金银花中绿原酸研究

2024-09-25

金银花中绿原酸研究（共9篇）

金银花中绿原酸研究篇1

摘要：目的:比较提取金银花中绿原酸不同工艺的提取效果。对提取优化工艺进行选择。方法:比较对金银花中绿原酸进行提取的不同工艺, 采用高效液相色谱法对提取液中的绿原酸的含量进行测定。结果:使用高效液相色谱法对绿原酸提含量进行测定, 方法精确度高、重复性好、回收率高, 可用于对金银花提取物中绿原酸的含量检测;通过不同提取工艺对绿原酸的提取物中绿原酸含量的测定, 发现使用酸醇回流提取法提取的绿原酸含量最高, 因此确定该工艺为最佳绿原酸提取工艺。结论:对金银花中绿原酸进行提取工艺比较、优化, 可有提高生产质量和效率。

关键词：金银花,绿原酸,提取工艺,优化研究

金银花中最重要的化学成分就是绿原酸[1]。本文比较对金银花中绿原酸进行提取的不同工艺, 采用高效液相色谱法对提取液中的绿原酸的含量进行测定。现报告如下:

1 材料与方法

1.1 材料

中药金银花, 绿原酸对照品, 用于分析的试剂是分析纯试剂, 蒸馏水;用于高效液相法的试剂是色谱纯, 超纯水;高效液相色谱仪 (Agilent 1100) :四元梯度泵、真空脱气机、二极管陈列检验器、自动进样器、色谱工作站。

1.2 方法

1.2.1 绿原酸含量测定

1.2.1. 1 色谱条件。

使用高效液相色谱法, 色谱条件:色谱柱 (3.9mm*200mm, 10μm) , 柱温为25℃, 流动相为甲醇 (23) -磷酸盐缓冲液 (77) , 流速为1.0ml/min, 检测波长为254nm[2]。

1.2.1. 2 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品1mg, 放置在

1ml量瓶中, 加如甲醇进行溶解后, 定容, 制成1.0mg/ml的溶液, 即得。

1.2.1. 3 供试品溶液制备。精密称取100ml量瓶中金银花提取液

1ml, 放置在10ml的量瓶中, 加水到达刻度后摇匀, 使用滤纸进行过滤, 收集续滤液, 即得。

1.2.1. 4 线性关系考察。

精密称取对照品绿原酸溶液1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 L, 按照“色谱条件”下依次进样, 以色谱峰面积做为纵坐标 (Y) , 以绿原酸的进样量做为横坐标 (X) , 计算绿原酸的回归方程为Y=80613.15X-20869.16, r=0.996 9, 表明绿原酸在浓度1μg-12μg的范围内, 峰面积个浓度具有良好的线性关系。

1.2.1. 5 精密度的试验。进行精密吸取统一绿原酸供试品溶液

10 L, 在“色谱条件”下, 连续进样5次, 测定绿原酸的峰面积, 结果平均峰面积为475682, RSD=1.32%, 表示该方法检测绿原酸的含量精密度良好。

1.2.1. 6 回收率试验。

精密称取已知含量的样品1ml, 放置在10ml的量瓶中, 加入蒸馏水进行定容, 用滤纸进行过滤, 收集续滤液, 再精密移取续滤液100 L6份。分别加入2.3mg/ml的对照品溶液80 L两份, 90 L两份, 100 L两份, 按“色谱条件”下进行测定, 测定绿原酸的量, 结果平均回收率为99.13%, RSD=0.91%, 表明该方法检测绿原酸的含量具有良好回收率。

1.2.2 绿原酸提取工艺

1.2.2. 1 水煎煮提取法[3]。

称取金银花粉末10g, 放置在250ml的烧瓶中, 加入120ml的蒸馏水, 在95℃的水浴下, 以100r/min的机械搅拌速度进行提取2小时, 过滤, 再加入80ml蒸馏水, 再以100r/min的机械搅拌速度进行提取2小时, 过滤。合并两次提取滤液, 用500ml容量瓶进行定容。

1.2.2. 2 索氏提取法。

称取金银花粉末10g, 使用索氏提取器进行6小时回流提取, 提取液为200ml6的75%乙醇溶液, 设定提取温度为80℃, 收集提取液用500ml容量瓶定容。

1.2.2. 3 乙醇回流提取法。

称取金银花粉末10g, 放置在250m的烧瓶中, 加入72%乙醇溶液100ml, 在80℃水浴下, 搅拌回流提取2小时, 过滤, 保留滤液, 滤渣再加72%乙醇溶液100ml, 在80℃水浴下, 搅拌回流提取2小时, 过滤, 保留滤液, 合并两次滤液进行水沉, 分离后用500ml容量瓶进行定容。

表1不同工艺对金银花中绿原酸提取效果比较

1.2.2. 4 酸醇回流提取法。参照“1.2.2.3乙醇回流提取法”, 将溶媒72%乙醇溶液的PH值调至4。

1.2.2. 5 减压沸腾提取法[4]。

称取金银花粉末10g, 放置在250ml的烧瓶中, 加入16ml的75%乙醇溶液, 在30℃下解吸30min, 将提取器移至70℃水浴中, 后快速加入180ml的沸腾蒸馏水, 并同时减压至-0.007Pa到0.006 Pa之间再提取5min, 过滤后保留滤液, 残渣再按上述方法进行提取一次, 合并滤液, 合并两次滤液进行水沉, 分离后用500ml容量瓶进行定容。

1.2.2. 6 超声乙醇回流提取法[5]。

称取金银花粉末10g, 放置在250ml的烧瓶中, 加入70%乙醇溶液60ml, 在70℃下进行超声解吸, 提取30min后过滤, 保留滤液, 滤渣再按照上述工艺进行一次提取, 合并两次滤液进行水沉, 分离后用500ml容量瓶进行定容。

2 结果

2.1 绿原酸含量测定

使用高效液相色谱法对绿原酸提含量进行测定, 方法精确度高、重复性好、回收率高, 可用于对金银花提取物中绿原酸的含量检测。

2.2 绿原酸提取工艺

通过不同提取工艺对绿原酸的提取物中绿原酸含量的测定, 发现使用酸醇回流提取法提取的绿原酸含量最高, 因此确定该工艺为最佳绿原酸提取工艺。 (详见表1)

3 讨论

中药金银花为忍冬科植物忍冬、华南忍冬、黄褐毛忍冬、菰腺忍冬等的干燥花蕾, 是临床常用的一种中药材, 具有清热解毒、疏散风热的功效。临床主要用于治疗痈肿、疔疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒和温病发热。比较提取金银花中绿原酸不同工艺的提取效果可以降低对金银花的浪费, 提高利用率, 通过研究显示, 使用酸醇回流提取法提取的绿原酸含量最高, 因此确定该工艺为最佳绿原酸提取工艺。

参考文献

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金银花中绿原酸研究篇2

关键词：毛细管区带电泳；杜仲叶；绿原酸；含量；变化规律

中图分类号： O657.8文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0279-03

收稿日期：2013-12-11

基金项目：河南省骨干教师资助项目（编号：2009GGJS-128）。

作者简介：张荷丽（1971—），女，河南安阳人，硕士，副教授，研究方向为分析化学。Tel：（0371）86176306；E-mail：zhangheli712@163.com。杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）中含有苯丙素类等40多种化合物，杜仲叶不仅与杜仲皮有大致相同的有效成分和药理作用[1-4]，而且来源更丰富，成本更低。绿原酸（chlorogenic acid）具有抗菌、消炎、解毒、利胆、降压等药理作用[5-6]，是多种药材和中成药的主要有效成分和质量控制的重要指标[7]。绿原酸的测定方法主要有紫外分光光度法[8-9]、薄层色谱扫描法[10-11]、高效液相色谱法[12-16]、流动注射化学发光分析法[17-18]等，这些方法存在干扰因素多、分析时间长、检测结果不稳定等缺点。高效毛细管电泳法（high performance capillary electrophoresis，HPCE）[19-21]具有分离效率高、分离速度快、重现性好等特点，已被广泛应用于中药材各类有效成分分析和中药复方制剂分析[22-23]。本研究应用毛细管区带电泳法（capillary zone electrophoresis，CZE）研究了河南省镇平县栽培的杜仲叶中绿原酸含量随生长期变化的规律。

1材料与方法

1.1仪器和试剂

HP3DCE毛细管电泳仪；8823-B紫外检测器；未涂层弹性石英毛细管（内径50 μm，柱长58 cm，有效长度50 cm），河北省永年县光导纤维厂；绿原酸标准品由中国药品生物制品检定所提供；内标物苯甲酸钠由北京化工厂生产；杜仲叶采摘自河南省镇平县杜仲种植基地；其他试剂均为分析纯。

1.2电泳条件

毛细管在每次使用前分别用0.1 mol/L NaOH溶液冲洗2 min，去离子水冲洗2 min，运行缓冲溶液冲洗3 min，以保证重现性。每5次进样后更换缓冲溶液。所有溶液在进样分析前用0.45 μm微孔滤膜过滤。

从电泳缓冲体系、缓冲体系pH值、缓冲液浓度、分离电压、进样时间等方面考察电泳条件。

1.3内标液的配制

精确称取0.100 0 g苯甲酸钠，加70%乙醇超声助溶后定容至100.0 mL容量瓶中。

1.4标准溶液的配制

精确称取绿原酸标准品（质量浓度>98%）适量，加70%乙醇溶解，配制标准样品贮备溶液。

1.5样品制备

精确称取0.500 0 g干燥研磨的杜仲叶样品，加70%乙醇，超声提取1 h，过滤，定容至50 mL。经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得样品贮备液。

1.6线性关系的考察

将一系列不同浓度的绿原酸标准品溶液（分取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL绿原酸标准样品贮备溶液于10 mL容量瓶内，加1.0 mL内标物，用70%乙醇超声助溶后定容），在优化的试验条件下进行CZE分析，每一溶液进样2次。以标准品浓度X（mg/mL）为横坐标，以标准品与内标物峰面积之比Y为纵坐标，绘制标准曲线。

1.7精密度考察

取标准品溶液3.0 mL于10 mL容量瓶中，加内标物 1.0 mL，用70%乙醇超声助溶后定容，进样测定，重复6次，测定标准品与内标物峰面积比。

1.8回收率试验

向杜仲叶样品提取液中准确加入绿原酸标准溶液 1.0 mL、内标物1.0 mL，在优化条件下测定。

1.9样品中绿原酸含量测定

分别称取不同采集日期的杜仲叶，按“1.3”节的方法制备样品溶液，加入内标液，按优化的电泳条件进样测定。

2结果与分析

2.1毛细管区带电泳条件的优化

毛细管电泳仪的运行条件：压力进样6 s；分离电压为 20 kV；毛细管温度为20 ℃；紫外检测波长为328 nm；运行缓冲溶液为20 mmol/L 硼砂-磷酸二氢钠（pH值=8.5）。

2.1.1缓冲体系的确定分别考察了硼砂、硼酸、磷酸氢二钠、硼砂-磷酸二氢钠等体系，其中硼砂-磷酸二氢钠体系出峰时间、峰形、分离效果均较理想（图1）。

2.1.2缓冲体系pH值的确定采用硼砂-磷酸二氢钠体系，考察了pH值在7.0～10.0范围内绿原酸分离情况。维持其他电泳条件不变，对pH值7.0、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0进行了考察。试验发现，当pH值在8.0～9.5 之间时，内标物与绿原酸分离效果较好；但当pH值>9.0 时，峰面积逐渐下降且迁移时间延长，不利于快速分离。综合考虑，选择缓冲液pH值为8.5，样品峰形和分离度均较好（图2）

。

2.1.3缓冲液浓度的确定采用pH值为8.5的硼砂-磷酸二氢钠缓冲体系，在不同硼砂浓度下进行分离。试验表明，随着缓冲溶液浓度的增大，样品的迁移时间延长，区带增宽，浓度达大影响分离效果；浓度太低时，缓冲容量小，不利于体系pH值的稳定（图3）。最终选择缓冲体系为20 mmol/L硼砂-磷酸二氢钠（pH值为8.5）。

nlc202309041401

2.1.4分离电压的确定采用pH值为8.5的20 mmol/L硼砂-磷酸二氢钠缓冲体系为运行缓冲液，分别考察了15、20、25、30 kV工作电压对分离的影响，结果表明，升高运行电压可以加快分析速度；但随着电场强度的增大，基线噪音升高，使分离度下降。有时由于电流过大，焦耳热大，还会引起缓冲溶液温度的升高。本試验选用20 kV作为分离电压，可保证良好峰形和较好分离度。

2.1.5进样时间的确定在进样时间分别为2、4、6、8、10 s时，测定峰高。结果表明，进样6 s后峰高增加幅度不大。进样时间延长，使得进样量太多，超出扩散控制的区带宽度，导致分离度下降，样品峰变宽；进样时间如果太短，会降低测定的精密度，因此本试验选择进样时间为6 s（图4）。

2.2线性关系的考察

试验结果表明，绿原酸浓度在0.03～0.15 mg/mL范围内线性关系良好。回归方程为：y=15.476x+0.025 7（r=0.999 4）。

2.3精密度的考察

精密度试验的RSD为1.1%，表明精密度良好。

2.4回收率试验

2.5样品中绿原酸含量测定

样品中绿原酸含量测定结果见表2。由表2可见，不同生长发育时期杜仲叶中化学成分的变化与叶片结构有着密切的关系。4月份叶片厚度最小，结构分化不明显，随着时间推移，叶片厚度增加，栅栏组织与海绵组织的比值逐渐增大，7月份达到最大。杜仲叶中绿原酸的含量与栅栏组织/海绵组织的比值关系密切。在4—7月份，绿原酸含量随叶片的生长发育而增加，最大值出现在生长最旺盛的6、7月份，最高可达32.14 mg/g，比年平均含量高出30.7%；随着叶片生长进入衰老阶段，绿原酸含量逐渐下降，到叶落时降到最低的 11.25 mg/g，比年平均含量低54.2%。

3结论

本研究应用毛细管区带电泳，建立了简单、灵敏、快速的CZE方法测定杜仲叶中绿原酸的含量。杜仲叶用70%乙醇超声提取，以苯甲酸钠为内标物，在以20 mmol/L pH值为85的硼砂-磷酸二氢钠缓冲体系作为运行缓冲液、分离电压为20 kV、压力进样为6 s、毛细管温度为20 ℃、紫外检测波长为328 nm的电泳条件下，测定方法的线性范围宽，可信度高。

测定结果表明，不同采摘时间杜仲叶中绿原酸含量差异显著。4月份至6月份绿原酸含量呈上升趋势，7月份至11月份绿原酸含量逐渐下降，其中6月份含量最高。本研究对杜仲叶的采收和有效利用提供了理论指导。

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金银花中绿原酸的萃取方法篇3

我们提供一种金银花中绿原酸的萃取方法, 以解决目前绿原酸提取物在去杂纯化过程中因沉淀量大而导致的过滤困难, 提高产品的纯度和得率;并且在提取金银花绿原酸的同时, 产生一系列附加值较高的产品, 更好的利用金银花的原料资源。

金银花中绿原酸的萃取方法, 其特征在于:将粉碎的金银花用石油醚进行动态浸提, 提取液经过滤回收石油醚后, 浓缩获得金银花香浸膏;石油醚浸提后的金银花, 再以乙酸乙酯进行回流提取, 提取液经过滤后回收乙酸乙酯, 浓缩获金银花总黄酮;乙酸乙酯回流提取后的金银花, 加水, 动态提取, 提取液经过滤、减压、浓缩、醇沉、脱色、纯化、浓缩、干燥, 即得金银花绿原酸。

本专利利用绿原酸不溶于石油醚, 而蜡质、脂溶性花青素、挥发油溶于石油醚的原理, 先期以石油醚和乙酸乙酯提取出金银花中、除绿原酸以外的附加值较高的副产品——金银花香浸膏和金银花总黄酮, 既避免了对金银花原料资源的浪费和损失, 同时, 也是对提取绿原酸的一个去杂纯化的过程, 减少了绿原酸水提液醇沉阶段的过滤困难;另外, 由于预先提取出了金银花中的大部分与绿原酸结构相似的黄酮和鞣质, 使后期大孔树脂对绿原酸液的处理量大为增加, 提高了产品纯度和得率。

联系人:苏小飞

地址:安徽省祁门“黄山药谷”生物科技有限公司

金银花中绿原酸研究篇4

关键词：四川省；金银花；种质；绿原酸

中图分类号： S567.7+90.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0311-02

收稿日期：2014-08-06

基金项目：国家大学生创新创业训练计划（编号：201310639001）；四川省科技厅应用基础研究计划（编号：2013JY0078）；四川省生态安全与保护重点实验室开放基金（编号：ZDS 1008）。

作者简介：罗明华（1964—），男，四川眉山人，博士，教授，主要从事药用植物与中药资源的开发利用研究。E-mail：969826049@qq.com。金银花（Flos Lonicerae）为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾，具有清热解毒、凉散风热之功效，用于治疗外感风热或温病初起、热毒下痢、肺热咳嗽等[1]。在我国，作为中药金银花流通及使用的品种非常复杂[2-3]。四川省地处中国西南地区，为我国金银花的主要产区之一，四川省南江县的金银花曾经闻名全国，但经鉴定为细毡毛忍冬[4]。2005年版和2010年版《中华人民共和国药典》（以下简称《药典》）中将金银花和山银花作为2个品种[1，5]分别收载后，对四川省金银花的栽培影响很大。由于主要栽培品种不是《药典》收载品种，四川省金银花的市场销售情况并不好，导致价格低，栽培面积减少，于是四川省的金银花种植企业和农户开始从外省引进金银花品种，根据笔者近2年的调查和文献记载[6]可知，目前四川省既有引进的山东省、河南省和重庆市的栽培品种，又有四川省当地驯化栽培的品种。近年来的化学和药理研究结果证实，绿原酸是金银花的主要活性成分之一[7]，因此金银花的绿原酸含量，是判断其质量的重要标志。笔者对四川省栽培的不同种质金银花的绿原酸含量进行测定比较，以期为筛选出适合四川省栽培的品种提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料

分别于2013年5月中下旬在山东省平邑县、河南省封丘县、重庆市秀山县和四川省北川县、江油市、南江县等地的金银花种植公司、金银花专业合作社的种植基地或农户种植田间共收集19份栽培的种质材料，详见表1。每个种质材料均采样30份以上，全部采集头茬花蕾快速烘干备用。同时采集标本，并将所有标本送交绵阳师范学院罗明华教授鉴定。

1.2试验方法

1.2.1试验仪器与色谱条件试验仪器为美国Agilent 1100型高效液相色谱仪（包括Agilent化学工作站）、十万分位电子天平（型号：XS205mettlerToledo）、万分位电子天平（型号 BSA224S-CW）。色谱柱为Phenomenex C18柱（250 mm×46 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（体积比为13 ∶87），柱温为25 ℃，检测波长为327 nm。临用前以0.45 μm 微孔滤膜过滤并经超声脱气处理，流速为 1.0 mL/min，进样量20 μL，理论塔板数（以绿原酸计）不低于1 500。

1.2.2对照品溶液的制备精确称取8.55 mg绿原酸对照品（批号为110753—201314，纯度以96.6%计算），以2010年版《药典》中规定的中间浓度为依据，将绿原酸对照品在 40 mL 的容量瓶中定容，配制成0.206 5 mg/mL的绿原酸对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的制备将每个种质材料样品充分混匀，取约0.5 g样品粉末（过4号筛）置于50 mL容量瓶中，加 50 mL 50%甲醇，超声40 min，放冷后定容、摇匀。用滤纸过滤后，取5 mL滤液，置于20 mL容量瓶中定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤。

1.2.4标准曲线的绘制以中间量为20 mL的进样量为基准，按不同进样量的梯度，分别设计以下几个进样量：5、10、20、40、50、60 μL。以峰面积对进样量进行线性回归，回归方程为：y=39.425x+2.354 6，其中r2=1.00，说明绿原酸进样量在1.032 5～12.390 0 μg范围内线性关系良好。

1.2.5稳定性试验取配制好的绿原酸对照品溶液，每4 h进样1次，共进样6次，每次进样10 μL，RSD=1.14%（n=6）。表明本试验条件稳定，绿原酸含量在24 h内稳定性良好。

1.2.6精密度试验精确吸取绿原酸对照品溶液，每次 10 μL，连续进样5次测定峰面积值，算得绿原酸含量的RSD为0.57%（n=5）。表明本试验方法精密度良好。

1.2.7加样回收试验精确称取5份已知绿原酸含量（80250 mg/g）的样品，分别置于25 mL具塞锥形瓶中，准确表119份金银花种质材料概况

样品编号品种名采集地采集时间

加入一定量的绿原酸对照品溶液（合0.62 mg绿原酸），按供试液制备方法制样并测定、进样分析。

1.2.8样品绿原酸含量的测定按上述色谱条件，精确吸取各供试样品20 μL，依次分别进样（n=3），测定样品中绿原酸的含量。

2结果与分析

2.1加样回收测定结果

表2为加样回收试验测定结果。分析表明，平均回收率98.06%，RSD=1.02%。

nlc202309031855

表2加样回收试验测定结果（n=5）

称样量

（g）样品量

（mg）加入量

（mg）测得量

（mg）回收率

（%）9.230.7410.6201.34998.29.690.7880.6201.39197.48.690.7370.6201.34197.58.870.7380.6201.32697.49.500.8010.6201.38099.8

2.2样品绿原酸含量

本试验比较了5个金银花品种在原产地和四川省栽培后的含量，由表3可以看出，山东省的大毛花、九丰一号，河南省的豫封一号引种栽培在四川省的质量表现较好，高出《药典》规定的100%以上；沂蒙四号和鸡爪花在原产地含量高，引种含量明显降低，但能达到《药典》要求（2010年版《药典》规定金银花中绿原酸含量不低于1.5%）。

灰毡毛忍冬是山银花的来源品种之一，本试验还比较了灰毡毛忍冬及其培育的品种渝蕾一号的绿原酸含量。由表3可知，四川省栽培的灰毡毛忍冬品种，绿原酸含量明显高出《药典》规定；渝蕾一号是由灰毡毛忍冬培育出的品种，它们的含量高于灰毡毛忍冬；渝蕾一号引种到四川省江油市后，含量高于原产地；引种到四川省南江县后，质量表现较好，与原

表3各样品绿原酸含量（n=3）

样品编号含量

（%）RSD

（%）13.152.2423.092.8931.651.1543.142.1353.721.9763.812.1573.271.7483.311.4697.121.78107.012.28116.940.19122.720.83131.512.08146.832.03153.282.76160.832.77170.782.99183.820.87193.022.81

产地没有明显的区别。

研究还发现，细毡毛忍冬、灰细毡毛忍冬、淡红忍冬、红腺忍冬、峨眉忍冬、异毛忍冬为四川省驯化栽培的品种。其中产于四川省南江县的细毡毛忍冬绿原酸含量高，远远高于《药典》规定的山银花和金银花的标准，这与苟占平等报道的结果[4]一致；红腺忍冬、峨眉忍冬符合《药典》要求，而淡红忍冬、异毛忍冬中绿原酸含量低，达不到《药典》的规定。

3结论

四川省是我国金银花的主要产区之一，四川省产的金银

花习称川银花。四川省要发展金银花产业，就要采取引进优良品种和培育本地品种相结合的方法。引种以选择山东省的九丰一号、大毛花和河南省的豫封一号为宜，其优点是产量高、有效成分含量稳定；如果要以提取绿原酸为目的，适宜选择渝蕾一号。此外，2010 年版《药典》将忍冬规定为金银花唯一的来源，将灰毡毛忍冬等置于山银花项下，而未对细毡毛忍冬作任何收载。就性状而言，灰毡毛忍冬和细毡毛忍冬很相似，特别是药用部位的成熟花蕾很难区别，而且其绿原酸含量高，为传统的川产金银花的主流品种[4]，也许将其纳入山银花范围更加合理。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010 ∶205.

[2]徐炳声. 中药金银花原植物的研究[J]. 药学学报，1979，14（1）：25-36.

[3]潘超逸，谭家铭，赖应涛. 四川省金银花的原植物调查[J]. 中药材，1991，14（9）：17-19.

[4]苟占平，万德光. 四川南江主流金银花的分类学鉴定与质量分析[J]. 四川中医，2009，27（2）：57-58.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005：21，152.

[6]苟占平，万德光. 川产商品金银花调查与鉴定[J]. 四川中医，2008，26（1）：49-51.

[7]郭明，詹敏忠，鲁小旺，等. 金银花活性成分绿原酸与不同蛋白质相互作用机制的比较分析研究[J]. 中国中药杂志，2013，38（16）：2714-2720.李康. 彩棉纤维的成分和结构分析[J]. 江苏农业科学，2015，43（1）：313-314.

金银花中绿原酸研究篇5

关键词：复方金银花颗粒,绿原酸,HPLC,含量测定

复方金银花颗粒由金银花、连翘、黄芩等三味药组成, 具有清热解毒, 凉血消肿等功效[1]。绿原酸是金银花中有效成分之一, 具有抗菌、消炎抗病毒等作用[2]。原标准中无含量测定, 为有效控制复方金银花颗粒内在质量, 本文选用绿原酸作为含量测定指标, 建立复方金银花颗粒中绿原酸HPLC含量测定方法, 结果表明该方法准确, 重复性好, 可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT系列高效液相色谱仪 (日本岛津) , AG135十万分之一电子天平。

1.2 试药

绿原酸对照品 (中检定, 110753-200413) ;复方金银花颗粒 (河北国金药业有限责任公司, 批号0910301、0812041、0805012) ;甲醇为色谱纯, 自制纯化水, 其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:phenomenex Luna- C18柱 (200 mm×4.60 mm, 5 μm) ;流动相:甲醇-1%冰醋酸 (20:80) ;流速:1.0 ml/min;检测波长:326 nm; 柱温:30℃;进样量:10 μl。

2.2 对照品溶液的制备

称绿原酸对照品, 加甲醇溶解得储备液 (363.2 μg/ml) 。量取储备液, 加甲醇稀释至每1 ml含绿原酸54.48 μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品研细, 取约5 g, 加50%甲醇50.00 ml, 称重, 超声40 min, 放冷, 用50%甲醇补足重量, 滤过, 即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方配比 (缺金银花药材) 按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.5 干扰试验

照上述色谱条件, 将上述三种溶液各进样10 μl。供试品色谱图中, 在与对照品色谱图相应的保留时间处, 有相同的色谱峰, 而阴性对照溶液无干扰峰。

2.6 线性关系考察

将上述绿原酸对照品溶液 (54.48 μg/ml) , 分别进样3.0 μl, 5.0 μl, 10.0 μl, 15.0 μl, 20.0 μl, 以平均峰面积为纵坐标, 以进样量为横坐标, 进行线性回归, 得方程:Y=3.345×106X+5.606×104, r=0.9995, 线性范围为0.1634~1.0896 μg。

2.7 精密度试验

取对照品溶液 (54.48 μg/ml) 连续进样6次, 每次10 μl, 记录峰面积, RSD为0.52%, 表明精密度良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液 (批号0910301) , 分别于0、4、8、12、16、24 h进样10 μl, 峰面积的RSD为0.53%, 表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验

取同一样品 (批号为0910301) 6份, 按“2.3”项下方法制备供试品溶液, 结果绿原酸含量的RSD为1.02%, 表明本法重复性较好。

2.10 加样回收率试验

取已知绿原酸含量的样品6份 (批号为0910301) , 每份约2.5 g, 分别加储备液 (363.2 μg/ml) 4.00 ml, 按“2.3”项下方法制备供试品溶液, 计算回收率, 平均回收率为99.6%, RSD=0.94% (n=6) 。

2.11 样品含量测定

取3批样品, 按“2.3”项下方法制备供试品溶液, 照外标法 (峰面积) 计算绿原酸的含量, 测定结果分别为 (批号0910301, 含量0.5739 mg/g;批号0812041, 含量0.5588 mg/g;批号0805012, 含量0.5654 mg/g) 。

3 讨论

3.1 考察了甲醇-0.2%磷酸, 甲醇-1%冰醋酸[3]等流动相, 最终确定甲醇-1%冰醋酸 (20∶80) 作为流动相, 流速为1.0 ml/min, 分离效果良好, 分析快速准确, 重复性好, 回收率好。

3.2 从线性, 回收率, 重复性, 溶液稳定性等实验结果可以看出, 用HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量, 准确性高, 重现性好, 且操作简便快速。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准.中药成方制剂第十册.中华人民共和国卫生部, 115.

[2]国家药曲委员会.中国药典.中国医药科技出版社, 2005:405-406.

金银花中绿原酸研究篇6

国内对其同属植物绿原酸含量的研究报道较多, 如金银花中绿原酸含量高, 纯度好, 是从自然界中获得绿原酸的主要原料, 但是金银花的开发利用已接近饱和。金银忍冬是金银花的同属植物, 有关金银忍冬中绿原酸含量的研究报道较少。为开发利用金银忍冬, 本试验采用反相高效液相色谱法同时测定宁夏种植的金银忍冬叶、花、果实中绿原酸的含量, 旨在为金银忍冬中绿原酸的提取、检测提供一种快捷、准确、简单的方法, 为进一步研究宁夏金银忍冬叶、花、果实的药理作用提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

采集宁夏医科大学校园内的金银忍冬叶;花;果实;阴干, 并保存。

1.2 仪器与试剂

日立L-2000型高效液相色谱仪, 日本Hi TACHi公司;Alltima C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm) , Grace Davison Discovery Sciences公司;AL204型电子天平, METTLER TOLEDO仪器有限公司;KQ3200DA型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司;JYL-13060型料理机, 九阳股份有限公司;绿原酸对照品, 中国药品生物制品检定所;甲醇 (色谱纯) , 天津赛弗瑞科技有限公司;冰醋酸 (分析纯) , 北京化工厂;自制高纯水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液配制

准确称取绿原酸对照品0.1 mg, 置于10 m L容量瓶中, 加50%甲醇定溶至刻度, 摇匀, 得到绿原酸对照品溶液 (10μg/m L) 。即得到4μg/m L绿原酸对照品溶液。

2.2 样品溶液的制备

分别准确称取0.200 0 g金银忍冬叶、花、果实的干燥粉末置于50 m L容量瓶中, 加入30%甲醇至刻度, 摇匀, 用数控超声器提取30 min, 取出, 放冷, 再用30%甲醇定容至刻度, 分别取4 m L溶液用800型离心沉淀器中以4 000 r/min的速度离心15 min, 取上清液用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过。

2.3 色谱条件

采用Alltima C18Column (250 mm×4.6 mm, 5μm) 分析柱, 流动相为:甲醇 (A) ∶体积分数1.0%的冰醋酸溶液 (B) =27∶73, 流速为1.0 m L/min;检测波长为327 nm, 柱温为25℃。

2.4 HPLC定量分析的方法学考察[1,2,3,4]

2.4.1 线性关系考察

吸取“步骤2.2”所制对照品溶液2.0 m L, 置于测量瓶内, 超声10 min, 放冷, 分别进样5.0μL, 10.0μL, 15.0μL, 20.0μL, 进行高效液相色谱仪测定, 结果如表1所示。

以绿原酸峰面积为纵坐标 (Y) , 对照品溶液的浓度为横坐标 (X) , 绘制标准曲线, 如图1所示。

绿原酸标准品回归方程为y=6860.3x+95.4, 相关系数为R2>0.9999, 试验结果表明, 绿原酸在0~8μg/m L的质量浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.4.2 精密度试验

准确吸取绿原酸的对照品溶液1.5 m L置于测量瓶内, 经超声处理10 min, 放冷, 用高效液相色谱一连续测定5次, 每次5μL, 测定结果如表2所示。

由测定结果计算得绿原酸峰面积的相对标准偏差 (RSD) 为1.59%, 表明测定精密度良好。

2.4.3 稳定性试验

按照样品溶液制备方法制备金银忍冬果实30%甲醇提取液, 准确吸取金银忍冬果实30%甲醇提取物的供试品溶液1.5 m L置于测量瓶, 超声处理10 min, 按上述液相色谱条件, 供试品溶液在制备后0 h、2 h、8 h、12 h、24 h, 分别进样10μL, 测定结果如表3所示。

由表3稳定性试验的测量结果计算得到绿原酸峰面积的相对标准偏差RSD为0.61%, 表明该测定方法稳定。

2.4.4 重复性试验

称取同一金银忍冬果实样品干粉三份, 按照2.2样品溶液的制备方法制备得到三份金银忍冬果实样品溶液, 照2.3高效液相色谱分析的色谱条件, 分别测定金银忍冬果实样品溶液, 测定结果如表4所示。

由测定结果计算得到绿原酸峰面积的相对标准偏差 (RSD) 为1.62%, 表明用该方法测定的重复性良好。

2.4.5 样品加标回收率实验

准确称取已知绿原酸含量的金银忍冬果实干粉3份置于25 m L容量瓶, 然后分别精密加入绿原酸对照品溶液, 按2.2节方法制备样品溶液, 在上述色谱条件下测定, 每份样品平行测定3次, 测定结果如表5所示。

由加样回收率试验测定结果计算得绿原酸的平均回收率为99.74%, 其RSD为0.23%, 回收率较高。加标前后色谱图见图2、图3所示。

2.4.6 宁夏金银忍冬叶、花、果实中绿原酸含量的测定

分别精密吸取宁夏金银忍冬叶、花、果实的30%甲醇提取液1 m L置于50 m L、25 m L、10 m L容量瓶中, 用30%甲醇定容至刻度。量取1.5 m L稀释后的样品溶液, 用超声波仪超声10 min, 在上述色谱条件下, 种按2.2样品处理方法处理得到的样品溶液各10.0μL注入高效液相色谱仪, 分别测定其含量。试验结果表明:绿原酸在宁夏金银忍冬叶、花、果实均存在 (图4、图5、图6、图7) , 且其含量如表6所示。

由表6可知, 宁夏金银忍冬叶、花、果实中绿原酸含量分别为: (31.64±2.21) mg/g, (17.45±1.05) mg/g, (5.14±1.39) mg/g。所以宁夏金银忍冬叶的30%甲醇提取物中所含绿原酸总量最大, 花次之, 果实最小, 表明在宁夏金银忍冬植株不同部位中绿原酸类化合物的含量分布为:叶>花>果实。

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择

研究表明, 以30%甲醇作为溶剂提取出的绿原酸含量高, 且绿原酸色谱峰与其他杂质峰分离的最好。

3.2 提取方法选择

采用冷浸提取、回流提取和超声提取3种方法进行对比试验, 结果表明相同提取时间, 超声和回流提取的量多, 而超声操作简单, 避免了热不稳定物质的破坏。

3.3 流动相比例的选择

色谱条件为甲醇∶1.0%冰醋酸=27∶73时, 三种样品溶液中绿原酸的色谱峰与其他物质色谱峰分离的较好, 在此色谱条件下可以较好的定性定量分析样品溶液中的绿原酸。

4 结论

本研究建立了反相高效液相色谱法同时测定金银忍冬叶、花、果实中绿原酸的含量的方法, 该方法简便快速, 线性范围宽, 分离效果好, 数据准确、可靠。

参考文献

[1]张永清, 徐凌川, 王丽萍, 等.忍冬不同部位中绿原酸的含量测定[J].中国中药杂志, 1996, 21 (4) :204-205.

[2]林丽美, 刘菊妍, 王燕, 等.RP-HPLC法测定金银花中绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志, 2009, 15 (9) :22-23.

[3]耿世磊, 徐鸿华, 赵晟, 等.山银花茎、叶、花中绿原酸分布规律研究[J].中草药, 2004, 35 (3) :315-318.

金银花中绿原酸研究篇7

关键词：高效液相色谱法,龟苓膏,绿原酸

1 前言

龟苓膏口感嫩滑而带有弹性, 味道甘甜, 既可以清热解毒, 又可以消暑生津, 一直以来, 深受两广、港澳、东南亚的消费者喜爱, 近些年, 随着人民群众生活水平的不断提高, 健康理念的不断认识, 凉茶类产品逐渐在全国范围热销, 也带动了龟苓膏市场的不断扩大, 产量和销量逐年提高, 创造了较好的经济效益。市场上也涌出了很多的龟苓膏生产厂家, 各种龟苓膏品牌应运而生, 但品质却参差不齐, 甚至出现了以凉粉膏滥充龟苓膏的现象, 为了规范龟苓膏行业, 统一龟苓膏的产品质量, 广西壮族自治区质量技术监督局、广西梧州市质量技术监督局联合梧州龟苓膏主要生产厂家梧州双钱实业有限公司、梧州致中和保健食品有限公司先后推出了DB 45/391-2007《地理标志产品梧州龟苓膏》、DB 45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》标准, 对龟苓膏的原辅材料要求、技术要求、生产过程要求、试验方法、检验规则等作出了规定, 其中最主要的是规定了龟苓膏的几项营养指标和检验方法, 确保龟苓膏应有的营养成分, 确保龟苓膏的品质。标准中规定了通过高效液相色谱法对龟苓膏绿原酸的检测。

近年来的研究表明, 绿原酸是一种重要的生物活性物质, 具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。

绿原酸不稳定, 会自然衰减。陈芳萍等在《β-环糊精对绿原酸稳定作用的研究》一文中, 得出结论:绿原酸经β-环糊精包合后, 稳定性增加。β-环糊精可以作为绿原酸及其制剂中的稳定剂。李刚等在《金银花提取物中绿原酸的稳定性研究》一文中, 得出结论:绿原酸在碱性条件下, 极不稳定, 容易水解。本文要研究的就是绿原酸在龟苓膏中的检测方法和绿原酸在龟苓膏中的直链淀粉、低pH等条件综合影响下, 绿原酸的衰减情况。

DB 45/391-2007《地理标志产品梧州龟苓膏》、DB 45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》的绿原酸检测方法不同, 本文拟在对比的过程中探讨方法、在分析的过程中比较优劣, 客观的选出较好的检测方法。

2 材料与方法

2.1 试材、药品和仪器

龟苓膏按包装型式不同主要分为易拉罐装和塑料碗装两种型式, 由于包装材料不同, 透光率、透气性都不同, 造成了对绿原酸稳定性影响也不同。因此, 易拉罐装龟苓膏、塑料碗装龟苓膏应该分开研究。

绿原酸 (中国药品生物制品检定所) 标准品;甲醇 (fisher) 为分析纯;无水乙醇为分析纯;乙睛为色谱纯;冰醋酸;磷酸均为色谱纯;水为新鲜的超纯水。

L6-P6高效液相色谱仪 (北京普析通用分析仪器有限责任公司) , 数控超声清洗器, 超纯水净化器。

2.2 方法

2.2.1 方法A

2.2.1. 1 色谱条件

色谱柱:C18 (250mm×4.6mm) 。

温度:室温。

流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液 (13:87)

流速:1.0mL/min。

检测波长:327nm。

进样量:10μL。

2.2.1. 2 标准液制备

精密称取绿原酸标准品适量置棕色容量瓶中, 加甲醇制成10ug/ml的溶液, 即得标准溶液。

2.2.1. 3 标准曲线制备

吸取上述标准溶液0.4ml, 0.8ml, 1.2ml, 1.6ml, 2.0ml, 加甲醇定容至10ml容量瓶中, 摇匀即得。注入高效液相色谱仪, 测定其峰面积, 以峰面积为纵坐标, 浓度为横坐标绘制标准曲线, 求回归方程。

2.2.1. 4 样品制备

取膏体试样适量, 搅拌成浆, 精密称取25g (准确至0.01g) 置于100ml容量瓶中, 加无水乙醇定容至100ml, 称量, 超声提取处理20min, 放冷, 补无水乙醇至处理前质量, 摇匀, 放置, 分取上清液用G4砂芯漏斗过滤, 备用。取所制得的上清液25ml, 水浴挥干, 加适量甲醇溶解, 移置于10ml容量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀即得试样溶液。

2.2.1. 5 结果计算

由标准曲线计算出被测溶液中绿原酸含量, 计算出试样中绿原酸含量:

X---试样中绿原酸含量, 单位为毫克每百克 (mg/100g)

m4---由标准曲线计算出的被测液仲绿原酸质量, 单位为微克 (μg)

m3---试样的质量, 单位为克 (g)

2.2.2 方法B

2.2.2.1 色谱条件

色谱柱:C18 (250mm×4.6mm) 。

温度:室温。

流动相:0.5%乙酸溶液+乙腈=9+1

流速:1.0mL/min。

检测波长:327nm。

进样量:10μL。

2.2.2.2 标准液制备

称取绿原酸标准品0.02g (精确至0.0001g) 于10.0ml容量瓶中, 加流动相溶解并定容至刻度, 混匀。 (此标准储备液在4℃冰箱中, 可保存5d) 。

2.2.2. 3 标准曲线制备

精密称取绿原酸标准使用液, 加流动相稀释并在容量瓶中定容的浓度分别为2.0μg/ml, 4.0μg/ml, 6.0μg/ml, 8.0μg/ml, 10ug/ml的溶液, 即得标准溶液。

2.2.2. 4 样品制备

取膏体适量, 搅拌成浆, 称取试样15g (准确至0.01g) 于小烧杯中, 加甲醇15mL稀释后转移于50mL容量瓶, 容器另用约15mL甲醇分次洗涤并转移入该容量瓶中;超声提取30min, 放冷, 补加甲醇至刻度并摇匀, 静置后分取上清液作为检测液。

2.2.2. 5 结果计算

式中:

X---试样中的含量, 单位为克每千克或克每升 (g/kg或g/L)

C---由标准曲线求得进样液中绿原酸的浓度, 单位为微克每毫升 (μg/ml)

V---试样定容体积, 单位为毫升 (ml)

m---试样质量或体积, 单位为克或毫升 (g或ml) 。

2.2.3 含量测定

在相同色谱条件下根据标准品、样品的峰面积与标准品的含量, 计算样品绿原酸的含量。

3 结果与分析

3.1 分别依据DB 45/391-2007《地理标志产品梧州龟苓膏》 (方法A) 、DB 45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》 (方法B) 的方法, 得出两组样品数据 (方法A数据、方法B数据) , 通过高效液相色谱法对同一批号龟苓膏绿原酸进行检测, 得出表1数据:

由表1看出, 相比之下, DB 45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》的检测方法有以下优点:检测数据稳定、能充分检测绿原酸含量。

3.2 依照DB 45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》的检测方法, 对同一批次、不同时期的易拉罐装龟苓膏、塑料碗装龟苓膏进行检测, 得到了表2、表3的数据:

由表2、表3可以看出, 龟苓膏中的绿原酸会随着时间推移不断衰减, 相比之下, 易拉罐装龟苓膏的衰减速度较慢。

4 结论与讨论

4.1 由于绿原酸的不稳定性, 在常温下都不稳定, 若在高温状态下且和空气充分接触, 更容易被氧化分解掉, 因此, DB45/391-2007《地理标志产品梧州龟苓膏》标准中绿原酸检测的样品处理采用"水浴挥干"这一步骤是不合理的, 这样处理的结果是导致绿原酸的检测结果偏低。而DB45/T 580-2009《龟苓膏质量安全要求》标准中测定绿原酸的样品处理是经超声提取后定容, 直接吸取上清液作为检测液, 上机检测。这个方法没有了"水浴挥干"这一步骤, 因此也大大缩短了样品处理时间和温度、氧化的影响, 这对保护提取出来的绿原酸起了非常大的作用。因此, 应选用DB45/T 580-2009《龟苓膏质量安全要求》的检测方法检测龟苓膏中的绿原酸。

4.2 龟苓膏绿原酸含量客观存在衰减现象, 且与温度、光线、氧气等因素密切相关, 由于易拉罐包装密封性、气密性都比塑料碗包装好得多, 所以, 易拉罐产品中绿原酸衰减较慢, 9个月后由开始的8.3mg/kg下降到4.2mg/kg, 而塑料碗产品中绿原酸衰减较快, 9个月后由开始的8.1mg/kg下降到2.9mg/kg。虽然龟苓膏的直链淀粉和低pH值对绿原酸有一定的保护作用, 减缓绿原酸的衰减。但龟苓膏如何成为绿原酸营养成分的有效载体, 还需要进一步的在龟苓膏生产工艺方面进行深入研究。

参考文献

[1]易唐玲、关翔、贤英越、茹天霞、杨政雄。DB45/391-2007《地理标志产品梧州龟苓膏》。广西壮族自治区质量技术监督局、梧州市质量技术监督局、广西梧州双钱实业有限公司。2007:09-20

[2]梁日明、易唐玲、关翔、林萍。DB45/T580-2009《龟苓膏质量安全要求》。梧州市质量技术监督局负责起草。2009:06-30

[3]陈芳平、李玉贤、孙德梅。《β-环糊精对绿原酸稳定作用的研究》郑州瑞康制药有限公司, 河南中医学院中药系。1996:06

金银花中绿原酸研究篇8

1实验部分

1.1原料、试剂与设备

卷心菜, 市售。

绿原酸标准品, 昆明科翔生物科技有限公司;无水乙醇, 天津市科密欧有限公司;其他试剂均为市售分析纯。

MM721NG1-PW微波炉, 美的集团;UV-2550紫外分光光度计, 日本岛津公司;GF101-0 电热恒温鼓风干燥箱, 中国重庆试验设备厂;植物草本粉碎机, 天津泰斯特仪器有限公司;标准检验筛, 浙江上虞市道墟张兴纱筛厂;AL204 电子天平, 北京赛多利斯公司;恒温水浴锅, 上海富玛试验设备有限公司;旋片式真空泵, 上海沪冈真空泵制造有限公司。

1.2选择最大吸收波长及制作标准曲线

1.2.1 最大吸收波长的选择[6]

准确称取绿原酸标准品1 mg, 用无水乙醇定容至50 mL容量瓶中。用无水乙醇作参比对照液, 在250~500 nm范围内扫描, 绿原酸标准品紫外吸收光谱表见文献“正交试验法优化金银花中绿原酸提取工艺的研究”。由该文献可知, 绿原酸标准品在329.9 nm处有最大吸收峰, 因此应选择最大吸收波长329.9 nm用于测量绿原酸的吸光度。

1.2.2 绘制绿原酸标准曲线

按分光光度法, 无水乙醇为参比液, 以吸光度A与浓度C进行直线回归, 绘制绿原酸标准曲线。测定处在最大吸收波长329.9 nm时的绿原酸吸光度, 得吸光度A与绿原酸浓度C之间满足

其中C为质量浓度, 由线性回归方程可知:在测定范围内该线性关系良好。

1.3 绿原酸的提取

1.3.1 提取工艺

将卷心菜叶用流动水清洗干净, 置于50 ℃恒温烘箱中干燥, 待叶子干燥后, 用中草药粉碎机粉碎, 过筛, 筛取直径≤0.15 mm的颗粒放入锥形瓶中。在上述锥形瓶中按一定比例加入一定浓度的乙醇溶液浸泡一段时间, 而后, 放入快速微波反应器中, 设置相关的参数 (微波温度、微波时间、微波功率) , 处理后将含有绿原酸的溶液倒入小烧杯中备用。

取小烧杯中绿原酸溶液少许, 在常温的条件下稀释若干倍, 而后, 用紫外分光光度计测出它的吸光度, 带入相关公式中计算卷心菜叶中绿原酸的提取率。

1.3.2 绿原酸提取率计算公式

由1.3.1 可得, 计算绿原酸提取率的公式如下:

式中:

Y———卷心菜叶中绿原酸的提取率 (%)

A———绿原酸滤液的吸光度

V———绿原酸滤液的体积 (mL)

N———提取液的稀释倍数

M———卷心菜叶粉末的质量 (g)

2结果与讨论

2.1单因素实验

2.1.1 乙醇体积分数的影响

控制料液比1∶15, 设置微波温度50 ℃、微波功率200 W、微波时间5 min, 分别研究在乙醇体积分数为50%、60%、70%、80%、90%的条件下对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响, 结果如表1 所示。

由表1 数据可知:乙醇体积分数70%时绿原酸的提取率最高, 在50%~70%范围之间, 卷心菜叶中绿原酸的提取率随着乙醇体积分数的升高而增大, 可能是因为卷心菜叶中绿原酸的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性;随着乙醇体积分数进一步增大, 绿原酸提取率反而降低, 可能是由于一些脂溶性杂质也溶于了乙醇, 导致绿原酸提取率的降低, 故乙醇体积分数控制在70%为宜。

2.1.2 料液比的影响

选取上述较优乙醇体积分数70%, 控制其他条件相同, 分别研究料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 的条件下对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响, 结果如表2 所示。

由表2 数据可得:在1∶10~1∶20 范围中, 卷心菜叶中绿原酸提取率随料液比的增大而增大, 在1∶20~1∶30 范围内卷心菜叶中绿原酸的提取率随料液比的增加还是有所增大, 但是绿原酸溶解几乎接近平衡。因为当料液比小时, 固液相浓度差小, 导致传质推动力衰减加快, 提取率低, 而随着料液比的增大, 传质速率提高, 提取率变大, 但生产成本也相应增高, 所以料液比不宜过大, 最好控制在1∶20 左右。

2.1.3 微波温度的影响

选取上述较优乙醇体积分数70%、料液比1∶20, 控制其他条件相同, 分别研究在微波温度为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的条件下对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响, 结果如表3 所示。

由表3 数据可知:在40℃~60℃之间卷心菜叶中绿原酸提取率随着微波温度的升高而增大, 因为温度升高, 分子运动加快, 使得细胞破裂加剧, 进一步导致卷心菜叶中绿原酸的溶解及扩散速度加快, 提取率显著提高。在60℃~80℃之间随着温度的升高绿原酸提取率反而下降, 可能是因为卷心菜叶中绿原酸随着温度的升高一部分有效成分被分解, 故微波温度宜选60℃。

2.1.4 微波功率的影响

选取上述较优乙醇体积分数70%、料液比1∶20、微波温度60℃, 控制其他条件相同, 分别研究在微波功率为100W、200W、300W、400W、500W的条件下对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响, 结果如表4 所示。

由表4 可知:在300W时卷心菜叶中绿原酸提取率最高。在100W~300W之间卷心菜叶中绿原酸提取率随微波功率增大而增大, 因为随着微波功率增大, 强大的内压及分子间的摩擦力使卷心菜叶细胞膜破裂, 故而绿原酸溶解速度加快, 提取率增大;在300W~500W内随着微波功率的增大, 绿原酸提取率反而逐渐降低, 因为微波功率过大产生的局部过热现象使绿原酸变性, 提取率下降。因此, 选择300W为最佳微波功率。

2.1.5 微波时间的影响

选取上述较优乙醇体积分数70%、料液比1∶20、微波温度60℃、微波功率300W, 控制其他条件相同, 分别研究在微波时间为4 min、5 min、6 min、7min、8 min的条件下对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响, 结果如表5 所示。

由表5 可知:在4~6 min范围内, 卷心菜叶中绿原酸提取率随微波时间的延长而增大, 6 min时提取率最大, 之后卷心菜叶中绿原酸提取率反而下降。可能因为当提取时间过短时, 微波反应产生的辐射能不足以改变细胞结构和细胞膜的电位变化, 导致绿原酸提取率不太高, 而当提取时间过长时, 溶剂挥发加剧, 导致提取效果下降, 提取率降低, 因此选择6min为较佳微波时间。

2.2正交试验

2.2.1 正交试验设计

在单因素实验的基础上, 选取影响绿原酸的乙醇体积分数、料液比、微波温度、微波功率、微波时间, 设计5 因素4 水平的L16 (45) 正交试验, 以进一步优化实验条件, 正交试验的因素水平设计见表6。

2.2.2 正交试验结果及极差分析

按表6 进行正交试验, 正交试验结果及极差分析如表7 所示。

由表7 可看出, 微波辅助乙醇萃取卷心菜叶中绿原酸的最佳工艺条件是:A2B3C3D3E3, 即微波温度为60℃、微波时间为6 min、微波功率300W、乙醇体积分数为60%、料液比为1∶20。影响卷心菜叶中绿原酸提取率的因素顺序是C>E>A>B>D, 即微波温度> 微波功率> 乙醇体积分数> 料液比> 微波时间。根据正交优化后得到的最佳工艺条件, 进行验证性实验, 平行3 次试验, 取平均值, 得绿原酸提取率在最佳提取条件下为1.2682%。

3结论

在单因素实验基础上, 正交优化微波辅助乙醇萃取卷心菜叶中绿原酸提取工艺。得最佳工艺条件是:乙醇体积分数为60%、料液比为1∶20、微波温度为60℃、微波时间为6 min、微波功率300W。重复三次平行实验, 得在最佳提取条件下绿原酸提取率的平均值为1.2682%。因此优化卷心菜叶中绿原酸提取工艺可合理利用废弃物, 对我国现阶段经济的可持续发展具有重要的指导意义和现实意义。

摘要：以卷心菜叶为原料, 研究采用微波法辅助提取卷心菜叶中绿原酸的提取工艺。实验中以绿原酸的提取率为指标, 以乙醇为提取剂, 考察乙醇体积分数、料液比、微波温度、微波时间、微波强度等因素对卷心菜叶中绿原酸提取率的影响。通过L16 (45) 正交优化绿原酸提取工艺, 结果显示, 最佳工艺条件为:微波温度60℃、微波时间6 min、微波功率300 W、乙醇体积分数60%、料液比1∶20。在此最佳工艺条件下, 卷心菜叶中绿原酸的提取率为1.2682%。

关键词：卷心菜叶,绿原酸,微波辅助,提取工艺,正交试验

参考文献

[1]刘颖, 郭明晔, 白根本.绿原酸的研究进展[J].中药材, 2012, 35 (17) :1180-1185.

[2]李万林.金银花中微波辅助提取绿原酸工艺条件研究[J].江西饲料, 2013, (03) :3-6.

[3]张英峰, 张立艳, 马子川, 等.植物绿原酸的研究进展[J].化学教育, 2011, (04) :1-3.

[4]陈绍华, 王亚琴, 罗立新.天然产物绿原酸的研究进展[J].食品科技, 2008, (02) :195-199.

[5]李万林, 钟姣姣, 刘方平, 等.大黄中多糖的提取工艺及其抗氧化活性的研究[J].皮革与化工, 2013, 30 (6) :14-18.

太白蓼中绿原酸含量测定篇9

1 仪器与试药

使用的仪器主要有:实验所需的液相色谱仪最好选用岛津LC-10AT型号的;超声波清洗仪最好选用无锡超声电子设备有限公司生产的H66025型号产品;采用的是北京同泰联科技发展公司生产的TTL-10B超纯水仪;同时又需要德国赛多利斯生产的型号为BS2245和型号为ME2355的电子分析天平以及美国安捷伦科技公司生产的Agilent-8453紫外分析仪。试验中使用的试药主要有:中国药品生物制品检定所的批号为110753-200413的绿原酸对比品 (含测用) ;实验需要10批蓼科植物太白蓼的根茎, 要对其进行鉴定以后方可使用, 并且其中最好是自己自采5批, 同时在药物市场购商用药品5批;还需要甲醇、乙腈两种美国TE-DIA公司生产的色谱纯, 大量的分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取实验需要的对比品溶液

实验室各种数据要严格按照要求进行, 首先要使用精密仪器, 取出9.50mg实验所需的对比品, 将其放入25mL容量瓶中, 再加入70%甲醇稀释稀释样品, 使其达到25mL刻度处, 轻轻摇匀, 使得溶液浓度为0.3795mg·mL-1, 以备实验用。

2.2 提取实验所需的供试品溶液

提取供试品溶液, 首先取0.25g药材粉末, 要严格控制实验数据的准确性, 加入70%甲醇, 得到容量为50mL的溶液, 利用超声提取仪持续操作35min, 滤过后, 即可得到所需液体。

2.3 实验所需的色谱条件

色谱柱为Kromasil C18柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相为乙腈-0.05%磷酸 (13:87) ;流量为1mL·min-1;柱温为40℃;检测波长327nm;进样10μL;实验要求的理论塔板数, 按照绿原酸所需应不低于3 000。在这些条件下, 绿原酸的分离情况得以展现。

2.4 线性关系考察

在相同的色谱条件下, 在对比品溶液中分别进样0、5、10、15、20、25μL, 记录实验数据时建立一个以峰面积为纵坐标, 进样量 (μg) 为横坐标的坐标图, 并用公式计算方程Y=3.5322X+0.002, γ=0.9999。

2.5 精密度试验

对所得结果进行精密度试验, 用上述同样的供试品溶液, 加入10μL, 重复操作8次, RSD=0.50%。

2.6 重复性试验