化学发光免疫

化学发光免疫（共13篇）

化学发光免疫 篇1

化学发光免疫分析仪

我只听说在研究分子表面蛋白质时会用到，最近还有一个华裔科学家因为发光蛋白得了诺贝尔奖的。

具体的应用有：

细胞检测中的应用

脂质过氧化物检测的应用（自由基、活性氧分析）

生物传感器的研究应用

分子生物学研究的应用

卫生学检测中的应用

环境检测应用

药物筛选

医学应用

应用化学发光免疫分析法可用于对甲状腺素类、肿瘤标记物、生殖-孕激素类、血清抗原抗体类、心脏指示类等项目检测。

Abbott：Architect i1000/i2000/i4000 SR

AxSYM、AxSYM PLUS

Siemens：（原Bayer）ADVIA Centaur CP、ADVIA CentaurXP

（原DPC）IMMULITE 2000

Beckman Coulter：ACCESS/ACCESS II

DiaSorin：LIAISON

Ortho Clinical Diagnostics：VITROS ECi Immunodiagnostic System

Roche（ECLIA）：Elecsys2010、Cobas E

威海威高生物：全自动AutolumiS2000

深圳新产业生物：MAGLUMI 2000 Plus

上海蓝怡：全自动免疫发光系统AIA-2000

郑州安图生物：AutoLumo A2000

市场占有率具体数据不能给，在化学发光免疫产品中Roche最大，Abbott与Siemens差不多并列排二，

化学发光免疫 篇2

1 化学发光免疫分析方法类别

1.1 化学发光免疫分析

化学发光免疫分析方法主要是由化学发光剂, 对抗原或者抗体进行直接标记的免疫测定方法之一。当前比较常见的化学发光免疫分析方法主要有吖啶酯类化学发光剂和鲁米诺类化学发光剂。一般情况下, 吖啶酯以及吖啶磺酰胺类的化合物均属于化学发光免疫分析方法, 能够在加入适量的CTAC后, 大大的增强发光效果。其次, 鲁米诺类物质的发光原理主要为氧化发光。含有鲁米诺类物质的碱性溶液, 能够在催化剂的辅助下实现基态, 进而发出光子。

1.2 化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分析主要采用没进行生物活性物质的标记, 以此判断其免疫反应。出现免疫反应后, 复合物上的酶便会再次对发光底物产生作用, 利用信号试剂等进行发光。当前, 化学发光酶免疫分析当中比较常见的标记酶应该为碱性磷酸酶, 以及辣根过氧化物酶。其中, 碱性磷酸酶主要在酶联免疫分析、核酸杂交分析当中得到了广泛的应用。具有反应速度较快, 分析时间较短, 结果较为正确可靠等优点。而辣根过氧化物酶主要将鲁米诺及其相应的衍生物作为主要的发光底物, 在使用过氧化酶的情况下, 对抗体进行标记。在此基础桑, 通过过氧化酶将发光试剂启动, 将能够起到一定的发光标记作用。金茂俊等 (2012) 在其研究中认为, 该种方法比较传统, 发光强度比较低, 且测量不便。但是, 在长时间的研究下, 已经能够长时间的保证发光新高增强, 分析灵敏且准确[1]。

1.3 电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析主要有电化学原理产生的反应, 引起了一定的化学发光过程。国外著名学者Leland曾在其研究中, 对三联必定钌体系当中所存在的电化学发光机理进行比较全面的且深入的研究。经过研究发现, 当三联吡啶钌作为发光的底物, 三病案作为激发光反应物质时, 阳极的表面会出现两种物质同时失去电子的情况。若三联吡啶钌出现了衰减, 并在衰减的过程中能够发出比较长的, 例如波长为620mm的光子, 其将能够重新恢复成为基态的三联吡啶钌。在此过程当中, 电极的表面将能够产生比较连续的、稳定的、高效的、增强的发光现象。

2 化学发光免疫分析方法的应用

2.1 食品安全检测中的应用

在当前食品安全问题十分严重的情况下, 必须采用有效的方法对食品安全进行检测。洪亮 (2015) 在其研究中表示, 当前化学发光免疫分析方法已经能够在食品安全检测当中得到良好的应用[2]。不仅能够有效的对生物毒素进行检验, 防止人们食入病毒而引起中度时间, 及时发现有毒因素。亦能够对病原微生物等进行检测, 既节省操作时间, 有具有良好的灵敏度。此外, 对于兽药、农药等环境污染物亦能够有效检测, 防止因农药、兽药等药物残留引起中度事件的发生。

2.2 临床诊断中的应用

临床诊断中亦对化学发光免疫分析方法进行了有效的、广泛的应用。尤其在对甲状腺疾病患者进行甲状腺球蛋白浓度的检测当中, 更能够通过该方法有效的提升假阳性和假阴性的检测率。例如, 刘洪玲等 (2015) 在其研究当中, 采用化学发光免疫分析方法对甲状腺患者的假阴性、假阳性检测结果、以及灵敏度、特异性等, 与放射免疫法进行了对比分析[3]。结果发现化学发光免疫方法的检测效果更佳。由此可见, 化学发光免疫分析方法能够在临床诊断中发挥比较良好的效果, 为临床诊断提供有力依据, 值得临床应用并推广。

3 结语

综上所述, 近年来, 化学发光免疫分析方法及其应用的研究逐渐增多, 发展非常迅速。化学发光免疫分析方法的类别主要有化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析、电化学发光免疫分析等。同时, 该方法凭借其自身的优势广泛应用于食品安全检测、临床诊断当中。但是, 未来的研究更应该致力于在降低成本、提高质量、扩大应用范围等方面。以此促进化学发光免疫分析方法获得更加良好的、快速的发展和应用。

参考文献

[1]金茂俊, 邵华, 金芬, 等.化学发光免疫分析方法的研究及应用[J].农产品质量与安全, 2012, 05 (02) :42-46.

[2]洪亮.化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用[J].化学工程与装备, 2015, 10 (11) :216-218.

化学发光免疫 篇3

[关键词] 化学发光免疫分析技术；研究进展；应用

章编号：1004-7484（2014）-03-1787-01

化学发光免疫分析起源于1977年，化学发光免疫分析主要利用了化学发光测定技术和免疫反应，化学发光测定技术有着非常高的灵敏性同时免疫反应有着非常高的特异性，通过两者的结合使得化学发光免疫技术成为现今最新的免疫分析技术。化学发光免疫分析技术较其他免疫分析技术而言拥有着高灵敏度、价格低以及操作简便等多种优点，正因为这些优点使得化学发光免疫分析技术被广泛的运用。

1 化学发光免疫分析技术的基本原理

化学发光免疫分析最关键的步骤就是化学发光以及免疫，免疫分析技术就是对分析的抗原进行标记，而化学发光分析技术就是对所产生的微观反应进行检测，以此来达到分析的目的。免疫分析就是利用抗原与抗体之间的特异性结合所产生的明显现象来检测所检测物质，而采用标记免疫分析就是通过对抗原进行放射性的标记，这样就能够更好的检测微观物质所发生的化学反应[1]。化学发光技术则是化学反应中的一种现象，化学反应必然伴随着能量的迁移，而具备能量的分子为了達到稳定的状态就要释放多余的能量，能量则是通过光形式释放出来，对所发出的光和能量迁移进行分析便可以知道内部所发生的化学变化。

2 化学发光免疫分析技术的应用

由于化学发光免疫分析技术不仅拥有较好的灵敏度以及较高的自动化程度，而且其还有较高的精密程度，所以得到了较多的应用。化学发光免疫分析技术在兽医学、临床医学以及食品分析中都得到了相当多的应用，下面将进行详细介绍。

2.1 化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用 化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用还处于早期阶段，因此没有得到较多的应用。主要原因则是化学发光免疫分析技术在兽医学的应用中会跨越化学、兽医以及生物学科方面的知识，而这样加大了化学发光免疫分析技术的应用难度，因此没有在兽医学中得到较多的应用。但是化学发光免疫分析技术仍然是兽医学中一项疾病快速检测的方法，即通过化学发光免疫分析技术可以精准快速的判定动物所发生疾病的原因，而且通过这项技术的运用还可以监测动物体内的疾病发生概率[2]。化学发光免疫分析技术在我国没有较多的应用到兽医学中，而且技术也没有国外先进，这进一步制约了化学发光免疫分析技术在我国的应用。国外化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用较多，比如国外利用化学发光免疫分析技术来进行动物肠道病毒检测试验、猪肉中沙门菌抗体检测以及评价胰岛素浓度对奶牛繁殖性能的影响，并且取得了较好的成果。

2.2 化学发光免疫分析技术在临床医学中的应用 化学发光免疫分析技术在临床医学中有较多的应用，比在兽医学中的应用要更加广泛，而且在临床医学的应用中非常重要。美国通过对化学发光免疫分析技术进行改进，使得其具备更好的灵敏性以及精准性，现今化学发光免疫分析技术在临床医学中主要用来检测甲状腺系统、性腺系统、血液系统以及心血管系统中激素浓度。后来有科学家利用金刚烷衍生物在碱性磷酸酶的条件下可产生长时间辉光的特性将其运用到化学发光免疫分析技术中，即通过碱性磷酸酶来作为标记物，完善后的化学发光免疫分析技术科用来检测心脏病、传染病、糖尿病以及过敏症状，另外还可以用于血液系统和胰岛素的检测中。现今将化学发光免疫分析技术运用的最好的就是Roche公司，其所创造的ECL分析系统可以检测到及其细微的反应信号，并且特异性反应极为强烈，操作过程也非常快捷。

2.3 化学发光免疫分析技术在食品分析上中的应用 现今食品安全已成为人们越来越关注的问题，检测食品中含有的违规成分也有一定的难度。但是通过化学发光免疫分析技术的运用可以快速精确的测定食品中违规成分的含量，使得食品检测部门可以更好的测定食品中含有成分的含量。化学发光免疫分析技术可以用于鸡肉样品中CAP的检测以及牛奶中黄曲霉毒素的检测，国外科学家还利用化学发光免疫分析技术来测定牛奶、牛肉以及鸡蛋中肉毒梭菌毒素A的含量，由于化学发光免疫分析技术有着较高的灵敏度，所以所测定的结果非常准确，而且极大的节省了测试所需要的时间[3]。Yang M等科学家将增强型化学发光免疫检测技术以及电荷耦合器件结合起来创造了检测食品中葡萄球菌肠毒素B的技术，其灵敏度非常高、方法实用而且检测成本非常低。

3 化学发光免疫分析技术的新研究进展

3.1 新的标记物 化学发光免疫分析技术运用的重点就是检测内部微观化学反应的情况，而为了达到更好的检测效果就需要发光物质发光时间更加持久发光更加明亮，而这可以通过标记新的标记物来得以实现。各国科学家都致力于研究标记物的发光时间以及发光强度，标记物发光需要特定酶的催化，这需要科学家通过长时间的实践才能够证明哪一种标记物在哪一种酶的催化下才能够达到长时间的发光以及高强度的发光，另外对于标记物发光过程还需要较高的稳定性。目前科学家通过大量实验得到luminol-H2O2在HRP2A的催化下可以发出高强度而且长时间的光，而且发光的稳定性非常好。化学发光免疫分析技术能够快速、灵敏、精准的测定非常细微的物质含量，对于医学检测以及食品安全检测都有着较多的应用，通过不断的研究会使得该技术得到更广泛的运用。

参考文献

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[3] 吴建伟.化学发光免疫分析技术的临床应用及研究进展[J].中国实用医药，2010-12-10.

流动注射化学发光法测定强力霉素 篇4

HNO3酸性介质中,强力霉素与Ce(Ⅳ)反应产生化学发光,罗丹明6G对该反应有较强的增敏作用.据此,采用流动注射技术建立了简易、快速测定盐酸强力霉素的化学发光新方法.在优化的实验条件下,化学发光强度在1.0×10-8～1.0×10-5 g/mL范围内与强力霉素的浓度呈现良好的.线性关系.根据IUPAC的建议计算得到的检出限为2×10-9 g/mL(3σ),对1.0×10-6 g/mL的强力霉素进行了11次平行测定,其相对标准偏差为1.5%.将本法用于强力霉素药片及血样和尿样中强力霉素的测定,结果令人满意.

作 者：王皓 王瑞芬 黄玉明 WANG Hao WANG Rui-fen HUANG Yu-ming 作者单位：王皓,黄玉明,WANG Hao,HUANG Yu-ming(西南大学,化学化工学院,重庆,400715)

王瑞芬,WANG Rui-fen(山西省分析测试中心,太原,030006)

化学发光免疫 篇5

在甲醛的存在下,酸性KMnO4与青霉素G钾能够产生很强的化学发光,从而建立了KMnO4-甲醛-青霉素G钾化学发光体系来测定青霉素G钾.青霉素G钾的.测定线性范围为2.0×10-7～1.0×10-5 g/mL,方法的检出限为1.4×10-7 g/mL,对4.0×10-7 g/mL的青霉素G钾进行11次平行测定,相对标准偏差为1.0%,用此法测定青霉素G钾取得了较好的结果.

作 者：张志娟 范荣亮 ZHANG Zhi-juan FAN Rong-liang 作者单位：张志娟,ZHANG Zhi-juan(贵州大学化学工程学院,贵阳,550003)

范荣亮,FAN Rong-liang(贵州大学资源与环境工程学院,贵阳,550003)

化学发光免疫 篇6

目的 利用便携式流动注射化学发光仪和紫外降解装置,检测蔬菜中残留的有机磷农药.方法 过硫酸钾在紫外光的.催化下能将有机磷降解为无机磷,无机磷在酸性条件下可以和钒酸盐、钼酸盐反应生成具有氧化性的磷钼钒杂多酸,可直接氧化鲁米诺产生强而稳定的化学发光信号;根据发光强度与磷的浓度在一定范围内呈线性关系,从而实现有机磷农药的定量测定.结果 测定磷的检出限为1.0×10-10g/mL,线性范围为1.0×10-9～3.0×10-6g/mL,对浓度为2.0×10-7g/mL的磷平行测定11次,相对标准偏差为2.1%;当青菜中有机磷农药的添加浓度为1.00mg/kg和2.00mg/kg时,方法回收率在89.5%～113.5%之间.结论 此方法简便快捷、准确可靠,实现了检测仪器的自动化和微型化,为市售蔬菜中有机磷农药残留的现场检测奠定了基础.

作 者：肖娜 侯晓芳 崔亚丽 陈超 XIAO Na HOU Xiao-fang CUI Ya-li CHEN Chao 作者单位：肖娜,崔亚丽,陈超,XIAO Na,CUI Ya-li,CHEN Chao(西北大学,国家微检测系统工程技术研究中心,陕西,西安,710069)

侯晓芳,HOU Xiao-fang(陕西师范大学,化学与材料科学学院,陕西,西安,710062)

化学发光免疫 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

60例HCV确诊感染者血清标本来自该院的门诊和住院患者, 其诊断符合2004年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、中华医学会肝病学分会联合修订的《丙型肝炎防治指南》的有关标准[1], 其中男性33例, 女性27例, 年龄18~82岁, 平均年龄 (39.8±4.3) 岁, 病程3个月~21年, 平均病程 (6.5±2.1) 年。所有患者均知情同意, 签署知情同意书。100例正常血清标本来自该院自愿参与研究的健康体检者, 其中男性36例, 女性24例, 年龄18~81岁, 平均年龄 (39.4±3.9) 岁。

1.2 仪器与试剂

ELISA法仪器为瑞士FAME全自动酶标分析系统, 采用厦门新创科技有限公司生产的抗-HCV试剂盒;CLIA法仪器为美国强生Vitros 3600化学发光免疫分析仪, 试剂盒为相配套试剂。确认试剂 (重组免疫印迹法) 使用Chiton RIBA-3.0 SIA, Cop E-meryville, CA。

1.3 检测结果判断

ELISA法:以 (0.1×阳性对照平均A值+阴性对照平均A值) 确定Cut-off值, 以检测值≥Cut-off值为阳性。CLIA法:S/CO.值≥1为阳性。确认试验:出现2条以上HCV蛋白条带为阳性。

1.4 方法

同时用ELISA法和CLIA法对160份样本进行抗HCV抗体检测, 按说明书进行操作。另选取100份化学发光法初检结果阳性的标本, 分为两组:低值组 (1

1.5 统计方法

用四格表统计临床数据, 并计算阴性、阳性以及总符合率, 所得数据采用统计学软件SPSS17.0处理, 样本率以χ2检验。用Kappa检验计算发光法试剂与ELISA试剂的诊断一致性, 按照Kappa系数大小以极差、微弱、弱、中度、高度和极强对诊断一致性强度进行判断, 极差:Kappa系数<0;微弱:Kappa系数0~0.2;弱:Kappa系数0.21~0.4;中度:Kappa系数0.41~0.6;高度:Kappa系数0.61~0.8;极强:Kappa系数0.81~1.0[2]。

2 结果

2.1 ELISA和CLIA方法检测丙型肝炎病毒抗体结果的符合性

结果显示使用传统ELISA试剂与化学发光方法试剂检测抗HCV抗体的诊断一致性较高, 临床检测中差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

注:阳性符合率:87.7%, 阴性符合率:91.3%, 总符合率:90.0%, χ2检验:χ2=280.000, P=0.000。

2.2 化学发光法抗-HCV初检阳性标本的RIBA确认试验结果见表2。

3 讨论

目前广泛使用的第三代HCV抗体ELISA试剂增加了HCV Ns5区表达的蛋白作为抗原, 大增加了灵敏度和特异性。但临床使用该类试剂筛检HCV感染者, 仍存在一定数量的假阳性和假阴性结果[3], 特别是在HCV低流行率人群中, 如无偿献血者, 假阳性问题一直比较突出。此外, 国内常用的HCV抗体酶免试剂皆没有灰区的设定, 试剂盒cutoff值计算方法各厂家也都不一致, 导致国产试剂盒之间的检测性能存在较大的异质性, 亦是假阳性比较多的原因[4,5]。

在临床实验室中检验中, 需先对使用的方法和程程序进行评估, 确定其符合要求后才可正式使用。Kappa检验是用于分析计数资料和等级分组资料一致性检验中的一种方法, 在肝炎病毒血清标志物等二分变量 (阴性、阳性) 检测中, 一般选择使用使用检验法, 以判断不同方法学是否存在一致性及相关程度。该文结果显示化学发光法与酶联免疫法在丙型肝炎病毒抗体检测中的Kappa系数达到0.76, 具有高度一致性, 与同类研究报道结果基本一致[4], 结果表明两种试剂均可用于血源筛查、临床术前初筛。ELISA试剂的特异性较好, 发光试剂的灵敏度较高, 两种试剂均存在漏检现象, 实际工作中如能联合应用可提高检出率[6]。

另外该研究参照美国CDC丙型肝炎实验导则[7], 使用S/CO.≥8可判断为阳性作为分组依据, 对发光法初筛阳性的标本再进行RIBA确认试验, 发现低值组的阳性率为24%, 而高值组的阳性率为88%, 提示中国人群的抗HCV阳性预测值与美国有一定的差异, 目前的抗-HCV诊断试剂盒均采用基因工程或合成多肽抗原, 而由于HCV基因易发生变异, 其基因呈现高度异质性, 编码氨基酸序列明显改变, 可引起抗原性的改变, 现阶段试剂的检测抗原多为2型抗原, 而以往的研究发现, 我国HCV患者多为1型, 因此当前的试剂并不适用于中国所有地区[4]。提示实验室应对抗HCV试剂的S/CO.比值设定进行评估, 使用在所有人群中经过验证的能够预测确认试验≥95%阳性率的S/CO.比值作为是否进行确认试验的依据, 并设立一定范围内的灰区, 以达到灵敏度和特异性的最佳平衡[8], 该研究还提示对初检呈弱反应者有必要进行确认试验, 跟踪观察。

摘要：目的 分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的应用价值。方法 同时应用化学发光法和酶联免疫吸附法检测60例丙肝确诊感染者和100例健康体检者的抗丙型肝炎病毒抗体, 计算其阴性符合率、阳性符合率以及总符合率, 用Kappa检验计算待评价诊断一致性。选取化学发光法初检验结果为阳性的标本100例, 按照S/CO.值分为低值组 (1<S/CO.<8) 和高值组 (S/CO.≥8) , 经抗HCV经重组免疫印迹试验 (RIBA) 对化学发光法试剂的检测界限值进行评估。结果ELISA法与化学发光法检测HCV抗体结果阳性符合率:87.7%, 阴性符合率:91.3%, 总符合率:90.0%, Kappa系数为0.760, 两者具有高度的一致性, 两种方法在常规临床检测中并无明显差异。阳性低值组中12份标本经RIBA试剂确证为阳性, 而高值组中44份标本确证为阳性。结论 ELISA是目前HCV抗体筛查中较为常用的方法, 其试剂盒多为第三代试剂, 特异性较好, 化学发光法近期在HCV抗体筛查中逐渐得到重视, 其试剂的灵敏度较高, 两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。化学发光法的阳性判定标准应进行评估, 以提高特异性。

关键词：丙型肝炎,抗体,化学发光,ELISA

参考文献

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化学发光法的研究进展综述 篇8

【关键词】 化学发光法；研究进展；综述

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.686 文章编号：1004-7484（2012）-08-2967-02

1 化学发光概述

所谓化学发光（chemiluminescence，CL）实际上是产生于化学反应过程中的一种光辐射。化学发光法的基本原理就是：化学反应的反应物或生成物吸收了反应释放的化学能由基态跃迁至电子激发态，再由激发态的最低振动能级返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。

2 常见化学发光体系及其应用

2.1 鲁米诺化学发光体系 鲁米诺是1928年Albrecht首先发现的一种发光试剂。鲁米诺属肼类有机化。由于鲁米诺及其衍生物性质稳定，结构简单，易于合成，且无毒不污染环境，水溶性较好，从而成为研究最多，使用最早，应用范围最广泛的化学发光试剂之一。它在碱性溶液中可以被强氧化剂氧化而处于激发态，激发态回到基态时同时发射425nm的蓝光，所以鲁米诺的发光体都是3-氨基邻苯二甲酸根。

2.2 吖啶类化合物的化学发光体系一光泽精化学发光体系 光泽精（Lucigenin，LC）化学发光体系是一个性能优良、应用广泛的化学发光体系，在国内对该体系的研究与应用还很少。国外对LC发光体系作了较深入、系统的研究。和鲁米诺一样，光泽精在碱性介质中被H2O2氧化，裂解为激活态，发出蓝色的光，其发光效率也较高，只是氧化产物N-甲基吖啶酮难溶于水，常沉积在反应器壁上，为此常加入表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）使之增活。

2.3 过氧化草酸酯类化学发光体系 过氧草酯类化合物的化学发光反应被认为是目前效率最高的非酶催化的发光反应，最大量子产率可达34%。这类反应通常由草酸酯与一种氧化剂作用产生高能中间体，并由此中间体激发合适的荧光剂而产生化学发光。

3 化学发光法的研究进展

3.1 新化学发光体系和新型发光试剂的研究 作为化学发光法的研究的一个发展方向来说就是要探索新的化学发光体系，并在此基础之上开发新型发光试剂。这显然是十分重要的发展方向。比如，在化学发光试剂的研究方面，我们可以在荧光物质方面进行一些创新，针对荧光和化学发光之间的经验规则我们可以对类似结构进行适当的应用和改进，可以引入鳌合基团，借助鳌合基团的选择性来优化化学发光。这样我们就可以得到了具有较好选择性的化学发光新试剂。按照这种创新思路，鲁米诺及其衍生物逐渐发展起来，并在临床实践过程中得以广泛的应用。

3.2 试验装置的微型化、集成化和专一化 从试验装置的发展上来看，微型化、集成化和专一化将是以后的发展趋势之一。针对化学发光传感器的研究从發展趋势上，“将化学发光试剂固定”逐渐要成为今后的发展趋势之一。

3.3 其它技术在化学发光分析中的应用 对于其他技术而言在今后的应用中可以联合多项技术进行全方位的发展和研究。可以利用的技术有毛细管电泳、流动注射技术、微透析技术、传感器技术和芯片技术等等，同时可以借助相关的先进仪器进行改造和完善。

参考文献

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化学发光免疫 篇9

铈(Ⅳ)-吐温40-邻苯二酚化学发光体系测定废水中的邻苯二酚

基于在吐温40存在下邻苯二酚与铈(Ⅳ)在酸性介质中发生化学发光反应,建立了测定邻苯二酚化学发光分析法.该法测定邻苯二酚的线性范围为3.0×10-7 ～5.0×10-5 mol/L,检测限为1.0×10-7 mol/L,相对标准偏差为3.0%(邻苯二酚浓度为5.0×10-6 mol/L,平行测定11次).用该法测定实验室废水中的邻苯二酚,结果令人满意.

作 者：谢成根 李淮芬 刘宜树 常文贵 Xie Chenggen Li Huaifen Liu Yishu Chang Wengui  作者单位：皖西学院,化学系,安徽,六安,237012 刊 名：化工环保  ISTIC PKU英文刊名：ENVIRONMENTAL PROTECTION OF CHEMICAL INDUSTRY 年，卷(期)： 25(2) 分类号：X8 关键词：化学发光法   铈(Ⅳ)   邻苯二酚   吐温40   分析  

化学发光免疫 篇10

蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

目的 阐明蓝尾石龙子消化道内分泌细胞的.形态学特征、类型、局部分布和细胞密度.方法 应用免疫组织化学技术链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)法.结果 蓝尾石龙子消化道中的内分泌细胞形态多样,呈圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、锥形、烧瓶形和杆状.蓝尾石龙子消化道中显示出3种内分泌细胞,即5-羟色胺阳性细胞、生长抑素阳性细胞和胃泌素阳性细胞,未见高血糖素阳性细胞、P物质阳性细胞、胰岛素阳性细胞和胰多肽阳性细胞.5-羟色胺阳性细胞是消化道中最主要的内分泌细胞类型,其在消化道各段均有分布,但在各段分布密度不同.生长抑素阳性细胞仅分布于胃部.胃泌素阳性细胞局限分布于幽门和十二指肠部位.在蓝尾石龙子消化道内具有最多种类型内分泌细胞分布的部位是幽门,同时消化道内各种内分泌细胞在此部位也显示出最高的分布密度.结论 蓝尾石龙子与其他爬行动物消化道内分泌细胞在分布上存在一定的共同特征并具其独特性,这些共同特征可能反映着不同脊椎动物消化生理的相同点.

作 者：黄徐根 吴孝兵 HUANG Xu-gen WU Xiao-bing 作者单位：安徽师范大学生命科学学院,重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室,芜湖,241000刊 名：解剖学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ANATOMICA SINICA年，卷(期)：37(5)分类号：Q954关键词：消化道 内分泌细胞 免疫组织化学 蓝尾石龙子 Digestive tract Endocrine cells Immunohistochemistry Eumeces elegans

化学发光免疫 篇11

关键词：大便潜血 邻联甲苯胺法 免疫胶体金

The Comparison Between the Chemical Method and Immunogold Method in Detecting Sedoccult Blood

Duan Xiangyuan

Abstract:Objective:To explore the comparability between the chemical method and immunogold method in detecting sed occult blood．Methods:To detect the sed occult blood of 300 specimens with both O-tolidine method and immunogold method．then analyse the results．Results:2 kinds of methods in line with the consistency of the results of the measured rate of greater than 90%.Conclusion:Food and drink impact the results of chemical method very much．so chemical method is lesssensitive and specific than immunogold method．But immunogold method also has false positivereaction，therefore we suggest detecting sed occult blood with the both two methods.

Keywords：Sed occult blood O-tolidine method Immunogold method

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879(2012)03-0026-01

大便潜血 (fecesoccultblood,FOB)实验是临床诊断消化道出血的一项重要项目，也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段。常用的化学法主要有联苯胺法、邻联甲苯胺法、无色孔雀绿法、愈创木脂法、匹拉米洞法等,以邻联甲苯胺法较为实用。随着近年来对粪便隐血检测试剂的深入研究,免疫法测定潜血，方便快捷并取得了较满意的结果，已逐渐取代邻联甲苯胺法。但实际工作中，某些特殊标本用胶体金试纸法检测结果与临床不符。为进一步了解粪便隐血免疫法与化学法在检测灵敏度特异性方面的特点，我们用化学法（邻联甲苯胺法）与免疫法（胶体金试纸法）测定粪便隐血结果作如下比较，探讨二者在临床上的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本。测定本院300份无重复门诊及住院患者新鲜大便，均为成年人，女89例，非月经期，男211例(均排除痔肛裂出血)。患者随机分为A、B二组：A组（65例）严格按照医嘱进行饮食和药物控制3日。B组（235例）未按照医嘱进行饮食和药物控制。

1．2 试剂。艾康生物技术公司提供的便潜血胶体金检测试纸条（批号20070124）；邻联甲苯胺由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由开封化工厂生产，均为AR级。10g/L邻联甲苯胺冰乙酸试剂、3%过氧化氢自配。

1．3 方法。邻联甲苯胺法按文献操作［1］，便隐血胶体金试纸法严格按说明书操作。对收集的每份标本分别做邻联甲苯胺法和便隐血胶体金试纸检测，记录同一份二种不同方法的测定结果。邻联甲苯胺法阳性而胶体金试纸检测阴性的标本，按一定比例稀释后以胶体金法再测。

2 结果

2.1 化学法（邻联甲苯胺法）和免疫法（胶体金法）对二组检测结果的比较。见表1。

2.2 A组排除饮食及药物的影响，邻联甲苯胺法和胶体金法对A组检测结果基本一致。

2.3 B组受饮食及药物等干扰因素的影响，邻联甲苯胺法阳性率明显高于胶体金法。B组中80例化学法阳性者，胶体金法均为阴性，经咨询病史和饮食情况，除5例服用铁剂外，其他人近日曾食用动物血、肉、肝脏、及富含叶绿素食物等。其中胶体金法为阴性的2例柏油样便标本经1∶50～1∶100稀释后以胶体金法重测皆为阳性。

3 讨论

粪便隐血实验是消化道疾病辅助诊断试验。邻联甲苯胺法利用血红蛋白中的亚铁血红素具过氧化物酶活性，催化过氧化氢放出新生态氧，把受体邻联甲苯胺氧化成联甲偶氮苯而显蓝绿色。显色的深浅反映了Hb的多少，即出血量的大小。该法可检出1～5mg/L的Hb，消化道5～10ml出血即为阳性。但缺乏特异性和准确性，易出现假阳性反应，任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，外源性动物食品如含有Hb、肌红蛋白，其含铁血红素的作用可使试验阳性；大量生食富含葉绿素蔬菜，其中含有活性的植物过氧化物酶也可催化H2O2分解出现阳性反应。邻联甲苯胺法灵敏性低于胶体金法［2］，故极少量的出血会造成邻联甲苯胺法(阴性)胶体金法(阳性)的结果。此时粪便外观通常无明显异常，但如果血红蛋白在消化道停留时间过长，或受细菌分解等因素而降解，其与胶体金试纸上包被的抗体的相应抗原受到破坏时就会出现假阴性，若此时出血量在邻联甲苯胺法检测限上就会出现邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的结果。另外当出血量大于胶体金法检测范围，随着血红蛋白含量增加，抗原抗体复合物反而减少，产生后带现象，免疫胶体金法出现假阴性，上述两种情况大便外观通常会有明显改变，只需将粪便溶液调配成一定浓度后检测，免疫胶体金法可获阳性结果。由于胶体金单克隆抗体免疫法是利用金标Hb-抗体与Hb结合后，向上扩散分别与测试区的抗-Hb抗体及对照区的Hb结合，此时胶体金的颗粒聚集呈颜色反应，它只特异地针对人-Hb抗原表位，基本排除了饮食及药物因素的干扰；且具有很好的灵敏度，一般Hb为0.2mg/L就可得到阳性结果［3-4］。被世界卫生组织（WHO）和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪便隐血实验的一种较为确认的方法［5］，且对操作者无损害，但其成本较化学法高。

鉴于两种方法各有优缺点，有条件的实验室应同时开展两种方法：二者皆为阳性判断为真阳性；化学法阳性而免疫胶体金法阴性者，若外观无改变者建议禁肉食、富含叶绿素食物、停用某些已知有影响的药物2 d～3 d后复查，若外观有所改变者稀释重测免疫胶体金法；若化学法阴性而免疫胶体金法阳性者建议连续复查2次及做进一步检查。

参考文献

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［3］ 朱立华.实验诊断学［M］.北京：北京医科大学出版社，2002，264-265

［4］ 高茂馗，束国防.免疫法与化学法测定隐血的比较［J］.临床检验杂志，2004，22（1）：69

化学发光免疫 篇12

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

抗PGⅠ单克隆抗体8003#和8009#，抗PGⅡ单克隆抗体8101#和8103#均购自Medix Biochemia公司。发光微粒由博阳生物科技(上海)有限公司提供。LICA通用液系LICA HT光激化学发光检测仪的配套试剂。二奎啉甲酸(BCATM)法蛋白质定量检测试剂盒购自Thermo Fisher Scientific公司。相关性分析样本，来自于上海中医药大学附属曙光医院住院及门诊病人新鲜血液，分离血清冷冻保存。LICA HT高通量均相发光免疫分析仪、LICA SP全自动移液器由上海博阳医疗仪器有限公司提供；粒径仪为NICOMP380激光衍射式粒度分布测量仪。96孔微孔板为LICA HT高通量均相发光免疫分析仪配套专用板。

1.2 实验方法

1.2.1 免疫发光微粒的制备

依照参考文献[5]，取适量200nm左右表面为活性醛基的发光微粒2支，离心处理，超声分散至0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值7.0)中，以10∶2(W/w)的比例分别加入单克隆抗体8003#和8101#，分别加入适量三氢硼氰化钠(NaCNBH3)催化，37℃旋转混合反应48h，进行离心，清洗未反应的单抗，之后将其分别定容至10mg/mL,4℃保存备用。

1.2.2 抗体的生物素标记

取适量单克隆抗体8009#和8103#，将其溶液的p H值调整为8.5，以1∶30(摩尔比)的比例加入生物素(Biotin)，4℃混合反应过夜，之后将未反应的生物素进行透析处理，将其定容至1mg/m L,4℃保存备用。

1.2.3 标准品的制备

将两份经Abbott Architect系统定值的PGⅠ、PGⅡ混合样本用分别小牛血清系列稀释，配制成0、5、35、70、200、500ng/mL的PGI标准液和0、5、10、20、50、100ng/mL的PGⅡ标准液。再使用Abbot Architect系统对每个稀释液进行标定，标定合格后，分装成每管1mL，保存在-20℃备用。

1.2.4 检测方法

在96孔微孔板中，每孔依次加入标准品或者待测样本25µL、免疫发光微粒试剂25µL、生物素标记试剂25µL，将微孔板置于LICA HT光激化学发光检测仪内，仪器程序设定为37℃温育1200s，然后仪器自动加入LICA通用液175µL,37℃温育900s后，读取光信号RLU值。

1.2.5 检测方法性能评价

1.2.5. 1 分析灵敏度

方法参考EP17-A[6]程序：质控在控的情况下，同批试剂一次运行空白样本或零值校准品20次，计算均值及SD，以空白均值±2SD来计算方法的分析灵敏度。

1.2.5. 2 回收率

待测样本等体积分为3份，取2份分别以等体积与高低质控品（QC H和QC L）等体积混合，分别测定待测样本、混合后样本、QC H和QC L各测3次，取均值，计算回收率。回收率=实际检测浓度/理论浓度×100%。

1.2.5. 3 精密度

参考EP5-A2[7]程序：采用同一批试剂、校准品，以各自配套的质控血清作为测试标本，一次运行对标本重复测定至少20次。计算均值、SD及CV。

1.2.5. 4 稳定性

37℃加速稳定性实验，将试剂在37℃存放7d，然后对其进行物理检查，并在线性、灵敏度、精密度方面考察其稳定性。

1.2.5. 5 方法学相关性分析

取65份患者血清样本，分别用建立的LICA和Abbott Architect试剂(化学发光法)进行检测，并对2种方法的检测值进行比较，得到相关性曲线。

2 结果

2.1 分析灵敏度

光激化学发光法PGⅠ、PGⅡ试剂盒的分析灵敏度分别为0.8ng/m L和0.6ng/m L。

2.2 批内精密度

光激化学发光法PGⅠ、PGⅡ试剂盒QC L的批内精密度分别为4.1%和4.3%，QC H的批内精密度分别为0.93%和1.2%。

2.3 回收率

样本与QC L等体积混合后的样本为样本1，与QC H等体积混合后的样本为样本2，回收率=实际检测浓度/理论浓度×100%。结果见表1。

2.4 稳定性

将37℃存放7d的试剂取出，对其进行物理检查，并考察试剂的线性、灵敏度、精密度，结果见表2。

2.5 与化学发光法检测结果的相关性

分别用LICA法和Abbott化学发光法检测65份患者血清样本的PGⅠ和PGⅡ的浓度，相关结果见图1和图2，相关性方程分别为YPGI=1.004XPGI-0.147,r=0.977;YPGII=0.885XPGII+2.311,r=0.951；对二相关系数做统计分析，r>r0.05(63)，P<0.05，说明相关系数有统计意义。

3 讨论

已有报道证实[8,9]，血清胃蛋白酶原的水平可动态地反映胃黏膜的状态和组织功能：在发生基底腺黏膜萎缩性胃炎时，会伴随着血清PGⅠ含量的显著下降，PGⅠ/PGⅡ的比值降低，这提示了胃癌的可能；在胃溃疡时，PGⅠ会异常增高；比较溃疡组、慢性萎缩性胃炎组、胃癌组和正常组的PGⅠ值和PGⅠ/PGⅡ值，其大小顺序如下：溃疡组>正常组>萎缩性胃炎组>胃癌组。由于PGⅠ、PGⅡ检测成本相对低廉且操作简便，适合大批量的标本检测，对胃黏膜疾病的大规模筛查具有实用价值，因此可作为慢性萎缩性胃炎的胃黏膜萎缩程度筛查指征。

对PG的检测目前已经报道的方法有免疫比浊分析、化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析等，但这些方法分别存在敏感性差、定量范围窄、需要反复清洗与分离、检测耗时长、自动化程度不高等缺点。光激化学发光是继LOCI[10]（Luminescent oxygen channeling immunoassay）技术问世之后，在国内建立、发展并应用于临床检测的一种新型检测技术。在均相条件下将内部带有染料的LICA通用液微粒以及包被有活性分子并且内部带有发光化合物的发光微粒混合物和检测样本混合。此时LICA通用液微粒和包被有活性分子的发光微粒可迅速有效地捕捉靶分子并形成免疫夹心复合物。经680nm激发光照射后，LICA通用液微粒中的染料被诱导激活，并释放高能态的单线态活性氧。该高能态的活性氧被近距离的发光微粒俘获，传递能量以激活所述发光微粒中的发光化合物。数微秒后，发光微粒中的发光化合物将释放出高能级610nm红光，用光子计数器计数得到相对光量子单位(RLU)值。该法反应为均相反应，既可加快反应速度，又可避免反复分离与清洗，同时，由于微粒表面积的增加，也提高了检测的灵敏度。

本研究采用LICA的双抗体夹心法，建立了测定PGⅠ和PGⅡ的方法，并考察了分析性能。结果表明，LICA法测定PGI和PGII的本底低、灵敏度高、特异性强、准确性和重复性好、分析时间短(仅为25min)。在37℃7d的加速稳定性实验中，试剂的外观目测无沉淀，粒径分布均一，在线性、灵敏度、精密度方面也和4度试剂无明显差异，试剂的稳定性佳。

LICA测定PGⅠ和PGⅡ的分析灵敏度分别为0.8ng/m L和0.6ng/m L，同市场上同类产品雅培的灵敏度1ng/m L和0.5ng/m L近似；本法的回收率高，在90%～110%之间；质控血清的批内和批间CV均<5%，具有很好的准确性和重复性，与化学发光法的相关性好，可适用于临床。该方法的建立有助于进一步进行长期稳定性试验和相应的检测试剂盒的研制。

参考文献

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[4]高云朝.光激化学发光技术研究进展及应用[J].中华检验医学杂志,2009,32(4):474-476.

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[8]吴志成,何敏,夏勇.血清胃蛋白酶原检测与慢性萎缩性胃炎相关研究[J].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(13):2027-2028.

[9]姜智敏,戈之铮.胃蛋白酶原在慢性萎缩性胃炎和胃癌筛查中的价值[J].胃肠病学,2009,14(12):754-756.

化学发光免疫 篇13

关键词：化学发光免疫分析仪,免疫分析,故障分析,检验设备维修

化学免疫分析法是将化学反应与免疫反应相结合而产生的一种免疫分析法。美国雅培公司i2000SR全自动化学发光免疫分析仪,能同时检测25个项目,每小时200个测试,工作效率高,检测准确且灵敏度,人为操作误差少,在医院中使用普遍[1,2]。

1 工作原理

雅培i2000SR系统由系统控制中心(SCC)、运行模块(PM)、样本处理器(RSH)组成。系统控制中心负责检验项目录入、质控管理、结果查看等工作;运行模块对所有样本进行从吸样到最后读数的分析操作;样品处理模块是将系统中的样品运送到各运行模块,在这一区域可进行样品的放置、确认、传输和样品的回收。样品被放在样品架中进行运送[3]。雅培i2000SR系统采用化学发光免疫分析方法(CMIA),用于测量蛋白质、病毒抗原等大分子物质。雅培i2000SR的CMIA分析包括以下成分[4]:(1)磁性微粒子包被的捕捉分子(抗原、抗体或病毒颗粒)用于特异性检测;(2)吖啶酯标记的连接物;(3)预激发液和激发液。被分析物在测量过程中采用两步法(加样本、固液相,一步清洗,加结合物,两步清洗,读数),加入样本后,两次加试剂,两次清洗,大大提高了检测的准确性和稳定性。检测项目的优势:肝炎检测项目优势明显,属于全球金标准测试,其中的Hbs Ag和Hbs Ab为全定量检测,其余3项为半定量检测,甲状腺检测项目中促甲状腺素(TSH)具有最优灵敏度。

2 故障一

2.1 故障现象

偶尔几个项目测试无结果,并出现报警信息。

2.2 故障分析与检修

设备处于运行状态进行样本测试的过程中,出现报警,报警信息为1006 unable to process test,background read failure(不能进行检测,本底读出失败),查看工作站结果显示菜单,有部分测试无法读出结果,怀疑是否相关试剂不足。在测试结束后,打开试剂舱,检查相关试剂容量充足,故与试剂容量无关。更换另一批次的相关试剂,故障依旧;更换预激发液和激发液,相关样本的测试结果,仍然无法读出。将能够读出结果的试剂与无法读出结果的实际相比较,发现无法读出结果的试剂比较浓稠,怀疑是试剂管路出现问题,检查相应管路和电磁阀,发现Wash Zone2的电磁阀中有结晶,处在半通状态,相应测试的试剂由于比较浓稠无法正常清洗,导致反应不完全或者不反应,无法读出结果,而其他测试试剂能够正常清洗,能够读出测试结果。将处于半通状态的电磁阀的结晶清理干净,重新将样本加入设备,能够做出相应测试结果,设备恢复正常。

3 故障二

3.1 故障现象

设备在进行测试的过程中,停止加样并返回到停止状态,无法重新启动。

3.2 故障分析与检修

检查设备的报警信息,报警信息为5000 STAT Pipettor movement restricted at SP wash step number 0(急诊加样针在冲洗起始处受阻),表示为急诊加样针在运动过程中移动受到限制。根据报警提示,清理急诊针运动X轴和Z轴方向传感器的灰尘,若传感器上有灰尘极可能影响加样针的移动,清理完毕后,重新启动设备,仍然无法正常启动。检查急诊样本针的防撞电路板,分析设备急诊针移动的防护过程,当针向下移动时优先探测防撞板是否就位,再观察故障现象X轴移动无碍,Z轴向下移动立即报警,怀疑防撞板故障,将之屏蔽,故障消失,更换后,故障解决。

4 故障三

4.1 故障现象

机器处于停止状态,开机,初始化不能正常进行,报警,重新返回停止状态。

4.2 故障分析与检修

检查设备的报警信息确定故障位置,报警信息为3700Unable to process test,(Wash Zone 1)wash aspiration error for probe(s)(1)~(3)(冲洗吸液针1~3故障,不能进行检测)。根据报警信息提示,初步判定Wash Zone 1的清洗针有可能由于结晶而堵塞,但是比较特殊的是根据提示3根清洗针故障同时出现问题,可能性很小。将3根清洗针分别取下,用30 m L注射器注射纯净水,3根清洗针出水都很通畅,将3根清洗针分别装回Wash Zone上,再次启动设备,初始化后不能正常进行,返回停止状态。分析故障可能来自Wash Zone 1的定量泵,关闭36 V电源,将Wash Zone 1的定量泵拆卸下来,轻轻打开发现转动轴承附近有很多试剂结晶将轴承抱死,导致轴承无法正常转动。用棉签蘸纯净水将结晶擦净,重新装好定量泵,打开36 V电源,启动设备,初始化成功,设备处于准备状态,可以使用。

5 小结

雅培i2000SR全自动化学发光免疫分析仪的集成化、智能化程度较高,维修比较困难。实验室临床使用对时间的要求比较苛刻,所以要理解设备的工作原理、测试过程、各个部件主要作用[5,6],在分析故障的时候,就能比较顺利地找到原因,及时地解决问题。

参考文献

[1]刘青,王厚照.ABBOTT ARCHITECT i2000SR全自动免疫分析仪几例常见故障的处理方法[J].现代检验医学杂志,2010,25(1):153.

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