行为事件访谈法操作步骤总结

行为事件访谈法操作步骤总结（共5篇）

行为事件访谈法操作步骤总结 篇1

行为事件访谈法操作步骤总结

行为事件访谈法是在进行胜任力模型研究过程中由美国哈佛大学教授麦克里兰提出来的，在胜任力模型的建立中具有特殊的地位和作用。行为事件访谈法主要采用了关键事例法等访谈方式，请受访者回忆过去半年或一年在工作上感到最具有成就感（或挫折感）的关键事例，收集被访谈人员在代表性事件中的具体行为和心理活动的详细信息的访谈方法。

行为事件访谈法的的主要用途是通过被访谈者对以往工作事件的描述，发现杰出者普遍具备的特质，提炼出被访谈者的胜任特征，建立岗位胜任力模型。

结合本人在华峰氨纶、西安欧亚等咨询项目实际操作中的经验教训，总结出行为事件访谈法的操作步骤，供读者参考。

总体来说，进行行为事件访谈的六大步骤分别是：

1、了解被访谈者的背景，准备访谈提纲与录音设备

2、进行自我介绍和访谈目的介绍

3、询问被访谈人的工作履历、工作内容

4、借助STAR工具深入挖掘被访谈者的行为事件

5、通过直接询问求证被访谈者所需特质

6、设计结束语

步骤1的具体描述：

了解被访谈者的背景，准备访谈提纲与录音设备。这是访谈工作的基础，目的是首先对被访谈者有一个了解，通过分析被访谈者的工作履历、工作内容等基本情况，准备一系列问题逐步引导被访谈者讲述自己的“故事”。录音是为访谈录音做准备的，通过录音后便与访谈结束后整理访谈记录。

步骤2的具体描述：

进行访谈者的自我介绍和访谈目的介绍。首先，访谈者应以轻松的口吻作自我介绍，并告知被访者访谈的目的和访谈程序。在介绍中应该明确突出三个问题：

1、保密原则——访谈者需要对访谈的目的和保密性等方面作一些补充说明，以帮助被访者消除疑虑，避免产生紧张情绪

2、时间要求——访谈者在访谈开始前应告知被访谈者本次访谈估计占用的时间，以免在访谈过程中被访谈者因为有其他安排而产生焦虑情绪

3、录音要求——访谈者在访谈开始前应征求被访谈者的意见，之后才可进行录音此举的目的是与被访谈对象建立信任关系，创造融洽和谐的谈话气氛，使其感到轻松、愉快并愿意讲出自己的事情，同时强调面谈资料的保密性。这个步骤一般不需要很长的时间，三到五分钟即可，但这个过程却是不容忽略的。步骤3的具体描述：

询问被访谈人的工作履历、工作内容。这是对被访谈者的一个熟悉和了解过程，询问的问题可以包括：

1、基本信息——姓名、性别、年龄、部门、职务、联系电话等

2、工作经历——在本单位的工作经历、之前的工作经历

3、部门信息——部门人数、规模、分工、在同行业中的地位

4、主要工作任务或职责——主要工作内容、主要工作职责

5、权力关系——对谁汇报、管理那个部门、有多少下属强调这个步骤的目的是为了了解被访谈者的工作环境信息，建立访谈者的职业形象，另外可以让被访谈者从自己熟悉的内容谈起，轻松发挥，尽快进入状态。其中了解被访谈者经历的岗位、职责，可以从初步材料中捕捉到下一步开展行为事件调查的突破口。如果被访者在归纳主要职责上有困难，可以请他描述日常工作并举例说明，了解其在岗位上实际做些什么，以便从具体细节中作出判断。另外，通过简单的聊天，还可以确定被访谈者的性格特点，并依据不同的个性特点确定面试的谈话环境。

步骤4的具体描述：

借助STAR工具挖掘被访谈者的行为事件。通过S（situation）T（Task）A（Action）R（result）的访谈思路，引导被访谈者讲故事，采集3—6个被访者在岗位上经历过的典型或关键事件（一般包括两到三个成功事例，以及两到三个失败的例子）的详细资料。

这一步骤的目的是通过有针对性的提问，引导被访谈人集中谈论真正体现其个人特质的关键事件，针对每个事件进行深入的挖掘式提问，获得在各种不同的情境下被访谈者相对稳定的行为模式，进而推断出被访谈者的胜任特征 步骤5的具体描述：

通过直接询问求证被访谈者所需特质。通过直接询问被访谈者本人对从事工作所需素质的理解，以求证被访谈者所需特质。不同的被访谈者会以自己的理解和语言来表述自己的行为特征，面对不同我被访谈者我们还需要进行的一个步骤是通过询问、总结、求证的方法来确保信息传达的有效性，也即我们理解的就是被访谈者想表达意思。这个环节可以使用的技巧是：

1、直接询问——通过直接询问被访谈者本人对从事工作所需要的胜任特征，简单明了的达到最终目的

2、归纳总结——根据被访谈人谈到的故事提炼标准化的胜任特征，寻求被访谈者的确认

3、旁敲侧击——通过让被访谈者描述其他绩优同事的胜任特征进行验证通过精炼和总结，我们就可以初步归纳被访谈真正体现的标准化的胜任特征，以利于编码和分析。

步骤6的具体描述：

设计结束语。对被访谈者表示感谢，建立友好关系，为可能存在的补访留下余地。结束语设计时应考虑的几个问题是：

1、时间控制——根据信息获取的程度和被访谈者的合作态度适时结束访谈

2、问题答疑——留给被访者一个提问的机会并作出解答

3、友好礼貌——对被访者的合作表示感谢

4、关系建立——留下进一步联系的余地这一步骤的设计目的是保持良好的商务礼仪，通过访谈中信息获取的程度、被访谈者的耐心适时结束访谈，建立与被访谈者再次合作的关系。

行为事件访谈法操作步骤总结 篇2

随着我国社会老龄化程度的不断加剧, 养老问题将逐渐成为我国政府所要解决的首要民生问题。为了适应我国养老护理事业的发展, 我校开设了老年护理专业。老年护理专业需要从新的角度考虑才能适应当前形势和社会的发展。行为事件访谈法[1]是McClelland教授结合关键事件法和主题统觉测验而提出来的, 是一种开放式的、行为回顾式的考察技术, 目前岗位胜任力研究最主要的方法就是行为事件访谈法。本研究采用行为事件访谈法对临床、学校和养老院的老年护理专家进行访谈和专家咨询, 构建科学实用的高职老年护理专业岗位胜任力指标评价体系, 以期为高职老年护理的课程设置和教学提供依据, 现介绍如下。

1对象与方法

1.1访谈对象

采用立意抽样的方法选取宁波卫生职业技术学院、宁波市5所三级甲等医院的老年病房和5所养老院, 由各单位根据研究条件推荐老年护理专家1~2名。入选标准: (1) 从事过老年护理工作或老年护理教学工作; (2) 同意参与本研究。入选的研究对象共17人, 年龄42~58岁, 平均 (50±4.23) 岁;职称:高级职称7名, 副高级职称5名, 中级职称5名;学历:硕士5名, 本科生12名;工作年限:15年以下6名, 15~30年4名, 30年以上7名。

1.2方法

1.2.1成立课题研究小组本课题研究小组成员共6名, 其中副教授3名, 讲师2名, 助教1名, 均从事老年护理教育和护理研究工作。研究小组的任务是编写访谈提纲, 选择专家并对访谈结果进行统计分析。

1.2.2制订访谈提纲通过检索Pub Med、中国知网、CBA等数据库, 根据文献回顾[2,3,4]和老年护理岗位护士[5]的特点, 参考刘俊丽[6]的护士岗位胜任特征结构问卷, 遵循科学性、完整性和可行性的原则制订访谈提纲和专家咨询表。首先设计好关键问题, 由小组成员讨论通过。选定4位专家进行预调查, 并根据预调查结果进行修正。

1.2.3统一培训研究人员研究人员需要具备良好的沟通能力、高度的鉴别力和敏锐的观察力。本研究的3名研究人员都是护理硕士毕业, 具备一定的心理学知识背景和工作3年以上的护理教育经历, 并且在访谈前进行了统一培训, 以保证访谈结果的准确性。

1.2.4访谈过程采用现象学研究法和深入访谈法, 围绕访谈提纲进行开放式提问。本次访谈内容包括:作为一名老年护理的专业人员, 在您的日常工作中, 肯定会有许多您认为做得非常成功并引以为豪的事情。下面请您详细介绍一下您经历过、记忆深刻、觉得非常成功的3件事, 具体内容包括: (1) 什么事情?发生的原因是什么?具体的背景是什么? (2) 涉及哪些人、事等要素? (3) 在这件事情中您的具体角色或者任务是什么? (4) 您当时都想到了什么? (5) 您当时的感觉如何? (6) 您当时肯定会想到采取一些具体行动, 有哪些具体行动?您为什么想采取这些行动? (7) 事情实际发展如何?出现了哪些实际困难?您实际上做或者说了些什么? (8) 结果如何? (9) 您事后的体会与感受如何?作为一名老年护理的专业人员, 您在自己工作发展的过程中, 也可能会有一些不成功的经历。请您描述一下您认为失败和遗憾的3件事, 描述内容同上。

研究人员提前通过E-mail将访谈提纲发给护理专家, 电话预约受访者。访谈开始前先向专家解释本研究的目的、访谈时间和方法, 在征得专家同意后将访谈内容进行录音, 以便后期研究使用。选择安静且方便交谈的地方进行访谈, 每次访谈对象为1人, 时间控制在1个小时内。访谈工具有录音器、笔和纸。除录音外, 研究人员对访谈对象的表情、反应、动作均做好记录。交谈结束后请专家当场填写高职老年护理专业岗位胜任力评价指标体系咨询表。

2结果

2.1应注重老年护理专业学生人文素质方面的培养

护理专业的核心价值就是关心、尊重和帮助, 护理教育应该充分体现出护理的人文关怀精神[7]。本研究中90%的专家提出老年护理专业的学生应该具有高度的爱心和责任心。因为爱心和责任心是理解和沟通的基础, 是区别于其他护理人员的重要特征。只有具有爱心, 才能把护理工作做好、做精。95%的专家提出人文素养对老年护理专业的学生是最重要的, 也是区别于其他护理人员的重要特征。

2.2应注重老年护理专业学生健康评估能力的培养

老年人全身各器官功能随年龄增长而衰退, 常常同时患多种疾病, 疾病变化隐匿, 恢复时间较长, 有更多的健康问题和需求, 增加了护理的复杂性[8]。这些复杂性使得老年护理人员必须具备专业的健康评估能力, 才能预测疾病的发生发展。本研究中90%的专家提出老年护理专业的学生应该具备较强的健康评估能力。被访者三:“老年护理岗位的工作说难是真难, 说简单绝对不简单。上次那件事情让我到现在还心有余悸。一位有心脏病的老先生, 平时按时服药, 也没有明显的症状。上午10点钟左右常规服用过地高辛后就睡下了, 饭前巡视的时候发现其意识不清, 立即开始抢救, 幸运的是抢救过来了。到现在还在纠结怎么就没看出来。”

2.3应注重老年护理专业学生操作技能和抢救技能的培养

被访者六“:我工作有二十多年了, 在老年护理岗位也十几年了, 对于我来说, 让我最有成就感的就是科里所有最难扎的静脉留置针最后全是由我去完成的。在这个时候会有一种成就感, 觉得自己的技术被大家认可、被患者认可, 也是对自己职业的一种认可吧。在老年护理工作岗位, 我觉得熟练的操作技能还是很重要的, 你有再多的知识, 给老年人进行再多的健康教育, 老人不一定信任你, 但你给他穿刺成功了, 老人就会特别信任你。”3老年护理岗位胜任力评价指标 (见表1)

4讨论

4.1一级指标分析

一级指标包括知识维度、能力维度和素质维度3个维度, 这也和高职教育知识、能力、素质并进的KAQ人才培养模式相一致[9]。从各指标的权重来看, 知识维度权重0.3、能力维度权重0.4、素质维度权重0.3。与以前研究不同的是, 该指标体系将素质维度权重增至0.3, 体现了老年护理教育除了培养知识和技能外, 也更加重视人文素质方面的培养。其中两位专家也建议增大素质维度权重, 以体现老年护理与其他护理的区别, 即更加注重人文素质的培养。研究小组在咨询其他专家意见的基础上, 将素质维度权重由0.2增加至0.3, 知识维度权重由0.35降至0.3, 能力维度权重由0.45降至0.4。由于老年护理专业的学生还需要进行护士执业资格考试, 因此知识对于老年护理专业学生仍然是非常重要的, 可为其以后的可持续发展奠定基础。

4.2二级指标分析

二级指标是对一级指标的细化, 共有12个条目。其中知识维度包括专业知识、基础知识和其他相关知识3个条目;能力维度包括基本护理技能、沟通交流能力、培训能力等6个条目;素质维度包括身体素质、心理素质和思想素质3个条目。基本护理技能在能力目标中权重0.40, 反映了护理基本技能是做好老年护理工作最基本的也是最重要的技能。60%的专家认为, 管理能力对于老年护理专业的学生来说比较重要, 因为在养老机构, 护士需要扮演领导者的角色, 其在值班时对人力、物力、财力的安排也比对医院的护士要求更高, 因此管理能力是老年护理毕业生必备的技能之一。该指标体系中还增加了培训能力和科研能力。80%的专家认为老年护理专业是一个新的专业, 目前专业水平还比较低, 需要大量的科研以促进这个专业的发展, 还要承担养老员的培训、学科的发展等任务。心理素质在素质目标中的权重为0.40, 反映了拥有爱心、责任心是做好老年护理工作的前提, 也是最重要的素质。

4.3三级指标分析

三级指标是对二级指标的细化和解释。在知识目标中增加了老年护理新进展, 强调了高职老年护理毕业生除了要掌握护理学基础知识和专科知识外, 对老年护理的新进展也要有所了解, 从而为以后的职业发展奠定基础。90%的专家认为, 应对在校高职护理学生进行护理科研意识教育。因此, 在其他相关知识中“能熟练使用计算机”的权重为0.3, “达到大学英语三级及以上水平”的权重为0.2。80%的专家认为, 老年护理专业的学生还应具有社会学和管理学方面的知识, 因此在其他相关知识里, 社会学知识 (社会学概论、管理学等知识) 的权重为0.1。90%的专家认为很难对人际关系和谐这一条目进行客观评价, 建议删除, 但是65%的专家认为护士就是要与不同的患者打交道。因此, 建立良好的人际关系是老年护理毕业生应具备的技能。

本研究使用行为事件访谈法, 通过面对面交谈和当场填写咨询表等方法构建老年护理专业学生岗位胜任力指标评价体系。与以往研究使用的Delphi法[10]相比, 本问卷的回收率高、可信度高, 因此, 本结果更加科学合理和可行。本研究的结果为高职老年护理专业学生的岗位胜任力提供了量化标准, 也为高职老年护理专业的课程设置等教学改革提供了依据。如何客观准确地使用该指标对高职老年护理专业进行课程改革将是我们下一步的研究任务。

参考文献

[1]Deborah H, Carolyn H.The ideal attributes of chief nurses in Europe:A Delphi study[J].J Adv Nurs, 2003, 43 (5) :441-448.

[2]Lenburg C B.Assessing the goals of nursing education:issues and approaches to evaluation outcomes[M].New York:NLN Press, 1991.

[3]Michael A, Angela B.Performance management[M].London:The Cromwell Press, 1998.

[4]张俐, 任辉, 刘玉馥, 等.优秀护士人格特征研究[J].实用护理杂志, 2000, 16 (2) :5-6.

[5]化前珍.老年护理学[M].北京:人民卫生出版社, 2007.

[6]刘俊丽.护士胜任特征结构及特点的研究[D].重庆:第三军医大学, 2006.

[7]沈宁.护理教育:有质量才有前途[J].中华护理教育, 2006, 3 (4) :185-186.

[8]阮小玲, 康又乐, 石红妮.老年护理需求与护理教育改革的思考[J].护理研究, 2005, 19 (10A) :2057-2059.

[9]祝士明.高职教育专业质量保障体系的研究[D].天津:天津大学, 2006.

行为事件访谈法操作步骤总结 篇3

1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。

2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。

4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。

6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。

7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。

一、概念和常用方法介绍

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。

2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。

4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍

1）免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。

2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。

3）免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。

5、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

6、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。

7、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。

二、实验流程简介

1、SP三步法

1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物

酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（最好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。8）PBS冲洗，3分钟×5次。9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。10）PBS冲洗，3分钟×5次。11）显色剂显色（DAB等）。12）自来水充分冲洗。13）可进行复染，脱水，透明。14）选择适当的封片剂封片。

2、即用型二步法 1）脱蜡、水化组织切片。2）根据所应用的一抗的特殊要求，对组织切片进行预处理。3）0.3%或3%H2O2去离子水孵育5分钟-30分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS或TBS冲洗。4）滴加一抗，室温或37℃孵育30~60分钟，或4℃过夜，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。5）滴加enhangcer增强剂，37度30min，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。6）滴加通用型IgG抗体-Fab段-HRP多聚体，室温/37℃孵育30分钟-1h，PBS/TBS冲洗，3分钟×5次。7）应用DAB溶液显色。8）蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明、封片。

三、免疫荧光技术

1、免疫荧光方法中的重要环节 1）冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定：切好片风干后立即用冰西奈山环保组织固定液固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。6）复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。7）封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。8）切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。（中性及弱硷性条件（PH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）9）拍照：有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过2~3h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发；使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

已有的常见免疫组化难题集锦

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

2、一抗的选择要点和技巧是什么？（1）单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。（2）应用范围的选择。有的一抗只能用于Western blotting，或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。（3）种属反应性的选择（species reactivity）。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。(4)种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。(5)生产厂家的选择。如santa Cruz公司抗体一般1ml，价格2100元左右；而chemicon公司一抗一般100ul，价格2800元左右。这两个厂家的同一种抗体它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做Western blotting效果还可以。

3、在什么情况下使用TritonX-100？（1）Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。（3)Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用，具体参阅： http:///bbs/post/view?bid=68&id=12301317&sty=1

4、封闭血清的选择原则是什么？（1）膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！（2）封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。

5、抗体孵育条件的比较？（1）一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。（2）二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索。

6、一抗4度孵育后为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩！

7、DAB显色时间如何把握？（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。

8、免疫组化结果如何分析？（1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），最终可以分数相加，再进行比较。对于以上这几种方法，各有利弊，请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

9、在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。

10、内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么？（1）一般3%过氧化氢灭活时间短点，可以10min左右；而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般10~30min。（2）用西奈山环保组织固定液配置过氧化氢比双蒸水或PBS能更好保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片。（3）现用现配，配好后4度避光保存。

11、如何才能充分脱蜡？（1）蜡不溶于水，如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短；（2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。（3）当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果魁伟更好。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定，脱蜡的时间，原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。

12、如何最大限度地降低组织非特异性染色？（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。

13、苏木素复染时间的把握？（1）苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。（2）盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。（3）如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。

14、PBS的清洗方式选择、次数和时间的选择？（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果在加入一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的PBS为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。冲洗切片，取出切片，将PBS从上轻轻地冲洗，让PBS自上而下流下来，不要拿起切片将PBS对准切片冲洗，这样由于冲出的PBS有一定的冲击力，很容易使切片周边引起松动，导致切片的脱落。（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。冲洗切片有人提出用微振荡器振染，振下未结合的各种物，使之不产生背景，此种做法一是浪费时间，二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为，用一小烧杯柔和地于切片上冲洗，就能彻底冲洗去未结合的物质，无需附加其它条件，冲洗好于切片上再注入PBS，持续2分钟左右就完全足够了。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。刘彦仿指出：中性及弱硷性条件（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。免疫组化PBS我们目前常用的PBS的PH在7.4-7.6浓度是0.01M，根据本室十几年来的使用情况，认为该溶液价格便宜配制方面，使用效果好。（5）常用试剂的配制和使用。在免疫组织化学的染色过程中，用得最多的试剂就是缓冲液，因为切片在整个染色中，抗体的加、换、切片的冲洗，DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用，缓冲液的过酸或偏碱，都将影响染色的结果。

15、脱片产生的原因和如何防止脱片？（1）多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，迈新按说也是不错的，可是都脱成什么样子了。后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。（2）组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。（3）组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。（4）没烤好，时间短温度不够之类。（5）操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。（6）修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。（7）此外，一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。

16、背景染色较深的原因有哪些？（1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。（3）DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。（4）组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。（5）切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在4ºC冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。（6）一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

word操作步骤 篇4

给文档中的文字“一个和尚挑水喝，两个和尚抬水喝，三个和尚没水喝。”添加文字效果为“赤水情深”（选中文字—右键—字体—文字效果）

三个和尚的故事

这是一个很经典的故事了，题目叫《三个和尚》。说的是在过去的一个山定上有一个破庙，有一天，一个矮小的和尚要去山上的破庙，途径一条河流，由于天很热，便到附近的水池喝水，他来到庙中，看见庙里的缸没水了，便挑水，给观音的瓶子中加了水，那干枯的杨柳也死灰复燃。不久后，一个胖和尚也来到庙中，由于天热，到水池边喝水，他来到了庙中喝完了庙中的水，又挑了一桶，之后两人都不愿挑水，后来他们意识到这样做不行，于是两人就挑水了，但是分配总是不均匀，都想占便宜，最后两人在竿子上画了一跳线，总算平息了**。不久后，一个瘦和尚来到了庙中，由于天热，到水池边喝水，他来到了庙中喝完了庙中的水，又挑了一桶，之后三人都不愿挑水，杨柳也谢了，最后风干物燥，老鼠横行，引起了一场大火，三人奋力救火。**平息后，三人通力合作打水。

我们这一辈之前有很多人知道，于是，长辈们把它告诉了我们；我们之中应该也会有很多人将它告诉小辈，因为我们能信手拈来的故事没有很多。

一个和尚挑水喝，两个和尚抬水喝，三个和尚没水喝。就是故事的全部内容。

就是通过这样一个既简单又有趣的小故事，告诉我们应该克服自私自利的坏思想，从小培养人与人之间互相合作的好品质。

故事的启示告诉我们人不能只考虑到自己的利益，也不能太计较得失，主动一些付出关心，把每一件好事都由自己带头做起，我们就可以让我们的班级，我们的校园，我们的社会充满公义，让大家的生活都向上提升，身为班级，学校，社会的一份子，我们都有共同的责任。

二、打开考生文件夹下的Word目录中的“2012年全国青少年信息学奥林匹克竞赛.doc”文件，进行下列操作并保存。

将整个文档的行距设置为“2”

在文档中任意位置插入一个“2”行“2”列的表格

设置页面左边距为“4”厘米（操作提示：文件—页面设置）

为了进一步在安徽省青少年中普及信息技术教育，提高信息技术教育水平，选拔优秀选手组队参加2012年全国青少年信息学奥林匹克竞赛，经研究决定举办2012年全省青少年信息学奥林匹克竞赛。现将竞赛有关事项通知如下：

1、各市以市为单位组队参赛，每市三个队，小学队，初中队，高中队。承办市每组可分别增派一支代表队参赛，增派代表队的成员组成需符合竞赛组队规定。

2、3、小学组只能由小学生组成，初中组只能由初中学生组成，高中组只能由高中学生组成。参赛选手必须是2012年在校学生，年龄上限为19岁（即1993年9月1日以后出生）。高中组不含2012年暑期毕业的高三毕业生。各市须经选拔方可确定本市参加省赛的选手，若有2011年全国信息学奥林匹克联赛（复赛）提高组和普及组前20名的选手没能选拔进入市代表队的，可作为个人选手参加本次竞赛，个人选手具有获个人奖及选拔资格，但其成绩不纳入所在市队的团体总分。按2011年联赛成绩选拔参赛的市，须严格按联赛成绩从高到低组队参赛。

三、打开考生文件夹下的Word目录中的“关于精神.doc”文件，进行下列操作并保存。将正文中的字号改为“小四”

将文档中第“2”段的行距设置为“2”（提示：标题为第一段）将文档分成“3”栏（提示：全部选中--格式菜单—分栏）

关于精神

初夏季节，日里夜里总传来孤单而嘹亮的鹧鸪声，在这热风冷雨的无赖光阴中乱人心肠。“唯有鹧鸪啼，独伤行客心”，鹧鸪在中国古诗中是感伤的象征，声声鹧鸪曾唤起一代代文人的多少悉怨。认真追究起来，中国古文学对我产生过最深刻影响的精神不是别的，而是感伤。喜或者怒最多只是入心而已，感伤却能彻骨。从杨柳依依、雨雪霏霏的《诗经》到厚地高天、疾男怨女的《红楼梦》，至少在我初涉人生的少年时代，是这一以贯之的感伤传统以它有毒的甜蜜滋养了我的情感。

后来，随着年龄的增长，或许是因为生命个体所秉承的趋向健康的自然机缘，我的这种感伤病在某一天霍然而愈。我对李后主和秦少游再也没有那样强烈的共鸣了。我转换了兴趣，竟喜爱起了苏东坡的达观。苏东坡无论在怎样失意的情况下都能保持心情的平和，都能欣赏身边的风景。他在赤壁赏月，在西湖种柳，一派诗心；贬谪黄州他能“长江绕郭知鱼美”，贬谪惠州他能“日啖荔枝三百颗”，对生命的喜悦甚至表露为这样直接的口腹之快。他放弃了对生命的无限欲望，放弃了那种“非如何不可”的悲剧感，随遇而安，没有什么事情能真正伤害他。他总能在既有的境况中获得满足，总能保持生机的充盈。他知道怎样在这大不如意的人世间保护自己。这种自我保护的心传被后人誉为“生活的艺术”。这种“艺术”同样在诸种坎坷中保护了我，使我平安度过了生于人世难免的一次次危机。

然而，到了今天，在这我青春将逝的而立之年，夜半醒来我突然感到一种大惶恐。我要一直这样平庸而快乐地生活下去吗，直到暮年?在这青春将逝的时候我突然对青春有了一种强烈的留恋，突然生出一种要抓住青春、抓住生活的强烈冲动。

四、打开考生文件夹下的Word目录中的“孔子留给我们什么.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“孔子留给我们什么？”的字号改为“三号”在文档中的文字“永远安祥地躺在方寸之间”之前插入文字“肉体的孔子”将文档中的文字“他对后世的影响，是深远的。”移动到文字“他留给后世的是什么呢？”之后将文档中的文字“孔子留给我们什么？”所在的段落的对齐方式设置为“居中”孔子留给我们什么？

由济宁东行约四十公里，便是天下闻名的曲阜圣地。那里，孔子沉静入梦，不再问世事变迁。人间冷暖、烟云繁华都与他无关了。苍松翠柏间，永远安祥地躺在方寸之间，一位历史的伟人，同样摆脱不了生命的终结。然而，另一位孔子却永远地活在这个历经沧桑的世间。这位有着思想灵魂的孔子，存在于他的言论，存在于他对后世的深远影响中。并且，这种影响随着时代的变迁，越来越深远。孔子，这位被尊为圣人的伟人，他的思想被皇家尊崇。但笔者认为，皇家尊崇的不仅是他半部伦语治天下的智慧，而且，最主要的是他关于德政、民德修养的思想。翻着历史来看，孔子的思想在历史上的尊崇曾经达到过顶峰。他对后世的影响，是深远的。他留给后世的是什么呢？

以凡胎肉体的孔子来说，只觉得岁月擦肩而过。原来，史事沧桑、恰如一梦；以灵魂的孔子为基点，却觉得此时此刻的世间是那么渺小，小得只剩下历史与现实斗争的一个战场。而这个战场里所容纳的斗争，便是散见于生活中的所有矛盾。

五、打开考生文件夹下的Word目录中的“两只口袋.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“两口袋”的字体设置加粗

将文档中的文字“××”替换为“口袋”（复制××--编辑菜单—查找—粘贴（ctrl+V）××--替换—口袋—全部替换）

将整个文档的行距设置为“3”

两口袋

普罗米修斯创造了人，又在每个人的脖子上挂了两只××，一只装别人的缺点，一只装自己的缺点。他把那只装别人缺点的××挂在胸前，另一只挂在背后。因此，人们总是能够很快地看到别人的缺点，而自己的缺点总是看不到。

这故事说明人们往往喜欢挑剔别人的缺点，却无视自己的缺点。

六、打开考生文件夹下的Word目录中的“落网之鸟.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“落网之鸟”的文字颜色改为“红”色

将文档中的文字“腊人”替换为“猎人”（提示：用编辑菜单查找）删除文档中文字“带着网飞去了。”后的文字“很久以前” 把文档中的文字“后来证明果然如此。”的字体设置倾斜

落网之鸟

一个腊人在湖边布下罗网。许多鸟儿落网了。这些鸟都很大，带着网飞去了。很久以前 腊人跟在鸟儿后面跑。一个农夫看见了说“你要跑到哪儿去呀?你能用一双腿追上鸟儿吗?” 腊人回答：“如果只有一只鸟，那我是没办法把它捉住，但像现在这样，我是十拿九稳的。” 后来证明果然如此。因为天一黑，那些鸟儿便各自要朝自己的方向飞回去；一只要去森林，一只要去沼泽，一只要去田野，到头来就一起连网掉到地上，腊人便把它们捉住了。

七、打开考生文件夹下的Word目录中的“青少年上网调查表.doc”文件，进行下列操作并保存。在文档中文字“青少年上网调查表”后面插入一个“6”行“4”列的表格（操作提示：表格菜单—插入表格）

将文档中的文字“青少年上网调查表”所在的段落的对齐方式设置为“居中”（操作提示：选中文字—右键—段落—对齐—居中）

将文档中的文字“青少年上网调查表”的字体设置加粗 将文档中的文字“2012.03”移动到文字“时间：”之后

青少年上网调查表

2012.03 时间：

八、打开考生文件夹下的Word目录中的“生活的颜色.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“生活的颜色”所在的段落的对齐方式设置为“居中”

将文档中第“1”段的行距设置为“2”（说明：标题就是第一段。操作方法：选中第一段—右键—段落—行距—多倍行距—调整为2）将正文中的文字设置加粗

生活的颜色

贫病交加的梵高，在每天努力振作起来的信心支配下，画着他那些颜色绚烂、有颤动感的、不幸到他死后才撼动人心的画。他为弟弟勉力提供的几年支付颜料与土豆的法郎而感慨：“生活的色彩像碗水……”他在给弟弟的信中说。

生活的色彩和他画中色彩太不一致了，是否艺术家就是这种人？他不安地晃动着这盆洗碗水，总试图从脏污的水波中发现太阳的折射，希图看见艺术的光芒。

而对没有艺术感的人来说，他甚至感觉不到生活的色彩，这一生浸在洗碗水里，无论有钱还是没钱，都不会有梵高式的痛苦和感慨，和他看见光芒时的巨大幸福。

九、打开考生文件夹下的Word目录中的“生活与工作的关系.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“生活与工作的关系”的字体设置加粗 将整个文档的行距设置为“2倍行距”

将文档中的文字“当你还能给予的时候别轻言放弃。只要你不放弃，就有无限延伸的可能。别害怕承认你并非完美。正因如此，我们才得以藉由这脆弱的细丝紧密地串绑在一起。”移动到文字“你就活出了生命中的每一天。”之后

生活与工作的关系

几年前，在一所大学的开幕典礼中﹐可口可乐的执行长(CEO)Brian Dyson，讲到生活与工作关系： 想象生命是一场不停丢掷五个球于空中的游戏。这五个球分别为工作，家庭，健康，朋友和心灵。而且你很努力地掷着这五个球，不让它们落地。很快地你会了解工作是一个橡皮球。如果你不幸失手落下它，它还是会弹回来。但是家庭，健康，朋友和精神这四个球是用玻璃做成的。一旦你失手落下，他们可能会少了一角，留下无法挽回的记号、刻痕，损坏，或甚至碎落一地。他们将永远不会跟以前一样。你必须了解这个道理，并且致力为平衡你的生命而努力。但要怎么才做得到？

当你还能给予的时候别轻言放弃。只要你不放弃，就有无限延伸的可能。别害怕承认你并非完美。正因如此，我们才得以藉由这脆弱的细丝紧密地串绑在一起。别拿自己和他人比较，这只会降低了你原有的价值。因为我们都是独一无二的，因为我们每一个人都很特别。别人认为重要的事不是你该列为遵循的目标。只有你才知道什么最适合你。不要将贴近你的心的人事物视为理所当然的存在。你必须将他们视为你的生命一般好好地抓牢他们。没有他们，生命将失去意义。别让你的生命总在依恋过去种种或是寄望未来中逝去。如果你活在每个当下，你就活出了生命中的每一天。

十、打开考生文件夹下的Word目录中的“时间飞逝.doc”文件，进行下列操作并保存。(忽略标题，从正文开始为第一段落)

将文档中的文字“时间飞逝”所在的段落的对齐方式设置为“居中” 将文档中的文字“时间飞逝”的字号改为“三号”

将文档中第“1”段首行缩进“2”字符（操作方法：选中第一段—右键—段落—首行缩进—2字符）将文档中第“2”段首行缩进“2”字符

时间飞逝

曾经以为诸如似水年华、白驹过隙、逝者如斯之类的话语，不过是秦淮河畔那群风流才子的趣事罢了，与我那是太遥远、太遥远的事。

只有把真实变成文字，才会去记得他的存在。

时间就这样一点一点的从指尖流淌，从来都不等待任何人。

我似乎从都不懂得去了解自己从逝去的时间里得到的是什么，而是想起自己失去的是什么。很多东西都是不可以挽回的。我能做的，唯有珍惜现在吧。

十一、打开考生文件夹下的Word目录中的“网游盗号成电脑木马首恶.doc”文件，进行下列操作并保存。

将文档中的文字“网游盗号成电脑木马首恶”的字号改为“四号” 将文档中的文字“黑客论坛”的文字颜色改为“红”色

删除文档中文字“报告揭示：本报讯 ”后的文字“(记者 罗曙驰)” 给文档中的文字“窃取数字财产、窥探他人隐私”加下划线

网游盗号成电脑木马首恶

报告揭示：本报讯(记者 罗曙驰)以“窃取数字财产、窥探他人隐私”为主要目标的木马，已经取代病毒成为对网民威胁最大的网络公敌。据国内反病毒软件360安全中心昨天公布的2008年木马病毒报告显示，在2008年流毒最广、波及用户最多的恶意程序木马中，HB系列网游盗号者、AV终结者、磁碟机分居前三位，受害网民分别超过3000万、1000万、500万，其中“首恶”是一类专门盗取网游账号密码或装备的木马。

报告称，一些“老”病毒在大量木马下载器的带动下也异常活跃，它们大多采用加载驱动、频繁升级之类的手段与安全软件对抗。与病毒相比，这群“马贼”更狡猾、更隐蔽，同时也更具破坏力。报告提醒，如果用户电脑系统存在盗号木马，就会自动搜索内存、缓存等本地存储的密码信息，或截获键盘的操作信息，将密码发送到指定的电子邮箱中形成隐私外泄。

据了解，在某些黑客论坛上，花数百乃至上千元即可雇佣所谓的技术高手，来破解指定QQ号等聊天账号密码、电子邮件密码以及网站管理权限，而且使用了“货到付款”的交易方式。报告统计数据显示，以牟利为特征的木马占到恶意程序的80%以上。随着互联网应用的发展，经济利益成为网络攻击者追逐的目标，并形成一条从编写到传播、销赃的木马产业链。

十二、打开考生文件夹下的Word目录中的“文学社报名表.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“文学社报名表”的字体名称改为“黑体”

将文档中的文字“文学社报名表”所在的段落的对齐方式设置为“居中” 在文档中文字“文学社报名表”后面插入一个“2”行“3”列的表格

将文档中表格的第“2”行的行高设置为“1”厘米（选中第二行 — 右键 — 表格属性 —行）

文学社报名表

十三、打开考生文件夹下的Word目录中的“雪之味.doc”文件，进行下列操作并保存。(忽略标题，从正文开始为第一段落)

将文档中的文字“红泥小火炉”的字体名称改为“隶书”

将文档中第“2”段左缩进“4”字符（选中第二段—右键—段落—缩进 左— 4）将文档中的文字“雪”替换为“霜”

雪之味

绿蚁新醅酒，红泥小火炉。晚来天欲雪，能饮一杯无？

我常常怀疑，是不是在那个大雪天，在白雪染白了乡村的黄昏的时候，白居易是不是真的举起一杯“绿蚁新醅酒”，问刘十九，“能饮一杯无”？

我想那当真是一个浪漫的雪季，当真有一个叫刘十九的人，陪着白居易，一边赏雪，一边度过那个漫长的黄昏。

在其它时候，一样是黄昏，他们也只能缩手缩脚，偎在炉前，尝一杯新酒，只是在那个黄昏，那个落雪的季节，他们尝到了酒外之味。在千年之后的今天，又有一个书生，读到了《问刘十九》，从那几行短短的诗句，他也品到了酒外之味——雪味。

天欲雪，是的，欲雪而未雪，就像“山雨欲来”，欲雨而未雨，而风已满楼。满楼的风夹杂着泥土与野草的芳香，将一个未雨的“日沉阁”，装扮得如同待嫁闺中的新娘。那一样是另外的味道，我们称之为雨味。

水光潋滟晴方好，山色空蒙雨亦奇。

欲把西湖比西子，淡妆浓抹总相宜。

西子湖之美，在于“淡妆浓抹总相宜”。是的，烟雨西湖，让多少画家、文人雅士费尽了精神，却也未能画出西湖之万一。桂林山水，奇绝八九，终未有一副图画，能画出这八九之一。

十四、打开考生文件夹下的Word目录中的“一.doc”文件，进行下列操作并保存。将文档中的文字“消量”替换为“销量”

将文档中的文字“最新一期英国《经济学家》周刊载文预测”的文字颜色改为“蓝”色 将整个文档的行距设置为“1.5倍行距”

最新一期英国《经济学家》周刊载文预测，随着手持电脑、电视机顶置盒、智能移动电话、网络电脑等新一代操作简易、可靠性高的计算装置的迅速兴起，在未来五年中，个人电脑在计算机产业中的比重将不断下降，计算机发展史上个人电脑占主导地位的时代行将结束。

该杂志引用国际数据公司最近发表的一份预测报告称，虽然目前新一代计算装置的消量与个人电脑相比还微不足道，但其销售速度在今后几年内将迅猛增长，在2002年左右其消量就会与个人电脑基本持平，此后还将进一步上升。以此为转折点，个人电脑的主导时代将走向衰落。

静脉输液操作步骤 篇5

准备用物

自己准备用物，所有无菌用品都要按标准评估方法口述，例如：氯化钠溶液包装无破损，有效期是XX年XX月，瓶身无漏气，瓶口无破裂，无沉淀物、结晶、絮状物。输液单，瓶签在准备室写好。

各位老师各位评委上午好，我是X号参赛选手XXX，操作的项目是密闭式静脉输液，遵医嘱，我将为一位阑尾炎术后第二天的患者进行静脉输液，由于患者是手术的第二天肠蠕动尚未恢复，暂不能进食，遵医嘱将为患者输入250mlNS和0.5gV-C以补充能量，首先进行评估（评估病人、环境）（拿输液架核对床尾卡进病房评估病人）

护：您好，请问您叫什么名字？ 患：XXX 护：是X病室X床的XXX吗？ 患：是的。

护：您今天看起来起色好的多了，伤口还痛么？

患：伤口还有点痛，肚子很饿，可以吃东西吗？

护：您是术后第二天，肠胃功能尚未恢复，暂不能进食，遵医嘱将为您继续输入250mlNS和0.5gV-C以补充能量。让我看一下您手背的血管。

患：看这只吧，那只昨天扎过了。

护：您的血管很好，就扎这一根吧。

患：好的。今天要输几瓶呀？

护：今天就一瓶。您需不需要方便一下？

患：不用了。

护：由于病室光线较暗不方便操作，我给您拉开窗帘吧。

患：好的。

护：请您稍等，我去准备药物。等会儿过来为您输液。

用物以在准备室检查完毕，经评估病人恢复情况良好，意识清楚，能够配合。穿刺部位皮肤完好，血管直、滑、有弹性。用物齐全，无菌物品均在有效期之内，没有污染。环境清洁、整洁、明亮、宽敞。符合操作要求。

在治疗室：洗手（六步）→核对药物（无需口述）→撕开外包装→贴标签→起瓶盖→划痕→消毒（各两次）→抽吸药液、配药（抽吸干净、手法正确，注意细节）→核对药物签字“请老师帮忙核对”→剪开输液器扎进输液瓶内放好→治疗单上联放于治疗室（交与监考老师）

进入病房再次核对床尾卡。

护：XXX您准备好了吗？我们开始输液吧，如果在操作中有什么不舒服，请您及时告诉我。

排气（动作规范，美观，排到延长管的2／3，检查有无气泡）→扎止血带（“请您放心，我尽量为您一次穿成功”）→一次消毒皮肤→准备输液贴→二次消毒待干→第二次排气（不拔针帽，少量排液，再次检查有无气泡）→穿刺（请您握紧拳）→见回血三松（看滴管内液体点滴通畅）→固定（收拾治疗巾）→调节滴速

护：滴速为您调节好了，是60滴／分。患：60滴快不快？

护：是这样的XXX，滴速是根据您的体质、年龄龄、病情调节的。小儿年老体弱，有心肺疾患及输入特殊药物的滴速宜慢。您的体质很好，也没有心肺疾患，60滴是完全可以的。您还有什么不清楚的么？

患：没有了。

取出治疗巾和止血带，帮助病人取舒适体位。

护：XXX谢谢您的合作，请您保护好穿刺部位，不要随意调节滴速，如穿刺部位疼痛、肿胀、或液体不滴时，请按床旁呼叫器，我们会随时赶到的。

核对药物（输液瓶签和安剖）→核对床尾卡→打勾、写滴速、签字（挂于输液架上）→出病房

垃圾分类处理，口述手消 再一次进入病房：

取下输液条，核对床尾卡后放于治疗车上

护：XXX您有什么不舒服的地方么？（患：没有。）这疼么？（按压手指）（患：不疼。）液体已经滴完了，我来为您拔针。（患：好的。）

口述手消→拔针（去除胶布正确，关紧调节器）→按压（护：请您竖着按，不要揉，多按一会。）→（箭针头两个，收拾输液管）→核对→进行健康教育。XXX谢谢您的配合，您的伤口恢复很好，今天就可以下床活动了，可使肠蠕动恢复，防止肠粘连。排气后就可以吃饭了，多吃富含维生素，蛋白质的清淡饮食。请您好好休息，如有什么事，请按床旁呼叫器，我们也会经常来看您的。

拿输液架出病房

按垃圾处理原则整理（要做），口述手消。报告老师操作完毕。

注意：文中斜体字为改动部分。

1、计时从第一次手消开始到最后口述手消结束，共14分钟。

2、查对一定要仔细。

3、用后的止血带放医用垃圾袋中，口述其是一次性使用。不是一次性的需放在一容器内，不浸泡，统一放供应室处理。

4、抽药一定抽干净，否则会被扣去4分。动作要规范。