突变论文

突变论文（共12篇）

突变论文 篇1

摘要：目的:建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑。方法:以构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)中编码胆碱水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过DpnⅠ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒。结果:通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子。结论:该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%。

关键词：一步法定点突变,单核细胞增生李斯特菌,bsh

定点突变技术(site-directed mutagenesis)是生物化学与分子生物学中的一种常规实验技术,在基因和蛋白质结构与功能领域具有广泛的应用[1]。本研究介绍了一种高效便捷的定点突变方法,该方法的基本原理是利用完全互补的并带有突变位点的引物PCR扩增整个模板质粒DNA,由于从细菌细胞提取的模板质粒DNA具有甲基化位点,而PCR扩增产物不具有甲基化位点,因此采用能特异识别甲基化位点的DpnⅠ酶,就能去除PCR产物中剩余的模板DNA。最后将PCR扩增的线型突变质粒转化入大肠杆菌,利用大肠杆菌自身的修饰酶系统使线型质粒环化。该方法简单高效,PCR产物无需纯化,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、PCR扩增程序以及模板DNA浓度的选择,突变率可以达到100%。

本研究以构建单核细胞增生李斯特菌(简称LM)中编码胆碱水解酶(Bile Salt Hydrolase,简称BSH)的bsh基因突变启动子为例,具体介绍一步法定点突变技术的要点及其操作步骤。BSH能水解肠道胆汁酸盐,促使细菌在肠道环境中的生存[2],是LM中重要的毒力因子之一。其编码基因bsh启动子上既有LM毒力基因转录调控蛋白PrfA (Positive Regulatory Factor A)的结合位点PrfA-box(TTAAAAATTTTTAA),同时也存在压力胁迫调节因子σB因子的结合位点SigB-box[GGGTAT(-10区)和GTTA(-35区)],暗示σB和PrfA在调控细菌耐受肠道胆汁酸盐的机制中可能起着重要且复杂的作用。本研究成功构建了bsh启动子(以下称Pbsh)的三种突变:PrfA-box突变;SigB-box(-10区)突变;PrfA-box和SigB-box(-10区)同时突变,为进一步研究PrfA和SigB在bsh转录表达中的作用奠定了坚实的基础,该方面的研究工作在国内外尚未见报道。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)标准株EGD和大肠杆菌DH5α菌株以及pUC18质粒为本实验室保存。

1.1.2 试剂

(1)XbaⅠ、Pfu、T4连接酶、Taq DNA聚合酶、CIAP酶购自上海赛百盛基因技术有限公司。

BHI(Brain Heart Infusion,脑心浸液)为Betcon,Dickinson & Company公司产品。其它所有化学试剂均为进口或国产分析纯。

(2)试剂盒:

①基因组DNA提取试剂盒,PCR产物回收试剂盒购自上海赛百盛基因技术有限公司;②质粒小量提取试剂盒,凝胶回收试剂盒购自Omega公司。

(3)引物:

由上海赛百盛基因技术有限公司合成(带有下划线的代表突变位点)。

1.1.3 仪器

离心机:Centrifuge5415D、5415R、5804R(eppendorf);PCR仪:Master cyclerg radient (eppendorf);电热恒温培养箱:HPP-9082(北京东联哈尔滨仪器制造有限公司);电转化仪:Gene Pulser Xcell Electroporation System(BIO-RAD)。

1.1.4 培养基

LB(Luria-Bertani)培养基:酵母抽提物5g/L,胰蛋白胨10g/L,氯化钠5g/L,pH 7.0,121℃高压蒸汽灭菌20min备用。

BHI培养基:BHI 37g/L,121℃高压蒸汽灭菌20min备用。

1.2 方法

1.2.1 突变模板Pbsh-XbaⅠ-pUC18重组质粒的构建

利用基因组提取试剂盒从EGD菌株中提取总DNA,然后以提取的总DNA为模板,以Pbsh-XbaⅠ-1F/Pbsh-XbaⅠ-1R为引物, 扩增带有XbaⅠ酶切位点的bsh基因启动子序列(Pbsh)。PCR程序:95℃ 2min;[95℃ 45s,53℃ 45s,72℃ 30s]30×;72℃ 5min。XbaⅠ酶切Pbsh和pUC18载体后用PCR产物回收试剂盒纯化酶切产物,然后用CIAP酶处理pUC18-XbaⅠ片段,防止pUC18连接。XbaⅠ酶切后的Pbsh和pUC18载体经T4连接酶连接后,转入大肠杆菌DH5α菌株,涂布添加了Ampicillin(100μg/mL)的LB平板。经酶切筛选的阳性克隆送英俊公司测序确认。

1.2.2 定点突变过程中模板浓度的选择

本研究通过预实验来确定PCR反应中的模板质粒Pbsh-XbaⅠ-pUC18的浓度,以保证在PCR成功扩增的同时,模板质粒能被DpnⅠ酶完全消化,提高突变效率。选择的模板浓度分别为20ng、40ng和60ng,PCR结束后取10μL上样进行琼脂糖凝胶电泳检测。

1.2.3 运用定点突变技术构建突变启动子

Pbsh上有PrfA和SigB的结合位点:PrfA-box和SigB-box(-10区)。本实验运用PCR介导的定点突变技术,利用设计的引物bsh-MprfA-1F/bsh-MprfA-1R和bsh-MsigB-1F/bsh-MsigB-1R构建携带:①PrfA-box突变的质粒—mPrfA-Pbsh-XbaⅠ-pUC18;②SigB-box(-10区)突变的质粒—mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18。然后以PrfA-box突变的质粒DNA为模板,以bsh-MsigB-1F/bsh-MsigB-1R为引物构建③PrfA-box与SigB-box(-10区)同时突变的质粒—mPrfA-mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18。

PCR反应体系:1μL质粒DNA模板、2μL dNTPs (10mmol/L)、1μL 10×pfu buffer、1μL pfu、引物(100pmol)各1μL,添加ddH2O至50μL。PCR程序:95℃ 2min;[95℃ 45s,51℃ 1min,68℃ 9min]18×;72℃ 10min。

PCR反应完成后,取PCR产物20μL加入1μL的DpnⅠ酶和2.3μL的DpnⅠ buffer在37℃温育1h后,直接转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,然后涂布添加了Ampicillin (100μg/mL) 的LB平板,随机挑取10个克隆,送英俊公司测序检测。

2 结果与分析

2.1 突变模板Pbsh-XbaⅠ-pUC18重组质粒的构建结果

PCR扩增获得bsh启动子片段经1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可见一条清晰的约380 bp的电泳条带,与预期片段379bp大小相符,见图1A。

M: Marker DL5000;1: Amplification of bsh promoter by PCR; 2:Pbsh-XbaⅠ-pUC18 digested with XbaⅠ.

获得的重组质粒Pbsh-XbaⅠ-pUC18用XbaⅠ酶切鉴定,结果如图1B所示:酶切后可见两条清晰的条带,与预期的Pbsh片段长度(379bp)以及pUC18载体 (2674bp) 的片段长度一致,表明重组质粒Pbsh-XbaⅠ-pUC18构建成功。

2.2 定点突变过程中模板浓度的确定

为确保扩增后剩余模板能被DpnⅠ酶完全消化,提高突变率,本研究通过预实验来选择合适的模板浓度。选择的模板浓度分别为20ng、40ng和60ng,PCR结束后,取10μL上样进行琼脂糖凝胶电泳检测,结果如图2所示:三种浓度均能成功扩增,得到所需的PCR产物,尽管随着模板浓度的增高,PCR扩增产物的亮度也有所增加,显示产物的浓度也随之增加,但为了保证突变的成功率,我们选择了模板为20ng的PCR扩增产物用于DpnⅠ酶切。酶切后直接转化大肠杆菌感受态,随机挑取10颗转化子进行测序,阳性突变率达到100%,表明该浓度适于做为本研究的PCR反应的模板工作浓度。

M: Marker DL5000; 1: 60ng template; 2: 40ng template; 3: 20ng template.

2.3 测序鉴定定点突变结果

构建的突变质粒送到英俊公司,应用M13-Reverse引物测序结果如下:

2.3.1 重组质粒Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果

模板重组质粒Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果如图3所示:野生型bsh基因启动子的PrfA-box碱基序列为TTAAAAATTTTTAA,SigB-box(-10区)为GGGTAC。

The sequence TTAAAAATTTTTAA between 241-255bp is PrfA-box and the sequence GGGTAC between 342-348bp is SigB-box(-10box).

2.3.2 PrfA-box突变质粒mPrfA-Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果

PrfA-box突变质粒mPrfA-Pbsh-XbaⅠ-pUC18测序结果如图4所示:PrfA-box中的TAA碱基突变为GGC,突变结果与预期一致。

2.3.3 SigB-box(-10区)突变质粒mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18测序结果

SigB-box(-10区)突变质粒mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果如图5所示:SigB-box(-10区)中的GGG碱基突变为ATA,与预期一致。

2.3.4 PrfA-box与SigB-box(-10区)同时突变质粒mPrfA-mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果

PrfA-box与SigB-box(-10区)同时突变的mPrfA-mSigB-Pbsh-XbaⅠ-pUC18的测序结果如图6所示:PrfA-box中的TAA碱基突变为GGC,SigB-box(-10区)中的GGG碱基突变为ATA,突变结果与预期一致。

3 讨论

定点突变技术是研究基因和蛋白质结构和功能的有力工具之一,也是实验室研究基因表达调控的主要手段。目前国内外采用的定点突变的方法很多,如重叠延伸PCR定点突变技术[3]、寡核苷酸引物介导的定点突变技术[4]、大引物PCR定点突变技术[5]等;同时,商业公司还开发出多种定点突变试剂盒,如Stratagene公司的QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit和QuikChange XL site-directed mutagenesis kit,Clontech公司的Transformer Site-Directed Mutagenesis Kit等。与以上这些定点突变技术相比,本方法的关键及特色在于:

The sequence GGC between 241-255bp is the mutated points in the PrfA-box

The sequence ATA between 362-364bp is the mutated points in the SigB-box(-10box)

The sequence GGC between 247-249bp is the mutated points in the PrfA-box and the sequence ATA between 346-348bp is the mutated points in the SigB-box(-10box)

(1)突变过程中PCR反应程序的设定。PCR程序大体为:95℃ 2min;[95℃ 45s,50-55℃ 1min,68℃ N min]12～18×;72℃ 10min。“N”根据所需扩增的突变模板DNA长度来确定,一般pfu酶的扩增效率为0.5kb/min。本研究所用的重组质粒大约为3kb,为了保证能充分扩增出整个质粒,以及避免质粒二级结构干扰扩增效率,我们最终设定的扩增时间为9min。扩增循环数的选择:若进行一个碱基的突变则为12个左右循环,两个碱基的突变为16个左右循环,多个碱基的突变则为18个左右的循环,为了提高突变的效率,扩增循环数应控制在此范围内。循环数太少,难以得到足量用于转化大肠杆菌所需的突变产物;而扩增循环数太多则有可能引入随机突变。本实验设定的PCR程序为95℃ 2min;[95℃ 45s,51℃ 1s,68℃ 9min]18×;72℃ 10min,一次PCR实现了对三个碱基的同时突变。

(2)高保真DNA聚合酶的选用。本实验采用了高保真的pfu聚合酶,降低了PCR扩增过程中随机突变的几率,但实验中我们发现该酶仅对于扩增全长小于4kb的DNA序列的效果较好,如需扩增更长片段,则应选取能扩增长片段的高保真DNA聚合酶。张宝真[6]等使用的高保真耐热DNA聚合酶Phusion(购自New England Biolabs公司,可以扩增10 kb以上的DNA片段)成功的对长度大于7kb的质粒进行了定点突变。朱大兴[7]等利用的Pyrobest DNA聚合酶(购自宝生物工程有限公司)也成功的对长度大于7kb的质粒进行了定点突变。

(3)有效选取了定点突变模板的浓度,确保DpnⅠ酶的工作效率。PCR扩增产物中剩余模板DNA能否被DpnⅠ酶完全消化,是关系到突变成功率的关键因素之一,从理论上讲,模板DNA浓度越低,扩增后产物中剩余的模板量越少,越易被DpnⅠ酶消化完全。但是,模板浓度过低又会导致PCR反应效率低下,产物的浓度过低,从而得不到阳性转化子。王宏梅[8]等建议为了保证DpnⅠ酶的充分消化,在PCR结束后可进行电泳验证,确认产物的浓度,如果产物浓度很高,可以减少消化的产物量或适当延长酶切时间。此方法存在一定的局限,一是因为影响PCR产物浓度高低的因素较多,模板浓度高不一定就意味PCR产物浓度就高;二是产物浓度降低到多少才能保证DpnⅠ酶的充分消化,需要经过多次反复摸索才能确定,从而增加了实验的操作步骤和成本。而通过预实验选取有效且较低的定点突变模板浓度,可以确保DpnⅠ酶的工作效率,减少由于测序来筛选正确突变子所需的时间和成本。

(4)操作简化,成本降低。重叠延伸PCR定点突变技术、寡核苷酸引物介导的定点突变技术、大引物PCR定点突变技术都需要多对引物及多轮PCR,且突变过程需要繁琐的提纯步骤才能得到最终的突变子。与这些传统方法相比,本研究只需要一对引物,整个PCR过程只需一步就可得到突变质粒,简化了由于传统的多对引物带来的繁琐的提纯步骤,增加了得到突变子的几率。

(5)应用范围广。与近年来广为使用的“设计限制酶辅助突变”(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis, DREAM) 技术相比, 本研究介绍的方法所利用的原理与其大体相似,但DREAM技术是通过引进的限制性内切酶位点对转化子进行鉴定,虽然避免了使用测序法对突变产物的筛选[6,9],但由于设计和引入的限制性酶切位点必需与突变位点相匹配,因此存在很大的局限性,而本实验介绍的定点突变方法可以将目的基因碱基按照要求任意突变,因此可广泛应用于基因调控以及蛋白质结构与功能之间的研究。

综上所述,本研究介绍了一种经济、高效、简便快捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供了技术支撑。

参考文献

[1]谢振华,史小军,蔡国平.在单个PCR管内快捷完成定点突变[J].中国生物化学与分子生物学报,2006,22(8):681-684.

[2]Didier Cabanes,Pierre Dehoux,Marc Lecuit.Listeria monocytogenes bilesalt hydrolase is a PrfA-regulated virulence factor involved in the intestinal andhepatic phases of listeriosis[J].Molecular Microbiology,2002,45(4):1095-1106.

[3]何震宇,李月琴,林元藻.重叠延伸PCR对DAN片段进行定点双突变[J].氨基酸和生物资源,2007,29(3):78-82.

[4]Wei D,Li M,Zhang X,et al.An improvement of the site-directed muta-genesis method by combination of megaprimer,one-site PCR and DpnⅠtreat-ment[J].Anal Biochem,2004,331(2):401-403.

[5]张碧乾,邓会群,宫彩霞,等.大引物PCR定点突变方法的改进[J].湖北大学学报,2009,31(1):79-81.

[6]张宝中,冉多良,刘大斌,等.利用DREAM设计和同源重组进行一步定点突变[J].中国生物工程杂志,2008,28(11):77-81.

[7]朱大兴,周清华,王艳萍,等.利用Pyrobest DNA聚合酶一步法进行大片段基因的定点突变[J].生物技术通讯,2007,18(4):590-593.

[8]王宏梅,赵心清.一步PCR法对拟南芥ATPK64基因的快速定点突变[J].华中农业大学学报,2008,27(1):19-21.

[9]张宝中,冉多良,张昕,等.用DREAM技术进行全长质粒快速定点突变[J].生物工程学报,2009,25(72):306-312.

突变论文 篇2

二十一世纪二十年代，人类的科技已经发展到不可想象的地步。回想过去，展望未来。就在二十年前，这个世界才踏进高科技的世界，而就在这短短的二十年，人类已经登上了科技的高峰。

二十年后的`我，是一位正在攻读博士后的大学生，不仅如此，我还是商业界中著名的企业家，凭着一项伟大的发明DD变形金钢，“名垂青史”。

在大街上，你再也看不到各式各样的商店，取而代之的是一家规模宏大的“一货公司”，里面数以万计的小钢片，就是我发明的变形金钢。现在，这种小钢片已经成为了人类生活中不可缺少的一部分，它的功能就是听从你的吩咐，变成你想要的东西。

虽然世界进步了，各种各样的“新型武器”代替了那些“老古董”，但是，在我国东部还保留着一座绝无仅有的“古城”，这座“古城”是十三年前最发达的城市，可如今却沦落到了这种地步。

人类的科技进步了，人的数量也日益增加，从原来的六十几亿，迅猛地发展成一千零二十五亿。你别愁，科学家早在五年前就克隆出了十个地球，到现在，还有三个地球空着呢！

你可能会疑惑不解：“讲了这么多，我们的‘狗窝’是怎样的还不清楚哩！”告诉你吧：我们现在的住所可好了！为了抵御各种自然灾害，科学家突发奇想，给每种生物，植物，物品都加了一层厚厚的保护膜，不管是地震，大台风还是洪水，都不会被侵害，依然安然

无恙。而房子的样式并没有千篇 一律，而是可以根据自己的喜好所定。每一套房子都有一个模型，你可以把它当作橡皮泥，随意地摆弄成你喜欢的样子。这种房子的好处在于不需要换，你可以天天改变它的形状。

基因突变 篇3

中国定制

从K4上市的地点我们就能看出很多信息：西安不仅是历史名城，更是中华文明和中华民族重要的发祥地。K4选择西安上市，无声地在向外界宣示着自己“中国定制”的身份，也传达着东风悦达·起亚的诚意。

曾几何时，“中国定制”似乎已经成了考验车企是否重视中国市场的关键因素。从奥迪最早针对中国市场推出加长版车型，到大众推出朗逸、宝来等“专为中国市场量身打造”的车型，大众可谓尝到了“中国定制”的甜头。之后，包括丰田、现代和东风标致都针对中国市场推出量身定制的车型。

K4就是东风悦达·起亚谋划已久的“中国定制”。无论是外观还是内饰、动力，K4处处都体现了“中国定制”的特色。虽然同是出自大师彼得·希瑞尔之手，不同于K3和K5，K4的整体设计思路有所转变，潮流感和时尚感的比重有所降低，取而代之的是更成熟稳重的设计。这样的基因突变，很大程度上向中国消费者表现了诚意。

在内饰上，K4同样强化了商务气质。东风悦达·起亚特别强化了对其后排乘用空间的设计，通过后排通风口、后排中央头枕、后排座椅加热等配置来打造K4的商务性能。由此也可以看出，在原有主打活力的K3和K5外，东风悦达·起亚也在试图通过K4来拓展自己的消费群体。而年底上市的1.6T车型更是顺应当前中国汽车市场的形势，进一步强化了K4的竞争力。

K系矩阵

“K4要成为明星车型。”早在沈阳K4试驾会上，东风悦达·起亚销售本部副本部长蒋玉滨就曾点明东风悦达·起亚对K4的期望。在东风悦达·起亚新划定的各车型运营战略中，K系列被划为销售主力车型，涵盖了K5、K4、K3、K3S和K2五大车型。作为销量过万的名图的同平台车型，东风悦达·起亚内部对K4的期待很高。

“名图一个月能卖1万辆，K4也应该差不多吧。”东风悦达·起亚相关负责人表示。尽管上半年，东风悦达起亚共销售31万辆，同比增长12.39%，高于行业增速。但面对今年65万辆的销售目标，东风悦达·起亚还是颇有压力，而完成这一目标的希望，则寄托在刚刚上市的K4上。作为起亚今年最重要的一款新车，同时也是一年半以来起亚在华推出的第一款新车，其意义不言而喻。

另一方面，东风悦达·起亚销量的增长主要是由K3、K2以及眼下最热门的SUV产品支撑，其中中高级车K5销量甚至出现不升反降的情况。对于东风悦达·起亚而言，K5曾是重点打造的旗舰产品，包含了起亚品牌在中国市场提升品牌形象的长久诉求，而其销量渐入萎靡并非吉兆。作为入门级中高级车的K4此时进入，显然是想挽救起亚在中高级车的下滑趋势，托举品牌提升。再加上北京现代名图的成功，更是给了东风悦达·起亚信心，“K4+K5”的战略组合联手冲击销量，相信效果不会太差。

营销助力

众所周知，东风悦达·起亚在创新营销方面是一把好手。近年，东风悦达·起亚通过不断创新营销手段，持续强化品牌多元化营销体系的建构，以体育营销为主，同时覆盖文化、公益等多领域，进一步推动品牌力的发展。

借力于明星代言的魔力，K3、K3S和K5都取得了不错销售业绩。想起之前的“长腿欧巴”李敏镐、演员吴秀波，大家都在猜测K4的代言人是谁。而K4上市发布会现场却并没有见到任何明星的到场，发布会更像是东风悦达·起亚高层与经销商们拉近距离的誓师大会，伴随着一阵阵的“大卖”口号声，在现场的媒体能够感受到这家三方持股的合资公司为达成到2017年销量突破百万而抱持的决心。

据蒋玉滨介绍，今年东风悦达·起亚继续进行“顾客感动”的战略推进，希望通过持续强化以顾客为中心的经营战略，来实现产品和品牌价值的全面提升。K4的目标群体锁定在35岁左右社会中层阶级，未来东风悦达·起亚会邀请这类型的社会精英为K4造势，并继续深耕体育营销全面助力K4的上市销售。

突变不如暗变 篇4

逆来顺受肯定不是办法,这样做最终的结果是“逼良为娼”。本来还是一个心性很好的管理者,逆来顺受时间长了,心理慢慢畸形,反成了冰冷似铁的毒蛇型管理者,发展到了这副田地,失败肯定是必然。

而直接反抗会因过于突然而遭到强烈的反扑,结果出师未捷身先死,落得一个商鞅的结局,被人“五马分尸”。

暗变是最佳的选择,可以只付出最小的代价就能达到目的,也不至于对自己的情绪驾驭能力发出太大的挑战,何乐而不为。

暗中叛逆

在《红楼梦》中,宝玉多数情况下只能算是一个逆来顺受的人。吃穿用度、事业婚姻等,几乎所有事情都是完全服从父母和贾母的安排。

在事业上,起初的时候,不愿意学八股文,但最后,为了贾家中兴,还是苦学了起来,并考上了状元。

在婚姻上,本不喜欢宝钗,但最终还是按父母长辈的意思,弃了木石姻缘,默认了金玉良缘。

宝玉一生其实只做了一次像样的反抗,而且还是突然的反抗,那就是:没有听从父母长辈的安排,选择了出家。这一举动说穿了,还不能算是纯纯粹粹的抗争,实质上只是逃避而已。

现在,许多学者把宝玉看成是叛逆者,甚至是五四新文化运动的先驱,这显然有些过了。

虽然宝玉的身上有点叛逆者的影子,也体现出了一些民主、平等、自主思想的光芒,但还是太少太朦胧,只是有那么一点意思而已,终究与五四新青年差得太远,所以戴不了这么高的帽子。

纵观全书,我们看到更多的是宝玉的压抑、麻木和无作为。

比如,晴雯、芳官、四儿、金钏这些宝玉身边的丫鬟面临险境时,宝玉是完全可以向贾母或王夫人求求情的,即便是她们没答应,尽了这个力也不遗憾。

而宝玉却硬压抑下了这份感情。对于父母长辈的不合理要求,他不但没抗争,甚至连疏导都没做——他太想做乖孩子了。

其实,有些乖特别没必要。就拿让晴雯补雀金裘这件事来说,宝玉就做得很过分。当得知外面的裁缝无法缝补时,麝月就曾劝过宝玉:明儿不穿也罢了。

宝玉却偏想穿。且说:明儿是正日子,老太太、太太说了,还叫穿这个去呢。偏头一日就烧了,太扫兴了。

只是为了让宝玉不扫兴,贾母不责怪,他就舍得让病中的晴雯拼着命地为他补了一夜,这多少有些残忍。

结果累得晴雯头晕眼黑,气喘神虚。第二天王太医来诊了脉后,疑惑地说:昨日已好了些,今日加重得这么厉害,这汗后失于调养,非同小可。

宝玉此时也感觉到情况的严重性,说:如果你万一有个好歹,都是我造的孽。他这话倒是说中了,病里拼着命补雀金裘,成了晴雯最终惨死的诱因之一。

这一点十分像《射雕英雄传》里的黄老邪。在弟子陈玄风与梅超风盗走九阴真经下部后,黄药师因急怒交加,神情恍惚,妻子冯蘅为了安抚丈夫,苦思九阴真经,终至心力交瘁,难产而死。

一个身体本来就不好的孕妇,还要默背那么繁难的经书,可当时的黄老邪并没有劝说妻子停止这件事。当时,他跟宝玉一样,为了自己的一点私欲,便不再顾及他人的死活,为人生留下了一件终身的憾事。

怎么变革都要付出代价

对于和黛玉的爱情,宝玉没有想到任何解决的办法,更没有自己或求人向贾母及王夫人说起这件事,说穿了,他还是怕离开这个家,并没有真的想:我的青春我做主。

在这方面,还不及紫鹃这个小姑娘,紫鹃还能想出试探宝玉的方法,为黛玉的婚姻造势。

试探完之后,紫鹃对自己的测试结果特别满意,因为不但试出宝玉的真心,还得来了宝玉的一句誓言:活着,咱们一处活着,不活着,咱们一处化灰化烟。高兴得她在晚上和林黛玉说了半宿的真心话。

紫鹃毕竟没有学过心理学,其实,宝玉在这次测试中就暴露出了自己的弱点:知道林妹妹要走了,他首先失去了理智,不是选择求林黛玉不走或求贾母把她留住,而是“走火入魔”,眼也直了,手脚也冷了话也不说了,李妈妈掐着也不疼了,已死了大半个。

这倒是和传说中的梁山伯有点相像,得知祝英台的父母不同意双方的婚事,不去想办法反抗,而是在家活活郁闷死了。

过去,谈及这些事,人们一直以封建社会制度的黑暗为由来为宝玉开脱,其实,在封建社会,为爱情私奔的人数不胜数,其中也不乏名门世族。

比如卓文君,就放弃富庶华贵的家,和穷书生司马相如私奔。为了维持生计,二人开了家酒馆,卓文君这个富家千金,在酒馆站柜台,而司马相如这个超级帅哥兼才子也和下人们一样,喂马,扫马圈。二人心心相印,小日子过得有滋有味,一点也没觉得苦。

实战案例

案例一

我所咨询的一家公司发生过这样一件事。

这家公司的老板叫陆林志洪。公司主要销售手机和电子产品。原来一直走的是地面渠道,可公司的一个韩国籍员工叫朴大江。他找到陆林志洪,希望他们能用电视购物的形式销售科技含量较高的产品,并认为这个渠道会越来越好。

陆林志洪叹了口气说:“可惜,这个渠道从一开始进入中国就是个畸形儿,所有厂家、经销商都夸大宣传。”

朴大江说:“在韩国,家庭电视购物从1996年开始时,最初的时候市场也是很乱的,不过很快便走向正规化了。发展到今天,已经成为可以和大型商场、减价超市竞争的‘第三势力’,韩国到2006年已经演变成一个产值高达53亿美元的巨大市场,涌现出了不少知名企业,比如LG、现代和CJ……”

一讲起营销管理方面的事,朴大江就开始滔滔不绝,语言精准流畅,很难让人想象他是个外国人。

陆林志洪觉得朴大江说得有道理,有点心动。就附和着说:

“是呀,现在商场超市这些促销员最高学历也就是高中水平,而且大都是一些不爱学习的人。商品如果复杂了,他们根本介绍不清楚。太影响销量了!你觉得咱们公司应该主销什么呢?”

朴大江说:“手机!尤其是那种有新功能的国产手机,价格又不太贵的。”

陆林志洪犹豫道:“有那么大销量吗?现在老百姓都不爱看电视购物节目。”。

朴大江说“那也不能说是电视购物这种销售模式不行,只是咱们的节目制作水平和销售策略有问题。在韩国,有近三分之一的电视台要拿出大部分时段播放电视购物节目,一些影视明星还经常在这种节目中客串表演,特别精彩,许多韩国女性对电视购物频道的依赖几乎已经到了着迷的程度。”

陆林志洪说:“可手机毕竟也是个较贵的产品,大家会轻易相信电视上的宣传吗?”

由此看来,在企业管理中,虽然暗中改变代价小,但不论是叛逆,还是变革,都是要付出代价的。这个要提早作好心里准备,不能等到事情发生后,没了主心骨,有病乱投医,把事情弄得越来越无法收拾。

朴大江说:“在韩国,手机可是电视购物中卖得最好的产品之一。销量上来了,价格就可以降下来,比市场价能便宜一多半。我们公司前不久为一家外国公司作过调查:现在,在中国的发达地区的城里人平均每年要换两部手机。手机已不是什么耐用消费品了,而是快销品。有些人,看手机有了吸引他的新功能,就会毫不犹豫地淘汰旧手机。”

朴大江接着说。,“代理手机企业的一个产品要多少钱啊?”朴大江终于吊起了陆林志洪的胃口。

“五百万肯定是没戏的。至少1000万才能周转过来。”朴大江说。

陆林志洪嘴动了动,半天没说出话。

想了半天,说:“想改革,就要豁得出去,有条件要上,没有条件也要争取条件上!”

陆林志洪马上贷款,在公司成立了电视购物部,让朴大江负责,主要利用电视购物模式销售一款超常待机的双卡双带手机。

可项目上马后,各电视台的电视购物时段大幅涨价,公司的销售成本一下涨了上去。不久,资金便周转不开了,朴大江便经常回韩国四处找人投钱,最终也没什么结果。

这时,好多经销商都来找陆林志洪和朴大江做批发山寨机项目。陆林志洪什么也没说,让朴大江决定。

见朴大江毫不动心,经销商又说:“我们可以弄到‘五码’机的,有入网证、三包卡,发票上有IMEI码。你们就放心吧不会有任何问题。现在大家不都卖这种货吗,利润高,又好卖,何必弄厂家的东西呢?现在,全国有将近一半的手机都是山寨机,连阿尔卡特这样的国际名牌在中国都快被挤黄摊了,你们何必非要销品牌货呢,利润太薄了!”

朴大江婉言谢绝了经销商。他感慨地对陆林志洪说:

“这种丢人的事打死我也是不会做的,我们在中国,代表的是韩国人的形象,我不能丢国家的脸。。”

陆林志洪点了点头,内心很惭愧。从这一段时间的接触来看,韩国男人性格是激烈的,为了国家,为了大义,断指和自焚,什么事都会做得出来的。

见陆林志洪不说话,朴大江又说:“我们的国歌里有这样一句歌词,‘愿我大韩精神,如秋夜晴空的浩月,清辉洒向大地,坚定、真诚、执著’,从小我父母就用这句话教育我,做人要真诚,这样才能做久。”

陆林志洪拍了拍朴大江的肩膀,劝他道:

“我理解,这点困难是吓不倒我的。改革吗,总是要付出代价的,再准备一阵子,我们重新再来。”

案例二

我所咨询的一家公司发生过这样一件事。

这家公司是个传媒集团,有一份属于自己的报纸。报纸创刊后,公司对报刊部一直实施的是弹性工作制:不打卡,也不用天天坐班,只要求周一和周五来公司两次。

没过多久,公司几位元老就对此十分有意见,说报纸编辑部这样散漫,工作积极性不高,有吃大锅饭的现象。这些坏现象不但影响了报刊部,也给其他部门的管理和考核带来了许多不良影响,不停地劝洪主编采用公司其他部门的管理模式。

老洪也知道,自己的部门存在许多问题,于是他一狠心,废除了原有的管理模式,实施了和公司其他部门一样的管理模式。

这项改革刚开始实施就受到很多阻碍,各个方面都出现了一些棘手的问题。

就拿每日打卡这件事来说,大家就很不习惯。许多记者每天都要早早来到公司,打完卡再出去采访,采访完后,还要再回到公司打卡。这样,一天要有好几个小时耽误在路上。

没过多久,对这种工作方式不习惯的核心记者都慢慢跳了槽,报纸的质量受到了很大的影响。

基因突变作文400字 篇5

提起基因突变这个词，大家可能会联想到x战警里面的那些变异英雄们，可我今天写的主人公可跟他们一点边都搭不上，今天我要写的是那早在新石器时期就被人们广泛饲养的鸡和鸡生下的`蛋。

作为学生的我们，在学校里经常听见那有趣而刁钻的问题：先有鸡还是先有蛋？面对这样的问题，同学们经常争论不休，有的说：先有鸡，没有鸡哪来的蛋？而有的同学却说：先有蛋，没有蛋哪来的鸡？还有的同学常常开玩笑的大喊道：“先有我”随后，便引起全班哄堂大笑，而我却对这个问题很感兴趣，随即我便在家里查阅相关信息，才明白这到底是怎么一回事，让大家困惑了很久的谜题终于解开了，其实是先有蛋再有的鸡这是为什么呢？绕来绕去还是要跟文章开头的那4个字扯上关系——基因突变！

就是因为基因突变，才会产生鸡蛋这个不符合常规的东西，后来在一定的条件下，蛋才会孵化成鸡，鸡再生出蛋，就此循环。

侥幸出击　风云突变 篇6

(2000年11月2日弈于上海浦东)

中炮对反宫马

1、炮二平五马2进32、马二进三炮8平6

3、车一平二马8进74、兵三进一卒3进1

5、马八进九象7进56、炮八平七车1平2

7、车九平八炮2进48、兵五进一…………

布局阶段双方轻车熟路，很快演变成“五七炮进三兵对反宫马右炮封车”的布局定式。现红方挺中兵避开黑方过河炮的牵制，是当今棋手采用较多的变化。以往多走兵七进一，以下卒3进1，兵三进一，卒7进1，车二进四，红弃双兵快攻，战局错综复杂，双方机会相当。

8、…………士6进59、兵九进一…………

挺兵活马，是一种新的进攻方案。此时另有兵七进一的选择，以下卒3进1，车二进三，炮2退1，兵五进一，双方将形成激烈对攻。

9、…………马3进4

跃马放弃中卒，占领河口制高点，着法新颖。实战中此时多走车9平6(平车占肋，准备炮6进5破坏红方阵形)，炮五平四(平炮打车是红方维持先手的惟一着法。如改走仕四进五，则车6平8，红右车被兑，左车被封，黑方局势满意)，以下黑有三种应法：(一)炮6进7，相三进五，炮6平4，帅五平六，马3进4，弃炮抢攻，双方各有顾忌，但棋手们普遍认为红方多子，机会多于黑方；(二)车6平8，车二进九，马7退8，车八进一，马8进7，马三进二，红方稍先；(三)车6平7，相三进五，马3进4，双方互缠。

10、兵七进一…………

弃七兵意在借七路炮的威慑力先手炮击黑方中卒，将局势迅速导向对攻状态。如求稳可改走仕四进五，则形成相持局面。此时如随手走炮五进四，则炮6进5，炮五退一，炮2进2，红方难应。

10、…………卒3进111、炮五进四马4进3

守中带攻!进马填塞，消除红方车八进三的手段，又伏有一定的反击力。如改走象3进1消极应对，红则兵五进一先手渡兵，黑将忙于应付。

12、兵五进一炮6进5

进炮闪开马脚，畅通肋线，同时和右翼子力配合，对红方阵形造成一定的侵扰，是一步照应全局的好棋。如随手走车2进4，则马九进七，车2平5，马七退五，红方得子。

13、炮七进二炮2进114、相三进五…………

飞相有嫌缓慢，可考虑改走马三进四出击，以下黑如炮6平1，则马四进六!马3进4，车八进一，马4退6，车八平四，先弃后取，对攻中红方稍占主动。

14、…………炮6进1

进炮伏有炮6平2得子和马3进4攻车取势两种手段，战术灵活生动。

15、车二进一…………

软着。红方升车捉炮是寄望于黑方战术失误的侥幸一击，但就棋本身而言，此手并无积极意义，一旦被黑方识破，反而在战略上处于下风。故仍应马三进四，寻找积极的对抗途径。

15、…………车9平6

平车保炮，避开陷阱，蓄势待发。如急于进攻而改走炮6平2(如马3进4，则炮七退三)，则车八平九，马3进1，马三进五，红方占优。

16、炮五平七…………

平炮打马，败着!可能是由于黑方一连串令人目眩的战术组合给红方心理上造成重压所致。其实红方虽处下风，但并没到不可收拾的地步。此时冷静的下法是仕四进五(也可考虑走马三退二)，以下黑如马3进2，则车二平四，炮2进2，车四进八，将5平6，马九退八，车2进4，炮五平四，黑方稍好，但欲扩大优势亦非易事。

16、…………马3进417、后炮退三(图)车6进7

如图形势，黑方进车击双，攻城掠地，红方败局已不可避免。以下只有见着拆着，勉强应付了。

18、仕四进五…………

无奈。如改走相五进七，则炮6平3，黑方得子。

18、…………车6平519、车二平四车5平7

20、车四进三车2进621、前炮进一车2平5

应改走炮2平5可以速胜。以下红如仕五退四，则车2平5，兵五平六，马7进5，红方难应。

22、车八进二车7平223、前炮平三车5退2

24、马九进八车2平825、车四退四车5平3

26、炮七平八车3进127、马八进九马4退2

28、车四进三车3进329、炮八退一车3进1

30、炮八进一车3退131、炮八退一车3退3

mtDNA突变研究新进展 篇7

1 线粒体基因组的结构

1.1 基本结构

mt DNA呈闭合的双链环状结构, 包含16 569对碱基[1], 共编码37个结构基因, 包括12S和16S 2个核糖体RNA以及22种转移RNA。另外13个结构基因编码13个蛋白多肽, 它们分别是[2]:复合体Ⅰ (NADH-泛醌还原酶) 中7个亚基 (ND1, ND2, ND3, ND4, ND4L, ND5, ND6) ;复合体Ⅲ (泛醌-细胞色素C还原酶) 中1个亚基 (Cytb) ;复合体Ⅳ (细胞色素C氧化酶, CO) 中3个亚基 (COⅠ, COⅡ, COⅢ) 和复合体V (ATP合酶) 中的2个亚基 (ATPase6和ATP ase8[3]) 。非编码区包括HV区和D-loop区。其中D-loop区长1 124 bp, 既是线粒体DNA转录和复制的起点, 又是突变热点。

1.2 开放阅读框架

在人的Hela细胞线粒体中发现[4]的

7SRNA中含有一个线粒体通用的终止密码子及Poly A尾, 是Hela细胞中含有Poly A尾最多的mt RNA, 其间有一个潜在的开放阅读框架 (ORF) , 编码23或24个氨基酸的多肽。

2 基因突变及可能因素

2.1 mt DNA在整个细胞周期的合成十分活跃, 而相应的DNA聚合酶γ不具有校读功能, 导致复制错配频率高。

2.2 缺乏组蛋白和DNA结合蛋白的保护, 分子裸露, 易受外来因素的攻击而发生损伤。

2.3 线粒体内氧的浓度高, 易产生氧自由基及过氧化氢等物质[5], 它本身又不能合成谷胱甘肽将其有效清除, 故mt DNA易受氧化损伤。线粒体的能量代谢中, 呼吸链的底物端有些物质, 如黄素蛋白、非血红素铁蛋白、醌, 尤其是半醌发生氧化反应的能量保障是很低的, 常常直接启动O2的单电子还原, 产生超氧阴离子自由基 (O2-) , 这种在电子传递末端氧化酶之前漏出呼吸链与氧反应生成超氧自由基的过程是线粒体生成有害活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 的源头[6]。细胞存在有效的抗氧化防御体系, 如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等。实验证明, μmol水平引起细胞凋亡, nmol水平可促进细胞增生, mmol水平则引起细胞的损伤反应[7]。

2.4 mt DNA缺乏组蛋白和DNA结合蛋白的保护, 并且线粒体内脂肪/DNA比值很高, 因而mt DNA易于和致癌物尤其是嗜脂性致癌物结合[8]。

3 线粒体DNA与疾病的联系

3.1 衰老

随着生命的进程, mtDNA突变日益积累, 当突变的mt DNA成为主导时, 将引起氧化磷酸化功能缺失, 尤其使需要较高能量供应的组织受累。这样随着年龄的增长而mt DNA突变增加累积的结果, 即是引起衰老。

3.2 糖尿病

对糖尿病的研究表明:与糖尿病有关的mt DNA位点突变有20余种, 其中具有致病作用的是3243A-G突变。后来有人相继报道了3316G-A、3394T-C位点突变也可以导致糖尿病。

3.3 耳聋

目前发现可以导致耳聋的突变有12SrRNAl555-G, CoI/t RNA Ser (UCN) 7445A-G;tRNALeu (UUR) 327 l T-G;mtDNA4834bp和4977bp缺失, t RNASer (UCN) 7472插入U。线粒体DNA缺失突变与链霉素 (AmAn) 耳毒作用存在着易感性的关系, 大多数家族史的AmAn中毒性聋患者呈mt DNA1555G突变。

3.4 肿瘤

在各种人类肿瘤中已经发现各种线粒体DNA突变[9], 这些突变既有在线粒体DNA编码区, 也有在非编码区, 而且大部分突变是同质突变。各种因素所致的mt DNA损伤 (包括突变、缺失、整合和不稳定性等) 与细胞的癌变、肿瘤的发生之间可能存在一定的关系。在实体性肿瘤如乳腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌和肾癌中都有mt DNA畸变的报道。

3.4.1 肺癌

Sanehez-Cespedes等[10]研究了27例原发性肺癌组织, 有9例体细胞突变。其中2例是碱基替代, 7例为D-Loop区 (C) n重复序列的插入和缺失。Dai等[11]检测了37对肺癌组织和癌旁正常组织, 20例正常肺组织的线粒体DNA大片段缺失, 发现缺失率分别为54.1%, 59.5%, 30%。这三种组织之间差异无显著性, 但发现大片段缺失与年龄和吸烟有相关性。

3.4.2 肾癌

Nagy等[12]在6例晚期肾癌患者中发现94个线粒体DNA多态性, 其中56%为能导致氨基酸改变的异质性改变。他还直接测序了8对肾细胞癌组织和对应癌旁正常组织, 28%的线粒体DNA改变发生在D-Loop区。Simonnet等[13]的研究认为线粒体DNA氧化磷酸化的减少有助于肿瘤的生长和转移。

4 小结

应急物流能力突变控制模型 篇8

近年来我国各类突发事件如地震、洪水、泥石流、台风、海啸、传染病 (如SARS、H1N1) 等频频发生, 财产人员损失惨重。应急物流能力是灾难损失程度的重要影响因素之一。应急物流能力系统 (emergency logistics capability system) , 是指某特定的应急物流系统从应急需求分析与确认、应急物资采购、分拣、运输到交付给应急客户的全过程中, 在响应时间、响应速度、物流成本、满足需求准时性和可靠性等方面的综合反映[1]。应急物资与救援人员的运入, 受灾群众撤出、死者安葬、卫生防疫等都依赖于强大柔性、安全高效的应急物流能力系统。相关资料显示, 智利8.8级地震只夺走了几百人的生命, 而海地7.0级地震就导致20多万人死亡, 其间差异与应急物流能力的强弱密切相关。由于应急物流指挥、受过专业训练的应急救援队伍和应急物流设备 (如后备役车辆) 等所构成的强大应急物流能力系统, 2008年汶川地震和2009年玉树地震的救援抢险过程有序有效, 较以往明显提高了救援效率效果。我国应急物流能力系统建设还处于初期阶段, 对其深入研究将对应急物流能力的提高, 国家应对突发事件具有理论和实践意义。

学者们已关注应急物流能力问题, 并从不同角度运用不同方法对应急物流能力进行评价[2,3,4,5]。不少学者运用突变模型研究突发事件, 如建立突变模型研究公共空间拥堵、近海水污染、传染病爆发等公共突发事件[6,7,8,9]。张亚平、唐铁桥等[10,11]分别用尖点、燕尾突变理论对交通流进行预测, 前者选择速度为状态变量, 流量和密度为控制变量建立尖点突变模型, 后者在前者的研究基础上, 将时间因素补进控制变量建立燕尾突变模型进行研究。陈涛等[12]运用尖点突变理论建立拥挤控制模型, 利用势函数和动能函数描述拥挤空间交通系统变量之间关系, 并提出限制交通流的拥挤控制模型。在社会科学中, 系统本身的精确描述很难做到, 用突变模型研究各种突发事件和交通流问题是本研究良好的基础和启示。应急物流能力系统的特征和突变模型的适用性表明突变模型是研究动态应急物流能力有效的工具之一。本文将以应急物资需求、应急时间需求和应急成本需求为三个控制要素建立燕尾突变模型对应急物流能力系统展开研究。通过对应急物流能力系统的势函数、平衡曲面和奇点集的讨论分析, 求解其突变临界点, 并讨论其稳定性和变化方向, 在此基础上建立应急物流能力系统的控制模型, 以预测、控制和提升应急物流能力。

2 应急物流能力系统燕尾突变模型

2.1 突变理论与应急物流能力系统

20世纪60~70年代, 法国数学家Thom借助于奇点理论和结构稳定性理论提出突变理论。该理论认为:突变系统在状态空间演化过程中有多个稳定态和不稳定态, 当控制参数发生变化并越过一定界限时, 系统会从一个稳定态向另一个稳定态跃迁, 直接跨过其间不稳定态, 即发生突变。突变系统存在五个突变指征:多模态、不可达、突跳、发散和滞后。根据不同突变指征、状态变量和控制变量的数目, Thom等建立了七种初等突变模型:折迭, 尖点, 燕尾, 蝴蝶, 椭圆脐, 双曲脐和抛物脐[14]。目前突变理论及模型散见于数学、力学、社会学等学科的应用中。根据突变理论, 系统如果显现二个及以上的突变指征, 就可以运用突变理论进行分析;根据状态变量和控制变量的数目可以选择相应的初等突变函数作为系统的演化模型, 分析突变系统的演化特点和规律。

应急物流能力系统是由多个参数描述和控制的复杂问题。一方面, 突发事件的发生和紧急救援的需求成为社会各界关注的焦点。本着“救援第一”和“绿色通道”的思想, 应急物流能力会在思想上、组织上和通行上变得异常强大;另一方面, 由于突发事件 (如地震、洪水等) 会毁坏甚至阻断物流通道与设施, 加之可能引起的伴生性事件, 例如信息沟通不畅、次生性灾害、民众聚集引起的交通堵塞等, 这些又会造成应急物流能力的巨大削弱。在多种条件、多种因素作用下, 这个复杂系统呈现多模态 (能力强、能力弱二种基本稳定态, 能力较强、能力较弱等多种不稳定状态) 、突跳 (如应急物资从各地涌向救援点, 当超出救援点承受能力时, 应急物流能力系统会出现停滞甚至崩溃) 、发散 (突跳出现后, 系统出现严重堵塞甚至次生灾害, 已无法通过自组织改变现状) 、不可达 (系统在多种不稳定区域不断运动调整直至到稳定状态, 不稳定即为不可达) 等特性。这就使得应急物流能力不断在能力强 (满足应急物流需求) 、能力弱 (不能满足应急物流需求) 之间突变。本文拟选用一个状态变量、三个控制变量来描述应急物流能力系统, 根据Thom的理论, 可用燕尾突变模型来分析应急物流能力系统的突变结构和突变特征。突发事件发生时, 应急物流能力系统受到扰动, 控制变量发生不同变化, 从而使应急物流能力系统不断呈现“能力强-能力弱-能力再强-能力再弱”的状态, 即发生应急物流能力系统从一稳定态向另一稳定态的突跳。

2.2 控制变量与状态变量

突发事件对应急物流能力系统的影响首先表现为控制变量的变化, 进而引起状态变量在多个状态空间变化以至系统的突变。应急物流能力系统追求的是最大限度满足应急物流需求, 主要体现在应急物流物资流量大、耗时短 (速度快) 、成本低等方面。因此本质上, 流量、时间和成本是应急物流能力系统的三个控制要素。考虑到三个要素实际值相对于应急需求的相对满足程度更能动态体现其对状态变量和系统函数的影响, 同时也考虑到三个控制要素在量纲上的一致性, 本文对控制变量作修正, 即选用应急物流流量变化率、时间变化率和成本变化率为控制变量。现对控制变量和状态变量作如下定义。

定义1应急物流流量变化率φ (q) , 第一控制变量, 表示应急时的I个供应点物资流量 (∑qi (s) ) 相对于J个救援点物资需求量 (∑qj (d) ) 满足程度的变化情况, 即:

假设货源充足, 则物资流量 (供应量) 仅指在约束条件下到达救援点的流量, 即∑qi (s) 是在时间窗[0, tw]内实际通过图1中弧群rcdk (k=1, 2, …, K) 的流量和。时间窗是指救援点需要紧急物资供给的有效时间区间 (时段) 。应急物流系统对救援点的物资供应, 必须在救援点要求的有效时间区间内进行。本文采用单边上限时间窗, 即[0, tw]。图1中, 弧群rabm (m=1, 2, …, M) 、rcdk为公路运输路段, 弧群rbcn (n=1, 2, …, N) 存在公路运输、铁路运输和航空运输等多种运输方式。而弧群rcdk表示直达救援点的公路运输方式, 根据受灾情况, 可能存在各种车型的公路运输, 如大车、小货车和人力车等。时间窗内的V种运输方式通过rcd路段区间K条道路的总流量为:

定义2应急物流时间变化率φ (t) , 第二控制变量, 表示应急时物流时间 (∑tA (e) ) 与时间窗长度 (T (e) ) 相比的变化率。 (以常态物流时间∑tA (z) 为参照, T (e) =∑tA (z) 。)

∑tA (e) 、∑tA (z) 分别表示应急e时和常态z时物资在所有节点、路段、网络中流动所需时间和, A为所有路段和节点集合。常态物流时间由各路段的运输时间与节点作业时间组成, 即∑tA (z) =∑tA1 (z) +∑tA2 (z) 。而突发事件发生时, 由于思想上、组织上、行动上的“绿色通道”, 在弧群rabm、rbcn段以及各节点在时间效率上都有不同程度的提高, 物流时间会大大缩短;而在弧群rcdk段, 由于受到内外部扰动, 发生道路阻塞、中断以及修复等情况的概率较大, 因而会增加非常态的等待时间。由此应急物流时间由运输时间、节点作业时间和阻抗应对时间三部分组成, 即:

其中, t1rv (e) 、p1rv (e) 分别表示第v种运输方式在路段r的运输时间和运输任务份额, ;t2uv (e) 表示在第v种运输方式在第u个节点的作业时间, 其中第一个节点包含非常态物资组织延迟时间;t3h (e) 、p3h (e) 分别表示第h次阻抗应对时间和阻抗发生的概率。

定义3应急物流成本变化率φ (c) , 第三控制变量, 表示应急时的物流成本 (∑cA (e) ) 与常态物流成本 (∑cA (z) ) 相比的变化率。

应急物流成本主要由运输费用、中转费用和阻抗应对费用组成, 即

c1rv (e) 、p1rv (e) 分别表示第v种运输方式在路段r的运输费用和运输任务份额, ;c2uv (e) 、p2uv (e) 分别表示在第v种运输方式在节点u的中转费用和承担的费用份额;c3h (e) 、p3h (e) 分别表示第h次阻抗应对费用和阻抗发生概率。运输、中转费用与流量相关, 运输费用主要包括基本运费 (如公路、铁路、航空的基本运价) 和里程运费 (与路段长度、货物重量、燃油、人工和损耗等相关的费用) 。

定义4应急物流能力l, 系统状态变量, 是指突发事件发生后, 应急物流能力系统面向救援点在物资大流量需求、短时间需求和低成本需求上的满足程度。在外界各种扰动下, 控制变量发生不同程度变化时, 它是直接导致应急物流能力系统突变的变量。它的稳定与否是系统是否会发生突变的直接影响因素, 也可以说应急物流能力和应急物流能力系统是自变量和因变量的关系。它的微小摄动可能导致系统状态的完全变化, 即突变。由于各个控制变量变化方向和程度的不一致, 从而带来状态变量不断变化, 进而引起能力系统在强、弱二个稳定态和介于强弱之间的多个不稳定态之间发生变化。

2.3 应急物流能力系统突变模型

根据突变理论和本文研究对象特点, 以应急物流能力为状态变量, 以流量变化率、时间变化率和成本变化率为控制变量, 构造应急物流能力系统的燕尾突变模型势函数:

其中:l为应急物流能力, φ (q) 为流量变化率, φ (t) 为时间变化率, φ (c) 为成本变化率。

由f′ (l) =0得到其平衡曲面方程:

再由f″ (l) =0得奇点集方程为:

3 应急物流能力系统突变奇点及其稳定性讨论

3.1 应急物流能力系统分岐曲线图和势函数曲线图

式 (8) 、式 (9) 联立, 消去l, 可得燕尾模型的分岐点集:

应急物流能力系统的分岐点集为多维空间 (φ (q) , φ (t) , φ (c) ) 中的一个空间曲面, 曲面上的点就是可能导致应急物流能力系统发生突变的奇点。燕尾模型的分岐点集曲面在φ (q) >0和φ (q) ≤0时的φ (t) -φ (c) 截面曲线图像不同。根据本研究对象的特点, 当φ (q) >0即已100%满足需求, 所以仅对φ (q) ≤0时的情况作探讨。当其他控制参数保持不变, φ (q) 趋向于0的过程就是应急物流能力增强的过程。借助式 (8) 、式 (9) 和式 (10) , 作出φ (q) ≤0时的分岐曲线图 (见图2) , 其中小图为相应的势函数空间曲线图。曲线将势函数空间曲面划分为不同的区域, 不同区域截线形状不同, 极值点个数不同, 势函数性质不同, 应急物流能力系统的稳定状态存在差异。

3.2 φ (q) ≤0时应急物流能力系统突变临界点及其稳定性

由燕尾突变分岐点集的对称性特征, 保持控制因子φ (q) 为常数, 讨论φ (t) -φ (c) 平面在φ (q) ≤0时的区域分割情况。由于分岐点集是平衡位置的个数和性质改变的界线, 只需找一个点作代表就可以了[14,15]。考虑满足“应急”时间需求, 即φ (t) =0时的情形, 由式 (8) 求出平衡曲面的解为:

其中, Δ=9φ2 (q) -20φ (c) , 后同。将式 (11) 代入式 (9) , 得:

当f″ (l) >0时, 则应急物流能力系统的势函数有极小值点l, 是稳点奇点, 应急物流能力系统处于某一稳定状态, 不会发生突变;当f″ (l) <0时, 则系统的势函数有极大值点l, 是不稳点奇点, 应急物流能力系统处于某一不稳定状态, 会发生突变;当f″ (l) =0时, 则系统的势函数只有拐点, 不会发生突变。根据式 (9) 、式 (10) 、式 (11) 、式 (12) 和图2分析可知, 当φ (t) =0时系统有三种状态:

状态1:当φ (q) ≤0且时, 系统势函数无奇点, 应急物流能力系统处于稳定状态, 不会向其他状态突变。

状态2:当φ (q) ≤0且时, 系统势函数有4个奇点:, 其中:为不稳定奇点, 会导致应急物流能力系统向其他状态发生突变。

状态3:当φ (q) ≤0且φ (c) ≤0时, 系统势函数有2个奇点, 同样不稳定的奇点 (负解) 会使得应急物流能力系统状态发生突变。

从以上状态可知, 区域中不稳定歧点越多系统越活跃, 越容易发生突变。当φ (t) =0时, 系统在状态2或状态3时都存在不稳定的奇点, 当不稳定奇点越过分岐点集时, 系统就会发生突变, 要么从一个稳定状态变到另一个稳定状态 (如从状态2到状态3或状态3到状态2) , 要么稳定状态消失 (如从状态2到状态1或状态3到状态1) 。

4 应急物流能力系统控制与优化

突变模型中, 势函数越大代表应急物流能力系统性能越强。但根据Maxwell约定, 势函数达到极大值后会向一个极小值点方向迅速移动, 直至分岐集另一区域中平衡稳定, 即系统发生突变。此时, 必须借助外力作用, 势函数方能再向极大值方向移动。或者在势函数极大值时改变控制变量, 稳定控制点在极大值点附近活动, 只要控制点不越过分岐集, 系统就不会发生突变。由于系统有多个控制变量, 且控制方向不一致, 导致系统的变化趋势复杂而不确定, 如遇路段阻塞, 控制流量可以重新获得物流流量, 但降低了供给;如遇路段阻断, 则需借助大物流设施设备等令其重新通行, 增加了流量, 减少了等待时间, 但提高了成本。突变模型给我们提供了系统状态和变化方向, 而对控制参数的控制可以使得系统始终向良好状态发展。控制变量控制方向不一致, 很难找到一组解使得多目标中每个目标达到最优。借助Pareto最优思想, 建立非线性规划控制模型求解非劣解:

模型表示保持控制点在分岐点集相应区域内时, 力求系统势函数最大。通过对相应分岐点集的控制点进行管控, 以达到应急物流能力系统的高性能保持。突发事件发生后, 应急物流能力系统面向救援点物资大流量需求、短时间需求和低成本需求, 力求三者平衡提升, 以获得最大的应急物流能力, 达到最好的救援效果。也就是说, 当φ (q) 向正方向变化, φ (t) 、φ (c) 向负方向变化的过程, 也是应急物流能力系统趋于强能力的过程。因此本文将模型转化为以φ (t) =0 (进行应急时间管理, 满足应急时间需求) 时系统的最大流量和最小成本为目标的非线性规划模型:

式 (15) 为目标函数, 求解最大应急流量、最小应急成本;式 (16) 和式 (17) 为流量 (供应量) 约束, 中转节点的流入量与流出量需相等, 还要满足路段弧容量的限制;式 (18) 为流量变化率和成本变化率的平衡约束 (由式 (10) φ (t) =0时得到) , 式 (19) 为时间约束, 式 (20) 为非负约束。

5 仿真算例分析

5.1 仿真算例设计

南方某地区发生7.0级地震。灾害发生后, 受灾严重的d1、d2、d3、d4四个城市对应急物资的需求量 (折合平均) 至少为250t (t表示吨, 后同) 。根据四个城市的物资需求和外援城市物资供应情况, 决定从a1、a2二个周边城市调运物资900t, 从西北城市a3调运物资80t, 从东北城市a4空运紧缺物资20t.根据灾情, 救援物资需在12~16h (h表示小时, 后同) 内到达救援点, 时间越短救援效果越好。结合某物流公司的运行数据和本案例情况分析, 物流常态下从四个供应点到四个需求点的总运输成本约为20万元, 路段单位运输成本为2.5元/5t·km (t·km表示吨·公里, 后同) 。图3为从四个供应点城市到救援点的拓扑图, S、T为虚拟节点, 表示供应点集和需求点集, 不发生流量、时间和成本。表1为各路段、节点相关流量、时间和费用数据。根据物流公司经验, 对于时速为60km/h、100km/h、40km/h的路段, 路段应急通行能力 (应急通行能力=常态通行能力-常态流量) 分别300v/h、500v/h、200v/h (v/h表示辆/小时, 后同) 。应急时, 节点平均服务能力为10v/h.救援车采用标准5t车型, 假设满载。

5.2 运算结果分析

本文考虑单边时间窗tw (e) 分别为12h、13h、14h、15h、16h时的流量变化和成本变化情况。当φ (t) =0时, 根据式 (1) 、式 (2) 、式 (3) 、式 (4) 、式 (5) 、式 (6) 、式 (15) 、式 (16) 、式 (17) 、式 (18) 、式 (19) 、式 (20) , 各项运算结果见表2所示。

注:max∑q (s) 的单位为t, min∑c (e) 的单位为元。αi为阻抗应对时间减少率。

①从表2左6列可以看出, 单边时间窗tw (e) 为12h、13h、14h时, 系统很活跃、势函数很不稳定, 皆有两个不稳定奇点。随着φ (q) 由负值向0方向的变化、φ (c) 由正值向0方向的变化, 在14h向15h过渡的过程中系统发生突变, 系统由四奇点的稳定态转变为二奇点的稳定态, φ (c) 由正值变为负值。从φ (q) 、φ (c) 的变化情况来看, 在12h到13h变化过程中变化幅度较大, 但控制点未越过临界点, 因此系统性质未发生变化, 但这个阶段的变化推动了后面阶段的突变。

②根据表2右4列数据可以看出, 通过时间管理, 当阻抗应对平均时间缩短10%、30%、50%后, 不同时间窗内∑q (s) 和∑c (e) 的值会发生不同程度的变化, 相应地控制点会发生变化。由表中数据可以看出, 12h内的流量相比于管控前188t有小幅度下降, 分别为181t、169t、156t.但在12~13h阶段, 流量分别获得765t、875t和984t, 较1h前提高了321.90%、417.91%、529.32%, 而管控前的提高率为278.19%, 说明在时间管理初期应急物流能力效果不明显甚至倒退, 但在后期提升很快。从供应量满足率突变情况来看, 当α1=0.1时, 流量在16小时内全部满足;当α1=0.3时, 流量在15h内全部满足;当α1=0.5时, 流量在14h内全部满足。从成本变化来看, 时间管控程度越高, 成本越高。阻抗应对平均时间缩短10%、30%时, 流量变化率大于成本变化率, 而缩短50%时后者远大于前者。就类似本案例情况, 当时间窗是13h且φ (t) =0, 流量变化率得到较大幅度提升, 而成本变化率却没有大幅提升是较理想的状态。

③流量和时间的满足程度是衡量应急物流能力最重要指标。本案例中, 相比于常态物流, 应急物流时间增加主要在于非常态供应始节点的物资组织时间延迟和路段rcd的应对阻抗。承担90%物资供应任务的周边城市尽管路途不长, 但因物资流量大, 货源组织的难度和路途遇阻风险使其物流时间较长。运算表明, 当φ (q) =0, 即流量与最低需求量相等, 物资到达救援点的平均时间为14.28h, 此时φ (t) =0.262, φ (c) =-0.021, 属状态3, 有2个奇点 (±0.805) , 不稳定奇点使得系统状态可能发生突变。如果加强外力作用, 在φ (q) =0条件下能够缩短应急时间, 成本持平或下降;或者在tw (e) 保持不变、φ (t) =0的条件下, 能够增加流量、成本持平或下降, 皆可表明应急物流能力在不断提升。

6 结论与建议

本文运用燕尾突变理论, 以应急物流能力为状态变量, 物流流量变化率、时间变化率和成本变化率为控制变量, 建立应急物流能力系统突变模型, 构建系统势函数并确定了系统平衡曲面、奇点集和分岐点集, 讨论了应急物流能力系统在时间需求满足状态的突变临界点及其稳定性, 在此基础上提出应急物流能力控制模型, 并用算例对模型作了验证。通过研究得出以下三点结论:①如果能通过调查及实测可以获得三个控制变量的相关数据, 就可以确定控制点的奇点集和分歧点集, 分析系统在分岐点集各区域的奇点个数和性质, 进而确定系统当前状态的稳定性和突变趋势, 以采取相应的管控措施。②根据应急物流需求的特点、不同时段的主要目标、控制变量的性质和外力作用程度对相关控制变量进行有效管理, 将对应急物流能力的瞬时提升起到非常明显的作用与效果。③应急物流能力系统的稳定与提升是系统工程, 鉴于各控制要素在管控中活动方向的相背情况, 借助Pareto思想对主要要素进行控制, 求解非劣解, 在获得时间效益、流量效益的同时力求成本效益是可行思路。由于灾害事件中信息收集难度较大, 本文仅运用简单算例分析验证模型的可行性, 如何对模型作进一步修正以解决更多更复杂的实例将是下一步研究方向。

摘要：运用燕尾突变理论, 以应急物流能力为状态变量, 应急物流流量变化率、时间变化率和成本变化率为控制变量, 建立应急物流能力系统突变模型, 建立系统势函数确定平衡曲面、奇点集和分岐点集, 讨论应急物流能力的突变临界点及稳定性, 在此基础上建立非线性规划模型以控制和提升应急物流能力, 并用仿真算例分析验证模型应用的可行性。通过研究本文得出三点结论:通过调查及实测可以获得三个控制变量的相关数据, 确定系统的奇点集和分歧点集, 进而确定系统当前状态的稳定性和突变趋势;根据应急物流需求的特点、控制变量的性质和外力作用程度对相关控制变量进行有效管理, 将对应急物流能力的瞬时提升起到非常明显的作用与效果;应急物流能力系统的稳定与提升是系统工程, 鉴于各控制要素在管控中活动方向有背离情况, 借助Pareto思想对主要要素进行控制, 可获得时间效益、流量效益和成本效益的相对平衡的非劣解。

体育教学环境突变与应对策略 篇9

营造和设置适宜的教学环境是完成教学任务的重要途径。在体育教学中, 如何在各种突变的教学环境下完成教学任务呢?

一、实例叙述

教学背景:操场上堆满了厚厚的积雪, 原定的教学计划无法执行, 只好拿出学期初准备的备用教材—《侧向投掷雪球》。

教学过程:体育委员整队后, 教师问学生:“同学们, 面对操场上厚厚的积雪你们最想干什么啊?”学生纷纷回答:“堆雪人、打雪仗。”教师接着说:“那我们选择打雪仗, 如何?”学生们高兴地点着头。“同学们, 老师有一个疑问, 需要你们带着这个疑问去打雪仗, 请大家想想看, 怎样才能将雪球掷得更远, 打得更准呢?体育委员与同学们一起商讨如何分组和游戏规则后, 就开始游戏吧!”

在体育委员的带领下, 2名学生为一组合作握雪球, 每组大约握了20个, 学生们进行了3个击打目标的游戏。第1个游戏:先打固定目标—以操场周围的树木或足球墙上的标记为目标。

第2个游戏:在地上划有近、中、远的三条线, 先在离目标稍近的距离击打目标, 击中目标后, 再到中间线上击打目标, 击中目标后, 再到最远的线上击打目标, 最后请大家自由选择一个适合自己的位置击打固定目标;第3个游戏:在教师的提醒下, 进行击打“活动目标”游戏, 即将A组学生中的其中两名学生作为“活动目标”, 当“活动目标”从操场的东侧向西侧跑出时, B组学生立刻开始用雪球击打A组的“活动目标”, 规则是只能击打“活动目标”的头部以下部位。

二、实例分析

在上述环境因素变化时, 教师没有将学生带回教室进行理论课学习, 而是充分利用变化的环境, 让学生利用环境之变兴高采烈地体验了一节“侧向投掷雪球”课。在教学环境突变的状态下完成教学是对一名教师的考验, 如何变被动为主动更是一种能力, 教学环境的突变可通过采取相应的方法与措施进行“补救”, 只要策略得当完全能化解危机。

三、策略与建议

1.要有应变能力与良好的心理素质

一旦出现教学环境突变, 首先要分清教学环境突变的原因, 是自然因素还是人为因素?哪些是我们能改变的?哪些是我们改变不了的?如, 气候、季节等因素是不可能改变的, 但学生的情绪波动、注意力的分散与集中等是可以改变的。只有找到问题的关键才能采取应对策略和手段。其次, 教学环境突变时先暂停正在进行的工作, 然后快速反应, 采取应对措施, 从而化被动为主动, 见招拆招。

2.制订教学预案

体育教师要在学期初制订出一些应对意外情况的教学预案。如, 天气突变, 遇到雨天、雪天、霾天、暑天等应准备怎样的应对措施呢?以北方为例:雪天可进行雪地足球赛、雪地“橄榄球”赛、越野跑、速度滑冰等冰雪活动;雾霾天可在室内以微课形式进行教学或到体育馆进行乒乓球、羽毛球、技巧类教学等;暑天采用练习密度小、活动量小、强度较弱的内容。

3.了解校情、班情

对于本校所处地理位置、教学硬件设施、器材配备等体育教师应做到心中有数, 哪些器材用了多久, 有什么问题, 器材用在哪种教学中, 教学过程中学生会出现什么问题, 班级学生的身体情况如何, 班风学风如何等, 都是触发教学环境突变的重要因素。

4.了解教材、熟悉教法

对于本次教学的授课内容及教材的搭配, 各教学环节会出现何种问题?应采取何种教学策略?教师对此一定要有清醒的认识。同时在教学过程中, 教师的教法也要运用得当, 什么样的教学内容采用什么样的教学手段和方法, 因某种突发事件造成教学环境的突然转变该如何“补救”?这也要做到心中有数。如, 教师在讲解示范过程中突然示范失误, 教学该如何进行下去?学生不能按照预定的教学方法完成教学任务怎么办?这都需要体育教师及时做出清醒的判断, 并能在教学实施过程中采取相应的解决措施。

5.优化教学模式

教师要精心钻研、敢于探索, 大胆尝试与信息技术学科整合。把授课内容制作成微课或课件, 同时还要把可预见的、易于突变的教学环境因素融入其中, 利用平板电脑或大屏幕智能手机等多媒体进行讲解、示范;将丰富的图文画面、精彩的视频影音及教师精准的动作示范融合后展示给学生, 能更加吸引学生的注意力、激发学习兴趣。学生们学习方式也更开阔、更直观了。这样做, 既优化了课堂教学环境, 同时也创新了教学模式, 也可避免各教学环节的疏漏。

接地电阻突变电流监测装置的应用 篇10

由于中性点经电阻接地方式在我国使用时间不长, 正常运行时接地电阻不承受系统电压, 所以对接地电阻的运行工况控制一直未得到重视。目前, 国内对接地电阻运行工况的研究主要集中在理论分析上, 对接地电阻故障监测装置应用和运行情况的讨论较少。

1 接地电阻监测装置

目前, 上海市区供电公司在所属变电站中加装的中性点接地电阻监测装置为ZDT中性点电阻突变电流测录仪。该测录仪通过对流经中性点电阻的电流及中心点电压进行采样, 以测录接地电阻的工作状况并监测用电网络的三相平衡度及各相对地的故障情况, 保证接地电阻运行状态良好。仪表记录下的数据, 能捕捉和分析系统的异常运行状态。

中性点电阻突变电流测录系统是由安装在现场的测录仪表实现数据测录、存储, 通过多种方式进行数据采集并传输到上位计算机, 由计算机管理软件进行数据的分类、存储、共享, 运行和管理人员可随时查询, 可选取需要的数据进行报表输出和曲线打印。数据采集可以采用RS232、RS485以及GSM无线通讯等多种方式。

1.1 中性点接地电阻监测装置的特点

(1) 采用先进的DSP内核的测量芯片, 保证了电流有效值及瞬时最大值、电压有效值的测量精度, 使各数据的校正、转换、计算和存储在很宽的测量工作范围内可以满足仪器测量的各项技术要求。

(2) 仪表的输入端采用非晶态合金材料绕制而成的专用电流互感器和电压互感器, 保证了输入信号的精度和线性度。

(3) 采用自诊断和自修正技术, 能在较差的工作环境下, 保证其测量精确度和稳定性。

(4) 数据存储采用了串行E2PROM芯片, 可靠性高、功耗小。无需后备电池, 失电时亦可保持数据。

(5) 监测仪表整机不用任何电位器或可调元件, 避免了因可调元件的数值改变而引起误差。仪表的校准和设定工作都是通过软件来完成的。

(6) 抄表方式具有多种通讯形式, 可采用RS232、RS485以及GSM无线通讯方式。

(7) 系统软件可对大量的采集数据进行储存、分析等各类处理, 操作简便, 用户界面良好, 功能完善。

1.2 中性点接地电阻监测系统的构成

ZDT中性点电阻突变电流测录装置通过对流经中性点电阻的电流采样 (也可对零序电压采样) , 监测接地电阻的工作状态、各相对地的故障情况, 保证接地电阻运行状态正常。通过零序电流 (也可通过零序电压) 启动仪表记录数据, 有利于捕捉和分析系统的异常情况。根据接地故障对中性点接地电阻的影响, 记录通过电阻的最大电流以及持续时间, 并能结合变电站自动化装置, 实现报警。图1为ZDT装置系统硬件构成框图。

整个系统在时钟同步信号的协调下高速运转, 特别是对电流信号不间断地以4000点/秒的速率进行采样, 保证了对异常信号的捕捉、采样, 足以构画电流的波形曲线;但为了节约时间也节约存储空间, 所以只对交流电流的最大值进行校正运算并存储, 存储数据所能构画的是异常电流的包络线, 这些数据已完全能够作出对异常电流的分析与判断。在对接地电流进行监测的同时, 对中心点接地系统的零序电压, 也进行了监测, 以便一旦发生接地异常或故障时, 可通过对电流、电压的综合分析, 得出对故障异常的正确判断。

2 中性点接地电阻监测装置运行情况分析

2005年10月, 上海市电力公司市区供电公司完成了2台样机的试制和性能测试, 随后在卢湾站等变电站的变压器10k V侧接地电阻上加装ZDT中性点电阻突变电流测录装置, 按照相关运行要求, 制定如下规定:

(1) 小电流检测装置定值设置:120A有效值 (一次电流) , 持续5s动作发信或小于5s累计9次动作发信。

(2) 日常巡视应检查外观无异常, 检查装置面板电流显示值应不大于30A, 并与主变10k V零流继电器面板显示读数校对相符。

(3) 日常检验周期暂以配合检验为主。

(4) 当装置动作后, 当值调度员应立即通知中心站到现场检查。现场检查仍有较大接地电流 (其值大于100A且与主变10k V零流继电器面板显示读数校对相符) , 应进行接地试拉处理, 接地试拉可参考出线保护的零流读数。处理后次日继保班应调出装置内部记录。

通过多个监测点的数据可发现, 接地电阻上监测到的电流都是大电流短时间和小电流长时间通过, 常规零流保护无法动作, 但此时接地电阻的动热稳定性会受到很大的影响, 严重的可能会导致接地电阻损坏。因此, 调度运行人员必须根据监测装置的记录结果及时采取相应措施, 防止事故的扩大化。现以卢湾变电站的中性点接地电阻监测数据为例进行说明。

2.1 对超限电流的监测和动作情况

卢湾变电站2010年1月的ZDT监测数据显示, 1月4日监测到最大电流为747.4A, 最大瞬时电流为1093A。根据电流发生及失去事件, 22:10:17电流发生1.4A, 瞬时电流为3A, 6s后电流失去, 根据规定此时监测装置不发信号;在22:10:25时再次有突变电流发生, 22:10:36时ZDT监测装置报警输出。根据运行规定, ZDT装置记录的瞬时电流超限过程曲线图, 当大于120A的一次瞬时电流出现累计满9次时, 装置发出报警信号, 通知调度人员接地电阻上有突变电流情况, 有效地监测到小电流接地故障的发生。

2.2 对长时间小电流的监测

由卢湾变电站2009年11月的监测数据可知, 接地电阻在3日、4日和12日多个时段流过1A左右的小电流, 该电流长期存在, 但小于间接性保护的整定电流, 因此无法触发继电保护装置动作。ZDT装置对该间歇性小电流的发生和失去进行记录, 运行人员可根据事件记录对设备采取检测和故障排查。同时, 长时间的小电流要触发间隙性接地保护, 其二次电流出现间隙必须小于整定要求, 通常为1s;若间隙大于整定值时就重新开始累计, 这种长期出现的小电流会使接地电阻发热。针对该情况, ZDT监测装置在记录突变电流时累计一定时限内的电流发生次数, 当累计次数满足规定要求时即可报警, 防止上述异常情况的继续发展。

2.3 对短时间大电流的监测

由卢湾变电站2009年9月的监测数据可知, 17日14:05:04流经接地电阻的最大电流为228.8A, 持续时间仅为1s, 达不到定时限零流的动作时限, 因此不触发继电保护装置动作。运行人员可根据ZDT装置事件记录及时发现流经接地电阻时间极短的大电流, 有效监测了接地电阻的运行工况。

3 结束语

远离老年抑郁，警惕性情突变 篇11

如果一个平常性格开朗的人，突然变得回避人群、少言寡语，常常独自哭泣，甚至说自己犯了大罪对不起众人，而他所说的罪责在旁人看来不过是鸡毛蒜皮或陈年旧事，这种情况往往需要警惕，并及时就医，否则容易被忽视而错过治疗时机。

在排除了躯体疾病引起的抑郁综合征的情况下，老年人常常会产生一些异常的表现：

1.痴呆

引起痴呆的原因主要有：脑动脉硬化和脑严重萎缩。老年人的近期记忆能力衰退是正常的，但是有的老年人则表现为高度健忘。例如，刚放下的东西就忘记放在哪里；刚吃过饭就忘了吃了些什么；更有甚者连自己的年龄、自己爱人、孩子的姓名都忘记了。

2.抑郁

是老年人较常见的一种精神异常。表现为情绪沮丧、孤单寂寞、思维迟钝。这种老年人，对一切事物都不感兴趣，什么都不想干，经常自寻烦恼，甚至绝望自杀。老年人的这种抑郁状态常伴随失眠、食欲不振、体重下降等症状。

3.猜疑

猜疑心重是老年人较常见的一种精神异常。与本人毫不相干的言行他们疑为是针对自己的。猜疑心重对老年人身心健康很不利，他们整天疑神疑鬼，认为受到了别人的冷落挖苦，从而闷闷不乐。

4.幻觉与妄想

也是老年人的一种精神异常。老年人的幻觉以幻视与幻听为多见，也有发生幻嗅、幻味、幻触等。例如有的老年人说看到了鬼神，听到故去亲人的呼叫等。

5.身体各部位不适

胃肠道系统不适，如腹胀腹泻、厌食恶心等；心血管系统不适，如心慌、憋气、胸闷等；运动系统不适，如腰背痛、头痛、全身痛等；植物神经系统不适，如全身忽冷忽热、出汗等。

6.紧张恐惧焦虑

如担心自己的钱不够花、子女不能照顾自己、自己做不了家务了、家人会出意外等，这些在他人看来没有必要的担心，患者却因此而整天坐卧不宁、茶不思饭不想，甚至有不吃不喝、自杀自伤、冲动伤人等倾向。

7.记忆力减退、智能下降

患者往往觉得自己脑子变慢了，什么也记不住。不同于老年痴呆的是，患者能够认识到自己存在记忆力、智能方面的问题，而且随着抑郁症状缓解，记忆力、智能能逐渐恢复。

8.想法荒谬，过度担忧

可以出现旁人无法理解的荒谬想法，如认为自己肠子腐烂了，已病入膏盲，或是自己变成穷光蛋了、自己犯了滔天大罪等怪诞的想法。

9.发现抑郁苗头，及时就诊

老年抑郁症患者由于大部分有生活上的不如意事件作为发病诱因，如果缺乏及时、有效的治疗，容易导致抑郁症慢性化。

如果发现家中老人有类似表现，一定要带老人前往专科医院就医。目前有多种安全有效的药物可治疗抑郁症，但需要专业人员就用药选择、治疗周期等进行指导。

中药浮海石致突变的实验研究 篇12

但目前还没有人对其致突变性进行研究, 对此我们在山东省医科院药物研究所的帮助下进行了研究。以下是我们的结果:

1 浮海石鼠伤寒沙门菌回复突变试验 (Ames试验)

1.1 目的

体外观察浮海石能否诱发鼠伤寒沙门菌组氨酸营养缺陷型突变株的回复突变, 为评定海浮石是否具有致突变性提供依据。

1.2 受试样品

浮海石, 灰白色块状物, 由山东省诸城市中医院提供。称取1g浮海石用研钵将其研碎, 加入20mL生理盐水, 在4℃冰箱浸提24h, 制得浸提液20mL, 以此作为原液 (50μg/mL) 。

1.3 试验菌株

(1) 组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌侏:TA97、TA98、TA100、TA102, 由山东省劳动卫生职业病研究所提供。 (2) 增菌条件:四株菌株均在营养肉汤培养基中, 37℃水浴振荡培养10～12h, 振荡频率100次/分。 (3) 菌株鉴定:组氨酸需求试验 (his-) 、结晶紫敏感试验 (rfa) 、紫外线敏感试验 (uvrB) 、抗氨苄青霉素试验 (PKm 101) 、抗四环素试验 (PAQ1) 、已知诱变剂敏感试验, 均符合要求。

1.4 试验方法

采用平板掺入法, 培养48h后计算回变菌落数, 求得±SD。试验分为不加代谢活化系统 (-Sg) 和加代谢活化系统 (+Sg) 两组平行试验。共设5个剂量组, 即5000、500、50、5、0.5μg/皿, 每剂量组3只平皿, 重复1次。另设阴性对照 (生理盐水) 、二甲基亚砜 (DMSO) 对照及阳性对照 (阳性对照物为疟的平、正定霉素、叠氮钠、丝裂霉素C和2-氨基芴) 组。

1.5 试验结果

结果数据说明, 各菌株的阴性对照自然回复菌落数的两倍以上, 判为阳性。而受试物浮海石各剂量组不加和加代谢活化系统两组平行试验的回复菌落数均未超过自然回变菌落数的两倍, 故本试验判为阴性结。

2 浮海石染色体畸变试验

2.1 目的

体外观察浮海石能否诱发中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL) 染色体畸变, 以评价其对染色体的损伤作用, 为评定浮海石是否具有致突变性提供依据。

2.2 受试物

(1) 名称:浮海石, 灰白色块状物。4℃条件下用生理盐水浸提24h, 经离心过滤后制成2000mg/mL的浸提液备用。 (2) 提供单位:山东省诸城中医医院。

2.3 细胞

CHL细胞, 中国仓鼠肺成纤维细胞。由中国医学科学院药物所提供。

2.4 培养液

RPMI1640完全培养基, 含20%小牛血清。

2.5 方法

(1) 半数细胞生长抑制率 (IC50) 的测定:将生长良好的CLH细胞洗涤、消化后, 制成单细胞悬液, 接种于96孔板中, 1×104个/0.1mL孔, 置37℃、5%CO2中培养。24h后加入用RPMI1640, 稀释的浮海石浸提液, 每孔加药容积为0.1mL, 使其终浓度分别为:1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6、7.8μg/mL。并设空白对照, 每个浓度设4孔, 继续培养48h。于培养结束前4h加入MTT染液, 用DMSO终止反应, 于酶标仪570nm处测各孔A值。计算出不同浓度药物对CHL细胞的生长抑制率 (%) , 求出IC50值。 (2) 染色体畸变试验:由于未测出IC50值, 故以1000μg/mL为高剂量、500μg/mL为中剂量、250μg mL为小剂量组, 再设定MMC (不加肝微粒体酶代谢系统-Sg) 及CTX (加肝微粒代酶代谢系统+Sg) 为阳性对照组。将生长良好的CHL细胞制成单细胞悬液, 接种于培养瓶中, 4×104个细胞/5mL/瓶, 共44瓶, —Sg20瓶, +Sg24瓶, 于37℃、5%CO2中培养72h后分别加入RPMI1640稀释的浮海石浸提液, 使其终浓度分别为1000、500、250μg/mL。 (+Sg组同时加入Sg混合液0.05mL, 并于加药后6h洗去药液) , 继续培养24或48h后收集细胞, 常规制染色体片。在油镜下每个剂量观察100个中期分裂相细胞中染色体结构异常及多倍体出现情况, 计算出染色体畸变细胞率 (%) 。

2.6 CHL系统畸变结果判定

畸变率<5%, 阴性 (—) ;畸变率>5%, 可疑 (±) ;畸变率>10%, 阳性 (+) ;畸变率>10%, 阳性 (+) ;畸变率>10%, 阳性 (++) ;畸变率>10%, 阳性 (+++) 。

2.7 结果

(1) 半数细胞生长抑制率 (IC50) 的测定:MTT法未测得浮海石浸提液对CHL细胞的IC50。 (2) 染色体畸变试验:在加或不加肝微粒体酶代谢系统情况下给药24或48h, 浮海石对CHL细胞染色体畸变率均<5%。

2.8 结论

浮海石染色体畸变试验结果为阴性。

3 浮海石小鼠微核试验:

3.1 目的

观察浮海石能否在动物体内诱发染色体畸变, 为评价其致突变性提供依据。

3.2 受试物

(1) 名称:浮海石, 灰白色块状物, 使用时, 称取浮海石50g, 研碎后加60mL生理盐水, 4℃条件下用生理盐水浸提24h, 离心制成不同浓度浸提液备用。 (2) 提供单位:山东省诸城市中医院

3.3 对照品

空白对照为生理盐水, 阳性对照为环磷酰胺。

3.4 动物

昆明种小鼠。 (1) 来源:山东医科大学实验动物中心, 鲁动质字960102。 (2) 体质量: (25±1) g。 (3) 性别:雌雄各半。 (4) 动物数:50只。 (5) 实验室温度: (25±1) ℃。

3.5 剂量

0.5mL。

3.6 途径

灌胃给药。

3.7 方法

取健康小鼠50只, 分为5组:浮海石浸提液40、20、10g/kg (经预试末测出LD50) 三个剂量组, 生理盐水对照组及环磷酰胺 (40mg kg) 组, 每组10只。各剂量组及生理盐水对照组灌胃给药, 环磷酰胺组腹腔注射给药, 容积均为0.5mL/鼠。给药24h后颈脱臼处死动物, 取双侧股骨骨髓, 小牛血清冲洗后, 离心5min, 弃上清, 将沉淀物吹成混悬液制片, 固定并染色。每只动物的微核细胞数, 观察其微核出现的频度及嗜多染红细胞和正常红细胞的比率 (P/N) , 微核细胞数以千分率表示。

3.8 结果

数据表明浮海石三个剂量组微核细胞率与生理盐水组比较无明显差异。环磷酰胺组与生理盐水组比较差异明显。

3.9 结论

浮海石微核试验结果阴性。

参考文献

[1]江苏新医学院.中药大辞典[S].上海:上海人民出版社, 1977:1943.

[2]杨松年.中国矿物药图鉴[S].上海:上海科学技术文献出版社, 1990:9.

[3]张贞丽, 武继彪, 程立方, 等.中药小海浮石化学成分与镇咳作用的研究[J].中国海洋药物, 1995, 14 (4) :17-20.