毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱（精选7篇）
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇1
HPLC法测定花蛇解痒片中盐酸小檗碱的含量
建立HPLC法测定花蛇解痒片中盐酸小檗碱含量的方法.方法是采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;以乙腈:0.05mol・L-1磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH值2.8)=28.5∶71.5为流动相,流速1.0ml・min-1,检测波长265nm,进样量10μl;柱温为室温.结果盐酸小檗碱进样量在0.0421～0.4208μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998).精密度试验的RSD为0.33%,重复性试验的RSD为0.93%,加样回收试验的.平均回收率为98.74%,RSD=1.19%(n=6).该方法测定10批样品的盐酸小檗碱平均含量为每片0.39mg,与标准中拟定的0.3mg相近.该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制.
作 者：曾祥林 梁佳 ZENG Xiang-lin LIANG Jia 作者单位：曾祥林,ZENG Xiang-lin(广西食品药品检验所,广西南宁,530021)
梁佳,LIANG Jia(广西中医学院,广西南宁,530001)
刊 名：广西科学 ISTIC英文刊名：GUANGXI SCIENCES年，卷(期)：16(4)分类号：O657.72 R284关键词：盐酸小檗碱 花蛇解痒片 HPLC
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇2
关键词：高效毛细管电泳 (HPCE) ,清热化毒丸,盐酸小檗碱
清热化毒丸由连翘、青黛、黄连、大黄、菊花等15味药物组成, 具有清火化毒, 消肿止痛的作用。用于小儿身热烦躁, 咽喉肿痛, 口舌生疮, 皮肤疮疖口臭便秘, 疹后余毒未尽等症状。盐酸小糪碱是清热化毒丸中主要活性成分之一, 以抗菌消炎为主。
近年来分析小檗碱型生物碱的方法分别有反向高效液相色谱法[1], 离子交换色谱法[2], 胶束色谱法[3], 薄层色谱-荧光分光光度法等。但此样品成分复杂, 且盐酸小檗碱为季胺类生物碱, 碱性强, 极性大, 往往被色谱柱吸附, 影响峰形, 对色谱柱造成很大污染, 高效毛细管电泳 (HPCE) 以其高效灵敏、分离速度快、样品量小、消耗仅微量等优点已越来越多的用于中药成分分析及测定中。本文通过对清热化毒丸中盐酸小糪碱的毛细管电泳条件进行摸索, 建立了盐酸小糪碱含量测定的高效毛细管电泳方法。
1仪器与试剂
1.1 仪器 Beckman P/ACE
5500型高效毛细管电泳仪 (美国Beckman公司) , 配备UV检测器, Chemical Station 工作站;酸度计Model PHS-2CA (上海大中分析仪器厂) ;超声清洗器KQ-500E (江苏昆山市超声仪器有限公司) ;万分之一电子天平 (METTLER-TOLEDO中国) ;涂层熔融石英毛细管柱 (47 cm×75 m, 河北永年光导纤维厂) 。
1.2 试剂
盐酸小檗碱对照品 (批号:110713-200609) 购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯 (天津市广成化学试剂有限公司) , 水为自制重蒸馏水, 其他试剂均为分析纯。所需清热化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂, 批号:9013395) , 购自药店。
2含量测定
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品适量, 加甲醇制成1 mg/ml的对照品溶液, 4 ℃保存备用。
2.1.2 供试品溶液的制备
取清热化毒丸2丸, 剪碎, 称取3.0065 g置于100 ml具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇50 ml, 称重后超声 (功率250 W, 频率30 kHz) 处理30 min, 放冷, 称定重量, 必要时用甲醇补足失重, 过滤。滤液自然挥干后用甲醇溶解, 转移至5 ml容量瓶中, 加入2 ml缓冲液后用甲醇定容, 最后用0.45 μm 有机膜过滤备用。
2.2 电泳条件
涂层熔融石英毛细管柱 (47 cm×75 m, 有效长度为40 cm) ;检测波长为200nm, 进样:氮气压力 (586 KPa) 自动进样5 s, 分离电压为30KV, 柱温25℃, 缓冲液体系为60 mmol/L磷酸缓冲溶液-甲醇 (65:35) , 调节pH值为3.2。
2.3 线性关系考察
精密称取盐酸小檗碱对照品适量分别于10 ml容量瓶中, 加入2 ml缓冲溶液, 用甲醇定容至刻度得0.05, 006, 0.07, 008, 0.09, 0.10 mg/ml的对照品溶液, 依次进样, 以对照品浓度为横坐标对峰面积做回归分析, 得回归方程为Y=1000000x-8143.9, r=0.9993。结果表明盐酸小檗碱在0.05～0.10 mg/ml范围内线性关系良好, (对照品色谱图见图1) 。
2.4 精密度试验
取0.1 mg/ml盐酸小糪碱对照品溶液, 在上述电泳条件下, 连续进样5次, 以峰面积计算RSD为0.50%, 表明在此条件下精密度良好。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液一份, 分别于0, 2, 4, 8, 10 h测定样品的峰面积, 求得RSD值为1.29%, 实验表明供试品在10 h内稳定性良好。
2.6 回收率测定
取5份已知含量的供试品溶液, 加入适量对照品, 按“2.1.2”项下的方法制备, 通过HPCE进行测定, 结果见表1。
2.7 样品含量测定
按“2.1.2”项方法制备供试品溶液3份, 在上述电泳条件下, 每份进样两次取平均值, 得盐酸小檗碱的含量测定结果为0.1357 mg/g (样品色谱图见图2) 。
1.盐酸小糪碱
3讨论
3.1 缓冲溶液的选择
由于盐酸小檗碱为季胺类生物碱, 带有正电荷, 用磷酸氢二钠做为缓冲液可使其保持带有正电荷, 不同的缓冲液及不同的比例会影响成分之间的分离度。本实验先后在硼砂-甲醇及磷酸二氢钠-甲醇不同浓度缓冲体系下进行电泳分离, 发现60 mmol/L磷酸二氢钠-甲醇 (65:35) 的缓冲体系分离度较高, 可达到良好的分离效果。
3.2 pH值的选择
在毛细管电泳中, 电渗流对pH值有较强的依赖性, 直接影响待测成分的出峰时间, pH值降低, 缓冲液呈酸性时, 电渗流减弱, 成分出峰时间延后, pH值升高, 缓冲液偏碱性时, 电渗流增强, 成分出峰时间提前。并且离子的电泳淌度跟有效电荷成正比, 极易受缓冲溶液pH值影响, 因此缓冲溶液的pH值调节与控制是优化分离的重要对策。同时缓冲溶液的pH值也会影响离子的有效电荷, 从而间接影响分离效果。在硼砂-甲醇 (85:15) 缓冲体系 (pH=9.0) 中, 样品的出峰时间短, 但未能达到基线分离。本实验又分别考察了磷酸二氢钠缓冲体系 (pH值分别为3.0、4.0、5.0) 对分离效果的影响。结果表明, pH值为3.0时有良好的分离效果。
3.3 分离电压的选择
本试验考察了电压为15 KV～30 KV 时的影响。结果表明:电压低时, 基线稳定, 但样品的分析时间延长, 峰形变宽;随着电压的增加, 样品的迁移时间缩短, 峰型窄, 分离效果好, 但基线噪音有所增大。基于对迁移时间和基线的综合考虑, 本试验最终选用30 KV 作为分离电压。
3.4 毛细管有效柱长的选择
熔融石英毛细管柱长是改变出峰时间的主要因素之一, 一般目标成分的出峰时间控制在15 min以内为宜。本实验考察了有效长度为40 cm、50 cm、60 cm的毛细管对出峰时间的影响, 结果表明, 三者对于目标组分均有良好的色谱峰形和分离度, 但40 cm柱长出峰时间在5 min左右, 较为快速, 因此优先选择40 cm柱长毛细管。
综上所述, 在目前分析黄连药材及其复方制剂的较常用的含量测定方法中, 高效液相色谱法应用最为广泛, 薄层层析方法已经较为少见。高效液相色谱法分离具有重现性好, 分离效果稳定、灵敏度高的优点, 但是由于小糪碱是季胺碱, 碱性强, 极性强, 易离子化, 且易使液相色谱柱中的ODS染色, 需要大量溶剂冲洗且耗时较多, 而且由于黄连中含多种季胺碱, 极性类似, 液相色谱不易将其分开, 相互之间易造成干扰。HPCE的区带电泳模式, 由于使用熔融石英毛细管空管, 不怕污染和堵塞, 易清洗, 且有分离效率高, 样品需要量极少的特点, 仅使用简单少量的缓冲液, 几乎不产生废液, 分析耗费低, 样品预处理简单, 几乎可称为绿色分析方法, 尤其适合于基质比较复杂, 结构近似的药用植物成分的分析。在本实验中, 可同时分离黄连中的7个季胺生物碱, 专属性和分离度良好, 可用于该类成分的指纹图谱研究。HPCE既可结合质谱技术建立复方药物指纹图谱, 又可进行多种有效成分或指标成分定量, 还可用于体内药物分析, 开展有效成分研究。HPCE分离分析药用植物成分的发展具有极为广阔的前景。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) .北京:化学工版社, 2005:705.
[2]文欣欣, 刘丹华, 余陈欢, 等.薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量.中国中医药信息杂志, 2008, 15 (10) :54.
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇3
关键词：盐酸小檗碱 黄连 磷酸二氢钾
【中图分类号】R-3 【文献标识码】B 【文章编号】1008-1879(2012)03-0219-01
黄连［1］为毛茛科植物黄连、三角叶黄连、云连的干燥根茎，主要成份为盐酸小檗碱我们研究采用HLPC对黄连中盐酸小檗碱含量进行检测，实验结果证明HPLC法重现性良好，结果准确，操作简便，可满足该药材的质量检验要求。
1 仪器与材料
1.1 仪器。SSI二元高压液相色谱仪，Thermo可变波长紫外检测器和EZ Chrom Elite色谱工作站（美国科学技术公司）。
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇4
用高效毛细管电泳法测定姜黄素类化合物中姜黄素的含量.姜黄素在0.450～4.049 g/L内峰面积和浓度有良好的`线性关系(r=0.999 2).方法的精密度RSD=1.25%(n=6),平均回收率为99.8%.适用于含姜黄素的样品中姜黄素含量的测定.
作 者：胡孝忠 刘保启 王玉春 丁良 作者单位：胡孝忠(河北大学,化学与环境科学学院,河北,保定,071002;河北北方学院,基础部,河北,宣化,075131)
刘保启,王玉春(河北大学,化学与环境科学学院,河北,保定,071002)
丁良(河北省职工医学院,理学院,河北,保定,071000)
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇5
Tb3+敏化化学发光法测定氟罗沙星
利用Tb3+能大大增强Ce*$-H2SO3-FLX的.化学发光,建立了一种简单、快速、高灵敏度、高选择性的测定氟罗沙星的新方法,氟罗沙星浓度在2.0×10-9～8.0×10-8 mol/L范围内时,发光强度与氟罗沙星浓度呈良好的线性关系,方法的检出限为8.3×10-10 mol/L,对2.0×10-8 mol/L的氟罗沙星平行测定11次,相对标准偏差为1.2%.并用该方法测定了沃尔得及天方片剂中氟罗沙星的含量,不经任何预处理,直接测定了尿样中氟罗沙星的含量及回收率,结果令人满意.
作 者：聂丽华 赵慧春 王旭 作者单位：北京师范大学化学系刊 名：分析化学 ISTIC SCI PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY年，卷(期)：29(8)分类号：O65关键词：化学发光 流动注射 氟罗沙星 片剂 尿样
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇6
建立了运用毛细管气相色谱检测南美白对虾中硫丹残留的快速测定方法.用乙酸乙酯提取样品中的硫丹,提取液浓缩后以中性氧化铝和活性炭小柱进行双级柱色谱净化,用正己烷-乙酸乙酯(体积比为1:1)洗脱,洗脱液用气相色谱-电子捕获检测器检测,以保留时间定性,外标法定量.在南美白对虾样品中分别添加0.20,0.10,0.04和0.02 mg/kg硫丹标准品,测得添加回收率为80.5%～109.5%,相对标准偏差为3.6%～8.4%.该方法在不具备凝胶渗透色谱条件下也能进行硫丹残留的检测,具有简便、准确的`特点,能满足常规检测及食品安全监控的需要.
作 者：刘晓松 黄大新 卢声宇 LIU Xiaosong HUANG Daxin LU Shengyu 作者单位：刘晓松,黄大新,LIU Xiaosong,HUANG Daxin(广西出入境检验检疫局技术中心,广西,南宁,530021)
卢声宇,LU Shengyu(福建出入境检验检疫局技术中心,福建,福州,350003)
毛细管电泳-电化学发光法测定盐酸小檗碱 篇7
1 材料与方法
1.1 仪器与药品
索氏提取器 (自行设计) 、薄层层析用紫外灯365nm (北京光学仪器厂) , 香连丸 (湖北香连药业有限责任公司) , 盐酸小檗碱标准品 (中国药品生物制品检定所) 。
1.2 方法
1.2.1 供试品溶液制备
取香连丸约20粒, 研成粗粉, 取约0.1g, 精密称定, 置索氏提取器中, 加95%乙醇适量, 连续回流至提取液无色, 再常压蒸馏提取液至约10mL, 放至室温, 将液体移至25mL容量瓶中, 用少许95%乙醇洗涤容器, 洗液并入提取液中, 加95%乙醇调至刻度, 摇匀, 为备用液。
取一支2.0cm×30cm层析柱, 柱底覆盖少许脱脂棉, 柱内加入一定体积95%乙醇, 打开活塞, 让溶液慢慢流出。此时将已搅拌混均的氧化铝95%乙醇悬液 (层析氧化铝120～140目, 25～30g) 不断加入层析柱内, 至加完后, 轻敲柱体, 使各部分氧化铝均匀紧密一致。待氧化铝沉降稳定 (表面应平整) , 表面保持有少量溶剂 (0.5cm左右) , 关闭活塞。吸取0.1mL备用液通过氧化铝柱, 连续加入95%乙醇洗脱, 至流出液无色, 收集洗脱液置容量瓶中, 用95%乙醇调至刻度, 为供试品溶液。
1.2.2 对照品溶液制备
精密称取盐酸小檗碱标准品, 加甲醇制成每1mL含15μg的溶液, 即得。
1.2.3 测定方法
吸取供试品溶液及对照品溶液各3μL, 点于同一硅胶G薄层板上, 用展开剂 (乙酸乙酯∶氯仿∶甲醇∶浓氨水∶二乙胺=6∶2∶2∶1∶0.5, V/V/V) 展开, 置紫外灯 (365nm) 下检识。
2 结果与分析
2.1 香连丸中盐酸小檗碱的分离与纯化
盐酸小檗碱为黄色针状结晶, 在热乙醇中溶解度较大。根据报道[5], 选择95%乙醇为溶媒, 采用连续回流提取法加常压蒸馏提取, 易与香连丸中其他成分, 如挥发油、木香碱等分离, 且提取盐酸小檗碱浓度较大;根据盐酸小檗碱的极性特点, 采用氧化铝柱层析方法, 可以达到分离纯化盐酸小檗碱的作用。
2.3展开剂的选择
薄层色谱法对于样品能否实现满意的分离和检识, 取决于展开剂的选择。展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑, 本次实验根据盐酸小檗碱的化学性质, 尝试选用中等极性的溶剂体系, 即由氯仿相组成, 加入乙酸乙酯、甲醇来调节, 根据三者不同配比对展开效果进行评定。展开剂分别采用表1中的各种配比。
2.2薄层色谱法检测
从图2、图3中可以看出, 供试品与对照品均出现斑点, 证明供试品中有与对照品相同的成分, 二者斑点位置高度相同, 证明供试品中盐酸小檗碱的含量与标准品相同, 说明此方法有应用的可能性。
采用1号展开剂时, 点的样基本不变, 没有展开, 这可能与展开剂极性太弱有关, 采用5号展开剂时, 也没有展开, 这可能与展开剂极性太强有关, 3号展开剂效果最好, 可以清晰地将供试品及样品展开, 所以实验中选用3号展开剂, 另外考虑到薄层层析需要在硅胶这种酸性物质分离检识, 在展开剂里再加一点点二乙胺、氨水这类碱性物质, 以中和硅胶的酸性。展开剂即为:乙酸乙酯∶氯仿∶甲醇∶浓氨水∶二乙胺=6∶2∶2∶1∶0.5, V/V/V。
注:1、3斑点为供试品;2、4斑点为对照品。
3 结论
用95%乙醇作溶媒, 利用连续回流提取法和常压蒸馏法处理香连丸, 并用氧化铝色谱柱层析法分离纯化, 再利用薄层色谱法将香连丸中盐酸小檗碱分离出来, 分离效果较好;根据盐酸小檗碱的化学性质, 采用硅胶G薄层板及中等极性的展开剂, 对盐酸小檗碱具有良好的吸附效果, 从而利用薄层色谱法进行定性分析, 能准确快速地鉴定出香连丸中是否含有盐酸小檗碱。通过与对照品斑点高度相对比, 能够检测出供试品中盐酸小檗碱的含量是否符合标准, 从而实现定量分析。
本检测方法具有良好的稳定性和重现性, 方法简便易行, 适合在国内广大基层检测部门普遍推广。
参考文献
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