五味子提取工艺研究

五味子提取工艺研究（通用8篇）

五味子提取工艺研究 篇1

五味子首载于《神农本草经》, 列为上品, 商品药材有北五味子和南五味子之分。南五味子为木兰科植物华中五味子 (Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.) 的干燥成熟果实, 是许多中成药的主要成分之一, 具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心、保肝之功效, 用于久喇虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、气短脉虚、内热、消渴、心悸失眠等证。南五味子种子[2]含五味子甲素、五味子酯甲、乙、丙、丁、戊等木脂素类成分。药理临床实验[2]表明, 酯甲、酯乙、酯丙、酯丁对迁延性、慢性病毒性肝炎有较好的降SGPT作用, 我厂将五味子乙酯提取后, 制成联苯双酯片。联苯双酯片具有疏肝理气, 降低血清谷丙转氨酶的作用, 对慢性病毒性肝炎、迁延性肝炎、早期肝硬化具有显著疗效 。为了考察不同提取条件对其木脂素类成分提取的影响, 笔者采用正交实验方案, 以总木脂素及五味子酯甲、甲素为指标, 以分光光度法及高效液相色谱法为测定手段, 本着为工业生产降低成本, 得出一种比较理想的五味子提取工艺, 适用于工业化大生产, 对其提取工艺进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

南五味子药材 (由哈药集团制药四厂购进) ;五味子酯甲、甲素对照品, 均由中国生物制品检定所提供, 批号为1764-200005、0766-200010, 供含量检测用;甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器

日本岛津LC-2010C型高效液相色谱仪, 岛津色谱工作站CLASS-VP6.12版。UV-2550型紫外分光光度仪 (日本岛津) 。AB204-N电子分析天平 (梅特勒-托利多上海有限公司) , 电热小型三用水箱 (北京医疗设备厂) , 真空干燥箱。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱:Shim-pack VP-ODS (4.0 mm×150 mm, 5 μm) ;流动相:甲醇-水 (705 ∶ 30) ;流速:1.0 ml/min, 检测波长:254 nm;进样量:供试液、对照液均匀为10 μl;柱温为室温。

1.2.2 对照品溶液配制[4]

精密称取五味子酯甲对照品7.5 mg, 加甲醇溶解并定容于25 ml量瓶中, 即得五味子酯甲对照品溶液;再精密称取五味子甲素对照品7.5 mg, 加甲醇溶解并定溶于25 ml量瓶中, 即得五味子甲素对照品溶液。分别吸取上述各对照品溶液一定量混合, 加甲醇稀释6倍, 即得五味子酯甲和五味子甲素的混合对照溶液。

1.2.3 线性关系考察[5]

吸取混合对照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl分别进样, 测定峰面积, 以峰面积为纵坐标, 对照品的微克数为横坐标进行线性回归, 得回归方程:

Y酯甲=52.17×104+66.52×104x γ=0.9997

Y甲素=-11.35×104+430.42*104x γ=0.9989

结果表明, 五味子酯甲在0.1503 μg～1.002 μg, 五味子甲素在0.06 μg～0.4 μg范围内线性关系良好。

1.2.4 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10 μl, 连续进样品次, 记录峰面积, 结果五味子酯甲、甲素RSD分别为2.8%和1.5%。

1.2.5 样品液的制备[6]

分别称取南五味子种子或粗粉各20 g, 按实验条件回流提取即加入B倍量A浓度的乙醇, 在沸水浴中提取D次, 每次C时间, 离心 (4000 r/min, 30 min) , 上清液浓缩并回收乙醇, 合并浓缩液, 定容到100 ml容量瓶中, 得提取液。

供试品溶液制备[7] 精密吸取此样品液5 ml, 于蒸发皿中水浴蒸干, 置索氏提取器中回流6 h, 蒸干容剂, 用甲醇溶解并定容于25 ml量瓶中, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45 μm) 过滤, 取续滤液作为供试品溶液。

总木脂素的含量测定[8] 精密吸取五味子酯甲对照溶液、供试品及甲醇各80 μl, 分别置于三支具塞的试管内, 挥发去甲醇, 再分别精密加入10%变色酸澄清水溶液1 ml, 硫酸6 ml, 蒸馏水3 ml, 撒手摇匀, 置沸水浴加热30 min, 迅速冷却, 以甲醇为空白, 分光光度法于570 nm处测定吸光度, 计算含量。

五味子酯甲、甲素的含量测定[9] 分别精密吸取各供试品溶液, 混合对照溶液10μl进样, 依法测定, 外标计算含量。

2 结果

2.1 工艺条件考察及数据处理。

2.1.1 粉碎度对提取的影响

为了考察不同粉碎度对木脂素提取的影响, 实验设定在相同提取条件下, 选种子与种子粗粉作对照, 贪污提取, 测定含量, 实验条件及结果见表1。

2.1.2 提取条件考察

以乙醇溶液为提取介质, 选取提取剂浓度、提取时间、提取次数、溶剂用量为主要考察的主要因素, 采取回流方式, 以测得的五味子木脂成分为考察指标, 采用4因素3水平L9 (34) 正交实验方案对提取条件进行了研究, 实验因素水平见表2, 实验方案、结果见表3, 方差分析见表4。

2.1.3 L9 (34) 正交实验

2.1.4 结果分析

极差分析结果显示, 影响提取的因素大小顺序, 总木脂为提取时间 (C) >醇浓度 (A) >提取次数 (D) >醇体积 (B) 。结合因素水平确定的最佳工艺组合, 总木脂为A B C D 即3倍量95%乙醇提取3次, 每次1.5 h;酯甲为A B C D 即4倍量80%提取3次, 每次1.5 h。方差分析结果显示, 提取时间对总木脂素、甲素均有显著性, 而乙醇浓度提取次数对甲素有显著性。由实验结果可知, 乙醇的最佳浓度为80%;提取时间越长, 提取效果越好, 但提取时间长消耗的能量增加, 加大了生产成本, 且效果增加幅度不大, 考虑到工业生产中节约能源、省时, 综合成本与效果, 定提取时间为1.5 h;提取次数越多, 提取越完全, 但提取次数越多乙醇和能量的消耗量就越大, 故结合实际, 提取数定为3次;溶剂用量的增加, 提取度越大, 提取效果越好, 故溶剂用量定为4倍。根据研究极差分析结果, 综合考虑各种因素, 由正交试验结合生产实际, 确定南五味子的提取工艺为A B C D , 即4倍80%乙醇提取3次, 每次1.5 h。

注:查表知:F (2, 2) =19.00 , F (2, 2) =99.00

2.1.5 生产工艺

根据正交试验筛选出的最佳条件提取条件提取五味子, 工艺流程如下。

称取一定经粉碎的五味子粉, 投放到多能提取罐中, 加入80%乙醇溶液至中药材的4倍, 升温加热, 设定好蒸汽压力, 蒸汽压力大小应以维持药液沸腾为度, 从药液沸沸时开始计时, 回流3次, 每次1.5 h, 合并提取液, 静置24 h。将静置后的上清液导入到盘管蒸发器中, 回收乙醇, 进行浓缩, 浓缩至相对密度为1.28～1.32的五味子浸膏。

3 讨论

五味子中木脂素成份属联苯环辛烯型木脂素, 在植物体内常与大量树脂状物共存, 本身在溶剂处理过程中容易树脂化。这是提取过程中的难点, 而且溶剂不易渗透到植物细胞, 南五味子又是植物的果实本乡本土, 很难完全提取出来。

南五味子种子的粉碎与否能显著影响提取效率, 原因是粉碎能使种子皮破裂, 有利于溶剂的渗透及有效成分的溶出, 因此提取时应以粗粉为佳。

根据研究结果, 综合考虑各种因素, 确定南五味子中木脂素的提取工艺为4倍量80%乙醇回流提取3次, 每次1.5 h。通过对不同来源的多批五味子种子木脂素成分HPLC分析及含量测定, 结果显示同一品种不同来源的南五味子药材, 其木脂素成分 (包括总木脂素含量, 酯甲、甲素的含量, HPLC图谱等) 有较大差异, 因此, 南五味子药材品质与药源有很大关系。此外, 采收季节对药材品质的影响也是很重要的一个方面。

由于2000版中国药典中没有规定五味子膏提取方法, 而原部标和省标的工艺方法都采用75%乙醇回流五味子膏。通过实验证明, 用80%乙醇提取五味子, 五味子万分含量较高。因为五味子中木脂素成份属联苯环辛烯型木脂素, 所以适当提高乙醇的浓度, 有利于对五味子中木脂素的提取。

南五味子醇提物及五味子木脂素、甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、酯乙等, 具有抗肝脏损伤和诱导药物代谢酶的作用。可明显促进肝细胞滑面内质网增生, 对肝细胞损伤有明显保护作用。可作为控制联苯双酯片质量的一个指标 。

摘要：目的五味子是我厂联苯双酯片的主要成份之一, 其主要有效成分在一般制备过程中不易提取出来, 严重影响了联苯双酯片的质量和临床疗效。为了提高联苯双酯片的质量、对五味子有效成分的提取工艺进行研究, 尤其是提取工艺的最佳条件。方法采用正交设计法选定乙醇浓度、提取次数和溶媒用量4个因素, 每个因素选定3个水平作为考察内容。实验采用分光光度法、高效液相色谱法 (HPLC) 测定各条件下南五味子提取液中的百分含量, 并以总木脂素及五味子甲、甲素为考察指标。结果最佳提取方案为AB C D, 即使用4倍量的80%乙醇, 回流提取3次, 每次1.5 h。结论为提高工业生产联苯双酯片中南五味子中的含量提供了科学依据。

关键词：正交试验,南五味子,木脂素,高效液相色谱法,提取工艺

参考文献

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典2000版.化学工业出版社, 2000:48-49.

[2]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国国家药典1995版.广东科技出版社, 1995:51-52.

[3]肖培根.新编中药志.化学工业出版社, 2002:435.

[4]肖崇厚.中华药化学.上海科技出版社, 1991:246.

[5]方积乾.医药数理统计方法.人民卫生出版社, 1995:180-183, 266-269.

[6]陈延墉, 等.五味子的研究.南五味子降谷丙转氨酶有效成份的分离和鉴定.中国科学, 1979; (1) :98.

[7]阴健, 郭力弓.中药现代化研究与临床应用.学苑出版社, 1995:28-30.

[8]童玉懿, 宋万志.五味子 (南、北) 的高效液相图谱及木脂素成分含量测定.中国中药杂志, 1989, 14 (10) :35.

[9]侯世祥, 廖工铁, 程宇惠, 等.中药制剂常用提取工艺条件的实验筛选.华西药学杂志, 1998, 4 (2) :120-122.

五味子提取工艺研究 篇2

萝卜水溶性多糖的提取工艺研究

探讨以萝卜为原料提取水溶性多糖的`最佳工艺条件,实验结果表明:萝卜水溶性多糖的最佳工艺条件为料液比1:12,提取时间4 h,提取3次,温度为90 ℃,此条件下多糖得率为1.477%.

作 者：刘剑利 曹向宇 李其久 邹志远 LIU Jian-li CAO Xiang-yu LI Qi-jiu ZOU Zhi-yuan 作者单位：辽宁大学,生命科学院,辽宁,沈阳,110036刊 名：辽宁大学学报(自然科学版)英文刊名：JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)年，卷(期)：36(1)分类号：Q53关键词：萝卜 多糖 提取工艺

五味子提取工艺研究 篇3

1 材料

SFT - 2000 型超临界萃取设备: 美国SFT; UV - 1800 紫外分光光度计: 日本岛津; BSA124S电子天平: 北京赛多利斯。五味子乙素、五味子醇甲标准品: 中国药品生物制品检定所; 五味子药材: 取自本院中药库, 经鉴定为木兰科植物五味子Sehisandraehinensis ( Turez. ) Baill. 的干燥成熟果实。甲醇为色谱纯; 水为重蒸馏水。

2 实验方法

2. 1 正交方案设计固定CO2流量为15L·h－ 1, 分离压力为7MPa, 分离温度为60℃, 以萃取物总量和木脂素总量为指标, 采取L9 ( 34) 正交设计试验方案, 考察萃取温度、萃取压力、萃取时间3 个因素的影响权重。因素和水平见表1。

2. 2 木脂素含量测定

2. 2. 1 标准曲线的制备精密称取五味子乙素标准品0.96mg, 用甲醇溶解定容于25 mL容量瓶中, 制成浓度为0.0384 mg·mL－ 1标准品溶液。分别精密量取上述溶液0、0.3、0. 5、1. 0、2. 0、2. 5 、3. 0mL置于10 mL具塞磨口试管中, 水浴挥干溶剂后, 分别加入10%变色酸溶液0.5 mL、浓硫酸3.5 mL, 加塞, 摇匀后于沸水浴中加热30 分钟后马上取出, 冷却后分别加入2. 0 mL蒸馏水稀释, 摇匀, 以0 号试管为对照, 用UV -9100 紫外分光光度仪在575 nm处测定吸收度。以五味子乙素含量 ( x) 为横坐标, 吸光度 ( y) 为纵坐标, 进行线性回归, 回归方程为y =1. 4191x -0. 0477 ( r =0. 9999〕, 含量在11.52 ~114 μg范围内呈良好的线性关系。

2. 2. 2木脂素含量测定精确称取0. 1g萃取物, 置50mL容量瓶中加甲醇至刻度, 溶解混匀; 吸取0.1mL, 用甲醇再稀释定容于25mL容量瓶; 吸取0. 5mL定容液, 水浴加热挥干溶剂后, 按照“2.2.1”方法操作测定计算。

2. 3 实验方法与结果分别称取干燥至恒重的五味子粉末100g ( 3 ~ 4 号筛) 9 份, 精密称重后装入提取罐中, 分别按正交试验设计的9 组方案进行提取实验。收集萃取物, 测定总木脂素含量。按投料量、萃取物总量、萃取物称取量及稀释倍数、萃取物稀释液吸取量及回归方程分别计算萃取率 ( %) 和木脂素提取率 ( %) , 并以萃取率和木脂素提取率各占50%权重进行分析。实验结果见表2, 方差分析结果见表3。

F0.05 (2, 2) =19.00, F0.01 (2, 2) =99.00

3试验结果分析

结果分析在选定因素水平范围内, 以萃取物和总木脂素为优化实验判定指标, A和B对实验结果有显著影响, C对实验结果无显著影响。综合考虑, 确定A2B2C1优化工艺方案, 即提取温度50℃, 提取压力20MPa, 提取时间90分钟。

4 优化方案验证

4. 1 最佳工艺按最佳工艺条件, 重复3 次试验, 萃取物得率分别为11. 4428%、11. 6845%、11. 5612%, 平均11.5628% ; 总木脂素提取率分别为7. 6410% 、7. 6388% 、7.6376% , 平均7. 6391% 。均高于或接近实验设计方案, 表明实验所确定最佳工艺条件是可行的。

4. 2 五味子醇甲提取率测定按照药典五味子项下含量测定方法［2］, 测定同一批五味子药材中五味子醇甲含量为13.874 mg·g－ 1 ( n =3) , 同样方法测定优化工艺方案萃取物中五味子醇甲含量并折算成药材含量为12. 7086 mg·g－ 1 ( n= 3) , 萃取率达到91. 60% 。

4. 3挥发油提取率［5］按照药典方法测定同一批五味子药材中挥发油含量为2.8764mL·100g－ 1 ( n =3) , 优化工艺方案萃取物中挥发油含量并折算成药材含量为2. 6963 mL·100g－ 1 ( n =3) , 萃取率达到93.74. %。

5讨论

现代研究表明, 五味子中的木脂素成分具有促进损伤肝细胞的修复、降低肝炎患者血清谷丙转氨酶水平等作用, 是保肝、降酶、抗病毒、抗癌的主要药效成分［3］。因此实验选择萃取物和总木脂素为超临界提取优化试验判定指标。从实验数据来看, 萃取物得率与总木脂素的萃取率呈一致性。为简化计算, 各取50%作为综合权重进行计算, 可以分析判断方案优劣。

五味子挥发油对肝细胞色素P -450 具有明显诱导作用, 五味子醇甲是五味子木脂素的主要成分之一, 也是药典规定的药材质量控制指标, 以此两种成分提取率加强验证超临界提取效果, 能进一步判定优化工艺方案。

以萃取物总量和木脂素总量为指标, 五味子超临界提取优化工艺为提取温度50℃, 提取压力20MPa, 提取时间90 分钟, 在此工艺条件下五味子醇甲萃取率达到91. 60%, 挥发油萃取率达到93.74%。

五味保肝丸原为全粉末水丸, 本实验通过优化方中主药五味子超临界提取工艺, 进行浓缩丸的剂型改革研究, 既提高药材生物利用率, 同时降低服药量。

参考文献

[1]王兰青, 王琳, 丁广智.五味保肝丸治疗慢性乙型肝炎疗效观察.中国中医药信息杂志, 2011, 18 (11) 78.

[2]国家药典委员会.中国药典:一部.北京.中国医药科技出版社, 2010:附录63.

土茯苓中提取总黄酮的工艺研究 篇4

采用乙醇溶液提取土茯苓饮片中总黄酮,分析了乙醇浓度、温度、固液比、浸取时间对总黄酮提取率的影响.进行了单因素实验设计,得出优化实验条件:乙醇浓度50%,浸取温度80℃,固液比1:20,浸取时间3h,总黄酮提取率为75.8%.

作 者：王晋黄 池汝安 陈少峰 高洪 周芳 刘敏 WANG Jin-Huang CHI Ru-An CHEN Shao-Feng GAO Hong ZHOU Fang LIU Min  作者单位：王晋黄,陈少峰,WANG Jin-Huang,CHEN Shao-Feng(武汉化工学院,湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室,武汉,430073;江汉大学化学与环境工程学院,武汉,430056)

池汝安,高洪,周芳,刘敏,CHI Ru-An,GAO Hong,ZHOU Fang,LIU Min(武汉化工学院,湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室,武汉,430073)

刊 名：植物研究  ISTIC PKU英文刊名：BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH 年，卷(期)： 26(3) 分类号：Q94 关键词：土茯苓   总黄酮   提取   乙醇  

五味子色素提取及稳定性研究 篇5

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

五味子:以辽宁野生北五味子为原料,阴干、粉碎后备用。

1.1.2 试剂

无水乙醇、氢氧化钠、过氧化氢、亚硫酸钠、苯甲酸钠、抗坏血酸、蔗糖、硫酸铜、硫酸铁等均为国产分析纯。

1.1.3 仪器

紫外可见分光光度计(UV-1800PC),精密数显酸度计(PHS-3TC),恒温水浴锅(HH-S),干燥箱,旋转蒸发器(RE-52A),调温恒温电热套(HPM500),循环水式多用真空泵(SHB-ⅢA)。

1.2 方法

1.2.1 五味子色素提取工艺

分别在保持其他因素相同的条件下进行单因素试验,考察乙醇浓度、浸提时间、料液比、浸提温度对色素提取效果的影响。在此基础上,选用L9(34)正交试验表进行试验设计,最终得出最佳提取工艺。

1.2.2 吸光度的确定

将浸提液适当稀释,制成色素溶液,在500～600 nm波长范围内扫描得吸收光谱图。

1.2.3 稳定性的研究

考察pH值、光照、氧化剂、还原剂、金属离子、食品添加剂等对五味子色素稳定性的影响。在扫描所得最大吸收波长下测定五味子色素在各种环境条件下的吸光度值,以吸光度值的变化为指标来研究五味子色素在不同环境条件下的稳定性。

2 结果与分析

2.1 五味子色素的吸收光谱

五味子色素溶液在500～600nm范围内的吸收光谱如图1所示,其最大吸收波长为532nm。因此,以下试验均以532nm为测定波长。

2.2 提取工艺的确定[3,4]

2.2.1 乙醇浓度的选择

分别以45%、55%、65%、75%、85%乙醇溶液作为溶剂,对五味子色素进行提取。采用1∶20的料液比,70℃恒温水浴加热提取1h。浸提液过滤、离心定容后测定吸光度值,结果如图2所示。

由图2可知,随着乙醇浓度增大,提取量逐渐增大,乙醇浓度为65%时,提取量最高。而后,随着乙醇浓度继续增加,提取量又有所下降。因此后续试验采用65%乙醇作浸提剂。

2.2.2 料液比的选择

采用不同的料液比、65%乙醇、浸提温度70℃的条件下,浸提五味子粉末1h,结果如图3所示。

由图3可知,五味子色素含量随料液比的增大而上升,当料液比达到1∶25时含量达到最大,随后再增大料液比,五味子色素含量增加不明显,说明当料液比达到1∶25时,五味子色素基本可以充分浸提。

2.2.3 浸提时间的选择

采用65%乙醇、1∶25的料液比、浸提温度70 ℃的条件对五味子粉末浸提不同时间,结果如图4所示。

由图4可知,当浸提时间从20min增加到40min时,色素含量先升高,在40min处达到最大后开始减小。综合考虑,40min为适宜浸提时间。

2.2.4 浸提温度的选择

采用65%乙醇、1∶25的料液比,分别在40℃、50℃、60℃、70℃和80℃下浸提五味子粉40min,结果如图5所示。

由图5可知,当温度从40℃升高到70℃时,五味子色素含量有所上升,在70℃时达到最大;当温度继续上升,五味子色素含量下降,这是因为高温导致了五味子色素分解。

2.2.5 正交试验

根据单因素试验结果,选择影响五味子色素浸提效果各因素中有意义的水平做正交试验,以确定最佳提取条件。正交试验结果见表1。

结果表明,各因素对五味子色素提取影响次序为:料液比>乙醇浓度>浸提时间>温度;经验证试验证明最佳提取工艺条件为:料液比1∶25,乙醇浓度45%,浸提温度70℃,浸提时间40min。

2.3 五味子色素稳定性研究[4,5,6,7,8]

2.3.1 光照对色素稳定性的影响

将一定浓度的五味子色素溶液,分别置于室内自然光、紫外光下照射不同时间后测吸光度值,结果如图6所示。由图6可知,随着光照时间的延长,五味子色素溶液吸光度值皆有所变化,但都不明显。说明五味子色素对光照比较稳定。

2.3.2 pH值对叶绿素稳定性的影响

配制一系列不同pH值的五味子色素溶液,放置一定时间后观察颜色变化并测定溶液的吸光度值,结果如表2所示。

表2表明,在pH 1～11范围内,五味子色素溶液吸光度值没有太大变化,颜色呈红色;pH 12时溶液颜色略有变浅;pH>12时,色素溶液颜色发生变化,当pH 13时,观察到溶液呈黄绿色,pH 14溶液呈黄色。由此可知,五味子色素在强碱条件下不稳定,适宜于酸性、中性和弱碱条件下使用。

2.3.3 氧化剂、还原剂对色素稳定性的影响

分别配制含不同浓度过氧化氢、亚硫酸钠的色素溶液,每隔15min后测定溶液的吸光度值,结果如图7、8所示。图7表明,过氧化氢的存在使五味子色素溶液的吸光度值降低,且有随过氧化氢溶液浓度增大而减小的趋势,但一段时间后颜色趋于稳定,溶液颜色变浅,说明五味子色素抗氧化性较差。图8表明,Na2SO3的存在使五味子色素溶液的吸光度略微降低,但五味子色素溶液仍为红色,说明Na2SO3对五味子色素稳定性的影响较小。

2.3.4 常用食品添加剂对五味子色素稳定性的影响

分别配制含有不同浓度的蔗糖、苯甲酸钠、抗坏血酸、氯化钠的系列色素溶液,摇匀每隔15min后测定溶液的吸光度值,结果见图9～12。

图9～12表明,不同浓度的蔗糖、苯甲酸钠、抗坏血酸、氯化钠的加入,对色素溶液的吸光度皆有一定影响,蔗糖对五味子色素吸光度影响较小,浓度较低的蔗糖对五味子色素有一定增色作用;苯甲酸钠对色素影响明显,且无显著规律;抗坏血酸有使五味子色素吸光度减小的趋势,但浓度与吸光度之间无相关性;氯化钠对五味子色素有一定的增色作用。

2.3.5 金属离子对五味子色素稳定性的影响

分别配制含有0.02mol/L Fe2+、Ca2+、Mg2+、Al3+、Na+、Cu2+的色素溶液,放置一定时间后,观察溶液颜色变化,并测定吸光度,结果如图13所示。

从吸光度及溶液颜色看,加入上述金属离子均使五味子色素溶液吸光度增大,其中Fe2+、Cu2+、Al3+对五味子色素的影响较大,溶液颜色略为加深;Ca2+、Mg2+、Na+对五味子色素无明显影响。

3 讨论

通过单因素试验及正交试验确定五味子色素最佳提取工艺为:料液比1∶25,乙醇浓度45%,浸提温度70℃,浸提时间40min。

稳定性试验表明:五味子色素对光照比较稳定;在pH 1～11范围内五味子色素稳定,在强碱性条件下出现颜色改变;强氧化性的H2O2和苯甲酸钠对五味子色素的稳定性有较大影响;Na2SO3和抗坏血酸对五味子色素有较弱的降解作用;低浓度的蔗糖溶液对五味子色素溶液有一定稳定作用;氯化钠对色素有一定增色作用;金属离子Ca2+、Mg2+和Na+对五味子色素无明显影响,Fe2+、Cu2+和Al3+对五味子色素影响显著,使溶液颜色加深。因此,在五味子色素的提取、加工、储存和使用过程中,应尽可能在避光、酸性或弱碱、低温条件下进行,避免和H2O2、苯甲酸钠等接触。

摘要：目的:研究五味子色素的提取工艺条件及色素稳定性。方法:在单因素实验基础上利用L9(34)正交试验确定最佳提取工艺;以吸光度值的变化为指标,研究色素稳定性。结果:最佳提取工艺为∶料液比1∶25,乙醇浓度45%,浸提温度70℃,浸提时间40min;五味子色素光稳定性较好;在酸性、弱碱性条件下稳定,当pH≥12时出现颜色变化;对糖、氯化钠有一定稳定性;抗坏血酸和Na2SO3对色素影响较小;苯甲酸钠和H2O2对色素影响显著;金属离子Ca2+、Mg2+、Na+对色素无明显影响,Fe2+、Cu2+、Al3+对色素影响显著。

关键词：五味子,色素,提取,稳定性

参考文献

[1]陈存社,董银卯,陆辛玫.食用天然色素的提取及其稳定性研究[J].天然产物研究与开发,2001,13(6):39-40.

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[3]范荣军,刘派,任涛.五味子红色素的提取工艺[J].吉林大学学报,2008,46(4):784-788.

[4]李进,瞿伟菁,吕海英.黑果枸杞色素的提取和精制工艺研究[J].天然产物研究与开发,2006,(18):650-654.

[5]张瑞宇,王文娟.金莲花天然色素的提取方法与稳定性研究[J].食品研究与开发,2007,28(03):60-65.

[6]陈阳,王军华,陈亚光.红花芸豆色素的提取及稳定性研究[J].食品科学,2007,28(06):175-179.

[7]梅广,张坤,吴桢.紫玉米芯色素稳定性的研究[J].四川食品与发酵,2007,43(136):48-51.

五味子提取工艺研究 篇6

超声波应用于提取植物的有效成分,具有操作简便、无需加热、提取率高、速度快、不破坏组织结构等特点。此技术已在药用植物有效成分提取等方面有较多的应用。本实验以超声波技术为基础,探讨了超声功率、料液比、温度、时间等因素对五味子木脂素提取率的影响,采用正交设计试验的方法确定了最佳工艺条件,旨在对北五味子木脂素的开发利用提供理论基础和实验依据。

1 实验部分

1.1 方法

1.1.1 木脂素标准曲线的制备

精密称取20mg五味子乙素标准品,用甲醇溶解,摇匀,定容于100ml容量瓶中,使之成为浓度为0.2mg/ml五味子总木脂素标准品溶液,作为贮备液备用。分别精密量取上述溶液0.0ml,0.lml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml,0.6ml,0.7ml,0.8ml,0.9ml,1.0ml于试管中,水浴加热挥干溶剂后,分别加入10%变色酸溶液0.5ml、浓硫酸3.5ml,加塞,摇匀后于沸水浴中加热30分钟后,马上取出,冷却后,分别加入2.0m L蒸馏水稀释,摇匀,冷却后,以0号试管为对照,用756分光光度计,在575nm处测定吸收度。以五味子乙素量为x,吸光度为y做图,并采用二元线性回归法求回归方程为y=8.0214x+0.038,R2=0.9976。结果见图1。

根据方程得出北五味子提取物总木脂素量计算公式如下:

x=(y-0.038)/8.0214

y:吸光度;x:五味子提取物总木脂素量mg

1.1.2 木脂素的测定

北五味子粉碎、过60目筛,精确称量等量北五味子粉,放入超声循环提取机中,分别按一定的提取条件(超声功率,时间,温度及料液比)提取北五味子木脂素,离心,浓缩,干燥得提取物。

精确称取0.1000g提取物,用甲醇溶解,摇匀,定容于10m L容量瓶中,吸取0.2ml定容液,水浴加热挥干溶剂后,采用标准曲线测定方法测定。

按1.1.1方法测定木脂素提取率。

五味子总木脂素提取率(%)=五味子提取物总木脂素量/样品量×100%

1.1.3 正交试验因素与水平设计

2 结果与讨论

不同工艺下提取物的收率,见表2

试验中各因素影响大小顺序,总木脂素提取率均为温度(B)>功率(A)>时间(C)>料液比(D)。通过正交试验确定北五味子木脂素超声波法最佳提取条件为A2B3C3D2,即超声功率为1050W、料液比为1:20、提取温度为70℃、提取时间为120min。

2.1 超声功率对北五味子木脂素提取率的影响超声功率是超声波法中很重要的操作参数。结果表明,随着超声功率的增大,提取率逐渐增大,但超声功率大于1050W后,提取率趋于平缓,选择超声功率为1050W。

2.2 提取时间对五味子木脂素提取率的影响

提取时间在120min时峰最高,提取率最大,故选择提取时间120min。

2.3 提取温度对北五味子木脂素提取率的影响

当萃取温度在50℃~70℃时提取率增幅很大,萃取温度在70℃~90℃时提取率递增,增幅减缓。选择萃取温度70℃。

2.4 料液比对五味子木脂素萃取率的影响

当料液比≥1:20(g:ml)时提取率趋于平缓,所以选择料液比为1:20。

根据以上各单因素试验的结果,采用四因素三水平L9(34)的正交试验对五味子木脂素的超声提取工艺进行优化。其实验因素水平见表1,L9(34)试验设计与结果见表2。

3 结论

本实验采用超声波法提取五味子木脂素,在超声功率、提取时间、提取温度、料液比各单因素试验的基础上,采用正交试验得出超声波法提取五味子木脂素的最佳条件为:超声功率为1050W、料液比为1:20、提取温度为70℃、提取时间为120min,在此条件下的五味子木脂素得率为6.25%。

参考文献

[1]张兰杰,张维华,赵珊红.北五味子果实中多糖的提取与纯化研究[J].鞍山师范学院学报,2002,03,4(1):58-60.

[2]谢碧霞.五味子的利用现状与开发前景[J].湖南林业科技,2004,31(5):57-58.

五味子提取工艺研究 篇7

1 仪器与试药

1.1 仪器

半自动生化仪,型号:RT1904C。酶标定量测试仪:奥地利特TECAN公司,型号:F039003。

1.2 药品及试剂

五味子醇提取物:沈阳医学院药理教研室提供;丙戊酸钠:山东仁和堂药业有限公司,批号:20090221;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化歧化酶(SOD)的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒:上海酶联生物科技有限公司。

1.3 动物

昆明种小鼠120只,体重25～30 g,健康,雌雄各半,由沈阳药科大学动物实验中心提供。

2 方法与结果

2.1 实验动物分组及给药方法

实验动物40只,雌雄各半,随机分成4组:空白对照组,模型组,五味子醇提取物低剂量组(五味子低剂量组),五味子醇提取物高剂量组(五味子高剂量组),每组10只。适应性喂养3 d后,给药方式:对照组给予生理盐水;模型组给予丙戊酸钠80 mg/(kg·d)(造模剂量预实验获得);五味子醇提取物低剂量组给予丙戊酸钠同时给五味子醇提取物50 mg/(kg·d),五味子醇提取物高剂量组给予丙戊酸钠同时给五味子醇提取物100 mg/(kg·d);连续灌胃给药14 d。实验期间各组小鼠置于安静环境分笼饲养,自由摄食饮水,每天称量体重,观察动物进食及活动情况。

2.2 血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量的检测

实验动物于给药后禁食12 h。眼球采血置于带抗凝剂的EP管中,检测ALT、AST指标,评价五味子醇提取物减轻丙戊酸钠的肝脏毒性作用。

2.3 ELISA检测肝组织中GSH-Px、SOD含量

取各组肝组织100 mg,加入生理盐水900μL,机械匀浆。静置10 min后,4℃,3000 r/min,离心15 min后取上清液。制备标准曲线,检测肝组织中GSH-Px,SOD含量。

2.4 五味子醇提取物的协同抗癫痫作用

取小鼠80只,雌雄各半原则,随机分为模型对照组,五味子醇提取物组(五味子组),丙戊酸钠组,丙戊酸钠联合五味子醇提取物组(丙戊酸钠加五味子组)。按照组别给药:模型对照组给予生理盐水;五味子组给予五味子醇提取物100 mg/(kg·d);丙戊酸钠组给予丙成酸钠80 mg/(kg·d);丙戊酸钠加五味子组给予丙戊酸钠加五味子醇提取物100 mg/(kg·d),连续给药7 d,于第7天经腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),24 h后注射硫酸阿托品(1 mg/kg),30 min后再注射匹罗卡品(300 mg/kg)。观察小鼠出现明显的肢体阵挛、强直及跌倒等癫痫症状。按照经典的Racine癫痫发作行为标准进行癫痫的行为学评价[11]。

2.5 统计学方法

实验结果采用SPSS 17.0软件处理数据,计量资料以均数±标准差(±s)表示,多组间的比较采用单因素方差分析。两两比较采用LSD-t检验。计数资料采用确切概率法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.6 结果

2.6.1 五味子醇提取物对肝酶的影响

结果显示,与空白对照组比较,模型组ALT、AST升高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,五味子高剂量组ALT、AST降低明显,差异有统计学意义(P<0.05)。各组白细胞(WBC)变化不明显。见表1。

注:与空白对照组比较,#P<0.05;与模型组比较,*P<0.05;ALT:丙氨酸氨基转移酶;AST:天冬氨酸氨基转移酶;WBC:白细胞

2.6.2 五味子醇提取物对血清酶的影响

结果显示,与空白对照组比较,模型组SOD、GSH降低明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,五味子高剂量组SOD、GSH升高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

注:与空白对照组比较,#P<0.05;与模型组比较,*P<0.05;SOD:谷胱甘肽过氧化物酶;GSH:超氧化歧化酶

2.6.3 五味子醇提取物协同抗癫痫作用

结果显示,与模型组比较,丙戊酸钠加五味子组Ⅳ级、Ⅴ级动物比例明显降低(P<0.05)。见表3。

注:与模型对照组比较,*P<0.05

3 讨论

丙戊酸钠作为临床上以应用多年的广谱抗癫痫药,可导致严重的肝损伤甚至肝衰竭[11]。其机制可能是:大量丙戊酸钠影响肝细胞正常代谢,使细胞内产生自由基及自由基样物质,产生过氧反应,进而造成肝细胞破坏和肝脏功能障碍[12]。五味子富含多种保肝成分[13],其主要机制包括:清除肝脏代谢中产生的自由基,抑制脂质过氧化作用,进而保护肝细胞免受自由基损伤[8]。研究表明五味子对ALT升高的调节有独特作用[14]。五味子多糖明显降低老年大鼠血清丙二醛(MDA)含量,并提高老年大鼠血清SOD、过氧化氢酶(CAT)和GSH-Px活性,提示五味子多糖具有改善体内自由基代谢紊乱的作用[15,16]。Leong等[17]发现,五味子乙素能明显激活AML12细胞中ERK1/2及Nrf2,从而激活MAPK通路,最终使谷胱甘肽的表达增强,阻断氧化剂促凋亡效果。实验证明,癫痫发作时引起神经元异常放电的内向电流主要是Ca2+内流[17],当Ca2+通道通透性增加时,Ca2+大量内流,引起神经细胞持续较长的去极化反应及阵发性去极化漂移或称爆发性放电,诱发癫痫发作。有研究报道五味子乙素可调节神经元的同步放电,抑制神经细胞内钙离子浓度[18]。五味子提取物能明显减少小鼠活动次数,有明显镇静作用。此外五味子提取物还能增加小鼠睡眠次数,延长睡眠时间[19]。为五味子的协同抗癫痫作用提供理论依据。

五味子提取工艺研究 篇8

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪, 紫外检测器, 电子天平, 超声波清洗器, YLN-II型三用紫外分析仪。

1.2 试药

五味子对照药材, 五味子醇甲对照品, 甲醇 (色谱纯) , 水为双蒸水, 其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

筛选制备工艺条件

2.1 正交试验

根据预试验结果, 以五味子醇甲的转移率和出膏率为考察指标, 以煎煮次数、提取时间、加水量作为3个因素, 因素水平见表1。对所得的实验结果进行分析表明:RC>RB>RA;同时因素C对出膏率和五味子醇甲的提取转移率均有显著影响, 然而因素B仅对出膏率有显著的影响。综合以上结果, 最终将提取条件确定为:A1B2C3, 即用8倍量的水煎煮3次, 每次煎煮时间为60min。

为了验证所选条件的合理性, 我们按照优化后的工艺条件提取3批药材, 五味子醇甲的转移率高, 并且相对较为稳定。故确定提取条件为:加8倍量的水、煎煮3次、每次60min。

2.2 制备工艺

按上述确定的工艺条件来提取五味子, 减压浓缩后干燥并制成干浸膏, 粉碎, 干浸膏和辅料的比例为1:1加入糊精, 混和均匀, 取适量无水乙醇将其制成软材, 然后用14目筛制粒, 60℃干燥4h, 整粒, 即得五味子配方颗粒。

3 质量标准

3.1 定性鉴别

取本品粉末0.5g, 加三氯甲烷10m L, 加热回流0.5h, 滤过, 然后取滤液将其蒸干, 取残渣并加入三氯甲烷2m L使其溶解, 即供试品溶液。取五味子对照药材粉末约1.0g, 按照上述同法将其制成对照药材溶液。另取糊精0.5g, 同法制成阴性对照品溶液。再取五味子甲素4mg, 加4m L三氯甲烷使之溶解, 作为对照品溶液。

精密吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照品溶液和对照品溶液各5μL, 分别将其点于同一硅胶G薄层板上, 以石油醚-甲酸乙酯-甲酸 (3:1:0.2) 作为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置于254nm紫外光灯下检视显色清晰。结果显示:在与对照药材色谱的相应位置上, 供试品色谱中的荧光暗斑点要少;在五味子甲素色谱处, 配方颗粒及对照药材均显与对照品相同颜色的斑点, 且阴性对照品的色谱无干扰。

3.2 样品含量的测定

3.2.1 色谱条件色

谱柱:C18柱 (250mm×4.6mm, 10μm) ;流动相:甲醇-水 (14:5) ;检测波长:252nm;流速:0.8m L·min-1;进样量:10u L。

3.2.2 样品溶液的制备

取本品粉末约100mg, 精密称定, 放于20m L量瓶中, 取适量甲醇加入量瓶中, 超声15min后, 室温放冷, 用甲醇稀释溶液至刻度, 摇匀, 滤过, 续滤液即为供试品溶液。取糊精约50mg, 精密称定, 按供试品溶液的制备方法将其制成阴性对照溶液。精密称取适量五味子醇甲对照品, 加甲醇溶液将其制成浓度为10μg·m L-1的对照品溶液。分别吸取10μL上述各溶液并注人高效液相色谱仪中, 结果表明, 糊精对五味子醇甲的测定无干扰。

3.2.3 线性关系考察

精密吸取对照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12μL, 分别注入液相色谱仪中, 按3.2.1项下的色谱条件来测定, 计算峰面积, 以峰面积为纵坐标, 五味子醇甲的进样量为横坐标来绘制标准曲线, 得回归方程为:Y=1093219X+1179, r=0.9997。结果表明, 五味子醇甲在0.0412-0.315μg范围内线性关系良好。

3.2.4 精密度试验

精密吸取上述供试品溶液10μL, 重复进样6次, 按照上述色谱条件来测定, 记录峰面积。计算得RSD=1.28% (n=6) 。

3.2.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10μl, 在室温下放置0, 3, 6, 9, 12, 18h后进行测定, 得五味子醇甲的色谱峰面积RSD=1.31%, 结果表明该供试品溶液在18h内具有良好的稳定性。

3.2.6 加样回收率试验

精密称取已知含量的五味子配方颗粒粉末约40mg, 置于50ml量瓶中, 精密加人定量的对照品五味子醇甲溶液, 按3.2.2项下的供试品溶液的制备方法和色谱条件来进行测定, 计算回收率为100.58%, RSD=1.12%。

4 讨论

五味子提取工艺参数为:加8倍量水, 煎煮提取3次, 每次60min。

本文采用薄层色谱法对五味子配方颗粒进行定性鉴别, 该方法简便、快速、准确可靠, 不仅可以提供更多更准确的定性信息, 而且薄层色谱法几乎成为中药材和中成药首选的鉴别方法。同时还采用HPLC法检测该配方颗粒中五味子醇甲的含量, 该法快速灵敏、精密度高、重现性好、易于操作。

摘要：目的:优化五味子配方颗粒的提取工艺, 并建立五味子配方颗粒的质量标准研究。方法:采用L9 (34) 正交设计安排实验来优化五味子配方颗粒的提取工艺, 采用薄层色谱法进行定性鉴别, 并用高效液相色谱法测定五味子醇甲的含量。结果:五味子的提取工艺为每次加入药材量的8倍水, 连续煎煮3次, 每次60min;在薄层色谱的图谱中能够检测出五味子的特征斑点;五味子醇甲在0.0412-0.315μg范围内线性关系良好, r=0.9997, 加样回收率为100.58%, RSD=1.12%。结论:该提取工艺和质量标准研究的方法合理、操作简单, 有效成分提取效率高, 能够为该药的生产和质量标准研究提供科学依据。

关键词：五味子配方颗粒,薄层色谱法,高效液相色谱法,工艺,质量标准

参考文献

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