假单胞菌属（共7篇）
假单胞菌属 篇1
铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)属非发酵革兰阴性菌,为条件致病菌,是引起临床感染常见病原菌。近年来研究发现耐亚胺培南(IPM)的铜绿假单胞菌逐年增多,产金属酶(metallo-beta-lactamase,MBL)菌株已成为其耐药机制研究中的热点。本研究收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌进行金属酶表型检测,同时检测blaIMP-1和blaVIM-2耐药基因,探讨耐IPM铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
收集2006年8月—2007年12月山东省淄博市第一医院临床分离并经K-B法筛选对IPM耐药的40株铜绿假单胞菌作为研究对象。铜绿假单胞菌ATCC 27853阴性对照菌株,购于山东省临床检验中心;铜绿假单胞菌产IMP-1型和VIM-2型金属酶的阳性对照菌株,由上海交通大学医学院附属瑞金医院惠赠。
1.2 试剂与仪器
7600型DNA扩增仪(美国PE公司);EDTA-Na2分析纯(德国Sigma公司);水解酪蛋白琼脂(M-H)干粉和IPM(10 μg)均为英国Oxoid公司产品;IP/IPI E-test MBL试验条(瑞典AB Biodisk公司)。Taq DNA聚合酶,10×PCR Buffer(Mg2+15 mM );dNTP Mixture(各2.5 mM);DNA Marker DL2 000(日本TaKaRa公司)。微量肉汤稀释法板条(天津金章科技有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 菌株鉴定
采用API鉴定系统或ATB Expression微生物分析仪鉴定。
1.3.2 金属酶初筛试验
1.3.2.1 EDTA-Na2纸片复合法
以IPM为金属β-内酰胺酶底物,以EDTA-Na2为金属β-内酰胺酶抑制剂,建立用于筛选MBL铜绿假单胞菌的纸片复合法。EDTA-Na2先配成500 mmol/L溶液,再用NaOH调pH值至8.0,高压灭菌后4 ℃冷藏备用,临用前于室温放置30 min,以达到温度平衡。将受试细菌制成0.5麦氏浊度的菌液,在直径90 mm的M-H琼脂平板上涂布受试细菌,药敏试验采用K-B纸片法,采用IPM(IPM,10 μg)纸片,并将500 mmol/L EDTA10 μl加至上述纸片制得IPM / EDTA纸片,按K-B纸片法测出IPM,IPM / EDTA纸片的抑菌圈直径。EDTA能使相应抗菌药物的抑菌圈直径扩大,直径≥5 mm者,判为金属β-内酰胺酶阳性[1]。
1.3.2.2 E-test法检测
在直径90 mm的M-H琼脂平板上,药敏试验采用K-B纸片法接种待测菌株后,在正中贴上IP/IPI E-test MBL试纸条,最低抑菌浓度(MIC)刻度面朝上,35 ℃温箱孵育16～18 h,观察结果。E-test金属β-内酰胺酶试验条由两边7倍稀释范围的IPM(4～256 μg/ml)和上面覆盖有EDTA的IPM (1～64 μg/ml)构成。用铜绿假单胞菌ATCC 27853作为阴性质控菌,MIC (minimum inhibitory concentration)质控范围:(IP) IPM MIC≤4 μg/ml,(IPI) IPM +EDTA MIC在1～4 μg/ml,测试菌株结果判断标准为:如果IP/IPI≥3倍稀释度为阳性,则表示待测菌株产金属酶[2]。
1.3.3 DNA模板制备
采用蛋白酶K消化法。挑取过夜纯培养菌落置入0.5 ml 离心管(内已预制200 ng/ml 蛋白酶K溶液),56 ℃水浴2 h,改95 ℃水浴10 min。15 000 r/min离心30 s,取上清液移入另一新的0.5 ml离心管作为模板液,置入-20 ℃冰箱备用。
1.3.4 耐药基因检测
1.3.4.1 扩增所用引物参照Genbank blaIMP-1和blaVIM-2设计为IMP-F:5′-ATGAGCAAGTTATCTGTATTC-3′,IMP-R:5′-TTAGTTGCTTGGTTTTGATGG-3′,产物长度为741 bp;VIM-F:5′-ATGTTCAAACTTTTGAGTAA -3′,VIM-R:5′-CTACTCAACGACTGAGC-3′,产物长度为801 bp。PCR引物委托大连宝生物工程有限公司合成。
1.3.4.2 PCR反应体系 Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.2 μl,10×PCR Buffer 2.5 μl,dNTP Mixture 2 μl,模板DNA 2 μl,引物F (20 μM)0.5 μl,引物R(20 μM)0.5 μl,灭菌蒸馏水(ddH2O)17.3 μl,共25 μl。
1.3.4.3 blaIMP-1和blaVIM-2耐药基因聚合酶链反应 94 ℃预变性2 min后进入循环,94 ℃变性30 s,50 ℃退火60 s,70 ℃延伸60 s,循环30次,最后70 ℃延伸2 min终止反应。
1.3.4.4 PCR全过程以产IMP-1型金属酶铜绿假单胞菌株作为扩增blaIMP-1的阳性对照,以产VIM-2型金属酶铜绿假单胞菌株作为扩增blaVIM-2的阳性对照,铜绿假单胞菌ATCC27853作为阴性对照。
1.3.5 MIC的测定(微量肉汤稀释法)
抗菌药物共有8种,分别是IPM、头孢他啶(CAZ)、头孢哌酮(CFP)、庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(ATM)、左氧氟沙星(LEV),质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。结果判定标准参照2006年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)的临界值判定敏感、耐药、中介[3]。
2 结果
2.1 金属酶初筛试验结果
40株耐IPM铜绿假单胞菌,EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株(见表1)。
2.2 耐药基因检测
目标基因blaIMP-1长为741 bp,目标基因blaVIM-2长为801 bp。40株耐IPM铜绿假单胞菌耐药基因扩增后,1.5%琼脂糖电泳显示1株具有blaIMP-1型金属酶(菌株号为3)的扩增阳性条带和3株具有blaVIM-2型金属酶(菌株号为1、4、8)的扩增阳性条带(见图1,图2)。
2.3 抗菌药物对MBL菌株的MIC
我院临床分离铜绿假单胞菌中部分携带金属酶;产金属酶铜绿假单胞菌呈多重耐药性,并且对CAZ(MIC≥64 μg/ml)、IPM(MIC≥128 μg/ml)大多表现为高水平耐药(见表2)。
注:P:阳性对照;N:阴性对照;M:DNA Marker
注:P:阳性对照;N:阴性对照;M:DNA Marker
3 结论
铜绿假单胞菌是医院感染的一种重要病原体,其对抗菌药物的耐药性越来越强,使治疗变得十分困难。碳青霉烯类一直认为是治疗铜绿假单胞菌感染的可靠药物,现在耐药性也在逐步上升。以往对铜绿假单胞菌耐药机制的研究中,发现铜绿假单胞菌对IPM耐药主要是外膜孔蛋白OprD2缺失所致[4]。近年来随着金属酶在铜绿假单胞菌多重耐药机制中的作用不断被揭示和认同[5],金属酶的研究已成为人们关注的热点。
金属酶属于Ambler分子结构分类中的B类和Bush功能分类中的第3组。金属酶能水解除单环类抗菌药物以外的几乎所有β-内酰胺类抗菌药物,使细菌对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类耐药。1991年日本学者Osano等[6]首先发现了粘质沙雷菌所产生的MBL(IMP-1型)基因后,又报道了这种质粒介导的MBL存在于铜绿假单胞菌中,并发现blaIMP位于整合子上,由质粒携带。到目前为止已发现4个不同家族的MBL,分别为IMP型、VIM型、SPM型和GIM型,其中IMP型,VIM型和SPM型是获得性MBL,其编码基因位于整合子。
金属酶耐药基因由染色体或质粒介导。IMP-1基因大多数位于质粒上,而VIM-2基因主要存在于染色体上,仅少数存在于质粒上[7]。由于质粒介导的耐药基因易在同种细菌之间迅速水平传播,临床检测耐IPM铜绿假单胞菌产金属酶已迫在眉睫。本研究认为IPM / EDTA纸片复合法简便、结果可靠,可作为金属酶的初筛方法在临床微生物室日常工作中应用,进一步的研究有待于扩大菌株的数量和酶的型别。Lee等[2]研究表明E-test法表型筛选试验无论是染色体还是质粒介导的金属酶均能检测,可用于产金属酶菌株的初筛,但E-test条价格昂贵,不宜用于实验室常规检测。尽管PCR法快速、准确,但其技术要求较高,费用较大,更不适合用于临床微生物实验室的常规检测。
本研究发现,产金属酶铜绿假单胞菌对3类或3类以上抗菌药物表现出耐药在不断增多,提示铜绿假单胞菌感染与多种医源性操作、长期应用抗菌药物和免疫抑制剂有关,并且对头孢他啶(MIC≥64 μg/ml)、亚胺培南(MIC≥128 μg/ml)大多表现为高水平耐药,可见我院临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。产金属酶铜绿假单胞菌感染时抗菌药物的选择范围很窄,阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星。阿米卡星对铜绿假单胞菌产生的氨基糖苷类钝化酶较稳定,具有良好的抗菌活性,但氨基糖苷类药物有耳、肾毒性,临床应用中应注意监测。治疗多重耐药铜绿假单胞菌感染时,临床医师一定要结合药物敏感试验来选择抗菌药物,防止耐药菌株在医院感染的流行和暴发。
本研究中40株耐IPM铜绿假单胞菌,EDTA纸片复合法筛选出9株产金属酶菌株;E-test法筛选出6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株blaIMP-1和3株blaVIM-2耐药基因,然而实验中仍有2株未检测到碳青霉烯类酶,提示有其他碳青霉烯类酶存在,也可能有其他耐药机制存在,如外膜孔蛋白OprD2缺失、高产AmpC及外排泵出系统有关,需进一步用分子生物学方法证实。因此,我们必须加强对耐IPM铜绿假单胞菌产金属酶的监测,合理指导临床IPM的使用,减少多重耐药克隆菌株的扩散。
摘要：目的 研究临床分离耐亚胺培南(IPM)铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征。方法 收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌作为研究对象,采用EDTA纸片复合法、E-test法和PCR法分别检测产金属酶菌株,用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果 40株耐IPM铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株blaIMP-1和3株blaVIM-2耐药基因。产金属酶菌株呈多重耐药,对头孢他啶、亚胺培南大多数表现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星。结论 目前从临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。
关键词：假单胞菌,铜绿,β-内酰胺酶类,抗药性
参考文献
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假单胞菌属 篇2
1 临床资料
1.1 标本来源
本院肠道门诊急性腹泻腹泻患者的粪便210份, 其中主要为门诊及住院患者。
1.2 细菌培养
粪便标本接种血平板, 中国兰、SS板, 置37℃培养18～24h, 挑取可疑菌落作生化鉴定。
1.3 生化鉴定
(1) 直接涂片:G-杆菌。 (2) 作氧化酶试验, 涂片染色, 符合气单胞菌属的特性者, 再进一步做系统生化反应:氧化酶试验, 动力, 精氨基酸双水解酶, 葡萄糖, 尿素分解。硝酸盐还原胆汁七叶苷等, 培养24h观察结果。
1.4 结果 (表1)
210例腹泻病人共检出气单胞8株, 其中嗜水气单胞4株, 温和气单胞3株, 豚鼠气单胞1株。
临床特征:由气单胞所致的感染性腹泻, 其中主要临床症状为腹泻, 腹痛、水样便, 粘液便, 少数有发热及恶心呕吐。
1.5 药敏试验
气单胞对环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那, 红霉素、复方新若明、多粘菌素等均敏感。对青霉素, 氨苄青霉素耐药。
2 讨论
铜绿假单胞菌的耐药分析 篇3
1.1 一般资料
1003株菌株来源于2012年1月-2013年7月笔者所在医院送检标本。送检标本阳性分离率前五位依次为痰液 (包括咽拭子, 支气管灌洗液) 、分泌物、体液、血、尿。
1.2 方法
采用法国生物梅里埃VITEK-2 XL全自动微生物鉴定系统, 及VITEK-2配套药敏卡片。
1.3 质控操作
按全国检验操作规程及仪器操作说明书, 美国CLSI药敏规则。质控菌株ACTT27853。
1.4 统计学处理
采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析, 计量资料用均数±标准差 (±s) 表示, 比较采用t检验;计数资料以率 (%) 表示, 比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 耐药监测情况
分离率前5名的标本来源:痰751株 (74.9%) , 分泌物89株 (8.9%) , 体液83株 (8.31%) , 血36株 (3.6%) , 尿33株 (3.3%) 。在20种抗菌药物中耐药率小于30%从低到高依次为阿米卡星 (2.4%) , 妥布霉素 (3.9%) , 哌拉西林/他唑巴坦 (5.9%) , 庆大霉素 (6.2%) , 左旋氧氟沙星和环丙沙星 (6.7%) , 美洛培南 (7.8%) , 亚胺培南 (7.9%) , 头孢吡肟8.7%, 哌拉西林 (9.8%) , 头孢他啶 (11.7%) , 氨曲南 (21.2%) 。PA菌的感染主要在呼吸道。详见表1。
2.2 2004-2007年与2012-2013年的PA耐药率比较
笔者回顾2004-2007年同家医院的PA感染和耐药性检测, 对几种PA常见的抗菌药物比较, 差异均有统计学意义 (P<0.001) 。详见表2。
%
%
R1:2004-2007年抗生素耐药率;R2:2012-2013年抗生素耐药率
3 讨论
PA菌感染多继发于不同免疫损伤的基础疾病上, 病情复杂, 由于抗菌药物在不同的组织内浓度不尽相似, 其临床治疗效果决定于感染程度及其部位;PA菌在临床感染中的来源非常广, 从机体的深部以至表皮均见其踪影, 而以呼吸道的感染最常见, 在血流、胸腹腔等体液等危险部位也占一定的比例。本资料显示, PA菌的标本来源以呼吸道为主, 其次为分泌物、体液、血液、尿液, 其呼吸道感染仍是PA的主要感染方式;常见感染诱因:PA在自然界较为广泛分布, 在于人类的皮肤和肠道亦存在, 是人体的正常菌群之一。由于此菌在环境中的广泛存在, 因此很容易污染医疗器械而造成感染机会, 特别是气管插管或器官切开等, 使上呼吸道的过滤功能失去作用;气管纤毛活动减退或消失, 削弱了肺免受感染的保护机制, 加上机械通气、人工吸痰等操作, 使感染的机会大大增加, 对于这类高危患者, 临床应重视及时对痰标本的收集送检;铜绿假单胞菌败血症也是临床上常见的感染之一, 多继发于大面积烧伤、白血病、淋巴瘤、恶性肿瘤、静脉导管、心瓣膜置换术及各种严重慢性疾病等的过程中, 本菌引起的败血症约占革兰阴性杆菌败血症7%~18%, 居第3或第4位, 但其死亡率则是革兰阴性杆菌败血症的首位, 应给予高度重视并及时正确的处置。假单胞菌的尿路感染是医院内泌尿道交叉感染的常见菌之一, 留置导尿管是截瘫患者获得感染的最常见诱因, 其他如神经原膀胱、尿路梗阻, 慢性尿路感染长期应用抗菌治疗亦易罹患假单胞菌感染, 有资料报道40%的铜绿假单胞菌败血症的原发病为尿路感染。铜绿假单胞菌的主要耐药机制:耐药机制异常复杂, 总括之, 主要与以下因素有关: (1) 细菌产生抗菌活性酶, 如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等; (2) 细菌改变抗菌药物作用的靶位, 如青霉素结合蛋白 (PBPs) 、DNA旋转酶等结构发生改变, 从而逃避抗菌药物的抗菌作用; (3) 外膜通透性降低; (4) 生物膜形成; (5) 主动泵出系统。其中主动泵出系统在铜绿假单胞菌多重耐药机制中起着主导作用;抗菌药物的主要作用机理及耐药机制:三四代头孢的耐药与PA菌外膜通透性降低, 产β-内酰胺酶, 产低亲和力的PBPs有关, 氟喹诺酮药[1], 对抗生物膜效果很强, 是临床治疗PA的主要药物之一。环丙沙星是氟喹诺酮问世以来, 第一个被应用于治疗PA感染的药物, 左氧氟沙星是氧氟沙星的左旋异构体, 通过阻断细菌DNA合成而达到抑菌的效果。但随着氟喹诺酮类的广泛应用其耐药率也不断增高。有研究表明:喹诺酮类药物的耐药机制主要包括以下几个方面, QRDR基因突变:导致酶结构改变, 使药物不能与酶DNA复合物稳定结合;gyr A基因的突变是氟喹诺酮类药物对PA临床分离株的主要耐药机制, par C基因的突变可使耐药性增强;主动外排泵系统的变异而导致细胞内药物浓度降低;外膜蛋白和脂多糖的变异均能使细菌摄取药物的量减少而导致耐药[2]。
氨基糖苷类药物的耐药机制与氨基糖苷类纯化酶的产生和多重耐药主动外排系统有关, 临床常用联合用药方式治疗PA感染, 如碳青霉烯类抗生素与氨基糖苷类抗生素或与新一代氟喹诺酮类抗生素合用, 可降低MDRP耐药率;加酶抑制剂的β-内酰胺酶类复合抗菌药物[3]在治疗产ESBL的铜绿假单胞菌有较好的效果, 碳青酶烯类对β-内酰胺酶的PA抗菌活性很强, 耐药率低, 但其同时也是一种很强的β-内酰胺酶的诱导剂, 其耐药机制与PA产金属酶及细菌的特异性外膜通道蛋白OPr D2丢失有关, 耐碳青酶烯类的PA常为多重耐药菌, 甚至为泛耐菌, 故临床应合理地慎用亚胺培南和美洛培南;耐药监测:本文资料在20种抗生素中, 氨苄西林、呋喃妥因、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、呋喃妥因、复方新诺明的耐药率极高均大于92%, 三代头孢中的头孢曲松耐药率也高达84.3%, 氨曲南耐药率21.2%, 按耐药率低于30%的推荐用药原则, 其余抗菌药物可做为推荐用药。
在同家医院不同时期PA对9种抗菌药物的耐药率监测对比资料显示, 该院在科学合理用药方面不断地规范和取得明显成效;实验室快速准确的病原菌分离和耐药性监测, 有利于指导临床抗生素的正确使用, 减少院内感染, 节约医疗资源, 了解各类抗菌药物作用机制及细菌的耐药机制, 有利于防止多重耐药菌和泛耐菌的蔓延和扩散。
摘要：目的:了解铜绿假单胞菌 (PA) 医院感染现状及其对抗菌药物的耐药性, 为临床医生合理用药提供科学依据。方法:2012年1月-2013年6月某三甲医院分离的1003株铜绿假单胞菌株进行耐药分析, 采用法国生物梅里埃VITEK-2 XL全自动微生物鉴定系统, 及VITEK-2配套药敏卡片。结果:PA在呼吸道标本中检出率最高, 占74.88%, 在20种抗菌药物中耐药率小于30%从低到高依次为阿米卡星 (2.4%) 、妥布霉素 (3.9%) 、哌拉西林/他唑巴坦 (5.9%) 、庆大霉素 (6.2%) 、左旋氧氟沙星和环丙沙星 (6.7%) 、美洛培南 (7.8%) 、亚胺培南 (7.9%) 、头孢吡肟 (8.7%) 、哌拉西林 (9.8%) 、头孢他啶 (11.7%) 、氨曲南 (21.2%) 。2004-2007年与2012-2013年的PA耐药率比较, 差异均有统计学意义 (P<0.001) 。结论:PA是医院感染重要致病菌, 加强监控了解耐药机制及规范用药以减少高耐菌的产生。
关键词：绿假单胞菌,医院感染:耐药机制
参考文献
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[2]王燕.铜绿假单胞菌的耐药机制及抗生素应用[J].实用医技杂志, 2008, 15 (11) :1408-1409.
铜绿假单胞菌临床耐药分析 篇4
1材料及方法
1.1 2002年至2005年,本院细菌室从临床送检的各类标本中,经培养分离出铜绿假单胞菌150株。由本院细菌室参照《全国临床检验操作规程》进行细菌培养和分离,采用K-B法常规进行药物敏感试验。铜绿假单胞菌(ATCC27853)质控菌株,购自卫生部临床检验中心。
1.1 对4年来检出的铜绿假单胞菌进行回顾性分析,比较其对常用抗菌素耐药率和药物敏感性试验结果。
2结果
2.1 标本类型与分离的铜绿假单胞菌菌株:
见表1。
2.2 药敏结果
见表2。
2.3铜绿假单胞菌在不同年份对4种抗生素的耐药率:见表
3讨论
铜绿假单胞菌,分布广泛,水、空气、土壤、医院环境中都存在此菌,也是医院内最常见的致病菌,广泛存在于污染的医疗器械中,成为医院感染的重要来源。铜绿假单胞菌几乎可感染人体的任何组织和部位。铜绿假单胞菌的耐药机制复杂,产生高水平染色体介导的AmpCβ-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。此外,铜绿假单胞菌极易形成生物膜,这是铜绿假单胞菌难以被清除、感染易慢性化的主要原因[1]。铜绿假单胞菌生物膜产生的β-内酰胺酶主要分布在生物膜的表面,可通过结合或水解β-内酰胺类抗菌药物,阻止抗菌药物进入生物膜内部。β-内酰胺酶在生物膜细菌中不仅能够通过降解、灭活抗菌药而发挥作用,还可能与外多糖基质协同作用,降低抗菌药物的渗透[2]。
从表1看出, 150株铜绿假单胞菌中118株来源于痰液,占居首位,其余32株来源于其他标本,可见铜绿假单胞菌是呼吸道感染的主要致病菌之一。这主要是因铜绿假单胞菌的胞膜能产生具有粘附的藻酸盐生物膜,使细菌易附于呼吸道黏膜,不易吞噬,形成物理屏障。而且物理屏障的形成使抗菌药物的渗透性降低,并中和部分抗菌药物,使被膜内的细菌处于生长不活跃期,导致抗菌药物不敏感。因此,引起下呼吸道感染的铜绿假单胞菌在临床上治疗比较困难[3]。所以,对呼吸道感染,尤其是下呼吸道感染,要提高送检意识,及时正确留取标本作病原菌检查及药敏试验,针对性合理用药,规范治疗,并且加强消毒隔离,提高护理水平,减少医院感染的发生。
表2中, 铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方磺胺甲基异恶唑、头孢拉定、复方磺胺甲基异恶唑、头孢曲松、头孢噻肟、头孢呋辛耐药率大于80%,复方磺胺甲基异恶唑及喹诺酮类,因其广泛应用而耐药率也较高。因此在治疗时应首先排除此类药物。第三代头孢菌素对铜绿假单胞菌虽有较强的抑菌作用,但随着近年来三代头孢菌素的广泛应用和滥用以及新的β-内酰胺酶出现,导致铜绿假单胞菌对三代头孢菌素的耐药日益严重,本研究显示,铜绿假单胞菌对头孢噻肟的耐药率为90%。
其他β-内酰胺类抗菌药的耐药率为氨曲南37.3%、哌拉西林34.7%、头孢他啶31.3%,这些药可考虑选用。
而耐药率较低的阿米卡星16.7%、左氧氟沙星16.7%、亚胺培南14.6%、呋喃妥因12.6%,可作为首选,但在氨基糖甙类药物中,阿米卡星的耐药率16.7%,与其较强的耳毒性及肾毒性 而在临床较少应用有关。左氧氟沙星为氧氟沙星的左旋异构体,与沿用的氟喹喏酮类抗菌药物相比保持了对需氧革兰氏阴性杆菌的良好抗菌作用,增强了对革兰氏阳性菌的抗菌活性,对呼吸系统感染的常见致病菌具有高度抗菌活性。本研究中,其耐药率低,为16.7%,临床应用效果明显。
铜绿假单胞菌是临床常见的重要致病菌,对多种抗菌药物天然耐药,临床可供选择的治疗药物较少,是抗感染治疗的严峻挑战[4]。亚胺培南是目前治疗产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的肠杆菌科和非发酵菌感染中占有重要地位。但随着亚胺培南的临床应用,铜绿假单胞菌对其耐药性逐年增加,并且亚胺培南耐药菌株可引起医院感染的发生。不可忽视的是,对革兰阴性杆菌最敏感的亚胺培南的耐药率为14.6%,说明产金属酶及碳青酶烯水解酶的铜绿假单胞菌占相当比例,随着亚胺培南临床治疗使用的增加,必须筛选出更多耐碳青酶菌株,因此,虽然对亚胺培南耐药率较低,临床也要注意亚胺培南的长期使用问题,严格掌握用药指征,减少抗菌药物选择性压力[5]。建议亚胺培南应限制在下列情况使用:多重微生物混合感染(特别是合并厌氧菌感染)铜绿假单胞菌对其他抗菌药物耐药; 应用亚胺培南应经常进行细菌培养和药敏试验,以尽早发现亚胺培南耐药菌株[6]。
表3中,铜绿假单胞菌的耐药较为严重,铜绿假单胞菌耐药范围大,其耐药性变异发展较快,分析不同年份铜绿假单胞菌耐药率,对亚胺培南、头孢他啶、哌拉西林、阿米卡星逐年上升,其对亚胺培南耐药率相对较低。
通过对150株铜绿假单胞菌的分析,希望临床医师在治疗铜绿假单胞菌的感染过程中,充分考虑其耐药机制,选用耐药率低的抗菌药物,治疗上建议用氨基糖甙类抗菌药物提高对外膜的通透性,加上联合使用耐酶的β-内酰胺类抗菌药物,可以有效地控制感染,避免诱导铜绿假单胞菌产生β-内酰胺酶而对抗菌药物广泛耐药[7]。
有些医师根据经验用药,直接选用抗菌素进行治疗,显然,这是耐药现象明显的一个重要原因,再者,临床为控制感染,往往采用大剂量抗菌素,且长期使用,势必降低药物效能,使耐药菌株增加,耐药种类增加。因此,遇有可疑细菌感染性疾病,首先考虑做常规细菌培养和药敏试验,治疗铜绿假单胞菌感染应严格掌握抗菌药物的适应证,根据药敏结果选择抗菌药物,监测铜绿假单胞菌耐药率以指导临床用药,选择有效抗菌药物联合用药。合理应用抗菌素,并尽可能减少可致铜绿假单胞菌定植或感染的医源性操作,以预防或减少医院感染。
摘要：目的了解本院铜绿假单胞菌的分布及耐药情况。方法对本院细菌室从2002-2005年临床各科标本中分离的150株铜绿假单胞菌进行药敏试验。结果对头孢拉定、复方磺胺甲基异恶唑、头孢曲松、头孢噻肟、头孢呋辛、头孢西丁耐药率很高。虽然对阿米卡星、左氧氟沙星、亚胺培南等耐药率较低(分别为16.7%、16.7%、14.6%),临床用药也应注意。结论重视细菌培养,合理使用抗菌素,减少耐药菌株,减少医院感染。
关键词：铜绿假单胞菌,抗菌素,耐药性,医院感染
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铜绿假单胞菌常见的耐药机制 篇5
1 外膜通透性改变
PA因其特殊的细胞膜结构而有多重耐药特点, 膜通透性降低或消失是最主要原因。PA的LPS分子通过特定脂肪酸链相互铰链, 使得膜流动性和通透性很低, 脂溶性药物很难通过细菌外膜[3]。PA的外膜由微孔蛋白孔道组成, 没有类似其他细菌的“高通透”性的孔蛋白, 这些微孔蛋白仅允许分子量小的糖类扩散, 另外由于外膜蛋白编码基因突变及脂多糖结构改变, 导致膜通透性降低或消失, 使药物不易进入菌体, 故对多种不同结构的抗菌药物高度耐药。有研究证明, PA的外膜通透性低于大肠埃希菌, 仅为大肠埃希菌的1%~8%[4]。
2 外膜蛋白Opr D2缺失
外膜蛋白D2 (Opr D2) 是外膜的通道之一, 对碳青霉烯类具有通透性, 是碳青霉烯类抗生素进入的通道[5]。Opr D2孔道能有效阻止其他β内酰胺类药物的通透, 是小分子的亚胺培南快速进入菌体而达高度抗菌活性的特异通道, 其缺失导致药物不能进入细菌体, 从而产生耐药[6]。Opr D2具有配体特异性, 能形成亚胺培南的特异结合位点。Yoneyama等[7]将克隆Opr D的质粒转导Opr D2缺失的亚胺培南耐药PA株, 发现该耐药株恢复了其对亚胺培南的敏感性。国内外资料显示, Opr D2减少或缺失是PA对亚胺培南耐药的主要原因之一, 也有研究认为单纯的Opr D2缺失要和其他因素一起作用才对碳青霉烯类抗生素产生明显耐药。
3 独特的药物主动外排系统
主动外排是PA耐药的重要机制, PA细胞膜上的许多蛋白能将抗菌药物主动外排, 其与低通透性协同作用, 导致PA固有多药耐药[8]。目前PA中常见7种外排系统:Mex AB2Opr M、Mex CD2Opr J、Mex EF2Opr N、Mex XY2Opr M、Mex JK2Opr M、Mex HI2Opm D、Mex VW2Opr M。其中Mex AB2Opr M是最重要的, 属于野生有组成性的表达, 能够对包括β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类等抗菌药物天然耐药。PA的外排系统主要由三部分外排蛋白组成, 这些蛋白包括内膜转运蛋白, 位于质膜的能量依赖外排泵, 有识别药物的作用, 但不具有特异性;外膜通道蛋白:如Opr M、Opr J、Opm D等, 控制抗生素进出细胞, 形成门通道, 能将药物排出到菌体外;膜融合蛋白:Mex A、Mex C、Mex E、Mex X等, 是外胞质蛋白家族, 与内膜交接, 形成主动外排系统并开口于外膜复合体, 将抗菌药物直接泵出菌体外。这三部分外排蛋白形成一种贯穿细胞内外膜的通道, 即主动外排系统, 能将靶物质直接从细胞质泵到细胞外中。Sobe I等[9]认为至少有mex R、na IC、na ID3种不同基因的突变能增加Mex AB2Opr M的表达。只有Mex EF2Opr N受mex T编码产物的正性调节, 大多数外排泵系统都受调节基因的负性调节, 在mex T突变时, Mex EF2Opr N才能介导PA的多重耐药。总之外排系统能有效的排除多粘菌素外所有的抗菌药物, 由不同泵所泵出的抗菌药物种类不同, 从而导致PA多药耐药。
4 细菌产生超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) , 头孢菌素酶 (Ampc) 以及金属β-内酰胺酶 (MBLs) 等多种β内酰胺酶
4.1 PA可产生几乎所有类型的β内酰胺酶[10]
这些β内酰胺酶分为染色体介导酶和质粒介导酶两类。主要是染色体介导酶, 质粒介导酶<2%[11]。其主要包括ESBLs酶、Ampc酶、MBLs酶。
4.2 ESBLs
是指能水解青霉素、三代头孢菌素、单环内酰胺类药物, 能被β-内酰胺酶抑制剂所抑制的一类β-内酰胺酶[12]。ESBLs基因由普通的β内酰胺酶基因突变而来, 由质粒介导, 通过转导、转化和结合等方式在质粒与质粒、质粒与染色体间转移扩散使更多细菌产生ESBLs。ESBLs突变常常是由于其固有序列的基因点突变所致, 残基的突变改变了β-内酰胺酶与头孢菌素的结合, 导致抑制和水解三代头孢菌素, 致使细菌产生多重耐药, 而且酶基因的连续突变可增强酶的活力, 从而使新一代头孢菌素灭活[13]。ESBLs的耐药基因主要有TEM、SHV、OXA 3类。亚胺培南是治疗PA感染活性最强的药物之一, 但近年随着抗生素的大量使用, PA对亚胺培南的耐药率越来越高, 原因为PA在产生质粒介导的β-内酰胺酶时可同时伴有Opr D的缺失;另外ESBLs中如VEB21a、OXA250等可水解亚胺培南[14]。
4.3 Ampc
Ampc酶即头孢菌素酶, 按BUSH功能分类属于1类β-内酰胺酶, 能水解三代头孢菌素和头霉素, 对碳青酶烯和4代头孢菌素较敏感。临床首先发现的是由染色体介导的Ampc酶, 该基因呈诱导型表达。所有的PA都能表达有染色体介导的Ampc酶[15]。另一类Ampc酶由质粒介导, 已陆续报道了25种以上的基因型, 其中以DHA型我国最常见。临床分离株常携带Ampc以外的其他β-内酰胺类酶基因, 表现为对青霉素、一至三代头孢菌素、头霉素、氨基糖甙类均耐药, 但对碳青酶烯类、第四代头孢及氟喹诺酮类敏感。一份研究表明, 重症监护病房PA中产Ampc酶的菌株占60.0%, 且此菌株仅对亚胺培南、头孢吡肟保持较高敏感率, 而对头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南敏感率明显降低 (P<0.05) [16]。PA染色体固有携带Ampc基因, 当有诱导作用的β-内酰胺类酶存在时, Ampc基因自发突变可致稳定的去阻遏表达, Ampc酶可呈持续高水平。4.4 MBLs
又称金属酶, 能水解除单环类以外包括碳青酶烯类制剂在内的所有β-内酰胺类药物的能力, 这是MBLs的主要耐药机制。耐药基因由染色体或质粒介导, 并在PA和其他革兰阴性菌中传播。该类酶主要以IPM和VIM为主。PA可同时产不同的β-内酰胺酶, 有不同的耐药机制, 杨春霞等[17]对北京5所教学医院分离的213株非重复性亚胺培南耐药PA进行研究发现, 84株有膜微孔蛋白Opr D2缺失, 其中6株同时产生IPM-1金属酶, 13株单独产生IPM-1金属酶, 2株单独产生VIM-2金属酶, 而且金属酶之间有高度同源性。所有耐药菌株之中大部分对美罗培南敏感, 只有36株Opr D2菌株对美罗培南耐药, 可能同时存在外排泵机制。
5 产生氨基糖苷类钝化酶
PA对氨基糖苷类药物耐药与携带的钝化酶基因密切相关。该酶作用于特定的氨基或羟基, 导致氨基糖苷类抗菌药物与核糖体结合减少, 使氨基糖苷类药物发生钝化。常见的氨基糖苷类钝化酶有乙酰转移酶 (AAC) 、核苷酸转移酶 (ANT) 和磷酸转移酶 (APH) 3大类, 3类酶又可按照所破坏的抗生素不同和作用点的不同而分为许多种, 目前已鉴定出50多种, 因酶的钝化而导致了高水平耐药。氨基糖苷类钝化酶通常由质粒和染色体携带, 常和MBLs、ESBLs等同存在与细菌的可动遗传因子整合子或转座子上, 从而导致多耐药性在同种或异种细菌间相互转移传播。
6 抗菌药物靶位的改变
PA通过改变靶位青霉素结合蛋白 (PBP) 和DNA拓扑异构酶的结构, 对β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药物产生耐药。
6.1 青霉素结合蛋白
PBP是细胞内膜蛋白质, 参与合成细菌细胞壁肽聚糖, 是保持细菌细胞壁正常形态与功能的必要条件。PBP编码基因突变致其结构改变, 与β-内酰胺类抗菌药物合成降低, 从而产生耐药。多数青霉素或头孢菌素类药物主要与PBP1、PBP3结合, 使细菌变形萎缩逐渐溶解死亡。据报道PBP除了作为β-内酰胺类抗生素的作用靶位外, 同时参与Ampc酶的诱导产生过程[18]。
6.2 喹诺酮类抗菌药物靶位的改变
喹诺酮抗菌药物通过抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ、IV, 阻断DNA复制而产生抗菌作用[19]。大量研究表明, PA对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制主要包括3个方面: (1) 编码喹诺酮类抗菌药物对细菌作用靶位的基因突变, 导致酶结构改变, 使药物不能与酶-DNA复合物稳定结合, 双基因突变比单基因突变对喹诺酮类药物耐药性更高。 (2) 外排系统调节基因的变异导致细胞内药物浓度降低, 主动外排系统中的外膜蛋白过量表达导致药物主动外排增加。 (3) 膜通透性降低和形成生物膜, 外膜蛋白和脂多糖的变异使细菌摄取药物减少而产生耐药。其中基因突变, 药物不能与酶-DNA复合物稳定结合是PA的主要耐药机制, 外排机制也起重要作用。
7 细菌形成生物被膜
生物被膜是细菌吸附于生物材料或机体腔道表面后分泌的藻酸盐多糖和纤维蛋白, 由菌体和自身分泌的胞外基质组成, 不同细菌和不同环境下其被膜形态有所不同。有研究表明, 65%以上的人类细菌感染与生物膜有关, PA极易形成生物膜[20]。生物被膜的形成可加速细菌耐药性的传播, 威胁人类健康。生物被膜结构坚实稳定, 不易破坏, 因而其存活能力很强。生物被膜的耐药机制目前还不十分清楚, 有营养限制、渗透障碍和免疫逃逸三种学说。营养限制学说主要是指生物膜内细菌营养物质等缺乏使细菌进入一种非生长状态, 这种饥饿状态的细菌对抗生素不敏感;渗透障碍学说主要从生物膜的结构, 如细菌合成的胞外基质阻碍抗生素穿透生物被膜分析;免疫逃逸学说认为生物被膜的存在阻止了机体对细菌的免疫力, 使之产生免疫逃逸现象, 减弱机体免疫力和抗菌的协同杀菌作用。总之, 生物膜PA的耐药机制非常复杂, 不同机制在生物膜耐药中所起的作用仍需要进一步研究。
PA对抗生素的耐药性呈逐年上升趋势, 其不是由单一因素造成的, 常是多种耐药机制共同作用所致, 其机制复杂、多样, 而且具有交叉耐药性。应综合评价PA的耐药规律和特点, 指导临床合理使用抗生素。
摘要：铜绿假单胞菌 (PA) 是医院感染常见的条件致病菌, 耐药发生率高。其主要耐药机制有外膜通透性改变、外膜蛋白OprD2缺失、独特的药物主动外排系统、产生多种β内酰胺酶及氨基糖苷类钝化酶、抗菌药物靶位的改变、形成生物被膜等。而且它对不同抗生素有着不同的耐药机制, 给临床治疗带来严峻挑战。
铜绿假单胞菌耐药机制的分析 篇6
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2011年11月至2012年12月本院住院患者的各类送检标本中分离的的铜绿假单胞菌154株。
1.2 检测方法
(1) 仪器试剂:仪器为长沙天地人自动微生物鉴定仪。MH琼脂、血琼脂、各种生化鉴定微量管购自杭州天和微生物有限公司;药敏纸片购自英国Oxoid公司。 (2) 方法:常规培养方法, 药敏结果判断标准参照CLsi2011年的标准。
2 结果
2.1 铜绿假单胞菌的分布情况:
从住院患者标本分离的154株铜绿假单胞菌中, 痰标本127株, 各种分泌物26株, 尿液1株。可见分离菌主要来自呼吸道标本。
2.2 铜绿假单胞菌在临床各科的分布情况:
154株铜绿假单胞菌中来自呼吸内科的52株, 内分泌科6株, 康复科46株, 干部科11株, 外科16株, 儿科7株, ICU10株, 五官科6株。可见, 铜绿假单胞菌主要分布于呼吸内科, 其次是康复科的慢性病患者。
2.3 铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况:
铜绿假单胞菌对米诺环素、头孢曲松、头孢唑肟耐药率达到50%以上, 对氟喹诺酮类、氨基糖苷类均低于20%, 对碳青霉烯类的美洛培南耐药率达到了7.8%。具体见表1。
3 讨论
铜绿假单胞菌在自然界中分布广泛, 为土壤中存在的最常见的细菌之一。各种水、空气、正常人皮肤、呼吸道和肠道等都有其存在。在水及潮湿的环境中极易生长, 并对抗生素和消毒剂有天然耐药质粒。随着侵入性医学治疗的发展, 本菌已成为医院内感染的主要致病菌[2]。本室通过追溯性统计分析, 了解铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况, 本地区的铜绿假单胞菌对米诺环素、头孢曲松、头孢唑肟的耐药率超过了50%。目前铜绿假单胞菌对头孢类抗菌素耐药机制报道最多的是, 细菌产生头孢菌素酶 (Ampc酶) , 此类酶是由染色体介导的。目前已发现50多种, 表现为对第一代至第三代头孢菌素、头霉类、氨基糖苷类和抗假单胞青霉素均耐药, 对四代头孢可显示敏感[3]。
分析发现有12株对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌, 产金属B-内酰胺酶是引起碳青霉烯类抗生素耐药的原因。金属B-内酰胺酶 (MBLs) 是一组活性部位为金属离子 (主要为Zn2+等) , 且必须依赖它们的存在才能发挥催化活性的酶类。能水解大多的B-内酰胺抗生素, 包括青霉素、头孢菌素、头霉素、碳青霉烯类, 从而造成耐药。自从1988年由日本发现的第一株以来, MBLs已发现了十多种[4], 给铜绿假单胞菌感染的治疗带来很大的困难。现在对碳青霉烯类的耐药机制是微生物界的热门课题, 在今后的学习工作中, 多注意这方面的知识更新。
本地区的铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类抗生素耐药性都低于20%。氟喹诺酮类药物通过形成DNA-拓扑异构酶-氟喹诺酮类药物三元复合物, 阻止DNA-拓扑异构酶变化, 妨碍细菌DNA复制、转录, 以达到杀菌的目的。而拓扑异构酶的突变, 改变了三元复合物的亲和力, 抑制了氟喹诺酮的活性而产生耐药[5]。
总之, 铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂, 对抗生素的耐药不是由单一的因素造成的, 特别是多重耐药株的出现, 使其耐药机制更为复杂, 常是多重机制协同作用。这次分析中出现了5株全耐的泛耐药株, 给临床治疗带来很大困难。因此, 遏制抗生素滥用, 重视微生物检验, 规范药敏试验是关键。这更促使我们微生物工作者提高业务水平, 加快检验速度, 为临床的合理用药出一份力。
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假单胞菌属 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
我院2012年1月~2014年6月共确诊多重耐药铜绿假单胞菌呼吸道感染患者76例, 按照随机自愿原则分为观察组和对照组各38例。观察组男21例, 女17例;年龄21~73 (43.5±8.3) 岁;对照组男23例, 女15例;年龄20~76 (44.2±8.7) 岁。两组性别、年龄等一般临床资料无显著性差异 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 药敏测试
铜绿假单胞菌药敏分析操作方法及结果判断参考CLSI2010年版的标准[3], 其结果为对环丙沙星、氨曲南、头孢吡肟妥布霉素、头孢曲松、头孢他啶、哌拉西林、庆大霉素、头孢噻肟、头孢哌酮、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦表现为耐药, 对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、美罗培南表现为敏感。
1.3 治疗方法
两组均采用药物治疗, 给予谷氨酰胺颗粒10g, tid, 疗程2w。此外, 观察组给予磷霉素4g+5%葡萄糖注射液100ml和头孢哌酮/舒巴坦4g+0.9%氯化钠注射液250ml) 静脉滴注, bid;对照组给予阿米卡星80mg+5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注, qd。两组均以2w为1疗程。
1.4 疗效评估
根据患者症状体征进行疗效评估, 参考中国人民解放军总后勤部卫生部制定的关于多重耐药铜绿假单胞菌感染治疗疗效标准[4], 其中以患者临床症状完全消退, 体内铜绿假单胞菌消除, 相关影像学及实验室检查正常为痊愈;以患者临床症状、相关影像学及实验室检查得到明显改善, 且在用药期间体内铜绿假单胞菌检查呈阴性为有效;以患者临床症状、相关影像学及实验室检查得到一定程度的改善为好转;以患者临床症状未得到任何改善为无效。
1.5 统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析, 计数资料用χ2检验, 多组间比较采用方差分析, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组疗效比较
经治疗后, 观察组痊愈19例, 有效11例, 好转6例, 无效2例;对照组痊愈7例, 有效5例, 好转4例, 无效22例。观察组有效率为94.7%, 显著高于对照组的42.1% (P<0.05) 。见附表。
2.2 两组药物不良反应发生情况
观察组出现血小板减少2例, 不良发应发生率为5.3%;对照组出现血小板减少4例, 不良发应发生率为10.5%。
3 讨论
临床上治疗多重耐药铜绿假单胞菌的药物种类有限, 在无新的治疗多重耐药铜绿假单胞菌有效药物前, 充分利用现有药物对于降低耐药性, 提高疗效, 具有重要的临床应用价值。在治疗多重耐药菌引起的临床感染时, 联合用药可以较少药物的用药剂量充分发挥药物协同和相加作用, 提高药物的治疗效果和降低药物副作用。
本次研究中, 观察组采用磷霉素与头孢哌酮/舒巴坦联用, 其总有效率高达94.7%, 药物不良反应为5.3%, 与采用头孢哌酮/舒巴坦和阿米卡星联用的治疗效果相比, 明显优于对照组。因此, 联合用药应科学合理地选择药物, 充分发挥药物的协同和相加作用。本次研究的药敏实验结果显示, 本组多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性较高, 对大部分抗菌药物具有耐药性, 仅对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、美罗培南表现为敏感。结合文献报道, 笔者分析认为对照组采用头孢哌酮/舒巴坦与阿米卡星联合用药效果并不理想, 其可能原因与细菌形成生物膜或/和主动外排机制加强有关[5]。徐志豪等[6]发现, 磷霉素能够有效抑制铜绿假单胞菌的生物膜合成, 能够有效阻断细菌生物膜或/和主动外排耐药机制。因此, 本次研究选用渗透性强、体内结构稳定的小分子药物磷霉素, 以起到破坏铜绿假单胞菌细胞壁, 促进头孢哌酮/舒巴坦顺利进入铜绿假单胞菌, 提高细菌内药物有效浓度, 从而获得满意的治疗效果。总之, 磷霉素与头孢哌酮/舒巴坦治疗多重耐药铜绿假单胞菌, 可以明显抑制和对抗细菌耐药机制的产生, 值得在临床治疗中推广。
摘要：分析比较不同药物治疗多重耐药铜绿假单胞菌的临床疗效。选择确诊的76例多重耐药铜绿假单胞菌呼吸道感染患者为研究对象, 按照随机自愿原则分为观察组和对照组, 观察组给予静脉滴注磷霉素和头孢哌酮/舒巴坦, 对照组给予静脉滴注阿米卡星, 治疗2w后, 根据患者症状体征进行疗效评估并比较两组不良反应发生情况。观察组痊愈 (19例) 和总有效率 (94.7%) 均显著高于对照组 (7例和42.1%, P<0.05) ;观察组出现血小板减少2例, 不良发应发生率为5.3%, 对照组出现血小板减少4例, 不良发应发生率为10.5%。磷霉素与头孢哌酮/舒巴坦治疗多重耐药铜绿假单胞菌疗效显著, 安全可靠, 值得临床推广。
关键词：多重耐药,铜绿假单胞菌,药物治疗
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