药物含量测定

药物含量测定（精选8篇）

药物含量测定 篇1

卡铂 (Carboplatin, CBP) 的化学名称为顺-二氨-1, 1-环丁酸烷铂, 是继顺铂之后的第二代铂类抗癌药物, 对肺癌、卵巢癌等多种癌症具有良好的治疗效果[1~3], 相对于顺铂具有更小的肾、胃肠毒性[4,5]。

无机纳米材料C60作为抗癌药物载体具有载药量大、控释性好、组织靶向性强的特点, 建立C60/卡铂纳米药物递送系统可以增强卡铂对肿瘤组织的靶向性、提高肿瘤细胞外周与胞内的药物浓度, 从而达到提高药效, 降低毒副作用的目的。

目前, 卡铂的检测方法主要采用高效液相色谱[6~8]和原子吸收光谱[9,10], 这2种方法具有良好的灵敏度和较强的专属性, 但仪器价格昂贵、重现性欠佳。还有报道采用二阶导数光谱法[11]、络合分光光度法[12,13]、电感耦合等离子质谱/发射光谱法[14]对卡铂含量进行测定, 但这些方法因样品预处理过程复杂、样品耗量大、检测时间长等问题而没有被广泛采用。纳米药物递送系统中卡铂含量的测定不仅要求方法灵敏、准确、专属, 还要考虑C60本身的吸附性可能对仪器造成的损害和背景干扰问题。紫外分光光度法具有操作简单、迅速、经济的特点, 准确性和重复性良好, 吸附于比色池中的C60易于去除不会对仪器造成严重损害, 同时C60在紫外光区内无强吸收, 不会对卡铂的测定造成干扰。本文采用紫外分光光度计建立一种快速、准确的卡铂分析方法, 以用于测定卡铂在纳米药物递送系统中的含量, 为卡铂的药物开发打下基础。

1 仪器与试剂

UNIC2800紫外可见分光光度计 (上海尤尼柯仪器有限公司) , KQ-500DE数控超声清洗器 (昆山超声仪器有限公司) , AC-120S精密电子分析天平 (德国Sartorius公司) , 卡铂 (北京偶合科技有限公司, 纯度≥98%) , C60 (濮阳市永新富勒烯科技有限公司, 纯度99.9%) , 5%葡萄糖注射液 (石家庄四药集团) 。

2 实验方法与结果

2.1 检测条件

起始波长:800nm, 终止波长:190nm, 扫描间隔:1.0nm, 参比溶剂:5%葡萄糖注射液。图1为卡铂在5%葡萄糖溶液中的紫外吸收光谱, 最大吸收峰位置为229nm。

2.2 线性关系考察

精确称取卡铂样品2.8mg, 用25m L 5%葡萄糖注射液定溶, 超声10min使卡铂充分溶解, 得到浓度为112μg/m L样品, 作为母液备用。配制浓度为64μg/m L、32μg/m L、25.6μg/m L、19.2μg/m L、12.8μg/m L、6.4μg/m L、3.2μg/m L、1.6μg/m L、0.64μg/m L的待测样品, 分别取上述样品3m L于比色池中, 在229nm处测定吸光度值, 每个样品平行测定3次。以样品浓度 (C, μg/m L) 为横坐标, 吸光度值 (A) 为纵坐标, 做线性回归, 得到标准曲线方程A=0.0105C+0.0082 (R2=0.9984) , 结果表明在0.64~64μg/m L范围内, 卡铂浓度与吸光度值呈良好的线性关系。

2.3 精密度测定

精确称取1.2mg卡铂, 用30m L 5%葡萄糖注射液溶解, 配制浓度为40μg/m L的待测样品, 在229nm处连续平行测定6次, 记录吸光度值。结果:6次测定的吸光度值RSD=0.13%, 表明方法精密度良好。

2.4 稳定性测定

取2.3中所配浓度为40μg/m L的溶液, 室温条件下避光保存, 每天测定一次, 连续测定5天。5天检测结果的RSD=0.63%, 说明在卡铂在5%葡萄糖溶液中室温条件下避光保存较为稳定, 未出现显著降解。

2.5 重复性测定

重新称取6份质量为1.2mg的卡铂样品, 如2.3所述方法配制浓度为40μg/m L的待测样, 测定6份样品的吸光度值, 分析批内变异情况。结果RSD=1.69%, 表明方法的重复性良好。

2.6 回收率测定

精确称取卡铂2.0mg, 按高、中、低水平配成浓度为80μg/m L、40μg/m L、20μg/m L的待测样品, 每日测定3次, 连续检测3天, 根据吸光度值和2.2项所得标准曲线计算回收率, 见表1。实验结果表明, 卡铂的日内回收率为95.96%~96.93%, 日间回收率为95.68%~97.53%, 说明回收率良好。

2.7 载药量测定

精确称取C60 10.0mg、卡铂24mg于锥形瓶中, 加入5%葡萄糖注射液20m L, 避光搅拌24h, 以16000r/min离心8min, 收集上清液并稀释10倍, 在229nm处测定吸光度值, 按照公式:

(m游离药量=C×稀释倍数×稀释体积, C为测定吸光度值代入2.2项标准曲线方程计算结果) 。实验结果 (见表2) 。

3 讨论

以C60为药物载体对化疗药物卡铂进行吸附, 可以实现提高药效、降低毒副作用的目的。因C60经长时间搅拌将有少量形成稳定存在于水中的纳米晶颗粒[15], 所以在收集到的游离药液中存在C60, 如果按照中国药典中所采用的高效液相色谱法[16]对C60/卡铂药物递送系统中的卡铂含量进行测定, 则可能遇到2点问题: (1) 测定样品中存在的C60在色谱中高保留, 造成色谱柱污染; (2) 谱峰不佳。而其它检测方法如电感耦合等离子质谱/发射光谱法、络合分光度法则需要对样品进行预处理, 既增加了操作的复杂性又不利于回收样品, 还可能因预处理不当影响结果的准确性。采用紫外分光光度法对纳米药物递送系统中卡铂的含量进行测定, 可以实现方便、快速、准确的定量, 同时避免C60的干扰, 操作简单, 是一种良好的分析方法。

蛋白质含量测定方法概述 篇2

关键词：蛋白质含量测定；方法；特点

蛋白质含量的测定是目前生物化学中常用的一项指标测定。目前国内外所采用的检测方法主要有凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲分光光度法、考马斯亮蓝法（Bradford法）、Lowry法、二辛可酸比色法（BCA法）、荧光光度法、电流法、毛细管电泳分析法、罗丹明生物探针法以及高效光谱遥感技术分析法等。

每种测定法都有其优势，但也不可避免存在一定缺点。实验中，应综合考虑各方面因素再选择最佳使方法。实验对测定所要求的灵敏度和精确度、蛋白质的性质、溶液中存在的干扰物质、测定所要花费的时间等因素都会影响最终实验方法的选择。

本文主要就几种常见的蛋白质测定方法的原理及特点作一简单概述、比较。

1 凯氏定氮法

1.1基本原理

凯氏定氮法包括微量定氮法和全量定氮法两种方法，其测定蛋白质含量的过程主要包括消化、蒸馏、吸收、滴定等步骤。

含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵，此过程称为“消化”。浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，溶液中氢离子浓度降低。用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，即可根据所用标准酸的当量数计算出待测物中的总氮量。蛋白质中的氮含量一般为16%，据此推断蛋白质含量。

1.2 方法特点

该方法仪器装置简单，试剂用量少且廉价易得。精密度、准确度高，最低可检出0.05mg氮，且样品用量少。但操作较繁琐费时，不利于大批样品的测定，且测定的结果只能是粗蛋白质的含量，处理未知样品时，其误差还有变大的危险。

1.3适用场合

适用于一切形态的食品与生物样品。对于不溶和浑浊的样品，其他许多方法不能进行测定，凯氏定氮法是唯一可行的分析方法。

2双缩脲法

2.1基本原理

双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，都有双缩脲反应。蛋白质发生双缩脲反应时，紫色络合物颜色的深浅与其浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用以测定蛋白质含量。

2.2方法特点

该方法操作简便，试剂单一，可快速测定蛋白质含量，测定受蛋白质种类和环境温度的影响小。但灵敏度差，测定范围仅为1～20mg蛋白质。

2.3适用场合

适用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定，常用于谷物蛋白质含量测定。

3紫外吸收法

3.1基本原理

蛋白质分子中的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的能力。在280nm具有吸光度是蛋白质的一种普遍性质。一定范围内，蛋白质溶液在280nm的吸光度与其浓度成正比。

3.2方法特点

该方法不消耗样品，测定后样品仍能回收，低浓度盐类不干扰测定，且简便、灵敏、快速。但也存在缺点：①在测定与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差。②若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质，会对结果产生较大干扰。③蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有變化，因此样品与标准蛋白溶液的pH值若不同，会影响样品中蛋白含量的测定。

3.3 适用场合

适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。在蛋白质和酶的生化制备中（特别是在柱层析分离中）广泛应用。

4 考马斯亮蓝法

4.1 基本原理

考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。考马斯亮蓝是一种有机染料，在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合后变为蓝色，在蛋白质含量为1～1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比。

4.2方法特点

该法易于操作，干扰物质少，所用试剂较少，显色剂易于配制。同时考马斯亮蓝与蛋白质结合反应十分迅速而稳定，2min左右即达到平衡，其结合物室温下1h内保持稳定，且在5～20min之间，颜色的稳定性最好。

但由于各种蛋白质中的碱性氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，考马斯亮蓝法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用γ-球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

4.3适用场合

该方法适用于要求灵敏度高、快速定量测定微量蛋白质的测定。

5总结

蛋白质测定方法有十几种，在常用测定方法中，考马斯亮蓝法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍。凯氏定氮法测定结果较为准确，灵敏度高，故往往以该法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。但凯氏定氮法操作过程比较复杂繁琐，测定也较费时，且会产生大量有毒有害气体，危害操作者的身体健康，污染环境。紫外吸收法和考马斯亮蓝法都是较为快速的测定方法。另外，不同方法下不同物质对蛋白测定的干扰也不同。故对于不同样品，应选择合适方法测定，如对测定结果要求较高，则往往需要结合多种方法测定，并分析测定结果，最终得出最准确蛋白含量值。

参考文献：

[1]王宗乾，程龙，邱小永，姬树人，陈维国. 凯氏定氮法测定牛奶纤维蛋白质含量[J]. 印染，2008，12：32-34.

[2]杨正坤， 王秀丽， 龙施华， 郝再彬， 单展展， 周菲菲. 考马斯亮蓝染色法测定大豆茎叶中蛋白质含量[J]. 湖北农业科学，2012，20：4610-4612.

[3]钱博. 乳粉蛋白质快速检测方法的研究[D]. 浙江大学，2006.

药物含量测定 篇3

1 材料与方法

1.1 材料

(1) 北京聚德阳光医药科技有限公司生产提供的卡巴拉汀单品。 (2) 北京康倍得医药技术开发有限公司生产提供的卡巴拉汀空白贴片, 单片面积为20.00 cm2。 (3) 美国Fisher公司提供的经由色谱提纯的甲醇试剂。 (4) 北京大学医学部动物中心繁育提供的雄性豚鼠若干只, 平均体重 (250.00±30.00) g。

1.2 仪器

(1) 美国Waters公司生产提供的Waters2690高效液相色谱仪 (搭配使用自动进样器) , Waters2487紫外检测器以及Millennium32色谱数据工作站。 (2) 日本岛津公司生产提供的UV-2401型紫外光-可见光分光光度仪。 (3) 上海锴凯科技贸易有限公司生产提供的TK-60B型Frannz扩散池。

1.3 HPLC法检测过程中技术控制条件

(1) 色谱柱:择取Waters XTerra PR18.00柱 (150.00 mm×3.90 mm, 5.00μm) 。 (2) 流动相:由甲醇、碳酸氢铵溶液以及水按照42∶27∶31体积比混合而成, 且碳酸氢铵溶液的浓度应当严格控制在10.00 mmol/L, 在此基础上还需运用浓度适宜的磷酸溶液的p H值调节到8.50。 (3) 柱温:32.00℃。 (4) 检测过程中的进样量:10.00μl。 (5) 流速:1.00 ml/min。 (6) 检测波长:210.00 mm。

1.4 主要检验溶液的制备

1.4.1参照品溶液

运用分析天平精确测量卡巴拉汀单品19.386 mg, 并将称取的药品加入有效容积为50.00 ml的容量瓶中, 运用经由色谱净化获取的甲醇完成溶解、定容和摇匀处理过程, 即可获取浓度水平为387.72μg/ml的参照品溶液。

1.4.2实验品溶液

取卡巴拉汀贴片, 去除其防粘层并将其在25.00 ml甲醇中常温浸泡处理24 h, 随后运用孔径尺寸为0.22μm的滤膜过滤处理获取甲醇滤出液, 抽取2.00 ml滤液, 并运用色谱纯化甲醇稀释到10.00 ml, 即可获取实验品溶液。

1.4.3空白溶液

取空白贴片, 按照实验品溶液的制备操作方法即可获取空白溶液。

1.5 体外透皮实验

选取成年健康雄性豚鼠, 应用电动剃刀彻底剔除其腹部和背部位置的全部毛发, 用温开水洗净地皮肤, 之后采用敲颅法促使其快速死亡, 并立即剥离腹部皮肤, 剔除皮下联结的脂肪组织, 并浸泡于足量生理盐水中, 放入冰箱备用。选取成年雄性豚鼠的腹部皮肤作为卡巴拉汀药物经皮渗透释放量实验室检测过程中的屏障材料, 将经由前期技术处理环节获取的皮肤样本固定放置于总体积为18.00 ml的由上海锴凯科技贸易有限公司生产提供的TK-60B型Frannz扩散池上方, 其保证腹部皮肤组织的角质层朝向外侧, 取卡巴拉汀透明贴剂, 去除其防粘层并将其粘贴在角质层上。运用p H值为6.80的磷酸盐缓冲用液作为卡巴拉汀透皮释放过程在的丛台介质, 并将介质在使用过程中的温度参数控制在31.50~32.50℃。

2 结果

卡巴拉汀在9.68~116.31μg/ml的浓度范围内具备较好的线性关系检出特征, 其检出限为0.16μg/ml, 精密度RSD测算范围为0.12%~0.47%, 在低、中以及高浓度等级条件下的平均测算回收率分别为98.78%、98.52%以及98.86%。体外透皮试验条件下获取的描述曲线方程符合方程属性特征。

3 讨论

从化学属性与药理学属性角度分析, 卡巴拉汀属于氨基甲酸类乙酰胆碱酯酶抑制剂类药物, 能够借由促使胆碱能神经元细胞释放的乙酰胆碱物质生物代谢降解过程发生时间延搁, 促进人体胆碱能神经元细胞的神经信号传导过程快速实现[1,2]。现阶段, 卡巴拉汀是全世界范围内应用数量最大且应用频率最高的阿尔茨海默症痴呆型症状缓解和改善类药物[3]。

透皮给药系统与传统的口服给药方式相对照, 其最大的差别在于彻底避免了人体胃肠道生理组织的消化代谢处理过程, 以及人体肝脏器官在药物有效成分实际吸收利用之前发生的首过效应, 因而确保了卡巴拉汀药物的生物利用率水平获取了程度显著的提高变化[4]。与此同时, 透皮贴剂的给药形式在实际运用过程中通常能够产生持久性、恒定性以及可控性的血药浓度水平, 有效减低了患者在接受药物治疗过程中的不良反应事件发生可能性[5]。

本次研究中, 卡巴拉汀在9.68~116.31μg/ml的浓度范围内具备较好的线性关系检出特征, 其检出限为0.16μg/ml, 精密度RSD测算范围为0.12%~0.47%, 在低、中以及高浓度等级条件下的平均测算回收率分别为98.78%、98.52%以及98.86%。体外透皮试验条件下获取的描述曲线方程符合方程属性特征。以上研究结果表明, 运用HPLC法测定卡巴拉汀贴剂中的卡巴药物含量, 并运用离体豚鼠皮肤作为屏障检测卡巴拉汀贴剂中有效药物成分的体外透皮释放量, 能够实现对卡巴拉汀药物疾病药理运用特征以及释放效能状态的清晰评估, 为临床药师开展卡巴拉汀贴剂的临床应用提供指导支持条件, 促进我国现代临床医学事业的稳定有序发展。

总之, 运用HPLC法测定卡巴拉汀贴剂中的卡巴药物含量, 并运用离体豚鼠皮肤作为屏障检测卡巴拉汀贴剂中有效药物成分的体外透皮释放量, 能够实现对卡巴拉汀药物疾病药理运用特征以及释放效能状态的清晰评估, 为临床药师开展卡巴拉汀贴剂的临床应用提供指导支持条件。

参考文献

[1]郭淼, 杜洪光, 钟叙英, 等.HPLC法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量.北京化工大学学报 (自然科学版) , 2011, 38 (1) :35-38.

[2]许丽丽, 杜洪光, 王刚, 等.HPLC法测定丁丙诺啡贴剂中药物的含量及其体外透皮释放量.药物分析杂志, 2009, 29 (8) :1294-1296.

[3]王文刚, 恽榴红, 王睿, 等.非洛地平-美托洛尔复方透皮贴剂的处方与工艺研究.中国药房, 2008, 19 (16) :1236-1239.

[4]陈雯雯, 云琦, 陶亮, 等.小茴香挥发油贴剂体外释放和透皮性能的研究.天然产物研究与开发, 2016, 28 (1) :65-70.

药物含量测定 篇4

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪 (LC-1000) , 购自山东鲁南瑞红化工仪器有限公司;电子分析天平, 购自奥豪斯国际贸易有限公司;紫外分光光度计 (UV-2500) , 日本岛津公司制造;SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵, 购自郑州长城科工贸有限公司;超声波清洗器 (KQ5200E) , 上海科导超声仪器有限公司制造;微量进样器, 上海安亭微量进样器厂制造。以上仪器均由青岛农业大学临床兽医学实验室提供。

1.2 药品与试剂

头孢噻呋标准品 (含量为100%, 批号为K0330406 ) , 购自中国兽药监察所;头孢噻呋原粉 (含量为100.3%, 批号为110700306W) , 购自齐鲁晟华制药有限公司;5%头孢噻呋原位凝胶注射液, 青岛农业大学临床兽医学实验室研制;25%四丁基氢氧化铵溶液 (分析纯) , 购自天津市光复精细化工研究所;醋酸铵 (分析纯) , 购自天津市巴斯夫化工有限公司;甲醇 (色谱纯) , 购自天津市永大化学试剂有限公司;冰乙酸 (分析纯) , 购自天津市大茂化学试剂厂;四氢呋喃 (色谱纯) , 购自天津市广成化学试剂有限公司。

1.3 色谱条件

色谱柱为Hypersil BDS C18 (250 mm× 4.6 mm, 5 μm) ;以醋酸铵溶液 (取醋酸铵3.95 g, 加25%四丁基氢氧化铵溶液28 mL, 加水至700 mL) -甲醇-四氢呋喃 (70∶22∶10) 为流动相;检测波长为291 nm, 柱温为30 ℃, 流速为0.8 mL/min, 进样量为20 μL。

1.4 标准品溶液的制备

精密称取头孢噻呋标准品0.100 0 g置于100 mL容量瓶中, 加适量流动相振摇30 min溶解, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 得终浓度为1 μg/mL的储备液, 4 ℃保存, 备用。

1.5 方法专属性试验

取空白辅料溶液、标准品溶液 (200 μg/mL) 和样品溶液 (100 μg/mL) , 分别在确定的色谱条件下检测考察方法的专属性。

1.6 线性关系考察

精密量量取1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL储备液于10 mL容量瓶中, 加流动相定容至刻度, 摇匀即得浓度分别为100, 200, 300, 400, 500 μg/mL的标准溶液。按照“1.3”的色谱条件, 各浓度重复测定3次, 每次精密量取20 μL进样, 以标准品浓度 (X) 为横坐标, 峰面积 (Y) 为纵坐标绘制标准曲线, 考察线性关系。

1.7 精密度试验

取“1.6”中的100, 300, 500 μg/mL, 即低、中、高3个浓度的标准液, 各浓度1 d内重复进样5次, 计算日内相对标准偏差;同法各浓度每日测定1次, 连续测定5 d, 计算日间相对标准偏差。

1.8 回收率的测定

精密量取1.0, 3.0, 5.0 mL头孢噻呋储备液于50 mL容量瓶中, 流动相稀释定容至刻度, 即得浓度为100, 300, 500 μg/mL的系列标准溶液。各浓度在“1.3”色谱条件重复测定3次, 每次进样20 μL, 计算回收率。

1.9 头孢噻呋原位凝胶注射液药物含量的测定

取5%头孢噻呋原位凝胶注射液样品3批, 精密量取10.0 mL (含头孢噻呋0.5 g) 置于100 mL量瓶中, 加流动相定容至刻度, 摇匀;精密量取1.0 mL置于50 mL量瓶中, 加流动相稀释并定容至刻度, 摇匀, 精密量取20 μL进样, 每批样品重复测定3次, 采用外标法以峰面积计算注射液中的头孢噻呋含量。

2 结果与分析

2.1 方法专属性试验结果 (见图1～3)

由图1～3分析可知:头孢噻呋保留时间为15.098～15.498 min, 空白辅料溶液在此波长条件下无吸收, 而流动相峰分别在3～5 min、18 min左右出现, 与头孢噻呋峰分离且不影响头孢噻呋出峰, 说明该方法专属性强, 可用于头孢噻呋原位凝胶注射液中药物含量的检测。

2.2 线性关系考察结果 (见图4)

由图4可以看出:头孢噻呋在100～500 μg/mL浓度范围内线性关系良好, 标准曲线方程为Y=23 031X-39 113, R2=0.999 2。

2.3 精密度试验结果 (见表1～2)

由表1～2数据可知, 该方法测定的头孢噻呋含量精密度高, 变异系数较小, 符合方法学要求。

2.4 回收率试验结果 (见表3)

由表3可以看出:该测定方法头孢噻呋回收率高, 变异系数小, 符合方法学要求。

2.5 样品中头孢噻呋含量的测定结果 (见表4)

由表4可知, 3批样品中头孢噻呋的平均含量分别为4.95%、5.02%、4.96%, 说明3批样品中头孢噻呋含量合格。

3 讨论

3.1 检测波长的确定

采用紫外可见分光光度计检测头孢噻呋标准品溶液, 通过紫外吸收图谱确定头孢噻呋检测波长。在280～320 nm范围内重复扫描5次, 样品在290.8～291.3 nm有最大光吸收, 故选择291 nm为检测波长。昌莉丽等[4]确定检测波长为292 nm, 与本试验结果基本一致, 说明所选波长均适用于头孢噻呋含量检测。

3.2 流动相的选择

本试验流动相在中华人民共和国兽药典[5]基础上加以调整, 头孢噻呋出峰时间由调整前的17.898 min左右提前至15.098～15.498 min, 并且使流动相出峰相对延后, 避免流动相在18分钟左右出峰造成干扰, 使其与头孢噻呋峰分离更好。M.J.Souza等[6]以磷酸氢二钠 (85%磷酸调定pH值为6.0) -乙腈 (78∶22) 为流动相测定头孢噻呋钠含量, 出峰时间约在7分钟, 较本试验提前, 但其线性范围为20～120 μg/mL, 同本试验适用线性范围相比大大缩小, 其流动相的配制调节pH值过程相对复杂。与昌莉丽等[4]报道的测定方法相比, 本试验精密度和回收率更高, 且药品峰的分离度符合标准, 说明本试验选择的色谱条件更理想。本试验中头孢噻呋出峰时间与其他研究中报道的不同, 可能是由于流动相不同造成的, 虽然本试验头孢噻呋保留时间相对较长, 但线性关系适用范围更广, 精密度和回收率更高, 具有一定的优越性。

4 结论

本试验建立的头孢噻呋HPLC检测方法前处理简单, 方法专属性强, 灵敏度高, 精密度和回收率等指标符合要求, 结果准确、可靠, 适用于头孢噻呋凝胶注射液中药物含量的测定。

参考文献

[1]WATTS J L, YANCEY R J, SALMON S A, et al.A 4-year surveyof antimicrobial susceptibility trends for isolates from cattle with bo-vine respiratory disease in North America[J].J Clin Microb, 1994, 32:725-731.

[2]SCHMOLKA I V.Artifcial skinⅠ.Preparation and properties ofpluronic F-127 gels of treatment of burns[J].J Biomed MaterRes, 1972, 6 (6) :571-582.

[3]西尼尔, 拉多米斯基.可注射缓释制剂[M].郑俊民, 等, 译.北京:化学工业出版社, 2005:151-153.

[4]昌莉丽, 张春辉, 肖传武, 等.RP-HPLC法测定头孢噻呋混悬注射液含量[J].西北农业学报, 2010, 19 (6) :44-47.

[5]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典 (2010年版, 一部) [M].北京:中国农业出版社, 2010:61-63.

药物含量测定 篇5

关键词：高效液相色谱,实验教学,本科生,药物分析

以培养具有创新性思维和较强动手能力、适应我国21世纪新药研究开发需要的药学人才为指导思想, 药物分析课程旨在通过教学使学生了解新药质量标准制订的基本原理, 掌握对已知结构的药物进行定性和定量测定的常见分析方法并在此基础上熟悉一些药物分析的新方法、新技术。实验教学是药物分析的重要环节, 占有较大的比重, 实验教学质量对学生加深理解和巩固所学的理论知识, 正确熟练地掌握实验的基本操作和技能, 培养学生良好的实验习惯、实事求是的科学态度和严谨细致的工作作风, 培养学生掌握药物的质量控制和质量保证能力将起到重要作用[1,2]。因此, 在药物分析的整个学习过程中要求学生既重视药品质量分析的基础理论知识的学习, 又要重视实验技能的训练。我校药物分析教学始于1958年, 在长期的教学过程中, 我们不断总结教学过程, 寻找问题, 实施实验教学改革。

一、实验目的

通过高效液相色谱测定维生素A中视黄醇、视黄醛、视黄酸、维生素A醋酸酯的含量, 了解高效液相色谱的测定原理以及与传统三点校正法相比较之下的优越性, 熟悉高效液相色谱的使用, 引导、培养学生的创新意识。

二、实验原理

高效液相色谱法[3,4] (high performance liquid chromatography, HPLC) 是在20世纪60年代末期迅速发展起来的用于有机物定量分析的仪器分析方法。HPLC是在经典液相 (柱) 色谱的基础上, 采用了由全多孔或非多孔高效微粒 (1.7~10μm) 固定相制备的色谱柱, 由高压输液泵输送流动相, 用高灵敏度检测器进行检测, 实现了高柱效、高选择性、高灵敏度的快速分析, 并成为有机物定量分析的主要分析工具。

三、实验

1. 仪器和试剂。

日本岛津LC-15C高效液相色谱仪, UV 2401-PC紫外分光光度计, 维生素A醋酸酯标准品 (Dr.Ehrenstorfer) , 美国sigma公司视黄醇、视黄醛、视黄酸标准品, 甲醇 (色谱纯) , 异丙醇 (分析纯) , 环己烷 (分析纯) 试药维生素A软胶囊 (上海东海制药) , 实验用水为去离子水。

2. 溶液的配制。

(1) 供试品溶液, 取样品20丸, 挤出内容物, 取0.1463g于10ml容量瓶, 异丙醇溶解并定容至刻度, 用甲醇稀释成14.63μg/ml进样分析。 (2) 对照品溶液, 精密称取视黄醇、视黄醛、视黄酸和维生素A醋酸酯对照品适量, 置容量瓶中, 加异丙醇溶解并用甲醇定容至刻度, 配制成各对照品浓度约为12μg/m L的混合对照品溶液。

3. 实验内容。

(1) 对东海制药生产的维生素A软胶囊, 按上述色谱条件测定, 用外标法以峰面积计算含量, 同时按照药典执行标准采用紫外分光光度法测定含量。2种方法测定结果见表1。 (2) 人工用对照品模拟样品, HPLC法测定结果见表2。

但是UV法只能测得Va醋酸酯含量, 不能测得视黄醇、视黄醛和视黄酸的含量, 具有一定的局限性。

四、总结

通过高效液相测定维生素A醋酸酯的含量与中国药典收录的三点校正法[7]的比较, 发现HPLC法和三点校正法都能测定维生素A软胶囊中维生素A醋酸酯的含量, 但是两种方法在应用范围上存在一定的区别。三点校正法适合纯度比较高的维生素A醋酸酯[5], 通过三点校正法虽然可消除某些杂质的影响, 使得该法在Va制剂含量测定中始终发挥着重要作用, 但是不能够单独测出维生素A中杂质的含量。HPLC法更适合纯度比较低的维生素A, 而且能够单独测出某种特定的杂质的含量。在最新的研究发现, 农药草达灭对大鼠体内维生素A代谢产物产生影响, 因此对睾丸造成一定的毒性。HPLC法可以对动物体内维生素A及其代谢产物即视黄醇、视黄醛、视黄酸进行含量测定[6], 但是紫外三点校正法明显不行。因此HPLC法显示出其特有的优越性。HPLC法专属性更强, 检测灵敏度更高, 能更好对样品进行质量控制。分析实验课中开设高效液相色谱法和三点校正法测定维生素A含量的实验, 可对同种目标分析物的不同分离方法进行比较, 以加深学生对两种分离方法的理解, 从而提高学生灵活运用分离分析方法的能力。目前国内相关院校已经相继给本科生开设了毛细管电泳的实验, 但是关于该类教学实验的详细、全面报道很少。我们在积极给本科生开设了相关实验的同时, 不断结合自己的科研成果, 使其成为一个开放式实验, 取得了较好的教学效果。

参考文献

[1]于世林.高效液相色谱法技术与应用[M].北京:科学出版社, 2009.

[2]詹益兴.实用色谱法[M].科学技术文献出版社, 2008.

[3]黄琦, 周孝瑞, 蒋成君等.面向应用型人才培养的药物分析改革与实践[J].安徽医药, 2011, 15 (5) :655-658.

[4]付支锋, 王琳.药物分析实验教学改革的探索与实践[J].山西医科大学学报, 2010, 12 (2) :191-192.

[5]钱玲慧, 廖佳宇, 李亚妮等.测定维生素A的三种方法比较[J].实验技术与管理, 2012, 29 (5) .

[6]Fabiola G, Zuno-Floriano, Dirk Holstege, et al.Determination of Vitamin A and its Metabolites in Rat Testis:Possible Involvement of Vitamin A in Testicular Toxicity Caused by Molinate[J].Bull Environ Contam Toxicol (2012) 88:1038-1042

土壤水分含量测定实验 篇6

水分是土壤最重要的组成部分之一,土壤水分含量多少及其存在形式对土壤形成发育过程及肥力水平高低与自净能力都有重要的影响。作为土壤组成物质,水分是土壤物质迁移和运动的载体,也是土壤能量转化的重要物质基础。土壤水分的运动,使有机质和无机质在土壤剖面中不断地迁移与转化,使土壤中的营养元素向植物根际迁移,被植物吸收利用;同时水分也会影响土壤物质的分解与转化过程。认识土壤水分状况是土壤研究的重要指标之一,土壤水分含量的测定是土壤地理学的一项基础实验。另外土壤理化分析中,都以“烘干土”作为计算标准,因此,每个实验都有必要测定土壤吸湿水含量。

1 实验目的与要求

土壤水分是土壤的重要组成部分和肥力因素,不同气候生物条件下,其水分状况类型与动态都有很大的差异。研究土壤水分状况类型与动态,对掌握土壤的形成、分类、分布、肥力状况以及进行田间土壤水分调节等方面,都有十分重要的理论和实践意义。通过实验获取土壤吸湿水含量和自然含水量,掌握烘干法测定土壤风干样品和新鲜采集样品的含水量的方法,了解土壤水分含量的意义。

2 实验原理

土壤水分的测定方法可以归结为三大类:即质量分析法、核技术法和电磁技术法。其中质量分析法包括经典烘干法、红外线烘干法、微波炉烘干法以及酒精燃烧法等,其有限是操作简单、价格低廉,缺点是难以现场观测、观察精度不高。目前我国常用的水分测定的方法是烘干法。计算用土壤失水量占烘干土重的百分数表示。本实验采用烘干法测定土壤的吸湿水含量。

新鲜的土壤样品都含有一定的水分。将新鲜土晾置于室内,土壤中的水分会因为不断地向空气中蒸发而损失,当土壤中的水分与空气中的水分达到平衡时(一般需要数天),称此时的土壤为“风干土”。风干土中仍含有一些被土壤颗粒紧紧吸附的不能进入空气中的水分,这称为吸湿水。吸湿水可在高温环境下被烘干。此时的土壤称为“烘干土”。由于风范土和烘干土的重量差值,即可计算土壤吸湿水的含量。

3 实验步骤

3.1 采集土壤分析样土

采集土壤样土前需要先进行土壤野外调查,通过调查选取一定的典型地区选择择有代表性的耕作地点,观察该区域的土壤形成环境及了解其土壤类型,为土壤分析做好数据搜集工作。如选取河漫滩阶地耕作土壤,挖一个深度为1米左右的土壤剖面,在土壤剖面的耕作层、犁地层、心土层和底土层进行土壤剖面调查,观测各层土壤特性,并将观察结果进行记录,如表1,为土壤分析提供参考。

观察记录完土壤剖面各层的特性后,进行采集样土,其中样土采集数量数多少可根据实验项目选的多少来确定,一般各层采集3～5个样土。可用环刀法和土铲采集样土。

用环刀进行取样。在环刀内壁涂抹凡士林,将环刀刀口垂直压入土中。环刀另一端套上环刀托,用铁锤敲打环刀托,使环刀插入土层中,直至土壤充满环刀筒内,刀托背面到达地层表面,即停止敲打环刀把,以免环刀进入土层太深而压实了已进入环刀筒内的土壤结构;用铁铲和切土刀小心挖出环刀,切去环刀两端多余的泥土,擦干净环刀外环的土壤,往环刀两端加套,以免水分蒸发。如还需进行土壤容重比重测定实验还最好采用环刀取土法。用铁铲进行取样,需按第一、二、三、四层的顺序分别采集样土,采集好样品需贴上标签,放进塑料袋,用于土壤水分含量的测定

3.2 制备土壤分析样土

将新鲜采回的样品放在平整的木板上,挑拣石块、植物根系等;

3.3取合适大小容器,如铝盒,在105℃下烘2h,取出冷却,用电子天平称量干燥而洁净的铝盒重量,记为W。

3.4在铝盒中放入5g新鲜采集的土样,称量,此为铝盒+新鲜土重量,记为W1。

3.5将装入铝盒的样品放置通风的实验室内5天,其风干后进行称量,此为铝盒+风干土重量,记为W2。

3.6将装着风干后的土样的铝盒放入烘箱,盒盖斜放在盒皿上,以留出一定空隙,便于水分蒸发,在105～110℃烘6～8h,取出放入干燥皿,冷却20min,带棉纱手套取出铝盒,马上称量,此为铝盒+烘干土重量,记为W3。

4 实验数据记录与计算

实验中的各项数据可填入下表。

1、自然含水量W (自)%的计算公式如下:W(自)%=(W1-W3)÷(W3-W)×100%2、吸湿水含量的计算W(吸)%的计算公式如下:W(吸)%=(W2-W3)÷(W3-W)×100%

5 实验分析与总结

实验操作完成后,将各项测定数据对照公式进行计算,得出土壤的自然含水量与吸湿水含水量。在实验过程中通过不同取样地点和不同土层样品的测定数据,对照采土区域土壤剖面的各层特性,分析土壤含水量与土壤颗粒大小组成和含量的密切关系,掌握影响土壤含水量大小的因素,掌握分析土壤特性和土壤含水量变化的规律,达到实验效果。

参考文献

[1]李天杰,赵烨,张科利等.土壤地理学[M].北京:高等教育出版社,2004.

食品中铝含量的测定控制 篇7

仪器与试剂

仪器

722S型分光光度计、BS210电子天平、MDS-6型微波消解仪、电热板、马弗炉、食品粉碎机。

试剂

1g/L铬天青S溶液 (1+1乙醇溶液) 、3+10 0聚乙二醇辛基苯醚 (乳化剂OP) 水溶液、3g/L溴代十六烷基吡啶 (CPB) 、乙二胺-盐酸缓冲溶液 (PH6.7~7.0) 、氨水 (1+1) 、0.5mol/L硝酸、100 g/m L铝标准液 (国家标准物质中心) 、1 g/m L铝标准使用液、1.0g/L对硝基酚乙醇溶液、硝酸 (分析纯) 、高氯酸 (分析纯) 、浓硫酸 (分析纯) 。

试验方法

在PH6.7~7.0范围内, 铝在聚乙二醇辛基苯醚和溴代十六烷基吡啶存在下, 与铬天青S反应生成绿色四元混合胶束, 比色定量。

湿法消解

精确称取经85℃干燥4h后的样品 (面制食品不包括夹心、夹馅部分) 0.5g, 置于100 m L锥形瓶中, 加数粒玻璃珠及10~15m L硝酸-高氯酸 (5+1) 混合液, 盖好玻片盖, 放置过夜。把锥形瓶置电热板上进行缓缓加热, 待其中的混合液至无色透明, 并出现大量高氯酸烟雾时, 取下锥形瓶, 向其加入0.5 m L浓硫酸, 不加玻片盖, 再置电热板上适当加热, 除去高氯酸, 之后再加入10~15m L水、加热至沸, 取下放冷后用水定容至50 m L (如果试样稀释倍数不同, 则应保证试样液中H2SO4含量在1%左右) , 同时做试剂空白。

干法消解

精确称取经85℃干燥4h后的样品 (面制食品不包括夹心、夹馅部分) 0.5g, 先放入瓷坩埚中小火碳化至不再冒烟, 再置入550℃的马弗炉中灰化4h, 冷却后用浓度为1%的H2SO4溶液定容至50m L (备用) , 同时做消化空白。

微波消解

精确称取经85℃干燥4h后的样品 (面制食品不包括夹心、夹馅部分) 0.5g, 将其放入聚四氟乙烯溶样杯中, 并加入6m L硝酸, 经电加热炉140℃预处理后, 再向杯中加入2m L硝酸、1m L过氧化氢, 并按微波消解仪操作规程进行消解 (消解条件:一档0.5MPa消解lmin, 二档1.0MPa消解2min, 三档1.5MPa消解2min, 四档2.0MPa消解5min) , 消解完毕移入50m L容量瓶中, 用水定容, 同时消化试剂空白。

标准曲线绘制与样品测定

分别吸取0.0m L、0.5m L、1.0m L、2.0m L、3.0m L、4.0m L和5.0m L铝标准使用液 (相当于铝0.0 g、0.5 g、1.0 g、2.0 g、3.0 g、4.0 g和5.0 g) , 再分别吸取1.0m L消化好的试样液, 将混合液分置于25m L比色管中, 并向管中加入1m L浓度为1%的H2SO4溶液, 后加水至10m L;向各管中滴加1滴对硝基酚乙醇液, 混匀后滴入氨水至混合液变为浅黄色, 再加入0.5mol/L硝酸直至黄色消失 (此时需多加入2滴硝酸) ;向混合液中加入3.0m L铬天青S, 待混匀后加入1.0m L乳化剂OP、2.0m LCPB、3.0m L乙二胺-盐酸缓冲溶液, 加水至25m L后混匀, 待放置30min后, 将1cm比色杯置于分光度计上, 以标样零管调零, 于620nm波长处测其吸光度, 绘制标准曲线比较定量。

结果与讨论

标准曲线与线性方程

对结果进行回归统计, 线性回归方程为Y=0.1610X+0.00173, r=0.9994。

精密度试验

精确称取二种不同含铝样品, 用3种不同的消化方法, 按本试验条件分别连续测定6次, RSD分别为:湿法消化2.1%~2.6%;干法消化2.3%~2.7%;微波消解2.2%~3.1%。结果见表2, 表中结果已换算成样品中铝含量。

准确度试验

在样品B中用3种不同的消化方法进行加标回收试验, 测得其回收率分别为:湿法消化89.7%~102.0%;干法消化88.4%~96.4%;微波消化90.2%~103.4%。结果见表3, 表中结果已换算成样品中铝含量, 本底值分别为6次测定平均值。

溶液酸碱度PH值影响

PH值对本法的显色反应影响较大, 因此在试验过程中要将反应体系的pH值控制在6.7~7.0范围内。在加入显色剂铬天青S溶液以前, 要滴加稀氨水和稀硝酸调节溶液的酸碱度, 使反应体系的pH值维持在7.0左右。不同的缓冲溶液及酸度对铝测定有很大的影响。本试验用3.0mL、pH值为6.7~7.0的乙二胺-盐酸缓冲溶液, 铝离子与试剂发生反应, 从而生成吸光值最大且稳定的绿色络合物。因此, 在配制乙二胺-盐酸缓冲溶液时应注意, 若p H<6.7应加乙二胺 (1+2) 调至p H>6.7, 若p H>7.0则用盐酸调至pH<7.0。

乳化剂OP与CPB加入量的选择

在本实验条件下, 乳化剂OP加入量小于1.0mL、表面活性剂CPB加入量小于2.0mL时, 随着试剂加入量的增加, 络合物吸光度值增大, 但大于此加入量以后, 吸光度值逐渐下降, 因此最合适的加入量为1.0mL和2.0mL。

显色的稳定性试验

通过实验发现, 加入显色剂后10~120min吸光度稳定, 本方法选用显色30min后比色。

小结

长庆商品原油氯含量测定 篇8

2012年3月, 长庆油田外输宁夏石化原油中有机氯含量异常, 导致宁夏石化催化装置严重腐蚀, 造成装置难以正常运行, 此事件对长庆油田造成极大影响。因此, 开展原油有机氯含量测定, 对于确定原油中有机氯的来源、杜绝有机氯进入原油生产系统, 是目前十分重要的事情。

1 原油中氯化物的来源与危害

1.1 原油中有机氯的来源

原油中的氯化物可以分为无机氯化物和有机氯化物两种。

无机氯主要以NaCl、CaCl2和MgCl2等形式存在, 并溶解于原油含有的少量水中, 或以结晶颗粒状态存在于原油中。

有机氯主要来源于采油过程中添加的含氯油田化学助剂。在含蜡或沥青质原油的开采过程中, 为了防止油井内的蜡、沥青质沉积并堵塞油井, 常常使用三氯乙烷等氯代烃清蜡剂来洗井。此外, 三次采油期不得不采取压裂、酸化、解堵等手段来提高产量, 使用含氯助剂, 如:甲基氯硅烷堵水剂、季铵-氯化铵复合粘土稳定剂等等。

1.2 原油中氯化物的危害

近年来随着原油开采深度的增加, 原油重质、劣质化日趋严重, 原油中的氯化物含量也呈不断增大的趋势。氯化物的存在具有巨大的危害性, 主要体现在设备腐蚀、铵盐堵塞以及催化剂氯中毒等, 加剧了下游炼化企业的设备腐蚀和非正常停工频率。

2 长庆油田商品原油的检测方法

2.1 微库伦测定原理

长庆油田商品原油采用微库伦滴定原理:样品与滴定池中的Ag+反应, 消耗电解液中的滴定剂Ag+, 消耗的Ag+由库仑计的电解作用, 由发生阳极极进行补充, 根据补充A g+所消耗的总电量经过信号放大控制, 微机记录从而得出样品中氯含量的测定值。

2.2 原油中无机氯的测定

采用的仪器:KY-4盐含量测定仪;测量原理:微库伦滴定原理;执行的方法标准:SY/T 0536-2008。

具体检测方法:称取约1g原油样品于离心管中, 加入稀释剂二甲苯1.5m L, 萃取液乙醇∶水 (v/v) =1∶3的混合液2mL, 采用高频震荡摇匀、高速离心分离的方式得到萃取液, 用微库仑滴定法定量分析萃取液中Cl-的含量。

2.3 原油中无机氯的测定

采用仪器:KY-200有机氯含量测定仪;测量原理:微库伦滴定原理;执行的方法标准:GB/T 18612-2011。

具体检测方法:量取100m L原油准确称量后, 进行常压蒸馏, 切割收取204℃之前馏分油, 进行碱洗和水洗除去H2S和无机氯, 用微量进样器把洗脱过的馏分油注入到含氧气和惰性气体的气流中, 气体载带样品通过800℃的裂解管, 此时, 有机氯转变为无机氯化物, 用氧化微库仑法测定馏分油中有机氯含量, 然后流进滴定池, 与滴定池中的Ag+反应。根据204℃前馏分油中有机氯含量及馏分油质量收率, 计算得到原油中有机氯的含量。

3 长庆油田商品原油的检测结果

3.1 长庆商品原油氯含量测量结果 (表1-表3)

4 结论

(1) 长庆油田建立了自己的氯含量操作与测量体系, 为以后氯化物的来源、化学制剂氯含量的测定、现场的氯含量检测与药品投加指导有一定的积极作用。

(2) 长庆商品原油的无机氯含量

通过对长庆商品原油无机氯含量测定, 无机氯含量在15.0-50.0mg/L之间。

(3) 长庆商品原油的有机氯含量

长庆商品原油的有机氯含量在0.66μg g-2.0μg/g之间, 远低于长庆油田企业标准10μg/g;试验中有机氯含量, 通过碱洗的结果低于未碱洗的, 说明之中存在干扰离子。

(4) 春秋季节有机氯含量差距较大, 说明有机氯含量与化学助剂使用量关系较大。

摘要：本文研究了长庆油田目前主要区块的有机与无机氯含量。为了确定与控制原油中有机氯的来源、杜绝有机氯进入原油生产系统, 进而对原油中氯含量测定势在必行。近年来随着原油开采深度的增加, 原油重质、劣质化日趋严重, 原油中的氯化物含量也呈不断增大的趋势;氯化物的存在对炼化企业具有巨大的危害性, 主要体现在设备腐蚀、铵盐堵塞以及催化剂氯中毒等, 加剧了下游炼化企业的设备腐蚀和非正常停工频率;因此此工作势在必行。

关键词：原油,氯含量,有机氯,测量

参考文献

[1]杨德凤.原油氯含量分析方法的研究及应用[J].石油炼制与化工2009.40 (12) :31-34

[2]杨德凤.原油盐含量分析方法的选择究及应用[J].石油炼制与化工2009.40 (12) :39-42

[3]张晓静.原油中氯化物的来源和分布及控制措施.炼油技术与工程[J].2004.2