掺苯甲酸法

掺苯甲酸法（共3篇）

掺苯甲酸法 篇1

四氟苯甲酸是含氟类拟除虫菊酯的重要中间体, 属于有机酸的一种, 由于它的极性很强, 在气相色谱柱上的吸附也极强, 气相色谱分析时无法出峰, 或呈山形杂峰, 直接进样对色谱柱损坏很大, 影响柱子的使用寿命, 因此通常会采用衍生气相色谱法或液相色谱法分析[1,2,3,4,5], 针对衍生分析不易定量反应而影响定量含量的准确性的弊端, 我们探索了反相高效液相色谱定量的方法。此中间体的定性定量分析未见报道, 本文方法可给与四氟苯甲酸相类似的有机酸分析提供参考。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

HP-1100液相色谱仪:具UV可变波长检测器, 浙大N2000色谱工作站, 迪马公司C18 (200mm×4.6mm i.d) 色相色谱柱 (带保护柱) 。

甲醇、KH2PO4、磷酸、四丁基溴化铵 (均为AR) ;二次蒸馏水;四氟苯甲酸标样:含量≥98.0% (sigama公司提供) ;四氟苯甲酸样品:自制。

磷酸盐缓冲溶液B:称取2.712g KH2PO4及1.05g四丁基溴化铵于1L容量瓶, 加入双蒸水溶解后再用双蒸水定容, 用磷酸调至pH=2.3, 经0.45μm滤膜过滤后备用。

1.2 色谱条件

流动相:甲醇/磷酸盐缓冲溶液B=15/85 (V/V) ;

流速:1.0mL/min;

紫外检测波长:276nm;

进样量:25μL。

1.3 标准溶液的配制

准确称取98.0%的四氟苯甲酸标样0.0575g (准确至0.0002g) , 置于25mL容量瓶中, 用流动相溶解, 稀释至刻度, 摇匀;用移液管分别准确移取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL上述溶液于10mL容量瓶中, 用流动相容, 摇匀, 待测。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

通过对四氟苯甲酸紫外吸收扫描可看出, 四氟苯甲酸有两个吸收峰分别在217nm和276nm, 在217nm处吸收最强, 但在217nm处, 本底吸收大, 会对结果造成一定影响, 经实验最终确定检测波长为276nm。四氟苯甲酸的紫外吸收光谱图如图1。

2.2 流动相的选择

有机酸样品的液相色谱分析, 流动相关系重大, 针对四氟苯甲酸的特性, 我们发现由于其极性很大, 而流动相中水的比例又很高, 会发生酸的离解而很难在固定相上保留, 或保留很差出分叉峰。

由图2可见, 峰形不单一, 对称性差, 拖尾严重, 更换不同种类及比例的反相流动相均不见改观, 通过查阅相关资料, 我们了解到出现这种状况的原因为:介质酸在流动相中被离解, 不是以本身分子的形态存在, 因此出现多峰并存的分叉峰。针对这种情况实验采取调节流动相的pH值, 提高流动相中H+的浓度的方法, 这样可有效的抑制四氟苯甲酸离解而以单一形式存在于流动相中, 从而得以在反相固定相上保留。此外为了调整保留时间, 改善峰形采取在流动相中添加甲醇的方法, 通过对一系列实验的探索我们得到了上述优惠分析条件, 采用外标法定量样品得到了较为令人满意的结果, 在此条件下四氟苯甲酸的色谱图如图3。

2.3 方法的验证

2.3.1 线性实验

按照1.3中的方法配制一系列浓度的标准溶液按上述色谱条件、外标法定量测定, 以四氟苯甲酸浓度为横坐标, 四氟苯甲酸峰面积为纵坐标绘制标准曲线, 得到此方法的线性关系为Y=ax+b, (其中a=4.51E-007, b=7.38E-002) , 线性相关系数R=0.9992, 四氟苯甲酸的校正曲线如图4。

2.3.2 精密度实验

将一已知浓度的四氟苯甲酸样品在上述条件下连续进样六次进行平行测定, 得到此方法的标准偏差及变系数, 结果如表1。

2.3.3 准确度实验

称取五个已知含量的样品, 分别加入一定量的四氟苯甲酸标准品, 在上述条件下测定, 平均回收率为99.60%。

3 结 论

(1) 采用上述条件分析四氟苯甲酸样品线性、精密度、准确度都很好, 用于分析样品可以取得令人满意的结果;

(2) 有机酸的液相色谱分析中, 缓冲溶液的配制相当重要, 缓冲溶液的PH值控制在使介质酸在缓冲溶液中不离解而以单一分子形式存在的状态, 这样有利用我们的分离分析;

(3) 缓冲溶液中加入一定量的甲醇, 可起到调节峰形与保留时间的作用。

参考文献

[1]辛梅华, 等.反相HPLC快速测定调味品有有机酸[J].中国调味品, 2003, 4 (4) :36-39.

[2]赵景婵, 等.有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究[J].色谱, 2001, 19 (3) :200-262.

[3]林维宣, 等.高效液相色谱法测定山楂中有机酸的研究[J].大连轻工业学院学报, 1992, 11 (3-4) :21-24.

[4]银燕, 等.高效液相色谱法测定果酒中的有机酸[J].食品与发酵工业, 1990 (5) :44-47.

[5]赵丽辉, 等.含酚废水中有机酸的气相色谱测定[J].环境化学, 1989, 8 (3) :70-79.

掺苯甲酸法 篇2

关键词：浊点萃取,高效液相色谱法,苯甲酸,蘑菇罐头

浊点萃取(CPE)是近年来出现的一种环保新型液-液萃取技术,它是以表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础,通过改变实验参数引发相的分离,从而将水溶性物质与亲油性物质分离[1]。传统的液-液萃取操作麻烦,有机溶剂消耗量大,对环境有污染,也影响操作人员的身体健康,而且引入的误差因素也较多[2]。CPE法与传统的萃取方法相比具有能够减少挥发性有机溶剂的使用、操作简单、快速、不需要专门的装置等优点。 CPE法已经应用在环境样品中金属离子的测定、蛋白质的分离与优化等领域中[3]。本实验将这方法应用于蘑菇罐头样品中苯甲酸的提取,并在CPE过程中加入了一定的有机添加剂,能明显降低表面活性剂的浊点温度,常温下就可以发生浊点现象,从而避免了热不稳定苯甲酸的降解。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

L-2000系列高效液相色谱仪(日本日立公司)、色谱柱(AOLLOP C18),1.00 mg/ml苯甲酸标准溶液(国家标准物质研究中心),10.0 μg/ml苯甲酸标准使用液2%Tween-20,甲醇(色谱纯),乙酸胺(分析纯),盐酸(优级纯)。本方法中,实验用水均为超纯水。

1.2 样品处理

吸取蘑菇罐头浸泡液10 ml于15 ml离心管中,加入1.5 ml 2%Tween-20和1.0 g(NH4)2SO4,定容至刻度,在80 ℃水浴中加热10 min,冷却至室温,以5 000 r/min的速度离心10 min(离心力=2 370 g),取上清液,再加入(NH4)2SO4使其浓度为300 g/L,调节pH值为4,摇匀,然后在90 ℃水浴中平衡10 min,可得到透明的两相;下层为水相,上层为表面活性剂富集相,吸去水相,加入少量甲醇溶解,用前过0.45 μm滤膜,备用。

1.3 仪器条件

流动相为甲醇 ∶乙酸胺=10 ∶90,流速为1.0 ml/min,检测波长为245 nm,柱温为室温,进样量为20 μl。

2 结果

2.1 表面活性剂浓度的选择

为了考察表面活性剂浓度对CPE的影响,改变Tween-20的浓度,其浓度为1%～6%(体积分数)。实验表明,当表面活性剂浓度为2%时,苯甲酸的回收率达到最大;当表面活性剂浓度再增大,对回收率基本没有影响,且在较大浓度时,增大了表面活性剂富集相的黏度,不利于色谱分离与分析。本实验采用Tween-20的浓度为2%(体积分数)。结果见图1。

2.2 添加剂的选择

添加剂能够加快相分离、降低CPE体系的温度。考察了NaCl和(NH4)2SO4对表面活性剂相分离和苯甲酸回收率的影响。实验表明,添加300 g/L的(NH4)2SO4使表面活性剂的相分离和回收率能达到较好的效果。

2.3 pH值的影响和选择

pH值对CPE的影响显著,要获得较好的回收率,应严格控制体系的pH值。所测苯甲酸为酸性有机物,在碱性条件下易形成盐而溶于水,所以萃取过程中pH值应小于7[4]。本实验采用盐酸调节pH值,随着pH值的增加,回收率在逐渐上升;当pH值达到4时,回收率最高;pH值继续增加,回收率则呈下降趋势。结果见图2。

2.4 平衡时间的选择

不同平衡时间对CPE的影响,样品在前面优化条件下处理后,研究了改变平衡时间,对回收率的影响。在水浴温度中分别平衡(10～35)min。当平衡时间为10 min时,苯甲酸的回收率达到最大,结果见图3。

2.5 平衡温度的选择

样品按照前面优化条件处理后,在60～100 ℃水浴中分别平衡10 min。实验表明,当平衡温度达到90 ℃时,苯甲酸的回收率达到最大,结果见图4。

2.6 工作曲线、回收率和精密度

在实验条件下,吸取苯甲酸标准使用液(10.00 μg/ml)0.50 ml于10 ml容量瓶中,并用流动相定容至刻度,过0.45 μm滤膜,此标准溶液上机测定。同时对样品进行加标试验,平均测定值为0.48 μg/ml(n=4),回收率为92.0%～102.0%。对0.50 μg/ml的苯甲酸标准溶液连续测定11次,RSD为1.50%。

3 讨论

采用表面活性剂Tween-20提取蘑菇罐头中的苯甲酸,萃取速度快,耗时短,操作方便,萃取率高,富集因子大,表面活性剂用量小,成本低廉[5]。本实验方法,可使回收率达到90%以上,满足蘑菇罐头中苯甲酸的检测。

参考文献

[1]李卓,董文斌,李娜,等.浊点萃取技术及其在食品检测预处理中的应用[J].食品科技,2010,35(3):277-280.

[2]宋英吉,李军德.浊点萃取的应用[J].化学世界,2008,(5):311-314.

[3]陈建波,刘伟,崔艳梅,等.浊点萃取-高效液相色谱法测定草莓汁中的多种农药残留[J].分析化学,2008,36(3):401-404.

[4]侯文欣,商闯,杨更亮,等.浊点萃取-高效液相色谱法检测牛奶中苯甲酸[J].中国食品添加剂分析测试,2010,31(4):277-280.

掺苯甲酸法 篇3

选用了一种粒径更小的C18不锈钢柱进行研究, 能够发现水平更高, 质量更好, 更令研究人员满意的分离途径, 并对不属于国标中提到的物品的前期管理进行详细的研究和操作试验, 为以后的工作打下基础。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

LC-5500高效液相色谱仪 (具有紫外检测器) , 赛多利斯BS210电子天平, 艾科超纯水仪。色谱纯甲醇, 干净无杂质的蒸馏水, 需要经过特殊设备的过滤杀菌。采用的部分仪器, 设备, 从国家级重点研究单位采进购买。

标准储备液浓度:山梨酸溶液标准物质1.00mg/mL;苯甲酸溶液标准物质1.00mg/mL;糖精钠溶液标准物质1.00mg/mL (中国计量科学研究院购买)

标准混合液:0.10g/L, 取三种标准液各10.0mL于100mL容量瓶中, 将蒸馏水倒入以刻度正好为准。实验所用甲醇和混标溶液均经0.45μm滤膜过滤。其余试剂均为分析纯试剂。

1.2色谱条件色谱柱:

YWG-C18不锈钢柱 (10μm, 250mm×4.6mmID) , 柱温为室温;进样量10μL;检测波长:230nm;流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸铵 (5+95) ;流速:1.0ml/min。以保留时间和吸收光谱定性, 以色谱峰峰面积定量。

1.3样品前处理

1.3.1饮料中对于水果类, 红茶、绿茶、花茶类, 汽水类, 选择性加入水后用0.45μm样品筛漏设备做出样品。

使用各种方式方法去掉其中的CO2, 可以加温或使用超声波, 而果冻类食品将固体去掉留下液体, 加入水搅匀, 滤掉杂质变成样品。

1.3.2固态的材料要加水变成液化形式, 这更加有利于提取其中的成分。稀释过程主要是先均匀捣碎变成粉末后取其中的5g放入50ml试管容器中, 倒进每升1摩尔的化学溶剂经过15分钟的震荡后沉淀等待取样。

1.3.3对于含蛋白质多的样品在1.3.2的基础上加入10.6%的亚铁氰化钾和21.9%的乙酸锌各2.0ml后再定容至刻度, 静置0.5h以上。

1.3.4有一些事物当中含油量过高, 去除这些油脂的最好方式使用正己烷, 这是特别需要的时候才进行的, 通常情况不需要。样品陈放一段时间后达到脱离杂质, 吸收足量水分的目的, 之后用专门的膜过滤一次后等待下一步使用。

2结果分析

2.1目的是周期最小的情况下实现应有的样品成分分离。

实验选用了一种粒径比国标推荐方法更小的5μm填料的C18柱来分离3种物质。通过试验可以得出结论, 甲醇含量相等的状况下, 此三种样品出峰很快。

2.1.1通过观察甲醇含量对分离的影响, 发现在甲醇含量为5%时有较好的分离度和合适的保留时间, 最终选择甲醇与0.02mol/L乙酸铵的比例为5:95。

2.1.2试验过程中出现一个问题, 一旦柱子未及时操作, 平衡不到位的情况出现, 糖精钠与山梨酸位置就会反过来, 如果是采用紫外检测器的多个波长检测时就会很容易识别, 因为山梨酸的灵敏度在波长254nm比在波长230nm时明显要高得多, 而在230nm时两者有相近的灵敏度, 往往不容易发现。

2.2标准曲线的绘制

分别取0, 0.0020, 0.0050, 0.0100, 0.0500, 0.1000g/L标准混合溶液20μL进行测定, 以浓度和峰面积进行标准曲线绘制, 回归方程的相关系数均大于0.999。苯甲酸、山梨酸、糖精钠的检出限分别是5, 3和15μg/L, 色谱图见图1。

2.3准确度实验

用试验中的操作方法对于国标内部缺少的物品贴上标志之后在试验地点进行观测, 得出了表中显示的以下结论:

2.4重复性实验

将碎化成粉末状的饼干分为8个容器容纳。各自溶入3样溶液, 多量少量情况自己掌握。按照1.3.2中所列的样品前处理方法处理后测定。3种成分测定的相对标准偏差分别为苯甲酸3.52%、山梨酸2.86%、糖精钠4.75%, 检验数据的偏离程度都合乎标准, 这就说明用此种方式测定拥有一定的重现性。

结论

在实际工作中, 选择一种快速高效的测定方法尤显重要。上述方法能快速地分离苯甲酸、山梨酸、糖精钠三种添加剂, 而且只需5%的甲醇比例就可以在较短时间内完成分离测定食品中三种食品添加剂的工作。该方法具有灵敏度高、结果准确、精密度和线性关系良好等特点。适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。

参考文献

[1]中国人民共和国食品安全卫生标准检验法[S].GB/T5009.28-2003;GB/T5009.29-2003