草酸含量

草酸含量（共5篇）

草酸含量 篇1

前言

草酸,又名乙二酸,分子式C2H2O4,通常含有二分子结晶水。无色透明单斜晶体,有毒。草酸常以2种形式存在于我们的生活中:(1)作为化工原料-广泛用于医药、涂料等方面起到以除锈、漂白的作用,是一种能致人于死命的危险化学物质,致死剂量为1.5g;(2)广泛存在于水果、蔬菜中,尤其富含于菠菜、苋菜、土豆、竹笋及桔子、李子、可可、茶叶、豆类等这些人们普遍喜欢的食物中。富含草酸的食品饮食不当的话,会对身体造成伤害,医生通过研究发现:如果一人一次将200g菠菜全部吃掉,食后8h,检查尿中草酸排泄量为20～25mg,相当于正常人2倍。长期摄入过多富含草酸的食品易引起肾结石。草酸钙结石是肾结石里最为常见的一种,占肾结石的80%以上[1]。经检索,我们国家目前对食物中草酸含量的检测目前还没有国家标准检验方法。从其他技术参考资料查找到一些对食品中草酸检测方法的报道如:只有在草酸含量高时,根据草酸的强还原性,才可用高锰酸钾溶液来进行定性分析的化学分析法。由于草酸检测干扰较多,长期以来采用更好的方法对食品中草酸的提取与检验的相关检验报道甚少[2],为能准确检测果蔬中草酸含量,指导人们合理配餐,科学饮食,减少肾结石疾病的困扰,开发此检测方法十分必要。

本课题采用高效液相色谱法检测果蔬中草酸含量的研究解决以下关键技术问题:(1)高效液相色谱仪HPLC (配紫外检测器)仪器条件的摸索及优化。a色谱柱的选择;b检测波长的筛选;c流动相的选用;d流速的调整;e分离度与保留时间的适宜性,实现多组分分离;f标物峰的峰形及灵敏度。(2)通过考核样品加标回收筛选不同基质下样品的提取与净化处理方法。(3)进行综合试验,形成成套的液相色谱分析方法。对试样试验,并经过反复摸索实验条件,达到分离效果检验结果准确的目的。方法的回收率位于98.0%～105.4%,最低检出限1μg/mL。(4)与其它相关类型有机酸进行排查。避免检验结果误判,力求达到检测方法的独特性和准确性。

1 实验方法

1.1 主要仪器与试剂

1.1.1 仪器

1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司):包括1100四元泵,紫外检测器、色谱站;UV-160型紫外可见分光光度计;Beckman-200酸度计(美国Beckman公司);甲醇(色谱纯,天津四友公司)。

1.1.2 试剂

磷酸、用0.2%磷酸氢二铵溶液(pH=2.5～2.6)(优级纯,天津化学试剂厂);草酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸标准品,(纯度≥99.0%);其他试剂均为分析纯,实验用水为二级水。活性炭预处理柱(或弗洛里硅土柱)。

1.2 色谱条件

AgilentC18色谱柱(4.6×250×5μm),流动相:甲醇-磷酸二氢铵0.2%溶液(2:98)pH值2.5～2.6,流速为0.7mL/min;检测波长197nm,柱温25℃。

图1为1.2条件下浓度均为100μg/mL的4种有机酸:草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸得到有效分离的图谱。

1.3 样品的制备及处理

1.3.1 草酸的提取

将水果蔬菜表面洗净吸水份后,初切为小段或块准确称取10.00g样品,加入3g氯化钠捣碎为泥(或初切为小段(块)后于100mL高脚烧杯中,加入20mL纯净水及3g氯化钠摇匀,上高速匀浆机(8000rpm)匀浆1～2min,达到匀浆效果后),全量转移到50mL L比色管中,磷酸调pH值为2.5～2.6,定容至刻度摇匀静置待用。过0.45μm滤膜进HPLC分析。

1.3.2 对于颜色较深的蔬菜

吸上清液过活性炭(或弗洛里硅土柱)预柱处理收集溜液待用。

2 结果与讨论

2.1 样品处理条件的选择

本方法样品制备的原则是尽量减少化学试剂的加入,回避液-液萃取法及衍生法[3]可能带入的污染与干扰,采取切碎、匀浆、离心或过滤办法,整个过程简便快速,草酸提取效果较好。

2.2 液相色谱紫外检测器及检测波长的选择

通过实验,对浓度为0.1 mg/mL草酸溶液紫外光谱扫描(见图2),结果表明:在紫外波长190～400nm范围内出现草酸溶液有吸收最大峰值,最大值max=2.69Abs,故选择197nm为检测波长。故表明选择液相色谱仪紫外检测器检测目标物草酸可行。

本课题所选流动相0.2%(NH4)H2PO4溶液在紫外波长190～400nm区无最大吸收,最大吸收趋势小于190nm(见图3),这表明紫外区波长190～400nm高于流动相0.2%(NH4)H2PO4溶液透过波长下限,所选流动相不影响在紫外去被测物质的吸收。

2.3 色谱柱的选择及工作条件的确认

选择非极性柱C18柱,为减少试验环境温差及长时间开机过程中柱温变化带来的保留时间的漂移[4]设定柱温为25℃时,对草酸在150mm短柱与250mm长柱定性分析结果(见图4,5)。结果表明草酸在AgilentC18色谱柱(4.6×150×5μm)短柱子上几乎不保留,出峰时间为0.428min (见图4);草酸在AgilentC18色谱柱(4.6×250×5μm)长柱子保留时间为4.212min。

2.4流动相参数条件的选择

2.4.1 0.2%(NH4)H2PO4缓冲溶液的确定

有机酸在水相中大部分以离子态存在,而离子在反相柱上几乎无保留,故采用抑制电离的方法,使其变为分子在柱子上保留而得以分离。(NH4)H2PO4与KH2PO4缓冲溶液都为弱酸电离抑制剂在紫外区几乎无吸收,作流动相有利于对有机酸的分离不影响其检测。经试验表明选用0.2%(NH4)H2PO4较KH2P O4的缓冲盐溶液增加流动性的抑制电离作用使有机酸有更好的分离与保留性,并对流动相(NH4)H2PO4浓度分别为0.1%、0.2%、0.3%、0.5%时草酸的柱保留时间试验:草酸tR分别为4.18min、4.13min、4.06 min、3.97min,结果表明:随浓度增大保留时间无明显变化,考虑到缓冲盐浓度愈大对泵和柱子的磨损愈大[5]的不利影响,故选择浓度0.2%(NH4)H2PO4较适宜。

2.4.2 流动相比例的确认

试验表明(NH4)H2PO4的缓冲盐溶液:甲醇(V/V)=98:2时分离效果最佳(见表1)。

2.4.3流动相pH值的确认

综合考虑用磷酸调节(NH4)H2PO4溶液的pH值分别为2.5、2.7、3.0、3.2、3.5,分别用来测定草酸、乙酸、柠檬酸、果酸的混合标样。试验选择pH值2.5～2.6的流动相分离效果较好。

2.5 线性范围及检出限

2.5.1 线性范围及定量线上限值

配制浓度为20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL、550μg/mL、600μg/mL草酸标液,测其对应得峰面积A,绘制定量结果趋势图(见图6)。当草酸溶液浓度为550μg/mL、600μxg/mL时,其线性发生变化明显偏转。删去这2点数据其工作曲线图(见图7),回归方程为y=25.55X+0.139,线性相关性为R2=0.9998,确认定量线性的上限值为500μg/mL。

2.5.2 确认定量线性的下限值(P=1μg/mL)

按1.2配制的系列工作标准使用液,在优化的分析条件下进行LC检测对应峰面积A,绘制工作曲线,测得小于100μg/mL低浓度范围工作曲线图(见图7)。y=25.548x+0.139,线性相关性为R2=0.9998,确认定量线性的下限值P为10倍的检出限(p),P检出限=0.1μg/mL×10=1μg/mL (10p)。其工作上草酸标准溶液浓度25μg/mL点出峰谱图(见图8)。

2.5.3 确认方法的检出限(p=0.1μg/mL)

从图9可知:草酸标准工作液2μg/mL的峰面积A=62.2882信噪比为109.8,计算检出限(5倍的信噪比S/N)浓度p:p (5S/N)=2/109.8×5=0.091≈0.1μg/mL,综上试验结果表明草酸的线性范围为1～500μg/mL,1.0μg/mL浓度(P≥10p)为本方法的定量限,0.1μg/mL浓度(p≥5(S/N)为本方法检出限。

2.6 精密度、回收率试验

2.6.1 精密度测定

经对蔬菜中菠菜、苋菜类、小橘子、西红柿、黄瓜、苹果取样后6次测定实验表明:不同基质果蔬样品中所含草酸的量差别较大,精密度的相对标准偏差(RSD)落在0.5%～5.0%范围,实验数据(见表2)。

2.6.2 回收率测定

依据本方法1.3.1样品处理方法,称取菠菜、苋菜类2.00g,小橘子、西红柿、黄瓜、苹果5.00g,分别加入浓度20 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg级别浓度进行加标,定容于25.0mL进行回收实验,结果表明回收率在98%～105%范围。回收率实验数据(见表2及图10(草酸标物50μg/mL谱图)、图11 (小橘子取样5.05g,定容于25mL草酸含量=52.77X25/5.05=261.24mg/kg谱图)、图12 (小橘子中草酸含量261.24+50 (加标)=311.24 mg/kg谱图),回收率=315.69/311.24=101.4%。

(261.24+50 (加标)=311.24 mg/kg)谱图

3 结论

该方法从制样方法、色谱柱筛选、检测波长确认、色谱峰分离及方法的重复性、再现性与准确度等全面考量与优化液相色谱分析果蔬中草酸含量检验方法参数建立系统的检测方法,其结果准确,检出限低,检测线性范围广,回收率满意,实现立项时的研究目标。主要研究结论如下。

3.1将水果、蔬菜捣碎或匀浆,用0.2%磷酸氢二铵溶液(pH=2.5～2.6)溶提-磷酸调节pH值,并离心分离或SPE柱过滤后收集提取液,0.45μm微膜过滤进行样品快速处理备用。样品回收率为98.0%-105.4%.

3.2 高效液相色谱分析方法的优化参数:高效液相色谱仪配紫外检测器,Venvil-MP-C18,φ4.6X250不锈钢柱,流动相为0.2%磷酸氢二铵溶液(pH=2.6):甲醇=98%:2%,流速:0.7mL/min,检测波长:197nm。

3.3 低浓度线性范围为1～100μg/mL,y=25.548X+0.139,线性相关性为R2=0.9998。高浓度方法线性范围50～500μg/mL回归方程为y=26.539x-51.098,线性相关性为R2=0.9996良好,精密度误差RSD<5%,定量限1μg/mL,最小检出限0.1μg/mL。

3.4 实现目标组草酸与果蔬基质中酒石酸、柠檬酸、果酸等其他有机酸能较好的分离,出峰时间不重合,柱保留时间适宜,25min分析结束,避免检验结果误判。

参考文献

[1] 武警北京总队第二医院.含草酸较高的食物易导致肾结石,http://www.wjbj120． com,2010-5-10

[2] 山西省科学技术情报研究所,科技查新报告,编号:200714B1910866,2007

[3] 佚名.草酸检测方法的研究进展,http://www xuqiu.com/pius./view.php,2009-11-23

[4] 分析化学丛书(第三卷,第三册)高效液相色谱法,北京:科学出版社,2001

[5] 陈青川,于文莲等.高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂,色谱,2001,19(2) :105-108

草酸含量 篇2

Sn改性TS-1分子筛催化草酸二甲酯和苯酚酯交换合成草酸二苯酯

Diphenyl carbonate (DPC) is a basic material for the non-phosgene production of polycarbonates. Non-phosgene method for DPC synthesis from the transesterification of dimethyl oxalate (DMO) with phenol has also been proposed[1,2].

作 者：王胜平马新宾 郭宏利 许根慧 作者单位：State Key Laboratory of C1 Chemistry and Technology, School of Chemical Engineering and Technology,Tianjin University, Tianjin 300072, China刊 名：催化学报 ISTIC SCI PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CATALYSIS年，卷(期)：200223(6)分类号：O643/TQ42关键词：diphenyl carbonate dimethyl oxalate transesterification diphenyl oxalate dibutyltin dilaurate tin oxide modified TS-1 weak acid sites

草酸含量 篇3

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪、Waters VP-ODS-C18 (250mm×5.0mm) 色谱柱、Waters 2489UV/visible Detector紫外检测器、Waters Millennium32工作站、瑞士梅特勒AB135-S电子天平 (0.01mg) 、瑞士梅特勒GB-204电子天平 (0.1mg) 、JK-3200B型超声波清洗器 (合肥金尼克机械制造有限公司) 。

甘草酸铵对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:110731-200614) 、胃康灵颗粒 (黑龙江葵花药业股份有限公司, 批号为110921) 、乙腈 (DIKMA CHNDOLOGIES INC.) 为色谱纯, 水为蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 系统适用性

Waters VP-ODS-C18 (250mm×5.0mm) 色谱柱、柱温30℃、流动相:乙腈-0.1mol·L-1醋酸铵-冰醋酸 (28∶72∶0.3) 、检测波长250nm、流速:1mL·min-1。理论板数以甘草酸铵峰计不低于1 800, 分离度:R=1.65 (R>1.5) 。在此实验条件下, 根据结果分析可以得知:供试品中甘草酸保留时间与对照品一致, 而阴性对照无干扰, 所以处方中的其它味药对测定结果没有影响, 见图1。

2.2 供试品溶液的制备

取本品适量, 研细, 精密称取约3.0g, 置50mL量瓶中, 加入流动相约45mL, 超声处理30min, 放冷, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液, 作为供试品溶液。

2.3 阴性对照溶液的制备

按照处方组成, 取除甘草外的其余味药, 按制备工艺要求制成不含甘草的胃康灵颗粒, 按供试品溶液制备项下方法制备成阴性对照溶液。

2.4 对照品溶液的制备

称取甘草酸铵对照品约5.0mg (折合甘草酸为4.897 5mg) , 精密称定, 置50mL量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每1mL中约含甘草酸100μg) 。

2.5 线性关系考察

精密称取甘草酸单铵盐对照品25.73mg (折合甘草酸25.2mg) 置100mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 再精密量取1、2、4、5、8、10mL, 分别置于6个10mL的容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为不同浓度的对照品溶液, 分别吸取20μL进样, 记录色谱峰面积 (见表1) , 以对照品峰面积为纵坐标, 甘草酸浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 得到甘草酸的回归方程为Y=10586X-11668, r=0.9997, 实验表明甘草酸在53.4～534.0μg·mL-1范围内呈现良好的线性关系。

2.6 精密度实验

精密量取甘草酸对照品溶液20μL, 连续进样5次, 测定其峰面积, RSD为0.03% (n=5) , 结果显示精密度良好, 见表2。

2.7 稳定性实验

精密吸取供试品溶液20μL, 每隔2h进样1次, 记录甘草酸的峰面积, RSD为0.05%, 结果表明甘草酸在10h内稳定性良好, 见表3。

2.8 重现性试验

精密称取样品 (批号:110921) 适量, 按制备供试品溶液方法分别制备供试液5份, 在上述色谱条件下取20μL进样, 测定, 计算含量, RSD为0.89%, 结果表明本品在所建色谱条件下重现性较好, 5次测定的甘草酸含量均很接近, RSD值较小。

2.9 回收率实验

精密称取已知含量的胃康灵颗粒剂粉末5份, 分别精密加入一定量的甘草酸对照品, 按样品制备方法项下制备供试品液, 在上述色谱条件下进样分析, 甘草酸的回收率为99.84%, RSD为0.29% (n=5) 。结果表明, 本品中甘草酸的加样回收率较好, 本色谱条件适宜本品的测定。

2.10 样品的测定

取不同批次的样品, 按照供试品溶液的制备方法制备, 得供试品溶液, 按上述色谱条件分析测定, 结果见表5。

3 讨论

3.1 超声时间的考察

采用超声20、30、45、60min等不同时间进行比较, 结果超声30min后甘草酸的含量无明显增加, 所以超声时间为30min比较适宜。

3.2 提取溶剂的考察

根据甘草酸溶于甲醇、甲醇-水、乙腈-0.1mol·L-1醋酸铵-冰醋酸 (28∶72∶0.3) 溶液为提取溶剂比较, 结果以流动相乙腈-0.1mol·L-1醋酸铵-冰醋酸 (28∶72∶0.3) 溶液为溶剂时提取量为最完全且溶剂峰最小, 测得的含量值最高。

本法测定胃康灵颗粒中甘草酸的含量, 样品前处理简单, 分离度好, 干扰少。结果表明, 本法测定甘草酸准确, 专属性强, 重现性好, 可作为本品的质量控制方法。

摘要：目的:采用高效液相色谱法测定胃康灵颗粒中甘草酸的含量。方法:采用HPLC法, WatersVP-ODS-C18 (250mm×5.0mm) 色谱柱, 流动相:乙腈-0.1mol.L-1醋酸铵-冰醋酸 (28∶72∶0.3) , 检测波长:250nm, 流速:1.0mL.min-1。结果:甘草酸在53.4～534.0μg.mL-1范围内呈现良好的线性关系 (r=0.9997, n=5) , 平均回收率为99.90%。结论:该方法分离度高, 重现性好, 简便, 准确, 可用于胃康灵颗粒的质量控制。

关键词：高效液相色谱法,胃康灵颗粒,甘草酸

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社, 2010:885.

草酸含量 篇4

关键词：参苓颗粒,厚朴酚,和厚朴酚,甘草酸单铵盐,高效液相色谱法

高效液相层析法 (high performance liquid chromatography, HPLC) 方法简便, 回收率高, 可用于参苓颗粒的质量控制。本文对参苓颗粒有效成分厚朴酚、和厚朴酚及甘草酸单铵盐进行了含量测定。

1 材料与方法

1.1 试剂

厚朴酚对照品 (批号110729-200411) 、和厚朴酚对照品 (批号110730-201112) 、甘草酸单铵盐对照品 (批号111692-200501) 、参苓颗粒 (自制样品, 批号分别为20130902、20130907、20130912、20130917、20130922) 。甲醇、乙腈为色谱纯, 水为重蒸水, 其他试剂均为分析纯。

1.2 对照品溶液制备

称取厚朴酚对照品, 用甲醇制成含厚朴酚0.200 mg/m L溶液。称取和厚朴酚对照品, 用甲醇制成含和厚朴酚0.025 mg/m L溶液。称取厚朴酚与和厚朴酚对照品, 用甲醇制成含厚朴酚0.200 mg/m L、和厚朴酚0.025 mg/m L混合对照品溶液。甘草酸单铵盐:取甘草酸单铵盐对照品约12 mg, 置100 m L量瓶中, 用流动相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取1 m L, 移至10 m L量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀。

1.3 供试品溶液制备

厚朴酚与和厚朴酚:取自制参苓颗粒样品, 精密称取2.0 g, 置50 m L量瓶中, 加入甲醇40 m L, 超声处理30 min, 放冷补足重量, 滤过, 取续滤液。甘草酸单铵盐:取自制样品参苓颗粒研成细粉, 精密称取1.5 g, 置50 m L量瓶中, 加入流动相适量, 超声处理30 min, 放冷, 再稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液。

1.4 阴性对照溶液制备

厚朴酚与和厚朴酚阴性对照溶液:制备不含厚朴药材的阴性样品, 按1.3项下制备方法制备阴性对照溶液。甘草酸单铵盐阴性对照溶液:制备不含甘草药材的缺味阴性样品, 按1.3项下方法制备阴性对照溶液。

1.5 仪器和器材

LC-10AT型高效液相色谱仪 (岛津, Kyoto, 日本) , LCsolution Lite色谱工作站 (岛津) , Sepax-C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) 色谱柱。

1.6 色谱条件

厚朴酚与和厚朴酚色谱条件:流动相为甲醇∶水=81∶19, 检测波长294 nm, 流速1.0 m L/min, 进样量为10μL, 理论板数按厚朴酚峰计算不低于3 500。甘草酸单铵盐色谱条件:流动相为乙腈∶2%冰醋酸=38∶62, 检测波长250 nm, 流速1.0 m L/min, 进样量为20μL, 理论板数按甘草酸峰计算应不低于2 000。

1.7 绘制标准曲线

厚朴酚与和厚朴酚标准曲线:分别称取厚朴酚对照品10.44 mg与和厚朴酚对照品约1.25 mg, 置25 m L容量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度, 再吸取此液1 m L、2 m L、4 m L、6 m L、8 m L置10 m L量瓶中, 分别用甲醇稀释至刻度。精密吸取上述稀释液及母液各10μL, 按上述条件测定。甘草酸单铵盐标准曲线:称取甘草酸单铵盐对照品约6 mg, 置50 m L容量瓶中, 精密吸取此液0.5 m L、1.0 m L、2.0 m L、3.0 m L、4.0 m L、5.0 m L置10 m L量瓶中, 再精密吸取上述溶液各20μL, 按上述条件进样, 记录甘草酸单铵盐峰面积。

1.8 样品含量测定

将5批自制参苓颗粒样品按1.3项下方法制备样品溶液, 分别精密量取10μL, 按上述条件测定样品含量。

2 结果与讨论

2.1 线性关系

厚朴酚回归方程Y=1 E+06 X-144 503 (X为供试品的浓度, Y为峰面积) , R=0.999 6, 浓度在41.8μg/m L~417.6μg/m L范围内与峰面积均呈良好线性关系。和厚朴酚回归方程Y=15 008 X+101 201, R=0.999 6, 浓度在5.0μg/m L~50.0μg/m L范围内与峰面积均呈良好线性关系。甘草酸单铵盐回归方程Y=13 235 X-809.13, R=0.999 9, 浓度在6.0μg/m L~60.0μg/m L范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2 空白对照实验

按1.5项下色谱条件进行测定, 阴性无干扰。

2.3 精密度实验

取1.2项下混合对照品溶液, 按上述条件测定连续进样6次, RSD=1.02%, 精密度良好。取甘草酸单铵盐对照品溶液, 按1.5项下色谱条件测定, 连续进样6次, 计算RSD=0.72%, 精密度良好。

2.4 重现性实验

精密称取参苓颗粒样品共6份, 按1.3项下方法制备供试品溶液, 精密量取10μL, 按上述条件测定, 计算厚朴酚与和厚朴酚含量, RSD=1.13%, 本法重现性良好。精密量取该溶液20μL, 按上述条件测定, 计算甘草酸单铵盐含量, RSD=1.09%, 本法重现性良好。

2.5 稳定性实验

吸取同一供试品溶液, 分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h进样, 测定峰面积, 厚朴酚与和厚朴酚RSD=0.98%, 甘草酸单铵盐RSD=0.99%说明样品溶液在10 h内稳定性较好。

2.6回收率实验

精密称定已知含量的同一批号样品1.0 g, 共6份, 置50 m L容量瓶中, 再分别加入厚朴酚与和厚朴酚对照品适量, 加甲醇40 m L, 超声处理30 min, 放冷补足重量, 滤过。精密量取各续滤液10μL, 按上述条件测定, 外标法以峰面积计算, 得平均回收率为99.53%、99.0 8%, RSD为0.80% (n=6) 、1.28% (n=6) 。精密称取已知含量为0.878 5 mg/g的同一批号的样品1.0 g, 共6份, 置50 m L容量瓶中, 再分别加入甘草酸单铵盐对照品适量, 加流动相适量, 超声处理30 min, 放冷, 摇匀。精密量取该溶液20μL测定, 平均回收率为98.12%, RSD为1.05% (n=6) 。

2.7 含量测定

将5批自制参苓颗粒样品按1.3项下方法制备样品溶液, 分别精密量取10μL, 按上述条件测定[1], 厚朴酚与和厚朴酚、甘草酸单铵盐含量测定结果见表1。

2.8 含量限度

含厚朴酚与和厚朴酚不得少于1.6%, 结合5批自制参苓颗粒样品实测结果, 厚朴酚与和厚朴酚含量限度暂定为本品每袋 (10 g/袋) 含厚朴酚与和厚朴酚量计, 不得少于10 mg。含甘草酸不得少于2.0%, 结合5批自制样品实测结果, 将本品中甘草酸单铵盐含量限度暂定为本品每袋 (10 g/袋) 含甘草酸单铵盐量计, 不得少于8 mg。

本文将厚朴酚、和厚朴酚与甘草酸单铵盐作为含量测定指标性成分加以控制, 结果适合本样品的含量测定。

参考文献

草酸含量 篇5

1 仪器与试剂

Agi Lent 1200高效液相色谱仪 (配置自动进样器、真空在线脱气、三元泵、光电二极管阵列检测器 (DAD) 、色谱工作站) , AB204-S电子分析天平 (Mett Ler To Ledo) , AS3120型双频数控超声波清洗仪 (天津奥特赛斯恩斯仪器有限公司) 。对照品:绿原酸 (批号:110753-201314) 、栀子苷 (批号:110749-200410) 、橙皮苷 (批号:721-8601) 、黄芩苷 (批号:110715-201016) 、均购自中国食品药品检定研究院, 供含量测定用;甘草酸 (批号:BZP0037) , 购自合肥博美生物科技有限责任公司;羚羊清肺颗粒为市售品;乙腈 (色谱纯, 天津市光复精细化工研究所) , 甲醇 (色谱纯, 天津市光复精细化工研究所) , 磷酸 (分析纯, 天津市百世化工有限公司) , 水为超纯水。

2 方法和结果

2.1 色谱的条件:

见摘要

2.2 制备溶液

2.2.1对照品混合溶液精密称取干燥至恒重的绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸的对照品, 加甲醇分别配成浓度为0.37、0.21、0.20、0.19、0.28mg•m L-1的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液0.5、0.5、0.5、0.5、0.1m L混合均匀, 制成含对照品分别为0.18, 0.10, 0.10, 0.09, 0.13 mg•m L-1混合溶液。

2.2.2供试品溶液取适量样品, 置研钵中研磨, 取细粉末约1.67g, 精密称定, 置25m L量瓶中, 加80%甲醇20m L, 超声提取40min, 冷却至室温, 用80%甲醇定容, 混匀, 静置, 取上层清液, 用0.45μm微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.3阴性样品溶液按羚羊清肺颗粒处方比例及制备工艺, 分别制备缺金银花、缺栀子、缺陈皮、缺黄芩和缺甘草阴性样品, 按以上方法制备各阴性样品溶液。

2.3 专属性试验

分别取对照品混合溶液、供试品溶液及各阴性样品溶液, 分别进样7μL, 记录色谱图, 检测波长分别为238nm、250nm、280nm和327nm, 结果如图所示:

图3对照品 (A) 样品 (B) 缺陈皮阴性对照 (C) 缺黄芩阴性对照 (C) 在280nm处色谱1橙皮苷2黄芩苷

图4对照品 (A) 样品 (B) 缺金银花阴性对照 (C) 在327nm处色谱1绿原酸

由样品色谱图, 可知与对照品绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸保留时间一致的特征峰, 保留时间分别为24.3、28.0、38.0、41.0和53.1min, 各阴性样品色谱图中无相应特征峰, 表明处方中其他药对其无干扰, 方法专属性良好。各成分分离度均大于1.5, 拖尾因子分别为0.98、1.03、1.01、0.98和0.96。

2.4 精密度试验

取同一对照品混合溶液, 进样20μL连续6次, 记录色谱图, 结果绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸峰面积的RSD分别为3.7%、3.5%、1.4%、3.2%和2.8%。

2.5 线性关系考察

取对照品混合溶液, 按以上色谱条件, 分别等梯度自动进样1-60μL, 记录色谱图。分别以进样量X为横坐标, 峰面积Y为纵坐标, 进行线性回归, 结果如下表:

2.6 重复性试验

取同批号 (批号:15115064) 样品6份, 每份约1.67g, 精密称定, 按“2.2.2”方法制备供试品溶液, 按“2.1”色谱条件, 分别进样7μL进行分析, 记录色谱图, 计算各组分平均含量, 结果绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸平均含量分别为0.46、1.08、1.59、2.43和3.31mg·g-1, RSD分别为3.0%、4.2%、1.6%、2.4%和3.3%。

2.7 稳定性试验

取同一样品 (批号:15115064) 的供试品溶液, 室温下放置, 按“2.1”色谱条件, 分别于制备后0、2、4、6、8、12、24h进样7μL进行分析, 记录色谱图, 结果绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸峰面积的RSD分别为0.3%、0.4%、1.9%、0.9%和1.8%, 表明各组分在24h内基本稳定。

2.8 加样回收试验

精密称取6份同批号 (批号:15115064) 已知含量样品, 每份约0.83g, 分别加入对照品0.24、0.78、0.40、0.88、0.29 m L, 按“2.2.2”方法制备溶液, 按以上色谱条件, 进样7μL, 记录峰面积, 计算回收率, 绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸平均加样回收率 (n=6) 分别为96.93%、98.04%、97.10%、101.15%和95.93%, RSD分别为1.62%、1.15%、0.57%、0.80%和1.71%。

2.9 样品含量测定

取3个不同批号的样品, 每批号3份, 按“2.2.2”方法分别制备供试品溶液, 按“2.1”色谱条件, 分别进样7μL, 记录峰面积, 用标准曲线法计算绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸的含量。

3 结语

采用多波长HPLC同时测定羚羊清肺颗粒中绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷、甘草酸的量, 结果准确、方法简便、重复性好, 为提升羚羊清肺颗粒质量标准提供了依据。

摘要：目的:建立HPLC同时测定羚羊清肺颗粒中绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸含量的方法;采用Agilent TCC18色谱柱 (4.6mm×150mm, 5μm) , 流动相为乙腈 (A) -0.6%磷酸水溶液 (B) , 梯度洗脱程序为 (020min, 4%→10%A;2024min, 10%→8%A;2425min, 8%A→10%A;2528min, 10%A→12%A;2830min, 12%A→23%A;3040min, 23%A→30%A;4045min, 30%A→35%A;4546min, 35%→40%A;4650min, 40%→50%A;5055min, 50%→60%A;) , 流速为1.0m L·min-1, 柱温为30oC, 检测波长分别为238nm (栀子苷) , 250nm (甘草酸) , 280nm (橙皮苷、黄芩苷) , 327nm (绿原酸) 。结果:绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸进样量分别在0.04702.8217μg (r=0.9996) , 0.027081.6247μg (r=0.9996) , 0.00771.5474μg (r=0.9999) , 0.02351.4100μg (r=0.9999) , 0.00720.4333μg (r=0.9996) 范围内线性关系良好;平均加样回收率 (n=6) 分别为96.93%、98.04%、97.10%、101.15%和95.93%, RSD分别为1.62%、1.15%、0.57%、0.80%和1.71%。结论:本法适用于同时测定羚羊清肺颗粒中绿原酸、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷和甘草酸的含量。

关键词：羚羊清肺颗粒,绿原酸,栀子苷,橙皮苷,黄芩苷,甘草酸,HPLC

参考文献

[1]ChP (中国药典) .2015.Vo LⅠ (一部) :86, 191, 221, 248, 301, 1520-1521.

[2]师永花, 师永清.双波长RP-HPLC法同时测定黄连上清丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事, 2012, 26 (7) :747-750.