吴茱萸的提取工艺研究

吴茱萸的提取工艺研究（精选7篇）

吴茱萸的提取工艺研究 篇1

吴茱萸为芸香科吴茱萸属植物吴茱萸的干燥近成熟果实[1]。吴茱萸始载于《神农本草经》。吴茱萸用于五更泄泻, 外治口疮、高血压症、厥阴头痛、寒湿脚气、经行腹痛等症的治疗。现代药理研究表明, 吴茱萸具有降低血压、增加血流、止呕、抗脑缺氧、镇痛作用、抗炎、抗溃疡、保肝利胆作用、扩张血管等作用。本文对吴茱萸次碱进行测定, 以含量测定为主要指标考察吴茱萸的提取工艺。

1 仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪、安捷伦色谱工作站、安捷伦1100可变波长检测器、百灵LA114型电子天平 (常熟市百灵天平仪器有限公司) 、722s分光光度计 (上海精科有限公司) 、KQ-250DB型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 、旋转薄膜蒸发仪 (上海申生科技有限公司) 、TGL-16G高速离心机、pHS-2C型精密酸度计 (上海精科雷磁厂) 、CD-100L华迪超导热风干燥箱 (浙江新昌暖通设备厂) 、吴茱萸次碱对照品 (中国药品生物制品检定所提供) 。甲醇、乙腈为色谱纯, 水为注射用水, 其它试剂试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取次数的选择。

按处方比例称取药材, 分别加入体积分数10%乙醇加热回流提取3次。3次提取加乙醇量依次为5, 4和3倍;每次提取2小时, 过滤, 分别收集各次提取液, 备用。采用高效液相法测定三次提取液中吴茱萸次碱的含量。第3次提取吴茱萸次碱含量分别占3次提取总量的10.2%, 说明第三次提取时, 有效成分还有一部分, 所以采用提取次数为3次。

2.2 正交试验设计。

选择乙醇体积分数、加醇量、提取时间作为考察因素, 采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平, 用L9 (34) 正交表进行试验, 因素水平表见表1。

3 含量测定

3.1 色谱条件。

色谱柱为DiamonsilTM (钻石) C18 (200mm×4.6mm, 5μm) ;乙腈一水一四氢呋喃一冰醋酸 (51:48:1:0.1) 为流动相;检测波长为210nm;流速1.0ml·min-1;柱温:30℃。

3.2 供试品溶液的制备。

取吴茱萸提取膏, 精密量取 (约含吴茱萸次碱1mg) , 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇100ml, 密塞, 精密称定重量, 超声处理 (240W, 40kHz) 25min, 放冷, 精密称定, 用甲醇补足重量, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过, 即得。

3.3 对照品溶液的制备。

精密称取吴茱萸次碱对照品约5mg, 置100ml容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取1ml至25ml容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每1ml溶液中含吴茱萸次碱2μg) 。

3.4 标准曲线的制备。

将浓度为8μg/m, 4μg/m, 2μg/ml, 1μg/ml, 0.5μg/m, 0.25μg/m, 的对照品溶液分别吸取20μl注入HPLC, 以进样量 (μg) 为横坐标, 峰面积积分值A为纵坐标, 绘制标准曲线, 回归方程为Y=6612.55X-1002.96, r=0.99996 (n=6) 。试验表明, 吴茱萸次碱对照品在0.25～8μg/ml范围内线性关系良好。

3.5 阴性干扰试验:

依照处方取除去吴茱萸, 按提取工艺提取醇膏, 用供试品溶液制备的方法, 制成阴性对照溶液, 用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制, 观察在与吴茱萸次碱相同的保留时间处是否存在吸收峰, 结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与吴茱萸次碱相同保留时间处不存在吸收峰, 因此说明选定的条件测定吴茱萸次碱无干扰, 具有较强的专属性。

3.6 精密度试验。

精密吸取吴茱萸次碱对照品溶液重复进样5次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.53%。

3.7 重现性试验。

分别称取同批吴茱萸提取膏6份, 按质量标准含量测定项下方法测定含量, 并计算样品的RSD值为0.46%, 此含量测定方法的重现性良好。

3.8 回收率试验。

采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分别精密添加一定量的吴茱萸次碱对照品, 按供试品制备所述方法测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为99.51%, RSD为0.72%。

4 实验结果

按照L9 (34) 正交设计表条件进行试验, 分别测定吴茱萸的含量, 并进行多指标综合评分, 评分时, 以各指标的最大值为参照将各数值进行归一化, 得到最佳的提取工艺10%乙醇提取三次, 提取液为倍数为10倍, 10倍, 8倍, 提取时间为1.5小时, 1.5小时, 1.0小时。

5 讨论

5.1 流动相的选择。

分别考察乙腈-0.05%磷酸溶液 (20:80) , 乙腈一水一四氢呋喃一冰醋酸 (51:48:1:0.1) , 甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 (15:85:1:0.2) 不同比例的流动相, 结果以乙腈一水一四氢呋喃一冰醋酸 (51:48:1:0.1) 为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用乙腈一水一四氢呋喃一冰醋酸 (51:48:1:0.1) 为流动相。

5.2 检测波长的选择。

制备吴茱萸次碱对照品稀释液照紫外-可见分光光度法 (中国药典2010版一部附录ⅤA) , 于190～900nm波长范围内进行全波长光谱扫描, 记录吸收光谱。在210nm处有最大吸收峰, 故选用210nm为检测波长[2]。

5.3 本实验结合资料和实际生产条件等因素对吴茱萸醇提工艺进行了优化[3,4,5]。

试验发现因素水平范围内, 各因素作用主次顺序为加醇量>提取时间>乙醇体积分数。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典第一部[M].北京:人民卫生出版社, 1998.

[2]国家药典委员会.中国药典第二部[S].北京:化学工业出版社.

[3]甄攀, 杨风珍.吴茱萸总生物碱提取条件的考察[J].中国中药, 2000, 25 (8) :505.

[4]赵冬梅, 张英, 毕开顺.吴茱萸汤不同配伍情况下生物碱含量的RP-HPLC测定[J].药物分析, 1999, 19 (1) :16.

[5]于治国, 侯晓虹, 时雅曼, 等.HPLC测定吴茱萸及其制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量[J].中国药学, 1999, 34 (10) :691.

吴茱萸的提取工艺研究 篇2

脑脉I号胶囊提取工艺的研究

[目的]脑脉I号胶囊为治疗中风中脏腑阴闭证的临床有效制剂,主要由黄芪、天麻、石葛蒲、川芎等组成,实验旨在优选该方的提取工艺.[方法]采用均匀设计法,以黄芪甲甙含量、干固物得率为指标,考察药材的.提取时间、提取次数、溶媒量、乙醇浓度4个因素对提取工艺的影响.[结果]最佳提取工艺为:A6B2C3D3,即溶剂为75%乙醇、溶剂用量为6倍、提取60min、提取次数为3次.[结论]均匀设计法适用于中药复方制剂提取工艺中多因素的优选实验.

作 者：袁小红 丘小惠 黄志海 欧爱华 刘茂才  作者单位：广州中医药大学第二附属医院中心实验室, 刊 名：广州中医药大学学报  ISTIC英文刊名：JOURNAL OF GUANGZHOU UNIVERSITY OF TRADITIONLA CHINESE MEDICINE 年，卷(期)：2001 18(2) 分类号：B284.2 关键词：均匀设计法   脑脉I号胶囊/生产和制备   黄芪甙/标准  

超声辅助提取酸枣多糖的工艺研究 篇3

【摘 要】 目的：以酸枣果肉为原料，研究超声辅助法对酸枣果肉多糖提取得率的影响。方法：在单因素试验基础上采用正交实验法研究温度、料液比、超声功率对酸枣多糖得率的影响，进一步优化超声提取的工艺。结果：酸枣多糖的最佳提取工艺为：提取温度80℃，料液比为1∶25，超声功率80W，超声时间40min。在该条件下酸枣多糖的提取率可达18.81 %，产品为淡黄色粉末。结论：与传统的水热提取法相比，超声辅助提取酸枣多糖时间短、收率高。

【关键词】 超声辅助；提取；酸枣果肉；酸枣多糖

【中图分类号】R284.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）13-0006-02

酸枣Ziyphus spinesu （Bunge）Hu.为属李科的枣属植物，主产于我国北方，在中南各省市也有分布。成熟酸枣的果仁（酸枣仁）是我国传统名贵中药材，含有黄酮、皂苷、生物碱等多种活性成分，具有镇静催眠的功效[1]。目前，酸枣的利用主要以酸枣仁药用为主，酸枣果肉则大多被当作废弃物丢弃，而据文献报道，酸枣的果肉中也富含多种活性成分，具有较高的营养价值[2]。

植物多糖是近年来中药研究的热点领域，生物活性也不断被挖掘[3]。酸枣果肉多糖很早就被证明具有增强体液免疫和细胞免疫的功能[4]，另有报道酸枣果肉多糖具有抗氧化的作用，可提高小鼠血中SOD和CAT水平，可降低血中MDA水平[5]，酸枣果肉多糖对小鼠CCl4急性肝损伤具有明显的治疗作用[6]，因此研究酸枣多糖的高效提取具有重要意义。

与传统的水提法相比，超声辅助提取法具有提取时间短、收率高等特点，在多糖提取中被广泛使用，是提取领域的新方法与新趋势之一[7-8]。本文利用超声辅助水热法提取酸枣果肉中的酸枣多糖，并通过单因素和正交实验优化提取工艺，为酸枣资源的综合开发和利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

1.1.1 仪器 KQ-250DA超声波清洗仪（上海昆山超声仪表厂）； SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

1.1.2 材料 新鲜酸枣采自陕西省澄城县，去核，果肉干燥后粉碎过筛备用；所用试剂均为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 提取工艺 取酸枣果肉适量，烘干，粉碎过筛，称取酸枣果肉粉5g，加石油醚脱脂，95%乙醇脱色素，加入相应比例的纯净水（一定的温度和超声频率）提取30min，抽滤，滤液浓缩至原液的五分之一，加入4倍体积无水乙醇，4℃静置过夜，抽滤，滤渣醇洗，干燥称重。酸枣多糖得率（%）=样品中酸枣多糖质量（g）/样品质量（g）×100%。

1.2.2 单因素试验 ①时间对酸枣多糖得率的影响：各份酸枣粉分别超声辅助提取10、20、30、40、50、60min，料液比1∶25，温度50℃，超声频率50W。②料液比对酸枣多糖得率的影响：各份酸枣粉分别按料液比1∶10、1∶15， 1∶20、1∶25、1∶30加入纯净水，温度50℃，超声频率50W。③温度对酸枣多糖收率的影响：各份酸枣粉温度分别为50、60、70、80、90℃，料液比1∶25，超声频率50W。④超声频率对酸枣多糖得率的影响：各份酸枣粉分别为超声频率40、50、60、70、80、100W，料液比1∶25，温度50℃。在此基础上设计正交试验，考查温度、料液比、超声功率、超声时间对酸枣多糖得率的影响，确定超声辅助提取酸枣多糖的最佳工艺。

1.2.2 正交实验设计 根据单因素试验结果设计正交实验，正交实验因素及水平见表1。

2 结果与分析

2.1 超声时间对酸枣多糖得率的影响 由图1可知，在料液比1∶25，温度50℃，超声频率50W的条件下，酸枣多糖的得率随着时间的延长一直增加，时间30min以前随时间增加明显，当时间超过30min 后，得率随着时间的延长依然增加，但是增加不再明显。因此选择30min为试验时间。

2.2 料液比对酸枣多糖得率的影响 由图2可知，在温度为50℃，超声频率为50W的条件下，料液比对酸枣多糖的得率影响较大，随着料液比的增大，酸枣多糖的得率呈上升趋势。当料液比大于1∶25时，得率达到最大值，此后随着料液比的增大，多糖收率不再显著增加。因此选择1∶25为试验的料液比。

2.3 温度对酸枣多糖得率的影响 由图3可知，在料液比为1∶25，超声频率为50W的条件下，当温度低于60℃时，酸枣多糖的得率随温度升高变化不大，温度超过60℃时酸枣多糖的得率随着温度的升高增加温度很快，当温度达到70℃时得率达到最大值，此后随着温度升高得率不再显著增加。因此选择70℃为试验温度。

2.4 超声频率对酸枣多糖得率的影响 由图4可知，在料液比为1∶25，温度50℃的条件下，酸枣多糖的得率随着超声频率的增加而增加，当超声频率达到70W时得率达到最大值。此后，随着超声频率的增大，得率不再显著增加。因此选择超声频率70W为试验频率。

2.5 正交实验 单因素实验的基础上，以提取温度、料液比、超声功率为因素设计正交实验，实验结果如下（见表2）。

正交实验结果显示，各条件影响酸枣多糖得率的主次顺序为B>D>C>A，最佳条件为A3B2C3D3，即温度80℃，料液比为1∶25，超声频率80W的条件下提取40min，酸枣多糖的提取得率最高，可达17.92 %。

2.7 正交实验最佳条件验证 按最佳条件A3B2C3D3进行酸枣多糖超声辅助提取的重复验证实验，结果显示，最佳条件下酸枣多糖的提取得率可达18.81%；对比试验则表明超声辅助提取法的提取效率高于传统的水热提取法（表3）。

3 讨论

研究结果显示，酸枣多糖的最佳提取工艺为：提取温度80℃，料液比为1∶25，超声功率80W，超声时间40min。在该条件下酸枣多糖的提取率可达18.81 %。与传统的水热提取法相比，超声辅助提取法能在大大缩短提取时间的同时提高提取效率，是酸枣多糖提取的一条高效途径。

参考文献

[1] 黄小娟，姜建国，林福兰，等.酸枣仁多糖的提取及其镇静催眠作用的研究[J].现代食品科技，2006，22（2）：37-39.

[2] 吴树勋，李兰芳，王洪占，等.酸枣的营养成分及营养实验研究[J].河北医药，1990，12（1）：31-31.

[3] 马红樱，张德，胡春香，等.植物活性多糖的研究进展[J].西北师范大学学报：自然科学版，2004，40（3）：112-117.

[4] 郎杏彩.酸枣仁、肉多糖增强小鼠免疫功能和抗放射性损伤的实验研究[J].中国中药杂志，1991，16（6）：366.

[5] 郎杰，崔娜，张金良，等.酸枣果肉多糖的提取工艺和抗氧化研究[J].食品工业科技，2009，30（12）：259-261.

[6] 张惠芳，周瑜珍，陈嘉璐，等.酸枣多糖对小鼠CCl4急性肝损伤的作用[J].现代食品科技，2014，30（9）：33-37.

[7] 赵鹏，欧莉，张丽华，等.超声辅助提取葛根多糖工艺研究[J].医药导报，2009，28（10）：1338-1339.

[8] Cai-ping Zhu，Xi-chuan Zhi，Lin-qiang Li，et al.Response surface optimization of ultrasound-assisted polysaccharides extraction from pomegranate peel [J].Food Chemistry，2015，177：139-146.

吴茱萸的提取工艺研究 篇4

关键词：吴茱萸,生物碱,提取工艺,含量分析

吴茱萸为芸香科吴茱萸属植物吴茱萸(Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth.)干燥近成熟的果实,为常用温中祛寒中药,主产于长江流域及长江以南各省区。始载于《神农本草经》,味苦性温,有小毒,归肝、脾、胃、肾经,具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功。常用于治疗呕吐泄泻、头痛眩晕[1]。吴茱萸所含化学成分类型较多,包括生物碱、柠檬苦素、萜类、黄酮、香豆精、甾体、挥发油、木脂素、多糖等,其中生物碱为其主要有效成分。如吴茱萸碱和吴茱萸次碱具有抗菌、抗癌、抗炎、镇痛、抗血小板聚集、抗血栓形成、体温调节和保护心脏等药理作用[2,3]。吴茱萸作为一种有良好开发应用前景的传统中药, 生物碱的提取工艺和含量测定对控制吴茱萸的药材的质量控制和进一步的研究、开发具有举足轻重的作用, 本文综述吴茱萸的提取工艺研究和含量分析概况。

1 生物碱提取工艺

1.1 传统溶剂提取法

用甲醇、乙醇等有机溶剂提取是国内目前研究较多的提取工艺。陈洪宝[4]采用均匀设计法,以吴茱萸总生物碱相对提取得率及浸膏得率作为指标,考察吴茱萸生物碱提取最佳工艺条件,认为用70%乙醇提取,溶剂10倍量用量、提取2.5h,提取2次,浸膏得率为25.25%,生物碱提取率为1.6369%。

1.2 超声辅助提取法

超声辅助提取 (ultrasound-assisted extraction)技术的应用原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的溶出,另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,利于提取。该技术具有提取时间短、产率高、无需加热、低温提取有利于有效成分的保护等优点[5]。

甄攀等[6]利用超声波辅助提取法提取吴茱萸生物碱,研究结果表明,用超声波提取辅助可节省大量的时间,用醋酸乙酯提取,45倍溶媒,30℃下超声提取40min,具有较高的提取效率。王世永等[7]在研究3种不同提取方法下吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取率,超声提取法吴茱萸碱得率为0.266 6%,吴茱萸次碱得率为0.2054%;而索氏提取法的提取率分别为0.1037%和0.0906%,高于水法(两种碱的得率为0.0117%和O.0029%)。另外,超声提取只需要1h,而水提法需2h。索氏提取法则需4h。认为采用超声提取法较常规的水提取和索氏提取方法效率高、时间短、提取温度低,是提取昊茱萸碱和吴茱萸次碱的较好方法。

1.3 超临界CO2萃取法

超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction)的应用原理是利用超临界流体(SF)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分。最常用的SF为CO2。应用CO2-SFE 技术提取分离天然药物有效成分,具有萃取速度快、效率高、操作简单等特点,产品中没有残留有机溶剂,特别对湿热不稳定物的萃取尤为适用,所提取的有效成分具有最大的生物活性[5]。

刘文[8]等应用超临界流体萃取法提取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱,结果表明在40℃条件下,采用无水乙醇作夹带剂,萃取压力为30MPa,萃取时间为90min萃取,吴茱萸碱产品纯度可达到28.54%、吴茱萸次碱27.95%;证明采用超临界萃取吴茱萸中茱萸碱和吴茱萸次碱具有萃取效率高,产品纯度大,无有机溶剂残留的优点。

2 生物碱含量分析

生物碱是吴茱萸果实的主要活性成分,包括吲哚类生物碱、喹诺酮类生物碱及其它生物碱。吴茱萸次碱属于吲哚类生物碱,不溶于水,也难溶于酸水、碱水及氯仿等溶剂。吴茱萸生物碱主要分析测定方法为薄层色谱法,高效液相色谱法、毛细管电泳技术等[9,10,11]。

2.1 薄层扫描法

薄层扫描法(TLC)指用一定波长的光照射在薄层板上,对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描,将扫描得到的图谱及积分值用于药品的质量检查的方法。与高效液相色谱法相比,具有多通道效应,可同时平行分离分析多个样品;流动相用量少且选择范围宽、更换方便;固定相为一次性使用,对样品的预处理要求不高等优点。在中药制剂检验中,已成为重要的常用分析方法之一。

刘蕴秀,罗淑荣等[12]首次应用薄层荧光扫描法测定中药吴茱萸中5种生物碱:羟基吴茱萸碱,吴茱萸次碱、吴茱萸酰胺甲、吴茱萸碱、N-甲酰二氢-吴茱萸次碱的含量。结果显示:各生物碱的线性范围在20.5~245μg,回收率为96.8%~104.5%,RSD=3.08%~4.75%,分离度较好,结果准确稳定、简便、快捷,是分析吴茱萸及其制剂质量的简便有效的手段之一,但也存在分离效率低、检测峰容量有限的缺点。

2.2 高效液相色谱法

高效液相色谱法(HPLC)由于具有较高效的分离效能,较宽的适用范围及条件优化的灵活性等优点,在生物碱分析中得到了广泛的应用。徐艳春等[13]利用HPLC法测定吴茱萸生物碱的含量。结果显示,测定组分具有较好的线性关系和分离度,吴茱萸碱及吴茱萸次碱回收率分别为97.82%,RSD=0.81%和97.00%,RSD=1.11%,该方法简便易行、有效、重现性好。 谢娟等[14]也利用HPLC法测定吴茱萸水提物中的吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。结果显示昊茱萸碱浓度在0.2~4.0μg/mL范围内呈良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为101.50%,RSD=1.93%;吴茱萸次碱浓度在0.5~6.0μg/mL内呈良好的线性关系,R=0.9999,平均回收率为100.80%,RSD=0.72%。

反相高效液相法(RP-HPLC)也用于吴茱萸生物碱的含量测定,邹巧根等[15]建立了利用RP-HPLC测定吴茱萸碱及吴茱萸次碱的定量方法,主要色谱条件为:色谱柱流动相为:水-乙腈-冰乙酸-四氢呋喃(100:90:0.2:2) (pH=5.0);流速为1.0mL/min;检测波长254nm;线性范围0.04~0.2ng,吴茱萸碱及吴茱萸次碱浓度与峰面积具有良好相关性,r值分别为0.9998, 0.9995,加样回收率分别为99.25%。

2.3 毛细管电泳法

毛细管电泳法与HPLC相比,具有分离时间更短,杂质干扰更少,使用有机溶剂少,操作简便等优点,满足了分析某些生物碱的要求。周兴旺等[16]采用高效毛细管电泳法测定吴茱萸提取物中的吴茱萸次碱的含量,针对吴茱萸次碱不溶于水,也难溶于酸水、碱水及氯仿等溶剂,进样后易产生沉淀而造成毛细管堵塞使电流中断。 并加入乙腈或甲醇对疏水性的吴茱萸次碱起增溶作用,有效改善峰形与柱效。对吴茱萸次碱测定的线性范围为8~80μg/mL;检出限为0.9μg/mL。

2.4 液相色谱-电喷雾串联质谱联用法

液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术(HLPC-EIS-MS)具有极强的定性能力,可有效的分析复杂混合物的单个和多个组分。特别是对一些没有标准物质的生物碱成分,利用毛细管电泳及高效液相色谱法等这几种测定方法显得无能力时,HLLC-EIS-MS却可以提供较为满意的定性定量信息。张雪琴等[17]除了采用RP-HPLC对吴茱萸次碱进行含量测定外,还采用HLLC-EIS-MS 联用法,通过色谱保留时间和相应的质谱信息对不同产地中药吴茱萸中的其它4种生物碱成分:吴茱萸碱、羟基吴茱萸碱、吴茱萸酰胺甲、吴茱萸酰胺等生物碱成分进行定性分析,方法简单,快速。灵敏。结果令人满意,为控制吴茱萸的质量,保证药效提供了部分科学依据。

2.5 电喷雾解吸电离质谱法

电喷雾解吸电离质谱 (DESI-MS)是利用电喷雾解吸电离(DESI)的离子化技术,其主要优点是能够在大气压下直接对固体表面的痕量物质进行解吸电离,形成离子后被质谱检测。由于在大气压下进行操作(样品更换等较便利)和不需要样品预处理,使得DESI适合于进行现场、在线分析,具有灵敏度高、速度快、特异性好等特点。

陈焕文等[18]利用电喷雾解吸电离质谱在不需要样品预处理的前提下进行复杂基体样品分析,采用酸性甲醇-水混合溶液作为喷雾试剂,在优化了的实验条件下快速获得了吴茱萸的DESI-MS指纹谱图,然后利用串联质谱对吴茱萸干燥未成熟果实中有重要活性的5种生物碱:吴茱萸碱(分子量303)、吴茱萸酰胺(分子量307)、羟基吴茱萸碱(分子量319)、吴茱萸次碱(分子量287)和吴茱萸酰胺甲(分子量305) 进行了结构鉴定。实验表明,基于固体表面解吸电离质谱分析的方法不需要萃取-分离手续,单个样品测定时间不超过1.5min,大幅度提高了分析速度。如果将DESI-MS获得的中草药的指纹谱图与化学计量学工具(如PCA等)相结合,还可根据吴茱萸中主要生物碱组分对吴茱萸的真伪进行快速鉴定,有望在药品品质的在线监测和工艺过程控制中发挥重要作用。

库拉索芦荟凝胶液的提取工艺研究 篇5

库拉索芦荟凝胶液的提取工艺研究

以美国库拉索芦荟为原料,分别采用鲜榨汁法、冷榨汁法、超声波破碎法和酶法提取芦荟凝胶液,并分析了凝胶液的活性成分及其稳定性,结果表明:采取不同提取工艺获得的.凝胶液功效成分差异明显.酶法提取获得的凝胶液出汁率高,多糖、蛋白质、有机酸及过氧化物酶含量较高,是制备高档芦荟凝胶液的最佳选择;而超声波破碎法所获得的芦荟凝胶液稳定性最好.另外,还探讨了芦荟综合利用的相关工艺,提出针对不同的应用领域应采取相应的提取工艺.

作 者：刘士平薛艳红 作者单位：三峡大学化学与生命科学学院,湖北,宜昌,443002刊 名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：34(18)分类号：Q94-33关键词：芦荟凝胶液 提取工艺 稳定性

浅析从柿叶中提取多糖工艺的研究 篇6

关键词:柿叶;可溶性多糖;提取工艺

多糖是由单糖基通过糖苷键连接而成的化合物,越来越多的研究证明,多糖不但能治疗使机体的免疫系统受到严重损伤的癌症,还能治疗多种免疫缺损疾病,如慢性病毒肝炎和某些细菌和病毒引起的慢性疾病,还能治疗风湿病之类的疾病,有的多糖还能诱导干扰素的产生。总之,多糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗病毒病菌、降血糖血脂、抗溃疡等作用。目前多糖的分离分析仍是比较活跃的研究领域。

柿叶是柿树科柿树属植物柿的新鲜或干燥叶。柿树为常绿或落叶乔木或灌木,生长在热带和温带,其中我国柿树产量占世界总产量的50%以上。柿叶中含有多种对人体有益的营养成分和药用成分,具有很高的营养价值和药用价值。能增加毛细血管的致密性、降低其渗透性和脆性,稳定和降低血压,增加冠状动脉血流量,刺激造血功能,净化血液、改善血液功能,增加抗体、提高免疫力,延缓组织细胞的衰老过程,防治坏血病、动脉硬化、高脂血症、高血压、冠心病、脑溢血、糖尿病、贫血、癌症、脱肛、各种急慢性传染病和感染疾病等,还可以达到减肥的效果。丰富的维生素C可改善皮肤代谢,使皮肤娇嫩、滋润,具有良好的美容效果。

从柿叶中提取粗多糖工艺的研究还鲜见报道。近年来对多糖提取工艺的研究方法较多,如热水浸提法、稀碱液浸提法、稀酸液浸提法。但因为稀酸、稀碱条件下,易使多糖发生糖苷键的断裂,部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少,因此本文采用热水浸提法。

一、实验部分

(一)主要材料、试剂及仪器

柿叶:采集于河南省郑州市郊区,清洗、除杂、晒干后粉碎备用。无水乙醇、丙酮、无水乙醚、苯酚、浓硫酸、葡萄糖、三氯乙酸、正丁醇(均为分析纯)。

微型高速万能试样粉碎机:北京市永光明医疗仪器厂;SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵:河南省巩义市英峪豫华仪器厂;数显恒温水浴锅:常州国华电器有限公司;TU-1800PC型紫外可见分光光度计:北京普析;800型低速离心机:金坛市华峰仪器有限公司;RE-52c型旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;SZ-93自动双重纯水蒸馏器:上海亚荣生化仪器厂。

(二)多糖的提取流程

将柿叶原料用无水乙醇回流脱脂,再抽滤至干燥,然后加入一定量的水,在一定温度下进行一定时间的提取,提取液经过减压浓缩得浓缩液,浓缩液用数倍量乙醇醇析得粗多糖沉淀,抽濾,沉淀分别用无水乙醇、无水乙醚、丙酮依次洗涤,真空干燥后得粗多糖产品。

(三)多糖含量的测定

本实验采用苯酚一硫酸法测定总的多糖含量。苯酚一硫酸法是利用糖类遇浓硫酸水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,于487nm处有最大吸收。本实验先利用标准葡萄糖溶液用苯酚-硫酸试剂处理后在487nm处的吸光度制作标准曲线,再测定待测样品溶液的吸光度,根据回归方程计算相应的浓度从而求出多糖含量。

二、结果与讨论

(一)多糖含量的测定

在实验条件下,以浓度(C)为横坐标,以吸光度(A)为纵坐标作图,得标准曲线。

回归方程为:

A=0.0113C+0.0196(相关系数r=0.9988)

多糖提取率=(VxCxfxW2/W3xW1)x100%

W1:称取干样品的质量(g)

W2:由W1提取的粗多糖的质量(g)

W3从W2中称取的用于分析测定的粗多糖质量(g)

V:溶解W3定容后的体积(L)

f:多糖的校正系数[4],f≈0.9

C:由回归方程计算所得多糖的浓度(g/L)

(二)温度、时间、醇沉比、浸提次数对柿叶粗多糖提取率的影响

热浸提工艺涉及三个关键条件:热浸提的温度、时间、醇沉比、水煮次数单因素。浸提温度采用60℃、70℃、80℃、90℃、100℃五个水平,浸提时间采用1、2、3、4、5h五个水平,醇沉比(无水乙醇:浓缩提取液,体积比)采用1:1、2:1、3:1、4:1、5:1五个水平,水煮次数采用1、2、3、4、5五个水平分别进行单因素试验。

1.温度的影响

改变温度对多糖提取率的影响如图一所示。试验结果表明:温度对柿叶多糖的提取率有显著的影响。随着温度的上升,多糖提取率先增大后减小,70℃条件下多糖的提取率达到最大。

2.时间的影响

改变时间对多糖提取率的影响如图二所示。时间单因素试验表明:随着热浸提时间的增加,柿叶多糖提取率呈增加趋势,3h后变化趋于平缓。所以浸提时间选择条件3h。

3.醇沉比的影响

改变醇沉比对多糖提取率的影响如图三所示。醇沉比单因素试验显示:随着醇沉比的增加,柿叶多糖的提取率也有所增加,但4:1时达到最大,再增大醇沉比,提取率反而降低。这说明乙醇浓度达到80%时,多糖的提取率最大。

4.浸提次数的影响

改变浸提次数对多糖提取率的影响如图四所示。结果表明:柿叶中粗多糖的提取率随浸提次数的增多逐渐增加,而4次以后反而减小了。这说明浸提次数为3次时大部分糖已经溶出,提取率达到最大。再增加浸提次数反而会增大损失。

三、结束语

在热浸提取柿叶可溶性多糖的过程中,温度是影响多糖提取率的最关键因素,多糖提取的最佳工艺条件为温度70℃,时间3h,醇沉比4:1,浸提次数3次。此时,柿叶中可溶性多糖的提取率(相对于被提取的柿叶干重)为2.16%。

参考文献:

[1]鲁军,任迪峰,杨阳等.柿叶多酚的提取及体外生物活性的研究[J].食品工业科技,2010,31,(7).

[2]安秋荣,郭志峰.柿叶挥发成分的GC/MS分析[J].河北大学学报(自然科学版),1999,(3).

[3]翟春.普通念珠藻中多糖的提取、分离、纯化和初步结构分析的研究「D].南宁:广西大学,2000.

柚皮中黄酮物质的提取工艺研究 篇7

关键词：柚子果皮；乙醇浸提法；总黄酮

中图分类号：R284.2 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.08.007

Abstract： The optimal extraction process of flavonoids from shaddock peel and the factors affecting yield during extraction were studied. The extraction process parameters were analyzed through single factor and orthogonal test. The results showed that the factors affecting the extraction yield were the ratio of solid to liquid > ethanol concentration > extracting temperature > extracting time， and the optimum parameters were the ratio of solid to liquid 1∶20 ， ethanol concentration 85%， extracting temperature 75 ℃ and extracting time 3.0 h ， by which the yield of flavonoids from shaddock peel was 0.536%.

Key words： shaddock peel ； ethanol extraction method ； total flavonoids

柚子皮约占整个柚子果重的40%左右，其中含有丰富的黄酮类化合物。黄酮类化合物是广泛存在于植物界的—类化合物，它们不仅是—些植物药的有效或无效成分，也是人们日常食用的蔬菜和水果中的成分[1-5]。该类化合物在植物体中常以游离状态或与糖缩合成苷存在，通常在花、叶、果实等组织中多为苷类，而在木质部等坚硬组织中多为游离的苷元。黄酮类化合物往往与植物的生长发育、开花结果，以及抵御异物的侵入有关。此类化合物在人和动物体内有抗过敏、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抑制血小板凝聚、降低毛细血管脆性等药理作用[6-12]。柚皮中的黄酮类化合物主要是柚皮苷、新橙皮苷、柚皮素芸香苷等二氢黄酮类，其中柚皮苷占80%以上。柚皮中柚皮苷的含量大约为1%～6%。

对柚皮中的主要有效成分黄酮进行提取，可使柚皮这一废弃物变废为宝，为柚皮的深加工提供参考依据，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1 材料和方法

1.1 试验材料

柚子：市售葡萄柚。

试剂：芦丁标准品、无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等试剂，均为分析纯。

仪器：FZ102型微型植物粉碎机、R201D-11型旋转蒸发器、WFJ 2100型可见分光光度计、BS 224 S型电子分析天平、电热恒温水浴锅、101-3-BS-Ⅱ型电热恒温鼓风干燥箱、LD-3型电动离心机。

1.2 试验方法

1.2.1 工艺流程 柚皮 → 清洗、切条 → 干燥 → 粉碎 → 浸提 → 过滤 → 减压浓缩 → 离心，备用[13]。

1.2.2 柚皮总黄酮的测定 （1） 芦丁标准曲线的确定。 参考中华人民共和国农业行业标准NY/T 1295—2007进行试验。（2）柚皮总黄酮的提取和测定。挑选个体大小均匀、无霉变、无腐烂成熟的柚子，将柚子清洗干净，剥取其果皮。将柚子果皮切成约1 cm的块状，置于烘箱中60 ℃烘干。烘干后，用植物粉碎机将柚皮块粉碎成粉末，备用。 用电子天平准确称取2 g柚皮粉末置于250 mL的烧瓶中，加入一定浓度的乙醇溶液，混合均匀后，在一定温度、时间条件下进行冷凝回流浸提。将浸提液过滤2～3次，收集滤液进行减压浓缩，再用30%的乙醇定容至25 mL，充分摇匀后备用。准确吸取5 mL样品液，在510 nm处测定样品液的吸光值，并根据线性回归方程计算总黄酮得率。（3） 柚皮黄酮得率的计算。柚皮中黄酮得率=提取液中柚皮黄酮的量（g）/称取的样品量（g）×100%。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线的确定

从图1可知，芦丁浓度与吸光值的线性关系良好，相关系数达到了0.991，线性回归方程为：y = 5.442 9x-0.005 4。

2.2 固液比、提取温度、提取时间、乙醇浓度对黄酮得率的影响

2.2.1 固液比对黄酮得率的影响 在提取温度65 ℃、提取时间2 h、乙醇浓度70%不变的条件下，研究不同固液比（1∶10，1∶15，1∶20，1∶25）对黄酮得率的影响，结果如图2所示。由图2可知，固液比为1∶20时，黄酮得率最高。

2.2.2 提取温度对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取时间为2 h、乙醇浓度为70%不变的条件下，研究不同提取温度（60，65，70，75 ℃）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图3所示。由图3可以得出，总黄酮的得率随着提取温度的升高而增大。当提取温度大于75 ℃时，乙醇挥发比较严重，同时也会破坏某些黄酮化合物的结构，因此选择提取温度为75 ℃。

2.2.3 提取时间对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、乙醇浓度为70%不变的条件下，研究不同提取时间（1.5，2，2.5，3 h）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图4所示。由图4可知，黄酮得率在提取时间为2.5 h时达到最高，整个过程中溶剂破坏细胞壁导致黄酮析出，最后达到一个平衡。因此，提取需要一定时间，但不能过长，因为时间过长会使部分黄酮类化合物氧化分解，因此选择提取时间为2.5 h。

2.2.4 乙醇浓度对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、提取时间为2 h不变的条件下，研究不同乙醇浓度（60%，70%，80%，90%）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图5所示。由图5可以得出，黄酮得率在乙醇浓度为80%左右达到了峰值。

2.3 正交试验

在单因素试验结果的基础上，为优化出从柚子果皮中提取黄酮的最佳工艺条件，进行了4因素3水平L9（34）的正交试验 。各因素水平如表1、2。

由极差分析结果表明，固液比对柚皮黄酮得率的影响最大，其次为乙醇浓度和提取温度，最后为提取时间。综合评分结果表明，黄酮得率最高的工艺是A3B3C3D2，即乙醇浓度为85%、固液比1∶20、提取时间为3.0 h、提取温度为75 ℃，在此条件下重复进行3次验证试验，黄酮得率为0.536%。

3 结 论

正交试验结果显示，对柚皮总黄酮得率的影响因素依次为固液比>乙醇浓度>提取温度>提取时间。最佳提取工艺为：当乙醇浓度为85%，固液比为1∶20，提取温度为75 ℃，提取时间为3.0 h时，黄酮得率最高，为0.536%。

参考文献：

[1] 龚盛昭，陈秋基，曾海宇.柚皮中有效成分综合利用的途径[J].广州食品工业科技，2003，19（3）：81-83.

[2] 贾冬英，姚开，谭敏，等.柚皮中柚皮甙的乙醇提取工艺研究[J].中草药，2002，39（9）：802.

[3] 孟衡玲，杨生超，苏一兰，等.药用植物通关藤中总黄酮提取工艺研究[J].河南农业科学，2013（9）：157-160.

[4] 庄靖峰，庄松峰，陈丽洪.度尾文旦柚优质高产栽培技术[J].内蒙古农业科技，2012（5）：121-122.

[5] 黄永芳，曾炳山，杨懋勋，等.柚木嫩枝扦插生根组织解剖学研究[J].华北农学报，2013（S1）：265-269.

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[8] 王卫东，陈复生.陈皮中黄酮类化合物抗氧化活性的研究[J].中国食品添加剂，2007（2）：59-62.

[9] 许琦.芹菜总黄酮的提取及含量测定[J].食品科技，2006（7）：241-243.

[10] 莫开菊，程超，黄鹏，等.生姜黄酮提纯化及结构的初步鉴定[J].食品科学，205（9）：211-215.

[11] 李楠，刘元，侯滨滨.黄酮类化合物的功能特性[J].食品研究与开发，2005（6）：139-141.

[12] 冯颖，王建国，孟宪军，等.无梗五加黄酮的提取及抗油脂氧化性能的研究[J].食品研究与开发，2006（3）：35-36，182.

[13] 左锦静，陈复生，姚永志，等.陈皮中黄酮类化合物的最佳提取工艺[J].食品研究与开发，2005，26（3）：61-63.

2.2.3 提取时间对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、乙醇浓度为70%不变的条件下，研究不同提取时间（1.5，2，2.5，3 h）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图4所示。由图4可知，黄酮得率在提取时间为2.5 h时达到最高，整个过程中溶剂破坏细胞壁导致黄酮析出，最后达到一个平衡。因此，提取需要一定时间，但不能过长，因为时间过长会使部分黄酮类化合物氧化分解，因此选择提取时间为2.5 h。

2.2.4 乙醇浓度对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、提取时间为2 h不变的条件下，研究不同乙醇浓度（60%，70%，80%，90%）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图5所示。由图5可以得出，黄酮得率在乙醇浓度为80%左右达到了峰值。

2.3 正交试验

在单因素试验结果的基础上，为优化出从柚子果皮中提取黄酮的最佳工艺条件，进行了4因素3水平L9（34）的正交试验 。各因素水平如表1、2。

由极差分析结果表明，固液比对柚皮黄酮得率的影响最大，其次为乙醇浓度和提取温度，最后为提取时间。综合评分结果表明，黄酮得率最高的工艺是A3B3C3D2，即乙醇浓度为85%、固液比1∶20、提取时间为3.0 h、提取温度为75 ℃，在此条件下重复进行3次验证试验，黄酮得率为0.536%。

3 结 论

正交试验结果显示，对柚皮总黄酮得率的影响因素依次为固液比>乙醇浓度>提取温度>提取时间。最佳提取工艺为：当乙醇浓度为85%，固液比为1∶20，提取温度为75 ℃，提取时间为3.0 h时，黄酮得率最高，为0.536%。

参考文献：

[1] 龚盛昭，陈秋基，曾海宇.柚皮中有效成分综合利用的途径[J].广州食品工业科技，2003，19（3）：81-83.

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[13] 左锦静，陈复生，姚永志，等.陈皮中黄酮类化合物的最佳提取工艺[J].食品研究与开发，2005，26（3）：61-63.

2.2.3 提取时间对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、乙醇浓度为70%不变的条件下，研究不同提取时间（1.5，2，2.5，3 h）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图4所示。由图4可知，黄酮得率在提取时间为2.5 h时达到最高，整个过程中溶剂破坏细胞壁导致黄酮析出，最后达到一个平衡。因此，提取需要一定时间，但不能过长，因为时间过长会使部分黄酮类化合物氧化分解，因此选择提取时间为2.5 h。

2.2.4 乙醇浓度对黄酮得率的影响 在固液比为1∶20、提取温度为65 ℃、提取时间为2 h不变的条件下，研究不同乙醇浓度（60%，70%，80%，90%）对柚皮黄酮得率的影响，结果如图5所示。由图5可以得出，黄酮得率在乙醇浓度为80%左右达到了峰值。

2.3 正交试验

在单因素试验结果的基础上，为优化出从柚子果皮中提取黄酮的最佳工艺条件，进行了4因素3水平L9（34）的正交试验 。各因素水平如表1、2。

由极差分析结果表明，固液比对柚皮黄酮得率的影响最大，其次为乙醇浓度和提取温度，最后为提取时间。综合评分结果表明，黄酮得率最高的工艺是A3B3C3D2，即乙醇浓度为85%、固液比1∶20、提取时间为3.0 h、提取温度为75 ℃，在此条件下重复进行3次验证试验，黄酮得率为0.536%。

3 结 论

正交试验结果显示，对柚皮总黄酮得率的影响因素依次为固液比>乙醇浓度>提取温度>提取时间。最佳提取工艺为：当乙醇浓度为85%，固液比为1∶20，提取温度为75 ℃，提取时间为3.0 h时，黄酮得率最高，为0.536%。

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[5] 黄永芳，曾炳山，杨懋勋，等.柚木嫩枝扦插生根组织解剖学研究[J].华北农学报，2013（S1）：265-269.

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[8] 王卫东，陈复生.陈皮中黄酮类化合物抗氧化活性的研究[J].中国食品添加剂，2007（2）：59-62.

[9] 许琦.芹菜总黄酮的提取及含量测定[J].食品科技，2006（7）：241-243.

[10] 莫开菊，程超，黄鹏，等.生姜黄酮提纯化及结构的初步鉴定[J].食品科学，205（9）：211-215.

[11] 李楠，刘元，侯滨滨.黄酮类化合物的功能特性[J].食品研究与开发，2005（6）：139-141.

[12] 冯颖，王建国，孟宪军，等.无梗五加黄酮的提取及抗油脂氧化性能的研究[J].食品研究与开发，2006（3）：35-36，182.