化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析法（精选10篇）

化学发光免疫分析法 篇1

化学发光免疫分析主要为化学发光和免疫分析相互结合的一种新型分析方法。最初, 在1977 年由著名学者Tsuji等提出。经过了40多年的发展, 当前, 化学发光免疫分析方法已经逐渐走向了成熟。并且能够广泛应用于多个领域。本文收集了近年来诸多学者关于化学发光免疫分析方法的相关研究的成果, 主要对当前该技术的研究与应用进展进行分析, 对其应用的领域, 以及应用的具体情况等进行阐述。据此, 希望促使化学发光免疫分析方法能够具有良好的发展前景。

1 化学发光免疫分析方法类别

1.1 化学发光免疫分析

化学发光免疫分析方法主要是由化学发光剂, 对抗原或者抗体进行直接标记的免疫测定方法之一。当前比较常见的化学发光免疫分析方法主要有吖啶酯类化学发光剂和鲁米诺类化学发光剂。一般情况下, 吖啶酯以及吖啶磺酰胺类的化合物均属于化学发光免疫分析方法, 能够在加入适量的CTAC后, 大大的增强发光效果。其次, 鲁米诺类物质的发光原理主要为氧化发光。含有鲁米诺类物质的碱性溶液, 能够在催化剂的辅助下实现基态, 进而发出光子。

1.2 化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分析主要采用没进行生物活性物质的标记, 以此判断其免疫反应。出现免疫反应后, 复合物上的酶便会再次对发光底物产生作用, 利用信号试剂等进行发光。当前, 化学发光酶免疫分析当中比较常见的标记酶应该为碱性磷酸酶, 以及辣根过氧化物酶。其中, 碱性磷酸酶主要在酶联免疫分析、核酸杂交分析当中得到了广泛的应用。具有反应速度较快, 分析时间较短, 结果较为正确可靠等优点。而辣根过氧化物酶主要将鲁米诺及其相应的衍生物作为主要的发光底物, 在使用过氧化酶的情况下, 对抗体进行标记。在此基础桑, 通过过氧化酶将发光试剂启动, 将能够起到一定的发光标记作用。金茂俊等 (2012) 在其研究中认为, 该种方法比较传统, 发光强度比较低, 且测量不便。但是, 在长时间的研究下, 已经能够长时间的保证发光新高增强, 分析灵敏且准确[1]。

1.3 电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析主要有电化学原理产生的反应, 引起了一定的化学发光过程。国外著名学者Leland曾在其研究中, 对三联必定钌体系当中所存在的电化学发光机理进行比较全面的且深入的研究。经过研究发现, 当三联吡啶钌作为发光的底物, 三病案作为激发光反应物质时, 阳极的表面会出现两种物质同时失去电子的情况。若三联吡啶钌出现了衰减, 并在衰减的过程中能够发出比较长的, 例如波长为620mm的光子, 其将能够重新恢复成为基态的三联吡啶钌。在此过程当中, 电极的表面将能够产生比较连续的、稳定的、高效的、增强的发光现象。

2 化学发光免疫分析方法的应用

2.1 食品安全检测中的应用

在当前食品安全问题十分严重的情况下, 必须采用有效的方法对食品安全进行检测。洪亮 (2015) 在其研究中表示, 当前化学发光免疫分析方法已经能够在食品安全检测当中得到良好的应用[2]。不仅能够有效的对生物毒素进行检验, 防止人们食入病毒而引起中度时间, 及时发现有毒因素。亦能够对病原微生物等进行检测, 既节省操作时间, 有具有良好的灵敏度。此外, 对于兽药、农药等环境污染物亦能够有效检测, 防止因农药、兽药等药物残留引起中度事件的发生。

2.2 临床诊断中的应用

临床诊断中亦对化学发光免疫分析方法进行了有效的、广泛的应用。尤其在对甲状腺疾病患者进行甲状腺球蛋白浓度的检测当中, 更能够通过该方法有效的提升假阳性和假阴性的检测率。例如, 刘洪玲等 (2015) 在其研究当中, 采用化学发光免疫分析方法对甲状腺患者的假阴性、假阳性检测结果、以及灵敏度、特异性等, 与放射免疫法进行了对比分析[3]。结果发现化学发光免疫方法的检测效果更佳。由此可见, 化学发光免疫分析方法能够在临床诊断中发挥比较良好的效果, 为临床诊断提供有力依据, 值得临床应用并推广。

3 结语

综上所述, 近年来, 化学发光免疫分析方法及其应用的研究逐渐增多, 发展非常迅速。化学发光免疫分析方法的类别主要有化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析、电化学发光免疫分析等。同时, 该方法凭借其自身的优势广泛应用于食品安全检测、临床诊断当中。但是, 未来的研究更应该致力于在降低成本、提高质量、扩大应用范围等方面。以此促进化学发光免疫分析方法获得更加良好的、快速的发展和应用。

参考文献

[1]金茂俊, 邵华, 金芬, 等.化学发光免疫分析方法的研究及应用[J].农产品质量与安全, 2012, 05 (02) :42-46.

[2]洪亮.化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用[J].化学工程与装备, 2015, 10 (11) :216-218.

[3]刘洪玲.临床检验中化学发光免疫分析的应用效果评价[J].中国医药指南, 2015, 06 (36) :57-58.

化学发光免疫分析法 篇2

11.100

C

中华人民共和国医药行业标准

YY/T

1735—2021

丙型肝炎病毒抗体检测试剂（盒）

（化学发光免疫分析法）

Hepatitis

c

virus

antibody

(Anti-hcv)

detection

reagent

(kit)

(Chemiluminescent

immunoassay)

2021-03-09

发布

2022-04-01

实施

国家药品监督管理局

发布

本标准按照GB/T

1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家药品监督管理局提出。

本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC

136）归口。

本标准起草单位：中国食品药品检定研究院、北京市医疗器械检验所、北京科美生物技术有限公司、郑州安图生物工程股份有限公司、苏州新波生物技术有限公司、厦门万泰凯瑞生物技术有限公司、迈克

生物股份有限公司、雅培贸易（上海）有限公司、罗氏诊断产品（上海）有限公司、西门子医学诊断产品（上

海）有限公司、富士瑞比欧株式会社。

本标准主要起草人:谷金莲、王瑞霞、王建梅、王新明、涂仙菊、徐飞海、王保宁、王雪峰、蔡晓蓉、邢春莲、白玉。

丙型肝炎病毒抗体检测试剂（盒）

（化学发光免疫分析法）

1范围

本标准规定了丙型肝炎病毒抗体检测试剂（盒）（化学发光免疫分析法）的要求、试验方法、标识、标

签、使用说明书、包装、运输和贮存等。

本标准适用于利用化学发光分析技术，采用间接法或双抗原夹心法原理定性检测人血清、血浆中丙

型肝炎病毒抗体的检测试剂（盒）。包括化学发光、电化学发光和时间分辨荧光等方法。

本标准不适用于：

a）

拟用于单独销售的丙型肝炎病毒抗体校准品和丙型肝炎病毒抗体质控品；

b）

以化学发光免疫分析为原理的生物芯片。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T

191包装储运图示标志

GB/T

29791.2体外诊断医疗器械

制造商提供的信息（标示）第2部分:专业用体外诊断试剂

3要求

3.1外观

外观应满足如下要求：1

a）

试剂（盒）各组分録全、完整，液体无渗漏；

b）

中文包装标签应清晰，无磨.膏

3.2阳性参考品符合率

用国家参考品或经国家参考品标化的阳性参考品进行检定，阳性参考品符合率应符合相应的要求。

丙肝肝炎病毒抗体国家参考品的信息参见附录A,以下条款类同。

3.3阴性参考品符合率

用国家参考品或经国家参考品标化的阴性参考品进行检定，阴性参考品符合率应符合相应的要求。

3.4最低检出限

用国家参考品或经国家参考品标化的最低检出限参考品进行检定，最低检出限应符合相应的要求。

3.5重复性

用国家参考品或经国家参考品标化的精密性参考品进行检定，平行检测10次，其变异系数（CV）应

不高于10%。

3.6批间精密度

用国家参考品或经国家参考品标化的精密性参考品检测3个批号试剂盒，其批间变异系数（CV）

应不高于15%。

3.7稳定性

可对效期稳定性和热稳定性进行验证：

a）

效期稳定性：生产企业应规定产品的有效期。取到效期后一定时间内的产品检测阳性参考品

符合率、阴性参考品符合率、最低检出限、重复性应符合3.2、3.3、3.4、3.5的要求；

b）

热稳定性试验：检测阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出限、重复性应符合3.2、3.3、3.4、3.5的要求。

注1：热稳定性不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。

注2：

一般地，效期为1年时选择不超过1个月的产品，效期为半年时选择不超过半个月的产品，以此类推。但如

超过规定时间，产品符合要求时也可以接受。

注3：根据产品特性可选择3.7a）,3.7b）方法的任意组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证在效期内产

品性能符合标准要求。

4试验方法

4.1外观

在自然光下目视检查，应符合3.1的要求。

4.2阳性参考品符合率

检测国家参考品或经国家参考品标化的阳性参考品，按试剂盒说明书进行操作，根据说明书进行判

定，结果应符合3.2的要求＜

4.3阴性参考品符合率

检测国家参考品或经国家参考品标化的阴性参考品，按试剂盒说明书进行操作，根据说明书进行判

定，结果应符合3.3的要求。

4.4最低检出限

检测国家参考品或经国家参考品标化的最低检出限参考品，按试剂盒说明书进行操作，根据说明书

进行判定，结果应符合3.4的要求。

4.5重复性

检测国家参考品或经国家参考品标化的精密性参考品，平行检测10次，计算10次检测值的平均值

G）和标准差（SD）,根据式⑴计算变异系数（CV）,结果应符合3.5的要求。

SD

CV

=

=/100%

（1）

式中：

CV——变异系数；

SD——检测结果的标准差；

狓——检测结果的平均值。

4.6批间精密度

取3个批号的试剂盒，分别检测国家参考品或国家参考品标化的精密性参考品，每批次重复10次,计算30次检测值的平均值（狓）和标准差（SD）,根据式（1）计算变异系数（CV）,结果应符合3.6项的要求。

4.7稳定性

4.7.1效期稳定性

取到效期后的样品按照4.2、4.3、4.4、4.5方法进行检测，应符合3.7a）的要求。

4.7.2热稳定性试验

取有效期内样品根据生产企业声称的热稳定性条件，按照4.2、4.3、4.4、4.5方法进行检测，应符合3.7b）的要求。

5标识、标签和使用说明书

应符合GB/T

29791.2的规定。

应在说明书中注明最低检测限的范围。

6包装、运输和贮存

6.1包装

包装储运图示标志应符合GB/T

191的规定。包装容器应保证密封性良好、完整，无泄漏，无破损。

6.2运输

试剂盒应按生产企业的要求运输。在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪

浸淋，防止与酸碱物质接触,，携止内外包装破损。

6.3贮存

试剂盒应在生产企业规定条件下保存＇V

附录A

（资料性附录）

现行参考品说明书*

丙型肝炎病毒抗体国家参考品

National

reference

materials

for

hepatitis

C

virus

antibody

reagents

A.1批号

300010—201509。

A.2性状

液体。

A.3用途

本品系用无菌方法采集丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）阴性和阳性人血浆，经多家抗HCV试剂检测

筛选，用RIBA及PCR等方法确证，并经多个实验室标定。用于丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（酶联

免疫法、化学发光法等）定性检测试剂的质量控制及评价。

A.4

包装

冻存管。

A.5规格

本参考品共65支样品，组成见表A.L0

表A.1参考品的组成类型

编号

规格/支

支数

阴性参考品

N1

〜N30

0.3

mL

阳性参考品

P1

〜P30

0.3

mL

精密性参考品

J

1.0

mL

灵敏度参考品

L1

〜L4

0.3

mL

A.6使用方法

本参考品使用时满足表A.2的条件。

现行参考品说明书可在中国食品药品检定研究院网站查询.参考品说明书会根据参考品的批次进行变更。

表A.2参考品的使用

项目名称

质量控制标准

阴性参考品符合率

阴性参考品符合率（-/-）》29/30

阳性参考品符合率

阳性参考品符合率（+

/

+）》29/30

精密性（重复性）

CVC15%狀=10）（酶联免疫法）

CVC10%狀=10）（化学发光法）

最低检出限

L1应检出阳性；L2应检出阳性；

L3应检出阳性或阴性；L4应检出阴性

A.7贮藏条件

长期保存置于一70

°C以下。

A.8注意事项

A.8.1上述参考品含有取自人类的材料，并且/或潜藏有传染性成分。未经灭活处理，必须视为潜在的污染物质，应按传染性物品处理。

A.8.2使用时应待参考品完全融化摇匀后方可加样，冻融次数不超过3次。

参考文献

[1]

YY/T

0316-2016医疗器械风险管理对医疗器械的应用

[2]

YY

0466-2003医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号

中华人民共和国药典（2015年版，三部）

化学发光免疫分析法 篇3

【关键词】 全自动化发光免疫分析；放射免疫法；血清促甲状腺激素

【中图分类号】R446.62 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0202-02

随着医疗科技不断的发展完善，医疗检验也逐渐趋于自动化、标准化。全自动化发光免疫法和放射性免疫法是临床中应用率较高的两种检验方式，在临床中有着非常重要的作用。我院在2012年9月-2014年9月间对全自动化发光免疫分析、放射性免疫法在血清促甲状腺激素中的检测情况进行调查，旨在进一步了解全自动化发光免疫分析、放射性免疫法的作用。

1.资料与方法

1.1一般资料

选择我院2012年9月-2014年9月间51例来院就诊的患者，患者平均年龄为（45.6±21.2）岁，男性26例，女性25例，所有患者均同意参与调查。

1.2一般方法

1.2.1仪器和试剂：全自动化发光免疫分析仪器均为德国Siemens 公司提供；放射性免疫法试剂由天津协和生物技术有限公司提供。

1.2.2调查方法：所有患者在参与调查前均禁食8h，抽取患者空腹静脉血，在4000 r/min条件下离心震荡4min，分离血清，而后将其放置于零下25摄氏度中保存。采用全自动化发光免疫分析法和放射性免疫法对血清促甲状腺激素进行检测，两种检测方式均在20天内完成。所有操作均按照说明书进行。

1.3评价指标

所有内容均采用准确度、精准度、相关性进行评价。批间变异系数低于10%；批内变异系数低于5%，回收率在90%-110%之间。

1.4数据统计

文中数据采用spss18.0軟件进行处理，计数资料采用%表示，资料采用卡方检验；计量资料采用 X±s表示，资料采用t值检验，P<0.05认为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1两种检测方式的精准度：低值水平的放射性免疫法批内变异系数、批间变异系数超过标准值，且与全自动化发光免疫分析比较存在明显差异，P<0.05；中值水平中全自动化发光免疫分析的批间变异系数与放射性免疫法比较存在明显差异，P<0.05；高值水平中全自动化发光免疫分析与放射性免疫法的批内、批间变异系数比较均无明显差异，P>0.05（详下见表1）。

3.讨论

血清促甲状腺激素主要来源于垂体，是一种糖蛋白类激素。血清促甲状腺激素的相对分子质量为28000mol，其是甲状腺疾病诊断中最灵敏的标志物，同时也是最重要的标志物，是判断甲状腺疾病的首选指标。血清促甲状腺激素的分泌情况与体内的游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素有着非常密切的联系，此三者间属于典型的负反馈调节系统。在我院的研究中采用了全自动化学发光免疫法进行分析，此种分析方式主要以链霉亲和素为载体，以Lumi-phos503为荧光底物，在碱性磷酸酶的作用下使磷酸酯基发生水解。此种检测技术非常灵敏，且自动化程度非常高，能够进行大样本量检测，因此非常适合在临床中应用。

放射免疫分析法是最传统的免疫分析方式，此种方式技术较为成熟，费用非常低廉，且对实验环境要求较低，因此非常适合基层医院使用。放射免疫分析法同时也具有非常高的准确性和精密度，在我院的调查结果中显示：低值水平的放射性免疫法批内变异系数、批间变异系数超过标准值，且与全自动化发光免疫分析比较存在明显差异，P<0.05；中值水平中全自动化发光免疫分析的批间变异系数与放射性免疫法比较存在明显差异，P<0.05；高值水平中全自动化发光免疫分析与放射性免疫法的批内、批间变异系数比较均无明显差异，P>0.05。低值水平、中值水平以及高值水平下的全自动化发光免疫分析和放射性免疫法回收率比较均无明显差异，P>0.05，且所有检测结果均符合检测标准。虽然在低值水平中放射性免疫法批内变异系数要高于全自动化发光免疫分析法，但其在中值、高值水平中的检测精准度均符合检测标准。因此，可以认为两种检测方式均具有较好的精准度和准确性。

总的来说，全自动化发光免疫分析法与放射性免疫法在血清促甲状腺激素的检测中均由较好的准确度和精准度，但全自动化发光免疫分析法的精准度要稍高于放射性免疫法。

参考文献

[1]吴婴. 放射免疫分析与电化学发光法测定血清 FT3、FT4 结果分析[J].放射免疫学杂志，2010，23（1）：29-30.

[2]马红霞，周运恒，杨蔺，等. ELISA 法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg 结果比较分析[J]. 医学检验，2010，25（6）：473-474.

[3]喻荣华，吴雁，郑家深，杨昌伟，等.全自动化发光免疫分析与放射免疫法测定血清促甲状腺激素的对比分析[J].2013，12（10）：1097-1098.

化学发光免疫分析法 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

60例HCV确诊感染者血清标本来自该院的门诊和住院患者, 其诊断符合2004年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、中华医学会肝病学分会联合修订的《丙型肝炎防治指南》的有关标准[1], 其中男性33例, 女性27例, 年龄18~82岁, 平均年龄 (39.8±4.3) 岁, 病程3个月~21年, 平均病程 (6.5±2.1) 年。所有患者均知情同意, 签署知情同意书。100例正常血清标本来自该院自愿参与研究的健康体检者, 其中男性36例, 女性24例, 年龄18~81岁, 平均年龄 (39.4±3.9) 岁。

1.2 仪器与试剂

ELISA法仪器为瑞士FAME全自动酶标分析系统, 采用厦门新创科技有限公司生产的抗-HCV试剂盒;CLIA法仪器为美国强生Vitros 3600化学发光免疫分析仪, 试剂盒为相配套试剂。确认试剂 (重组免疫印迹法) 使用Chiton RIBA-3.0 SIA, Cop E-meryville, CA。

1.3 检测结果判断

ELISA法:以 (0.1×阳性对照平均A值+阴性对照平均A值) 确定Cut-off值, 以检测值≥Cut-off值为阳性。CLIA法:S/CO.值≥1为阳性。确认试验:出现2条以上HCV蛋白条带为阳性。

1.4 方法

同时用ELISA法和CLIA法对160份样本进行抗HCV抗体检测, 按说明书进行操作。另选取100份化学发光法初检结果阳性的标本, 分为两组:低值组 (1

1.5 统计方法

用四格表统计临床数据, 并计算阴性、阳性以及总符合率, 所得数据采用统计学软件SPSS17.0处理, 样本率以χ2检验。用Kappa检验计算发光法试剂与ELISA试剂的诊断一致性, 按照Kappa系数大小以极差、微弱、弱、中度、高度和极强对诊断一致性强度进行判断, 极差:Kappa系数<0;微弱:Kappa系数0~0.2;弱:Kappa系数0.21~0.4;中度:Kappa系数0.41~0.6;高度:Kappa系数0.61~0.8;极强:Kappa系数0.81~1.0[2]。

2 结果

2.1 ELISA和CLIA方法检测丙型肝炎病毒抗体结果的符合性

结果显示使用传统ELISA试剂与化学发光方法试剂检测抗HCV抗体的诊断一致性较高, 临床检测中差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

注:阳性符合率:87.7%, 阴性符合率:91.3%, 总符合率:90.0%, χ2检验:χ2=280.000, P=0.000。

2.2 化学发光法抗-HCV初检阳性标本的RIBA确认试验结果见表2。

3 讨论

目前广泛使用的第三代HCV抗体ELISA试剂增加了HCV Ns5区表达的蛋白作为抗原, 大增加了灵敏度和特异性。但临床使用该类试剂筛检HCV感染者, 仍存在一定数量的假阳性和假阴性结果[3], 特别是在HCV低流行率人群中, 如无偿献血者, 假阳性问题一直比较突出。此外, 国内常用的HCV抗体酶免试剂皆没有灰区的设定, 试剂盒cutoff值计算方法各厂家也都不一致, 导致国产试剂盒之间的检测性能存在较大的异质性, 亦是假阳性比较多的原因[4,5]。

在临床实验室中检验中, 需先对使用的方法和程程序进行评估, 确定其符合要求后才可正式使用。Kappa检验是用于分析计数资料和等级分组资料一致性检验中的一种方法, 在肝炎病毒血清标志物等二分变量 (阴性、阳性) 检测中, 一般选择使用使用检验法, 以判断不同方法学是否存在一致性及相关程度。该文结果显示化学发光法与酶联免疫法在丙型肝炎病毒抗体检测中的Kappa系数达到0.76, 具有高度一致性, 与同类研究报道结果基本一致[4], 结果表明两种试剂均可用于血源筛查、临床术前初筛。ELISA试剂的特异性较好, 发光试剂的灵敏度较高, 两种试剂均存在漏检现象, 实际工作中如能联合应用可提高检出率[6]。

另外该研究参照美国CDC丙型肝炎实验导则[7], 使用S/CO.≥8可判断为阳性作为分组依据, 对发光法初筛阳性的标本再进行RIBA确认试验, 发现低值组的阳性率为24%, 而高值组的阳性率为88%, 提示中国人群的抗HCV阳性预测值与美国有一定的差异, 目前的抗-HCV诊断试剂盒均采用基因工程或合成多肽抗原, 而由于HCV基因易发生变异, 其基因呈现高度异质性, 编码氨基酸序列明显改变, 可引起抗原性的改变, 现阶段试剂的检测抗原多为2型抗原, 而以往的研究发现, 我国HCV患者多为1型, 因此当前的试剂并不适用于中国所有地区[4]。提示实验室应对抗HCV试剂的S/CO.比值设定进行评估, 使用在所有人群中经过验证的能够预测确认试验≥95%阳性率的S/CO.比值作为是否进行确认试验的依据, 并设立一定范围内的灰区, 以达到灵敏度和特异性的最佳平衡[8], 该研究还提示对初检呈弱反应者有必要进行确认试验, 跟踪观察。

摘要：目的 分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的应用价值。方法 同时应用化学发光法和酶联免疫吸附法检测60例丙肝确诊感染者和100例健康体检者的抗丙型肝炎病毒抗体, 计算其阴性符合率、阳性符合率以及总符合率, 用Kappa检验计算待评价诊断一致性。选取化学发光法初检验结果为阳性的标本100例, 按照S/CO.值分为低值组 (1<S/CO.<8) 和高值组 (S/CO.≥8) , 经抗HCV经重组免疫印迹试验 (RIBA) 对化学发光法试剂的检测界限值进行评估。结果ELISA法与化学发光法检测HCV抗体结果阳性符合率:87.7%, 阴性符合率:91.3%, 总符合率:90.0%, Kappa系数为0.760, 两者具有高度的一致性, 两种方法在常规临床检测中并无明显差异。阳性低值组中12份标本经RIBA试剂确证为阳性, 而高值组中44份标本确证为阳性。结论 ELISA是目前HCV抗体筛查中较为常用的方法, 其试剂盒多为第三代试剂, 特异性较好, 化学发光法近期在HCV抗体筛查中逐渐得到重视, 其试剂的灵敏度较高, 两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。化学发光法的阳性判定标准应进行评估, 以提高特异性。

关键词：丙型肝炎,抗体,化学发光,ELISA

参考文献

[1]中华医学会肝病学分会, 中华医学会传染病与寄生虫病学分学.丙型肝炎防治指南[Z], 2004.

[2]杨凡, 万海英, 单咏梅, 等.应用Kappa检验对乙型肝炎病毒血清标志物和丙型肝炎病毒抗体检测方法的评估[J].中华实验和临床感染病杂志:电子版, 2010, 4 (1) :52-55.

[3]李新建.酶联免疫法检测血清丙肝抗体的测量不确定度的评估[J].中国输血杂志, 2013, 26 (7) :630-632.

[4]张旋, 裴元元, 宋世军, 等.4种国产丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂的检测结果分析[J].检验医学与临床, 2012 (22) :2869-2870.

[5]吴军, 蒋理, 谢而付, 等.三种国产抗-HCV酶联免疫诊断试剂检测结果与电化学发光法比较[J].中华临床医师杂志:电子版, 2013 (20) :9056-9058.

[6]王燕, 尹秋霞, 窦恒利, 等.化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价[J].标记免疫分析与临床, 2013, 20 (4) :246-250.

[7]Alter MJ, Kuhnert WL, Finelli L.Guidelines for laboratory testingand result reporting of antibody to hepatitis C virus.NNWR Reomm Rep[J].2003, 52 (1) :13-16.

化学发光免疫分析法 篇5

微弱发光分析技术在药物分析中具有广泛的应用前景.以Ce4+-安乃近-罗丹明6G的化学发光反应以及安乃近在胶束中的自氧化化学发光反应为例,介绍了BPCL微弱发光测量仪与流动注射装置相结合测定痕量药物的.微弱化学发光分析方法.

作 者：张仲伦 杨凤珍 张新荣 ZHANG Zhong-Lun YANG Feng-Zhen ZHANG Xin-Rong  作者单位：张仲伦,ZHANG Zhong-Lun(中国科学院生物物理研究所,北京,100101)

杨凤珍,张新荣,YANG Feng-Zhen,ZHANG Xin-Rong(清华大学化学系,北京,100084)

化学发光免疫分析法 篇6

Vacuum Low 错误代码 (600 13 24) , 真空压力低。

故障原因分析:分析仪真空压力低, 主要有以下几种原因:

(1) 废液小桶1路管道系统故障:包括真空泵损坏、隔离瓶、真空压力表、及连接管道漏气。

(2) 废液小桶2路管道系统故障:包括废液泵损坏, 及连接管道漏气。

(3) 废液小桶3路管道系统故障:包括冲洗分离探针所对应的夹断阀损坏, 及连接管道漏气。

(4) 废液小桶4路管道系统故障:包括碱泵和废液探针所对应的夹断阀损坏, 以及连接管道漏气。

(5) 废液小桶5路管道系统故障:包括试剂和辅助试剂探针冲洗台所对应的夹断阀损坏;冲洗分离探针冲洗台所对应的两通阀损坏;孵育环、试剂探针冲洗台排液管所对应的两通阀损坏;主试剂仓、辅助试剂仓排液管所对应的两通阀损坏;及连接管道漏气。

2常规检修

(1) 检查废液小桶1路管道系统:

用夹钳夹在脱水器与真空压力表相连接侧, 若运行真空压力诊断测试正常, 说明真空泵工作正常, 真空压力表及连接的管道都正常;再用夹钳夹在脱水器另一侧, 若运行真空压力诊断测试正常, 说明脱水器无泄漏, 工作正常。

(2) 检查废液小桶2路管道系统:

检查废液泵是否动作, 废液能否排泄到废液桶, 若工作正常, 说明废液泵工作正常, 连接管道不漏气。

(3) 检查废液小桶3路管道系统:

检查冲洗分离探针1、冲洗分离探针2、冲洗分离探针3、冲洗分离探针4, 所对应的夹断阀V38、V39、V40、V41是否动作, 夹断阀损坏造成冲洗分离探针某一路夹断阀工作不正常漏气, 以及检查所连接的管道是否漏气。

(4) 检查废液小桶4路管道系统:

检查碱泵和废液探针所对应的夹断阀V37是否工作正常, 若夹断阀工作不正常漏气, 以及检查所连接的管道是否漏气。

(5) 检查废液小桶5路管道系统:

(a) 检查试剂探针1冲洗台、试剂探针2冲洗台、试剂探针3冲洗台、试剂探针4冲洗台和辅助试剂探针冲洗台, 所对应两桶阀V31、V30、V29、V28是否工作正常, 若两通阀损坏造成漏气, 以及检查连接管道是否漏气。

(b) 检查冲洗分离探针1冲洗台、冲洗分离探针2冲洗台、冲洗分离探针3冲洗台、冲洗分离探针4冲洗台, 所连接的两通阀V47是否工作正常, 两通阀工作不正常漏气, 以及检查连接管道是否漏气。

(c) 检查主试剂仓、辅助试剂仓排液管所对应的两通阀V63是否工作正常, 两通阀工作不正常漏气, 以及检查连接管道是否漏气。

(d) 检查孵育环、试剂探针1冲洗台、试剂探针2冲洗台、试剂探针3冲洗台排液管所对应的两通阀V64是否工作正常, 两通阀工作不正常漏气, 以及检查连接管道是否漏气。

按照以上的检修步骤进行常规检修。

3故障检修

在常规检修过程中, 当用夹钳夹在V47阀和废液小桶之间, 此时运行真空压力诊断测试, 真空压力恢复正常。因此判断V47阀损坏 (V47阀损坏后, 从冲洗分离探针1、冲洗分离探针2、冲洗分离探针3、冲洗分离探针4冲洗台漏气, 造成真空压力低。) 。更换V47阀后, 试机, 真空压力测试正常, 故障排除。

Waste Handing:废液管道系统;Waste#:废液小桶#管道;Waste:废液桶;Water trap:隔离瓶;Lumo Waste probe:发光室中的废液探针;Reagent Probes Wash Stations:试剂探针冲洗台;Aspirate Probe#:#号冲洗分离探针;Over Flow Shared By R#:探针#冲洗台;Probe#:探针#;Ancillary Probe:辅助试剂探针;Waste Transfer Pump:废液泵;Base Metering Pump:碱泵Incubation Ring Drains:孵育环排液管道;Vacuum Sensor On GIOB BOARD:GIOB板上的真空压力检测器;Refrigerator Drains:主试剂仓排液管道;Ancillary Queue Drains:辅助试剂仓排液管道;Luminometer Drains:发光室排液管道;Check Value:减压阀;Vacuum Gauge:真空压力表;Vacuum Pump:真空泵;Air beed:放气;V37、V38、V39、V40、V41:夹断阀;V28、V39、V30、V31、V63、V64:两通阀;

摘要：本文叙述了引起西门子ADVIA Centaur全自动化学发光免疫分析仪真空压力低的主要原因, 并详细介绍了真空压力故障的常规检修过程。

化学发光免疫分析法 篇7

1 资料与方法

1.1 标本来源

以我院2013年3月~2015年3月门诊与病房送检标本7856份展开研究, 均为无菌采集, 置于低温冰箱中备用。

1.2 检测方法

1.2.1 使用仪器

酶联免疫吸附法仪器为夏门新创试剂和MK3型酶标仪、YR2WASH21型洗板机 (法国ADIL提供) 。Elecsys2010全自动电化学发光仪和配套试剂 (Roche公司提供) 。检测结果判断标准:阳性:样品的A值≥Cutoff值者;阴性:样品A值<临界值。

1.2.2 检测操作

对所有标本分别行酶联免疫吸附法及电化学发光免疫分析法检测, 检测严格执行试剂批号、操作者、实验室一致原则, 按照操作步骤完成。且进行完以下两种检测后行过夜孵育法WB作为金标准评价检测结果, 若WB无法确认结果则行核酸检测。

1.2.2. 1 电化学发光免疫分析法

采用“三明治”法。第一步, 将—份待测样品与一份三联吡啶钌复合标记HIV特异性抗体及一份生物素抗HIV标单克隆抗体共同孵育成“三明治”样抗原-抗体复合体;第二步, 加入已经经由链亲和素标记的磁微粒进行孵育, 利用生物素作用形成固相复合体。反应液吸入流动室中, 用磁铁将磁微粒吸附到电极表面。加入三丙胺后电极加压, 启动电化学发光反应, 利用光电倍增管对光强度进行测量, 光强度与复合体浓度之间存在线性关系, 利用光强度得到样品HIVCutoff值。

1.2.2. 2 酶联免疫吸附法

无菌采集乙二胺四乙酸抗凝全血, 800转/min速度下离心。操作按照HIV抗体诊断试剂盒说明书进行HIV抗体筛查试验。

1.4 统计学方法

应用统计学软件SPSS 19.0处理有关数据, 准确率用n (%) 表示, 行χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法敏感性与特异性比较

7856份标本中, WB证实共19例为阳性, 阳性率0.24%。其中电化学发光免疫分析法全部检出, 无漏诊与误诊情况, 敏感性与特异性均为100%, 酶联免疫吸附法初筛出22例, 其中3例为假阳性, 敏感性与特异性分别为100%、86.4% (19/22) , 两种检测方法的敏感性与特异性比较均无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

2.2 两种检测方法HIV阳性分布结果

电化学发光免疫分析法Cutoff指数及酶联免疫吸附法OD/OC (吸光度值/临界值) 均呈现相同趋势及Cutoff指数与OD/OC越大, 阳性符合率越高。

3 讨论

艾滋病为严重威胁人类生命安全的感染疾病, 做好疾病预防及筛查工作以最大限度防止HIV病毒的传播对于公众卫生事业具有重大意义[3]。

本研究为探析更高效抗HIV检测方法, 将电化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测结果进行对比, 结果显示, 两种检测方法均具有较高敏感性, 电化学发光免疫分析法特异性更高, 但差异无统计学意义。提示两种检测方法均有较高准确性。国内HIV感染以血清病毒抗体检测作为临床诊断标准, 血清中抗HIV抗体为是否发生感染的依据, 病毒及相关抗原主要作为辅助手段[4]。原因在于体内HIV清除难度极大, 感染往往将终生持续, 因此体内抗体的检出一般即可断定病毒的存在[5]。酶联免疫吸附法为我国大多数医院抗HIV测定方法, 但此方法需将游离态抗原 (或抗体) 与结合态抗原 (或抗体) 分离开来, 因此检测过程需反复加样并洗板, 误差几率随之增大[5,6]。此外, 酶标板孔间也容易存在差异而导致变异系数增大, 这就是酶联免疫吸附法假阳性更高的原因。再有, 该方法操作繁琐, 需等待1~2h才出结果, 增加了判断难度;若标本浓度太低, 还容易导致假阴性结果[7]。电化学发光免疫分析法为磁性微珠包被技术、生物素-亲和素技术、电化学发光技术综合得到的检测技术, 灵敏度较高, 批内、批间误差也可大幅减少, 为临床提供精确检测结果。此外, 该方法的检测过程在封闭、流动系统中完成, 交叉污染情况得以避免, 且试剂稳定, 结果可靠。值得一提的是, 该方法最大优势在于其分析时间与酶联免疫吸附法相比明显缩短, 仅为20min, 更加快速。有研究提出[8], 电化学发光免疫分析法的另一个优势在于其测定线性范围比酶联免疫吸附法高出4个数量级左右, 因此可有效避免前带倒钩等引起的假阴性情况, 稳定性与重复性均较佳, 可实现批量化分析, 诊断窗口期大幅缩短。但也不可忽视, 电化学发光免疫分析法成本较高, 目前尚难以在小医院得到普及。

综上所述, 酶联免疫吸附法与电化学发光免疫分析法检测抗HIV准确性均较高, 前者比较费时但容易普及;后者更为快速, 但费用高, 各有优势, 医院可结合自身情况选择抗HIV检测方法。

摘要：目的 比较酶联免疫吸附法与电化学发光免疫分析法检测抗HIV的效果。方法 以门诊与病房送检标本7856份展开研究, 对所有标本分别行酶联免疫吸附法及电化学发光免疫分析法检测, 以WB检测结果为基准对两种检测方法的敏感性与特异性进行比较。结果 7856份标本中, WB证实共19例为阳性, 阳性率0.24%。其中电化学发光免疫分析法全部检出, 无漏诊与误诊情况, 敏感性与特异性均为100%, 酶联免疫吸附法初筛出22例, 其中3例为假阳性, 敏感性与特异性分别为100%、86.4% (19/22) , 两种检测方法的敏感性与特异性比较均无统计学意义 (P>0.05) 。结论 酶联免疫吸附法与电化学发光免疫分析法检测抗HIV准确性均较高, 前者比较费时但容易普及;后者更为快速, 但费用高, 各有优势, 医院可结合自身情况选择抗HIV检测方法。

关键词：酶联免疫吸附法,电化学发光免疫分析法,HIV,感染

参考文献

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化学发光免疫分析法 篇8

1 工作原理

由于化学发光分析具有一系列优点, 它在环境科学、生命科学及临床医学上得到愈来愈广泛的应用, 成为现代分析领域中一种有效的微量及痕量分析技术。特别是近十年来, 将化学发光与免疫测定法结合, 创立了发光免疫技术, 并在医学和免疫学中快速推广应用。免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物, 直接标记在抗原或抗体上, 经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。在免疫反应结束后, 加入氧化剂或酶的发光底物。化学发光物质经氧化剂的氧化后, 形成一个处于激发态的中间体, 会发射光子释放能量以回到稳定的基态, 发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。

由于化学免疫发光所产生的荧光属于微弱信号, 其能量范围大约在10-15~10-17W, 所以需要配制最微弱 (仪器能检测的最小的光信号) 和最强的 (仪器能检测的最大的光信号) 发光试剂, 来检验所制造的化学发光免疫分析仪器的量程范围是否满足临床检验的要求。另外还要配置一定梯度的发光试剂, 来检验所制造的化学发光免疫分析仪器的线性相关系数是否达0.99以上, 以及对某个发光值的重复性CV值是否能控制在3%以内。仪器的这些性能指标都是关系到临床检验准确性的关键性因素。

一般情况下, 要检验仪器的这些关键指标, 需要现场配制比例合适的辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (AP) 以及氧化发光底物, 加到96孔板中, 放入仪器中检测其发光值, 一般用RLU (相对光子数) 来表示发光值的大小。但这种方法存在以下几个方面的问题: (1) 配制出的试剂的稳定发光期太短 (约30分钟以下) , 在仪器制造过程需要反复测试仪器指标, 非常不方便。 (2) 试剂发光高值、低值、梯度值的配制过程手工操作繁琐, 耗时较长, 不适合批量制造的仪器的检验。 (3) 试剂的成本较高, 为检验一台仪器, 又需要反复配制不同发光值的试剂, 不适合批量制造的仪器的检验。

为解决上述问题, 本研究采用稳定电子电路加衰减片的方法, 研制出价格低廉、可以反复使用的稳定光源, 替代价格昂贵、配制繁琐的试剂光源, 来检验批量制造的化学发光免疫分析仪器的各项性能指标。

2 系统结构

本光源采用波长为465nm的蓝光发光二极管作为光源, 用遮光填充物将单个光源四周封闭, 仅留发光方向的孔, 覆盖上合适衰减倍数的衰减片, 壳体上留有电位器调节孔, 根据光源标称值调校该孔光源的发光值。

2.1 稳定光源的原理框图

9孔稳定光源依次定义为L1、L2……L9, 其中L1是仪器能测量到的发光的下限值, L9是仪器能测量到的发光上限值, L9接近但低于仪器的饱和值。L2至L8是梯度发光值, 既包含了在仪器量程范围内每个数量级的发光值, 又尽可能地相距合适的数值, 以便很好地反映仪器的线性度。

稳定光源的外形尺寸与抗原或抗体包被的载体96孔板 (每板12条, 每条8个孔) 相同, 光源孔隔行分布在96孔板标准孔位, 每个光源孔下方留有电位器阻止调节孔。每个孔的发光二极管需用遮光填充物相互密闭, 避免相互的光干扰, 发光二极管上方的衰减片需固定牢固, 每个发光孔需凸起1mm, 便于仪器光纤探头严密对准光源孔进行测试。每个发光孔孔径为4mm, 比96孔板的孔径8mm小, 目的是使仪器光纤探头的橡胶套严密地包裹住单个光源孔, 避免其他孔的光漏进来。稳定光源壳体、表面PC贴均采用黑色, 避免微弱光的漫反射造成干扰。

2.2 光源校准方法

光源标定方法操作顺序如下:

第一步, 配制标定液: (1) 取10u L的酶 (BAP) 与90u L的反应缓冲液配置成100u L溶液 (即母液) , 待用。 (2) 配制溶液A, 用90u L蒸馏水和10u L母液混合, 混匀, 制得待用。 (3) 配制溶液B, 用90u L蒸馏水和10u L溶液A混合, 混匀, 制得待用。 (4) 配制溶液C, 用90u L蒸馏水和10u L溶液B混合, 混匀, 制得待用。

第二步, 调整仪器工作电压:取一个干净的微孔板, 在单孔中先加入10u L溶液C, 再加入50ul底物, 常温避光反应。在仪器上读数, 按反应后第5分钟的读数为约10000RLU (即约10000个相对发光单位-RLU) 设定仪器A的倍增系数。

第三步, 标定标准光源:9孔标准光源上大孔为光源孔, 下方对应的小孔为该光源亮度的调节旋钮位置。各个孔的相对光强值分别为:1K;5K;50K;500K;2M;5M;10M;15M;19M。

将稳定光源放在仪器上标定。以L6 (5M) 孔为例, 调节孔位对应的阀门的位置, 顺时针方向调节阀门是增大光子信号量, 逆时针是减小光子信号量。调节后到仪器A上检测, 获取信号量, 把该孔最后调节到约为4M (范围4.5M~5.5M) , 误差不超过±5%。

3 稳定光源的性能参数及测试数据

3.1 性能参数

信号量范围:20~19, 000, 000RLU。连续工作时间:大于100小时。重复性:CV≤2%。线性相关系数:R≥0.990。

3.2 稳定光源实测数据

1K孔CV值1.26%;5K孔CV值1.19%;50K孔CV值1.08%;500K孔CV值0.92%;2M孔CV值0.83%;5M孔CV值.0.77%;10M孔CV值0.71%;15M孔CV值0.65%;19M孔CV值0.62%。

4 结论

本光源采用了稳定的电子电路控制微弱光发光值, 等同于试剂发光值, 将繁琐昂贵的试剂配制工作转化成简单易行的测试仪器工具, 从根本上解决了化学发光仪器批量制造的检验问题。

参考文献

[1]林金明, 赵丽霞.化学发光免疫分析[M].北京:北京工业出版社, 2009:147-154.

化学发光免疫分析法 篇9

关键词：化学发光微粒子免疫分析,梅毒抗体,丙型肝炎抗体

近年来, 我国梅毒和丙型肝炎的感染率呈不断上升的趋势, 我市孕产妇丙型肝炎感染率为0.52%, 梅毒感染率为1.79%[1]。丙型肝炎病毒 (HCV) 主要通过血液和母婴垂直传播, 梅毒螺旋体可通过胎盘和血液传染给胎儿, 妊娠合并丙型肝炎、梅毒对围生儿危害极大。因此, 妊娠期梅毒和HCV抗体被列为围生期必要的筛查试验。选择敏感性高、特异性强、简便快捷的实验方法应用于临床血样标本检测, 能有效的减少医源性传播, 快速有效的对患者做出适当的治疗和处理措施。2012年我院引进美国雅培i2000SR全自动微粒子发光免疫分析仪, 广泛应用于术前传染病筛查。本文选择使用化学发光微粒子免疫分析法 (CMIA) 进行梅毒和丙型肝炎抗体检测, 并对HCV抗体使用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 和金标法对比, 对梅毒抗体使用梅毒螺旋体抗体凝集法 (TPPA) 和金标法进行对比, 现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1标本来源:收集我院2013年1月至2014年4月17033例术前检查及分娩患者血清标本, 其年龄为18~40岁, 平均年龄26岁, 孕产次1~4次。

1.2试剂与方法:CMIA法采用美国雅培i2000SR全自动微粒子发光免疫分析仪, 配套试剂为ARCHITECT Syphilis TP和Anti-HCV。ELISA法试剂盒购自上海科华生物工程有限公司, 用Anthos2010酶标仪测试结果。这两种方法使用仪器自动判读检测结果。金标法试剂购自厦门英科新创科技有限公司, TPPA试剂由日本瑞必欧株式会社生产, 这两种方法手工操作, 使用肉眼判读结果。4种方法检测试剂均在有效期内使用。

1.3标本检测:以上所有标本4000 r/min离心5 min取血清, 采用CMIA法进行Anti-HCV和Syphilis TP检测, 操作严格按照仪器和试剂说明书进行。对Anti-HCV使用ELISA法和金标法对比检测, 对TP抗体使用金标法和TPPA法进行对比检测。

1.4统计学分析:统计数据用18.0进行分析, 采用χ2检验对结果进行统计学分析。P<0.05有统计学意义。

2结果

2.1在全部17033例检测样本中, 如表1、2所示, 使用CMIA检测出HCV抗体阳性标本共89份, 检出阳性率为0.52%;HCV-ELISA检测阳性样本73份检出阳性率为0.43%, HCV-金标法阳性样本68份, 检出阳性率为0.40%。HCV-CMIA法与HCV-ELISA法的一致性为99.9%, 配对χ2检验, χ2=10.23, P>0.05, 检出阳性差异无统计学意义。HCV-CMIA法与HCV-金标法的一致率为99.8%。配对χ2检验, χ2=15.55, P>0.05, 检出阳性差异无统计学意义。

在全部17033例检测样本中, 如表3、4, TP-CMIA阳性标本213份, 检出阳性率为1.25%;TPPA阳性标本203份, 检出阳性率为1.19%;TP-金标法标本197份, 检出阳性率为1.16%。TP-CMIA与TPPA一致率为99.9%, 配对χ2检验, χ2=8.1, P>0.05, 检出阳性差异无统计学意义。TP-CMIA与TP-金标法一致率为99.6%, 配对χ2检验, χ2=11.95, P>0.05, 检出阳性差异无统计学意义。

2.2如表5、6显示, 使用CMIA法检测结果阳性时, 当HCV-CMIA检测值在1.0~2.0时, HCV-CMIA法与另两种方法检测结果差异较大, HCV-CMIA检测值越高, 三种方法的差异越小。当HCV-CMIA检测值>6.5时, 三种方法的符合率几乎达到100%。当TP-CMIA检测值在1.0~2.0时, TP-CMIA法与另两种方法检测结果差异较大, TP-CMIA检测值越高, 三种方法的差异越小。当TP-CMIA检测值>5.0时, TP-CMIA法与TPPA法检测结果基本一致。

3讨论

HCV主要通过输血和使用血液制品以及母婴垂直传播等导致感染。目前, 我国人群丙型肝炎抗体阳性率3.2%[2], HCV抗体阳性表明个体可能已经感染HCV, 可能会传播HCV病毒[3]。虽然大部分感染者没有症状, 但是HCV感染者可能会发展成为慢性肝炎、肝硬化或增加罹患肝细胞癌的风险[4,5,6,7]。所以HCV抗体检测便于临床上早发现、早治疗丙型肝炎。梅毒由梅毒螺旋体感染引起, 妊娠合并梅毒对围生儿危害极大, 极易造成流产、死胎、早产、先天梅毒及新生儿死亡, 是高危妊娠的重点监护对象。因此, 提高梅毒的诊断率是改善围生儿预后的重点。微粒子发光技术的引进能对传染病检测指标进行定量和动态分析。同时, 术前检查采用高灵敏度雅培试剂也大大降低了低水平感染者漏检和假阳性、假阴性结果的可能性, 降低了医疗纠纷发生率。

本试验结果表明, CMIA检测强阳性的标本, 对比方法检测结果均为阳性, CMIA检测弱阳性的标本, 对比方法检测未必是阳性结果。作为筛查试验, 化学发光微粒子免疫分析可以大大减少ELISA法手工操作中可能会出现的实验误差和交叉感染, 大大缩短了操作时间。CMIA明显优于ELISA和金标法, 具有更好的敏感性和特异性, 重复性强, 操作简便, 而且自动化程度高, 避免了职业暴露, 定量结果更适用于患者治疗的定期监测。对于术前传染病的筛查具有广泛临床应用和推广意义, 有助于医师对患者病情的掌握, 是早期临床诊断是有效控制丙型肝炎和梅毒发生的重要手段。

任何检测方法都不能保证样本中含有极低量的HCV或TP抗体, 尤其是处于窗口期早期的样本, 因此, 任何时候取得的阴性结果不能排除病毒感染的可能性。又因样本中生物活性物质结构复杂及抗原抗体特异性的差异, 可能会导致试验假阳性[8], 或受临界值设定的“灰区”限定等, 检测阳性的未必是真正的阳性。尤其当检测值接近临界值时[9], 若要确诊是否为HCV病毒或TP螺旋体现感染, 尚须用其他方法复检。

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化学发光免疫分析法 篇10

1资料与方法

1.1一般资料:收集我院2014年12月至2015年4月142例门诊乙型肝炎患者的血清标本,其中男性76例,女性66例,年龄为16~66岁,平均年龄(43.8±2.1)岁。

1.2方法:采用CLIA与ELISA两种方法对分别对142例血清标本进行HBV-M检测,HBV血清学标志物包括乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎E抗体(HBe Ab)、乙型肝炎E抗原(HBe Ag)、乙型肝炎表面抗体(HBs Ab)、乙型肝炎核心抗体(HBc Ab)等五项指标,按照试剂盒说明书进行操作,同时应用两种方法检测不同浓度的标准品。其中所应用到的仪器为:日立化学发光分析仪、美国SF-2100型酶标仪;化学发光免疫分析法试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供,ELISA检测试剂盒由美国雅培公司提供。

1.3判断依据:(1)ELISA法以OD值与临界OD值的比值为分界点,其中HBs Ag、HBe Ag、HBs Ab测定时,若比值≥1.00则判为阳性,否则为阴性,而HBe Ab、HBc Ab测定时,若比值≤1.00则判为阳性,否则为阴性。(2)CLIA法:其中HBs Ag、HBs Ab测定时以标准曲线作为参考,通过相对光强度(RLU)来计算浓度,此为定量法,当HBs Ag>0.05 IU/m L则判为阳性,HBs Ab>10 IU/m L则判为阳性,否则为阴性;HBe Ag与HBc Ab测定时,以RLU值与临界RLU值的比值为分界点,当比值≥1.00则判为阳性,否则为阴性,而HBe Ab测定时,若比值≤1.00则判为阳性,否则为阴性。

1.4统计学方法:应用SPSS13.0统计软件进行,计量资料以均值±标准差表示,采用t检验;计数资料用百分比表示,采用卡方检验。取P<0.05时差异具有统计学意义。

2结果

2.1 CLIA与ELISA两种方法测定。142例HBV-M结果比较:142例乙型肝炎病毒患者的血清中,对于乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎E抗体(HBe Ab)、乙型肝炎E抗原(HBe Ag)三项标志物CLIA检出率明显高于ELISA,差异比较具有统计学意义(P<0.05),而对于乙型肝炎表面抗体(HBs Ab)、乙型肝炎核心抗体(HBc Ab)两项标志物,CLIA与ELISA的检出率比较无统计学意义(P>0.05),见表1。

2.2 CLIA与ELISA两种方法检测HBs Ag的灵敏度试验:根据卫生部2.00 IU/m L HBs Ag定值参比血清,使用双倍的阴性血清进行稀释,采用CLIA与ELISA两种方法进行检测,结果显示CLIA与ELISA检出最低浓度分别为0.03 IU/m L、0.13 IU/m L,CLIA检测较低HBs Ag水平的敏感度要高于ELISA,但差异比较无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

我国为乙型肝炎的高发国家,据权威调查显示,我国乙型病毒肝炎发生率一直呈居高不下之势,表面抗原携带率达到15%左右。HBV感染的监测是预防及诊治乙型肝炎的重要方面。传统检测方法ELISA检测HBV具有简便快速、价格低廉的好处,对临床乙型肝炎疾病诊断贡献较大,但是由于该检测方法仅限于定性分析,一旦血清标本中的检测指标浓度过大便会受到钩状效应的影响而导致最终结果呈假阴性[3],同时检测过程中也存在着比较多的干扰因素而影响了结果的稳定性,且不利于动态监测病情的发展,使得多数患者的HBV感染的复制情况都无法呈现出来,因而这使得ELISA在临床的应用受限。而在医疗发展进步的当下,为了满足临床实际的需求,必定要有所突破来弥补ELISA的定量缺陷。CLIA是近些年才逐渐发展起来的新一代标记免疫测定技术,是根据发光底物的发光强度来进行检测分析,灵敏度高,本研究中CLIA检出最低浓度可低至0.03 IU/m L,而ELISA则相对高至0.13 IU/m L,这说明CLIA可准确有效地检测出低浓度的乙型肝炎病毒表面抗原。

本研究结果还显示,142例乙型肝炎病毒患者的血清中,对于HBs Ag、HBe Ab、HBe Ag三项标志物CLIA检出率明显高于ELISA,比较具有统计学意义(P<0.05),而对于HBs Ab、HBc Ab两项标志物CLIA与ELISA的检出率比较无统计学意义(P>0.05),这进一步证实ELISA操作便捷,但敏感度欠佳;而CLIA可定量检测HBs Ab、HBs Ag,敏感度更高,对临床早期诊断及动态监测病情的适用价值高。

参考文献

[1]梁秀云.时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫分析法检测人血清乙肝病毒表面抗原浓度的差异性分析[J].医学信息(上旬刊),2011,24(8):4946-4947.

[2]李琦,尚晓泓.化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫吸附法检测感染性疾病抗原抗体的比较[J].国际检验医学杂志,2012,33(7):846-847.