生物学钾离子研究

生物学钾离子研究（共4篇）

生物学钾离子研究 篇1

摘要：利用解吸动力学的4个方程,Elovich方程:qt=a+blnt;一级动力学方程:ln(1-qt/qe)=-ka t;指数方程:lnqt=lna+blnt;抛物线扩散方程:qt=a+bt,对超级电容器用活性炭中钾离子的解吸过程进行了模拟,Elovich方程的拟合关系最好,r=0.994;一级动力学方程次之,r=0.992,指数方程和抛物线方程的拟合结果一般,两者r均为0.973。

关键词：超级电容器,活性炭,拟合方程,解吸动力学

超级电容器是一种新型储能装置,它能够提供比普通电容器更高的比能量、更高的比功率和更长的循环使用寿命[1]。在炭电极材料的选取当中,活性炭以其低廉的价格、丰富的原料来源和稳定的电化学性能在众多电极材料中脱颖而出。目前国产超级电容器用活性炭售价在15~20万元/t;由于采用的原料和制备工艺不同,产品中的钾离子含量过高,一般在2000mg/kg以上,但产品成本低,具有很强的市场竞争力;进口产品售价在40万元/t,活性炭中的钾离子含量一般在50mg/kg左右。因此对国产活性炭中钾离子进行有效的脱除,具有很好的工业化应用价值。

在超级电容器用活性炭的纯化过程当中,对活性炭的解吸动力学做相应的研究,有利于生产工艺条件的优化和产品质量的提高,对生产操作方案制定提供理论支持。

1实验部分

1.1原料

超级电容器用活性炭(河南某公司提供),酸性氧化物(自制)。

1.2仪器

水浴锅(DF-101集热式),循环水式真空泵(SHB-III循环水式),超声波清洗机(KQ-100VDE型),真空干燥箱(DZF-6020型),原子吸收光谱仪(普析通用,TAS-986F)。

1.3实验原理

实验选用自制的酸性氧化物,利用离子交换的原理,通过将自制酸性氧化物配成溶液,用溶液中的H+和活性炭中的酸性中心配位,破坏金属离子在活性炭中的成键结构,替换活性炭中原有的K+,Cd+等离子,使其形成水溶性盐,并对活性炭进行有效的洗涤。本文选用解吸动力学的4个方程[2,3],Elovich方程:qt=a+blnt,一级动力学方程:,指数方程:lnqt=lna+blnt和抛物线扩散方程:对活性炭中钾离子的解吸过程进行模拟,确定适用于超级电容器用活性炭的解吸动力学方程。

1.4实验步骤

本实验先将活性炭用物理方法进行脱钾后,加入磷酸,破坏活性炭中以化学键形式存在的钾离子,使钾离子成为游离状态,然后对活性炭中钾离子的解吸动力学进行研究,操作步骤如下:

将装有活性炭的烧杯置于恒温水浴锅中,安装好电动搅拌器,加入事先用物理洗脱方法处理后的活性炭和磷酸,并迅速搅拌均匀,同时多组进行,前30min,每5min内取1次样,30min后每隔10min取1次样,直至70min。取出的样品用去离子水洗涤,并用超声强化解吸后,烘干、煅烧,最后用原子吸收光谱仪测定样品中钾离子含量。

2实验结果分析

本实验共测定了5种不同温度下钾离子的解吸动力学,实验结果见表1。

由表1可知,在反应温度为323.15K和328.15K时,活性炭中的钾离子在40min左右基本达到解吸平衡,在反应温度为333.15K、338.15K及343.15K时,反应在进行到30min时就基本达到解吸平衡。因此,本实验在反应进行的前30min对钾离子的解析量进行动力学研究;由于在加入酸性氧化物之前,样品中的钾离子含量在804mg/kg,由此可以得出钾离子总的解析量随反应时间的变化。具体变化量见表2。

本实验根据活性炭中钾离子的解吸量对这4种方程进行拟合;结果见图1-图4。

Ink=-Ea/RT-InA

Ink=-1246.2149/T+1.0488

A=e10.488=2.8542

qt=a+bt1/2

拟合效果见表3。

表3的数据显示,在解吸拟合中,Elovich方程(0.994)的r值最高,其次是一级动力学方程(0.992),双常数方程(0.973)和抛物线扩散方程(0.973)的拟合程度较差。由此可知,Elovich方程和一级动力学方程比较适合作为活性炭中钾离子的解吸模型,且相比之下Elovich方程模型要优于一级动力学方程模型。

3结论

(1)本研究通过4个拟合方程对超级电容器用活性炭中钾离子的解吸动力学做了相应研究,拟合结果表明,Elovichqt=a+blnt是这四个方程当中拟合效果最优的方程,r=0.994;其次是一级动力学方程,r=0.992;双常数方程和抛物线方程拟合效果较差,不适用于作为活性炭中钾离子的解吸模型。

(2)本研究采用的解吸附动力学方程,对不同的反应温度下的钾离子解吸动力学有所影响,总体来说在较低温度下,方程拟合程度相对较好。

生物学钾离子研究 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年10月-2013年10月于笔者所在医院接受透析治疗的诱导期透析患者48例, 其中男28例, 女20例, 年龄28~74岁, 平均 (53.4±4.5) 岁。其中慢性肾小球肾炎22例, 糖尿病肾病10例, 肾病综合症8例, 梗阻性肾病7例, 高血压1例。按照掷骰子法将其均分为试验组与对照组, 各24例。两组患者性别、年龄等一般资料比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 透析方法

试验组患者透析液钾离子浓度选择3.0 mmol/L (A15透析液) ;对照组患者透析液选择2.0 mmol/L (A06透析液) 。两组患者透析过程中均采用相同型号的透析机与透析器, 每隔1 d进行一次透析, 每次透析时间均为3 h。

1.3 护理

1.3.1 对照组

行常规护理。护理人员每间隔30 min对患者的神志、呼吸、脉搏进行观察, 并测量血压, 使用床旁心电监护仪辅助监测, 对患者透析过程中心律失常以及其他不良反应进行观察与记录。透析前、透析中以及透析后对患者进行严密的心电监护, 密切关注患者的各项生命体征、心率以及心律的变化情况。如果护理人员发现患者各项监测指标异常或者患者讲述不适, 要立即将患者情况报告给医生, 并按照医生的安排进行处理, 并严密监视处理后的各项指标的变化情况。

1.3.2 试验组

在对照组常规护理的基础上行心理护理及饮食护理。 (1) 心理护理:当患者首次进行透析治疗前, 护理人员应该为患者及家属详细讲解透析治疗的原理及作用, 特别是对于患者原发疾病的治疗作用。同时还要告知患者及家属透析过程中常会出现的一些不良反应, 嘱咐患者如果在透析治疗过程中若发生不良反应或者身体任何一个部位出现不适症状, 都要及时告诉护理人员, 以便护理人员及时查找原因进行处理。护理人员还要让患者及家属明白, 对于发生的不良反应以及不适症状, 只要能够早发现、早处理, 不良反应及不适症状均能快速得到控制。从而缓解患者内心的压力, 解除其恐惧感, 尽最大可能降低患者在透析治疗过程中因心理压力产生不良反应的发生率。 (2) 饮食护理:在透析治疗过程中, 为提高患者的耐力与体力, 提高患者的疾病恢复能力, 必须确保患者的营养供给, 在护理过程中, 护理人员要给予患者高能量、高蛋白低钾低盐饮食, 保证给予患者营养供给, 降低体内钾离子水平, 同时护理人员还要告知患者饮食护理的重要性, 打消先前因饮食限制产生的顾虑, 提高患者战胜疾病的信心。

1.4 观察指标

观察两组患者透析治疗过程中两组患者不良反应的发生情况, 观察两组患者透析治疗前后血液中钾离子浓度的变化情况。

1.5 统计学处理

所得数据采用SPSS 19.0统计学软件进行处理, 计量资料以均数±标准差 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料采用字2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不良反应

两组患者经过透析治疗, 试验组透析治疗患者心律失常发生率为8.33%, 对照组为33.33%, 两组心律失常发生率比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。试验组不适症状发生率为16.67%, 对照组为41.67%, 两组不适症状发生率比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。详见表1。

例 (%)

2.2 钙离子浓度

两组患者透析前血液钾离子浓度比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。试验组透析前后血液钾离子浓度比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 对照组透析前后血液钾离子浓度比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。两组患者透析后血液钾离子浓度组间比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。详见表2。

mmol/L

3 讨论

目前, 在透析治疗的过程中通常使用钾离子浓度为2.0 mmol/L的透析液。选择这种浓度的透析液, 尽管能够快速降低患者血液中钾离子浓度, 纠正高血钾状态, 使组织液中钾离子浓度迅速降低。但在治疗过程中, 快速降低的钾离子浓度却降低了患者心肌细胞膜上的钾电导, 细胞内钾离子外流的速度反而迅速降低, 从而降低静息电位的负值, 增强心肌兴奋性, 心肌细胞钙离子内流速度增加, 进而缩短心肌细胞的有效不应期, 提高心肌兴奋性, 同时还会促进钠离子流入组织细胞, 提高异位起搏点自律性, 引发心律失常[3]。适当提高透析液钾离子浓度能够有效减缓上述生理反应, 降低透析过程不良反应的发生率。

透析治疗常常是在原发性疾病保守治疗难以达到治疗目的情况下的治疗, 在治疗过程中, 患者一方面出于对原发性疾病长期保守治疗无效最终转为透析治疗的心理压力, 另一方面缺乏对原发性疾病的相关治疗知识, 加之在透析时发生的不良反应产生的不耐受, 常常会导致患者产生紧张、焦虑、无奈、恐惧等不良心理。为患者患者不良心理, 减轻患者透析治疗过程中的不适状况, 必须对患者进行心理护理。

在原发性疾病保守治疗过程中, 由于患者自身疾病因素, 必须限制患者的饮食状况, 并以低蛋白饮食为主, 长期保守治疗过程中, 患者一直处于低蛋白饮食状态, 患者非常容易发生营养不良, 抵抗力快速下降。而透析治疗给予患者高能量、高蛋白低钾低盐饮食, 能够快速改善患者营养状态, 提高患者抵抗能力。在本研究中, 试验组透析治疗过程中心律失常、不适症状发生率均低于对照组, 且试验组透析治疗后血液中钾离子浓度显著低于对照组透析治疗后血液中钾离子浓度, 提示试验组疗效优于对照组。

综上所述, 适当提高透析液钾离子浓度, 能够有效提高透析治疗患者的耐受性, 再辅以有效的护理干预, 能够有效提高透析患者的临床疗效, 达到治疗疾病的目的。

参考文献

[1]黄志勇, 钟家浩, 卓建钦.高通量血液透析联合超纯透析液对尿毒症贫血的影响[J].中国医学创新, 2011, 8 (21) :51-52.

[2]李高利, 张娜.浅谈血液净化室透析用水、透析液的管理与监测[J].中外医学研究, 2012, 10 (24) :146-146.

生物学钾离子研究 篇3

该方法有良好的精密度和准确度, 但NADH、PK和谷氨酸脱氢酶 (GLDH) 稳定性差, 因此目前市场上的产品主要为冻干粉剂型。试剂复溶后一般有效期14 d左右。有文献[3]报道:复溶后立即测定精密度, 相对变异系数 (CV) 为11.25%, 放置冰箱2℃~8℃12 h后CV下降为1.25%。这给使用者带来不便, 并且复溶过程容易造成试剂污染。

实验对Berry的方法进行改进, 替换生色剂并添加了PK和GLDH酶活稳定剂, 使试剂具有良好的稳定性, 同时降低胆红素的干扰。完成对基础配方改进后, 参考美国临床和实验室标准协会 (CLSI) 的相关文件对试剂性能进行评估。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 仪器

日立全自动生化分析仪7100, 上海一恒科学仪器有限公司电热恒温培养箱DHP-9162, Mettler Toledo p H计SG 2。

1.1.2 样本

Randox血清质控HUM ASY CONTROL 3和HUM ASY CONTROL 2 (批号分别为506 UE和739 UN) ;Roche血清质控Precipath U和Precinorm U (批号分别为10171778和10171743) ;临床收集患者血清样本;氯化钾 (KCl) 、氯化钠 (Na Cl) 浓度梯度样本。

1.1.3 试剂

以下试剂均购自Sigma公司:PEP、三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 、咪唑、ADP、PK、LDH、GLDH、K 221、α-酮戊二酸 (α-KG) 、生色剂、总胆红素 (TBil) 、直接胆红素 (DBil) 、乳糜、血红蛋白。以下试剂购自国药集团化学试剂有限公司:氯化锰 (Mn Cl2) 、磷酸丙酮酸激酶稳定剂、谷氨酸脱氢酶稳定剂、氯化锂 (Li Cl) ;B公司钾离子测定试剂盒 (批号:109091 H) , C公司钾离子测定试剂盒 (批号:20120101)

1.2 实验方法

1.2.1 配制待评估液体试剂A。

1.2.2 热稳定性评价

取试剂A中的R1与R2置于37℃恒温箱7 d, 观察稳定性。经过热处理的试剂A称为试剂A1。计算试剂A初始吸光度值与试剂A1初始吸光度值比值, 评价试剂中生色剂稳定性。另外本次实验评估了试剂A1与ISE相关性、批内精密度、抗干扰能力。

1.2.3 批内精密度评价

参考CLSI EP 5-A 2文件关于评估试剂精密度方案[4]。本次实验采用Roche和Randox两个厂家的四个浓度值质控, 每个样本测20次, 计算试剂批内精密度。

1.2.4 抗干扰能力评价

本次实验参考CLSI EP 7-A 2文件并作部分调整。将干扰物添加到常值血清[5], 各干扰物浓度分别为TBil 600 mg/L, DBil 600 mg/L, 维生素C (Vc) 600 mg/L, 乳糜15 mg/L, 血红蛋白10 g/L。试剂A、试剂A1、试剂B、试剂C测定添加干扰物后血清, 计算与没有添加干扰物的血清样本 (加入等量去离子水) 的百分偏差。配制Na Cl浓度梯度样本, 浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200 mmol/L。

每份Na Cl浓度梯度样本测定两次并计算平均值。参考Berry测定钠离子 (Na+) 选择性公式, 通过如下公式计算该试剂对Na+的选择性:

Na+选择性=单位K+吸光度变化值/单位Na+吸光度变化值。

1.2.5 线性范围评价

实验参考CLSI EP 6-A 2对试剂线性进行评估[6]。配制KCl浓度梯度样本, 浓度分别为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 mmol/L。每个样本测定两次, 由低值至高值测定一次, 由高值到低值测定一次, 并计算平均值, 检测离群值, 计算与理论值的相关系数并拟合一次方程。

1.2.6 相关性评价

评估试剂与ISE的相关性。临床收集血清样本, 样本浓度2.4~6.3 mmol/L, 异常值血清样本约占整体的30%。用试剂A、试剂A1、试剂B、试剂C、ISE测定样本。参考EP 9-A2文件, 以ISE测定结果为X轴值, 分别以试剂A、A1、B、C为Y轴绘制散点图, 计算相关性以及回归方程[7]。

1.2.7 7100自动生化分析仪参数设定

试剂A、A1参数为:主副波长340/405 nm, 加样比R1/R2/样本为120/30/3, 试剂盒B参数为:主/副波长340/405 nm, 加样比R1/R2/样本为120/48/8.5;试剂盒C参数为:主/副波长340/405 nm, 加样比R1/R2/样本为100/40/3。

2 结果

2.1 试剂精密度

4种试剂批内精密度CV<5%, 变异较小, 满足临床要求, 见表1。

2.2 试剂A、B、C及A 1抗干扰实验

干扰物浓度TBil、DBil、Vc、乳糜及血红蛋白对试剂AA1、B的测定结果偏差<10%, 无明显干扰。总胆红素和乳糜对试剂C干扰较大, 见表2。

按照1.2.4公式计算试剂A、B、C对Na+的选择性, 分别为249、602、81。

2.3 试剂线性评估

试剂A测定值与理论值做散点图, 没有明显离群值, 在0~10 mmol/L范围相关系数γ=0.999, 线性方程为Y=1.047X+0.049。

2.4 与离子电极法相关性

使用SAS 8.1软件对数据进行分析, 四种试剂的测定值与ISE测定值的相关系数γ≥0.975或接近该数值 (P<0.001) , 4种试剂与ISE差异无统计学意义, 显著相关, 见附图。

2.5 试剂A稳定性观察

本实验将试剂放置在37℃环境中7 d, 评估试剂A的热稳定性。试剂A的R1初始吸光度值由2.5008 A降至2.1196A, 降低15.43%。试剂A1测定值与ISE测定值相关系数为0.985 (P<0.001) , 显著相关。TBil、DBil、Vc、乳糜和血红蛋白对试剂A1测定结果造成偏差<±10%, 干扰不明显。

3 讨论

本实验针对Berry方法的生色剂NADH不能长期稳定放置在液体试剂中, 替换该生色剂, 保证生色剂存放在液体试剂中的稳定性。评估结果显示试剂在37℃下放置7 d后, 试剂初始吸光度下降15.43%, 根据以往经验, 满足试剂放置4℃环境一年至少剩余50%生色剂的要求。

在评估Berry的方法时, 发现胆红素对检测结果有明显干扰。实验寻找多种方式解决胆红素干扰问题, 包括通过添加氧化性物质等方法来消除胆红素对试剂的干扰[8]。最终筛选出适合本液体试剂的成分消除胆红素干扰。

试剂A对钠离子选择性为249, 低于试剂B的602。正常血清钠离子135~145 mmol/L, 波动较小。即使血清钠离子波动20 mmol, 仅仅影响0.08 mmol的测定结果 (<10%) , 干扰不显著。

实验结果显示, 该液体试剂性能稳定, 与离子选择电极显著相关。TBil 600 mg/L、DBil 600 mg/L、Vc 600 mg/L、乳糜15 mg/L、血红蛋白10 g/L时对试剂测定结果影响<10%, 线性范围0~10 mmol/L (γ=0.999) 。试剂热稳定性良好。

参考文献

[1]Berry MN, Mazzachi RD, Pejakovic M, et al.Enzymatic determination of potassium in serum[J].Clin Chem, 1989, 35 (5) :817-820.

[2]张孝山, 魏晨阳, 刘金领, 等.血清钾离子的丙酮酸激酶法测定[J].临床检验杂志, 1997, 15 (4) :203-206.

[3]吕国才, 章英宏, 张松照, 等.酶法测定血清钾、钠的干扰分析[J].临床检验杂志, 2001, 19 (3) :137-140.

[4]Clinical and Laboratory Standard Institute.EP5-A2:Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods;Approved Guideline-Second Edition.2004.

[5]Clinical and Laboratory Standard Institute.EP7-A2:Interference testing in clinical chemistry;Approved Guideline-Second Edition.2005.

[6]Clinical and Laboratory Standard Institute.EP6-A2:Evaluation of the linearity of Quantitative Measurement procedures;Approved Guideline-Second Edition.2001.

[7]Clinical and Laboratory Standard Institute.EP9-A2:Method comparison and bias estimation using patient samples;Approved Guideline-Second Edition.2002.

生物学钾离子研究 篇4

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

氯沙坦钾片（规格：50mg/片，批号：124864），阿特维斯（佛山）制药有限公司提供；氯沙坦钾片（商品名：科素亚®，规格：50mg/片，批号：100520），杭州默沙东制药有限公司生产；氯沙坦钾对照品（批号：100597-200501，含量：100%），中国药品生物制品检定所；缬沙坦对照品（批号：100651-200902，含量：98.9%），中国药品生物制品检定所；氯沙坦羧酸（EXP3174）对照品（批号：6023，含量：95%），Ramidus AB公司；坎地沙坦对照品（批号：4-ARP-147-1，含量：98%），Toronto Research Chemicals Inc.；甲酸、乙腈、甲醇、甲基叔丁基醚和三乙胺为色谱纯；磷酸二氢钾和磷酸为分析纯；纯净水为杭州娃哈哈集团有限公司生产；空白血浆由中国人民解放军第二〇八医院提供。

1.2 仪器

API-2000串联四极杆质谱仪（配有电喷雾离子源，Analyst®1.5.1质谱工作站，美国AB SCIEX公司）；Ultimate 3000型高效液相色谱仪（含DCMS Link 2.7.0 for Analyst液相工作站、在线脱气机、自动进样器、柱温箱，美国戴安公司）；LC-10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Agilent 1200 G1321A荧光检测器（含Agilent ChemStation for LC工作站，美国安捷伦公司）；XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西仪器厂有限公司）；KS康氏振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；TGL-16M/TGL-20M高速台式冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；TGL-16G台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；AUW120D分析天平（日本岛津公司）；JA2003N电子天平、PHS-3E型PH计（上海精密科学仪器有限公司）；MTN-2800W型氮吹浓缩仪（天津奥特塞恩斯仪器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 试验设计

所有志愿者在试验前签署知情同意书，临床试验方案经辽宁中医药大学附属第二医院伦理委员会批准，试验在辽宁中医药大学附属第二医院药物临床试验机构进行。试验前对志愿者进行一般的体格检查，包括生命体征、血尿常规、血生化（肝肾功能、K+、Na+等）及12导联心电图检查等。体检合格的24例健康男性志愿者入组参加试验，其中1例由于个人原因于第一周期服药前退出试验，故最终23例志愿者完成了本试验。

本试验采用开放随机的双周期双交叉试验设计。每个周期志愿者禁食过夜至少10h后，次日晨空腹以250mL温开水送服50mg受试制剂或参比制剂，服药后要检查志愿者口腔和盛药容器，以确保药物的正确服用，同时进行必要的安全性评价。经过一周的清洗期后交叉服药。于每周期服药前及服药后0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00、3.00、3.50、4.00、4.50、5.00、6.00、8.00、12.00、24.00、36.00、48.00h采集静脉血5mL。采集后的血样以肝素抗凝，离心分离血浆后于-70℃冰箱中保存备用。

每周期服药后2h方可按需饮水，服药后4h、10h统一进标准餐，志愿者至少从服药前10d到最后一次采血前，禁服葡萄柚及其任何加工品；至少从服药前7d到最后一次采血前，禁服任何维生素补充剂和天然产品（包括草药，大蒜补充剂和圣约翰草）；在试验期间至少从服药前24h到最后一次采血前，禁服任何含黄嘌呤的食品和饮料，并禁止吸烟；至少从服药前48h到最后一次采血前，禁服任何含酒精的食品和饮料。

1.3.2 血浆样品中氯沙坦浓度的测定

1.3.2. 1 色谱-质谱条件

分析柱：Platisil ODS(150mm×4.6mm,5μm）；预柱：琛航C18保护柱；流动相：0.2%甲酸-乙腈（30∶70）；流速：梯度流速；柱温：30℃；自动进样器温度：10℃；进样量：5μL。

质谱条件：离子源为电喷雾离子源（ESI源）；气帘气：10 Psi；碰撞气：4 Psi;Gas1:70 Psi;Gas2:50 Psi；雾化温度：450℃；喷雾电压：4500 V；正离子方式检测；扫描方式为多反应离子监测（MRM），用于定量分析的离子分别为氯沙坦（m/z)422.9→206.9和缬沙坦（m/z)436.1→291.2。

1.3.2. 2 血浆样品处理

精密量取血浆样品200μL，置10mL离心管中，加入甲醇-水（1∶1）溶液20μL，加入内标溶液（20.2400μg/mL缬沙坦）20μL，加入5%甲酸溶液100μL，混合均匀后，加入甲基叔丁基醚3mL，涡旋混合60s，振荡混合10min，离心6min(10000 rpm），转移有机层至5mL离心管中，于40℃水浴中空气流吹干，加入流动相400μL复溶，涡旋混合60s，将溶液转移至1.5 mL离心管中，离心3min(15000rpm），取上清液5μL进样分析。

1.3.2. 3 方法学验证结果

采用HPLC-MS/MS法测定血浆中氯沙坦的浓度，结果表明，氯沙坦与内标缬沙坦及血浆杂质分离良好，在4.9950～599.4000ng/mL范围内线性关系良好，定量下限为4.9950ng/mL。氯沙坦提取回收率为74.9%～77.0%，批内和批间精密度与准确度均符合相关规定，基质效应不影响分析方法的准确度和精密度。

1.3.3 血浆样品中氯沙坦羧酸（EXP3174）浓度的测定

1.3.3. 1 色谱条件

分析柱：Hypersil BDS C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；预柱：琛航C18保护柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（pH=3.00±0.02）-乙腈-甲醇（50∶30∶20）；荧光波长：激发波长（Excitation）:250nm，发射波长（Emission）:375nm；流速：1.2mL/min；柱温：30℃；进样量：50μL。

1.3.3. 2 血浆样品处理

精密量取血浆样品500μL，置10mL离心管中，加入甲醇-水（1∶1）溶液50μL，加入内标溶液（1.0170μg/mL坎地沙坦）50μL，加入10%磷酸溶液100μL，混合均匀后，加入甲基叔丁基醚3mL，涡旋混合60s，振荡混合10min，离心6min(10000 rpm），转移有机层至5mL离心管中，于40℃水浴中空气流吹干，加入复溶溶剂乙腈-水（45∶55)150μL复溶，涡旋混合60s，将溶液转移至1.5mL离心管中，离心3min(15000 rpm），取上清液50μL进样分析。

1.3.3. 3 方法学验证结果

采用HPLC-荧光法测定血浆中EXP3174的浓度，结果表明，EXP3174与内标坎地沙坦及血浆杂质分离良好，在4.8～958.0 ng/mL范围内线性关系良好，定量下限为4.8ng/mL。EXP3174提取回收率为67.2%～71.3%，批内和批间精密度与准确度均符合相关规定。

1.4 统计方法

采用Win Nonlin 6.0数据统计软件计算完成试验的23例志愿者血浆中的氯沙坦及EXP3174的主要药动学参数，并对AUC0-t、AUC0-∞和Cmax经对数转换后进行方差分析，双单侧t检验。Tmax采用非参数检验[3]。

1.5 安全性评价

临床试验医师进行必要的安全性评价，采血期间定期监测生命体征，保证每天至少2次询问志愿者是否有任何不良事件，询问时避免使用诱导性语言，监护医师应保证志愿者的安全。

2 结果

2.1 数据计算和分析结果

23例志愿者口服受试制剂（T）和参比制剂（R）后氯沙坦、EXP3174的平均血药浓度（Concentration）-时间（Time）曲线均数对比图见图1和图2。

药动参数使用WinNonlin 6.0数据统计软件进行计算。Tmax和Cmax均为实测值，血药浓度-时间曲线下面积（AUC）按梯形面积法计算。计算得到的相应药动学参数见表1。

对主要药动学参数对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验和[1-2α]置信区间法进行生物等效性评价，其中Tmax采用非参数检验法。结果表明，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞均拒绝生物不等效假设，结果见表2。Tmax在受试制剂与参比制剂间无显著性差异（P>0.05），结果见表3。

根据以上结果，受试制剂参数AUC的90%置信区间落在了参比制剂相应参数的80%～125%范围内，受试制剂参数Cmax的90%置信区间落在了参比制剂相应参数的75%～133%范围内，因此受试制剂和参比制剂具有生物等效性[4]。

2.2 安全性评价结果

两个周期服药后共有8例志愿者报告了不良事件，所有不良事件均为血压下降，级别为轻度，并均在未经任何医学处理的情况下于该周期采血结束前恢复正常。试验结束后再次对志愿者进行一般的体格检查，项目与入组体检项目相同，检查结果均正常。

3 讨论

有报道，氯沙坦钾可引起高钾血症[5]和低钠血症[6]，为了保证志愿者的安全，在入、出组血生化检查中增加了血钾和血钠，从而避免入选血钾或血钠紊乱的志愿者。氯沙坦钾作为降血压的药物，在本试验期间仅发生8例血压下降的不良事件，由此可见，氯沙坦的安全性很好，与众多一线降血压药物相比有着明显的优势。

从表2的数据可见，氯沙坦及EXP3174的个体内变异系数均<30%，故氯沙坦及EXP3174不属于高变异药物，因此23例志愿者可以满足等效试验的统计学要求。氯沙坦钾在肝内经细胞色素P450酶（CYP3A4、2C9）转化产生活性代谢产物氯沙坦羧酸[7]，本试验受试制剂与参比制剂氯沙坦及EXP3174的药动学参数分别与文献[8,9,10]报道基本一致，而与非亚洲人种试验的文献[11,12]数据结果比较，代谢物EXP3174 Cmax和AUC结果相差较大，猜测这种差异可能源于不同人种体内P450酶的差别。

摘要：目的 建立人血浆中氯沙坦及其代谢物氯沙坦羧酸(EXP3174)浓度的测定方法,并评价2种氯沙坦钾片在健康志愿者体内的生物等效性。方法 23例男性健康志愿者随机双周期交叉给药,口服受试制剂和参比制剂50mg,清洗期1周,HPLC-MS/MS法测定血浆中氯沙坦和HPLC-荧光法测定血浆中氯沙坦代谢物EXP3174浓度。所得数据经WinNonlin 6.0软件分析,计算氯沙坦及EXP3174在人体内的药代动力学参数。结果 口服受试制剂和参比制剂后,志愿者的氯沙坦和EXP3174主要药代动力学参数如下:氯沙坦Cmax分别为(244.8561±86.9741)ng/mL,(266.8621±115.5986)ng/mL;AUC0-t分别为(451.4±151.8)ng/(h mL)(,459.4±163.7)ng/(h mL);AUC0-∞分别为(469.8±155.1)ng/(h mL)(,477.9±166.2)ng/(h mL);t1/2分别为(1.55±0.32)h,(1.65±0.37)h;Tmax分别为:(1.09±0.62)h,(1.25±0.75)h。EXP3174 Cmax分别为(399.4±100.5)ng/mL,(426.8±132.6)ng/mL;AUC0-t分别为(3231±1064)ng/(h mL),(3152±1058)ng/(h mL);AUC0-∞分别为(3458±1152)ng/(h mL),(3408±1061)ng/(h mL);t1/2分别为(6.86±2.25)h,(5.77±1.47)h;Tmax分别为:(3.48±0.89)h,(3.13±0.69)h。结论氯沙坦钾受试制剂与参比制剂在人体内具有生物等效性。