薄层扫描（精选7篇）
薄层扫描 篇1
精制藿胆胶囊由广藿香叶、猪胆粉两药组成,具有芳香化浊,清热通窍的功能,是治疗慢性鼻炎、鼻窦炎的常用中成药。牛磺酸(化学名2-氨基乙磺酸)广泛存在牛胆(牛黄)、猪胆、蛇胆、熊胆等胆汁类药材,既以游离分子形式存在,也与胆酸、去氧胆酸等结合存在。牛磺酸是一种具有显著药效的物质,本身作为镇静消炎药被中国药典二部收载。中国药典2005年版一部收载的藿胆丸质量标准仅有广藿香油和猪去氧胆酸的TLC鉴别和猪去氧胆酸及鹅去氧胆酸的含量测定,对另一有效成分牛磺酸未作监测。本文对精制藿胆胶囊及其原料猪胆粉中的牛磺酸进行了TLCS测定研究,现将结果报道如下:
1 仪器、试药及样品
日本岛津CS-930薄层色谱扫描仪;手提式不锈钢蒸汽消毒器;TD4型电动离心机。
硅胶G薄层预制板;正丁醇等化学试剂均为分析纯;732型强酸型阳离子交换树脂。
精制藿胆胶囊(批号:070501、070502、070503)。猪胆粉(批号:070601、070602、070603),牛磺酸对照品(111616-200),由中国药品生物制品检定所提供。
2 实验方法与结果[1~5]
2.1 色谱条件
硅胶G薄层板,展开剂:正丁醇-乙腈-水-甲醇(5∶5∶2∶3),展距8cm,显色剂:1%茚三酮乙醇溶液,105℃加热约5min至斑点清晰,扫描条件:反射法锯齿扫描,检测波长470nm。
2.2 样品的制备
2.2.1 猪胆粉供试品溶液的制备
精密称取猪胆粉1g,加10%氢氧化钠溶液50ml,置蒸汽消毒器内,120℃加热4小时,放冷,用盐酸调节p H值至2~3,摇匀。用乙酸乙酯振摇提取4次,每次50ml,弃去乙酸乙酯液,水液用10%氢氧化钠溶液调p H至中性,浓缩至50ml后离心5min,取上清液,上强酸型阳离子交换树脂柱,用蒸馏水洗脱,接收p H=3~5的流出液,浓缩,定容至10m L,即得。
2.2.2 精制藿胆胶囊供试品溶液的制备
精密称取精制藿胆胶囊内容物2g,加10%氢氧化钠溶液100ml,置蒸汽消毒器内,120℃加热4小时,放冷,用盐酸调节p H值至2~3,摇匀。用乙酸乙酯振摇提取4次,每次100ml,弃去乙酸乙酯液,水液用10%氢氧化钠溶液调p H至中性,浓缩至50ml后离心5min,取上清液,上强酸型阳离子交换树脂柱,用蒸馏水洗脱,接收p H=3~5的流出液,浓缩,定容至10m L,即得。
2.3 对照品溶液的制备
取105℃干燥至恒重的牛磺酸对照品11.5mg,置10ml的容量瓶中,加蒸馏水稀释并加至刻度,摇匀。即得每1ml含1.15mg的牛磺酸对照品液。
2.4 线性关系
精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6μL进行点样,按层析条件展开,显色,扫描,测定峰面积,以对照品点样量(X)对峰面积(Y)进行线性回归处理,得回归方程为Y=3368.5X+3375,r=0.9995,线形范围为1.15μg~11.5μg。
2.5 精密度试验
2.5.1 同板精密度
精密吸取对照品溶液6μl点于同一薄层板上,按测定法对6个点进行扫描测定,其峰面积积分值分别为:
2.5.2 异板精密度
精密吸取对照品溶液6μl点于六块薄层板上,按测定法对6个点进行扫描测定,其峰面积积分值分别为:
2.6 稳定性试验
精密吸取对照品溶液点于薄层板上,展开显色,按测定法分别在不同的时间(0,1,3,5h)扫描测定,其峰面积值分别为:22833.7,22852.3,22557.6,20745,由上述数据可知牛磺酸显色后放置3h内稳定(RSD=0.80%),本研究采用在显色后3h内进行扫描测定。
2.7 重复性试验
取精制藿胆胶囊(批号:070501),按供试品溶液制备项下操作,平行制备6份,按测定方法进行含量测定,结果分别为:1.05,1.06,1.08,1.09,1.08mg/g,RSD=1.48%,结果显示重现性较好。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的精制藿胆胶囊(批号:070501)10g,分别精密加入一定量的牛磺酸对照品,按供试品溶液制备项下操作,计算回收率,结果显示,平均回收率为92.78%,RSD=1.57%。
2.9 样品测定
按上述样品制备方法和色谱条件对精制藿胆胶囊、猪胆粉各3批样品进行了含量测定,结果见表1。
3 讨论
目前国内牛磺酸含量测定方法文献报道[6]有:酸碱滴定法,该法是对单一化合物的分析测定方法,不适用于天然产物中牛磺酸的分析;氨基酸分析仪测定法,该法仪器价格昂贵,不宜普及推广;高效液相色谱法需要柱前衍生化后测定,操作麻烦,样品前处理方法对测定结果影响较大。本文采用薄层扫描法测定牛磺酸含量,灵敏度高,方法简便,准确快速。
摘要：目的:采用薄层色谱扫描法测定精制藿胆胶囊及原料猪胆粉中牛磺酸的含量。方法:样品经预处理后点于硅胶G薄层板上,以正丁醇-乙腈-水-甲醇(5:5:2:3)为展开剂,于470nm波长处进行吸收扫描,用两点校正法测定含量。结果:此方法的平均回收率为92.68%,最低检测限为1.13μg。结论:本测定方法简便可行、重复性好,适用于藿胆丸制剂的质量控制。
关键词：精制藿胆胶囊,牛磺酸,薄层扫描法
参考文献
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薄层扫描 篇2
1 资料与方法
1.1 一般资料
筛选2012年9月~2013年9月本院收治的胃癌患者27例, 作为研究对象。所有患者均经过胃镜检查及胃镜取样病理实验检查确诊为胃癌。其中男16例, 女11例, 年龄在32~78岁, 平均年龄为 (56.7±1.9) 岁, 病程为1~9个月, 平均病程时间为 (5.6±0.5) 个月。胃镜检查胃癌发生于胃窦19例, 胃底贲门部5例, 其他部位3例, 发生溃疡16例。病理实验结果显示胃癌T期9例 (T1期2例, T2期1例, T3期3例, T4期3例) , M期8例 (M0期3例, M1期5例) , N期10例 (N1期3例期3例期4例) 。
1.2 方法
首先建立胃部气充盈环境:患者口服10 ml无菌蒸馏水、产气粉约9 g, 并进行初次扫描, 如气充盈情况不满意, 加服充气粉。应用飞利浦MX16-SLICE螺旋CT, 管电压120 k V, 电流150 m A, 层厚2 mm, 螺距1 mm, 设备调校完毕保证机器正常运行。患者检查前8 h禁食, 5~10 min肌内注射山莨菪碱20 mg, 充分气充盈患者仰卧位, 一次屏气扫描完成上腹部, 高压注射器注射优维显100 ml, 注射速度3 ml/s, 三期增强扫描于注射后20~25 s动脉期, 60~65 s门脉期, 4~8 min延迟期。采集到的影像结果应用图像工作站软件进行多平面立体重建 (MPR) , 对薄层螺旋CT三期增强图像及重建后图像进行分析诊断, 对其病变部位及病情进行评价, 总结其影像学表现特点。以胃镜检查及病理实验结果作为金标准, 通过与薄层螺旋CT诊断结果进行对比, 分析薄层螺旋CT的应用价值。
1.3 评价标准
胃癌分期应用国际TMN分期法[3]:T期提示胃壁增厚程度, 胃壁增厚标准为厚度>10 mm, T1~T4胃壁厚度逐级增厚;M期显示淋巴结转移情况, M0为无淋巴结转移, M1期轻度转移, M2期中度及重度淋巴结转移;M期显示胃癌侵袭周围器官组织情况, M0期无侵袭, M1期侵袭周围器官组织。
1.4 统计学方法
应用IBM SPSS 17.0统计学软件对实验数据进行统计分析, 计数资料采取χ2检验, P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 薄层螺旋CT对病灶位置定位情况比较
薄层螺旋CT对病灶位置定位情况比较, 两组结果比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表1。
2.2 薄层螺旋CT对病情的评价情况
薄层螺旋CT对病情的评价情况, 两组数据比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表2。
3 讨论
由于螺旋CT扫描速度较快, 断层影像清晰、无重叠物干扰, 可进行平扫及增强扫描, 能够准确的对病变位置、病变情况进行准确评价, 同时应用软件进行多平面立体重建可直观的对病情进行描述, 有助于诊断及治疗方案的选择, 临床上已广泛认可螺旋CT应用诊断胃癌[4,5]。由于胃部为囊性中空器官, 当胃部充盈时可使胃黏膜完全展开, 进行多平面重建时, 有助于螺旋CT对胃黏膜病变的描述, 防止漏诊、误诊现象的发生, 而选择气充盈方法, 主要针对薄层螺旋CT, 能够明显降低辐射剂量, 减少对患者损伤[6,7]。通过对所有患者的CT影像结果分析可知, 胃癌患者CT影像存在胃壁不规则增厚现象, 并且强化扫描门脉期效果较为显著, 并且胃黏膜存在不均匀软组织肿块, 影像显示腔内充盈缺损, 存在明显淋巴结肿大现象, 中晚期患者存在周围结构、器官侵袭现象[8]。在实验结果中, 薄层螺旋CT对胃癌病灶的定位准确率与胃镜检查结果比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 同时薄层螺旋CT对胃癌的分期结果与病理实验结果比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 说明胃部气充盈环境下应用薄层螺旋CT检查诊断结果与胃镜、病理实验检查结果无显著差异, 可进行替代检查。综上所述, 胃部气充盈环境下应用薄层螺旋CT根据其影像学表现诊断胃癌, 诊断结果准确可靠, 检查时间缩短, 费用较低, 患者所受辐射剂量较低, 具有临床应用及推广价值。
摘要：目的 探讨胃部气充盈后行薄层螺旋CT对胃癌诊断的临床价值。方法 筛选本院收治的胃癌患者27例作为研究对象。所有患者建立胃部气充盈后, 应用薄层螺旋CT进行胃部扫描, 根据其影像学结果进行诊断, 并对胃癌病灶发生部位及临床分期进行评价, 比较其与胃镜检查及病理检查结果 的差异性。结果 CT检查胃癌发生于胃窦19例, 胃底贲门部6例, 其他部位2例, 与胃镜检查比较, 表示差异无统计学意义 (P>0.05) ;CT对胃癌的TNM分期情况与病例检查结果比较, 表示差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 患者胃部气充盈后行薄层螺旋CT扫描检查, 可根据其CT影像学表现对胃癌诊断, 病灶部位定位准确, 可对胃癌进行准确分型, 并且无医源性损伤, 检查费用低, 具有临床应用及推广价值。
关键词：气充盈,薄层螺旋CT,胃癌,诊断
参考文献
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薄层扫描 篇3
1 仪器与材料
三用紫外分析仪,超声波清洗机,瑞士Camag薄层扫描仪(TLC Scanner 3),高速中药粉碎机,层析缸;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所110753-200413)所用试剂均为分析纯。猪殃殃(安徽源真堂中药饮片批号201016)经九江学院药学教研室高春华教授鉴定。
2 方法与结果
2.1 以绿原酸为对照品建立薄层色谱
(1)对照品溶液的制备:
取绿原酸对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液,作为对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备:
称取药材粗粉5 g,加甲醇30 mL,超声处理50 min, 冷后,滤过,滤液作为甲醇提取供试品溶液。
(3)薄层色谱鉴别:
照薄层色谱法试验吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL,分别点于同一硅胶板上,以乙酸乙酯:甲酸:水(14:1:1)为展开剂,上行展开,取出,晾干,至紫外光灯(365 nm)下检视定位。结果,供试品色谱中,在与对照品相同位置上,显相同斑点。再喷以2% Fecl3溶液,供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同的亮黄色斑点。上述实验重复3次,结果见表1、图1。
2.2 以绿原酸为对照品进行薄层扫描
2.2.1 扫描条件
双波长反射锯齿扫描,对绿原酸斑点在200~600 nm范围内扫描,线性参数SX=3,灵敏度中度。
2.2.2 薄层扫描结果
由薄层扫描图谱,甲醇作溶剂提取猪殃殃中绿原酸时所得Rf值与绿原酸对照品Rf值基本保持一致,因此表明猪殃殃化学成分中含有苯丙素类化合物“绿原酸”,见图2、图3。
3 讨 论
3.1 绿原酸的不稳定性
绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸结合而成[咖啡酸(3,4-二羟基肉桂酸)的羧基与奎尼酸(1,3,4,5-四羟基环己羧基)]的3位羟基结合而成的酯类化合物,是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。该成分易于氧化和水解[7],中草药的提取工艺不同,有可能会造成绿原酸的提取不完全,或引起不同程度的降解和损失,从而影响绿原酸的薄层鉴别[8]。
3.2 绿原酸的保存
绿原酸分子结构中含有不饱和双键,酯键及多元酚等不稳定结构,在从植物的提取过程中,分子内酯基水解及不饱和双键迁移而发生异构化,所以提取时不能高温,强光及长时间加热[9]。绿原酸的供试品溶液放置于棕色瓶,冰箱(2 ℃)保存时最稳定[10]。
3.3 展开剂的选择
猪殃殃的薄层色谱鉴别,曾以2010版一部金银花药材的TLC展开条件对样品进行鉴别,发现Rf值较低,斑点间分离度较差,经反复试验,显示以乙酸乙酯:甲酸:水(14:1:1)为展开剂,展开后效果较好。
4 结 论
TLC不需特殊的仪器,操作简便,加之近年来高效吸附剂、商品化的预制板、摄像装置的应用,极大的提高了分离效果、检出灵敏度、准确性和重现性,使TLC法已成为目前应用最多的生药理化鉴别方法。该鉴别方法对应的样品色谱斑点清晰,无拖尾、背景无干扰且重复性好。本试验用甲醇作溶剂提取猪殃殃中绿原酸。以乙酸乙酯:甲酸:水(14:1:1)为展开剂,2%FeCl3溶液为显色剂时对猪殃殃中绿原酸进行薄层色谱鉴定,结果与绿原酸标准品在同一位置显示相同斑点,薄层色谱扫描图谱基本一致,本方法可快速,准确地对猪殃殃中绿原酸进行鉴定。
摘要：建立猪殃殃中绿原酸的薄层色谱鉴别方法。猪殃殃药材经醇提,以绿原酸为对照品,以乙酸乙酯∶甲酸∶水(14∶1∶1)为展开剂,显色剂为2%Fecl3溶液。结果:甲醇作溶剂提取猪殃殃中绿原酸时所得Rf值与绿原酸对照品Rf值基本保持一致,呈亮黄色斑点。可快速,准确地对猪殃殃中绿原酸进行鉴定。
关键词：猪殃殃,绿原酸,薄层色谱,薄层扫描
参考文献
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[9]黄芳华.绿原酸及其中药注射剂的安全性问题状况分析[J].中国中药杂志,2008(22):2716-2717.
薄层扫描 篇4
1 仪器、试剂与药物
CS-930型薄层扫描仪 (日本岛津) ;定量毛细管 (美国Drummond) ;紫外分析仪UV-1型 (上海电光仪器厂) 。
聚酰胺薄膜 (浙江黄岩四青生化材料厂) ;黄芩苷对照品 (中国食品药品检定研究院) ;所用试剂均为分析纯;瘟清颗粒剂为本公司自制。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备
精密称取黄芩苷对照品适量, 加50%乙醇制成0.10mg/mL的对照品溶液, 即得。
2.2 供试品溶液制备
精密称取瘟清颗粒2g, 用50%乙醇回流提取至提取液无色, 浓缩后定容于50mL容量瓶中, 备用。
2.3 阴性对照品溶液制备
按处方比例称取除黄芩外的其它药材, 按照“2.2”项下方法制备阴性对照溶液, 备用。
3 方法
3.1 薄层定性
精密吸取对照液、供试液和阴性对照液各2μL, 分别点样于同一聚酰胺膜 (15cm×15cm) 上, 以36%醋酸为展开剂, 展距为10cm, 溶剂挥干后, 在紫外灯 (365nm) 下检视, 供试品溶液和对照品溶液在相应位置上具有相应特征的斑点显示, 而阴性对照品溶液在相应位置上无特征斑点显示。薄层色谱见图1。
3.2 扫描结果
对黄芩苷特征斑点进行光谱扫描, 结果表明其在280nm波长处有最大吸收, 而在350nm波长处吸收最少, 故采用S=280nm, 参比波长R=250nm, 双波长锯齿扫描, 宽度为100mm。
3.3 线性关系考察
精密吸取黄芩苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μL, 点样于同一聚酰胺薄膜上, 按上述条件展开, 扫描测定。结果表明, 黄芩苷点样量 (X) 在0.75~2.60μg范围内与峰面积积分值 (Y) 呈良好的线性关系, 回归方程为:
3.4 精密度试验
精密吸取黄芩苷对照品溶液2μL, 在同一聚酰胺薄膜上依次点样5次, 按上述条件展开, 测定峰面积积分值, RSD=1.78%, 表明该方法精密度良好。
3.5 稳定性试验
精密吸取黄芩苷对照品溶液2μL, 点于聚酰胺薄膜上, 按上述条件展开, 扫描测定斑点峰面积, 每隔30min测定1次, 连续5次, 其峰面积积分值在2h内变化不大 (RSD=1.86%, n=5) , 表明测定样品在2h内稳定, 测定结果可靠。
3.6回收率试验
精密称取黄芩苷对照品适量, 加入已知黄芩苷含量的供试品中, 依法制备供试品溶液, 按上述条件进行测定, 结果测得黄芩苷的平均回收率为99.05% (n=5) , 该方法回收率符合要求。
3.7 供试品含量测定
精密吸取供试品溶液4μL、黄芩苷对照品溶液1μL和2μL, 分别交叉点于同一聚酰胺薄膜上, 按上述条件展开, 扫描测定, 用外标两点法计算黄芩苷含量, 测定结果见表1。
4 讨论
本文采用聚酰胺薄膜为点样板材料, 采用双波长薄层扫描法对黄芩苷含量进行测定, 方中黄芩苷与其他成分分离效果较好, 不需要特殊处理将目标测定成分与干扰成分完全分离[2]。该法具有简便、快速、准确等优点, 可作为测定瘟清颗粒剂中黄芩苷含量的方法, 用于控制该制剂的质量。
参考文献
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薄层扫描 篇5
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品、试剂与仪器:
靛玉红标准品 (中国药品生物制品检定所, 批号110717200204) ;靛蓝标准品 (中国药品生物制品检定所, 批号110716200610) ;板连冲剂 (武警河北总队医院制剂室研发, 规格10g/袋) ;硅胶HPTLC板 (青岛海洋化工有限公司) ;石油醚、乙酸乙酯、氯仿均为色谱纯。CS-930型薄层扫描仪 (日本岛津) ;DHG-9243BS型电热恒温鼓风干燥箱;AR64CN型电子天平 (奥豪斯仪器 (上海) 有限公司) ;微量进样器 (山东滕海分析仪器有限公司) 。
1.1.2 色谱条件:
薄层层析板:硅胶HPTLC板;展开剂:石油醚-乙酸乙酯-氯仿 (1∶1∶8) 。
1.2 方法
1.2.1 硅胶HPTLC板于105℃活化1h, 冷却后置干燥器中备用。
1.2.2 标准溶液的制备
靛玉红标准溶液的制备:精密称取靛玉红标准品10mg, 置于100mL容量瓶中, 加氯仿溶解, 定容至刻度, 摇匀。配成每毫升含0.1mg靛玉红的标准溶液。避光保存。
靛蓝标准溶液的制备:精密称取靛蓝标准品50mg, 置于250mL容量瓶中, 加氯仿溶解, 定容至刻度, 摇匀。配成每毫升含0.2mg靛蓝的标准溶液。避光保存。
1.2.3 供试品溶液的制备
将板连冲剂研磨, 过筛, 烘干。精密称取5g, 用氯仿100mL索式回流提取, 过滤, 滤液水浴蒸干, 残渣用甲醇溶解并定容至10mL。
1.2.4 标准曲线的绘制
精密吸取上述靛玉红、靛蓝对照品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL, 分别点于同一硅胶HPTLC板上, 依法展开[4], 并进行全程扫描测定各斑点的面积。以斑点面积积分值为纵坐标Y, 以点样量为横坐标X, 绘制标准曲线。
1.2.5 稳定性实验
精密吸取对照品溶液5μL点于硅胶HPTLC板上, 依上述条件层析展开, 显色, 每间隔0.5h测定一次峰面积积分值, 计算RSD。
1.2.6 精密性实验
精密吸取对照品溶液3μL在同一块薄层板上点样6次, 依法展开, 计算各斑点的峰面积积分值RSD。
1.2.7 样品含量测定
分别精密吸取不同供试品溶液2μL, 对照品溶液1μL和3μL, 交叉点于同一硅胶HPTLC板上, 按上述条件展开, 显色, 扫描测定各样品中靛玉红、靛蓝的含量, 以外标二点法计算含量。
1.2.8 加样回收实验
取5份已知含量 (0.496mg/g) 的供试品粉末2g, 精密加入靛玉红及靛蓝对照品, 按供试品溶液制备, 测定回收率。
1.2.9 统计学处理
数据以表示, 采用SPSS11.0统计软件进行分析。
2 结果
2.1 标准曲线
2.1.1 以靛玉红对照品浓度c对峰面积A进行线性回归分析, 得一不过原点的线, 因此使用外标两点法进行含量测定。靛玉红在点样量0.1～0.5μg范围内呈良好的线性关系, 得回归方程为:Y=9991X+1017.9, r=0.9999, 见图1。
2.1.2 同2.1.1方法得靛蓝标准曲线, 回归方程为:Y=19955X+2080.5, r=0.9998, 见图2。
2.2 稳定性及精密性实验
稳定性实验结果的RSD为1.18% (n=5) , 精密性实验结果的RSD为2.18%。
加样回收率试验结果测定板连冲剂中靛玉红与靛蓝含量的RSD分别为2.74%、3.54%和4.53%、2.96%, 见表1。
2.3 板连冲剂中靛玉红与靛蓝的含量, 见表2。
3 讨论
近些年来季节性流感的感染情况愈发严重, 年初以来据卫生部公布的数据已经有10万多人次感染甲型H1N1流感, 死亡300多例。随着国内外对板蓝根抗病毒作用的进一步研究, 传统中药板蓝根在预防与治疗病毒性流感方面的作用更加显著, 从而导致了这一类药物在市场上的紧俏[5,6]。目前关于板蓝根的质量控制标准尚无确切定论, 本实验参考了近些年来的研究, 通过检测板连冲剂中的靛玉红以及靛蓝的含量来对制剂进行治疗控制, 通过查阅相关文献资料本实验结果显示板连冲剂中的板蓝根有效成分含量较高[6,7], 因此下一步将按照申请新药的标准继续完善制剂的质量, 以期尽早形成量产。
摘要：目的 为确定我院研发制剂板连冲剂中靛玉红与靛蓝的含量, 以期对其药品质量实现可控, 特采用薄层色谱扫描法进行测定。方法 选取硅胶HPTLC板点样, 以石油醚-乙酸乙酯-氯仿 (1∶1∶8) 为展开剂, 在该色谱条件下对样品进行展开。结果 板连冲剂中靛玉红含量为 (0.567±0.325) μg/g、靛蓝含量为 (0.989±0.503) μg/g;RSD为4.53%、2.56%。结论 我院研发的板连冲剂所含有效成分浓度较高、质量较好, 应继续做好研发工作尽早形成量产服务部队。
关键词：板连冲剂,靛蓝,靛玉红,薄层色谱
参考文献
[1]王瑞, 杨海英, 杨琪伟, 等.板蓝根的质量标准研究[J].中草药, 2010, 3 (3) :478-480.
[2]崔卓, 王颖, 康廷国.板蓝根有效成分质量研究[J].辽宁中医杂志, 2004, 8 (8) :692-693.
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[4]国家药典委员会.中国药典一部[M].北京:化学工业出版社, 2005:附录ⅥB.
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薄层扫描 篇6
关键词：颞骨CT薄层扫描,先天性感音神经性耳聋,内耳畸形
1 资料和方法
内耳发育畸形是引起先天性耳聋的重要原因之一。内耳发育畸形在重度或极重度先天性感音神经性耳聋患儿中占44.5%, 而内耳畸形又多由遗传因素引起[1]。内耳结构复杂、细微, 且无法直观观察, 内耳畸形种类繁多, 临床诊断及分型较困难。颞骨CT薄层扫描能精确显示中耳及内耳解剖形态, 确定畸形部位, 有助于对内耳发育畸形进行临床分型。
1.1 一般资料
2008年1月至2010年12月在我院进行语训及申报人工耳蜗植入项目的200例患儿, 其中男93例, 女106例, 年龄1~9岁, 平均年龄5岁, 临床表现为智力发育正常, 自幼无听力, 存在语言障碍。
1.2 听力学检测
对200例患儿全部进行了行为侧听或纯音侧听、声导抗、听性脑干反应 (auditory brainstem response, ABR) 、畸形产物耳声发射 (DPOAE) 检测, 确诊均为先天性感音神经性耳聋。
1.3 颞骨高分辨率薄层扫描检查 (HRCT)
采用GE Prospeed FI螺旋CT对患儿进行轴位薄层扫描, 扫描范围为乳突下缘至颞骨岩部上缘。扫描参数:120 kv, 150 m A, 扫描时间2.0 s, 扫描层厚1 mm, 层距1 mm, 标准骨算法重建, 窗位4 000, 窗宽700。影像观察与结果分析:通过对耳蜗形态、蜗管、蜗轴、蜗底及转数, 前庭、半规管、总脚的形态宽度及大小, 前庭导水管及内听道的宽度进行观察分析, 分为Michel畸形, Mondini畸形, 前庭及半规管畸形, 大前庭导水管综合征。
2 结果
听力学检测200例患儿中139例为极重度听力损失, 49例为重度听力损失, 12例为中度听力损失。颞骨CT薄层扫描检查发现, 内耳发育正常111例, 内耳畸形89例, 畸形率占45%。参考白人驹等[2]对耳蜗畸形进行的诊断分型, 可分为耳蜗畸形30例 (15%) , 前庭半规管畸形6例 (占3%) ;内听道畸形2例 (1%) , 大前庭导水管综合征51例 (26%) 。
(1) 耳蜗畸形分为: (1) Michel畸形:耳蜗和前庭结构完全缺如, HRCT表现为内耳迷路完全是致密骨质, 耳蜗和前庭完全缺如, 可伴内听道未发育, 是内耳发育畸形中最严重的一种 (见图1、图2) ; (2) Mondini畸形:耳蜗和前庭直径正常, 但耳蜗转数不够, 仅存1.5周, 可伴有大前庭、半规管畸形, 前庭导水管扩大, 是最常见的内耳畸形 (见图3) 。 (2) 前庭、半规管畸形:前庭畸形常与其他畸形同时发生, 最常见的是外半规管全部或部分与前庭融合。半规管畸形包括半规管缺如、半规管发育不良和扩大, 其中以外半规管畸形最常见 (见图4) 。 (3) 内听道畸形:包括内听道缺如、内听道闭锁、内听道狭窄或扩大, CT显示内听道直径<2 mm为内听道狭窄 (见图5) 。 (4) 大前庭导水管综合征:表现为前庭导水管外口与总脚之间中点的内径≥1.5 mm (见图6) 。
3 讨论
内耳发育畸形多由遗传因素引起, 而内耳发育畸形也是引起先天性感音神经性耳聋的重要原因之一, 在重度或极重度先天性感音神经性耳聋患儿中发病率很高。由于内耳位于颞骨岩部, 体积小, 位置深, 结构复杂精细且内耳畸形种类繁多, 仅靠临床耳科检查无法对其做出临床诊断及分型, 必须结合形态学检查。而普通X线检查较难显示内耳的结构和病变, 颞骨CT薄层扫描能精确显示中耳、内耳的详细解剖形态, 确定病变部位及周围结构, 并且可以对内耳发育畸形进行详细的临床分型, 是对先天性感音神经性耳聋患儿除听力学检查之外的必要补充。CT为颞骨先天性畸形的诊断提供了有价值的形态学资料, 且90%以上的病例的横轴位切面像即能提供所需的全部信息。因此, 应将颞骨CT薄层扫描作为先天性感音神经性耳聋患儿的常规检查项目之一。
随着人工耳蜗植入技术[3]的不断成熟、普及, 人工耳蜗植入将成为先天性感音神经性耳聋患儿获得听力的最主要手段。因此, CT检查在人工耳蜗植入术前必不可少, 其重点在于检出手术禁忌证, 如急慢性中耳炎、内耳道狭窄、内耳骨迷路的严重畸形以及耳蜗的纤维化等。随着科技的不断进步, 耳蜗骨化、Mondini畸形已不再是人工耳蜗植入术的绝对禁忌证, 只须提前准备特殊的植入电极即可手术。如今, 人工耳蜗植入术仍是治疗严重感音神经性耳聋的重要手段, 患儿前庭导水管易并发术中脑脊液漏, 即“井喷”现象, 增加了术后脑脊液鼻漏及中耳炎发生的可能性。对于了解乳突的气化情况及面神经情况方面, HRCT也具一定有优势, 尽管乳突状况不影响人工耳蜗植入的选择, 但对于手术中可能遇到的困难仍有一定的提示, 若乳突气化好, 手术则容易进行, 若乳突硬化, 耳蜗电极插入则较困难。
总之, 颞骨薄层CT扫描能精确显示中耳、内耳的详细解剖形态, 确定病变部位及周围结构, 是对先天性感音神经性耳聋患儿除听力学检查之外的必要补充。为耳科医生对疾病的处理, 如手术、人工耳蜗的植入、佩带助听器等提供形态学依据。尤其为内耳发育畸形所引起先天性感音神经性耳聋患儿进一步的治疗———人工耳蜗植入术的实施提供详细的影像学资料, 为手术提供充分依据。
参考文献
[1]徐悦凡, 任鲁风, 宋文芹, 等.中国人非综合征型听力损失患者Cx26基因的突变分析[J].中华耳鼻咽喉科杂志, 2002, 37 (5) :348~351.
[2]白人驹, 马大庆, 张雪林, 等.医学影像诊断学[M].北京:人民卫生出版社, 2007.
薄层扫描 篇7
薄层色谱法(Thin Layer chromatography,TLC)具有设备简单、操作方便、分离分析速度快等优点,且对实验室条件要求不高、实验成本低廉,与高效液相色谱法相比,更适用于大量样品的粗筛。20世纪80年代以来,随着科研仪器的发展与进步,TLC中的点样、扫描等步骤已能应用仪器全面代替,配以高质量的薄层扫描仪,大大提高了定量TLC结果的重复性与准确度,弥补了经典的TLC法在定量分析方面的不足。近年来,定量薄层扫描法在药物分析领域得到广泛应用[5,6]。该文运用定量薄层扫描法,建立在同一薄层板上同时对N4-脱一氧乙酰甲喹及脱二氧乙酰甲喹(图1)进行定量测定的检测方法,该法可用于复杂生物样品中乙酰甲喹代谢物的初步检测。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
Camag TLC Scanner 4型薄层扫描仪(瑞士);Camag Linomat 5型半自动点样仪(瑞士);Shimabe电子天平(日本岛津公司);硅胶GF254薄层色谱板(100 mm×200 mm×0.25mm,青岛谱科色谱技术有限公司);N4-脱一氧乙酰甲喹及脱二氧乙酰甲喹均为实验室自制;甲醇为色谱纯(百灵威);其他试剂为国产分析纯。
1.2 试验方法
1.2.1 溶液的制备。
取105℃干燥至恒重的N4-脱一氧乙酰甲喹及脱二氧乙酰甲喹,精密称定,加甲醇适量溶解,分别制成每50 m L含N4-脱一氧乙酰甲喹4.6 mg、脱二氧乙酰甲喹4.6 mg的对照品混合溶液,备用。
1.2.2 试验条件。
薄层色谱板:硅胶GF254薄层色谱板(100mm×200 mm×0.25 mm);展开剂:石油醚-乙酸乙酯(4∶1),上行展开;点样:半自动条带点样,带宽:6 mm;扫描:W灯,λ=254 nm,狭缝4.0 mm×0.2 mm。
1.3 系统适用性试验
1.3.1 重复性。
吸取对照品混合溶液于同一薄层色谱板上点样6点,每点溶液量4μL,如法展开,扫描样品点峰面积积分值。
1.3.2 分离度。
根据样品色谱图,判断N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹的分离度。
1.4 方法学验证
1.4.1 最低检出限。
取对照品混合溶液,于同一薄层色谱板上,分别依次精密点样0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16μL,每量3点,按量循环点样,如法展开、扫描。
1.4.2 线性关系。
取对照品混合溶液,于同一薄层色谱板上,分别依次精密点样1.0、2.0、4.0、8.0μL,每量2点,按量循环点样,如法展开、扫描。以点样量为横坐标,各点样量斑点峰面积积分值平均值为纵坐标绘制标准曲线。
1.4.3 扫描样点稳定性试验。
将1.4.2中扫描后的薄层板置于扫描仪中,以后每隔10 h扫描1次。
2 结果与分析
2.1 重复性
试验结果表明,N4-脱一氧乙酰甲喹和脱二氧乙酰甲喹RSD分别为6.0%和4.9%。
2.2 分离度
根据样品色谱图(图2),表明N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹与前后样品点之间分离清晰,无其他成分干扰,扫描曲线图均达到基线分离。
2.3 最低检出限
N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹在点样0.5μL时,样点不能或有时不能获得积分,在点样1.0μL及以上时,样点均能获得积分,故认为该方法N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹的最低检出量为0.092μg。
2.4 线性关系
得N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹回归方程分别为Y=2.30×104X+1.38×103(R=0.985)、Y=1.54×104X+1.03×103(R=0.991)。线性范围均为0.092~0.736μg。
2.5 稳定性
结果表明,各峰面积在50 h内基本稳定,N4-脱一氧乙酰甲喹峰面积的RSD小于3.4%;脱二氧乙酰甲喹峰面积的RSD小于5.2%。
3 结论与讨论
该法定量测定N4-脱一氧乙酰甲喹及脱二氧乙酰甲喹,2组分分离良好,试验操作简单,所得数据精密度和准确度较好,适用于快速简便检测复杂生物样品中N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹的含量。试验后期发现,所配N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹的甲醇溶液在室温放置5 d后,溶液颜色会由淡黄褪至无色,因而所用溶液以现配现用为宜,若需放置,应置于0~4℃冰箱储存。TLC板上样品在50 h内稳定,但带有样品的TLC板放置1个月后,以同法进行扫描,发现板上样点峰面积积分明显变小,说明N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹吸附在薄层板上后不稳定,在进行定量薄层色谱扫描分析时应即时操作。
该法所得N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹的最低检出量均为0.092μg。叶蓓蓓等[5]运用薄层扫描法进行定量检测时,所得胆酸及猪去氧胆酸的最低检出限均为8 ng。这一差异可能与该文所用薄层板为普通薄层色谱板并非高效薄层色谱板有关,可在此基础上进行深入研究,以建立针对N4-脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹精密度及准确度更好的薄层扫描检测方法。此外,胆酸及去氧胆酸的测定是在对二者进行衍生化后进行,可能所得衍生化产物在薄层扫描仪上信号较强有关。
参考文献
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[5]叶蓓蓓,潘莉,王栋,等.薄层扫描法同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量[J].药物分析杂志,2010,30(4):706-709.