液相色谱质谱联用法

液相色谱质谱联用法（精选12篇）

液相色谱质谱联用法 篇1

摘要：目的:建立高效液相色谱-电喷雾质谱 (HPLC/ESI/MS) 联用测定银黄颗粒中绿原酸含量。方法:以质谱定性, 高效液相色谱定量进行检测, 检测波长327nm。所用的色谱柱为Spherigel C18色谱柱 (200×4.6 mm, 5m) 流动相为乙腈-0.4%磷酸水。结果:在该色谱条件下, 绿原酸的含量在1.56g/mL25g/mL范围内线性关系良好, 相关系数为:r=0.9992, 加样回收率为99.7%, RSD为2.63% (n=5) , 最低检出限为0.05g/mL。结论:该方法操作简单, 分离度好, 适用于银黄颗粒及其提取物中绿原酸含量的测定。

关键词：高效液相色谱/质谱法 (HPLC/MS) ,绿原酸,银黄颗粒

银黄颗粒是由金银花、黄芩两味药材加工制成的复方制剂, 具有清热、解毒、消炎的功效[1], 主要用于急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、上呼吸道感染等症。金银花 (Flos lonicerae) 为忍冬科 (Caprifoaceae) 忍冬属 (Lonicera) 植物, 是本方的主药之一[2]。金银花的活性成分之一为绿原酸 (结构式如图1) 。绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物, 由奎尼酸和咖啡酸缩合而成, 易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂, 微溶于乙酸乙酯, 难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂, 是一种重要的生理活性物质。绿原酸为抗菌消炎的主要成分, 对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用;有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用;与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关, 还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[3,4]。

银黄颗粒中主药金银花的有效成分绿原酸的含量测定主要采用高效液相色谱法[5,6], 本文采用高效液相色谱/质谱联用法, 对银黄颗粒中绿原酸的含量进行测定。以期提高银黄颗粒质量标准可控性, 为进一步完善该制剂的质量标准提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

液相色谱-质谱联用仪:Waters 2695-Micromass ZQ 2000质谱检测器 (含四元低压泵、自动进样器、单级四极杆质谱检测器、Masslynx工作站、电喷雾电离源ESI) ;KQ 3200 B型超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公司) 。

1.2 材料与试剂

银黄颗粒 (河北省某厂生产) ;绿原酸标准品 (购自中国药品生物制品检定所) ;甲醇, 丙酮, 无水乙醇, 磷酸均为分析醇, 乙腈为色谱纯;二次蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 液相色谱条件

色谱条件:色谱柱Spherigel C18 色谱柱 (200×4.6mm, 5m) (大连江申分离科学科技公司) , 流动相:乙腈-0.4%磷酸水, 梯度程序见表1。检测波长327nm, 进样量10L;流速:1mL/min。

2.2 质谱条件

质谱条件:用电喷雾离子化负离子采集模式 (ESI-) , m/z范围:60～800m/z, 毛细管电压:3.2kV, 锥孔电压:20V, 萃取电压:4V, 射频电压:0.5V, 源温度:102℃, 脱溶剂温度:300℃, 脱溶剂气流速:280L/h;锥孔反吹气流速:60L/h;由DAD流出的溶液经过三通阀分流, 以0.2ml/min进入到MS电离源。

2.3 对照品溶液制备

精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥10h以上的绿原酸对照品2.5mg, 置50ml棕色容量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (绿原酸含量50g/ml) 。

2.4 供试品溶液的制备

用碾钵将银黄颗粒磨成细小粉末, 精确取0.5416g样品, 置50ml棕色容量瓶中, 加50%甲醇适量, 超声提取30min使溶解, 放冷至室温, 加50%甲醇定容至刻度, 摇匀, 滤过, 即得。

2.5 线性范围和检测限

分别取50g/mL绿原酸标准品用甲醇配制成, 12.5g/mL, 6.25g/mL, 3.13g/mL, 1.56g/mL的系列标准品, 过0.45m膜后, 按2.1色谱条件每个浓度的标准品进样3次, 记录峰面积。以浓度为横坐标, 峰面积平均值为纵坐标得到绿原酸的标准曲线方程为:

y=725.42x-268.21, 线性范围:1.56g/mL～25g/mL, 相关系数r=0.9992

将绿原酸标准溶液逐级稀释后, 测得最低检测限为0.05μg/mL (S/N=3) ;最低定量限为0.2μg/mL (S/N=10) 。

2.6 HPLC/ESI/MS分析

绿原酸的分子式为C16H18O9, 相对分子质量为354.30。按2.1色谱条件, 得到了对照品和银黄颗粒样品色谱图 (图2) , 绿原酸的相对保留时间为9.78min左右。图3为选择离子m/z353质谱图。

a.对照品色谱图;b.银黄颗粒样品色谱图

a.绿原酸对照品质谱图;b.银黄颗粒样品质谱图

m/z 353是绿原酸分子失氢后形成的准分子离子[M-H]-, m/z708为二聚物脱氢形成的碎片离子, m/z191为酯键断裂脱去咖啡酰基生成[M-caffeoyl]-碎片离子, 这些推测结果与谱图上所反映的信息基本一致。随着锥孔电压升高, 总离子流响增强, 分子离子峰的强度降低, 当电压升到20V时, 准分子离子峰强度最强。所以在选择离子模式中, 锥孔电压设为20V。

2.7 精密度和回收率试验

取25g/mL绿原酸标准溶液, 按2.1色谱条件连续进样6次, 每次进样10L, 以峰面积计算相对标准偏差, 结果为RSD=1.44% (n=6) 。

取5份已知含量的银黄颗粒样品0.5g左右, 精密称定, 分别加入50g/mL标准品1.00mL, 按样品处理的方法, 以50%甲醇超声提取30min, 过滤, 过膜, 按2.1色谱条件测定峰面积, 计算加样回收率, 得平均回收率为99.7%, RSD为2.63% (n=5) 。

2.8 重复性试验

取银黄颗粒样品0.5g左右6份, 精密称定, 以50%甲醇超声提取30min, 过滤, 过膜, 按2.1色谱条件测定峰面积, 计算各组分绿原酸含量, 结果RSD=2.12% (n=6) , 表明重复性好。

2.9 样品分析

取2.4制备的待测液过0.45m膜后, 按2.1色谱条件进样测定, 平行进样5次, 积分求峰面积, 根据回归方程, 求得到绿原酸的平均含量为5.13mg/g。

2.10 提取条件的选择

分别加入40%、50%、70%甲醇, 50%、70%丙酮, 40%、50%、70%乙醇, 冷水和热水, 分别定容至50mL, 超声30min, 过0.45m膜, 备用进样。不同溶剂提取的绿原酸含量 (见表2) , 由表可知, 40%甲醇的提取效果最好, 而绿原酸在水中的溶解度低, 水提取的效率较低。

比较乙醇与甲醇提取效果, 当乙醇浓度达到70%时, 提取率跟40%甲醇接近。考虑到甲醇的成本和毒性, 实验可以选取70%乙醇进行超声提取。虽然绿原酸易溶于丙酮, 70%丙酮和50%丙酮提取的样品含量与甲醇提取的样品结果相近, 说明丙酮提取方法可行。但由于丙酮的微毒性、直接进样丙酮的溶剂峰干扰较大, 蒸干后再溶解进样操作复杂, 因此不宜使用丙酮作为提取溶剂。

采用上述分析方法, 比较提取时间的影响, 发现30min提取比较完全, 超声40min或45min, 绿原酸的含量反而降低。这是由于绿原酸稳定性差, 超声时间过长, 或超声温度过高, 会引起绿原酸分解, 所以选取超声30min提取银黄颗粒中绿原酸的含量。

3 结论

本文采用高效液相色谱配合质谱的联用, 总结了中成药制剂中绿原酸含量的测定方法, 该方法具有灵敏度高、抗干扰能力、强定性定量准确等特点。同时对提取溶剂的选择进行了研究, 结果发现70%乙醇进行超声提取30min, 与甲醇提取效果相当, 可以节约测试成本。

参考文献

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[5]刘文丽.HPLC法测定银黄颗粒中绿原酸的含量[J].安徽医药, 2007, 11 (8) :711-712.

[6]魏清, 康红英.效液相色谱法测定银黄颗粒中绿原酸的含量[J].时珍国医国药, 2007, 18 (7) :1689-1670.

液相色谱质谱联用法 篇2

摘要：建立了高效液相色谱.电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC-ICP-MS)测定二价汞、甲基汞、乙基汞、苯基汞等4种汞形态的分析方法.该方法采用醋酸铵/L-半胱氨酸缓冲盐及甲醇体系组成的流动相按一定比例进行梯度洗脱,并结合了ICP-MS的.时间分辨采集优化程序.二价汞、甲基汞、乙基汞、苯基汞的检出限分别为0.022,0.022,0.028和0.041 ng・ml-1.对5.0 ng・ml-1的混合标准溶液连续测定6次,4种汞化合物的峰面积相对标准偏差(RSD)分别为1.40%,1.01%,0.97%和2.13%.作 者：张兰 陈玉红 施燕支 王英锋 米健秋 张之旭 ZHANG Lan CHEN Yu-hong Shi Yan-zhi WANG Ying-feng MI Jian-Qiu ZHANG Zhi-Xu 作者单位：张兰,施燕支,王英锋,ZHANG Lan,Shi Yan-zhi,WANG Ying-feng(首都师范大学分析测试中心,北京,100048)

陈玉红,米健秋,张之旭,CHEN Yu-hong,MI Jian-Qiu,ZHANG Zhi-Xu(安捷伦科技(中国)有限公司,北京,100102)

液相色谱质谱联用法 篇3

关键词：三唑酮；气质；假阳性

中图分类号：S-3 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-07-0092-2

三唑酮（triadimefon）别名粉锈宁，无色固体，熔点82-83℃，有特殊芳香味，溶解度水64mg/L(20℃)，中度溶于许多有机溶剂，除脂肪烃类以外，二氯甲烷、甲苯>200，异丙醇50－100，己烷5－10g/L(20℃)，酸性或碱性（pH为1-13）条件下都较稳定，是一种高效、低毒、低残留、持效期长、内吸性强的三唑类杀菌剂。检测工作者都知道在用气相色谱法测定蔬菜中的农药残留时，因为大蒜、蒜薹、韭菜等辛辣类蔬菜的基质中含有杂原子和活性酶，被打碎时这些活性酶促使该蔬菜释放出硫化物而影響对其中农药残留的定性和定量，甚至有时候会造成误判而产生假阳性或假阳性的结果[1]。因此对蔬菜中三唑酮的验证成为关键。为此，本人前处理沿用NY/T761-2008的方法进行提取、净化、定容、然后使用质谱检测器定性。

1 实验部分

1.1 材料与方法

1.1.1 仪器 食品加工机；气质联用仪(Agilent6890N-5973i，美国)；匀浆机（T18，广州仪科实验室技术有限公司）；漩涡混合器（XH-B，姜堰市康健医疗器械厂）；氮吹仪器（TTL-DCⅡ，北京同泰联科技发展有限公司）。

1.1.2 试剂、材料和标准溶液 乙腈（HPLC）；乙酸酐（分析纯）；无水氯化钠（分析纯）；正己烷（HPLC）。滤膜：0.22μm，有机相；100mL带塞玻璃试管，玻璃试管架，100mL具塞量筒，10mL移液器，50mL烧杯，10mL玻璃离心管，离心管架。标准储备液（20μg/mL）：取0.5mL 1000mg/mL三唑酮标准溶液（天津农业部环境保护科研监测所），用正己烷定容于25mL容量瓶中；标准中间液（100μg/L）：吸取0.5mL于100mL容量瓶中，用正己烷定容；标准工作液：以正己烷稀释标准中间液，配制成10、20、40、80、100μg/L的标准工作液。

1.1.3 样品的前处理方法[2] 提取：称取试样25g（精确至0.1g）于100mL带塞玻璃试管中，加入50.0mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤到装有5-7g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min，使乙腈相和水相分层。

净化：从100 mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，放入50mL烧杯中，将烧杯放在 80℃水浴锅上加热，杯中缓缓通入氮气或空气流，蒸发至干，加入2.0mL正己烷。将样液过Florisil柱，Florisil柱事先用1+9的丙酮+正己烷和正己烷5.0mL预处理，再用1+9的丙酮+正己烷洗脱，收集洗脱液，氮吹，用正己烷定容至5.0mL。待测。

1.1.4 色谱条件 色谱柱：Agilent Hp-5MS 30m×0.25mm ×0.25um；进样口温度，200℃；分流进样，分流比10+1；柱温，150℃（保持2min）6℃/min 270℃（保持10min）；载气，氮气，1.0mL/min；检测器，µ-ECD，320℃,尾吹30 mL/min。

液相色谱质谱联用法 篇4

医学研究表明, 它具有分布快, 消除慢的特点, 它能够改变养分的代谢途径, 促进动物肌肉蛋白质的合成, 抑制脂肪的合成和积累, 从而改变胴体的品质, 促进生长速度的加快, 可使胴体瘦肉率提高10%以上。但由于其严重的毒副作用, 欧盟于1988年1月1日起禁止使用此类药物, 美国从1991年禁止使用。1997年, 我国农业部下文, 严禁β-肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用, 并同时加强了监督和检测力度。

目前, β-受体激动剂类检测的仪器分析方法已经比较成熟, 并已被广泛使用, 常用的方法是酶联免疫法[1,2], 气相色谱-质谱法[3], 高效液相色谱法[4], 其他的方法还包括毛细管电泳法[5,6]及电化学分析法[7]。国家标准方法GB/T 22147-2008[8]也采用液相色谱质谱联用法测定了饲料中3种β-受体激动剂, 但样品预处理和上机检测时间长。

本文根据实际情况, 建立了利用液相色谱串联质谱法, 以磷酸甲醇作为提取溶剂, 同时测定饲料中4种β-受体激动剂的方法, 方法最低检出限为1μg·kg-1, 与国家标准方法GB/T 22147-2008要求[8] (检出限10μg·kg-1, 液相色谱分离时间20 min) 相比, 可以更加迅速准确地从动物饲料中检测出β-受体激动剂类化合物。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

沙丁胺醇、特布他林、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺标准品, 德国DR公司;甲醇、乙腈均为色谱纯, 美国飞世尔公司;浓磷酸 (分析纯) ;甲酸 (优级纯) ;氨水 (分析纯) , 广东光华科技股份有限公司;乙酸铵 (分析纯) , 美国霍尼韦尔公司;Oasis固相萃取MCX小柱 (60 mg, 3 cc) , 美国沃特世公司;水为Milli-Q制备的超纯水。

三重四级杆串联质谱仪 (API3200) , 配有电喷雾离子化源 (ESI源) 和Analyst1.4.2数据处理系统, 美国应用生物系统公司;高效液相色谱仪 (Agilent1200) , 美国安捷伦公司;超声波清洗器 (DS-7510 DTH) , 上海生析超声仪器有限公司;离心机 (L535R) 湖南湘仪科学仪器设备有限公司;多功能振荡器 (HY-3) , 江苏金坛市环宇科学仪器厂;分析天平 (BS224S) , 北京赛多利斯仪器系统有限公司;氮气吹干仪 (TTL-DCⅡ型) ;北京同泰联科技发展有限公司。

1.2 标准溶液的配制

1.2.1 标准贮备液

称取沙丁胺醇、特布他林、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺各10 mg分别于100 m L容量瓶中, 用甲醇溶解, 并定容至刻度。于冰箱中4℃保存, 有效期为3个月。

1.2.2 标准工作液

移取沙丁胺醇、特布他林、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺标准贮备液 (1.2.1) 各1 m L于100 m L容量瓶中, 用甲醇定容至刻度。

1.2.3 标准曲线的配制

根据检测要求, 用乙腈-水 (1+9) , 稀释成相应的标准工作液, 以各组分的色谱峰面积对浓度作线性回归, 得定量标准曲线。

1.3 色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18柱 (4.6 mm×150 mm×5.0μm) ;柱温:30℃;进样量:20μL;流速:500μL/min;流动相:A 5 mmol/L乙酸铵水溶液 (含0.1%乙酸) ;B乙腈, 梯度洗脱程序见表1。

1.4 质谱条件

电喷雾离子源, 正离子检测模式, 喷雾电压5000 V, 多反应监测 (MRM) , GAS1:60;GAS2:75;气帘气:15;MRM扫描参数见表2。

*定量碎片离子。

1.5 样品前处理

称取2.00 g粉碎好的饲料样品, 加入25 m L的磷酸甲醇提取液, 振荡15 min, 4000 R/min离心5 min, 上清液倾入50 m L比色管中, 再加入20 m L的磷酸甲醇提取液, 用玻璃棒捣碎残渣, 超声10 min, 振荡5 min, 4000 R/min离心5 min, 合并上清液, 最后用提取液定容至50 m L。

取2 m L液体过柱 (柱子先用2 m L甲醇和2 m L水活化) , 再用2 m L 2%甲酸水溶液和2 m L甲醇淋洗柱子, 压干, 再加入2 m L 5%氨水甲醇洗脱, 收集洗脱液, 50℃水浴吹干, 加入1 m L (1+9) 乙腈+水溶解, 涡旋0.5 min, 过0.22μm水相滤膜后待上机。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的选择

在正离子模式下进行全扫描, 以选择合适的准分子离子峰和电离方式, 同时结合基质空白和基质标准溶液的离子扫描图, 优化锥孔电压, 碰撞能量等仪器参数, 将各监测离子的强度调谐到最大, 从而相应的确定了各待测物在多反应监测模式下信号采集的特征离子对。结果见表2。

2.2 色谱条件的选择

试验选择Agilent Eclipse XDB-C18柱 (4.6 mm×150 mm×5.0μm) 和Hypersil Gold柱 (2.1 mm×150 mm×5.0μm) 为分离柱, 在正离子模式下, 比较了2种色谱柱的分离效果。试验结果表明采用Hypersil Gold柱时, 4种待测物未能完全分开, 且出现前沿峰;采用Agilent Eclipse XDB-C18柱时效果更佳, 4种待测物得到较好的分离。试验采用Agilent Eclipse XDB-C18柱作为分离柱。4种待测物在Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱上的色谱图见图1。

由于电喷雾质谱的电离是溶液状态电离, 因此流动相的组成和配比不但影响目标化合物的色谱行为, 还会影响到目标化合物的离子化效率, 从而影响灵敏度。实验选择乙腈-乙酸铵体系、乙腈-甲酸氨水体系、乙腈-甲酸铵体系作流动相进行测试, 通过比较发现乙腈-甲酸铵体系需调p H值, 且走样时间较长, 乙腈-乙酸铵体系出峰信号响应强度较好, 出峰时间稳定且峰型漂亮 (见图1) 。因此试验选用乙腈-酸铵酸体系作为流动相体系。

同时试验了在不同浓度的乙酸铵溶液中添加一定比例的甲酸或乙酸及梯度洗脱条件对4种待测组分的洗脱分离条件的影响。试验结果表明:选用5 mmol/L乙酸铵水溶液 (含0.1%乙酸) -乙腈溶液作为流动相, 可以达到基线分离, 梯度洗脱后各组分峰形尖锐, 分离良好。

2.3 方法的确认

2.3.1 回归分析、检出限和定量限

在仪器最佳测定条件下, 将沙丁胺醇、特布他林、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的混合标准液稀释成不同浓度的溶液后, 以各组分浓度与其色谱峰面积进行线性回归, 以3倍信噪比 (S/N) 作为其检出限, 10倍信噪比 (S/N) 作为其定量限 (表3和图2~图5) 。

2.3.2 精密度试验

按色谱条件对不同浓度的标准溶液重复进样6次, 测得各标准溶液峰面积的相对标准偏差 (见表4) 。

2.3.3 样品前处理的固相提取方法[8]

因饲料样品本身基质比较复杂, 在进行上机检测前需要一个较长的样品预处理过程。本试验方法选择样品经磷酸甲醇提取, 可以酸化样品, 使碱性的物质呈离子化状态, 提高样品的溶解性。同时为了减少测定干扰, 保护色谱柱, 净化步骤必不可少, 样品在Oasis固相萃取MCX小柱上以阳离子交换的形式保留, 可以提高提取的回收率。

2.3.4 回收率试验

按试验方法加入适量标准溶液制得加标样品溶液, 按色谱条件分别进样测定, 平均回收率见表5。

3 结论

本文提出了饲料中4种β-受体激动剂 (沙丁胺醇、特布他林、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺) 的液相色谱串联质谱测定的方法, 该试验方法可在12 min内完成, 杂质干扰少且峰形较好。进行分析时, 具有较好的线性关系, 重复性好, 且方法的检出限和定量限均能满足国家现行检测分析的要求, 可应用于实际样品分析。

摘要：采用液相色谱-质谱联用技术, 提出了饲料中4种β-受体激动剂同时测定方法。样品经磷酸-甲醇溶剂提取, 过MCX柱净化, 将淋出液蒸发浓缩后用乙腈-水溶液定容。通过Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱分离, 供串联质谱测定。外标法定量。用线性回归分析证明了4种β-受体激动剂的线性关系良好, 相关系数均大于0.99, 回收率在70%-105%之间, 其方法检出限均为1μg·kg-1。

关键词：液相色谱-质谱法,β-受体激动剂,饲料

参考文献

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液相色谱质谱联用法 篇5

高效液相色谱-串联质谱法分离鉴定绿原酸及其相关杂质

建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)分离和鉴定绿原酸及其相关杂质的方法.采用C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×150 mm),乙腈-水(含0.1%甲酸)(体积比为8:92)为流动相,经HPLC-MS/MS和HPLC-二极管阵列检测器在线检测,对工业绿原酸中的奎尼酸、咖啡酸、绿原酸同分异构体等8个相关杂质的结构进行了鉴定.

作 者：田晨煦 徐小平廖丽云 张洁 刘静 周莎 TIAN Chenxu XU Xiaoping LIAO Liyun ZHANG Jie LIU Jing ZHOU Sha  作者单位：田晨煦,徐小平,张洁,刘静,周莎,TIAN Chenxu,XU Xiaoping,ZHANG Jie,LIU Jing,ZHOU Sha(四川大学华西药学院,四川,成都,610041)

廖丽云,LIAO Liyun(成都医学院,四川,成都,610083)

刊 名：色谱  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)： 25(4) 分类号：O658 关键词：高效液相色谱-串联质谱法   绿原酸   相关杂质   鉴别  

液相色谱质谱联用法 篇6

根据相关国家标准，邻苯二甲酸酯类化合物的检测主要应用气相色谱质谱联用仪。Perkinelmer利用先进的Clarus系列气相色谱质谱联用仪，为食品、药品和包装材料中塑化剂的检测提供快速准确的解决方案。Clarus系列气质联用仪具有使用维护方便，快速分析，最宽质量范围，最高灵敏度，稳定性好等优点。其卓越的快速扫描速率最大限度地提高了分析的准确性，同时强大的SIFI（全扫描和选择离子扫描同时采集）又加强了对样品在痕量浓度时的定性能力。

材料与方法

1.仪器

Perkinelmer Clarus系列气相色谱质谱联用仪（见图1）。

2.样品处理和标样配制

参照《GB-T 21911-2008》食品中邻苯二甲酸酯的测定。药品及包装材料的前处理参照食品及其包装材料的国标，用正己烷萃取。饮料和酒类食品的前处理需先超声除气，再用正己烷萃取。

3.气相条件

进样口温度：250℃；进样量：1uL，不分流进样；色谱柱：Perkinelmer Elite-5MS，30mX0.25mmX0.25μm；柱温箱：60℃（保持1min）→以20℃/min，升温到220℃（保持1min）→以5℃/min，升温到280℃（保持8min）；柱流速：1mL/min。

4.质谱条件

传输线温度：280℃；离子源温度：250℃；全扫描：40～450m/z；选择离子扫描：见表1。

结果

在全扫描模式下进行16种化合物的定性以及保留时间的确定。图2为16种塑化剂的总离子流图。

1.检出限

本方法针对16种塑化剂的定量限都可到20ppb。其中DBEP的响应最低，但其20ppb的信噪比也可达到18.05，见图3。

2.线性

浓度范围从20～1000ppb所做的标准曲线（见图4）及相关系数（见表2）。

3.精密度

16种塑化剂100ppb的精密度（n=6）如表3所示。

讨论

液相色谱质谱联用法 篇7

关键词：γ-氨基丁酸,酒类,液相色谱-四极杆串联质谱联用技术

γ-氨基丁酸 (GABA) 是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸, 广泛分布在动植物体中, 是很重要的抑制性神经递质, 可改善脑、肾、肝等器官的生理活性, 还能促进人体内氨基酸代谢的平衡, 调节免疫功能。γ-氨基丁酸在2009年经卫生部批准为一种新资源食品, 能够被应用于饮料、巧克力及其制品、烘烤食品、糖果、可可制品等食品中, 但不用于婴幼儿食品。《国家食品安全标准食品添加剂使用标准 (GB2760-2011) 》将γ-氨基丁酸列入“表B.3允许使用的食品用合成香料名单”, 并规定:食品用香料、香精在各类食品中按生产需要适量使用。因此, γ-氨基丁酸在食品行业得到更广泛的研究和应用。在酒类产品中, γ-氨基丁酸也得到了广泛研究, 酒中添加适当剂量的GABA, 起到镇定、醒酒、促进乙醇代谢、增加饮用者酒量的作用。葡萄酒和果酒中添加适当剂量的GABA, 配制成GABA酒, 可以满足更多消费群体的需求, 如适合女性、中老年人群、白领人士享用的中高档花色果酒中可以添加GABA。

GABA具有对电化学、紫外、可见光不灵敏的特点, 对其测定不能使用直接测定的方法。关于GABA的测定, 近年来国内外有氨基酸分析仪测定[1,2,3]、柱层析荧光测定法、比色法[4]、薄层法[5]、纸电泳法[6]、毛细管电泳法[7]、离子色谱法[8]、高效液相色谱法[9,10]、液质联用法[11]等。但酒基体比较复杂, 一般由生物发酵而成, 干扰较严重。本文探索液相色谱—质谱联用法测定酒类中γ-氨基丁酸含量的方法, 该技术无须衍生化等特殊条件, 精密度和准确度符合要求。

1材料与方法

1.1试验仪器和试剂

试验用液质联用仪:液相色谱四极杆串联质谱 (电喷雾电离源 (ESI) ) 安捷伦6410, 液相色谱系统包括自动进样器。

试验试剂:γ-氨基丁酸标准样品 (含量为99%, SIGMA公司生产) , 甲醇 (色谱纯) 。

1.2仪器分析条件

1.2.1液相色谱条件。流动相组成:0.1%乙酸水溶液+甲醇 (4+6, 体积比) ;流速:200μL/min;注射体积:20μL;柱温:26℃。

1.2.2质谱条件。离子源:电喷雾离子源 (ESI) ;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测 (MRM) ;干燥气温度:350℃;干燥气流速:10 L/min;雾化器压力;275.8 k Pa;毛细管电压:4 000 V。

1.3试验方法

白酒:直接移取1 m L试样过0.22μm滤膜;葡萄酒和果酒:移取5 m L试样冷冻离心 (10 000 r/min, 15 min, 2~4℃) , 取上清液过0.22μm滤膜, 根据其含量直接或稀释液相色谱—质谱/质谱测定。

2结果与分析

2.1γ-氨基丁酸分析条件确定

γ-氨基丁酸化分子量103, 在液质里选择正离子模式, 得到母离子[M+1]为103.9, 在一定碰撞电压和能量下, 失去NH3得到子离子M/Z:86.9, 再失去1个H2O得到子离子M/Z:68.9, 具体碰撞条件见表1, 母离子和子离子在液质中形成见图1, 色谱图见图2。

2.2前处理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量较低, 一般直接过0.22μm滤膜进样测定。葡萄酒和果酒冷冻离心 (10 000 r/min, 15 min2~4℃) , 去除部分酒石酸盐类、单宁、果胶、色素等, 取上清液过0.22μm滤膜, 根据其含量直接或稀释进样。

2.3线性关系和检出限

配制不同浓度梯度的γ-氨基丁酸溶液, 其浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在试验设定条件, 将γ-氨基丁酸的质量浓度 (mg/L) 作为横坐标X, 将γ-氨基丁酸的峰面积作为纵坐标Y进行线性回归, 确定回归方程为Y=177.4X, 回归系数r2=0.999 1, 具有良好的线性关系。当信噪比 (S/N) =3时, 仪器检出限为0.003 mg/L。

2.4方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 m L作为空白基质, 分别添加5 mg/L标液0.08、0.20、0.40 m L共3组, 每组6份, 进行平行试验。按照试验方法进行前处理和仪器分析测定, 计算回收率和精密度试验数据, 结果见表2。

从表2可以看出, 采用该方法能够使回收率达到85%以上, 相对标准偏差RSD小于6%。采用该方法能够获得较高的测量精密度和准确度。

2.5样品测定

依据《国家食品安全标准食品添加剂使用标准 (GB2760-2014) 》, 化学合成的γ-氨基丁酸可作为在食品生产中能够作为香料使用, 但要控制使用量和使用范围。在白酒中, γ-氨基丁酸是按生产需要适量使用。在市场抽取白酒样品近50组, 运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定, 共检出5组样品含有γ-氨基丁酸, 含量为0.1~0.8 mg/L。

3结论

运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定酒类中γ-氨基丁酸, 当浓度在0.01~0.50的范围内, 表现出良好的线性关系。该方法具有前处理方法简单、测定过程快速、灵敏度高、测定结果准确等优点。

参考文献

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[3]李常钰, 王超超, 杨慧萍.发芽糙米中γ-氨基丁酸的富集与测定[J].粮食与饲料工业, 2011 (2) :5-7.

[4]赵大伟, 普晓英, 曾亚文, 等.大麦籽粒γ-氨基丁酸含量的测定分析[J].麦类作物学报, 2009, 29 (1) :69-72.

[5]黄美娥, 彭胜, 陈阳波, 等.南瓜叶中γ-氨基丁酸的提取及薄层扫描测定[J].天然产物研究与开发, 2012 (24) :1284-1287.

[6]汤茶琴, 张定, 陈暄, 等.茶叶中γ-氨基丁酸及谷氨酸的纸电泳测定[J].江苏农业学报, 2007, 23 (2) :135-138.

[7]孔令瑶, 汪云, 曹玉华.毛细管电泳-电化学法对发芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的检测[J].分析测试学报, 2008 (5) :527-530.

[8]李炳坤, 衷明华.离子色谱法测定桑叶中γ-氨基丁酸[J].韩山师范学院学报, 2009, 30 (6) :62-65.

[9]李波, 李磊, 邓旭衡, 等.葡萄酒发酵过程中γ-氨基丁酸含量变化的研究[J].中国酿造, 2011 (7) :171-173.

[10]徐自奥, 张军忠, 赵成仕.HPLC-ELSD法测定食品中γ-氨基丁酸含量[J].化学分析计量, 2012 (5) :49-51.

液相色谱质谱联用法 篇8

现如今食品安全检测的标准, 随着人们生活的提高也变得更为严格, 液相色谱一质谱联用技术依靠强大的分辨率、灵敏度以及定量的精度被广泛运用到了食品的检测领域。而随之科学技术的日益进步, 液相色谱-质谱联用仪器同样在不断推陈出新, 如今与其它检测仪器进行联合使用的情况越来越普遍, 这也极大的拓宽了高效液相色谱技术的应用范围, 并且进一步的提高了液相色谱-质谱联用检测水平, 使之在今后得到更广阔的发展空间[1]。

1 样品前期处理

因为肉制品组织样品构成基础物质其成分非常繁杂, 大多数情况下, 最先通过对肉制品的组织样品利用匀浆机对其实施强力破碎, 直到所需检测样品绝对呈现于提取剂里从而以达到最优质的收集程度。通过合理的溶剂或是缓冲液完成提炼之后, 行离心、过滤处理实现全面净化。再旋转蒸发, 处于氮气中风干后通过原始流动相定容, 最终稀释备用。预防固体分析物其颗粒阻塞进样通道及喷嘴, 预防污染仪器, 减少分析程度, 消灭对分析正确率的干扰。另外, ESI电荷是在其液滴的表层, 其样品和杂质于液滴表层处于竞争状态, 不挥发物阻碍带电液滴物质完成表层自然挥发, 许多杂质阻碍带电样品离子进入气相状态, 增加电荷中和的可能。

2 磺胺类药物与磺胺类药物检测分析

磺胺类药物 (Sulfonamides) 属于能够防治由于细菌所引发患者产生疾病的治疗药物, 磺胺类药物的种类数量庞大, 有数千种之多, 但临床应用最为广泛的只有数十种, 其主要功能便是加强动物免疫力, 提高动物的抗病能力, 也因此, 磺胺类药物常常参与到动物的养殖中来, 也一定程度的导致肉制品中抗生素的泛滥, 最终对人们的健康造成巨大的威胁。而液相色谱一质谱联用技术能够准确的测定肉制品中抗生素的残留。当前, 磺胺类药物 (chloramphenicol) 分析测定的办法主要有, 酶联免疫技术、气相色谱-电子捕获检测技术、液相色谱技术以及液相色谱一质谱联用技术。常规情况下, 酶联免疫技术的运用范围主要包括大规模筛选, 在进行大规模肉制品检测应运中比较常见, 但是所检测出的氯霉素范围仅仅只有每千克10μg, 相较于国际标准每千克0.3μg仍然存在极大的差距。并且, 由于酶联免疫技术存在显著的特异性, 无法完成多残留肉制品的检测工作, 而且使用试剂比较昂贵, 容易发生假性阳性结果。液相色谱一质谱联用技术能够利用第一层面的质谱择取母离子, 通过多离子监控测定特异技术, 最大程度地避免干扰, 在减小噪音的同时, 加强了仪器的灵敏效果, 是当前检测氯霉素类药物残留的不二选择[2]。

3 肾上腺素受体激动药物检测分析

根据相关研究表明, 肾上腺素受体激动药物 (adrenoceptor) 可以有效的推动动物身体中的蛋白质完成沉积, 从而抑制体内脂肪沉积。故而, 有许多不法养殖户会利用其药物当作动物饲料中的“营养品”, 进一步提升肉制品中的瘦肉率。但是, 动物往往在食用了含有肾上腺素受体激动药物之后, 往往会导致动物的肌肉组织即瘦肉部分, 拥有一定程度的药物残留, 让消费者食用之后发生中毒。故而, 当前已经有许多国家开始严禁在动物饲料中添加此类药物。在对动物组织身上的肾上腺素受体激动药物进行检测的方法主要包括了高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography) 、气液色谱法 (chromatography) 以及液相色谱-质谱联用法 (liquid Chromatograph Mass Spectrometer) 。通过相关分析测定, 液相色谱一质谱联用技术能够准确检测出肉制品肝脏以及尿液中所存在的克伦特罗 (瘦肉精) , 相较于国际标准每千克0.3μg, 其检测效果小于每千克0.1μg, 符合国际测定标准。

4 肉制品中氨基酸的检测分析

众所周知, 氨基酸是无数生物体赖以生存和生长最为重要的组成物质, 而酶与蛋白质正是氨基酸的主要成分构成。由于这两种物质成分具有易变性的特点, 在检测的过程中可以采用液相色谱-质谱联用法利用C18反相色谱柱进行对两种物质的分离完成试样[3]。详情见图1。通过液相色谱-质谱联用法测定氨基酸的物质组成含量, 研究证明此种方法不仅操作便捷、重现性好, 而且在进行色谱之时无论是分离时间以及分离程度都比传统的检测技术效果更好。在运用中, 液相色谱-质谱联用法术完美的体现了对氨基酸参数提取精确, 分辨速度快的优势。

5 结论

液相色谱一质谱联用技术当前仍然处在检测技术中的发展初始阶段, 其应用才刚刚起步。但液相色谱一质谱联用技术所拥有的诸多特异优势也其在检测应用方面具备比其它检测技术更为广阔的发展空间。由于低温肉制品所存在的药物残留属于多元性, 故而在实施检测中所涉及的化合物种类也十分庞大, 并且其性质差异极大, 这在一定程度上也会对分离及检测起到一定影响。

参考文献

[1]苏翠红, 李笑天.液相色谱和质谱联用技术及其在代谢组学中的应用[J].中华妇幼临床医学杂志, 2010 (1) :62-64.

[2]石先哲, 何智慧, 窦阿波, 等.基于液相色谱-质谱联用技术的代谢组学方法研究薄荷烟对大鼠代谢的影响[J].色谱, 2010 (8) :765-768.

液相色谱质谱联用法 篇9

1 资料与方法

1.1 仪器、试剂与材料

仪器:美国AB公司ABI4000 Q TRAP三级四级杆质谱仪, 配有电喷雾离子源 (ESI) ;美国Agilent公司1100液相色谱系统。美国Waters固相萃取仪, ZORBAX XDB-C18柱 (3ml/60mg) 。

试剂:乙酸铵 (色谱纯, 美国Dima-Tech公司;乙腈 (色谱纯, 美国Fisher Sci-entitle公司) ;实验用水为Milli-Q1级超纯水。大黄酚 (chrysophanol, 纯度大于97.5%) 、大黄素甲醚 (physcion, 纯度大于98%) 、大黄酸 (rhein, 纯度大于98%) 、大黄素 (emodin, 纯度大于97%) 、芦荟大黄素 (aloe-emodin, 纯度大于97%) 及虎杖苷 (polydatin, 纯度大于98%) 对照品由中国药品生物制品检定所购得。

材料:虎杖药材购于武汉雄楚大道药材市场, 经鉴定为蓼科植物虎杖的干燥根。

1.2 样品制备

取虎杖药材粉末1.0g (过60目筛) , 置于具塞三角瓶中, 加入50 ml甲醇, 称重。置于超声振荡器中提取30 min, 取出后放置至室温, 称重。补充甲醇至原重量, 混匀, 过0.22 m微孔滤膜, 得到虎杖药材供试液。称取对照品各10mg, 分别用甲醇定容到10mL, 配成质量浓度为1g/L的储备液;取25uL储备液, 用甲醇定容到25mL, 配制成质量浓度为1mg/L的供试溶液。

1.3 色谱-质谱联用

色谱条件:色谱柱为ZORBAX XDB-C18柱 (50mm~2.1mm, 3.5um) 。流动相为 (甲醇) :V (纯水) =88:12, 流量为200u L/min。进样量为5ul。

质谱条件:电喷雾ESI离子源;气帘气为45psi;雾化气 (GAS1) 为45psi;加热辅助气 (GAS2) 为55psi;碰撞气CAD为Medium;喷雾电压IS为-4500V;雾化温度为500℃;检测方式为负离子多离子反应检测 (MRM) , PCP用于定性分析的离子对为m/z264.9/37.2和m/z264.9/35.2, 其中m/z264.9/37.2为定量分析的离子。

2 结果

对虎杖药材进行正、负离子模式分析。由于蒽醌苷元在负离子模式下具有较好的质谱响应, 因此, 着重分析负离子模式结果, 将正离子模式结果作为成分鉴别的辅助依据。对每个谱峰的多级碎片进行解析, 对比对照品的裂解规律, 综合紫外 (UV) 数据、保留时间及参考文献, 共鉴别了12个化学成分, 分别为:大黄素、fallaeinol、大黄素-8-甲醚、大黄素-6-甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、2-甲氧基-6-乙酰基-7甲基胡桃醌、白藜芦醇、白藜芦醇苷、β-谷甾醇、香豆素、齐墩果酸、2-乙氧基-8-乙酰基-1, 4-奈醌。

3 讨论

虎杖植物的化学成分研究已较为深入, 迄今已从中分离得到的化学成分主要有:蒽醌类、二苯乙烯类、萘醌类、黄酮类等。其中蒽醌类化合物主要有大黄素, 大黄素甲醚, 大黄酚及蒽甙等.大黄素有较广泛的生物活性.对人肺癌细胞分裂有明显抑制作用;对金黄色葡萄球菌, 大肠杆菌, 福氏痢疾杆菌均有抑制作用, 且不产生耐药性;对血管平滑肌细胞增生有抑制作用大黄素可抑制肾小球系膜细胞增殖, 抑制系膜细胞自分泌或旁分泌白细胞介素-1, 白细胞介素-6, 肿瘤坏死因子等带来的肾小球局部炎症效应。大黄素对正常小鼠免疫系统有不同程度的抑制作用, 如减轻免疫器官的重量, 并减少抗体的产生, 抑制碳粒廓清功能和腹腔巨噬细胞吞噬功能, 降低白细胞数;对cc14损伤的原代培养大鼠肝细胞有显著保护作用, 对ACT、AST和MDA水平升高有显著的抑制作用, 并显著改善损伤肝细胞的增殖;对大鼠肝纤维化具治疗作用。

虎杖在我国的分布生长很广泛, 不同产地的虎杖药材品质也各不相同, 造成了目前市场上虎杖药材质量不稳定, 影响到虎杖药材及制剂的生产和临床使用。近年来对虎杖质量鉴别的方法主要集中在高效液相色谱, 虽然方法分析精度较高, 但是分析过程复杂, 速度较慢[2,3]。如果能将超高效液相色谱与串联四极杆质谱联用, 则可以充分发挥超高效液相色谱的高速、高分离度与串联质谱的高选择性、高灵敏度的优势, 采用多反应监测扫描方式可提供特征的母离子及其子离子信息, 为目标化合物的定性与定量分析提供了可靠依据。通过本文的工作, 我们认为高效液相色谱──质谱联用技术用于中药虎杖成分分析, 具有快速、简便、准确、灵敏、特异的优点, 值得在药物分析研究中应用和推广。

摘要：目的 探讨高效液相色谱──质谱联用技术在中药虎杖成分分析中的应用效果。方法 选用ZORBAX XDB-C18柱为分析柱, 流动相为V (甲醇) :V (纯水) =88:12, 流量为200uL/min;质谱条件选用气动辅助电喷雾离子源 (ESI) , 检测方式为负离子多离子反应检测 (MRM) ;PCP标准曲线线形范围为0.1-100ug/L。结果 对每个谱峰的多级碎片进行解析, 对比对照品的裂解规律, 综合紫外 (UV) 数据、保留时间及参考文献, 共鉴别出了中药虎杖中的10个化学成分。结论 高效液相色谱──质谱联用技术用于中药虎杖成分分析, 具有快速、简便、准确、灵敏、特异的优点, 值得在药物分析研究中应用和推广。

关键词：高效液相色谱,质谱,虎杖,成分分析

参考文献

[1]么春艳, 刘文哲.虎杖营养器官蒽醌类化合物含量的季节变化[J].西北植物学报.2005, 18 (3) :198.

[2]倪网东, 满瑞林, 李志明, 卢红梅.紫外分光光度法同时测定虎杖中芪类和蒽醌类化合物[J].化学工程师.2006, 11 (10) :70.

液相色谱质谱联用法 篇10

关键词：液质联用仪,蔬菜水果,赤霉素,残留

赤霉素是一种广谱性植物生长调节剂,几乎在植物生长、发育的各个阶段都起着调节作用,尤其对蔬菜水果等有着显著的增产效果。赤霉素可能干扰人体正常的内分泌系统,长期食用会在人体中蓄积,造成器官的慢性中毒,并可能引起癌变,严重危及消费者的身心健康,美国、日本等规定水果和蔬菜中赤霉素最高残留限量为0.2 mg/kg。目前,国内外采用的检测赤霉素残留的方法主要有HPLC法、GC法、GC-MS及免疫分析法等。我国赤霉素残留分析一般采用薄层分离-荧光检测技术,样品前处理常用液液萃取、柱层层析法,这些方法操作繁琐,且需使用大量有机溶剂。本方法用高效液相色谱-串联质谱,可同时测定和确证水果和蔬菜中赤霉素,具有前处理简单、灵敏度高、测定周期短等优点。

1 材料与方法

1.1 实验仪器

Agilent6410型串联四极杆质谱,配Agilent1200型液相色谱仪。

1.2 试剂与样品

甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯试剂;赤霉素(北京拜尔迪生物公司)。样品购自本地超市。

1.3 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-Aq柱:3.5μm,2.1mm×15.0mm;流速:0.25m L/min;柱温:30℃;进样量:25μL;流动相:甲醇:0.1%甲酸水溶液=40∶60(体积比)。

1.4 质谱条件

离子源:电喷雾离子源(ESI);扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测(MRM);喷雾压力:275.8kpa;干燥气流速:8 m L/min;离子化温度:340℃;定性离子对、定量离子对、碎裂电压及碰撞能量见表1。

1.5 样品处理

称取5g试样,精确到0.01g,置于25m L具塞玻璃离心管中,用50%乙睛水溶液(pH值2.5)定容至刻度,于液体混匀器上快速混合1min,超声30min后过滤(若样品提取液颜色深,可用10mL石油醚脱色3次)。用0.20μm滤膜将样液过滤,进样25μL进行质谱分析。

2 结果与讨论

2.1 质谱条件的优化

首先采用100ng/mL的赤霉素标准溶液在正离子模式下进行母离子全扫描,确定赤霉素的分子离子为m/z363.9。试验不同参数如碎裂电压、碰撞电压对检测的影响。结果表明,碎裂电压通常在30~80V内对赤霉素母离子检测响应的影响较大,质谱峰面积随碎裂电压的增加而增大,在超过80V时峰面积逐步减小,因为赤霉素母离子不稳定,在此电压就已经开始分解,因此选取碎裂电压80V。碰撞电压主要控制赤霉素前体离子的断裂,给出碎片离子。在碰撞电压5~10eV之间,m/z329.2和m/z239.1碎片离子的强度比较大,因此选择这个离子作为定量检测离子(图1)。碰撞电压等于5eV时,m/z329.2和m/z239.1碎片离子的强度最大,因此碰撞电压选择5eV为宜。

2.2 色谱条件的优化

赤霉素属于中等极性化合物,而且存在严重脱尾现象,为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善,本方法分别采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱、ZORBAX Eclipse SB-C18和ZORBAX SB-Aq柱进行分离试验,发现ZORBAX SB-Aq柱采用1‰甲酸水溶液-甲醇为流动相(60∶40),流速0.25m L/min,在10min内,可以较好的分离样品中赤霉素。图2为加标样品总子离子图,可以看出赤霉素得到较好的分离。

2.3 样品提取方法的选择

赤霉素在pH值2.5的酸性溶液中稳定,此外,50%乙睛水溶液有沉淀蛋白的作用,因此用50%乙睛水溶液(pH值2.5)超声提取样品,利用串联四极杆质谱的高选择性、高灵敏性进行直接测定。本研究具有操作简单、测定周期短等优点,试验结果表明该处理使水果蔬菜中的赤霉素有较高的稳定性和满意的提取效率。

2.4 线性范围与检出限

将逐级稀释的标准工作液分别进样10μL,测定结果经线性回归,线性范围:2.0~10.0μg/L。回归方程y=148922.14x-9996.77(y为峰面积,Counts;x为浓度,μg/L);线性相关系数:0.999 1。进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结果计算,测得方法检出限为2.0μg/L,按测定方法计算,本方法最低检出量为10.0μg/kg。

2.5 方法的回收率和精密度

准确称取同一空白样品4份,每份5.0g,分别加入定量为0.5μg、2.0μg的赤霉素标准样品,按供试样品制备方法制备后,进行测定,结果见表2。可以看出,平均加标回收率为96.7%,平均相对标准偏差为4.07%(n=8)。同时将浓度为10 ng/m L的标准样品重复测定5次,取平均值计算精密度,测得变异系数3.87%(n=6)。

3 结论

本文建立了水果和蔬菜中赤霉素的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法,该法具有样品处理简单、测定周期短等优点,适用于大量样品的快速筛选、测定。

参考文献

[1]葛雅琨,张元新,胡睿,等.蔬菜中赤霉素残留量的高效液相色谱检测方法研究[J].吉林化工学院学报,2005,22(2):13-16.

[2]肖志壮,杨加华,邢红宏,等.赤霉素的分光光度法测定[J].烟台大学学报(自然科学与工程版),1997,10(4):266-268.

液相色谱质谱联用法 篇11

关键词：单氰胺 葡萄 柱前衍生化 高效液相色谱串联质谱

中图分类号：O657文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）08-0061-02

单氰胺化学名称为氨基氰，是良好的植物生长调节剂、杀菌剂、杀虫剂、脱叶剂，可以打破葡萄类和落叶类水果的休眠期[1]，从而促使它们提前开花、结果和成熟，单氰胺在农业生产中的应用十分广泛[2]。单氰胺在水果作物中的广泛应用，导致其可能残留在水果中，单氰胺对人类健康有许多潜在的危害，GB 2763-2014食品安全国家标准食品中农药最大残留限量中规定了葡萄中的最大残留限量为0.05mg/kg，因此迫切需要葡萄中单氰胺的痕量检测方法。

单氰胺分子量小、极性大、易挥发的特点，给单氰胺的检测带来了极大的困难。目前单氰胺的检测还没有国家标准和行业标准，关于单氰胺残留检测方法的报道也很少[3]。本文首次建立了柱前衍生液相色谱-串联质谱法测定葡萄中单氰胺残留量的检测方法，其灵敏度和精密度满足残留分析的要求，为评价葡萄的食用安全性提供了检测依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

单氰胺标准品（98%，上海安谱科学仪器有限公司）；甲醇、丙酮、甲酸（均为色谱纯）；碳酸钠、碳酸氢钠、丹磺酰氯（均为优级纯）；超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪（Waters I-Class液相- XEVO TQ质谱）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；离心机（CTK80，湘仪离心机仪器有限公司）；

1.2 仪器条件

1.2.1 液相色谱条件

色谱柱：Waters UPLC BEH C18（50mm×2.1mm，1.7μm）；色谱柱温度：40℃；流动相A：0.1%甲酸/水；流动相B：甲醇；流速：0.3mL/min；进样量：5μL。

1.2.2 质谱条件

电喷雾正离子（ESI+）；母离子：276.2；定量离子：156.2；定性离子：171.2；锥孔电压：32V；定量、定性离子的碰撞能量分别为30、20eV。

1.3 标样溶液的配制

精确称取单氰胺标准品0.01g（精确至0.00001g），用水溶解并定容至100mL，制得100μg/mL标样溶液，备用。临用前根据需要用50%甲醇/水稀释成不同浓度的标样工作液。

1.4 样品预处理

准确称取5.00g已粉碎均匀的葡萄样品于50mL的离心管中，加入25mL甲醇，均质2min，10mL甲醇分两次清洗均质棒，5000r/min离心5min，上清液转移到 50mL的容量瓶中，并用甲醇定容到50mL，混匀，从容量瓶中准确吸取5mL至10mL的具塞刻度试管中，加入2mL 0.1M碳酸钠、碳酸氢钠混合溶液，1mL1%丹磺酰氯丙酮溶液，混匀后50℃水浴振荡反应1小时，冷却至室温，用甲醇定容到10mL，混合均匀后用0.22μm的滤膜过滤，待测。

2 结果与分析

2.1 前处理条件的确定

2.1.1衍生化条件的确认

由于单氰胺分子量小、极性大、易挥发的特点，导致单氰胺无法直接测定，因此必须进行衍生化反应后才能进行检测，本次实验尝试采用可以和伯胺进行反应的丹磺酰氯作为衍生化试剂，反应产物经LCMSMS分析测定。

2.1.2 净化条件的确定

单氰胺结构中含有氨基，属于碱性化合物，而且极性较强，于是考虑采用MCX、C18、Carb固相萃取小柱进行净化，结果显示MCX小柱回收率较低，保留作用较弱，而C18和Carb固相萃取小柱净化效果较差，考虑效率和成本，采用稀释后直接衍生化反应，由于LCMSMS仪器灵敏度好，采取样品稀释20倍后上机测定，回收率较好，而且完全满足限量值的要求。

2.2 仪器条件的确定

2.2.1 质谱条件的优化

衍生质量浓度为0.5mg/L的单氰胺的标准溶液，衍生产物分子量为275，质谱通过针泵连续进样，采用MS SCAN方式进行扫描，调节锥孔电压，得到较强的[M+H]峰母离子276.2，对选定的母离子进行子离子扫描，调节碰撞能量，得到丰度较好的2個子离子，分别为156.2、171.2，根据MRM的色谱峰形及灵敏度，确定156.2为定量离子，171.2为定性离子。

2.2.2 液相条件的优化

单氰胺衍生后的化合物，极性减弱，可以采用反相色谱柱C18进行分离。流动相采用甲醇和0.1%甲酸/水，梯度洗脱，调整使保留时间适中且基质影响小，最终确定梯度洗脱程序。

2.3 校准曲线及最低检测限

衍生单氰胺浓度为0.0002、0.001、0.005、0.02、 0.1mg/L的系列标准溶液，以衍生产物的峰面积、质量浓度为纵、横坐标，绘制标准曲线，表明在0.0002～ 0.1mg/L浓度范围内，线性关系良好（r2=0.9997），可以做定量分析。

对阴性葡萄样品添加0.02mg/kg的浓度水平，信噪比S/N为18.5，所以最低定量检测浓度定为0.02mg/kg。

2.4 回收率与精密度

在葡萄的空白试样中添加0.02、0.04、0.1mg/kg三个浓度水平的单氰胺标准溶液，分别进行5次平行测定，从结果看出单氰胺的平均回收率在78%～95%，相对标准偏差为2.9%～5.2%。

2.5 实际样品的检测

按照本方法，分别检测了三种不同产地的葡萄样品中单氰胺的残留，结果表明葡萄中的单氰胺未检出（<0.02mg/kg）。

3结语

本文建立了柱前衍生化液相色谱串联质谱法测定葡萄中单氰胺残留量的分析方法，速度快，准确度高，灵敏度好，适用于单氰胺的安全性评价。

液相色谱质谱联用法 篇12

As形态分析较多采用液相色谱分离(HPLC)与原子荧光光谱(AFS)以及石墨炉原子吸收光谱(GFAAS)等联用技术[8],但原子荧光光谱(AFS)分析实际样品时有干扰效应,同时样品基体产生的光散射和背景也会影响结果的读取,并且将HPLC直接与GFAAS连接极为困难[1,9]。HPLC与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用,使HPLC的高分离能力与ICP-MS在元素分析中极高的灵敏度有效结合,成为元素形态分析最为有效的途径。近年来HPLC与ICP-MS联用技术在水及水产品中得到应用,由于该技术具有灵敏度高、线性范围宽等优点受到青睐[10,11]。在前处理方式上GARCIA等[12]、UTE和ECKARD[15]采用了微波消解法的提取方法,但是由于微波消解每次处理的样品量较少限制了测定的效率。笔者研究旨在通过优化前处理方法以提高测定效率,摸索HPLC-ICP-MS的检测条件,建立海产品中As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、MMA、DMA和AsB等5种形态As的HPLC-ICP-MS检测方法并在海产品样品中应用,同时测定样品中总As的质量分数用于比较方法的适用性。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电感耦合等离子体质谱仪(美国Varian 820型);高效液相自动进样系统(美国Varian prostar 410型);阴离子交换色谱柱(瑞士Hamilton PRP-X100,4.1 mm×250 mm,10 μm);超纯水处理系统(美国Millipore MilliQ);分析天平(德国Sartorius CP124S,感量0.000 1g);水浴摇床(美国Boekel-Grant ORS200);离心机(德国Eppendorf 5810);搅拌捣磨仪(德国Retsch GM200);冷冻干燥机(美国Labconco FreeZone Triad);冰箱(美国Westinghouse公司出品)。

1.2 试剂

As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、MMA、DMA和AsB的纯度≥99%(英国Whatman公司出品)。碳酸铵[碳酸氢铵(NH4HCO3)+氨基甲酸铵(NH2COONH4)](分析纯,澳大利亚Chem-Supply公司出品);甲醇(优级纯,美国Merck公司出品);超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm);质谱调谐液[铍(Be)、镁(Mg)、钴(Co)、铟(In)、钡(Ba)、钛(Ti)、铈(Ce)、铅(Pb)和钍(Th)质量浓度为5 μg·L-1,澳大利亚ACR公司出品]。

2 分析方法

2.1 样品制备与前处理

将鱼取其肌肉组织、虾去头去壳、海苔去除根部等不可食用部分,用搅拌捣磨仪捣碎,称量搅匀的样品约30 g到50 mL离心管中,加少量水摇匀,倾斜放入-10 ℃冰箱冷冻12 h,转移至冷冻干燥机冻干48 h,冻干至含水量在5%左右后取出研磨均匀,称取约0.1 g样品于50 mL离心管中,准确记录质量,加入20 mL V(甲醇)∶V(水)=3∶1溶液,摇匀后放入70 ℃水浴摇床,120次·min-1频度振摇30 min取出,3 500 r·min-1离心6 min,取上清液到50 mL刻度管中,向样品中加入10 mL V(甲醇)∶V(水)=1∶1溶液,按照第一次的提取条件振摇、离心后取上清液,重复1次,合并上清液,用超纯水定容至50 mL,过0.45 μm滤膜到进样瓶中,用HPLC-ICP-MS分析5种形态As质量分数。

2.2 上机测定

色谱柱为Hamilton PRP-X100阴离子交换色谱柱(4.1 mm×250 mm,10 μm);流动相为20 mmol·L-1 NH4HCO3+NH2COONH4;流速1 mL·min-1;柱温为室温;进样体积10 μL,运行20 min。ICP-MS的工作参数见表1。

3 结果与讨论

3.1 前处理方法的选择

吕超等[7]和郝春莉等[16]比较了水、10%盐酸、10%硝酸、10%磷酸、V(水)∶V(乙酸)=19∶1溶液和V(甲醇)∶V(水)=1∶1溶液6种体系对5种As形态的提取效果,结果表明,用甲醇+水溶液对5种形态As的提取可不改变海产品中原有的As形态,但用甲醇+水的提取率偏高,提取后再蒸发浓缩会导致As形态的转变和损失,使回收率偏低。冷冻干燥不会造成样品中As形态的变化和损失[14],笔者在提取前进行冷冻干燥,避免了提取后提取液的浓度过低需要蒸发浓缩的繁琐和每次蒸发浓缩数量的限制,提高了检测效率又不会造成As形态的变化或损失,先用V(甲醇)∶V(水)=3∶1溶液提取1次,再用V(甲醇)∶V(水)=1∶1溶液提取2次,能够达到较理想的回收率。报道较多的As形态提取方法为微波萃取法和超声波提取法,但微波萃取和超声提取操作繁琐,且受每次处理样品较少的限制。笔者研究比较了第一次提取采用70 ℃水浴摇床120次·min-1振摇30 min、Hotblock 70 ℃加热30 min、震荡30 min和振摇2 min 4种方式,分别对1个海苔样品和1个鱼样品中的As形态进行测定,并同时测定样品中的总As质量分数,海苔[脐形紫菜(Porphyra umbilicalis)]中总As质量分数为556.1 μg·kg-1(干质量),剑鱼(Ziphias gladius)的总As质量分数为1 069.0 μg·kg-1(干质量)。结果表明水浴摇床振摇30 min的提取效率最高(表2),研究最终确定70 ℃水浴摇床振摇30 min作为提取的条件。

3.2 色谱分离条件的选择

同样用阴离子交换色谱柱进行形态分离时,Van JOHANNES和ŠLEJKOVEC[17]与DAGNAC等[18]用15 mmol·L-1的磷酸二氢钾(KH2PO4)调整pH为6.1做流动相对不同形态As进行洗脱,KATHRYN和KAREN[19]、张普敦等[20]用30 mmol·L-1碳酸铵-碳酸氢铵[(NH4)2CO3-NH4HCO3]的流动相调整pH为9进行洗脱,pH对洗脱效果的影响比较大,需调整pH以达到良好的洗脱效果。笔者研究选取10 mmol·L-1、20 mmol·L-1和30 mmol·L-1的NH4HCO3+NH2COONH4调整pH到9.0作为流动相,用20 mmol·L-1流动相分离效果最好,30 mmol·L-1的流动相虽然耗时较短,但是不能分离第二和第三个峰,用10 mmol·L-1和20 mmol·L-1流动相分离效果差别不大,但最后一个峰在20 min还不能够检出,导致检测耗时过长,故选择20 mmol·L-1的NH4HCO3+NH2COONH4作为流动相(图1)。20 mmol·L-1 NH4HCO3+NH2COONH4本身pH约为8.86,能够达到良好的分离效果,同时又减少了调整pH的过程,As形态分离效果见图2,故选择20 mmol·L-1 NH4HCO3+NH2COONH4作为流动相且不用调整pH,减少了流动相的准备过程。

3.3 方法线性范围与检出限

将5种形态As标准储备液稀释成0.5 μg·L-1、1 μg·L-1、5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1和200 μg·L-1的砷化合物混合标准溶液,在确立的试验条件下进行分析,得出5种砷化物的质量浓度(x)与峰面积(y)的线性关系,R≥0.999 5,按照信噪比(S/N)=3,得出5种砷化物的检出限LOD为0.057～0.13 μg·L-1,海产品干样中的砷化物定量限LOQ(S/N=10)为0.19～0.43 μg·kg-1(表3)。

3.4 方法的准确度和精密度

选择1个鱼样品进行不同质量浓度水平的加标回收试验,用确定的方法进行提取测定,计算加标回收率和相对标准偏差(RSD)。AsB、As(Ⅲ)、DMA、MMA和As(Ⅴ)的平均添加回收率分别为97.4%～103.0%,89.9%～99.5%,89.3%～94.2%,97.2%～104.0%和93.6%～98.4%,相对标准偏差均小于10%(表4)。

3.5 海产品中5种As形态分析

为了检验方法的适用性,笔者使用确立的方法对斑节对虾(Penaeus monodon)、金枪鱼(Thunnus albacares)、澳洲肺鱼(Lates calcarifer)、速食海苔(Porphyra umbilicalis)4种海产品中的5种形态As进行分析,同时用酸解消化法消解后ICP-MS[21]测定了总As的质量分数,测定结果见表5。4种海产品中的As总量为916.0～68 790.0 μg·kg-1,差异较大,虾和鱼中的As以AsB为主,占As总量的99%以上,海苔中以AsB和DMA为主。所测样品中As含量虽然较高,但是主要以无毒的AsB和极小毒性的DMA为主,故不能用总As来判定样品对人体危害的大小。测定水产品不同形态的As含量对更加科学地判定海产品中的As毒性尤为重要。每个样品的5种形态As测定结果的加权值除以总As的测定结果,得到总提取效率。结果表明总提取率达到了90%以上,说明该方法适用性较强。

注:

4 结论