流感病毒培养

流感病毒培养（共7篇）

流感病毒培养 篇1

对我市2015.10.1-2016.3.31流感高发季节的病毒分离情况进行分析,探讨影响流感病毒鸡胚培养的因素。

1 材料与方法

1.1 标本来源

2015年10月1日至2016年3月31日分别在佳木斯市两家流感监测哨点医院采集流感样患者咽拭子,经Real-time RT-PCR检测阳性经流感病毒MDCK细胞培养阳性鸡胚敏感的H1N1样本3例及B-Victoria样本54例共57例。

1.2 材料

鸡胚接种采用9～11 d龄SPF鸡胚,受精鸡蛋由黑龙江省疾病预防控制中心提供,本实验室孵化箱孵育。人O型红细胞本实验室采集制备,流感病毒标准诊断血清和抗原由国家流感中心提供。

1.3 病毒分离与鉴定

1.3.1 标本处理

原始标本咽试子用滤器滤过除菌,提取的尿囊液和羊膜液混匀3000转5分钟吸取上清,加入青、链霉素混合液50ul于1ml样品中,4℃作用4h以上。

1.3.2 标本接种

处理后的标本液接种于SPF鸡胚羊膜腔和尿囊腔,每份接种3枚鸡胚,B型流感病毒接种后置33-35℃温箱培养72h,H1N1型流感病毒接种后置33-35℃温箱培养48h,4℃过夜或-20℃冷冻30-60分钟收集羊膜液、尿囊液。

1.3.3 血凝试验用

1.5%人O型血红细胞做血凝试验,血凝滴度>1:1判定为阳性,大于1:8者为合格阳性培养物,用血凝抑制试验进一步做型别鉴定。阳性但未达合格阳性培养物者继续传至合格阳性为止,阴性标本盲传3代。

1.4 数据处理

采用SPSS19.0软件统计分析。X2检验P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 Real-time RT-PCR结果205.10.1-2016.4.1本流感网络实验室共采用实时荧光PCR检测样本1052份,阳性155份。其中H1N1 4例H3N2 56例B-Victoria 95例。

2.2 流感病毒MDCK细胞培养结果real-time RT-PCR阳性155例标本经MDCK培养86株阳性其中H1N13株H3N2 29株B-Victoria54株。

2.3 流感病毒鸡胚培养选取MDCK细胞培养阳性鸡胚敏感的H1N1及B-Victoria样本共57例原液接种SPF鸡胚经过2-3代鸡胚培养收获合格阳性病毒株B-Victoria20株。不同月份的鸡胚培养阳性率差异有统计学意义,流感病毒鸡胚培养阳性率明显低于MDCK细胞分离阳性率。

3 讨论

用鸡胚作为病毒生长介质也是目前流感疫苗生产最常用的培养基质,但检出率比细胞培养法低,实际操作时影响因素较多。

鸡胚的选择病毒接种首选9-11日龄SPF鸡胚,由于受气温影响冬季佳木斯地区无法购买到鸡胚,在试验中我们发现受精鸡蛋的胚胎成活率非常不稳定在本年度的三批次孵育中胚胎成活率有很大差别,在试验中我们发现鸡胚培养阳性率第三次结果明显低于前两次,可见受精鸡蛋的质量直接影响着鸡胚的成活率同时质量差也会造成鸡胚非实验性死亡导致病毒培养阳性率降低。

样品的毒力及存放时间对鸡胚培养结果的影响试验中我们选择MDCK细胞培养血凝滴度>1:8的阳性标本接种鸡胚,试验中我们发现MDCK细胞培养结果血凝滴度高、出毒快鸡胚培养结果也一致。我们接种的样本存放于-70℃冰箱,鸡胚培养时有些样品的存放时间会超过4个月。2013-2014年培养阳性40株,H1N1 22株H3N2 16株B-Yamagata2株。鸡胚培养24例结果阳性H1N1 4株。2014-2015年培养H3N2阳性28株B-Yamagata 9株。鸡胚培养B-Yamagata 9例,结果没有符合要求的阳性毒株。2015-2016MDCK培养阳性86株其中H1N1 3株H3N2 29株B-Victoria 54株。鸡胚培养结果阳性B-Victoria20株。因此及时进行鸡胚培养尽量缩短样品存放时间会提高鸡胚培养阳性率。

我们采用羊膜腔、尿囊腔双腔接种将收获尿囊液和羊水混合将第1代阴性收获液混合后盲传;第2代出现了HA阳性株,再将阴性传至第3代仍能出现HA阳性株,连续多次传代可以提高阳性检出率[1]。阳性株HA滴度>1:8时我们稀释10倍、阳性株HA滴度>1:32时稀释100倍进行接种会减少鸡胚的死亡率提高鸡胚培养的阳性率。同时要注意接种时动作要轻柔,减少对鸡胚的刺激导致的死亡。

试验中的无菌操作标本处理原始试验样本咽拭子会含有大量细菌用滤器滤过除菌是最简单实用的方法减少污染及抗生素对鸡胚的刺激减少鸡胚的死亡率。研究还发现接种方法、鸡胚的个体差异、血凝抑制采用的血球种类等也可影响流感病毒的分离率和病毒的血凝滴度判定[2]。因此影响鸡胚培养的因素主要有鸡胚的选择,样品的毒力及保存时间,传代次数,试验时样品的处理无菌操作等。

摘要：目的:探讨流感病毒鸡胚培养影响因素。方法:选取经实时荧光PCR检测阳性同时流感病毒MDCK细胞培养阳性的样本,用原始标本接种SPF鸡胚培养、传代、收获、以人O型血红细胞凝集试验测定病毒滴度,滴度大于等于1:8倍用血凝抑制试验鉴定分型。结果:205.10.1-2016.3.31本流感网络实验室共采用实时荧光PCR检测样本1052份,阳性155份,流感病毒MDCK细胞培养血凝滴度>1:8符合要求的阳性86株。选取MDCK细胞培养阳性鸡胚敏感的H1N1及B-Victoria样本共57例原始标本滤过除菌后接种SPF鸡胚经过2-3代鸡胚培养收获血凝滴度>1:8符合要求的阳性病毒株20株。结论:流感病毒鸡胚培养的敏感性低于细胞培养,影响鸡胚培养的因素主要有鸡胚的选择,样品的毒力及保存时间,试验时样品的处理无菌操作等。

关键词：流感病毒,鸡胚培养,影响因素

参考文献

[1]姚红,黄洋,张静.流感病毒的实验室检测方法及进展探究[M].医学信息2013年7月第26卷2.

[2]杨式芹,何芸,陈前进,等.2006年福建不同地区流感监测病原学监测结果分析[J].海峡预防医学杂志,2008,14(5):39-41.1.

流感与流感病毒 篇2

背景资料

在人类历史上, 出现过多次由各种病毒引起的大规模传染病, 近几年爆发的就有非典 (SARS) 、流感等。

流感是由流行性感冒病毒 (流感病毒) 引起的一种急性呼吸道传染病。

流感病毒结构自外而内可分为包膜、基质蛋白以及核心三部分。

包膜是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜, 这层膜来源于宿主的细胞膜, 成熟的流感病毒从宿主细胞出芽, 将宿主的细胞膜包裹在自己身上之后脱离细胞, 去感染下一个目标。包膜中除了磷脂分子之外, 还有两种非常重要的糖蛋白:血凝素 (H) 和神经氨酸酶 (N) 。这两类蛋白突出病毒体外, 长度约为10至40纳米, 被称作刺突。一般一个流感病毒表面会分布有500个血凝素刺突和100个神经氨酸酶刺突。

基质蛋白构成了病毒的外壳骨架, 骨架中除了基质蛋白 (M1) 之外还有膜蛋白 (M2) 。基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合, 有保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。

病毒的核心包含了贮存病毒信息的遗传物质以及复制这些信息必需的酶。

根据流感病毒感染的对象, 可将病毒分为人类流感病毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等。其中, 人类流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型流感病毒 (又称A型流感病毒) , 在动物中广为分布, 能造成世界流感大流行;乙型流感病毒 (又称B型流感病毒) , 仅在人与海豹中发现, 常引起流感局部爆发, 不会引起世界流感大流行;丙型流感病毒 (又称C型流感病毒) , 仅在人与猪中发现, 以散在形式出现, 一般不引起流行。

在核蛋白抗原性的基础上, 流感病毒还根据H和N的抗原性分为不同的亚型。根据世界卫生组织1980年通过的流感病毒毒株命名法修正案, 流感毒株的命名包含6个要素:型别/宿主/分离地区/毒株序号/分离年份 (HmNn) , 其中对于人类流感病毒, 省略宿主信息, 对于乙型和丙型流感病毒省略亚型信息。例如A/swine/Iowa/15/30 (H1N1) 表示的是核蛋白为A型的, 1930年在Iowa分离的以猪为宿主的H1N1亚型流感病毒毒株, 其毒株序号为15, 这也是人类分离的第一支流感病毒毒株。

1996年至2012年, 荷兰、意大利、加拿大、美国、墨西哥、英国都报告过人类感染H7流感病毒的病例, 大部分感染和家禽中暴发的流感有关。这些感染主要导致结膜炎和轻度上呼吸道症状。唯一一例死亡病例发生在荷兰。

H7N9是全球首次发现的新亚型流感病毒, 于2013年3月在上海和安徽两地率先发现。经调查, H7N9流感病毒基因来自于东亚地区野鸟和中国上海、浙江、江苏鸡群的基因重配。

感染H7N9病毒的绝大多数病人会出现严重肺炎, 症状包括发烧、咳嗽、气短。不过, 对于感染甲型H7N9流感病毒后可能产生的全部症状, 目前认知仍是有限的。至2013年7月, 全国共报告确诊病例130余例, 其中40余例死亡。

试题设计

1.关于甲型H1N1流感病毒与H5N1禽流感病毒的有关比较, 错误的是 ()

A.均使感染者发烧, 因此两者抗原相同

B.感染不同的人后所引起的患病程度可能不同

C.感染正常人体后均能引发特异性免疫反应

D.均可能发生基因突变而改变传染性

2.“达菲” (又名磷酸奥司他韦) , 是目前人们公认的抵抗甲型H1N1流感病毒的有效药物之一。该药能抑制流感病毒表面的一种蛋白质———神经胺酸酶 (N) 的作用, 从而使流感病毒不能从宿主细胞中释放出来。下列判断正确的是 ()

A.“达菲”能阻止甲型H1N1流感病毒在人体细胞内的繁殖

B.“达菲”能阻止甲型H1N1流感病毒在人体细胞间扩散

C.“达菲”能使甲型H1N1流感病毒丧失对人体细胞的识别能力

D.“达菲”能使甲型H1N1流感病毒中控制神经胺酶的基因发生突变

3.有人试图通过实验来了解H5N1禽流感病毒侵入家禽的一些过程, 设计实验如下:

一段时间后, 检测子代H5N1病毒的放射性及S、P元素, 下表中对结果的预测中, 最可能发生的是 ()

4.禽流感是由禽流感病毒 (一种非逆转录RNA病毒) 引起的急性传染病, 能感染人类。研究者针对禽流感病毒进行了相关研究。请回答下列问题:

(1) 禽流感病毒遗传物质的基本组成单位有__种。对禽流感病毒的基因测序时, 主要工作目标是测定禽流感病毒__。

(2) 病毒除感染家禽外, 还能感染其他哺乳动物, 说明不同种类的被感染细胞表面具有相似的__, 体现了细胞膜具有__的功能。在被感染的细胞中, 通过RNA复制与__过程合成病毒蛋白, 从而产生子代病毒, 机体被感染细胞的清除可通过免疫反应实现。

(3) 某男子感染了禽流感病毒并已产生相应抗体, 无明显病症, 但这并不能保证他短期内再次感染时不会成为禽流感患者, 理由是__。

5.2009年世界上发现了能感染人类的高致病性甲型H1N1流感病毒。我国参与了抗击甲型H1N1流感的国际性合作, 并已经研制出甲型H1N1流感疫苗。下图所示为甲型H1N1病毒在人体细胞中的一些变化以及相关反应。请回答:

(1) 甲型H1N1流感病毒侵入到人体后, 机体往往先通过图中__过程 (填标号) 阻止病毒的散播, 再通过图中__过程 (填标号) 予以消灭。

(2) 图中b的作用是__, c的作用是__。

(3) 人体细胞中蛋白质的合成与甲型H1N1流感病毒蛋白质的合成过程相比, 主要区别是____。

(4) 注射甲型H1N1流感疫苗可预防甲型H1N1流感, 疫苗作用的原理是__。对鸡蛋过敏者不宜注射甲型H1N1流感疫苗, 其原因是___。

(5) 制备单克隆抗体也是治疗甲型H1N1流感的方案之一。以能产生抗H1N1流感病毒抗体的浆细胞和骨髓瘤细胞为材料, 能够制备出单克隆抗体的方案是__。

(1) 将骨髓瘤细胞中的癌基因导入上述浆细胞中, 并使癌基因表达

(2) 将控制合成抗H1N1流感病毒抗体的基因导入骨髓瘤细胞, 并使目的基因表达

(3) 将能产生抗H1N1流感病毒抗体的浆细胞和骨髓瘤细胞融合, 筛选出杂交瘤细胞并进行体外大规模培养

(4) 将控制H1N1流感病毒抗原的基因导入骨髓瘤细胞, 并使目的基因表达

6.某研究小组为研制预防禽流感病毒的疫苗, 进行如下简要的操作流程:

(1) 实验步骤 (1) 所代表的反应过程是__。

(2) 步骤 (2) 构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制性内切酶和__酶, 后者的作用是将用限制性内切酶切割的__和__连接起来。

(3) 如果省略步骤 (2) 而将大量扩增的H基因直接导入大肠杆菌, 一般情况下, 不能得到表达的H蛋白, 其原因是H基因在大肠杆菌中不能__, 也不能__。

(4) 步骤 (3) 中, 通常要使用__处理细胞, 使大肠杆菌成为感受态细胞。

(5) 为了检验步骤 (4) 所表达的H蛋白是否与病毒H蛋白有相同的免疫反应特性, 可用__与__进行抗原—抗体特异性反应实验, 从而得出结论。

(6) 步骤 (4) 和 (6) 的结果相比, 原核细胞表达的H蛋白与真核细胞表达的H蛋白的氨基酸序列__ (相同/不同) , 根本原因是__。

7.科学工作者利用基因工程研制出两种甲型H1N1流感病毒疫苗, 为检测两种疫苗的免疫效果, 以小鼠为实验材料进行实验, 实验处理及结果如下表:

注:“-”表示免疫应答效果不显著, “+”的数目表示免疫应答效果的显著程度。

(1) 重组细菌进入小鼠的巨噬细胞内, 利用__细胞的表达系统合成抗原蛋白。

(2) 设置第2组和第4组作为对照, 其目的是__。检测结果显示, 未重组细菌和未重组空白载体__ (能/不能) 刺激机体产生体液免疫。

(3) 每组实验需要接种3次, 利用再次免疫具有__的特点, 使实验结果更加显著。效应T细胞可来源于__。

(4) 本实验可以得出的结论:

(1) ____________;

(2) ___________。

8.H7N9型禽流感是一种新型禽流感, 由颗粒型重配病毒引起, 于2013年3月底在上海和安徽两地率先被发现。该病重症患者病情发展迅速, 表现为重症肺炎, 体温大多持续在39℃以上。下图为某患者体内一些生理过程的示意图, 其中 (1) ~ (6) 表示体内的激素或免疫物质。请据图回答问题:

(1) 患者的发热症状主要是由激素 (3) 的作用造成的, 激素 (3) 的名称是__-。当其含量过高时, 激素 (2) 的变化趋势是__。据图可知人体调节内分泌活动的枢纽是__。

(2) 患者因在服药后大量出汗而使尿量减少, 参与此过程调节的激素是__ (用数字表示) , 其作用的靶器官是___。

(3) (6) 表示免疫活性物质, 其中属于信号分子的是__;能清除体液中抗原的是__;在非特异性免疫过程中发挥作用的是__。

(4) 若患者一段时间后康复, 参与此过程的调节机制是__。

9.病毒的RNA分为三类, 即正链RNA[ (+) RNA]、负链RNA[ (-) RNA]和逆转录RNA, 分别存在于三种不同类型的病毒中。正链RNA能与核糖体结合, 具有mRNA的功能;负链RNA必须在病毒颗粒携带的转录酶的作用下转录成 (+) RNA才具有mRNA的功能;逆转录RNA在逆转录酶的作用下合成DNA, 整合到寄主的DNA中, 再转录合成mRNA。SARS病毒与HIV病毒虽然同是正链RNA病毒, 但二者遗传信息的传递及表达是不同的。SARS病毒遗传信息的传递及表达可以用以下左侧概念图表示, 请完成右侧HIV病毒遗传信息的传递及表达的概念图。

10.2009年3月底开始, 美国、墨西哥等国接连爆发大规模甲型H1N1流感疫情, 并迅速蔓延至北美地区以外的国家, 全球拉响防疫警报。某学校生物兴趣小组的同学通过查阅资料发现, 常见的流感病毒都是RNA病毒, 提出疑问:甲型H1N1流感病毒的遗传物质是DNA还是RNA?下面是该兴趣小组设计的实验步骤, 请将其补充完整:

(1) 实验目的:_____。

(2) 材料用具:显微注射器, 甲型H1N1流感病毒的核酸提取液, 猪胚胎干细胞, DNA水解酶和RNA水解酶等。

(3) 实验步骤:

第一步:把甲型H1N1流感病毒核酸提取液分成相同的A、B、C三组, ____;

第二步:取等量的猪胚胎干细胞分成三组, 用显微注射技术分别把A、B、C三组处理过的核酸提取物注射到三组猪胚胎干细胞中;

第三步:将三组猪胚胎干细胞放在相同且适宜的环境中培养一段时间, 然后从培养好的猪胚胎干细胞中抽取出样品, 检测是否有甲型H1N1流感病毒产生。

(4) 请预测结果及结论:

(1) ________;

(2) ________;

(3) 若A、B、C三组出现甲型H1N1流感病毒, 则甲型H1N1流感病毒的遗传物质既不是DNA也不是RNA。

参考答案

1.A提示:决定病毒抗原特异性的是病毒表面的蛋白, 甲型H1N1流感病毒与H5N1禽流感病毒表面的蛋白不同, 故抗原不同。

2.B提示:病毒无法释放, 从而不会在人体细胞间扩散。

3.D提示:家禽体细胞在含32 P的培养基中连续培养后, 核酸被32 P标记;家禽体细胞在含35S的培养基中连续培养后, 氨基酸被35S标记。H5N1禽流感病毒被3 2 P的家禽体细胞中连续培养后, 核酸被3 2P标记。核酸被3 2P标记的H5N1禽流感病毒侵染氨基酸被3 5S标记的家禽体细胞时, 进入细胞的是核酸, 蛋白质未进入。由于合成子代病毒核酸和蛋白质的原料来自家禽体细胞, 所以子代蛋白质全部含有35S, 核酸少数含32P。

4. (1) 4 (RNA上的) 核糖核苷酸序列

(2) 受体 (糖蛋白) 信息交流 (信息传递) 翻译细胞

(3) 病毒可能发生变异

5. (1) (1) (2) (5) (6) (7) (8) (1) (2) (3) (4)

(2) 与抗原特异性结合使靶细胞裂解, 释放其中的抗原

(3) 前者有转录过程, 后者没有

(4) 接种疫苗可诱导人体产生特异性免疫, 获得记忆细胞, 当该种抗原再次侵入时, 记忆细胞会迅速增殖、分化, 形成抗体, 产生抵抗力

疫苗是由在活鸡胚中培养的病毒 (灭活后) 制成的

(5) (1) (2) (3)

6. (1) 反转录

(2) DNA连接载体H蛋白基因

(3) 复制合成H基因的mRNA

(4) Ca2+

(5) 大肠杆菌中表达的H蛋白康复动物 (鸡) 的血清

(6) 相同表达蛋白质所用的基因相同

7. (1) 重组细菌

(2) 排除空白载体和未重组细菌的干扰 不能

(3) 迅速、强烈T细胞和记忆细胞

(4) (1) 两种疫苗都能诱导机体产生特异性免疫应答 (2) 重组细菌疫苗诱导机体产生特异性免疫应答的效果好于重组DNA疫苗

8. (1) 甲状腺激素下降下丘脑

(2) (5) 肾小管 (或肾小管和集合管)

(3) 淋巴因子抗体溶菌酶

(4) 神经-体液-免疫

9.

10. (1) 探究甲型H1N1流感病毒的遗传物质是DNA还是RNA

(3) 分别用等量的相同浓度的DNA水解酶、RNA水解酶处理A、B两组核酸提取液, C组不做处理

(4) (1) 若A、C两组出现甲型H1N1流感病毒, B组没有出现, 则甲型H1N1流感病毒的遗传物质是RNA

(2) 若B、C两组出现甲型H1N1流感病毒, A组没有出现, 则甲型H1N1流感病毒的遗传物质是DNA

流感病毒疫苗研究进展 篇3

自流感发现以来, 科学家们一直致力于对于流感病毒的防控, 接种疫苗目前是最有利于预防流感, 控制流感传播的手段。20世纪30年代末流感病毒疫苗开始在人类中使用, 目前的流感病毒疫苗分为以下几种:灭活病毒疫苗和减毒病毒疫苗, DNA疫苗, 亚单位疫苗, 重组病毒载体疫苗, 类病毒颗粒疫苗。

1 灭活病毒疫苗和减毒病毒疫苗

灭活病毒疫苗一般是指将病毒疫苗进行灭活处理后的三价疫苗。此种疫苗具有较为完整的病毒蛋白, 包括病毒的全部内部蛋白及表面抗原蛋白 (HA、NA) 。一般是将低毒性的H1N1或者乙型流感的6个内部蛋白基因同当时的流行株 (如H3N2、H5N1等) 的HA和NA病毒进行重配得到。基于这种特点, 该类疫苗的免疫原性极强。但是也有明显的缺点, 该类病毒一般以鸡胚为基质来生产, 因此需要极高的成本和复杂的纯化过程, 同时一旦流感大流行暴发, 鸡胚难于大规模生产[3]。

减毒活疫苗现已成为流感疫苗研究的目标, 从理论上说较为安全有效。此类病毒疫苗的最大特点为冷适应性, 冷适应性的病毒在人体呼吸道的平均温度 (38~39℃) 下的复制会受到明显的影响, 因此美国和俄罗斯均于2003年分别批准投入使用了一批新型的冷适应性减毒活疫苗。该疫苗的独特的鼻腔给药途径也不同于传统的灭活疫苗, 这种给药方式简便易行, 被认为是最能模拟人体在自然状态下感染流感病毒的情况。而在安全性方面, 冷适应病毒疫苗又由于其温度敏感的特点, 机体接种疫苗之后不会发生较重的临床症状。而其接种途径和免疫效果优于灭活疫苗, 可在上呼吸道复制, 能诱导黏膜免疫、体液及细胞免疫反应[4], 有更持久的保护作用。临床试验证明冷适应减毒活疫苗长时间使用时未见回复突变[5]。尽管如此, 减毒病毒疫苗仍然有保留着一定的毒力和活性, 因此极有可能侵染其他的病原体, 甚至有可能同其他野生毒株发生基因重配, 从而发生毒力回复。另外, 由于是活体疫苗, 其保存和运输方式也受到了制约。

2 DNA疫苗

DNA疫苗也称为核酸疫苗, 顾名思义, 是指将流感病毒的一些基因通过特定的手段和方式导入人体内, 之后基因经过人体细胞内的转录和翻译机器表达病毒蛋白, 产生的病毒蛋白应是具有免疫原性的病毒蛋白, 能够刺激人体产生细胞免疫和体液免疫。此前, 由于HA和NA的DNA疫苗能够有效地产生针对性免疫保护而受到青睐, 然而, HA和NA两者作为流感病毒分型的主要依据, 极易发生抗原漂移和基因突变, 使DNA疫苗刺激产生的机体免疫无法识别突变后的病毒感染。因此, 目前流感DNA疫苗研制的目光更多地关注于流感病毒相对较保守的内部蛋白身上, 如流感病毒核蛋白 (NP) 和基质蛋白 (M1) 。病毒的内部蛋白, 如NP和M1蛋白, 由于其较为保守, 在DNA疫苗研制工作方面得到了越来越多的关注。目前已知NP蛋白能够诱导免疫细胞产生非中性抗体, 同时也能够被细胞毒性T淋巴细胞所识别;而M1蛋白作为流感病毒的最主要结构蛋白, 也同样能够引起T细胞的免疫反应;利用流感病毒M2蛋白表位在佐剂的存在下已使小鼠诱导出高的抗流感病毒的抗体滴度[6]。DNA疫苗比传统蛋白疫苗有较多的优点, 如成本低, 抗原表达时间长, 可以构建复合疫苗, 高温稳定, 不易污染, 可广泛使用。其缺点和危险性较之传统疫苗已经大为改善, 但也存在着一些, 如会有整合到宿主基因组的可能性, 以及DNA疫苗导入机体后会发生降解等。

3 亚单位疫苗

亚单位疫苗, 是指将流感病毒8种主要蛋白中最具有免疫原性的两种蛋白, HA和NA, 提取出来后固定于病毒包膜中, 再加入疫苗佐剂制成的。这类疫苗同上述的灭活病毒疫苗以及减毒活疫苗相比, 缺少了6种病毒的内部蛋白。因此不具备在人体内复制繁殖的能力, 缺乏感染性, 安全性较高, 其免疫原性因HA和NA也较强。此前, 由于基因工程技术还尚未得到发展, 亚单位疫苗的制作成本很高, 而且面临着蛋白质容易降解抗体持续时间短的问题。今天, 利用基因工程技术, 表达出大量的免疫原性蛋白已不再是难题。提取后的HA和NA在疫苗佐剂的加入后也能够稳定的维持其构象, 不被降解。例如1994年Kodihalli等研制了火鸡H5N2病毒NP/HA同ISCOM的复合型亚单位疫苗, 免疫火鸡, 21 d就能够产生较高的抗体滴度, 并且淋巴细胞被激活, 能够免疫同源和异源 (H6N1) 亚型病毒的攻击[7], 等等。基因工程亚单位疫苗产生的抗体安全性很好, 而且能够有效减少不良反应, 其免疫效果及安全性已在国内外的广泛应用中得到了认可。

4 重组病毒载体疫苗

利用反向遗传技术, 将流感病毒复制所需全部基因组导入细胞后, 刺激细胞表达病毒蛋白, 这些蛋白会自我组装, 成为重组病毒。将无致病力或弱致病力的禽流感病毒的全套内部基因作为载体, 加入免疫原性蛋白HA和NA的基因, 利用反向遗传技术来重组包装流感病毒。所得到的致病力弱, 但免疫原性强的病毒便是重组病毒载体疫苗。这些病毒能够在机体内进行有效的复制, 但是对于机体的损伤很低;同时, 又能诱导机体产生针对流行毒株的细胞免疫和体液免疫。Webster和Swayne先后构建了含A/Ty/Ire/1378/83 (H5N8) HA基因的禽痘病毒重组疫苗, 结果证明该苗可对H5N2提供90%~100%的保护[8]。重组活载体疫苗的主要特征是其为杂交的活病毒, 能够自我复制, 因此投入量很低, 同时降低了成本, 免疫时间随着病毒的复制一同进行, 大大增强了机体产生抗体进行免疫的时间。而且不干扰血清学调查, 因此该重组疫苗适用于监测野毒感染。其缺点是流感病毒的不稳定性, 在机体接种疫苗后不能排除流感活病毒会突变为强病毒感染人体。

5 类病毒颗粒疫苗

流感病毒的M1蛋白是病毒中丰度最高的基质蛋白, 曾有报道指出, 在细胞内大量表达M1蛋白时, 其会自发地形成一种病毒颗粒样结构, 称为类病毒颗粒 (VLP) 。VLP同病毒本身的结构十分相似, 而且由于含有病毒蛋白M1, 也能够引发机体产生免疫反应。在应用VLPs到疫苗方面时, 发现其有多个优点:不包含无病毒基因组, 因此绝对不会在人体内进行复制感染, 安全性高;同时, 其还易于分离纯化, 能够大规模生产。

流感病毒疫苗的展望:目前, 流感病毒对于我国乃至世界的公共卫生安全已经造成了极大的威胁和负担, 对流感病毒特别是禽流感病毒的防控已经刻不容缓。一个有效的新型流感病毒疫苗应该是兼具防控为一身, 既能够有效地防治病毒感染人体, 也能够控制病毒在各物种之间的传播。诚然, 这样一个疫苗的产生仍然需要研究人员投入大量的时间和经费, 但是我们确信这种新型疫苗的诞生指日可待。

参考文献

[1]Shaw A.New technologies for new influenza vaccines[J].Vaccine, 2012, 30 (33) :4927-4933

[2]Kemble G, Greenberg H.Novel generations of influenza vaccines[J].Vaccine, 2003, 21 (16) :1789-1795.

[3]Kistner O, Barrett N, Mundt W, et al.Development of a novel influenza vaccine derived from a continuous cell line[J].ALTEX, 2001, 18 (1) :50-54.

[4]Beyer WE, Palache AM, de Jong JC, et al.Cold-adapted live influenza vaccine versus inactivated vaccine:systemic vaccine reactions, local and systemic antibody response, and vaccine efficacy.A meta-analysis[J].Vaccine, 2002, 20 (9-10) :1340-1353.

[5]Jefferson T, Smith S, Demicheli V, et al.Assessment of the efficacy and effectiveness of influenza vaccines in healthy children:systematic review[J].Lancet, 2005, 365 (9461) :773-780.

[6]Fiers W, De Filette M, Birkett A, et al.A"universal"human influenza A vaccine[J].Virus Res, 2004, 103 (1-2) :173-176.

[7]Kodihalli S, Sivanandan V, Nagaraja KV, et al.A type-specific avian influenza virus subunit vaccine for turkeys:induction of protective immunity to challenge infection[J].Vaccine, 1994, 12 (15) :1467-1472.

猪流感病毒研究进展 篇4

1 猪流感病毒的理化性质特征

1.1 形态与结构

SIV是多形性的有囊膜病毒, 常为球形, 直径80～120 nm, 个别丝状体长达数微米, 它常见于刚分离到的病毒颗粒。病毒颗粒有3种蛋白突起, 一种能凝集红细胞的蛋白突起称为血凝素 (hemagglutinin, HA) , 另一种能使病毒颗粒从凝集的红细胞表面释放下来的蛋白突起, 称为神经氨酸 (neuramidinase, NA) 。HA和NA在囊膜上的比例为4∶1～5∶1;膜上的第3种突起称为基质蛋白 (matrix protein, M) , 3种突起均以疏水性氨基酸锚定在类脂膜上。SIV结构可分为3层, 最外层为双层类脂囊膜, 它来自于复制的宿主细胞, 中间层为基质蛋白, 形成一个或若干个球形蛋白壳, 里层是核衣壳, 呈螺旋型对称, 直径9～15 nm, 它含核蛋白 (neucleoprotein, NP) , 3种多聚酶蛋白 (polymerase protein 1, PB1;polymerase protein 2, PB2polymerase protein A) 和病毒单链RNA[6,7]。

1.2 理化特性

1.2.1 pH的稳定性。

猪流感病毒在pH 3.0以下或pH 10.0以上感染力很快被破坏;pH 5.0左右能使SIV血凝素蛋白构型发生改变, 其轻链HA2区溶血序列裸露, 使红细胞发生溶解。

1.2.2 热稳定性。

一般来说, SIV对热敏感, 56℃30min灭活;灭活的顺序为, 病毒颗粒的感染性、神经氨酸酶活性、红细胞凝集活性。病毒在4℃～40℃条件下不稳定, 只能短暂保存, 失去感染性;-10℃～-40℃保存两个月以上, 常使红细胞失去凝集活性;-70℃可保存数年, 冷冻干燥后置4℃可长期保存。

1.2.3 对化学试剂的稳定性。

SIV为有囊膜病毒, 故对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感, 200 mL/L乙醚4℃过夜, 病毒感染力被破坏;对氧化剂、卤素化合物、重金属、乙醇和甲醛也均敏感, 10 g/L高锰酸钾、1mL/L升汞处理3min, 750 mL/L乙醇5min, 1 mL/L碘酊5min, 1 mL/L盐酸3min和1mL/L甲醛30min SIV均可被灭活。

2 猪流感病毒的流行病学

2.1 古典猪H1N1亚型

1918年, 在美国首次发生了SI, 同年在匈牙利和中国也有SI发生的记载, 这与最具灾难性西班牙人流感发生的时间一致。当时猪群所表现的临床症状和病理变化与人群中流行的流感有许多相似之处。但直到1931年Shope才分离并鉴定了第一株SIV, 即古典H1N1 SIV[8]。古典H1N1 SIV在遗传进化上与引起1918年西班牙大流感的流感病毒 (H1N1亚型) 密切相关, 它们都来源于共同的祖先:禽流感病毒 (Avian influenza virus, AIV) , 并有很高的相关性。20世纪70年代以前, 古典H1N1亚型SI主要限制在北美地区, 70年代以后才传入亚洲和欧洲。1940～1960年英国、捷克斯洛伐克和西德等国家报道了猪群中存在抗H1N1 SIV抗体, 直到1976年, 意大利首次从猪群中分离到古典H1N1SIV, 与当时流行于美国的古典H1N1 SIV有非常近的相关性, 流行病学调查表明可能是通过猪只贸易从美国传入, 但这次疫情只限于意大利北部, 并没有在欧洲其他国家传播开。直到比利时和法国报道出现古典H1N1猪流感后, 古典H1N1迅速在欧洲大陆传播开来, 此后, 不断有关于古典H1N1从猪群中分离的报道, 核苷酸同源性分析显示分离株与美国古典H1N1 SIV同源性很高, 亲缘关系相近[9,10]。与人H1N1病毒相比, 古典H1N1 SIV很少发生抗原漂移, 这可能是由于SIV所受的免疫压力要远低于人流感病毒。但进入20世纪90年代后, 北美地区猪群中出现了抗原漂移的古典H1N1 SIV[11]。这些毒株不仅在抗原性和遗传性方面与传统的SIV不同, 致病性也发生了变化, 这可能与在猪群中使用疫苗有关[12]。由于病毒的突变, 从而导致SIV更易对人类健康造成威胁[13]。

2.2 类禽H1N1亚型

1979年, 在欧洲猪群中出现类禽H1N1流感病毒, 在抗原性和遗传性方面与北美古典H1N1 SIV有显著的差别, 而与鸭源的H1N1病毒关系最密切。遗传分析表明, 所有的8个基因节段都是禽源的, 表明是禽H1N1病毒跨物种传播到猪[14]。随后, 在德国、比利时、法国和英格兰均检测到类禽H1N1病毒的存在。类禽H1N1病毒可能比古典H1N1病毒具有更好选择优势以及更强的侵蚀力和致病性。传入猪群2年后, 迅速传遍欧洲大陆。目前, 该类病毒已完全取代古典H1N1 SIV, 成为欧洲猪群中主要的H1N1亚型病毒[15]。与人流感病毒、古典猪H1N1病毒相比, 类禽H1N1病毒进入猪群后, 进化速度明显加快。

2.3 类人H1N1和H3N2亚型

血清学监测研究表明人的H1N1亚型流感毒株很容易传递给猪, 偶尔也有从猪群中分离到类人H1N1病毒, 但是该类病毒流行的一个重要特征是不能在猪群中独立存在, 当人H1N1流行株在人群中消失后, 该类病毒在猪群中也不复存在。在实验条件下, 类人H1N1亚型流感病毒已经表现具有猪与猪之间的传播能力, 但在实际中, 大多数毒株在猪群之间的传播并不容易。1938年Shope血清学监测表明, 在自然条件下, 人流感病毒的流行株可以感染猪。1969年, Kundin等人首次从台湾猪群中分离到香港人的H3N2亚型病毒。随后几年内不断有H3N2病毒和抗体被检测或分离的报道, 但没有引起疾病的发生和流行[16]。大量的血清学调查结果表明, 1968年香港H3N2流感毒株与其变异株迅速传到了欧洲美洲的猪群中, 并且在世界范围内的猪群中存在了数年之久, 但都没有引起呼吸道疾病的暴发和流行。此后, 在大陆不断有学者报道分离到人H3N2病毒或从猪血清中检测到人H3N2病毒抗体。2003年李海燕的调查显示在我国东北、华北、华中、华东、华南和西南地区部分猪群中普遍存在H3和H1亚型SIV, 且以H3亚型为主[17,18]。

3 猪流感病毒疫苗的研究

3.1 全病毒灭活苗

目前市场上使用的SI疫苗都是灭活苗, 有单价苗和H1N1与H3N2双价苗, 这类疫苗在欧美多个国家已实现商品化供应。Heinen等比较了疫苗免疫猪和自然感染猪的免疫效果, 发现疫苗免疫猪在攻毒后短期内排毒, 而自然感染猪则得到完全保护分析表明疫苗免疫猪产生了相同或更高的血清HI、病毒中和抗体及核蛋白特异的IgG抗体, 但是鼻黏膜IgA滴度和淋巴细胞增殖反应较低, 这可能解释了免疫后的亚保护状态。目前商品化的猪流感灭活疫苗对预防猪流感虽然发挥了重要作用, 但是对异源和异型病毒不能提供有效保护, 因此灭活疫苗很难有效控制抗原性多变的SIV在猪群中的感染与传播。

3.2 亚单位疫苗

亚单位疫苗是通过物理化学方法或基因工程手段获取病原体主要免疫原蛋白而制成的一种疫苗, 它可以有效避免利用全病原体生产疫苗而导致的生物安全风险, 并有利于提高疫苗中有效成分的浓度、纯度, 以及开发多价、多联疫苗。

3.2.1 DNA疫苗。

将猪流感病毒免疫原 (HA和NA) 基因单独或者与细胞因子 (白介素-6、γ-干扰素等) 编码基因串联后克隆到真核表达质粒中, 然后再将重组DNA质粒导入机体细胞, 通过机体内源性表达并提呈给免疫系统, 诱导宿主产生特异性免疫应答, 发挥保护作用, 这就是所谓的DNA疫苗。最近Tompkins等[19]用表达A型流感病毒M2共同序列的DNA疫苗免疫小鼠, 诱导出M2特异性抗体, 并且对致死性攻毒产生了保护。先用M2 DNA疫苗初免, 再用表达M2的重组腺病毒加强免疫, 提高了与人流感病毒和禽流感病毒M2交叉反应的抗体并且产生了T细胞反应, 实验结果表明, M2 DNA疫苗初免并强化接种, 能对致死性A型流感病毒 (包括H5N1) 攻击产生广谱保护作用[20]。根据SIV的HA、NA、NP和M等主要抗原表位基因构建的猪流感复合多表位DNA疫苗, 在HeLa细胞中表达的重组蛋白具有良好的抗原性[21], 可能是较理想的猪流感候选疫苗。

3.2.2 活载体疫苗。

母源抗体的存在对疫苗接种有负面影响, 不仅延长了感染猪发热和临床症状, 而且与无母源抗体的免疫猪相比, 猪流感病毒对具有母源抗体的免疫猪诱导的肺炎更加严重[22], 因此理想的疫苗还需排除母源抗体的干扰, 而活载体疫苗是很好的选择。被用作载体的包括人腺病毒5型、猪腺病毒3型、猪伪狂犬病病毒、杆状病毒等。Tang等[23]用含有H3N2 SIV HA的重组腺病毒免疫小鼠, 在免疫后2周产生了针对SIV的高水平HI抗体, 初免后3周再加强免疫, 抗体水平大大提高。虽然这些抗体不能中和异源病毒, 但仍能保护免疫小鼠抗异源病毒的攻击。Wesley等[24]对3周龄小猪分别免疫表达HA和表达HA与NP的重组腺病毒混合物, 免疫猪群在4周内均产生了高水平的特异性HI抗体。免疫HA与NP重组病毒混合物的猪群获得了完全保护, 攻毒后无鼻腔散毒和肺部损伤。因此猪群同时接种这两种复制缺陷型腺病毒疫苗对预防猪流感是有效的, 与商品化疫苗相比的另一个优点是没有母源抗体干扰哺乳小猪的早期免疫[25], 并且这种复制缺陷型重组腺病毒不会传播给哨兵猪[26]。

4 结语

综上所述, SI不仅给畜禽养殖造成了重大经济损失, 而且SIV可直接感染人, 导致人类患病或死亡最近以墨西哥和美国为主的全球甲型H1N1流感的暴发更加坚定了对SIV的研究和防控。科学地预防和控制SI, 进而从源头上降低人类流感大流行发生的风险, 在减少世界经济损失和提高人类卫生健康方面, 都具有深远的意义。

摘要：猪流感病毒 (Swine influenza virus, SIV) 是引起猪的急性呼吸道疾病的重要原发病原之一, 常常与其他病原体混合感染造成更严重的损害。此病在世界各地都有发生, 危害严重, 经济损失巨大, 并对人类的健康构成威胁。目前, SIV已遍布美洲、亚洲、欧洲和非洲, 是规模化养猪场普遍存在且难以根除的群发性疾病。而最近发生的以墨西哥和美国为中心的SIV全球暴发事件, 更加拉响了人类对SIV的警钟。文章对SIV的理化性质、流行病学、疫苗等方面的研究情况进行了综述。

流感病毒培养 篇5

1 禽流感病毒感染和致病的分子机制

1.1 吸附、穿膜和脱壳

病毒粒子血凝素突起识别和结合宿主细胞表面含唾液酸的特异性受体, 使病毒与宿主细胞接触并吸附到细胞膜上, 然后被吞入, 形成胞饮泡, 胞饮泡与溶酶体融合使胞内p H降到5, 病毒粒子血凝素蛋白构型改变使位于轻链HA2N端的融合序列暴露, 引起病毒囊膜与细胞膜融合, 使病毒粒子内部的核衣壳释放到胞浆内。

1.2 基因组的转录与复制

病毒脱去囊膜后其核酸片段进入宿主细胞核。首先, 病毒RNA聚合酶结合到宿主m RNA的5′端, 通过聚合酶组分2的核酸内切酶活性切下11个核苷酸, 这一序列带有帽状结构, 可直接作为引物。引物加上后, 聚合酶组分1以病毒RNA为模板催化合成起始, 并使链延伸。接上去的第一个核苷酸是G, 它与病毒RNA聚合酶的3′端第二个核苷酸互补, 病毒转录酶不转录3′端的第一个核苷酸 (U) 。当链延伸到14个核苷酸长度时, 引物被释放下来, 但3′端的A仍保留在m RNA上, 病毒m RNA的5′端仍为AGC。当链延伸到近5′端的poly (U) 时, 以此为模板合成poly (A) 尾后终止链的延伸。因此, 病毒m RNA是病毒RNA的不完全转录物。6个单顺反子m RNA在核内合成后, 很快转移到细胞浆翻译病毒蛋白。

1.3 病毒蛋白的合成

m RNA在核内合成后转移到细胞浆, 在核糖体上翻译成为病毒血凝素、神经氨酸酶、核蛋白、聚合酶组分1、聚合酶组分2和聚合酶组分PA。NS和M基因的m RNA分别进行剪接, 各产生两个m RNA, 翻译成非结构蛋白NS1、NS2, 和基质蛋白M1、M2。血凝素HA和神经氨酸酶NA在粗面内质网内进行糖基化, 在高尔基体中修饰后运输到细胞膜。

1.4 病毒粒子的装配

首先, HA和NA插入到细胞膜, 然后M1移向细胞浆膜的内侧面, 非连续地贴补使之增厚。NP在细胞浆合成后首先以游离状态存在, 但很快进入细胞核并与新合成的v RNA结合形成核衣壳。8个基因节段和内部病毒蛋白 (NP、PB1、PB2、PA、M2) 一起组装, 并移送到有HA、NA和M2插入的细胞膜位置, 准备出芽。

1.5 病毒的出芽和释放

这个过程可持续数小时而不溶解感染的细胞, 目前机制尚不清楚。M1合成后到达细胞膜并与HA、NA或M2的胞浆区之间相互作用可能是出芽的信号。NA去除病毒囊膜上的唾液酸, 避免子代病毒在细胞膜上的吸附聚集, 从而促进病毒粒子的释放。病毒成熟的最后一步是靠宿主的蛋白酶将HA裂解为HA1和HA2, 使病毒粒子具有感染性并进入新一轮的复制, 这个裂解过程可能在胞外完成。

2 禽流感的诊断

因为禽流感亚型众多, 毒力差别很大, 临床症状也千差万别, 高致病性禽流感除了具有大流行的特点外, 很难与其它传染病区分, 因此单靠临床诊断常常难以定性。AIV的确切诊断有赖于病毒的分离和鉴定。

2.1 病毒的分离

病毒通常在消化道内复制, 所以一般从活禽或死禽的气管和泄殖腔中分离病毒。消化道和呼吸道的组织、分泌物、排泄物也都适合于分离病毒。在高致病性AIV造成全身感染的条件下, 由于严重的病毒血症, 实际上每一器官都能分离到病毒。

临床上分离病毒的方法常用棉拭子取气管和泄殖腔内的分泌物, 再将棉拭子放在含有抗生素的平衡盐溶液中, 以抑制细菌生长。鸡胚接种是目前分离病毒的常用方法。也可收集器官并放在灭菌的小瓶中, 在对器官进行取样时, 应尽量把不同脏器的样品分别收集, 因为从内脏器官分离到流感病毒通常意味着全身感染, 这常与致病性高致病性禽流感有关。

2.2 病毒的鉴定

用鸡红细胞检测鸡胚尿囊液的血凝活性是鉴定禽流感的方法之一, 有常量和微量两种技术。

HA表面抗原亚型的鉴定可在血凝抑制试验 (HI) 中用一组目前已知的16种 (H1~H16) 不同血凝素的抗血清来鉴定HA的亚型。抗HA血清最好用纯化的HA蛋白制备, 或用单克隆抗体, 这样可以避免由于抗NA抗体所产生的空间干扰。但是, 用已知亚型的抗HA抗体不能检测含有新的HA亚型的流感病毒。血凝阳性的病毒尿囊液还应当与新城疫病毒感染所引起的血凝活性区别。

NA亚型通常用制备的9种已知神经氨酸酶的抗血清做神经氨酸酶抑制试验 (NI) 来鉴定。现已经研制出微量NI技术, 这有助于对大量分离物的分析, 并且易于操作。

对于AIV的毒力鉴定, OIE认为, 用1:10倍稀释具有感染性的鸡胚尿囊液, 静脉注射8羽4~8周龄的易感鸡, 每羽0.2ml, 若10d内致死6~8羽, 则这样的流感病毒为高致病性AIV。

2.3 血清学诊断方法

流感病毒重配获新进展 篇6

崔杰团队通过与兰州兽医研究所朱启运、哈尔滨兽医研究所陈化兰团队合作, 针对2014年至2015年在湖南某禽养殖场及周边环境收集的流感病毒数据进行分析, 发现了3株经由H5N6及其他亚型重配而来的新毒株H3N6。动物实验表明两年内当地流行的4种毒株 (H3N2、H3N6、H3N8及H5N6) 均有较低的致病力。

据介绍, 流感病毒在演化过程中出现的重配现象值得警惕, 某些基因重配不仅使得病毒逃避机体的免疫监视, 导致感染和发病, 同时给疫苗预防免疫带来了很大困难。近年来, 有报道表明H5N6能够引起人的感染, 因此, 经其重配产生的毒株不容忽视。

猪流感病毒病的综合防治 篇7

1 病原

甲型 (A型) 流感病毒属于正粘病毒科, 有15个H亚型, 9个N型, 在猪群中常发生流行的血清型多为H1N1、H3N2、H1N2、H1N7、H3N6、H3N1和H2N3等。病毒对干燥和低温抵抗力较强, 对热敏感, 75℃即可杀死病毒。病毒对消毒药敏感, 常用消毒药即可杀灭病毒, 病毒对外界环境抵抗力不强。

猪流感病毒感染仅限于呼吸道, 极少出现毒血症病毒在鼻黏膜、扁桃体、气管、肺及支气管淋巴结上皮细胞中繁殖, 而肺脏是主要的靶器官, 猪流感病毒嗜好整个呼吸道的上皮细胞, 它会在气道和气腔上皮中增殖并损坏这些上皮, 造成这些上皮细胞坏死脱落、肺部嗜中性粒细胞浸润致使气道梗阻并释放酶, 而使肺组织严重受损导致免疫抑制的问题。

2 流行特点

大多数病例多发生在气候多变季节, 为发病高峰。当阴雨、潮湿、闷热、拥挤、营养不良以及饲养条件突变时也会促使本病的发生与流行。各种猪只都可感染, 病猪和带毒猪为传染源, 经呼吸道感染, 通过空气传播。发病快, 传播迅速, 2～3 d内可波及全群。

3症状特征

本病的潜伏期为2～7 d, 病程约1周。病猪表现为突然发热, 体温升高达40～42℃, 精神高度沉郁, 眼结膜潮红, 卧地不起, 寒颤, 关节疼痛, 行走无力, 不食。流黏液性鼻涕, 咳嗽、喘气、腹式呼吸, 呼吸困难。粪便干硬、尿少色黄。妊娠猪流产, 产弱仔, 流产率为10%左右, 新生仔猪死亡率较高。

近年来本病常与蓝耳病病毒, 猪瘟病毒, 呼吸道冠状病毒混合感染, 并常继发副猪嗜血杆菌, 传染性胸膜肺炎放线杆菌, 支气管败血波氏杆菌, 多杀性巴氏杆菌, 肺炎支原体和链球菌等, 使病情复杂化, 并发支气管炎, 肺炎、胸膜炎, 心包炎等。从而容易造成误诊, 增加发病率和死亡率, 造成更大的损失。

4 病理变化

剖检可见鼻、喉、气管及支气管黏膜充血、肿胀, 含有大量的带气泡的黏液。淋巴结肿大、充血;肺呈紫红色, 气肿区, 心叶、尖叶、中间叶切面有大量白色、棕红色泡沫样液体, 肺间质增宽;脾脏肿大, 胸腔与腹腔积液, 含有纤维素性物质;胃肠黏膜有出血性炎症。

5 控制措施

5.1 保持圈舍干燥卫生, 特别是在湿度较大的情况下不要经常冲洗, 采用干湿分离。

5.2 消毒正确、有效的消毒可以极大的降低空气中的病原微生物, 选择大厂家, 如先灵葆蕥的安灭杀, 齐鲁动保的复合酚, 中粮动保的精典等效果较好。

5.3预防性投药, 定期使用防呼吸道药物进行预防性用药, 如威特太妙125 g (袋) +红弓素500～1 000 g拌料1t或兑水1 t饮用, 阿莫西林+泰妙菌素等。

5.4个别治疗。解热镇痛防继发感染, 可选用长效西林肌注+卡巴西林钙饮水等。