橡皮树组织培养研究（精选6篇）
橡皮树组织培养研究 篇1
1材料与方法
1.1 材料
材料采自乌鲁木齐市燕儿窝风景管理站温室, 挑选健壮、无病害的橡皮树母株, 取其嫩枝顶芽和茎段为材料。
1.2 试验方法
表面消毒:从橡皮树植株上剪取茎段, 剪掉叶片, 先用自来水冲洗10min, 再用洗洁剂溶液洗涤1~2 次。在无菌条件下, 用75%的酒精浸泡50s, 再用0.95%的次升汞溶液消毒18min, 剪去材料的创伤面, 留取0.5~1.0cm长接种于培养基上。
1.3 培养基
以MS为基本培养基, 附加3%蔗糖及0.6%琼脂, 灭菌前p H值调至5.8, 按不同的培养目标添加相应的激素, 配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基, 常规方法灭菌。
1.4 培养条件
培养温度为 (25±3) ℃, 光照度为2000~2500Lx, 每天光照12h。观察记录愈伤组织或芽的诱导增殖情况。将丛生芽分株转入生根培养基中, 培养环境同诱导愈伤组织条件相同, 观察生根情况。生根后移栽在泥炭:珍珠岩=3:2 的混合基质中。
2培养基的配制
2.1 启动培养基
①MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L (单位下同) 。
②MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
③MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
2.2 增殖培养基
①MS+6-BA1.5+NAA0.1mg/L。
②MS+6-BA1.5+NAA0.05mg/L。
③MS+6-BA1.0+NAA0.1mg/L
④MS+6-BA1.0+NAA0.05mg/L。
2.3 生根培养基
①1/2MS+IBA0.3mg/L。
②1/2MS+IBA0.6mg/L。
③1/2MS+IBA0.9 mg/L。
④1/2MS+IBA1.2 mg/L。
3结果与分析
3.1 光照温度控制
经试验橡皮树组织培养对温度、光照条件的要求不太严, 一般在自然散射光照射下, 幼苗在玻璃瓶内生长很好, 最适宜的温度范围在18~28℃。
3.2 芽的启动及增殖培养
将橡皮树的外植体接种于启动培养基中, 20 天后观察芽丛分化情况。试验结果表明, 激素浓度的不同, 对橡皮树启动培养基有明显的影响。在NAA浓度为一定值的情况下, 6-BA设置0.1 mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L各3 种浓度, 处理③的诱导率最高, 为95%;处理①的诱导率最低, 为80.33%。通过对平均芽数的统计分析可知, 处理③与①间有显著差异, 激素浓度的增高有利于芽的生长速度和健壮程度。由此可见, 诱导橡皮树不定芽的启动培养基③MS+ 6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/L是最佳培养基组合, 培养效果见表1。
25 天后, 切去长约0.5cm、饱满、带有腋芽的茎段, 接种到4 种培养基上, 18d液芽开始萌动, 同时在茎段的基部四周出现黄白色较致密的愈伤组织, 茎段上端切口处 (没与培养基接触) 也出现少量黄白色愈伤组织。接种38d观察, 茎段基部及上端切口处愈伤组织增多, 液芽变长变绿。接种48d观察, 液芽处有一对新叶出现, 同时在基部增大的较致密的愈伤组织上可看到绿色芽点。这时将外植体取出, 将液芽及时转到增殖培养基。接种后第28 天观察芽丛分化情况。试验结果表明:6-BA浓度在1.0~1.5 mg/L和NNA浓度在0.05~0.1 mg/L范围内, 不定芽都能增殖, 而在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的培养基上效果最好, 增殖系数可达4.9, 增殖培养结果见表2。
3.3 不同浓度激素对橡皮树组培苗生根的影响
从橡皮树组培苗上截取长约2cm、粗壮而又生长良好的茎段, 接种到4 种培养基上, 10~15d, 接种茎段的基部、节间上开始出现不定根。随着时间的推移, 根不断加粗增多, 长成完整的再生植株, 18d后观察生根情况。生根结果见表3。
试验结果表明:在4 种生根培养基中均能长出根, 即对培养基的要求不严格。但在1/2MS+IBA0.5mg/L中, 组培苗的长势、生长量、生根的质量为最佳, 可长出2.5~4.0cm长的粗壮根, 生根率也达到最高。
3.4橡皮树组培苗的生根
将继代培养基上的无根幼苗, 在无菌条件下, 转移到生根培养基上培养, 约7~10 天即成幼植株。一般在根长0.1~0.5cm时, 将幼苗移到瓶外, 把沾带的培养液冲洗干净, 然后移栽到经高温消毒的河沙与珍珠岩混合的基质上培养。
3.5 生根组培苗的移栽
组培苗生根后先打开瓶口晾2~3 天, 洗净琼脂, 防止滋生微生物。然后将生根组培苗移栽到含有基质、配比为泥炭土:珍珠岩=3:2 的苗床中。组培苗出瓶2 个星期后, 叶子明显变绿, 新根产生, 成活率在97.7% (见表4)
4移栽
4.1 移栽技术
移植盆外是组织培养的最后一道工序, 由瓶内移出瓶外, 幼苗所处的环境有很大的变化:由异常到自养;由弱光到光到强光;由无菌到有菌。因此, 在移栽时要十分小心, 以提高移栽成活率。
①培育壮苗。在生根前1 次的继代培养过程中, 应在配制培养基时适当降低6-BA的浓度, 同时掌握继代时间, 在幼苗最壮时转移到生根培养基上生根。②加强锻炼。打开瓶口的覆盖物, 使之逐步适应由无菌到有菌, 从高温到低温的变化。③过渡培养。如果将生根培养基上的幼苗直接移栽到土壤中, 成活率很低, 经过在基质上过渡培养后, 移栽成活率则提高。④通风防病。橡皮树苗期生长缓慢, 移栽到营养袋后, 要加强管理, 特别是在温室中注意通风以防病虫害的发生。
4.2 炼苗及移栽
当苗基部诱导出4~5 条不定根且根长2cm左右时, 培养瓶移至室温条件下, 适应3d后, 将培养瓶的薄膜盖掀开。在常温和撒射光下炼苗3~4d, 再从培养瓶中取出培养苗, 并洗净根上附着的培养基, 移栽于消毒过的的基质 (1 份珍珠岩+1 份泥炭) 中。塑料大棚上覆盖遮阳网, 使苗处于半阴环境。刚移入大棚前2d每天喷雾3~4 次, 保持较高的环境温度 (≥85%) , 大棚温度控制在20~25℃。在大棚中炼苗100d后苗长至20cm高时即可上盆移栽。
5结语
通过橡皮树培养基不同浓度激素的组织培养试验, 筛选出适合橡皮树的培养基。结果表明:橡皮树丛生芽诱导的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;丛生芽增殖的最适培养基为MS+6-BA1.0+ NAA0.1 mg/L, 增殖倍数可达4.9倍;生根培养的最适培养基为1/2MS+IBA0.9 mg/L。
参考文献
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[2] 张馨月, 刘小菊, 屈敏等.橡皮树组织培养及试管苗的温室移栽[J].北方园艺, 2013 (18)
[3] 方海霞, 张浩洋, 高殿义, 于飞等.印度橡皮树愈伤组织培养成苗技术[J].辽宁林业科技, 2010 (3)
[4] 张洁.橡皮树的组织培养[J].新疆林业, 2001 (1)
橡皮树组织培养研究 篇2
叶子花组织培养技术研究
通过对叶子花(Bougainvillea glabra Choisy)茎尖组织培养技术的研究,筛选出适宜的.增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L,增殖系数达到4.0;最适合的生根培养基为MS+IBA1.0 mg/L,每株平均生根7.2条,根长4.2 cm,侧根数4.5条.以河沙为基质进行试管苗移栽有利于叶子花的成活,25d后成活率可达78.6%.
作 者：郭海滨 代汉萍 雷家军 作者单位：沈阳农业大学园艺学院,辽宁,沈阳,110161刊 名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：34(1)分类号：Q943.1关键词：叶子花 茎尖 组织培养
秋石斛组织培养的研究 篇3
关键词：秋石斛;组织培养;不定芽诱导;生根培养
中图分类号：S723.1+32.6文献标识码：A文章编号：1004-3020（2015）03-0020-03
TissueCultureTechniqueofDendrobiumhybrida
ZhangJuan
（FujianResearchInstituteofForestryFuzhou350012）
Abstract：DendrobiumhybridabelongstofamilyOrchidaceaewithhighornamentalvalue.WeestablishedamassproductionmethodforD.hybrida.Takinghighpositionbudsastheexplants，theoptimaldisinfectiontreatmentwas75%alcoholfor1minuteandthen0.1%HgCl2for20minutes.TheresultsshowedtheoptimalmediumforproliferationofadventitiousbudwastheMSmediumsupplementedwith1mg·L16-BA，0.5mg·L1IBA，100mg·L1mashedpotatoand1mg·L-1activatedcharcoal（AC），providingaproliferationcoefficientof4.5.TheoptimalmediumforrootingwasMSmediumsupplementedwith0.8mg·L1IBA，100mg·L1mashedPotatoand1mg·L1AC，providing99%rootingrateand95%survivalrate.
Keywords：Dendrobiumhybrida;tissueculture;inductionofadventitiousbud;rootingculture
秋石斛Dendrobiumhybrida为兰科石斛属，主要分布在我国西南、华南、台湾等热带、亚热带和秦岭以南地区，喜高温、湿润环境。秋石斛每年秋季开花，花色多，花量多，而且花期可长达两个月，具有非常高的观赏价值，又由于其花形类似蝴蝶，故称蝴蝶石斛[1]，作为一种新型的切花品种，常用于餐盘布置、插花等，近年来市场需求量很大[2]。目前秋石斛的主要繁殖方式为分株和高芽繁殖[3]，繁殖系数低，推广局限性大。本试验对秋石斛外植体消毒、增殖培养、生根培养等进行研究，以期为大规模的组培苗生产提供了技术支撑。
1材料和方法
1.1材料
本试验以秋石斛品种“阳光”的高位芽为外植体，秋石斛材料由鑫闽种业有限公司提供。
1.2方法
1.2.1外植体的消毒
于2012年3月中旬，将生长状况良好的植株上萌发的高位芽取下，剥去外层叶片，剪去根和顶部叶片，用饱和洗衣粉溶液浸泡30min后，清水冲洗干净。在超净工作台中进行消毒处理，先用75%酒精消毒，再用0.1%Hgcl2浸泡，最后用无菌水冲洗5次，消毒处理见表1。
经过消毒处理的材料接种于MS+6BA2.0mg·L1+NAA0.5mg·L1+胰蛋白胨2g·L1的外植体培养基。每瓶接种一个茎段，试验重复3次。
1.2.2不定芽的增殖
经过初代培养的材料接种在继代培养基中，用于诱导不定芽。比较不同种类和不同用量的添加物，对秋石斛不定芽增殖的影响。每瓶培养基中接种5个茎段，每个处理20瓶，试验重复3次。接种50d后，观察苗木生长情况，统计增殖率。继代培养基：①MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+蛋白胨2g·L1;②MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+花宝一号2g·L1;③MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1;④MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+香蕉泥80g·L1;⑤MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1。
1.2.3根的诱导
将经过增殖培养，生长至3～4cm的单株从不定芽中剥离，接种在添加不同浓度的ABT（0.6，0.8，1.0）和IBA（0.6，0.8，1.0）MS培养基中，并在培养基中添加80g·L1土豆泥和1g·L1活性炭（Ac），进行生根壮苗培养。每瓶培养基中接种10个单株，每个处理10瓶，试验重复3次。50d后观察根的生长情况以及苗木生长状况。生根培养基如下：①MS+ABT0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;②MS+ABT0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;③MS+ABT1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;④MS+IBA0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑤MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑥MS+IBA1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1。
1.2.4炼苗移栽
将高长至7～8cm的生长健壮、根系发达的生根苗移到大棚。打开瓶盖炼苗3d后，取出生根苗，洗净根部附着培养基，移栽于水苔基质中，观察移栽成活率。
1.3培养条件
试验培养基中均添加30g·L1白糖，卡拉胶6g·L1，pH值均为5.8。经过121℃、1.1kg·cm2高压消毒20min。培养室温度为25±2℃，光强1000～1500lx，光照时间12h·d1。
1.4数据统计
污染率=污染株数/接种数×100%;存活率=存活株数/接种数×100%;生根率=生根株数/接种数×100%;移栽成活率=成活株数/移栽总株数×100%。
2结果与分析
2.1不同消毒处理对秋石斛消毒效果的影响
试验中设计6种不同的消毒处理，将经过消毒的芽接种于初始培养基中，15d后观察统计污染率和成活率。统计结果如表1。试验结果表明采用处理5：酒精消毒1min后，用0.1%HgCl2消毒20min，能达到最佳的消毒效果，存活率达到68%。在0.1%HgCl2消毒时间一致时，发现酒精消毒30s的消毒效果远比酒精消毒1min效果差。当升汞消毒时间增加到25min时，由于过长的消毒时间对植物细胞产生毒害，使其死亡率提高。
2.2不定芽增殖
在继代培养基中添加不同的添加物，观察其对不定芽增殖的影响，50d后统计增殖率并进行方差分析。从表2和表3中可以看出，不同培养基配比下，秋石斛的增值系数存在显著性差异（F0.05（4，10）=3.47805 2.3生根培养 将长为3cm左右的无根单株接种到生根培养基中，从表4可以看到：在MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1的培养基中，生根率和根数都优于其它组合，并且苗木叶片浓绿、茎粗壮、生长状况优良。试验中发现IBA对秋石斛根的诱导作用优于ABT，罗岚[6]在秋石斛的生根培养试验中，认为IBA能促进秋石斛生根，这与本试验结果一致。 3结论与讨论 试验发现最佳的不定芽诱导培养基为MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系数为4.5;最佳的生根壮苗培养基为MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。 秋石斛多种植于高温高湿的环境中，茎叶中繁殖着大量的微生物，给外植体的消毒造了很大的困难。陆顺教[7]等分别对秋石斛外植体的取材部位进行了研究，认为基部萌发的侧芽细菌较多，而高位芽不易受内生菌感染。本试验采用高位芽为外植体，一定程度上避免了来自基质的污染，且内生菌较少，消毒效果较好。 试验在秋石斛的增殖过程中发现，有添加土豆泥培养基较未添加土豆泥的培养基，能更为有效的促进苗木生长，苗木叶片浓绿，茎秆粗壮;未添加活性炭的培养基与添加活性炭的培养基相比，苗木容易出现褐化现象，从而影响了植物快速繁殖的成功率。这是以后试验或生产上需要注意和值得进一步思考的地方。 参考文献 [1]邹成勇，刘燕.我国石斛属植物研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（12）：61646166. [2]王春.石斛兰组织培养及快繁技术研究[J].浙江林业科技，2002，22（2）：3840. [3]江秀娜，李军，詹海洋，等.解读秋石斛的四大繁殖方法[J].中国花卉盆景，2004，（9）：38. [4]陈亚鸿，洪磊，陈雄庭.减少秋石斛在组织培养中的褐化研究[J].现代农业科学，2009，16（3）：4448. [5]周华伟，李世君，钱秀红，等.组织培养中若干因素对石斛兰试管苗生长的影响[J].浙江农业大学，1995，21（6）：622624. [6]罗岚.秋石斛立体快速繁殖研究[J].佛山科学技术学院学报，2004，22（02）：6971. [7]陆顺教，易双双，任羽.秋石斛侧芽外植体消毒方法的研究[J].基因组学与应用生物学，2014，33（3）：674681. 果桑离体组织培养研究 以果桑为材料,对其进行组织培养,结果表明:基本培养基MS较有利于果桑芽体的萌发与生长;初代培养最佳培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;继代培养最佳培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.20 mg/L+GA3 1.0 mg/L;生根培养最佳培养基为1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L. 作 者：刘健 于元杰 作者单位：山东农业大学,山东,泰安,271000刊 名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：200634(16)分类号：Q943.1关键词：果桑 组织培养 关键词：广山药；组织培养；愈伤组织；激素；消毒 中图分类号： S632.104+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）02-0076-05 收稿日期：2015-03-20 基金项目：韩山师范学院博士科研启动项目（编号：QD20120626）。 作者简介：张振霞（1975—），女，博士，副教授，从事植物生物技术研究。E-mail：zhangzhenxia2006@gmail.com。 通信作者：郑玉忠，博士，副研究员，从事中药学工作。E-mail：zhengyuzhong@gmail.com。 山药是薯蓣 （Dioscorea opposita Thunb.） 的块茎，早在宋代广山药就是中药山药的一个品种，在中医上属于补益类中药，具有健脾止泻、补肺益肾等功能；同时也是南方各地的传统保健菜肴，营养丰富[1-2]。 山药通常利用块茎育苗或零余子播种等方式进行繁殖。这种传统的繁殖方式有着一定的弊病，主要是因为多数薯蓣科种类的细胞核内染色体数目较多，容易发生变异，出现性状分离，引起品种品质的退化[3]。另外，薯蓣科植物自身为了生存下来，会尽量多保留对外界环境适应能力强的性状，例如零余子的增多，块茎变小，品质变差，须根增多等[4]。此外，长期的无性繁殖会不断积累病毒，使其生产力明显下降[5-6]。目前對于山药的培养研究多为怀山药，而对广山药的组织培养少见报道。本研究利用植物生物技术中组织培养的方法对广山药进行快速无性繁殖，不仅可以保持其优良性状，在短期内生产出大量整齐、均匀的健壮种苗，解决繁殖系数低、块茎带病毒等问题，从而满足市场的大量要求。 1材料与方法 1.1材料来源 材料是购自广东省汕头市潮阳区的广山药块茎，并种植于花盆中待其长出植株，选取其幼嫩叶片和块茎作为试验材料。 以MS、NB为基本培养基，附加30 g/L蔗糖，7 g/L琼脂，pH值5.8，不同浓度2，4-D、NAA、6-BA、KT、IBA等激素。所有培养基均在121 ℃条件下高压灭菌15 min。 培养室温度（25±1） ℃，空气相对湿度50%～60%，光照时间每天12 h，光照度1 000～1 500 lx 。 1.2方法与步骤 1.2.1广山药块茎外植体的消毒选取新鲜广山药块茎，用自来水清洗干净后，放在蒸馏水中浸泡30 min，用蒸馏水清洗干净，70%乙醇消毒10 s，再按不同的方式进行消毒处理（表1），加入消毒剂之后再加入2滴吐温，恒温摇床100 r/min振荡灭菌，最后用无菌水清洗5次。用无菌滤纸吸干水分后将块茎切成1 cm大小、厚度0.3 cm的块状接种到MS培养基中，观察其生长状态并记录。 1.2.2广山药块茎愈伤组织诱导培养基不同基本培养基对愈伤组织的诱导有着不同的影响，本试验设置MS、1/2MS、NB母液培养基对广山药块茎愈伤组织的诱导。以消毒后的广山药块茎作为试验外植体，均切1 cm大小、厚度0.3 cm的块状，接种至含5 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA的MS、1/2MS、NB的培养基上，观察并记录基本培养基成分对广山药愈伤组织诱导的差异。 取消毒后的广山药块茎接种到MS基本培养基上，其中不同的生长激素分别为1 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA、1 mg/L 2，4-D+1 mg/L 6-BA、1 mg/L NAA+1 mg/L IBA、1 mg/L 2，4-D+1 mg/L IBA，观察记录广山药愈伤组织的生长状况，比较哪种激素条件更适合诱导广山药块茎愈伤组织的诱导。 将广山药的无菌块茎接种在MS+0.5 mg/L 6-BA，设置2，4-D浓度分别为1、2、4、8、10 mg/L等5个不同浓度。通过观察记录，分析不同的2，4-D浓度对广山药块茎愈伤组织生长的影响。 广山药块茎均切小块，接种在MS+5 mg/L 2，4-D，其中6-BA浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L等5个不同处理。观察记录，分析不同的6-BA浓度对广山药块茎愈伤组织生长的影响。 1.2.3广山药块茎愈伤组织诱导的光照条件设置24 h、12 h 光照和黑暗培养3种光照条件，将广山药块茎接种在 MS+5 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA的培养基上，分别在上述的光照条件下培养。1个月后，观察比较不同光照条件下广山药愈伤组织生长的差异。 1.2.4广山药愈伤组织防褐变处理取广山药的无菌块茎接种到MS+5 mg/L 2，4-D+0.1 mg/L 6-BA，采用不同防褐化添加物：1 g/L PVP、2 g/L PVP、1 g/L 活性炭、2 g/L 活性炭，设置对照，观察记录5组试验结果，并进行比较分析。 1.2.5诱导生根培养从试验所得的广山药再生苗接种到不同培养基中（表2），观察记录再生苗生根的生长状况，并统计生根率。 2结果与分析 nlc202309040709 2.1不同消毒方式对广山药块茎外植体培养的影响 本试验设置了不同种消毒方式，1周后比较染菌率及存活状态，筛选适合广山药块茎外植体的消毒方法。研究发现，不同的消毒条件，无论是哪种消毒剂、消毒浓度，消毒时间越长，污染率越低，坏死率越高（表3）。通过比较HgCl2的2个浓度0.05%和0.1%，以及次氯酸钠的2个浓度20%和30%的消毒效果，选择0.1%HgCl2消毒12 min作为广山药块茎的消毒条件，在此条件下外植体污染率为8%，坏死率为34%，诱导率为58%。 2.2不同基本培养基对广山药块茎愈伤组织诱导的影响 本试验设置了MS、1/2MS、NB 的3种基本培养基，激素条件均为5 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA，来选择诱导愈伤组织的最佳基本培养基。结果发现， 不同基本培养基成分对广山药愈伤组织的诱导效果不相同。广山药块茎外植体在MS基本培养基中的出愈率最高，为78%；而1/2MS培养基中的出愈率仅有34%，且愈伤组织疏松，形状不规则；NB与1/2MS 相比，其愈伤的外部形状相似，出愈率相对高一些（表4）。由此可见，无机盐含量高的MS基本成分更适合用于广山药愈伤组织的诱导培养生长，诱导的愈伤组织出愈率高，质地好，不会疏松，而且出根率、出芽率相对较低。 2.3不同生长激素配比对广山药块茎愈伤组织诱导的影响 植物生长激素和细胞分裂素的配比决定植物组织培养过程中外植体的发育方向[6]，2，4-D、NAA、6-BA、IBA等都是使用广范的植物激素。本试验设置了4种不同组合来探究广山药块茎诱导愈伤组织的情况，结果发现4种不同组合的生长激素对广山药块茎愈伤组织的诱导都表现出较高的出愈率，分别能达到75%、73.75%、63.75%、58.75%，4种培养基的生根率、出芽率以及愈伤的生长状况都不同（表5）。 2.4不同2，4-D浓度对广山药块茎愈伤组织生长的影响 设置了5个不同的2，4-D浓度与0.5 mg/L 6-BA搭配来探究最适宜广山药块茎诱导愈伤组织的2，4-D浓度，结果发现2，4-D浓度从1 mg/L到8 mg/L，随着浓度的逐渐增大广山药外植体的出愈率也不断升高，其中8 mg/L时出愈率高达100%，且愈伤颗粒状、紫红色。但当浓度增加到10 mg/L 时，出愈率反而比8 mg/L的出愈率下降了10百分点，同时外植体的愈伤生长速度变慢，愈伤质地更硬（图1至图5，表6）。根据以上分析可得出，在MS基本培养基上，8 mg/L 2，4-D 和0.5 mg/L 6-BA 时更适合于诱导广山药块茎愈伤组织。 2.5不同6-BA浓度对广山药愈伤组织生长的影响 本试验也同时选择确定适合诱导愈伤组织的6-BA浓度。在2，4-D为5 mg/L的基础上，设置5个6-BA的不同浓度梯度进行试验。结果发现，6-BA 的浓度从0.1 mg/L到0.8 mg/L，随着浓度的逐渐增加愈伤的出愈率也不断升高，浓度为0.4 mg/L和 0.8 mg/L 时的出愈率均达到最高（95%），但当6-BA 的浓度增加到1 mg/L 时其出愈率反而下降了（表7）。由此可见，5 mg/L的 2，4-D+0.4 mg/L 6-BA组合诱导广山药愈伤组织比较理想。 2.6不同光照條件对广山药愈伤组织诱导的影响 光照条件也是植物组织培养中的影响因子，对愈伤组织诱导、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响[6]。本试验设置了24 h 光照培养、12 h光照培养、 黑暗培养3种 条件，来研究哪一种光照条件更适合广山药块茎愈伤组织的培养。研究发现，3种光照条件对于淮山药愈伤组织的诱导效果都不错，其出愈率都达到85%以上，其中在黑暗培养的出愈率最高，为92%，愈伤的质量也是黑暗培养最好（表8）。由此可见，黑暗培养更适合诱导广山药块茎愈伤组织的诱导生长。 2.7不同抗氧化措施对广山药块茎褐变抑制的影响 广山药块茎切块培养过程中会出现褐化现象，影响了组织培养的成活率。本试验采用PVP和活性炭来防止、减轻广山药块茎褐变现象的发生。研究发现，添加各种防褐化材料对于广山药外植体诱导愈伤组织影响明显，出愈率都达到90%以上；对比5组试验的褐化率可以得出，活性炭的防褐化效果远远好于PVP，从外植体及愈伤组织的褐化变化过程中也可以得到同样的结果（表9）。同时注意到活性炭的防褐化效果比较好，但浓度较高又会影响到外植体的存活率。 2.8诱导生根培养 在MS、1/2MS、1/2MS+1 mg/L IBA、1/2MS+1 mg/L NAA+1 mg/L IBA培养条件下，于广山药再生植株的诱导生根培养的效率均达到100%，只是诱导出来的根之间有一定的差别。MS培养基上生长的再生苗的根数量较少、纤细，毛状根较少；1/2MS培养基上的根数量比前者多且粗壮；在1/2MS的基础上添加1 mg/L IBA后，再生苗长出明显的主根，并且又壮又长，还有少数的不定根；在1/2MS+1 mg/L NAA+1 mg/L IBA培养基上，长出来的根主根明显，还有比较多的不定根，毛状根也比较多，幼苗生长快（表10）。综上所述，1/2MS+1 mg/L NAA+1 mg/L IBA培养基诱导再生苗生根比较理想（图6）。 3结论与讨论 3.1消毒剂的选择以及消毒时间、消毒浓度的确定 选择正确的消毒剂、消毒时间以及消毒浓度是建立组织培养体系的前提[6-7]。在试验中选择的消毒剂有HgCl2和次氯酸钠，升汞的浓度分别为0.01%、0.02%、0.05%、0.1%，次氯酸钠的浓度分别为20%、30%，消毒时间分别为5、8、12、15 min。不同的外植体设置有不同的消毒时间和消毒浓度。从消毒的结果可以发现，在一定范围内，消毒剂浓度越低，消毒时间越短外植体污染率越高；消毒剂浓度越高，消毒时间越长，外植体的污染率越低，但是外植体的死亡率越高，这是因为有的外植体在消毒过程中死亡。在用乙醇处理过程中也要注意消毒时间，时间太长会造成外植体脱水死亡。此外，消毒过程中滴加适量的吐温作为表面活性剂，并不断振荡摇晃，可以改善消毒效果。 nlc202309040709 3.2生长激素的选择 在植物组织培养中配以适宜的植物激素是非常关键的，适当的生长调节剂对愈伤组织的诱导以及生根培养是极其重要的[7]。生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向，比例高时，有利于根的形成和愈伤组织的形成；比例适中时，有利于根芽的分化；比例低时，有利于芽的形成[8]。丰锋等[9]的报道也指出高浓度细胞分裂素有利于芽诱导增殖。本试验中，广山药块茎为外植体时选用高浓度的2，4-D和低浓度的6-BA有利于愈伤组织的生成，低浓度的2，4-D和高浓度的6-BA有利于根的生成。在生根培养中用了生长素NAA和IBA，对生根有很好的效果，其生根率都能达到 100 %，且主根明显、粗壮。 3.3光照条件的选择 光照条件对于植物生长是必不可少的条件，对于植物愈伤组织的诱导也是重要的条件之一[6]。试管苗或无菌苗的培养需要选用一定的光暗周期来进行组织培养，愈伤组织的诱导也需要一定的光暗周期，也有一些植物的愈伤组织在全黑暗的诱导下会长得更好。在试验中设置有全日照培养、半日照培养和黑暗培养3种光照条件。研究发现，不管从出愈率还是愈伤组织的生长状况来看，黑暗培养更加适合广山药块茎愈伤组织的生长。 3.4褐化的防止 褐化是植物组织培养中一种常见的不利现象，对于外植体的脱分化和再分化过程的影响非常大，甚至是影响某些植物组织培养成功与否的关键[10]。影响外植体褐化的因素多种多样，不同植物品种、同种植物的不同类型因为外植体材料的基因型不同，在组织培养中褐化发生的频率和程度都存在着较大的差异[11]。防褐化的途径也多种多样，适宜的培养基、良好的培养条件、适宜的外植体或者增加抗褐化剂或吸附剂都可以有效地防止褐化现象。本试验通过在培养基中增加抗褐剂和吸附剂活性炭和PVP来防止外植体的褐化。蔡建荣采用聚乙烯吡咯烷酮PVP来抑制淮山茎段和叶片外植体的褐化[12]。本研究结果显示对于广山药块茎，活性炭可以明显吸附培养物分泌的酚、醌等有害物质，能有效降低褐变。 参考文献： [1]吴仁修. 潮汕生物資源志略[M]. 广州：中山大学出版社，1997. 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广山药组织培养技术的研究 篇5
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