醛标准的色谱图基线平直, 色谱峰型对称, 未被衍生的2, 4-二硝基苯肼出峰在前, 2, 4-二硝基苯肼与甲醛反应生成的2, 4-二硝基苯腙能完全分离。
2.4萃取液的选择及保存时间萃取剂可选择三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷等, 浓度较高时, 使用正己烷提取不完全, 其衍生试剂 (2, 4-二硝基苯肼) 的色谱峰延后。选用三氯甲烷或二氯甲烷一次萃取, 都能满足0~50.0Lg甲醛衍生物的测定。我们选用1.0 ml二氯甲烷作萃取剂。经实验, 样品衍生后稳定, 室温放置72 h再萃取或萃取后在室温下放置72 h, 测定结果无变化。
2.5衍生试剂的选择甲醛的衍生试剂可选择硫酸肼或2, 4-二硝基苯肼。甲醛与硫酸肼形成的衍生物 (甲腙) 相对分子质量小, 出峰时间快, 检测的灵敏度低, 抗干扰能力差;甲醛与2, 4-二硝基苯阱的紫外衍生反应, 能迅速定量地生成2, 4-二硝基苯肼。过量的衍生试剂 (2, 4-二硝基苯肼) 通过选定的色谱柱能与2, 4-二硝基苯肼完全分离, 不干扰甲醛的测定。
2.6萃取方式经实验证实, 按本法操作, 样品和标准一次萃取即可。这样可省去多次萃取、分离、挥干、溶解等烦琐步骤, 从而减少工作量, 提高工作效率。
2.7线性范围与最低检出量甲醛在0~2.0Lg范围内, 浓度C与峰面积呈直线相关, n=6, r=0.9986, a=-26.0, b=773.6。方法最低检出量:以峰面积=30计, 方法最低检出量为0.072Lg。按本法操作, 串联2支大型气泡吸收管, 各加5.00 ml水作吸收液, 以0.20~0.50L/min的速度采集10 L空气, 在标准状态下, 最低检出浓度为0.036 mg/m3。如果样品中的甲醛浓度较高, 可将甲醛标准扩展至0~50.0Lg, 浓度与峰面积仍呈直线相关关系。甲醛为0、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00Lg时其峰面积为0、51.7、109.2、319.5、791.8和1511.3。
参考文献
[1]中国室内装饰协会室内环境监测中心.室内环境质量及检测标准汇编.北京:中国标准出版社, 2003:297.
液相色谱分析 篇5
溶剂的组成影响电喷雾离子(ESI)化效率.该研究观察了ESI溶剂体系中不同浓度的乙腈(ACN)对MRFA、Reserpine、MLtramarkl621、马肌球蛋白酶切肽段等标准物质的质谱信号响应强度的影响,发现在溶剂体系中,ACN浓度达到70%时,上述物质的.质谱信号强度具有最大值.根据这一现象,对传统的反相色谱-电喷雾-质谱(RPLC-ESI-MS)系统进行管路改造,在分析柱后通过1个三通阀引入适当流速的有机溶剂进行辅助喷雾.对马心肌蛋白酶切肽段混合物的分析表明,该方法可以有效提高酶切肽段的检出率,并提高鉴定蛋白质的序列覆盖率.
作 者：陈明 王立群 杲修杰 弓景波 钱小红 钱令嘉 CHEN Ming WANG Li-qun GAO Xiu-jie GONG Jing-bo QIAN Xiao-hong QIAN Ling-jia 作者单位：陈明,王立群,杲修杰,弓景波,钱令嘉,CHEN Ming,WANG Li-qun,GAO Xiu-jie,GONG Jing-bo,QIAN Ling-jia(军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津,300050)
钱小红,QIAN Xiao-hong(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850)
液相色谱分析 篇6
【关键词】高效液相色谱；保健食品；违禁药物
【中图分类号】TQ460.72 【文献标识码】B【文章編号】1004-4949（2015）02-0276-01
0.引言
目前市场上保健食品主要以补益类、减肥类以及控血糖类食品居多，在这些食品中化学成分较为复杂，部分商家为了节约成本以获取非法利益存在以次充好的情况，而所加入的违禁药物不仅仅会使药物质量降低，同时会直接影响到服用者的健康情况，若服用周期较长甚至可能使受众的生命安全受到威胁，因此需要通过有效的检出手段对保健食品进行检测，确保保健食品的质量达到标准[1]。
1高效液相色谱概述
高效液相色谱技术是最为常见的检测分离技术，细分又涵盖了吸附色谱、分配色谱离子、交换色谱以及凝胶色谱。该技术具有分离纯度高、灵敏度高、高效性等特点，但相对成本也偏高[2]。一般情况下高效液相色谱分离遵循以下流程：先对样品情况进行大致掌握并确定分离目的，然后对样品进行预处理及特殊处理再筛选合适的检测仪器并对检测参数进行调控[3]，对色谱进行有效筛选并进行预实验同时评估最佳分离条件，优化分离条件，对分离过程中出现的问题进行分析并进行定量校正。
2相关实验分析
以补益类药品为例进行具体实验分析，如下所示：
2.1实验仪器及试剂
西力士标准品，伐地那非标准品、新阳碱、还阳碱、甲醇、乙醇、磷酸、蒸馏水等；高效液相色谱仪、检测器、超声波清洗器、去离子水制备系统、相关工作站等。
2.2实验步骤
对他达那非、伐地那非等对照品进行准确称量，质量为0.0500g。将所取5份样品分别置于50ml量瓶中，向瓶中置入甲醇（40ml）溶解，溶解时间为5min，冷却后进行稀释，获取浓度为1mg/ml的对照品液，于4℃条件下进行保存。之后配置标准液，用甲醇液对对照品进行稀释，得到梯度浓度溶液（4.0ug/ml，10.0ug/ml，20.0ug/ml，40.0ug/ml，100.0ug/ml，200.0ug/ml）作为工作液。
色谱柱规格为250mm*4.6mm，5um，柱温设定为30℃，样品温度为室温，每次进样20ul，色谱柱流速为1.0ml/min。流动相取乙腈：磷酸缓冲液（0.02%）=1：3。
取相关胶囊内容物研磨充分，精确称取0.10g，将其置于50ml容量瓶中，添加甲醇进行溶解，利用超声波提取，冷却，继续加甲醇定容，利用微孔滤膜过滤作为固体样品溶液。在上述色谱条件下对他达那非、伐地那非、新阳碱、还阳碱等样品及标准品提取液进行测定。
2.3讨论
经过光谱分析发现甲磺酸西地那非与新阳碱在波长为225nm处存在最大吸收，他达那非在波长为199nm出存在最大吸收，伐地那非在波长为215nm条件下存在最大吸收，还阳碱在波长为280nm下存在最大吸收。由于在225nm处还阳碱吸收能力较强，可选225nm作为检测波长对上述样品进行实际分析。在色谱柱筛选方面通过横向比较发现不同流动相以及不同色谱柱条件下样品出峰顺序、保留时间以及峰形包括响应值等都存在较大差异，经综合研判发现安捷伦C18柱效果最优，柱规格为250mm*4.6mm，5um。流动相方面选取乙腈：磷酸缓冲液（0.02%）摒弃了缓冲液调节pH操作，并且不会受到挥发性影响。柱温30℃可保证样品波峰清晰分离，不会出现重叠情况并延长了波峰保留时间。流速方面采取1.0ml/min进行过柱操作，可保证波峰清晰分离，具有较为理想的分离度。经过线性回归处理得到上述化合物的线性回归方程分别为：
伐地那非（A=6.38*10^4C-11.4*10^4，r2=0.9991，线性范围为4.0-200.0ug/ml）；
还阳碱（A=3.57*10^4C-7.56*10^4，r2=0.9994，线性范围为4.0-200.0ug/ml）；
甲磺酸西地那非（A=6.56*10^4C-8.97*10^4，r2=0.9993，线性范围为4.0-200.0ug/ml）；
新阳碱（A=5.99*10^4C-1.51*10^4，r2=0.9997，线性范围为4.0-200.0ug/ml）；
他达那非（A=10.4*10^4C+2.85*10^4，r2=0.9995，线性范围为4.0-200.0ug/ml）。
通过上述处理可使得相关检测物质达到基线分离目的，同时对色谱条件进行优化，控制柱温与pH来获取理想分离效果，在分离过程中通过对样品液进行适当稀释可更好的对样品进行定性与定量测定，在PDA检测器基础上可提升容错率，特别是对复杂样品测定提供了有力的支持。
3结语
HPLC（High Performance Liquid Chromatography）高效液相色谱法在保健食品检测过程中承载了十分重要的作用，利用该方法可准确捕捉到保健食品中的违禁药物含量，为食品安全提供了重要保障
参考文献
[1] 严爱花，李贤良. 液相色谱-串级质谱法同时检测中成药及保健食品中非法添加的22种苯二氮卓类药物[J]. 分析化学. 2013（04）
[2] 葛宝坤，张群谦，赵孔祥. 高效液相色谱法同时测定减肥类保健食品中盐酸西布曲明和酚酞[J]. 药物分析杂志. 2012（11）
液相色谱分析 篇7
水是生命之源, 随着社会的进步和人民生活水平的不断提高, 人们对饮用水安全问题日益关注。饮用水安全问题涉及的主要方面有:重金属污染、微生物污染、农药残留等。饮用水中的各种农药残留对机体有一定的毒性, 多数都会产生致癌、致畸作用, 若不加以控制, 将对人体健康产生重大危害。为了更好地保障人体的健康, 生活饮用水指标GB/5749-2006由GB5749-1985的35项增加至106项, 增加了71项, 其中毒理指标中有机化合物由原来的5项增加到53项。本文就液相色谱技术在水质分析中的应用作一个回顾, 目的是使人们进一步认识到高效液相色谱在水质分析中的重要意义。
二、高效液相色谱
高效液相色谱法 (HPLC) 是20世纪70年代发展起来的一种分离分析技术。自1980年代以来, HPLC成为国际分析化学界发展最快的一种分离分析技术, 在工农业、医药卫生、环境监测等众多领域都有广泛的应用。
高效液相色谱仪一般由高压输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测器、记录器或数据处理机等组成。流程为流动相由高压输液泵输送, 样品由进样装置送入, 流动相将样品带入色谱柱进行分离, 分离后的各组分依次进入检测器, 检测器输出的信号经记录器记录或经数据处理机记录处理。高压输液泵、色谱柱、检测器是HPLC的三大关键部件, 而固定相、流动相和色谱柱又是高效液相色谱分离系统的核心所在。[1]
高效液相色谱法与经典柱色谱法的原理相同。溶质在固定相和流动相之间进行连续多次的交换过程, 由于每种物质在两相间的分配系数、亲合力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用等的差别而得到分离。根据分离机理, 可分为液一液分配色谱法、液一固吸附色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法四类。水质分析中一般采用液液分配色谱法和离子交换色谱法。
相比气相色谱, HPLC具有以下几个特点:
1) 、气相色谱不适用于不挥发性物质和对热不稳定物质, 而液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制。有些样品因为难以汽化而不能通过柱子, 热不稳定的物质受热会发生分解, 也不适用于气相色谱法。这使气相色谱法的使用范围受到了限制, 据估计, 世界上数百万种有机化合物中除20%宜用气相色谱分离分析外, 包括大分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物在内的其余80%的有机化合物均可用HPLC分离分析。
2) 、对于很难分离的样品, 用液相色谱常比用气相色谱容易完成分离, 因为流动相也影响分离过程, 这就对分离的控制和改善提供了额外的因素。而气相色谱中的载气一般不影响分配。也就是说, 在液相色谱中有两个相与样品分子发生选择性的相互作用。液相色谱中具有独特效能的柱填料 (固定相) 的种类较多, 这样就使固定相的选择余地更大, 从而增加了分离的可能性。
3) 、液相色谱使用较低的分离温度, 分子间的相互作用在低温时更为有效, 因此降低温度一般会提高色谱分离效率。
三、高效液相色谱在水质中的应用
1、水中多环芳烃的检测
多环芳烃是煤、石油、木材、烟草、有机高分子化合物等有机物不完全燃烧时产生的挥发性碳氢化合物, 是数量最多、分布最广的一类环境致癌物, 在已发现的1000多种致癌物中, 多环芳烃及其衍生物占三分之一以上, 所以, 环境样品中多环芳烃的含量常被作为环境污染评价的重要指标之一。GB5749-2006中要求严格控制多环芳烃含量为0.01μg/L。[2]
由于多环芳烃类化合物不易被气化, 而在紫外或荧光检测器上又有灵敏的特征性响应, 消除或减少了那些无紫外吸收或无荧光信号化合物的干扰, 可在反相色谱柱中的到很好的分离, 因此, 高效液相色谱法被列为苯并[a]芘首选的分析方法。
周芳等人[3]通过紫外-荧光串联使用, 紫外检测器变波扫描, 荧光检测器波长切换, 合理设定流动相梯度洗脱程序等手段优化分析条件, 使得包括苯并[a]芘在内的16个多环芳烃组分在40分钟内获得良好的分离效果, 并分别选取在紫外和荧光检测条件下各组分的最大响应进行定量, 使各组分均有更低的检出限0.0001~0.0013μg/L, 方法精密度达到0.98%~10.4%, 加标回收率达72.4%~112%。曹攽等人[4]应用荧光-紫外检测器联用的HPLC分析地下水中16种多环芳烃, 对HPLC梯度洗脱条件进行优化, 在较佳的条件下检出达到0.001~0.010μg/L, 回收率为86.3%~105%, 分析16种多环芳烃仅用20min, 比EPA8310方法中采用的液相色谱法缩短了17分钟, 方法分析时间短, 适用于大批水样的痕量多环芳烃的分析。
2、水中农药的分离分析
农药的发明和使用无疑大大地提高了农作物的产量。但水和食物中的农药残留对人类健康造成的负面影响也日益显露出来。人类饮入受农药污染的水源后, 残留在其中的农药就会储存在体内, 而且排泄缓慢, 最后造成人类急性或慢性中毒, 导致严重的危害。因此农药残留分析随着人们对健康的关注变得日益重要。液相色谱就是其中一种新型的、先进的农药残留分析技术, 尤其是其对不挥发、受热易分解、强极性物质的分离检测中显示出了明显的优越性。国内外已经有很多关于食物和水中农药残留检测的报道。[5]
Berrada等[6]综述了5年来分离富集蔬菜、土壤、水中残留的尿素类杀虫剂的萃取方法以及对这些农药的检测方法。他们重点总结了用LC检测该类杀虫剂的各种方法。指出自动固相萃取-液相色谱在线联用技术己经具有一定的商用价值, 很适合水样中多种农药残留分析。
杨晓松等人[7]建立固相膜萃取-高效液相色谱法测定饮用水中灭多威、涕灭威、速灭威、残灭威、呋喃丹、甲萘威、抗杀虫威、异丙威、硫双威、仲丁威、猛杀威、杀虫威等12种氨基甲酸酯类农药残留量的方法。水样经C18固相萃取膜真空抽滤, 滤膜用乙酸乙酯洗脱, 洗脱液经氮吹、甲醇溶解, 高效液相色谱法测定结果结果显示12种氨基甲酸酯类农药的线性范围为0.05 mg L~25.0mg/L, 线性相关系数大于0.999, 检出限为0.31 mg/L~1.25mg/L, 水样中氨基甲酸酯类农残最低检测浓度范围为0.005mg/L~0.019mg/L, 加标回收率为59.3%~97.3%, RSD<7.5%。本方法样品前处理方便、快捷, 有机试剂用量少。
3、水中酚类化合物的分析
酚类化合物作为炼焦、造纸、化工等工业污水的主要污染物, 在生活污水、天然水和饮用水中普遍存在。酚类化合物中的氯酚类化合物广泛用作杀虫剂和消毒剂, 从而污染水源。水中天然有机物在氯气消毒时也会产生卤代酚等产物, 使水带有氯酚味, 常规水处理工艺不能有效地去除, 长期饮用含酚类的水, 可引起头昏、出疹和瘙痒等神经系统症状。
酚类化合物的分析方法有分光光度法、气相色谱法和液相色谱法等。分光光度法只能测定水中邻间位取代的挥发性酚类, 所以检测的结果比实际水中的含量低。气相色谱法需要衍生化反应, 其操作繁琐, 应用受到限制。液相色谱法以其准确度高、重现性好、检出限低, 操作简单等特点广泛应用于水中酚类化合物的分析。
陆蓓蓓等人[8]建立水中7种有机酚类污染物的超高效液相色谱-二极管距阵检测器测定方法。水样经小柱富集, 利用色谱柱分离, 以甲醇和0.1%乙酸溶液为流动相进行梯度淋洗, 流速0.25ml/min, 采用PDA检测器, 在波长275 nm和303 nm进行测定, 外标法定量。结果:7种酚类化合物在0.05 mg/L~5.0 mg/L浓度范围呈线性关系, 其相关系数均大于0.999, 检出限为15.0μg/L~25.0μg/L, 方法回收率在86.9%~104.1%, 相对标准差均小于5%。此种方法灵敏、高效、准确, 适用于水中七种酚类污染物的同时测定。
张辉辉等人[9]采用固相萃取工作站上建立的酚类预处理方法, 梯度洗脱, 紫外检测器波长编程方法对自来水样进行检测, 检出限达到0.18~0.64μg/L, 回收率达到88.07%~95.00%, 相对标准偏差0.84%~5.26%.该种方法检出限更低, 适合饮用水中低浓度的水样检测。
4、结语
综上所述, 高效液相色谱法在水质分析中的应用是广泛的。实验表明, 在水质分析中高效液相色谱法是一种高效能、高灵敏度、高准确度及操作简便的分析方法。各个部件的不断改进, 更高性能检测器的出现、液相色谱与质谱联用技术的应用, 液相色谱在水质分析中将发挥越来越大的作用。
摘要：高效液相色谱技术在水质检测中有着重要的应用, 本文从高效液相色谱法的概念和特点入手, 分析了高效液相色谱技术在水质分析中的应用现状。
关键词：高效液相色谱,水质分析,多环芳烃,农药,酚类化合物,应用
参考文献
[1]于世林.高效液相色谱方法及应用 (第二版) .北京:化学工业出版社, 2006.[1]于世林.高效液相色谱方法及应用 (第二版) .北京:化学工业出版社, 2006.
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[7]杨晓松, 余辉菊等, 固相膜萃取-高效液相色谱法测定饮用水中12种氨基甲酸酯类农药残留, 中国卫生检验杂志, 2012年7月, 第22卷第7期[7]杨晓松, 余辉菊等, 固相膜萃取-高效液相色谱法测定饮用水中12种氨基甲酸酯类农药残留, 中国卫生检验杂志, 2012年7月, 第22卷第7期
[8]陆蓓蓓, 单晓梅, 超高效液相色谱-二极管阵列检测器法同时测定水中7种有机酚, 中国卫生检验杂志, 2012年06期[8]陆蓓蓓, 单晓梅, 超高效液相色谱-二极管阵列检测器法同时测定水中7种有机酚, 中国卫生检验杂志, 2012年06期
联萘酚对映体的高效液相色谱分析 篇8
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
SHIMADZU 20A型高效液相色谱仪,LC-20AT泵,SPO-20A程序紫外检测器。
R-(+)联萘酚及S-(-)联萘酚(外购),消旋联萘酚样品由广西化工研究院实验室提供,正己烷(色谱纯)。
1.2 色谱条件
色谱固定相为大赛璐多糖衍生物正相手性柱CHIRALCEL OD-H(4.5m×150mm,5μm),流动相为正己烷∶异丙醇(6∶1,V/V),紫外检测器检测,测定波长为225nm,流量为1mL·min-1,进样量为20μL。
1.3 溶液的配制
1.3.1 标准溶液的配制
分别准确称取R-(+)联萘酚标准品0.1g(准确至0.0002g),S-(-)联萘酚标准品0.1g(准确至0.0002g)于2只100mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,待测定。
1.3.2 反应样品的制备
将反应产物从反应釜中抽出,旋转蒸馏,浓缩,抽滤,称一定量产物(准确至0.0002g)(根据组分的含量,适量称取)于100mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,待测定。
2 结果与讨论
2.1 色谱柱的选择
CHIRALCEL OD-H是一种大孔硅基涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相色谱柱,主要用于正相色谱分析。故洗脱液通常选用非极性溶剂,在本方法中用正己烷和异丙醇进行探索,当用纯的正己烷作流动相时,联萘酚对映体无法被洗脱;当用纯的异丙醇作流动相时,联萘酚对映体由于其容量因子太小而无法分离。当流动相组成为正己烷∶异丙醇(6∶1,V/V)时,混旋联萘酚能很好地分离,并且色谱峰对称性好。
2.2 样品分析
按1.2项的色谱条件,对样品进行分析,其色谱图如图1所示。
2.3 工作曲线
在选定的色谱操作条件下,配制S-(-)联萘酚及R-(+)联萘酚标准系列溶液分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0g·L-1(准确至0.0002g),并进行色谱分析,绘制工作曲线。并用浓度为1g·L-1的S-(-)联萘酚及R-(+)联萘酚溶液做精密度试验,平行测定5次,求其相对标准偏差,结果见表1。由表1可知,本色谱条件测定S-(-)联萘酚及R-(+)联萘酚的线性范围较宽,在浓度0.1~5 g·L-1的范围内基本呈线性,精密度也较好。
2.4 样品的回收率和最低检测限
分别称取样品4批,用标准加入法测定其回收率,以3倍噪音求得此方法中S-(-)联萘酚及R-(+联萘酚的最低检测浓度,其结果见表2。
3 结论
本研究探讨了高效液相色谱手性分离混旋联萘酚的方法,该方法具有简便快捷、精密度高、结果可靠及回收率高等特点,可为生产监控和技术革新提供有力的技术支持,为手性联萘酚的产品质量评价提供有效依据。
参考文献
[1]Hargiti T,Okameto Y.J.Liq.Chromatogr,1993(4):843-858.
[2]Schmitt T,Engelhardt H.Chromatogr,1993,37(9-10):475-481.
实验室高效液相色谱柱的管理分析 篇9
1 色谱柱档案建立以及领用管理
1.1 色谱柱档案建立
在实验室内的色谱柱应该进行统一标号, 收纳进仓库中, 然后关于色谱柱的建立纸质版以及电子版档案, 档案中色谱柱的信息一定要添加完整, 为以后积累色谱柱的适用信息提供参考, 这其中应该包括:色谱柱的编号、品牌、填充材料、型号、正在运输中的溶剂、最大耐压值及流速、最佳使用温度范围、PH值范围、需要注意的事项、产品序列号以及备注信息等。色谱柱的使用信息可以参考使用说明书以及官方网站的相关信息。
1.2 色谱柱的领用管理
在领用色谱柱时需要填写色谱柱领用申请单, 色谱柱管理工作人员还需要在计算机电子档案中对领用人、领用日期和归还日期进行登记, 为以后的追溯工作提供信息参考。信息登记完毕后, 实验人员使用色谱柱时, 还应该在相关纸质版档案上登记相关信息。对于在实验进行的过程中, 实验人员发现色谱柱柱效下降或失效、以及色谱柱压升高的情况, 仍然需要对色谱柱效进行评价, 并分析其出现状况的原因, 然后按照色谱柱的管理规定对其进行处理, 将处理的过程、结果在档案中如实记录。实验完成后及时归还色谱柱。
1.3 色谱柱柱效评价
实验室新采购回来的色谱柱中都带有该色谱柱的柱效, 一般情况下会使用邻苯二甲酸二甲酯、二苯胺、尿嘧啶、硝基苯以及萘和芴等化合物的混合品作为标准品, 对这几种物质的分离度、理论塔板数进行考察。色谱柱经过使用后, 要对其柱效进行及时评价。评价的方法有两种, 一是利用上述几种物质的混合标准品评价;二是通过检验的品种评价, 将色谱图和色谱信息进行记录, 其中记录的信息中应该包括:色谱柱的序列号、制作的品种名称、使用时的色谱柱条件、色谱柱效、色谱柱使用人的签名、日期、备注信息等。
2 色谱柱的维护管理
2.1 色谱柱适用信息积累
色谱柱管理人员应该定期更新色谱柱的适用信息以及其适用范围, 并且按照其品牌、型号条件进行分类并整理, 按照其类型、填充材料以及其使用的流动分析物品的种类进行归纳, 还要将色谱柱无法适用的品种上标注, 分析无法适用的原因, 将其进行整合总结。色谱柱的适用范围、以及适用信息的积累能够帮助实验人员正确的选择色谱柱, 有效的提升开发具体品种的质量以及分析效率。
2.2 色谱柱的保养、维护、报废
2.2.1 轻拿轻放
实验人员使用色谱柱时应该轻拿轻放, 禁止随意振动使用;放置色谱柱以及归还色谱柱时相关实验人员应该确认已经将色谱柱保存在正确的溶剂中, 色谱柱上方的堵头已经拧紧。
2.2.2 柱压升高的处理
当发现色谱柱的柱压出现非正常升高情况时, 实验人员可以采取以下三种方法进行处理, 第一, 换用一种新的色谱柱清洗试剂, 新试剂的要求是应该比现在溶解能力更强的流动相对样品试剂, 对色谱柱进行清洗;第二, 将色谱柱按照相反方向进行连接、冲洗;第三, 将色谱柱头上的筛板拆卸下来进行清洗, 清洗过后再进行安装。
2.2.3 色谱柱再生
当色谱柱出现其峰高降低并且峰宽加大或者是出现肩峰、柱效下降的情况时, 应该根据相关规定对其进行再生操作, 值得注意的是再生操作的过程以及结果应该寄住在档案中。正相柱再生程序是, 顺次使用20至30倍的色谱柱体积量的正已烷, 异丙醇, 二氯甲烷, 以及甲醇作为流动相对色谱柱进行冲洗, 再用相反的顺序对色谱柱进行冲洗;反相柱再生程序是, 将甲醇和水的采用比例为95:5, 纯甲醇, 以及二氯甲烷等溶剂作为流动相, 依次进行冲洗, 其中每一种流动相经过色谱柱的用量应该为20至30倍的色谱柱体积, 再用相反顺序的试剂对色谱柱进行冲洗。试剂要严格脱水。
3 结语
在药物分析中高效色谱柱的管理具有重要作用, 能够有效的提升色谱柱的利用率, 减少药物的分析时间, 降低相关单位的分析成本。通过及时积累色谱柱的适用信息以及色谱柱的适用范围, 建立了积累信息库, 有效的提升了色谱分析方法的开发速度和质量, 保证了色谱柱管理工作的质量。
摘要：高效液相色谱柱被广泛应用于化学药品的分析方面。本文针对色谱柱的规范性使用和维护、提升高效液相色谱分析工作的水平作为研究的出发点, 通过建立色谱柱的档案、领用、管理、保养等多个方面, 探讨其管理方式。
关键词：实验室,高效液相,色谱柱,管理
参考文献
[1]吕虎, 汪红.高效液相色谱法测试乙氧氟草醚含量方法的改进[J].化工管理, 2015 (02) .
[2]关瑾, 任丽艳, 王慧泽等.高效液相手性固定相法分离分析几个质子泵抑制剂对映体[J].光谱实验室, 2012 (03) .
液相色谱分析 篇10
关键词：胶束液相色谱,表面活性剂,体内药物分析
胶束液相色谱(micellar liquid chromatography,MLC)是以高于临界胶束浓度(cmc)的表面活性剂溶液作为流动相的一种液相色谱方法[1]。这种色谱法与一般色谱法的主要不同是:流动相为胶束多相分配体系,不是真溶液,故又称为假相色谱[2],该系统具有固定相-流动相-胶束-固定相、三个界面和三个分配系数,因此具有较好的选择性。其代替传统液相色谱中的水-有机物流动相,克服了传统流动相毒性大(甲醇、乙腈)、消耗费用高、选择性低等缺点,有“绿色色谱”之称[3]。胶束液相具有传统高效液相不可替代的优点,国内外学者对胶束液相色谱的应用研究非常活跃。本文介绍了胶束液相色谱的基本原理,并综述了其在体内药物分析中的应用。
1 胶束液相色谱的基本原理
1.1 表面活性剂与胶束
表面活性剂是一种具有8～20碳原子的两亲分子,即分子中的一部分具有疏油的极性基,另一部分具有亲油的碳氢链组成的非极性基团。这两部分分别处于表面活性剂分子的两端,为不对称的分子结构。因此表面活性剂分子结构的特征是一种既亲油又亲水的两性分子,根据亲水基团的不同可分为两大类:离子性和非离子性。
1.2 分离机制
胶束溶液是多相分散体系,溶质的保留行为受固定相-水、胶束-固定相和胶束-水三个分配系数所左右,因此有较好的选择性[4]。三个分配系数的关系式如图1所示。图中Kmw为溶质在胶束相与水相间的分配系数;Ksw为溶质在固定相与水相间的分配系数;Ksm为溶质在固定相与胶束相间的分配系数。
通过溶质在胶束体系中的保留机理可以得知,溶质的保留与胶束浓度有关,同时与流动相的pH,固定相键合基团、有机改性剂、表面活性剂类型、温度等因素有关[5,6]。
1.3 胶束液相色谱优点
胶束液相色谱与传统液相色谱最大的区别在于胶束流动相由胶束和其周围溶剂介质组成,为微观非均相体系,而常规流动相是均相体系。这就使得胶束色谱具有下述与传统液相色谱所不同的特点[1,3,7]:
(1)由于表面活性剂作为流动相代替了传统液相色谱的水-有机物流动相(甲醇,乙腈),仅需少量有机溶剂,不仅降低成本同时有利于环保。
(2)胶束色谱选择性和专属性好,能够同时洗脱亲水性和疏水性化合物。
(3)有利于梯度洗脱,由于表面活性剂的浓度高于cmc后再增加浓度时,溶液中仅仅是胶束浓度的发生改变,而表面活性剂单体分子的浓度不变。因此,不会影响流动相与固定相的平衡过程,大大地缩短了分析时间,减少流动相的消耗。
(4)提高检测灵敏度,胶束具有改变某些化合物荧光强度的能力;还能稳定某些化合物分子的三重激发态,使其在室温下产生液体磷光,因此,对于一些荧光较弱而磷光强的化合物可以采用胶束色谱法分离。
(5)由于胶束聚集体可以溶解样品蛋白及其它化合物,可大大简化前处理程序。
(6)胶束液相色谱也存在缺陷,柱效较低,可通过在流动相中添加少量的有机添加剂来提高柱效,一般是采用短支链醇类化合物。另外,通过提高柱温也可以提高柱效。
2 胶束液相色谱在体内药物分析中的应用
体内药物分析一般采用血清或尿液。胶束液相色谱法与其它色谱法相比较最大的优点是,胶束聚集体可以溶解样品蛋白及其它化合物,将血清或尿液直接进样而不会引起蛋白质沉淀或柱压升高。因此大大简化前处理程序,胶束液相色谱法在体内药物分析中的应用越来越受到国内外广大学者的重视。
3 展 望
基于液相色谱 篇11
试验材料
材料。（1）仪器与设备。超高效液相色谱质谱联用仪，Pipet-LiteXLS型移液器，RetschGM200型组织捣碎机，TGL-16M型高速离心机，N-EVAP型氮吹仪，Sep-PakVac型氨基固相萃取柱，RE-52AA型旋转蒸发器。（2）试剂和材料。三唑酮，乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯，甲苯为优级纯，实验室用水为超纯水；氯化钠为优级纯，无水硫酸钠为分析纯，用前在650℃下灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。
三唑酮标准溶液：精密称取三唑酮标准品0.1000g于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，此溶液1mL相当于1.00mg三唑酮。临用时，用乙腈稀释至所需的质量浓度。
色谱条件。不同流动相色谱条件见表1。色谱柱：WATERSACQUITYC18（50×2.1mm，1.7μm）型；进样量：10μL；柱温：40℃。
质谱条件。电离模式：ESI+；扫描方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450℃；锥孔流速：50L/Hr；脱溶剂气流速：900L/Hr；碰撞气流速：0.17mL/min；母离子：294.2；子离子：197.1（定量离子），225.2；锥孔电压：25V；碰撞能量：15，13eV。
试验方法。（1）样品的提取。称取样品20 g于80 mL塑料离心管中，加入40 mL乙腈，用高速组织捣碎机在转速15 000 r/min 下匀浆提取1 min，加入5 g NaCl，再匀浆提取1min，以4 000 r/min离心5min，取上清液20 mL （相当于10 g 试样量），在40 ℃水浴中旋转浓缩至1 mL，待净化。（2）提取液的净化。在Sep-Pak Vac 型柱中加入约2 cm 高无水硫酸钠，并放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，并更换新鸡心瓶接收。再每次用2 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 洗涤样液瓶3 次，并将洗涤液移入柱中。在柱上加上50 mL 贮液器， 用25 mL 乙腈+ 甲苯（3+1） 洗脱农药及相关化学品合并于鸡心瓶中，并在40 ℃水浴中旋转浓缩至净干。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，迅速加入1 mL 的乙腈+ 水（3+2）混匀，经0.2 μm 滤膜过滤，供UPLC-MS/MS 分析。
线性关系。选择不含有三唑酮的苹果为果蔬样品代表。准确称取20 g （精确至0.01 g） 未添加三唑酮的苹果匀浆液，准确加入三唑酮的对照品溶液，使样品中三唑酮的质量浓度为1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0， 100.0 ng/mL， 分别对这些溶液进行UPLCMS/MS 分析，记录MRM 图，得峰面积，并对各溶液的峰面积和质量浓度进行线性回归分析，得到线性回归方程和相关系数。
检出限与定量限。检出限与定量限是衡量方法灵敏度的指标之一。将对照品溶液逐级稀释， 分别对这些溶液进行UPLC-MS/MS 分析，记录MRM 图中定量离子的信噪比，以3 倍信噪比计算得出检出限，10 倍信噪比计算得出定量限。
回收率和精密度测定。选择不含有三唑酮的西红柿为果蔬样品代表。按照加样回收法低、中、高3 个水平对空白样品进行加标，每个质量浓度平行3 份，使西红柿样品中三唑酮的添加量为0.125，0.250，0.500 μg/kg，按照1.4 方法进行样品处理。按照色谱- 质谱方法进样，计算每个质量浓度下的回收率，同时计算相对标准偏差。
结果与分析
线性关系。选用三唑酮的溶液质量浓度为1.0-100.0 ng/mL的样品溶液进样分析，以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。得到标准曲线为Y=2 091.3X-778.58，R2=0.999 8。线性关系良好，完全符合方法学要求。
三唑酮的标准工作曲线见图1，三唑酮标准溶液的MRM 见图2。
检出限与定量限。对逐级稀释溶液中三唑酮的质量浓度进行分析，将所得MRM 图中的色谱峰进行信噪比计算。质量浓度为0.5 ng/mL 时，信噪比大于3 倍空白信噪比，得出检出限为0.5 ng/mL。质量浓度为1.0 ng/mL 时，信噪比大于10 倍空白信噪比，得出定量限为1.0 ng/mL。
回收率与精密度。苹果样品中三唑酮的回收率与精密度见表2
苹果样品中回收率为82.8%～94.7%。根据国家标准GB/T 27404—2008 实验室质量控制规范食品理化检测中对检测方法确认的技术要求中，被检测组分浓度含量小于0.1 mg/kg 时，回收率达到60%～120%，即符合方法学的要求。计算各质量浓度下平行3次的试验结果，计算相对标准偏差。
实际样品分析。依照以上的试验方法对市场上出售的几种蔬菜水果进行检测，结果表明，结果表明被检测的几种蔬菜水果中，均未检出三唑酮。
讨论
试验建立了一种快速检测水果蔬菜中三唑酮农药残留的液相色谱-串联质谱法的检测技术， 该方法回收率在84.9%～89.3%之间，完全符合方法学要求。该方法前处理简单，具有灵敏度高、分离效果好、重复性强等特点，适用于短时间内大批量测定蔬菜水果中的三唑酮。
（作者单位：林敏 余婷婷 张莉 刘迪 湖北省食品质量安全监督检验研究院；熊昕 湖北省食品药品监督管理局技术审评核查中心）
液相色谱分析 篇12
1.1 仪器与试剂
仪器:美国沃特世Acquity UPLC I-Class超高效液相色谱仪、配带二极管阵列检测器、电化学工作站等;超纯水系、高速匀浆机、氮吹仪等。
试剂:吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素等农药标准品, 浓度皆为1 000μg/m L;色谱纯CH3OH (德国默克公司) ;18.2 MΩ.cm超纯水。
1.2 标准液配制
储备液:准确吸取吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素标准品溶液各1 m L, 均加甲醇稀释至10m L, 制备浓度中等的标准储备液, 于-18 ℃条件下密封保存。
工作液:取适量储备液, 用CH3OH/H2O (体积比为3∶2) 作溶剂, 分别制取3种不同浓度的标准工作液, 经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶, 上机检测, 做标准曲线, 标准曲线法定量。
1.3 样品处理
提取:准确称量25.0 g已备好的样品, 加入250 m L锥形瓶中, 再加入50.0 m L CH3CN, 高速匀浆处理2 min, 经过滤后加入100 m L具塞量筒之中, 量筒内已提前加入经灼烧处理的氯化钠4 g;用力震荡1 min, 然后静置30 min, 让乙腈与水彻底分离;于上层乙腈层吸取溶液10 m L, 加入150 m L烧杯中, 将烧杯放在80 ℃水浴锅上加热, 杯内缓缓通过空气流, 蒸发近干。加入2.0 m L CH2Cl2/CH3OH (体积比为99∶1) , 使烧杯瓶内残渣再次溶解。
净化:以4 m L CH2Cl2/CH3OH试剂对LC—NH2 SPE小柱进行预淋洗, 将流出液用玻璃刻度试管收集起来, 流速以2 m L/min为宜。以2 m L CH2Cl2/CH3OH试剂对烧杯进行洗涤, 待SPE小柱中的液面上升至柱床表面后, 向其中移入洗涤液, 并重复一次;再将盛有淋洗液的刻度试管置于氮吹仪上, 在水浴温度50 ℃的条件下, 氮吹蒸发至近干, 加入1.5 m L CH3OH, 然后涡旋处理, 加入1 m L水, 再次涡旋处理, 经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶, 留待上机检测。
1.4 色谱条件设定
以CH3OH/H2O为流动相, 流速设为0.2 m L/min;采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱, 规格为2.1mm×50 mm, 1.7 um i.d.;柱温设定25℃;二极管阵列检测器的检测波长设为255 nm;进样量5.0 μL。
1.5 线性关系及检出限
以CH3OH/H2O (体积比为3∶2) 为溶剂制备标准溶液, 浓度分别为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 μg/m L, 上机检测, 作浓度-峰面积标准曲线, 得出校正曲线, 然后按照信噪比S/N=3算出每种农药的检出限。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的优化
以CH3OH/H2O为流动相实施梯度洗脱时, 5种待测组分的分离效果明显, 经多次试验, 得出最佳洗脱梯度, 见表1。经进一步分析比较, 用50 nm及100 nm两种不同规格的色谱柱进行洗脱时, 分离效果未出现明显差异, 但100 nm色谱柱的耗时更长, 且柱压接近50 nm色谱柱的2倍, 从省时、系统安全等角度考虑, 决定选用50 nm色谱柱。在上述优化的基础上, 分别得到标准溶液色谱图以及豇豆、西红柿的加标色谱图。
在CH3OH/H2O流动相中, 甲醇与水的比例随时间而变化。为消除进样时的溶剂效应影响, 防止色谱峰发生漂移、变形等问题, 必须确定甲醇与水的合理比例。经多次尝试, 最终确定标准工作液中甲醇∶水的比例为3∶2时, 待测组分的保留时间相对稳定, 所得色谱峰的形状尖锐而对称;而采用纯甲醇或8∶2等比例时, 出现保留时间漂移、谱带展宽等问题, 其中采用纯甲醇时该问题尤其明显。
2.2 线性关系及检出限
相关性超过0.999, 反映线性关系良好;检出范围为0.01~0.06 mg/kg。
根据国家有关规定, 吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素5种农药在豇豆、西红柿等蔬菜中的残留限量依次为, 1、0.5、1、2、0.05 mg/kg, 本试验方法能够满足上述几种农药的检测需求。
2.3 实际样品分析
抽样调取一批蔬菜样品, 包括白菜、辣椒和菜花等, 通过本方法予以检测, 5种农药均有检出, 说明此类农药在我国农业生产中的使用较为广泛。尽管检测结果并未超出国家规定的残留上限, 但仍然要强化监管, 避免因农药残留超标而引发食品安全事故[1]。
3 结论与讨论
根据5种农药的回收率、变异系数及检出限结果可知, 该检测方法的准确度及精密度均比较高, 且操作容易、检测迅速、易于推广, 能够满足当前社会对蔬菜农药多残留的检测需求。
摘要：通过超高效液相色谱法同时测定蔬菜中吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素的残留量, 确定最佳色谱条件。结果证实, 超高效液相色谱法的准确度高、耗时短, 特别适用于批量蔬菜样品的农药多残留检测。
关键词：超高效液相色谱法,农药多残留,蔬菜检测
参考文献