优化板蓝根提取工艺（精选5篇）
优化板蓝根提取工艺 篇1
板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica)的根，性寒、味苦，具有清热解毒、凉血利咽的功效[1]，临床上广泛应用于抗病毒、抗菌、抗内毒素[1,2]和增强免疫力的作用。其传统提取工艺有效成分损失过大，拟采用过滤分离提取的方法与传统工艺进行对比考察，以总氮含量和靛玉红、靛蓝含量为考察指标，以优化出合理的提取提纯工艺条件。
1 仪器与材料
1.1 仪器
普析通用紫外检测仪岛津高效液相色谱仪自制渗漉器赛多利斯分析天平SCM杯式超滤器中空纤维膜
1.2 材料
板蓝根来源于河北安国, 靛玉红对照品为中国药品生物制品鉴定所, 甲醇、乙腈为色谱纯, 其他为分析纯。
2 方法与结果
2.1 提取方法
2.1.1 水煮醇沉法取板蓝根药材50g(已粉碎)，分两次加入适量蒸馏水，加热，第一次1.5h，第二次1h，合并煎液，过滤，浓缩至1/2量，加乙醇使成为70%的乙醇液，搅匀，静置，沉淀，取上清液，减压回收乙醇并浓缩至适量，即为样品溶液。
2.1.2 渗漉法取板蓝根药材50g(已粉碎)，乙醇浸泡12h，六倍量70%乙醇渗漉，控制流速在5ml/min，减压回收乙醇并浓缩至适量，即为样品溶液。
2.1.3 超滤法取板蓝根药材50g(已粉碎)，因醇浓度过高会导致板蓝根中的氨基酸损失[4]，故用50%的乙醇(六倍量)回流提取2次，每次2h，冷却后，离心(5000r/min)分离，经试验筛选结果表明分子截流值为3万的超滤膜能完全截留靛玉红，故上清液用分子截流值为3万的超滤膜过滤，得水溶成分样品溶液A，滤渣与沉淀物用3倍的95%乙醇回流提取两次，每次1h，提取液70℃真空回收乙醇，浓缩，得醇溶成份样品溶液B。
2.2 含量测定方法
2.2.1 总氮含量测定
按《中国药典》凯氏定氮法 (半微量法) 测定浸膏中的含氮量。
2.2.2 靛蓝、靛玉红含量测定
色谱条件色谱柱：Dikma DiamonsilTMC18色谱柱;流动相：甲醇-0.1mol/L醋酸铵-醋酸(70:30:1);流速：1ml/min;检测波长：290nm;柱温：40℃。
对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的靛玉红、靛蓝对照品各约2mg，分别置于50ml的量瓶中，加入氯仿溶解并定容。分别精取靛蓝对照品溶液1ml，靛玉红对照品溶液2ml同置于5ml的量瓶中，用氯仿定容，进样5μg。
供试品溶液的制备将三种方法所得的样品溶液分别于60℃真空浓缩，浸膏于40℃真空干燥，粉碎。分取干粉适量(相当于8g药材)，溶于150ml水中，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并萃取液，挥干，用氯仿定容于25ml的容量瓶中，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
线性范围在上述色谱条件下，精取对照品溶液10、25、50、100、150、200μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，分别以靛蓝和靛玉红峰面积为纵坐标(Y)，靛蓝和靛玉红含量为横坐标(X)，计算的回归方程：Y靛蓝=6.836×106X-1.326×104 (r=0.9998, n=5) ;Y靛玉红=1.900×107X-6.483×104 (r=0.9996, n=5) 。结果表明靛蓝进样量在0.161～3.421μg, 靛玉红进样量在0.171～3.342μg范围内具有良好的线性关系。
2.3 含量测定结果（见表1)
3 讨论
3.1 板蓝根中的主要成份为靛蓝、靛玉红及各种氨基酸，其中靛玉红是板蓝根主要有效成分之一，有升华性，在浓缩时大量损失[3]，板蓝根的传统提取工艺为水煮醇沉法，该方法靛蓝及靛玉红几乎损失殆尽[5]，改进的渗漉法对靛玉红的提取有一定的改善，但对板蓝根中各种氨基酸的提取效果仍然不理想，故在本试验采用了离心、超滤的方法将板蓝根中水溶性成份和水不溶性成份分开提取，这样氨基酸等有效的小分子物质可以通过超滤膜保留在滤液中，而靛蓝及靛玉红等吲哚类是不溶性成份得以保留在沉淀和滤渣中，再用高浓度的乙醇从中提取，这样就避免了因醇沉和浓缩导致的吲哚类成分的损失，又可以将不溶于乙醇的多糖类等大分子杂质除去。
参考文献
[1]肖姗姗等.Recent process in thestudies of chemical constuents, phar-macological effects and quality con-表1trol methods on the roots of Radix Indigotica[J].沈阳药科大学学报, 2003;20 (6) ;455-459.
[2]徐晗等.板蓝根最新研究进展[J].中草药, 2003, 34 (4) .
[3]李影等.板蓝根冲剂生产过程中的含量变化及工艺改进设想[J].中成药.1990, 12 (9) :8.
[4]黄俊等.板蓝根颗粒提取工艺的改进[J].华西药学杂志, 1999, 14 (6) :381.
[5]国家药典委员会编.中华人民共和国药典.一部[S].北京:化学工业出版社, 2000:490.
内部沸腾法提取松针多糖工艺优化 篇2
摘要：为提高松针多糖提取率，采用内部沸腾法提取松针多糖。方法：用适量的乙醇润湿物料使多糖溶出，然后加入一定温度的水让物料内部的乙醇在低温下沸腾，快速把多糖提取出来。结果：在料液比130（克/毫升）、提取温度90℃、提取时间5分钟以及乙醇体积分数40%时，多糖得率达到7.13%。结论：与超声波辅助提取法和传统法相比，新的提取方法多糖提取率提高显著，内部沸腾法用于提取松针多糖具有很大优势。
关键词：内部沸腾法;提取;松针;多糖
中图分类号： TQ351.0 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2014.24.0021
黑松为北方广大地区最主要的造林树种之一，松针为松科松属植物的叶片，松针是采伐后所残留的无用副产物之一，是可持续利用的天然再生资源。松针多糖是一种具有多种生理功能和开发价值的活性多糖，具有对机体毒副作用小、无残留、不产生耐药性等优点，应用前景广阔。在多糖提取研究中，提取方法多为水溶液提取法、微波辅助、超声波辅助等，这些方法还存在着提取时间长和多糖得率低等问题。内部沸腾法能以实现渗入物料内部溶剂产生汽化的方式，改变传统提取过程的普通分子扩散方式，实现低温、快速提取，从而大大降低了提取时多糖浸出的问题。
1 材料与方法
1.1 仪器
HH数显恒温水浴锅：金坛市金城国胜实验仪器厂;UV-5900型紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司;多功能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司;SHZ-C型循环水式多用真空泵：河南巩义市英峪予华仪器厂;DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥机：上海精宏实验设备有限公司;超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。
1.2 材料与试剂
黑松松针，采摘于沈阳师范大学校园，30℃烘干后粉碎至60～80目;葡萄糖（AR）;乙醇（AR）;苯酚（AR）;硫酸（AR）等。
1.3 试验方法
1.3.1 内部沸腾法提取松针多糖的单因素试验 称取1克松针粉末，用适量一定体积分数乙醇均匀润湿30分钟，使乙醇充分渗透物料，然后以一定温度的热水提取一段时间后，取滤液适当稀释后用苯酚—硫酸法测多糖含量。
单因素试验法，用内部沸腾法提取松针多糖，分别在热水温度90℃、提取5分钟、适量无水乙醇润湿条件下测定水用量对多糖提取率的影响;在提取5分钟、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取温度对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取时间对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、30倍水用量、提取5分钟条件下测定乙醇体积分数对多糖提取率的影响。
1.3.2 超声波辅助提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于烧杯中加蒸馏水进行超声提取30分钟，过滤取滤液适当稀释，用苯酚—硫酸法测定多糖含量。
1.3.3 传统煎煮法提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于圆底烧瓶内加入25毫升水，加热回流2小时，过滤，取少量的滤液并适当稀释，然后用苯酚—硫酸法测定含量。
1.4 多糖含量测定
1.4.1 标准曲线的绘制 称取葡萄糖（105℃烘干至衡重）20毫克，用蒸馏水溶解并定容至500毫升，摇匀。分别取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2毫升，加水补充至2.0毫升，再加入1.0毫升6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟至室温，在490纳米处测吸光度。取2毫升蒸馏水做空白对照。以葡萄糖浓度为自变量，吸光度值为因变量，得到多糖浓度C和吸光度值的线性回归曲线，其方程为Y=0.0095X+0.1424，R2=0.9905 （图1）。
1.4.2 松针多糖含量测定 取稀释后的多糖溶液2.0毫升，加入1.0毫升 6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟室温，在490纳米处测吸光度。取2.0毫升蒸馏水做空白对照。由下列公式计算出松针多糖得率：
多糖得率=（V×C÷1000000÷W）×100%
式中，C为标准曲线上查得的葡萄糖溶液浓度（微克/毫升），V为松针多糖溶液的总体积（毫升），W为松针粉末的质量（克）。
2 结论
本实验采用内部沸腾法提取松针多糖，确定最佳工艺条件乙醇体积分数40%、料液比为1∶30（克/毫升）、提取时间35分钟、提取温度90℃，在此条件下，松针多糖的提取率为7.13%。实验数据显示，内部沸腾法提取松针多糖是高效获得多糖的方法。
参考文献
[1] Kwak CS， Moon SC， Lee MS . Antioxidant ， antimutagenic，and antitumor effects of pine needles（Pinus densiflora） [J].Nutrition and cancer，2006，56（2）：162-171.
[2] 官员，张大伟，刘伟，等.松属植物天然多糖研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（25）：12357-12359，1237.
[3] 许丽丽，李杰.正交设计优化马尾松松针多糖的微波提取工艺[J].食品工业， 2013，34（2）：44-46.
[4] 杜晓平，郑明珠，刘景圣.超声波破壁提取松花粉多糖的工艺研究[J].食品科学，2007，28（9）：308-311.
[5] 陈晓光，韦藤幼，彭梦微，等.内部沸腾法提取香菇多糖的工艺优化[J].食品科学，2011，32（10）：31-34.
[6] 江岩，李斌，郭晓军，新疆黑桑格多糖的提取和测定田.食品科学，2005，29（8）：224-226.
[7] 翁艳英，韦藤幼，童张法.内部沸腾法提取三七多糖的研究[J].时珍国医国药，2011，22（6）：1435-1436.
作者简介：张松书，沈阳师范大学粮食学院，本科在读，研究方向：食品质量与安全。
摘要：为提高松针多糖提取率，采用内部沸腾法提取松针多糖。方法：用适量的乙醇润湿物料使多糖溶出，然后加入一定温度的水让物料内部的乙醇在低温下沸腾，快速把多糖提取出来。结果：在料液比130（克/毫升）、提取温度90℃、提取时间5分钟以及乙醇体积分数40%时，多糖得率达到7.13%。结论：与超声波辅助提取法和传统法相比，新的提取方法多糖提取率提高显著，内部沸腾法用于提取松针多糖具有很大优势。
关键词：内部沸腾法;提取;松针;多糖
中图分类号： TQ351.0 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2014.24.0021
黑松为北方广大地区最主要的造林树种之一，松针为松科松属植物的叶片，松针是采伐后所残留的无用副产物之一，是可持续利用的天然再生资源。松针多糖是一种具有多种生理功能和开发价值的活性多糖，具有对机体毒副作用小、无残留、不产生耐药性等优点，应用前景广阔。在多糖提取研究中，提取方法多为水溶液提取法、微波辅助、超声波辅助等，这些方法还存在着提取时间长和多糖得率低等问题。内部沸腾法能以实现渗入物料内部溶剂产生汽化的方式，改变传统提取过程的普通分子扩散方式，实现低温、快速提取，从而大大降低了提取时多糖浸出的问题。
1 材料与方法
1.1 仪器
HH数显恒温水浴锅：金坛市金城国胜实验仪器厂;UV-5900型紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司;多功能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司;SHZ-C型循环水式多用真空泵：河南巩义市英峪予华仪器厂;DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥机：上海精宏实验设备有限公司;超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。
1.2 材料与试剂
黑松松针，采摘于沈阳师范大学校园，30℃烘干后粉碎至60～80目;葡萄糖（AR）;乙醇（AR）;苯酚（AR）;硫酸（AR）等。
1.3 试验方法
1.3.1 内部沸腾法提取松针多糖的单因素试验 称取1克松针粉末，用适量一定体积分数乙醇均匀润湿30分钟，使乙醇充分渗透物料，然后以一定温度的热水提取一段时间后，取滤液适当稀释后用苯酚—硫酸法测多糖含量。
单因素试验法，用内部沸腾法提取松针多糖，分别在热水温度90℃、提取5分钟、适量无水乙醇润湿条件下测定水用量对多糖提取率的影响;在提取5分钟、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取温度对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取时间对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、30倍水用量、提取5分钟条件下测定乙醇体积分数对多糖提取率的影响。
1.3.2 超声波辅助提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于烧杯中加蒸馏水进行超声提取30分钟，过滤取滤液适当稀释，用苯酚—硫酸法测定多糖含量。
1.3.3 传统煎煮法提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于圆底烧瓶内加入25毫升水，加热回流2小时，过滤，取少量的滤液并适当稀释，然后用苯酚—硫酸法测定含量。
1.4 多糖含量测定
1.4.1 标准曲线的绘制 称取葡萄糖（105℃烘干至衡重）20毫克，用蒸馏水溶解并定容至500毫升，摇匀。分别取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2毫升，加水补充至2.0毫升，再加入1.0毫升6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟至室温，在490纳米处测吸光度。取2毫升蒸馏水做空白对照。以葡萄糖浓度为自变量，吸光度值为因变量，得到多糖浓度C和吸光度值的线性回归曲线，其方程为Y=0.0095X+0.1424，R2=0.9905 （图1）。
1.4.2 松针多糖含量测定 取稀释后的多糖溶液2.0毫升，加入1.0毫升 6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟室温，在490纳米处测吸光度。取2.0毫升蒸馏水做空白对照。由下列公式计算出松针多糖得率：
多糖得率=（V×C÷1000000÷W）×100%
式中，C为标准曲线上查得的葡萄糖溶液浓度（微克/毫升），V为松针多糖溶液的总体积（毫升），W为松针粉末的质量（克）。
2 结论
本实验采用内部沸腾法提取松针多糖，确定最佳工艺条件乙醇体积分数40%、料液比为1∶30（克/毫升）、提取时间35分钟、提取温度90℃，在此条件下，松针多糖的提取率为7.13%。实验数据显示，内部沸腾法提取松针多糖是高效获得多糖的方法。
参考文献
[1] Kwak CS， Moon SC， Lee MS . Antioxidant ， antimutagenic，and antitumor effects of pine needles（Pinus densiflora） [J].Nutrition and cancer，2006，56（2）：162-171.
[2] 官员，张大伟，刘伟，等.松属植物天然多糖研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（25）：12357-12359，1237.
[3] 许丽丽，李杰.正交设计优化马尾松松针多糖的微波提取工艺[J].食品工业， 2013，34（2）：44-46.
[4] 杜晓平，郑明珠，刘景圣.超声波破壁提取松花粉多糖的工艺研究[J].食品科学，2007，28（9）：308-311.
[5] 陈晓光，韦藤幼，彭梦微，等.内部沸腾法提取香菇多糖的工艺优化[J].食品科学，2011，32（10）：31-34.
[6] 江岩，李斌，郭晓军，新疆黑桑格多糖的提取和测定田.食品科学，2005，29（8）：224-226.
[7] 翁艳英，韦藤幼，童张法.内部沸腾法提取三七多糖的研究[J].时珍国医国药，2011，22（6）：1435-1436.
作者简介：张松书，沈阳师范大学粮食学院，本科在读，研究方向：食品质量与安全。
摘要：为提高松针多糖提取率，采用内部沸腾法提取松针多糖。方法：用适量的乙醇润湿物料使多糖溶出，然后加入一定温度的水让物料内部的乙醇在低温下沸腾，快速把多糖提取出来。结果：在料液比130（克/毫升）、提取温度90℃、提取时间5分钟以及乙醇体积分数40%时，多糖得率达到7.13%。结论：与超声波辅助提取法和传统法相比，新的提取方法多糖提取率提高显著，内部沸腾法用于提取松针多糖具有很大优势。
关键词：内部沸腾法;提取;松针;多糖
中图分类号： TQ351.0 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2014.24.0021
黑松为北方广大地区最主要的造林树种之一，松针为松科松属植物的叶片，松针是采伐后所残留的无用副产物之一，是可持续利用的天然再生资源。松针多糖是一种具有多种生理功能和开发价值的活性多糖，具有对机体毒副作用小、无残留、不产生耐药性等优点，应用前景广阔。在多糖提取研究中，提取方法多为水溶液提取法、微波辅助、超声波辅助等，这些方法还存在着提取时间长和多糖得率低等问题。内部沸腾法能以实现渗入物料内部溶剂产生汽化的方式，改变传统提取过程的普通分子扩散方式，实现低温、快速提取，从而大大降低了提取时多糖浸出的问题。
1 材料与方法
1.1 仪器
HH数显恒温水浴锅：金坛市金城国胜实验仪器厂;UV-5900型紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司;多功能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司;SHZ-C型循环水式多用真空泵：河南巩义市英峪予华仪器厂;DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥机：上海精宏实验设备有限公司;超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。
1.2 材料与试剂
黑松松针，采摘于沈阳师范大学校园，30℃烘干后粉碎至60～80目;葡萄糖（AR）;乙醇（AR）;苯酚（AR）;硫酸（AR）等。
1.3 试验方法
1.3.1 内部沸腾法提取松针多糖的单因素试验 称取1克松针粉末，用适量一定体积分数乙醇均匀润湿30分钟，使乙醇充分渗透物料，然后以一定温度的热水提取一段时间后，取滤液适当稀释后用苯酚—硫酸法测多糖含量。
单因素试验法，用内部沸腾法提取松针多糖，分别在热水温度90℃、提取5分钟、适量无水乙醇润湿条件下测定水用量对多糖提取率的影响;在提取5分钟、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取温度对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、适量无水乙醇润湿、30倍水用量条件下测定提取时间对多糖提取率的影响;在热水温度90℃、30倍水用量、提取5分钟条件下测定乙醇体积分数对多糖提取率的影响。
1.3.2 超声波辅助提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于烧杯中加蒸馏水进行超声提取30分钟，过滤取滤液适当稀释，用苯酚—硫酸法测定多糖含量。
1.3.3 传统煎煮法提取松针多糖的试验 取1克松针粉末置于圆底烧瓶内加入25毫升水，加热回流2小时，过滤，取少量的滤液并适当稀释，然后用苯酚—硫酸法测定含量。
1.4 多糖含量测定
1.4.1 标准曲线的绘制 称取葡萄糖（105℃烘干至衡重）20毫克，用蒸馏水溶解并定容至500毫升，摇匀。分别取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2毫升，加水补充至2.0毫升，再加入1.0毫升6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟至室温，在490纳米处测吸光度。取2毫升蒸馏水做空白对照。以葡萄糖浓度为自变量，吸光度值为因变量，得到多糖浓度C和吸光度值的线性回归曲线，其方程为Y=0.0095X+0.1424，R2=0.9905 （图1）。
1.4.2 松针多糖含量测定 取稀释后的多糖溶液2.0毫升，加入1.0毫升 6%苯酚溶液，快速加入浓硫酸5.0毫升，静置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，立即转入冷水浴中冷却10分钟室温，在490纳米处测吸光度。取2.0毫升蒸馏水做空白对照。由下列公式计算出松针多糖得率：
多糖得率=（V×C÷1000000÷W）×100%
式中，C为标准曲线上查得的葡萄糖溶液浓度（微克/毫升），V为松针多糖溶液的总体积（毫升），W为松针粉末的质量（克）。
2 结论
本实验采用内部沸腾法提取松针多糖，确定最佳工艺条件乙醇体积分数40%、料液比为1∶30（克/毫升）、提取时间35分钟、提取温度90℃，在此条件下，松针多糖的提取率为7.13%。实验数据显示，内部沸腾法提取松针多糖是高效获得多糖的方法。
参考文献
[1] Kwak CS， Moon SC， Lee MS . Antioxidant ， antimutagenic，and antitumor effects of pine needles（Pinus densiflora） [J].Nutrition and cancer，2006，56（2）：162-171.
[2] 官员，张大伟，刘伟，等.松属植物天然多糖研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（25）：12357-12359，1237.
[3] 许丽丽，李杰.正交设计优化马尾松松针多糖的微波提取工艺[J].食品工业， 2013，34（2）：44-46.
[4] 杜晓平，郑明珠，刘景圣.超声波破壁提取松花粉多糖的工艺研究[J].食品科学，2007，28（9）：308-311.
[5] 陈晓光，韦藤幼，彭梦微，等.内部沸腾法提取香菇多糖的工艺优化[J].食品科学，2011，32（10）：31-34.
[6] 江岩，李斌，郭晓军，新疆黑桑格多糖的提取和测定田.食品科学，2005，29（8）：224-226.
[7] 翁艳英，韦藤幼，童张法.内部沸腾法提取三七多糖的研究[J].时珍国医国药，2011，22（6）：1435-1436.
优化板蓝根提取工艺 篇3
板蓝根药用历史悠久，《神农本草经》、《本草图经》、《本草纲目》等古医籍以及《日华子本草》、《分类草药性》等传统医书对板蓝根的药用价值均有多处精辟阐述，评价颇高。目前对板蓝根有效部位的药理活性研究不多，追踪到单个有效成分的研究更少，因此有必要尽快找到发挥各药效的活性部位，进行深入的研究与开发。较其他提取技术的应用，微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。微波辐射(MWI)可以大大加快反应速度(最高达1 240倍)，应用于植物细胞破壁，有效提高了收率。
本文运用微波技术制得板蓝根粗多糖，并采用苯酚-硫酸比色法对其多糖提取率进行测定，全面、详细考察影响板蓝根多糖微波提取的工艺条件，为充分利用板蓝根资源提供有价值的参考。
1 试验原料与方法
1.1 试剂与仪器
材料：板蓝根，汉中市第二药材公司购买，洗净，晾干，70℃烘干，粉碎过80目筛，备用。
试剂：苯酚、浓硫酸(98﹪)、葡萄糖、无水乙醇、丙酮、乙醚，以上试剂均为分析纯。
仪器：GR-200电子分析天平，日本AND公司;722型分光光度计，上海第三分析仪器厂;HH-S6电热恒温水浴锅、101型电热恒温鼓风干燥箱，北京科伟永兴仪器公司;WF-200微波反应器，上海崎桡分析有限公司;N-1000旋转蒸发仪，日本Rikakikai公司。
1.2 板蓝根多糖的微波提取及提取率的测定
1.2.1 葡萄糖最大吸收波长的测定
精确移取葡萄糖试液0、0.6mL，分置于干燥的10.0mL的比色管中，各加蒸馏水至2mL，再分别加入6%的苯酚溶液1mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5mL，混匀，1～2min后于沸水液中加热30min，然后放入冷水浴中冷却15min，取出溶液于400～550nm范围内每隔10nm进行慢速扫描，选择最佳波长λmax=490nm，于490nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。可得回归方程为：A=0.2332C+0.0346(葡萄糖浓度单位μg/mL), R2=0.995，线性范围0～1.0mg/mL。
式中：C为供试液中葡萄糖的质量浓度，mg/mL;D为多糖的稀释因素;f为换算因子。
1.2.2 板蓝根多糖的提取与精制
称取10g粉碎的板蓝根粉末，置于1 000mL烧杯中，加入一定量的蒸馏水并混匀，调解pH值至7.0，按各种设定条件(提取时间6min、微波功率500W、液料比1:40)进行微波提取。微波提取过程为间歇微波处理，每次2min，中间停1min，补加损失的水分使提取液体积保持相对恒定。处理后将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩到1/4体积，加入终浓度体积分数为98﹪的乙醇，于4℃静置12h，离心收集沉淀，依次用98﹪的乙醇、丙酮洗涤沉淀，干燥得板蓝根粗多糖。
1.2.3 换算因子的测定
制得板蓝根多糖贮备液，测定板蓝根多糖贮备液的吸光度A=0.0714，代入回归方程A=0.2332C+0.0346，由换算因子公式(2)计算得到结果：f=9.882。
式中：W为称取多糖的质量，mg;C为精制板蓝根多糖贮备液中葡萄糖的浓度，mg/mL。
1.3 试验方法
1.3.1 微波处理功率对板蓝根多糖提取率影响
准确称取1.0g板蓝根粉末，以料液比为1∶40 (g/m L)，设定因子(温度70℃，时间4min)，功率设置为200、300、400、500、600W，分别取出液体进行离心(6 000r/min, 5min)，准确移取上清液0.5mL置于干净的带塞比色管中，加蒸馏水至15mL进行稀释，再准确移取2m L稀释液于比色管，加入6﹪苯酚1.0mL混匀后迅速加5.0mL浓硫酸，快速摇匀，1～2min后置于沸水液中加热30min，然后放入冷水浴冷却15min，取出，于490nm处测吸光度。依据公式(1)，计算多糖提取率，考察微波功率对板蓝根多糖提取率的影响。
1.3.2 浸提时间对板蓝根多糖提取率的影响
控制料液比为1∶40 (g/mL)，设定因子(温度70℃，功率500W)，浸提时间设置为2、4、6、8、10min，同1.3.1处理，并计算多糖提取率，考察浸提时间对板蓝根多糖提取率的影响。
1.3.3 料液比对板蓝根多糖提取率的影响
料液比设置为1∶20、1∶40、1∶60、1∶80、1∶100，加入蒸馏水，摇匀，微波反应器中，设定因子(温度70℃，时间4min，功率500W)，同1.3.1处理，并计算多糖提取率，考察不同料水比对板蓝根多糖提取率的影响。
1.3.4 正交试验
在单因素研究基础上，选择A(浸提时间)、B(微波功率)、C(料液比)3个因素，每个因素设计3个水平，进行L9 (33)的正交试验，以进一步优化提取工艺。依据正交试验条件，同1.3.1处理，于490nm处测吸光度。依据公式(1)，计算多糖提取率，确定微波提取板蓝根多糖的最佳提取工艺条件。
2 结果与分析
2.1 微波处理功率对板蓝根多糖提取率影响
由表1可知：板蓝根多糖的提取率随着提取功率的增大而增加，当超过500W时多糖提取率下降，分析原因可能是提取功率太大引起糖结构变化，甚至使碳环裂解，导致提取率降低。而功率太小，则不足以提供足够的摩擦热而实现微波破壁，提高提取率。因此，500W为提取功率的较佳条件。
2.2 浸提时间对板蓝根多糖提取率的影响
由表2可知：在2～4min这段时间里随着提取时间的延长板蓝根多糖的提取率明显增加，这是由于微波辐射在短时间内对细胞的破坏作用比较大，溶出物多，所以产率上升较快。但当溶解度达到饱和时，有效成分不再被溶解，产率也就不再提高，而且随着微波辐射时间的延长，细胞进一步破裂、溶解的杂质也会相应增多，故较佳提取时间为4min。
2.3 料液比对板蓝根多糖提取率的影响
由表3可知：在开始阶段随着溶剂的增加，板蓝根多糖提取率增加，当料液比在1∶40时板蓝根多糖提取率最大，达5.92%。此后，随着溶剂的增加，板蓝根多糖提取率基本不变，说明多糖已基本溶出。因此较佳料液比为1∶40。
2.4 正交试验
2.4.1 最佳微波提取工艺的确定
由表4可知：3个因素对板蓝根多糖提取率影响程度的大小顺序为：A>B>C。微波辅助提取取板蓝根多糖的最佳提取条件为：A3B2C1，即浸取时间为8min、功率为500W、料液比为1∶40。
2.4.2 最佳工艺条件的验证试验
采用2.2.1的最优条件进行试验，重复3次，结果表明：多糖提取率为6.55%，优于正交试验中的其他提取条件，说明所确定的条件为板蓝根多糖提取的最佳工艺。
3 结论
板蓝根多糖微波提取的优化条件为：浸取时间8min、功率500 W、料液比1∶40，在此条件下，得到板蓝根中多糖提取率为6.55﹪。微波功率及微波处理时间对多糖提取效果的影响较复杂，大功率长时间提取会造成溶液中水分快速蒸发，使多糖成分不易提取、有效成分变性，最终导致提取率的下降。而功率太小，则不足以提供足够的摩擦热使胞内水分汽化而实现微波破壁，提高提取率。
参考文献
[1]石磊, 陈靠山.植物多糖药理作用研究进展[N].曲阜师范大学学报, 2005, 31 (3) :100～103.
[2]徐晗, 方建国, 刘云海.板蓝根最新研究进展[J].中草药, 2003, 34 (4) :10～11.
[3]张萍, 刘捷, 邓扬悟.板蓝根多糖的提取工艺及其清除自由基作用的初步研究[J].河南工业大学学报:自然科学版, 2006, 27 (3) :36～38.
[4]赵宇, 彭晓霞.多糖类化合物提取工艺研究[J].医药卫生, 2006, 35 (2) :223～224.
[5]N.V.Orlova, M.A.Proskutnin, V.A.Samburova et al.Determination of polysaccharides and lipoplysaccharides by spectrophotometry and thermal-lens spectrometry[J].Journal of Analytical Chemistry, 2003, 58 (2) :149～151.
[6]Ivan Alvarez, Ana Maria Bermejo, Maria Jesus Tabernero et al.Microwave-assisted extraction:a simpler and faster method for the determination of ethyl glucuronide in hair by gas chromatography-mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem, 2009 (393) :1345～1350.
[7]孟宪军, 田丰.无梗五加果实多糖微波辅助提取技术的研究[J].食品科学, 2008 (3) :310～313.
优化板蓝根提取工艺 篇4
关键词：枣；多糖；超高压；提取；优化
中图分类号： TS201.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0256-02
收稿日期：2013-11-20
基金项目：安徽省淮南市科技攻关（编号：2012A01104、2012A01105）。
作者简介：靳学远（1958—），男，安徽淮南人，教授，主要从事天然产物化学研究和教学。E-mail：jxy18888@sohu.com。红枣营养价值和药用价值高，在生物活性成分中，多糖是主要的活性成分之一[1]。红枣多糖具有抗氧化、抗衰老、降血糖、增强机体免疫力等作用[2-3]，因此，红枣多糖的产业化开发，已成为近年来红枣精深加工领域的研究热点。传统红枣多糖提取的方法为热水浸提法[4]，该提取法多糖得率不高。为强化提取过程，一些研究者采用微波强化和超声强化方法增加得率[5-6]，但超声和微波处理容易引起多糖的活性发生改变。近年来，超高压提取技术在植物活性成分提取上得到应用[7-8]，其提取时间短，提取得率高，活性成分破坏少，目前，采用超高压提取红枣多糖还少见报道。因此，本研究拟采用超高压提取红枣多糖，对提取工艺条件进行优化，以期为红枣精深加工提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
红枣为新郑灰枣，由好想你枣业股份有限公司生产，60～65 ℃热风干燥箱中烘干并粉碎；浓硫酸、蒽酮、葡萄糖均为分析纯，购自安徽省淮南大药房有限公司。751-GD紫外可见光分光光度计，上海分析仪器总厂生产；UHP900×2-Z超高压处理装置，包头科发公司生产；R-205 型旋转蒸发仪，上海申胜生物技术有限公司生产。
1.2试验方法
1.2.1红枣多糖超高压提取称取10 g红枣粉碎物，加入不同体积蒸馏水，装入真空袋中真空密封；将真空袋放入超高压装置的传压介质油中，采用不同压力、不同处理时间；处理后过滤，收集滤液，提取2次，真空浓缩后测定多糖含量。多糖得率计算公式为：Y=CV/m×100%，其中：Y为红枣多糖得率（%）；C为多糖含量（g/mL）；V为浓缩液的体积（mL）；m为枣粉碎物质量（g）。
1.2.2红枣多糖含量的测定采用蒽酮比色法测定[9]。
1.2.3影响提取得率的单因素试验选择超高压压力、保压时间、粉碎度、固液比（g ∶mL）4个影响因素，将其中3个因素固定，改变1个影响因子，筛选出各因子的较佳水平范围。其固定条件为：超高压压力400 MPa、保压时间4.5 min、粉碎度60目、固液比1 ∶15（g ∶mL）。
1.2.4提取工艺正交试验优化在单因素试验的基础上，采用正交试验对影响多糖得率的工艺条件进行优化，试验因素与水平见表1。
2结果与分析
2.1超高压压力对红枣多糖得率的影响
采用60目的红枣、固液比为1 ∶15 （g ∶mL）、超高压提取压力在0.1～600 MPa、保压时间4 min。由图1可见，红枣多糖得率先随压力的增加而增加，400 MPa后开始减少；400 MPa 为红枣多糖提取的适宜压力条件。这是由于在超高压条件下细胞破裂，溶剂在高压下快速进入细胞内部溶解溶质，当压力卸除后，溶质溶解在溶剂内开始渗出；到400 MPa时，细胞已破裂，如压力过大，泄压后溶剂带出过多杂质，影响红枣多糖游离到细胞外。
2.2保压时间对红枣多糖得率的影响
采用60目的红枣、固液比为1 ∶15（g ∶mL）、超高压提取压力400 MPa、保压时间3.5～5.5 min。由图2可见，红枣多糖得率先随时间的增加而增加，到4.5 min后开始减少；保压 4.5 min 为红枣多糖提取的适宜时间。这是由于在超高压条件下，在一定时间后细胞破裂，溶剂在高压下快速进入细胞内部溶解溶质，当压力卸除后，溶质溶解在溶剂内开始渗出，4.5 min 时细胞已破裂，如时间过长，细胞破裂过大，同样造成泄压后溶剂带出过多杂质，影响红枣多糖游离到细胞外。
2.3粉碎度对红枣多糖得率的影响
采用20～80目的红枣粉，提取压力400 MPa、保压时间4.5 min、固液比为1 ∶15（g ∶mL）。由图3可见，红枣多糖得率随粉碎度的增加而增加，达到60目后开始减少；因此60目为红枣多糖提取的适宜粉碎度。这是由于超高压提取主要是依靠压力实现细胞的破裂，在达到足够粉碎度后，粉碎不是细胞破裂的主要因素，因此，增加粉碎度，得率变化不大。
2.4固液比对红枣多糖得率的影响
采用60目的红枣，超高压提取压力400 MPa、保压时间4.5 min、固液比为1 ∶10～1 ∶30 （g ∶mL）。由图4可见，固液比1 ∶15（g ∶mL）前，红枣多糖得率随溶剂用量增加而增加，但达到1 g ∶15 mL后，得率增加较缓慢。这是由于超高压条件下，细胞破裂后，溶剂在高压下快速进入细胞内部，溶剂越多，浓度差越大，越容易渗透进入细胞，但当溶剂达到一定量后，溶质已经基本溶出，继续增加溶剂，会导致后续的浓缩消耗更多的能源。因此，固液比以1 g ∶15 mL较好。
2.5红枣多糖提取工艺条件的正交试验优化
3结论
超高压提取紅枣多糖的最佳工艺条件为超高压压力 420 MPa、保压时间4.5 min、粉碎度60目、固液比 1 g ∶14 mL。在该提取条件下，多糖得率可达到4.71%。超高压提取方法是红枣多糖提取较为适宜的方法。
参考文献：
[1]吴海霞，李娜，孙元琳. 大枣多糖的研究进展[J]. 农产品加工·学刊，2009，5（6）：80-82.
[2]李进伟，丁霄霖. 金丝小枣多糖的生物活性[J]. 食品与生物技术学报，2006，25（5）：103-106.
[3]张瑞婷，魏欢换，郑敏，等. 冬枣多糖功能的研究[J]. 生命科学仪器，2012，10（2）：37-39.
[4]柳杨，罗瑞明. 长枣多糖水提工艺参数的响应面分析及优化[J]. 食品与机械，2010，26（5）：128-130.
[5]王桓，潘杨，敬思群. 超声强化提取喀什小枣多糖的工艺研究[J]. 食品研究与开发，2009，30（11）：40-43.
[6]王迎进，张书书，芦婧，等. 微波辅助提取壶瓶枣多糖及其抗氧化性[J]. 光谱实验室，2012，29（1）：364-366.
[7]Corrales M，Toepfl S，Butz P，et al. Extraction of anthocyanins from grape by-products assisted by ultrasonics，high hydrostatic pressure or pulsed electric fields：a comparison[J]. Innovative Food Science & Emerging Technologies，2008，9（1）：85-91.
[8]纵伟，李晓. 超高压法提取金银花中总黄酮的研究[J]. 食品研究与开发，2009，30（2）：65-68.
[9]钟先锋，黄桂东，邓泽元，等. 荷叶多糖提取工艺的研究[J]. 食品与机械，2007，23（1）：87-89.秦立公，韦金荣，王宁宁. HACCP驱动的生态农产品全供应链质量安全控制[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：258-261.
优化板蓝根提取工艺 篇5
【摘 要】 目的：优选防风配方颗粒的提取工艺，建立升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法，为有效控制该制剂的质量提供参考。方法：以升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷提取量和出膏率为评价指标，采用正交试验考察加水量、提取时间和提取次数对防风配方颗粒提取工艺的影响。采用HPLC 测定升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷含量。结果：最佳提取工艺为浸泡05h，加10、8、6倍量水提取3次，每次05h；升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在624～624μg、568～568μg与峰面积呈良好线性关系，平均加样回收率依次为9963%、9975%，RSD分别为013%、104%。结论：该提取工艺和含量测定方法稳定可行，有效成分提取效率高，为防风配方颗粒的生产和质量控制提供参考。
【关键词】 防风配方颗粒；升麻素苷；5-O-甲基维斯阿米醇苷；浸膏得率； 质量标准
【中图分类号】R2842 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）23-0024-03
防风是常用中药，为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk的干燥根。具有祛风解表，胜湿止痛，止痉之功效。用于感冒头痛，风湿麻痹，风疹瘙痒，破伤风。春、秋二季采挖未抽花茎植株的根，除去须根和泥沙，晒干[1]。主要成分有升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷等。《中国药典》（2015年版）规定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为防风药材质量控制的指标成分。防风配方颗粒是将防风饮片经现代制药工艺提取、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒剂。目前有关防风配方颗粒的工艺及质量标准研究尚未有报道，但配方颗粒研究前景广阔。故本实验通过正交试验，利用HPLC测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，并结合干浸膏得率作为质量指标，优选防风药材水提取的最佳工艺，为中药防风配方颗粒的质量标准研究提供参考。
1 仪器与材料
11 仪器 高效液相色谱仪（岛津）；BP211D 型电子天平（德国 Sautoris 公司）；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
12 材料 升麻素苷对照品（批号：111522-201511 中国食品药品检定研究院）；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（批号：111523-201509 中国食品药品检定研究院）；防风药材（安国义通中药材有限公司），甲醇（色谱纯），水（超纯水）。
2 方法与结果
21 配方颗粒的制备 称取防风药材，按优选的工艺条件提取，合并煎液，浓缩后干燥，得干浸膏粉，粉碎过3号筛，加入适量辅料，混匀，经过制粒、整粒，得防风配方颗粒。
22 高效液相色谱含量测定
221 色谱条件 十八硅烷键合硅胶为填充剂C18色谱柱（ 46mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水（40∶60），流速10mL·min-1，检测波长254nm，理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。
222 对照品溶液的制备 精密称取升麻素苷对照品312mg，5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品284mg，加甲醇溶解并定容至50mL，分别制成624μg·mL-1和568μg·mL-1对照品溶液，备用。
223 供试品溶液的制备 取本品颗粒适量，研细，取约05g，精密称定，置50mL锥形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，称定重量，超声处理15min，取出，放冷，用80%甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液，得供试品溶液。见图1。
224 检测波长的选择 取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液在200～400nm进行全波长扫描，结果显示在254nm处有最大吸收且灵敏度最高， 故确定其检测波长254nm。
23 线性关系考察 精密吸取升麻素苷（624μg·mL-1）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（568μg·mL-1）对照品溶液100mL、200mL、400mL、600mL、800mL、100mL，分别置10mL量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，按221项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，样品含量为横坐标，得回归方程依次为Y=119530X+74362，R2=09997（n=6），Y =121669X + 42184， R2=09997（n=6），结果表明升麻素苷在624～624 μg范围、5-O-甲基维斯阿米醇苷在568～568μg范围呈良好的线性关系。
24 精密度试验 精密吸取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液10μL，连续进样 6 次，按221项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD为分别039%与045%，表明仪器精密度良好。
25 重复性试验 精密称取同一批样品，按223项下方法制备供试品溶液，共6份，按221项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD分别为044%与042%，表明该方法重复性良好。
26 稳定性试验 精密取同一供试品溶液10μL，按0h、1h、2h、4h、8h、10h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积。结果表明供试品溶液在10h内稳定性良好，其RSD分别为113%与111%。
27 加样回收率试验 精密称取已知含量的防风配方颗粒样品约025g，共6份，分别精密加入升麻素苷对照溶液10mL（浓度为624μg·mL-1），或5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液6mL（浓度为568μg·mL-1），按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1、2。平均加样回收率9963%与9975%，RSD为013%与104%，表明样品回收率良好。
3 提取工艺的正交试验
31 正交设计 在预试验基础上，固定浸泡时间05 h，选择加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）作为考察因素。以升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量和出膏率为评价指标。采用L9（34） 正交表设计，因素水平详见表3。
32 实验方法 取内蒙防风药材9份，每份40 g，按表4设计的工艺条件进行提取，合并水煎煮提取液，滤过，水煎液均定容到1000mL容量瓶中，备用。从定容到1000mL的水煎液中吸取5mL至25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。用微孔滤膜滤过，取滤液，进样，测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷总含量。
33 正交试验结果及方差分析 按上述实验方法进行正交试验得到9份供试品溶液，按照含量测定方法进行含量测定，并计算总含量。正交试验结果见表4，方差分析结果见表5。
由直观分析可知， 各因素影响提取效果的顺序为C>B>A。方差分析表明因素C对提取工艺具有显著性影响，其他因素则影响不明显，考虑大生产节约成本等因素，最佳提取工艺条件为A1B1C3，即加10、8、6倍量水提取3次，每次05h。
34 优选工艺的验证试验 按最佳提取工艺进行了3次验证试验，取防风药材500g，结果升麻素苷质量分数分别为0506%、0509%、0528%，5-O-甲基维斯阿米醇苷质量分数分别为0357%、0350%、0381%，出膏率依次为419%、445%、438%， 说明该工艺稳定可行。因此，确定防风配方颗粒提取工艺为：加10、8、6倍量水提取3次，每次05h。
4 配方颗粒样品含量测定
按照最优提取工艺，制备出防风配方颗粒。精密称取防风配方颗粒约05 g，按223项下方法制备供试品溶液，按221项下色谱条件测定，计算升麻素苷质量分数分别为237、229、232 mg·g-1，5-O-甲基维斯阿米醇苷质量分数分别为131 、128、139mg·g-1，故暂定本品配方颗粒每1g含升麻素苷（ C22H28O11）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（C22H28O10）总量不得少于30 mg。
5 讨论
对于原料药材饮片的选择，是中药配方颗粒研制、生产、开发和应用等最根本的前提的前提条件，只有在确保了原料药材的质量的基础上，才能保证和提高稳定中药配方颗粒的质量[2]。由于条件有限，本研究只收集了两个不同产地的品种进行含量测定等一系列的对比考察研宄，通过研究发现两个不同产地的品种含有效成分总含量差别不大。
防风配方颗粒的水提工艺直接关系到配方颗粒的质量，以出膏率和升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量作为衡量指标，初步评价了工艺的提取效果，结果表明煎煮时间和加水量对工艺的影响较小，而煎煮次数对其二者的含量和出膏率有显著的影响，是该饮片提取工艺的重要因素。目前由于防风配方颗粒样品数量较少，有待于后续试验数据的积累，制定了升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的限量范围，使该制剂的质量更加稳定可靠，为有效控制防风配方颗粒的质量提供保证。
参考文献
[1]国家药典委员会中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社， 2010： 239.
[2]涂瑶生，毕晓黎，罗文汇. 中药配方颗粒的质量控制研究[J].世界科学技术中医药现代化思路与方法，2011，13（1）：41.