超数排卵

超数排卵（精选7篇）

超数排卵 篇1

奶牛为单胎动物, 自然繁殖情况下, 母牛2.5岁左右才可能有后代犊牛1头, 5.5岁可有后代犊牛4头。如何提高奶牛繁殖率一直是我国奶牛业发展的难题。近日, 犊牛“幼畜超数排卵技术” (JIVET技术) 在河北廊坊研发成功。采用该技术后, 当供体犊牛1岁时便拥有自己的后代犊牛4~5头, 将牛的世代间隔缩短至1年, 大大提高了奶牛的繁殖效率。

近年来, 我国奶牛遗传改良工作虽然取得了一定的成绩, 但奶牛单产水平总体仍然偏低, 并缺乏自主培育种公牛能力。如何从根本上改变我国良种奶牛比例低, 单产增长速度慢的局面成为目前亟待解决的问题。

据介绍, J I V E T技术最早由澳大利亚南澳研究与开发研究院研发。2 0 0 5年, 廊坊香河绿色东方农牧科技发展有限公司与该研究院签订了独家合作协议。JIVET技术引进后首先应用于绵羊肉羊技术繁殖;2006年, 绿色东方农牧科技发展有限公司把该技术应用于奶牛优良品种繁育上, 用于解决我国奶牛长期引进国外优良品种的问题。随着JIVET技术研发成功, 绿色东方农牧科技发展有限公司项目组还成功研发出具有自主知识产权的JIVET技术流动工作站, 技术终端通过互联网与S A R D I、中国农业大学动物科技学院、中国农业科学院畜牧研究所等权威科研机构建立J I V E T技术网络, 加速了技术成果的推广。

专家表示, J I V E T技术的应用可迅速提高我国奶牛的良种数量, 促进我国奶业的快速发展, 提高我国畜牧业技术水平和国际科技竞争力。另外, 运用该技术还可以应用于肉牛优良品种的快速繁育, 对推动我国肉牛养殖业的发展具有重要意义。

河北省奶牛超数排卵技术获突破 篇2

近日，河北省科技厅和石家庄市科技局组织有关专家，对石家庄天泉良种奶牛有限公司承担的河北省重大科技创新项目和石家庄市重大科研课题“良种奶牛高效胚胎生产综合配套技术研究及产业化开发”进行了验收，并对取得的成果进行了鉴定。专家组认定，该项目研发了奶牛超数排卵技术，育成牛高强度重复超排处理平均达5.17次/头，最高单头牛连续重复超排9次，平均每头次获得体内可用胚胎7.56枚，显著提高了奶牛胚胎生产效率，促进了胚胎质量提升，该项目总体达到国内领先水平。

据介绍，该项目促卵泡素抑制剂联合超排平均获得可用胚胎8.13枚/头。项目期内共生产奶牛体内常规胚胎22 824枚，获得体内性别鉴定雌性胚胎11 051枚，生产体内性别控制胚胎2 602枚，生产体外性控胚胎2 477枚;移植奶牛性别鉴定雌性胚胎10 633头次，移植体内性别控制胚胎1 175头次，移植体外胚胎323头次，总计获得后代母牛6 137头。该项目针对分割取样后的胚胎研发了专门的冷冻保护液，加入聚蔗糖、阿拉伯半乳聚糖，显著提高了取样胚胎的冷冻效果，申报发明专利2项。

(文章来源:中国农业新闻网)

超数排卵 篇3

1 材料与方法

1.1 试验牛和药品

选择牧研所试验牛场奶牛、平凉地区农科所牛场的奶牛、高代西门塔尔改良牛, 4～6岁, 2～6胎, 健康无病, 作为超排的供体。用加拿大FSH (400 mg/支) 进行超排。

1.2 冲胚

从第一次输精日算起, 推后7 d, 用非手术法回收胚胎。对回收的胚胎进行分级鉴定, 冲洗3～5遍后备用。

1.3 试验设计

超排发情后分别输精1～3次, 检测回收胚胎中有效胚胎的数量。

试验数据用SPSS13.0软件统计。

2 试验结果

注:不同字母之间的差异达到极显著水平 (P<0.01)

采用三种输精方案:① 一次输精, 发情开始后16～24 h。② 二次输精, 发情开始后12～15 h, 20～24 h。③ 三次输精, 发情开始后12～15 h, 20～24 h, 30～36 h。不同输精次数对采卵数和有效胚数的影响见表1。

结果表明, 输精次数增加有利于提高胚胎数量。

3 分析讨论

超数排卵毕竟是一种利用外源激素刺激多卵泡发育和排卵的过程。多卵泡在发育过程中不可避免的存在发育不同步的情况, 具体表现为非同期排卵及排卵延迟, 临床上解决的主要方法是利用促黄体素及其类似物卵泡破裂及排卵。但由于个体差异和卵泡非同期化, 仍然难以达到多卵泡同期排卵。

在人工授精过程中, 由于精液活力差异和排卵时机判断误差的存在, 也显著影响卵母细胞的受精情况。

因此, 在实际操作过程中, 为了尽量减少误差, 提高受精率, 选用了一次使用2枚细管冻精和多次输精、并在第一和第二次输精时肌注200 IU LH的方法。

从试验结果看, 输精1次, 超排采卵数显著低于输精2次和3次 (P<0.05) , 输精3次可明显提高超排采卵数和有效胚胎数, 有效胚率为86.6%。

由于超排时卵泡发育不同步性, 未受精卵在输卵管下行过程中, 由于表现出发育退化甚至死亡, 因而输精1次采卵数少, 而且有效超排胚胎数少。因此, 必须在输精时, 注意保证精子解冻活力在0.35以上, 实行3次输精, 同时搞好输精消毒和卫生, 才能提高有效排卵数。

4 小结

超数排卵 篇4

1 实验材料

实验药品。CIDR英国生产, FSH宁波激素厂生产, LH广东生产。

供体母羊。在新疆畜场选择身体健康、无病史和繁殖机能较好的2~3岁经产肉用绵羊70只, 品种分别为无角道赛特、特克塞尔和德国美利奴。对全部供体羊采用全年舍饲的方法进行饲养管理, 并适当放牧。

2 实验方法

对供体羊进行超排处理。对PVC投放管消毒, 将CIDR放入其中, 准时把投放管插入供体羊阴道中, 然后用无菌玻璃棒把CIDR推入。11天后每天向供体羊的肌肉中注射120IU的FSH, 每天注射2次, 连续注射3天, 每次间隔12小时。当注射到第5针的时候取出PVC管, 并于次日试情, 对发情母羊连续配种4~5次, 直到供体羊发情结束为止。胚胎采集工作。在进行胚胎采集时, 用手术法对供体羊的子宫进行冲洗。对超排后发情维持到第6天的供体羊使用外科手术方法采集胚胎。

本试验通过对70只不同种类身体健康、体格较好的肉用绵羊进行集中饲养, 并分别于春、秋、冬三季根据其体重进行分组超排处理。结果证明, 不同品种、不同季节和不同体重对绵羊超数排卵并无显著影响, 各类肉用绵羊在春季、秋季、冬季超数排卵的效果差异并不明显, 但是在这几个季节里进行胚胎生产和胚胎移植较好。另外, 41~50kg的母羊用来做超排的效果较其他体重的母羊好。

3 结果

品种对超排的影响。通过SPSS软件统计分析, 可以看出不同品种对供体羊的超排获得胚胎数和获得胚胎中的可用胚数并无显著影响, 即P>0.05。

不同季节的超数排卵效果。SPSS统计分析显示, 春秋冬三季中供体羊的同期发情效率并无显著差异, 即P>0.05, 但是个别的供体羊会显现出黄体退化和子宫粘连现象而导致冲胚受阻。不同季节对于超排供体羊的胚胎数、黄体数和可用胚胎数的影响也不显著 (P>0.05) , 但是胚胎的可用率在秋季会达到最高的84.02%, 与春季相比差异显著, 即P<0.01。

不同体重的超数排卵效果。不同的体重组对其超排反应也没有显著影响, 即P>0.05。而胚胎的可用率情况为:41~50kg体重组比其他组高, 即P<0.01;体重在51~60kg肉用绵羊的胚胎可用率比71~80kg组的胚胎可用率要高, 即P<0.01。61~70kg组的肉用绵羊的胚胎可用率比71~80kg体重组的要高, 即P<0.05。

4 讨论

从体重分组看, 体重在41~50kg范围内的供体羊在可用胚率上显著高于其他体重组;体重在71~80kg范围内供体羊的可用胚率最低, 而且差异极显著 (P<0.01) 。说明肉用供体绵羊应将体重控制在41~70kg范围内。

从激素角度看, 处于超排同期的发情供体羊中有一小部分出现黄体退化情况, 这可能是由于激素比例失调或者外源药物导致的卵泡排卵。另外, 还有极少数供体羊出现子宫粘连现象, 这与冲胚技术的不完善和操作不当有关。

5 小结

超数排卵 篇5

马是一种繁殖周期较长的单胎动物, 通常在排卵前的发情周期一个卵泡发育成优势卵泡, 其他几个会退化[1]。在发情期, 优势卵泡会变成一个排卵前卵泡, 之后在激素作用下排卵。在马属动物中双排卵的比例较低。通过有效的超数排卵为胚胎移植 (ET) 、配子输卵管内移植 (GIFT) 和胞质内精子注射 (ICSI) 等技术提供多个卵母细胞和多个胚胎以提高马的繁殖率。超数排卵会提高正常和低生殖能力的母马的妊娠率。在过去的35年里, 许多研究者用各种各样的激素疗法, 像马绒毛膜促性腺激素 (e CG) 、促性腺激素释放激素 (GnRH) 、马脑垂体提取物 (EPE) 和马促卵泡素 (e FSH) 在马的发情周期诱导马的超数排卵, 但是成功率仍受到限制[2]。

1 母马发情周期的特点

母马的平均发情周期为21 d (范围18~25 d) , 发情期持续5~7 d, 要比其他家畜长很多。但其发情期长短也因品种、个体、年龄、饲养水平及使役情况的不同而异。一般情况下, 年龄越老及饲养水平越低的母马和在发情季节早期发情的母马, 其发情期一般较长。导致母马发情期比较长的原因有以下几点:1) 马卵巢结构的特殊性, 马的卵巢皮质部分在内, 髓质部分在外面。由于卵泡必须发育到足以达到排卵的程度才能通过排卵窝排卵, 所以这个过程需要比较长的时间, 从而使发情持续的时间较长;2) 卵巢对促卵泡素 (FSH) 的反应不如牛、羊那么敏感, 卵泡发育至完全成熟需要的时间较长;3) 母马发情周期中有2个FSH峰, 使得促黄体生成素 (LH) 分泌量极显著低于FSH, 造成排卵时间延迟[3]。

2 马卵巢卵泡发育动力学

哺乳动物体内最为连续不断的、动态可见的变化过程就是发情周期 (更确切地说应称为排卵间隔) 中卵泡波内卵泡的生长和退化。在一个特定的卵泡波中, 其中一个卵泡能够变成排卵卵泡, 这种现象被看作为卵泡选择。自20世纪60年代起卵泡选择引起了生物学家的兴趣, 其被看作是单卵动物生殖生物学中最为持久的奥秘。排卵间隔期和排卵卵泡波中母马和人卵泡动力学上惊人的类似联系支持了母马作为研究人卵泡发生的试验模型。在一个卵泡波中母马卵泡直径是人卵泡直径的2倍, 这就为体外试验过程提供了极好的试验入门之处, 如卵泡内注射、连续采集卵泡液及彩色多普勒超声检测血管变化等。

3 卵巢卵泡的生长波

卵泡的生长发育过程又称卵泡发生波。有的母马在整个发情周期有2个卵泡发生波, 有的母马在整个发情周期有1个卵泡发生波。在马发情周期中的大部分时间, 卵巢上都存在直径为4~50 mm的卵泡。这些卵泡在发生过程中分为选择期 (selection) 和优势期 (dominance) 。选择期是指从大量不依赖于促性腺激素的小卵泡中选择某些卵泡进入促性腺激素依赖期, 被选择的卵泡发育进入优势期, 这些卵泡具有发育成熟的能力, 在发情周期中, 有1~2批卵泡具有发育成熟的潜力。

马、牛和人都是排单卵的物种, 它们的内分泌剖面图和卵泡发生波现象从卵泡出现到排卵前几天都是相似的。在排卵周期中, 通过直肠超声检查法可以检测其卵泡发育情况。在排卵前, 经阴道用促性腺激素刺激母马卵巢, 其成熟卵母细胞的回收率比较高 (65%~80%) [4]。

4 超数排卵

超数排卵简称“超排”, 就是在雌性哺乳动物发情周期的一定阶段, 注射外源性促性腺激素诱导卵巢多个卵泡发育, 并排出具有受精能力的卵子的方法。通过超数排卵技术可以充分挖掘母畜的繁殖潜力, 为胚胎移植提供充足的胚胎。因此, 超数排卵技术是胚胎移植过程中必不可少的环节, 也是进行转基因动物生产和动物克隆等研究中的一种重要技术手段[5]。

4.1 超数排卵的机理

生长期的卵泡数由以下因素决定:初级卵泡发育成生长卵泡的比例、生长卵泡的生长率、生长卵泡的闭锁率。超排处理就是增加早期卵泡发育到高级阶段卵泡的数量, 或者降低发育卵泡的闭锁率, 这是个连续的动态过程, 该过程受中枢神经系统、垂体前叶和卵巢间激素调控。常见的方法有:降低或消除卵巢对促性腺激素释放的负反馈反应, 主要针对FSH;增加外源激素, 提高血液中促性腺激素浓度。在生产中广泛采用的是后者, 它常与刺激内源促性腺激素释放的方法相结合。动物对超排处理的反应很不稳定:排卵数、可获得的卵数、所获得的卵子质量都很不稳定, 这种不稳定性已成为目前阻碍家畜胚胎移植技术应用中亟待解决的问题。

4.2 马的超数排卵方法

4.2.1 马促卵泡素 (e FSH) 处理法

M.C.Witta等[6]对母马进行超数排卵处理, 在激素处理周期, 当卵泡直径大于22 mm时, 给马注射e FSH, 2次/d, 每次12.5 mg。在注射e FSH的第2天, 即第3次注射e FSH后, 再注射氯前列烯醇250μg, 一直用e FSH处理直到卵泡直径达到32~35 mm为止。之后再注射人绒毛膜促性腺激素 (h CG) 2 500 IU以诱导排卵。该研究结果表明, 用e FSH处理母马后可提高子宫和卵巢血流量雌二醇水平, 还促进多个卵泡的发育。

4.2.2 马重组促卵泡素 (re FSH) 处理法

G.A.Meyers-Brown等[7]研究发现, 不同剂量的re FSH刺激母马多个卵泡发育、排卵并增加回收胚胎的数量。因为re FSH可以重复且大量克隆得到, 所以可以用来作为一种工具, 以提高母马的超数排卵效率。用不同剂量的re FSH (0.35, 0.50, 0.65 mg) 和12.5 mg的e FSH分别处理母马, 结果增加了排卵前卵泡的数量, 而且经0.50 mg re FSH、12.5 mg e FSH、0.65 mg re F-SH处理诱导时排卵最多, 用0.65 mg re FSH和e FSH处理得到的每次冲胚回收数量最多。

E.L.Cullingfor等[8]比较了用25, 50, 100, 150 mg猪的促卵泡素 (p FSH) 和0.5 mg的re FSH分别诱导马的超排, 2次/d。在处理的第2天各组再分别注射氯前列烯醇, 在24~38 h内注射2 500 IU的h CG。结果表明, 任何剂量的p FSH都未提高母马的排卵率, 原因还需进一步调查。但是用re FSH处理其中3/8数量的母马有3个或更多的卵泡直径超过了30mm, 尽管有2只马没有超数排卵成功。总之, 虽然使用p FSH进行马超数排卵效果令人失望, 但是re FSH似乎是一个很理想的选择, 但对于巨大的可变性还需进一步研究。

4.2.3 马促黄体素 (e LH) 处理法

有证据表明, 在几个物种中, 高浓度LH可能会干扰正常的卵泡发育和排卵。S.N.Schauer等[9]假设在母马性成熟前提高LH水平会中断正常卵泡的成熟, 从而导致排卵功能紊乱。试验1, 在母马发情中期所有直径>10 mm的卵泡通过阴道超声引导穿刺使它们脱落, 诱导新的卵泡波。随后每天注射e LH (1.6μg/kg, 静脉注射) 2次, 当优势卵泡直径>32 mm时, 以排卵剂量注射h CG (3 000 IU, 静脉注射) 。对照组用等量的生理盐水做同样处理。在处理后的黄体期用e LH处理没有影响母马的排卵反应或黄体酮水平。试验2, 分为3组, 前两组处理同试验1, 第3组在卵泡脱落的当天注射PGF2α, 随后每天注射生理盐水2次。注射e LH诱导LH水平的升高类似于注射PGF2α。注射e LH和PGF2α对卵泡的发育和总数都没有显著影响。然而对比用生理盐水处理的母马, e LH和PGF2α组的排卵前卵泡的雄烯二酮水平较低, 胰岛素样生长因子 (IGF) 水平较高。而且e LH和PGF2α组的排卵前卵泡的前列腺素E-2趋于低水平。总之, 高水平的LH对母马的卵泡发育及排卵无明显影响, 但是它会诱导卵泡液因子水平的变化, 这可能导致卵泡/卵母细胞成熟受阻, 表明还需要进一步研究如何应用PGF2α控制家畜生育能力。

4.2.4 醋酸德舍瑞林处理法

J.F.Nagao等[10]对醋酸德舍瑞林能否诱导母马的双排卵进行了研究。在试验1中, 对所有母马在发情周期的第8天注射前列腺素 (5 mg, 肌肉注射) , 然后随机分成2组, 即对照组 (n=4) 和处理组 (n=4) 。处理组:在诱导黄体溶解后的第8天每12 h注射醋酸德舍瑞林缓释剂 (100μg, 肌肉注射) 1次;直到至少有2个卵泡的最小直径达到33 mm;此时, 用2 500 IU的h CG诱发排卵;诱发排卵24 h后进行人工授精, 并收集排卵后第8天的胚胎进行第1次检测。对照组:注射生理盐水 (1 m L, 肌肉注射) 。在试验2中, 研究了56匹母马的112个发情周期, 在这个试验中, 每次肌肉注射100μg醋酸德舍瑞林控释制剂或者生理盐水, 经检测发现醋酸德舍瑞林的作用只在那些卵泡直径至少25 mm和至少有1/2的卵泡直径≥20 mm的母马中产生。其他程序类似于试验1中的描述。研究的变量应用t检验分析和Fisher精确检验。在试验1中, 处理组只有2匹马有20~25 mm的双排卵反应;在试验2中, 经过处理的母马82%产生了双排卵反应并且每次发情周期经醋酸德舍瑞林处理的胚胎的回收数量为1.12, 而对照组的胚胎回收数量为0.57。因此, 醋酸德舍瑞林能够有效诱导母马双排卵。平均而言, 子宫冲胚时每次能够回收1个胚胎。

4.2.5 雌二醇 (ECP) 和多番立酮 (DPB) 处理法

母马生殖研究的目标就是寻找一种简单的方法来诱导季节性无排卵的母马, 在一些研究中已经有人通过注射多巴胺的颉颃剂———多番立酮和舒必利来加速母马排卵。K.K.Kelley等[11]研究发现, 与舒必利治疗比较, 通过预处理苯甲酸雌二醇可大大增加催乳素及LH的反应, 在无排卵的母马中, 可引起更大的排卵反应。随后, D.L.Thompson等[12]确定, 单次注射戊酸雌二醇 (100 mg) 时对催乳素的反应, 与先前报道的每隔1 d注射苯甲酸雌二醇的效果一致。

P.B.Mitcham[13]测试了不同剂量环戊丙酸雌二醇和多番立酮在季节性无排卵的母马中诱导排卵的有效性。试验1, 将43匹轻型母马分为以下6组:对照组 (无处理, n=9) ;DPB组 (3 g, 肌肉注射, n=9) ;ECP (100 mg) +DPB (3 g) 组 (n=6) ;ECP (150 mg) +DPB (3 g) 组 (n=7) ;ECP (150 mg) +DPB (3 g) +黄体酮 (1.5 g) 组 (n=7) ;ECP (150 mg) +黄体酮 (1.5 g) 组 (n=5) 。试验2, 将24匹轻型母马分为2组:对照组 (n=13) 和ECP (150 mg) +DPB (3 g) (n=11) 。在这2个试验中每隔3 d通过超声波对母马的卵泡活性进行监测, 结果与对照组相比, 接受ECP和DPB处理的母马在35天排卵的比例更大。试验3, 将18匹卵巢直径小于20 mm且没有黄体的母马随机分成6组:在注射DPB (1.5, 3.0 g) 10 d后, 再肌肉注射ECP (0, 75, 150 mg) , 最后得出结论, 6组母马在排卵上无显著性差异, 只要用75 mg ECP和1.5 g DPB就可以提高排卵母马的比例。

5 存在问题及展望

超数排卵的基础是操纵控制优势卵泡激素和抑制次级卵泡的退化[14]。相对于绵羊和牛而言, 马对外源性激素的敏感性较差, 因此处理得到的排卵卵泡数量有限[15]。前面提及的各种激素超排处理, 没有一种类似的处理方法可以适用于所有的母马, 了解母马每个繁殖阶段的生理和内分泌机能是找到最适合处理方案的关键。虽然如此, 不同马可能会对不同的药剂组合产生不同反应。总之, 从了解母马的发情周期特点、超排机理及不同的药物处理方法看, 最大的希望是继续推进生殖技术。

超数排卵 篇6

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择发育整齐、体况良好的4~8周龄未断奶的健康且膘情正常辽宁绒山羊母羔, 补饲地瓜秧和羊草粉。

1.2 试验方法

晚8点开始第1次激素注射, 间隔12 h第2次注射, 每两针间隔为12 h。一般在最后一针结束后6~10 h手术。采用抽吸法吸取卵母细胞及卵泡液, 培养液洗后检取卵丘卵母细胞复合体, 进行成熟培养。

1.3 试验设计

1.3.1 不同周龄幼羔羊超数排卵效果的比较

将45只羔羊分为4周龄、5~6周龄、7~8周龄三组, 均采用同一超排方案进行超排处理。

1.3.2 不同超排方案幼羔羊超数排卵效果的比较

对40只4~8周龄的辽宁绒山母羔采用4种超排方案, 第1组宁波产FSH总剂量120 IU+10 IU LH, 第2组加拿大产FSH总剂量120 mg+10 IU LH, 第3组宁波产FSH总剂量120 IU+PMSG300 IU, 第4组加拿大产FSH总剂量120 mg+PMSG 300 IU。

1.3.3 不同季节对母羔超数排卵效果的影响

统计春季 (3~5月份) 、夏季 (6~7月份) 、秋季 (9~11月份) 对幼羔进行超排处理后的卵泡、回收卵数量。

1.3.4 重复使用对超排效果的影响

在羔羊第1次激素诱导排卵后, 间隔4周进行重复超排处理, 重复超排采用同批次的FSH处理, 具体方法与第1次相同。

1.3.5 运输应激对羔羊超排效果影响

运输应激组 (简称应激组) 羔羊在开始超排前约24 h内用机动车运输50 km (约1 h) , 对照组不运输。

1.4 统计分析

试验结果采用SPSS 10.0统计软件单因素ANOVA程序进行方差分析和检验统计。

2 结果与分析

2.1 不同周龄幼羔羊超数排卵效果的比较结果见表1。

注:同列数据肩注小写字母不同者表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同者表示差异极显著 (P<0.01) , 未标注字母者表示差异不显著 (P>0.05) 。下表同。

从表1的结果可以看出, 随着周龄的增加, 三组幼羔的发育卵泡数逐步降低, 4周龄组最高, 与7~8周龄组比差异显著 (P<0.05) 。可用卵数以5~6周龄为最高, 与其他两组比差异显著 (P<0.05) ;可用卵比率4周龄组最低, 与另两组之间差异极显著 (P<0.01) ;5~6周龄与7~8周龄之间差异不显著 (P>0.05) 。

2.2 不同超排方案幼羔羊超数排卵效果的比较采用4种超排方案进行处理, 结果见表2。

从表2看出, 卵巢表面卵泡的发育数量以第3组最高, 但是可用卵数量低于第4组;体外成熟数量以第4组最高, 但与其他三组差异不显著 (P>0.05) ;体外成熟率第4组则显著高于其他三组 (P<0.05) 。

2.3 不同季节对母羔超数排卵效果的影响

分别统计春季、夏季、秋季对幼羔进行超排处理后卵泡发育、回收情况, 见表3。

由表3可以看出, 春季采集的卵母细胞数量和质量略好于秋季, 但差异不显著 (P>0.05) , 春秋季均高于夏季, 且与夏季差异极显著 (P<0.01) 。

2.4 重复使用对超排效果的影响重复超排处理结果见表4。

由表4可见, 重复组卵泡数、获卵数极显著低于初次组 (P<0.01) , 可用卵数显著低于初次组 (P<0.05) , 体外成熟数低于初次组, 但差异不显著 (P>0.05) , 而体外成熟率高于初次组, 差异也不显著 (P>0.05) 。

2.5 运输应激对羔羊超排效果影响设运输应激组与对照组采用相同方法处理, 结果见表5。

由表5看出, 运输应激组羔羊只均卵泡数、只均获可用卵数和只均获可用卵率均低于对照组, 且差异显著 (P<0.05) 。

3 讨论与结论

3.1 羔山羊周龄对超排效果影响

不同发育阶段的羔羊超排处理后卵巢的反应程度差异较大。在羔羊出生后数周内, 其对外源促卵泡素的敏感性随日龄增加而有所降低, 从而使大周龄组羔羊获卵数低于小周龄组。试验数据表明, 5~6周龄为辽宁绒山羊羔羊的适宜超排时期。

3.2 不同方案对诱导超数排卵效果的影响

近年来羔羊超排试验多选用进口激素, 以加拿大和新西兰产的FSH应用较多。本试验结果表明, 加拿大FSH组效果要好于于国产FSH组, 但差异不显著。以往宁波FSH在成年羊超排应用中也有不错效果。加PMSG组发育卵泡和获得体外成熟的卵母细胞数量多, 加注PMSG可增加卵巢内卵母细胞的发育并提高卵母细胞的体外成熟率, 效果好于加注LH。

3.3 季节对羔羊超排效果的影响

山羊是季节性发情动物, 本试验结果也表明, 春季采集的卵母细胞数量和质量略好于秋季, 春秋季均高于夏季, 且与夏季差异极显著 (P<0.01) 。表明, 春秋季是适于进行卵母细胞采集的季节, 而夏季不适合进行卵母细胞采集。

3.4 重复超排对羔羊超排效果的影响

重复诱导幼羔卵泡发育可以提高每只供体所获卵母细胞的总数, 从而提高供体遗传资源的利用效率。而在本研究中, 手术法在一定程度上会影响卵母细胞的采集效果, 4周后进行重复超排, 于是羔羊年龄偏大, 也可能是卵母细胞数量减少的原因。改进采卵手术的方法, 降低对卵巢的损伤程度, 能减少重复超排间隔的时间, 有利于提高供体羔羊的利用效率。

3.5 运输应激对羔羊超排效果影响

羔羊激素处理前一定距离的运输应激是否会影响试验效果, 目前尚不清楚。本研究结果显示运输应激组羔羊只均获卵数和只均获可用卵数比对照组低, 表明羔羊在激素处理前进行一定距离的运输会降低羔羊卵泡发育效果。

摘要：本试验以特定日龄阶段的羔羊为研究对象, 进行外源激素刺激其卵巢发育, 收集和筛选卵母细胞并进行成熟培养, 研究卵母细胞获得和成熟情况。分别探讨了激素的周龄不同、使用剂量和来源 (纯度) 、重复超排、季节和运输应激对辽宁绒山羊超排效果的影响, 结果表明:5～6周龄为辽宁绒山羊羔羊的适宜超排时期;国产FSH+PMSG组超排反应最好, 加拿大FSH+PMSG组均获得体外成熟的卵母细胞数量最多;春秋季是适于进行卵母细胞采集的季节, 而夏季不适合进行卵母细胞采集;重复超排获卵数较初次超排极显著降低, 但体外成熟率优于首次超排;羔羊在激素处理前进行一定距离的运输会降低羔羊卵泡发育效果。

超数排卵 篇7

1 材料与方法

1.1 材料

用于同期发情的情酮栓由南京农业大学生产，促卵泡素 (FSH) 由中国科学院动物研究所生产，供体羊为纯种辽宁绒山羊共40余只，年龄5岁以下，产后60d以上。选择体型较大、繁殖正常、经产的当地山羊作为受体。

1.2 方法

1.2.1 供体超排处理

于发情周期任1天在供体山羊阴道内放置情酮栓。放置栓后第14d开始进行超数排卵处理：(1)促卵泡素6～7mg以4d递减量注射;注射2次/d，于第7次注射时取出情酮栓。(2)去除情酮栓后用结扎输精管的公羊试情，接受爬跨时肌注促黄体素并输精。间隔8～10h重复输精。

1.2.2 胚胎的采集、鉴定

在供体山羊发情后6～7d，利用手术法采集桑椹胚和囊胚。按Elsden等的分级标准分为A、B、C和D4个等级。只有A、B级胚胎被判定为可用胚。

1.2.3 受体羊的发情同步处理

受体山羊与供体组同时放入情酮栓。在供体去除情酮栓前0.5d去除受体情酮栓，去栓后，用试情公羊检查发情，并记录发情日期和时间，同组供体与受体同步发情的差异不超过24h。

1.2.4 胚胎移植

受体母羊局部麻醉，腹中线切口，暴露出卵巢和子宫，向子宫角前1/3移入胚胎。

1.2.5 数据处理

利用SPSS软件进行数据处理，统计各测定指标的平均数、标准差，用LSD法检验分析组间差异。

2 结果

2.1 不同年龄山羊超数排卵和胚胎移植效果

在秋季对43只年龄为1～4岁年龄的辽宁绒山羊采用国产FSH 6～7mg 4d递减处理。从表1可以看出，2～3岁山羊平均排卵数最高，显著高于<1岁山羊;2岁和3岁山羊可用胚率差异不显著，但显著高于<1岁山羊。2～3岁山羊胚胎经移植妊娠率最高，显著高于<1岁山羊和4岁山羊。辽宁绒山羊超数排卵和胚胎移植的最佳年龄应为2～3岁。

2.2 季节对超数排卵效果的影响

对45只2～3岁年龄山羊在春 (3～5月) 、秋 (9～11月) 和冬季 (12～次年2月) 用国产FSH 6～7mg 4d递减剂量处理。结果发现，秋季平均排卵数显著高于春季，可用胚率显著高于冬季。春季与冬季在平均排卵数和可用胚率上差异均不显著。胚胎经移植妊娠率冬季显著低于春、秋两季，春季与秋季间无显著差异。

3 讨论与小结

研究发现，秋季平均排卵数显著高于春季，可用胚率显著高于冬季。春季与冬季在平均排卵数上差异不显著。胚胎经移植妊娠率冬季显著低于春、秋两季，春季与秋季间无显著差异。这说明，在山东地区冬季对山羊移植妊娠率有影响。因此，尽管经过多年的饲养驯化辽宁绒山羊似乎已经失去繁殖的季节性，但秋季仍然是辽宁绒山羊的发情盛季，这一时期卵巢对激素的反应能力、卵质量都优于其它季节。冬季胚胎经移植妊娠率低可能与在检胚及胚胎运输过程中低温打击对胚胎造成损伤有关[4,5]。

对于优秀供体，人们总是期望尽早实施超排，获得大量胚胎进行移植[6]。笔者的试验结果还表明，辽宁绒山羊在1岁前已具备了对FSH反应的能力，超排可以获得一定数量的可用胚，但平均排卵数、可用胚率和妊娠率均明显低于其它年龄山羊。因此，辽宁绒山羊进行超排和胚胎移植的最佳年龄为2～3岁。

参考文献

[1]Loi P, Ptak G.Embryo transfer and related technologies in sheep reproduction.Reprod Nutr Dev 1998;38:615–628.

[2]Cognie Y.State of the art in sheep-goat embryo transfer.Theriogenology 1999;51:105–116.

[3]Ptak G, Loi P.Offspring from onemonth-old lambs:studies on the developmental capability of prepubertal oocytes.Biol Reprod 1999;61:1568–1574.

[4]Ptak G, Dattena M.Ovum pick up in sheep:present situation and future perspectives.14th International Congress on Animal Reproduction;Stockholm;July 2–6, 2000;p.267.

[5]Downing JA, Joss J.Ovulation rate and the concentrations of gonadotrophic and metabolic hormones in ewes fed lupin grain.J Reprod Fertil 1995;103:137–145.