动物源生物农药研究

2024-05-20

动物源生物农药研究（精选9篇）

动物源生物农药研究篇1

从当前的环保工作来看,虽然已经将“绿色食品与生物园农药”作为工作重点,但此项工程想要发挥实效依旧任重道远,特别是当前农业生产对于化学农药的依赖性,生态环境保护前景堪忧。为满足生态环境发展的可持续性,展现出经济效益、生态效益以及社会效益等发展目标,都需要依托于生态农业与现代农业的支撑。微生物源农药从长期的角度对生态环境保护与农业生产作用显著。

1 微生物源农药的应用现状

1.1 杀虫剂应用现状

微生物源杀虫剂中涉及到的品类较多,主要从细菌杀虫剂、真菌杀虫剂以及病毒杀虫剂三个大的品类分析其应用现状。

细菌杀虫剂:该杀虫剂是最早的微生物源农药,当前研究领域能够被筛选出的杀虫活性细菌多达上百种,研究比较广泛的是一些芽孢杆菌。现代微生物源农药应用最为广泛的是苏云金芽孢杆菌,占到整个微生物源杀虫剂农药市场的90%以上,杀虫对象主要为咀嚼式口器害虫,为农业虫害防治提供保障。

真菌杀虫剂:在现有的记录当中,杀虫真菌的种类已经多达100个属,800多种。常见的杀虫真菌包括白僵菌属(Beauveria)、绿僵菌属(Metarhi-zium)、被毛孢属(Hirsutella Pet.)、蟪霉属(Nomu-raea)、拟青霉属(Paecilomyce)等[1]。在真菌杀虫剂中,当属白僵菌的研究最为广泛,凭借其广泛的杀虫谱被有效的运用到防治农业生产作物的杀虫中,主要防治玉米螟、松毛虫、叶蝉等。真菌杀虫是通过一种特殊的侵染方式,拓展能力较强,防治效果较好并且产生的效果是一般杀虫剂无法替代的。

病毒杀虫剂:根据相关数据统计,当前对害虫有活性的昆虫病毒已经达到千余种,杆状病毒居多,占总数量比例达到60%。经过大量的实验证明,微生物源病毒杀虫剂已经进行大田试验以及大田应用阶段,病毒类型以杆状病毒的核型多角体病毒(NPV)、颗粒体病毒(GV)及质型多角体病毒(CPV),该种杀虫剂的原理是去感染害虫种群,最终达到控制害虫数量的目的[2]。

1.2 杀菌剂应用现状

微生物源杀菌剂在农业当中的应用,目的是为了控制植物病原菌。本次研究主要介绍细菌杀菌剂与真菌杀菌剂两种。

细菌杀菌剂:植物病害的防治是杀菌剂的基本功能,也是微生物源农药应用较多的一种,当前在册登记的品类已经达到10中,成功开发的杀菌剂主要是荧光假单胞杆菌、芽孢杆菌等,在小麦纹枯病方面多有应用。细菌种类繁多,科学技术的进步使得细菌繁殖速度有所增强,微生物源细菌杀菌剂在应用以及未来发展方面作用显著,具有良好的发展前景。

真菌杀菌剂:植物病害的防治,真菌达到20多个属,产品开发速度较多,代表性的真菌包括木霉菌(Tri-choderma),常见的有绿色木霉(T.viride)、哈茨木霉(T.harzinum)[3]。从我国的研究上看,真菌杀菌剂研究中运用最为广泛的就是木霉菌,将其作为主导原料,对霜霉病稳定防治作用显著。杀菌剂的基本原理是通过竞争生态位影响病原菌的定殖、转移,还能够直接影响病原菌的繁殖。

1.3 除草剂应用现状

微生物源除草剂的应用同样具有一定前景,为明确微生物源农药应用现状,从真菌除草剂与农用抗生素除草剂入手。

真菌除草剂:当前的科学研究中确定侵染微生物种类80余种,可防治杂草的有70种。结合农业生产对于除草剂的要求,利用微生物源开发的真菌除草剂种类达到30余种,其中丝孢纲和腔孢纲两类真菌具有一定的可开发前景。

农用抗生素除草剂:近年来农业抗生素除草剂也成为开发的重点,这种抗生素除草剂最早出现在日本,而在我国的研究是由中国农业科学院生物防治研究所与福建省微生物研究所共同研制的除草剂M-22,从土壤中分离到的一株链霉菌所产生的广谱性苗类抗生素除草剂。

2 微生物源农药的发展前景

与传统的农药相比,微生物源农药具有多种优势,这也是之所以谈起微生物源农药则考量其发展前景的根本之所在。具体优势表现在以下几个方面:其一,安全性好。微生物源农药的安全性主要表现在对人和家畜都处于无害的状态,不容易产生农药中毒等相关事故;其二,作用机制独特。与传统的农药相比较而言,微生物源农药对目标的针对性更强,对天敌以及有益生物无害。一旦成分得以充分发挥,病虫草害将不会产生抗药性,应用效果良好;其三,相容性好,无论是生产材料还是有效成分,在使用之后不会对自然环境产生影响,对维持生态平衡作用显著;其四,产业化简易。生产工艺相对便捷,无论是在开发还是在登记方面,其便捷性明显优于传统农药[4]。因此,从现代生态环境的适应性方面考量,微生物源农药的发展前景广阔。

微生物源农药的发展前景不单单应该看到优势,还应该重视其发展缺陷,以便于在后续研究中得到补充与完善。微生物源的防治效果不佳,可利用的拮抗微生物资源相对匮乏,为有效解决这一问题还需要深度的探究与挖掘。目前,我国微生物防治已经迈入世界先进的行列当中,但依旧缺乏相关理论及经费方面的条件限制。生态环境保护理念以及科学技术水平的提升,将微生物源农药发展推向一个新的高度,本次研究旨在为我国农业生产提供保障,支撑农业生产大国的快速发展。

3 结论

综上所述,微生物源农药在我国的应用现状虽然并未全面普及但应用价值与展现出的作用毋庸置疑。微生物源农药研究尚存在些许不足,未来的研究倾向性要进行深度探索,创造出多品种新型农药,一方面为生态环境的稳定发展做出贡献,另一方面推动现代农业快速发展。

摘要：化学农药作为农业生产的一个重要构成,对环境产生一定影响。为有效改善传统农药带来的环境危害,微生物源农药成为很好的一种替代产品,不单单具备诸多优点,还能够在环境相容性与安全性方面发挥作用。本次的研究重点则是对微生物源农药的应用现状与发展进行研究,讨论其发展前景。

关键词：微生物源农药,应用现状,发展前景

参考文献

[1]刘顺字,曹永军.微生物源农药应用现状及发展前景[J].河南农业科学,2015,5:22-25.

[2]王以燕,袁善奎,吴厚斌,等.我国生物源及矿物源农药应用发展现状[J].农药,2012,5:313-316.

[3]段永兰,侯金丽,邢文会.我国微生物农药的研究与展望[J].安徽农业科学,2010,8:415-418.

[4]马俊义,李尽哲,叶兆伟.生物农药的应用现状及前景展望[J].江苏农业科学,2011,4:15-17.

动物源生物农药研究篇2

(一）研究背景及意义

最近几年，狗肉节这一活动又引起了大量舆论的关注，狗肉节年年都要肆意残杀大量猫狗，这使得社会普遍关注。很多国外的民众因为看到一些我国残杀动物的新闻报道，所以对我国的相关产品有十分强烈的抵制情绪。从这些事例中我们也可以看出人们关心爱护动物的想法愈来愈强烈，动物福利的理念也已经慢慢地被人们所接受。其实在很早以前的历史记载中也有提及人们对动物福利的态度。而后的朝代中，还有通过法律保护动物的。而西方人对动物保护的态度主要是受文化的熏陶。

当今世界，国际贸易在一天天地发展，国际间的交往也在一天天变得频繁。因为国际贸易的发展，动物福利这一理念也逐渐被引入国际贸易的领域。尤其是经济较为发达的国家，很早就已经将这两者紧密联系。因为动物福利在渐渐进入人们的眼球的同时与国际贸易密切相关，所以影响也逐渐增大。受许多因素的制约，我们国家在动物福利上还有很多不足。所以研究动物福利这一问题有着深刻的意义。

我国是农产品大国，我国的农产品常出口到其他国家。在21世纪的今天，经济发展水平逐渐提高，动物源产品的出口贸易也越来越发展，所以我们不断残杀动物。以至于动物福利壁垒对动物源产品产生了一系列影响。一旦忽视，很多动物源产品产品出口会继续遭遇巨大损失，如水产品、化妆品、禽产品等。所以说为了能够努力去跟上发达国家，我们不得不重视动物福利的问题。

（二）国内外研究现状

1.国外研究现状

动物福利已经有很多年的发展历史。关于动物福利的法案最早是在英国被提出的。一开始提出的时候是遭到质疑和嘲笑的。但经过一段时间的争论之后查理德马丁的《马丁法案》最终在英国获得通过。后来，其他国家都陆陆续续进行了动物福利的立法，使动物福利壁垒有了法律的支持和依靠。

欧盟在动物福利的倡导上是领头羊，制定了一系列相关的公约。这些公约都是有关于动物福利的问题的。在欧盟的带领下，其他国际机构、组织也在不断努力。一些国际组织纷纷加入支持动物福利的行列，并且制定了相应的标准及准则。

如今，在国际贸易中，已经形成了动物福利壁垒。在有些发达国家，已经有了有关于动物福利的规定。

2.国内研究现状

和西方一些经济较发达的国家还有亚洲一些例如日本等比较早实施动物福利法的国家相比，我国的动物福利发展存在很多问题。首先我国起步很迟，其次进程慢而坎坷。在我国，经常会发生虐待动物的事情。因为利益往往是大家最关心的，所以为了利益，很多养殖场都忽视动物福利，只为获得更高的经济利益。就算政府比较重视动物福利法制建设，但由于其他因素的干扰，立法进程还是相当曲折艰难的。

（三）研究方法及内容

1.研究方法

①调查法。文中对调查搜集到的大量资料进行分析、综合、比较、归纳，从而为人们提供关于动物福利及动物福利壁垒规律性的知识。

②文献研究法。文中参考了大量的文献，并且以文献为基础进行写作。

③对比研究法。文中通过比较我国及其他一些国家动物福利水平，进而分析其他一些国家动物福利水平较高的原因。

④案例分析法。因为没有案例的纯文字分析往往会显得比较没有说服力，所以文中引用了一些案例来使论证更有说服力。

2.研究内容

第一部分：动物福利壁垒概述。主要是介绍动物福利和动物福利壁垒的内涵，以及动物福利壁垒的一些特征还有产生的原因。

第二部分：这一部分主要是我国动物产品的动物福利现状。包括生产和出口现状。紧接着是关于禽产品、水产品、中医药产品还有化妆品的动物福利现状。最后分析制约我国动物福利水平提高的因素。其中也指出制约我国动物福利水平提高最直接的一大因素是成本因素。

第三部分：这一部分是全文最主要的部分。主要是关于动物福利壁垒对我国的动物源产品的影响。首先对中外动物福利水平进行对比，并分析为什么他们动物福利水平较高而我们较低。接着阐述动物福利对需求和供给的影响。然后从国际组织和进口国两个角度介绍相关的立法依据。最后结合一些实际案例对动物福利壁垒的积极以及消极影响进行具体的阐述。

第四部分：这是文本的最后一部分，分别从政府、企业、相关行业协会以及公民个人的四个不同的角度提出相关的对策应对动物福利壁垒带来的影响。

动物福利壁垒概述

1.1

动物福利内涵

动物福利主要是为了动物的生活，是为了让动物有更好的生存环境。这体现了人们对动物的关心与爱护。一些西方国家近年来成立了一些组织，如动物解放阵线来关心和爱护动物。不过有些观点让人存在质疑，例如有观点把动物提升到人的高度，觉得动物和人是完全一致的。这虽然是为了保护动物，但在一定程度上混淆了动物和人的伦理界限，所以还是有失偏颇。

关于“动物福利”，国内外有种种解释。虽然文字表达不同，但其实质是相同或是相近的。基本出发点都是为了让动物生活得更好，让动物在康乐的状态下生存，在无痛苦的状态下死亡。

众所周知，家养动物一般是可分为宠物动物和经济性动物。宠物动物又称伴侣动物。宠物动物是人类为了生活上的陪伴和娱乐而饲养的动物，例如狗、猫、兔等。相较于经济性动物而言，宠物动物与人类的关系更为亲密，一般会被当做是人类的朋友及家人。宠物福利指宠物能够有更好的生活条件，能够更好地生存。西方国家普遍推行替代、减少和优化的“3R”原则。保障宠物的相关权益以及生命安全，有利于维护饲养者的相关利益。

1.2动物福利壁垒内涵

关于动物福利壁垒，一般有两种。一种是认为动物福利壁垒的最初目的就是为了保护动物，为了保护自然资源，当然还有为了人类自身的身体健康，但是还有一种观点觉得发达国家之所以把动物福利与国际贸易紧密联系，无非是为了自身贸易的发展，他们只是把动物福利当做是一个借口，以此来抵制其它国家的产品。

一些人觉得动物福利壁垒是结合道德和技术的壁垒。一方面不断强调动物应该健康成长，应该为动物提供十分舒适的生存条件。另一方面，设置了许多的标准来限制技术和经济较为落后的国家。所以从某种意义上说，也可以算是道德和技术壁垒的结合产物。动物福利壁垒不得不说，在一定程度上对人类文明有推进作用，对和谐社会的建设以及经济的可持续发展也有积极作用。但是一些西方国家利用人们日益增长的动物福利意识来组织进口其他国家产品，其实是贸易保护的一种手段。

1.3动物福利壁垒的特征

1.3.1

动物福利壁垒的合法性

合法性是动物福利壁垒的一大特征。指的是动物福利有法可依。在较早的时候，一些发达国家就已经有相关的法律。而后欧盟等国际组织也制定了一系列法律，如对动物的运输途中时间的规定等。

除了立法比较早的那些发达国家以及国际组织，现在也有越来越多的国家拥有了自己的法是关于动物福利的。WTO也允许成员国采用一系列保障措施。这些保障动物福利的法规成为发达国家对外设置贸易壁垒的法律依据，是发达国家对外设置贸易障碍的强有力的武器。这也使动物福利壁垒有了合理的外衣。

1.3.2

动物福利壁垒的隐蔽性和歧视性

每个国家都有自己的文化、历史以及经济发展水平等。所以在很多事情的态度和行动上也大不相同。因为动物福利水平和成本是呈正相关的，动物福利水平如果需要提高，势必要投入大量的资金，这也就会导致成本的增加。发达国际本来就拥有较雄厚的经济实力，所以在资金的投入上也较多。但发展中国家无法很好地承受较重的经济压力，所以往往无法严格执行动物福利标准。所以虽然说标准看似是公平的，实质上还是存在歧视性的。

而一些国家打着保护和关爱动物的口号，其实只是为了限制甚至拒绝外国货物进口，以保护本国贸易的发展，所以这也是隐蔽性的一大体现。

1.3.3

动物福利壁垒的严重性

动物福利壁垒的严重性不言而喻。对许多的领域都产生了强有力的冲击。造成的损失也是十分巨大的。很多企业迫于压力纷纷停产，造成了十分重大的经济损失。很多人也因此实业，所以说动物福利壁垒带来的影响是十分严重的。

我国虽然是比较大的发展中国家。但是在经济发展水平、立法等方面与发达国家还是存在较大的差距的。所以我国其实是受害者之一，因此不得不及时采取措施。如果不及时重视起来，其他和动物关系十分密切的动物源产业，例如中医药、化妆品等都会受到影响。

1.3.4

动物福利壁垒的争议性

动物福利壁垒介于合理与不合理之间，它说是为了人类的进步，实质上只是为了不同国家不同的利益罢了，所以就变得更加复杂。

如果是不同国家和地区，那么他们认定的标准也是不一样的，因此会产生很大的争议。

与此同时，这种争议又是十分难以调和的，争端不断，有时会发生恶化。动物福利壁垒会带来许多不可避免的争议和摩擦，包括文化、贸易和政治。这些争议和摩擦带来的影响也是不可估量的。

1.4

动物福利壁垒产生的原因

1.4.1

文明进步

文明的进步能带动人们意识的进步。所以说文明的进步是动物福利壁垒产生的一大原因。

伴随着文明的进步，人们的动物福利意识也在慢慢地增强。以前人们总是觉得自己就是这个世界的主宰，而动物是在较低的位置任人宰割的。但是随着社会文明的进步，人们开始去深入思考，开始去反省。人们发现其实动物和人类有很多相似的地方，动物值得被尊重和爱护。所以人们开始制定法律去保护动物，动物福利壁垒也逐渐形成了。

1.4.2

立法差距

不同国家有不同的立法，彼此间的立法往往存在着差距，这是动物福利壁垒产生的最直接的原因。

因为立法的差距，发展中国家一直无法克服动物福利壁垒这个困难。一些西方发达国家立法早，而且制定的标准高，而一些发展中国家立法起步迟而且过程曲折，而且无法达到像发达国家那样的标准，所以差距由此产生。

在经济发展水平方面，发展中国家是不及发达国家的，所以在资金等的投入上也是比不上发达国家的，因此动物福利水平往往较低。其次大家都是为了各自的利益，所以无法在短时间内形成全球化的一个标准。

1.4.3

政府目标

政府的目标也是其中原因之一，是动物福利壁垒形成的主观原因。

政府作为决策的制定者，在很大程度上影响着其他决策的执行者。政府很多时候为了追求利益，往往会忽视动物福利这一问题。有时候出口处于劣势，政府为了出口，就会不得不实施进口国的标准，从而提高动物福利水平来促进出口。所以这也成为动物福利壁垒产生的一大原因。

1.4.4

WTO规则

WTO协议中有一些有关动物福利保护的规则，这让动物福利更具操作性。WTO本身就有许多有关于动物福利的一些规定来提高动物福利水平。例如GATS中就有许多条款有相关规定。此外，有时候一些发达国家是凌驾于WTO之上的，他们会用自己较高的国际地位向WTO施压，强迫WTO加大对动物福利的关注，他们试图使自己的立法受到关注和肯定。

1.4.5

安全意识加强

随着社会的进步，文明的发展，人们的安全意识也在不断地加强。如果说以前的人们只关心能不能吃饱，那么现在的人们最关心的是这种食品是否安全。食品安全已经得到十分大的关注。对于食品的质量安全人们给予了高度重视。

如果食品在加工过程中没有按照相关的标准制作，那么可想而知是会存在质量问题的，这样就会或多或少影响人们的身体安全。因此为了保障人们的身体安全，发达国家就会制定严格的标准，来要求进口产品的质量安全。这样一来，动物福利壁垒也就逐渐产生了。

我国动物源产品动物福利现状

2.1

我国动物及其产品生产和出口现状

2.1.1

我国动物及其产品生产现状

我国是肉类生产大国和消费大国，当然也是水产品的生产、消费大国。每年都会有许多肉类出口。如今我国的饲养业也一如既往地处于一个高速发展的时期。早在10多年前，我国猪肉的产量就已经占世界总产量的一半。一直到现在，我国的肉类总产量以及水产品总量在世界还是遥遥领先，我国已经成为世界上举足轻重的肉类、水产品生产大国。

但是，虽然我国肉类的产量成绩十分傲人，生产现状看似可观，但是作为原材料的各类动物的状况却十分令人着急。饲养者只为了自身的利益，完全不顾及动物，肆意大量虐待和杀戮动物。这也使得饲养者和动物间的关系急剧恶化。受多种因素的限制，我国在相关法律法规和行业标准上都无法跟上发达国家的步伐。例如我国目前还无法实现真正的无痛屠宰。

2.1.2

我国动物及其产品出口现状

自2001年加入WTO以来，我国经济就以迅猛的速度在发展。早在2005年，我国就已经超过法国，一跃成为世界第五大经济体，此外我国进出口贸易也已经位居世界第三位。到2010年，我国成为了第三大经济体和第二大贸易国。时至今日，我国对外贸易对世界贸易具有相当大的促进作用。

然而不同于生产现状，我国动物产品出口现状主要是出口呈下降趋势，而进口呈增长趋势，于是贸易逆差也不断增长。以猪肉为例，2016年出口11.6万吨，出口额

6.7亿美元；进口56.8万吨，进口额13.8亿美元，逆差达7.1亿美元。我国动物产品出口远远小于进口，贸易逆差十分之大。

目前，由于技术壁垒的使用受到了更进一步的规范，动物福利壁垒受到了发达国家的青睐，频繁地出现在禽畜产品的国际贸易中。动物福利壁垒作为非质量性标准进入了贸易壁垒。动物福利壁垒作为一种新型的贸易壁垒，在刚出现的时候还未引起禽畜行业和水产养殖业的足够重视。因为缺乏适当的动物福利标准和立法，已经使我国的相关动物产品出口困难，因此动物福利壁垒将是我国禽畜产品出口的最大障碍。

此外，除了动物福利壁垒的因素，还有是因为我国自身出口动力不足，所以才导致出口贸易逆差严重。从种种数据来看，一些禽畜产品国内市场目前还供不应求，因此暂时根本不需要考虑出口。这也是一个很现实的因素。

2.2

我国主要动物源产品的动物福利水平

2.2.1

禽产品动物福利现状

经济全球化对我国的好处之一就是促进了我国的进出口贸易的发展。我国的畜牧业一直在全球处于相对比较领先的地位。甚至一度还处于领头羊的地位。虽然曾经因为经济危机的原因，我国畜牧业发展稍显无力，但是后来几年在政府的政策支持下又获得了复苏。

然而畜牧业产品出口依然存在许多问题。如今世界经济是全球化发展的经济，我们既然是全球化大军中的一员，就不得不遵循其中的规则。我国畜牧产品在出口时就不得不考虑很多之前可能无需考虑的问题。例如产品质量必须达到国际标准。又例如出口会受到货币贬值的影响等。因为我国加入了WTO,，所以我们也必须遵守国际组织的规则。

2016年1-5月我国畜产品出口情况如下：畜产品：1-5月，进口94.4亿美元，同比增11.6%；出口21.5亿美元，同比减9.0%；贸易逆差72.9亿美元，同比增19.7%。其中，猪肉进口56.8万吨，同比增1.2倍；猪杂碎进口54.7万吨，同比增66.6%；牛肉进口23.8万吨，同比增66.3%；羊肉进口11.8万吨，同比增2.3%；奶粉进口45.0万吨，同比增19.0%。

此外，虽然在一定程度上规模化、集约化养殖是可以促进我国畜牧业发展的，但是也带来了有关动物福利的话题。集约化和规模化养殖方式目的是追求对畜禽进行高度集中与密集饲养方式以提高生产效益，但也带来了严重的动物福利问题。例如中国蛋鸡饲养方式以笼养为主，蛋鸡笼养虽然可以有效地避免疾病传播，减少发病率，但同样会引发蛋鸡福利问题，如限制行为表达和导致骨质疏松等等；针对畜牧生产中的动物福利问题，国内也有相关研究与实践，通过改进传统的养殖模式将动物福利引入具体的养殖实践中。目前，中国的养猪企业也逐渐开始关注动物福利，慢慢接受动物福利理念，改变养殖方式。

2.2.2

水产品动物福利现状

我国水域面积较大，因此适合发展水产养殖业。所以我国是世界上较大的水产养殖国家。但是我们只注重发展这个产业并从中获得利益，却不懂得保护水生动物。所以我国的水生动物福利观念十分落后，与我国的经济发展水平不在同一个层级上。

水生动物福利是主要针对水产品的福利。主要是让水生动物有更好的生存和生活环境。使他们在安乐的状态下生存，提高水生动物的健康质量能为人类提供健康的水产品，从而提高人们的身体健康水平。

目前，我国有关水生动物福利的法律还十分欠缺。只有一小部分法律有这方面内容的涉及。我国水产品动物福利现状不容乐观。因此在关于水生动物动物福利立法上我国依然是任重而道远。

在水产品进出口方面，据中国水产频道报道，2018年1月，水产品进口数量为35.05万吨，同比增加42.58%，出口数量43.63万吨，同比减少0.34%，从数量上看，水产品净出口8.58万吨；水产品进口金额为10.45亿美元，同比增长48.71%，出口金额为21.97亿美元，比同期增加8.86%，从金额上看，水产品净出口11.52亿美元。以此看来贸易顺差有所收窄。

2.2.3

中医药动物福利现状

中医药是我国特有的药材，作为中医药生产大国，我国的中医药在世界上也享有较高的名誉。

然而随着中医药行业的发展，对一些野生动物药材的需求量也大量增加。于是出现了许多随意捕杀的情况，造成对野生动物资源的严重破坏。如今有很多人被利益蒙蔽了双眼，肆意破坏生态环境，导致资源严重枯竭。如果不及时采取措施，后果不堪想象，不仅会对野生动物药材资源造成严重破坏，更会严重影响我国中医药事业的发展。所以，相关部门应该引起足够的重视，采取相关措施保护作为中医药原材料的动物资源。

2.2.4

化妆品动物福利现状

化妆品动物福利也在上世纪90年代开始引起人们的重视。目前已经有许多国家通过了禁止化妆品开发中的动物实验的法律。例如一些西方发达国家为了提升动物福利水平，就明确立法禁止在化妆品开发中用动物进行实验。

我国在世界上是属于一个较重要的化妆品出口国，但是很多化妆品的原料又都是从动物身上提取的。所以又涉及到了动物福利的问题。首先，美国和欧盟等国家及国际组织是我国化妆品出口的主要市场，但是我国化妆品产品动物福利无法达到他们的标准，于是出口受到限制。其次，在短时间内我国无法寻找相应的替代品，所以不可避免地受到舆论关于动物福利的压力。

2.3

我国动物源产品动物福利水平提高的制约因素

2.3.1

成本因素

制约我国动物源产品动物福利水平提高的因素有许多，其中成本因素是最直接的一大因素。动物福利水平与成本在一定条件下是正相关的关系。为了提高动物福利水平，有时候需要配置更好的设备或者置办更好的设施，这就往往需要投入大量的资金，这就会导致成本的增加。所以说高动物福利水平往往对应的是高成本。

西方国家就是因为经济发展水平比较高，所以不惧怕高成本，而我国目前仍是发展中国家，经济发展水平相较于西方发达国家还是处于较低的水平，在一定程度上无法像西方国家那样投入大量的资金，无法很好地承受提高动物源产品动物福利水平提高带来的成本的增加。因此，成本因素成为制约我国动物源产品动物福利水平提高的一大重大因素。

2.3.2

技术因素

与发达国家相比，我国目前的技术水平还较为落后。发达国家因为拥有比较先进的技术水平，就可以制定比较高的标准并努力达到。而我国受技术水平的限制，无法达到如此高的标准。俗话说：技术是第一生产力。没有较高的技术水平，我国的动物福利水平自然也就无法很好地提高。

2.3.3意识因素

动物福利这一概念在很长时间内都不被人熟知，更别说是认可了。早前很多学者都认为这是有悖于我国的国情的，所以是彻底反对这种观念的。而民众往往会比较相信学者的说法，所以民众也是不接受这种观念的。而人们的意识往往决定他们的行动，所以说意识也是制约动物福利水平提高的一大因素。

2.3.4

信息因素

当今社会是信息技术高速发展的社会，媒体的影响力也空前强大。传媒的发展也就导致新闻的迅速传播。我国遭遇了较多的动物福利壁垒，因此也有较多的新闻报道。但是因为每个国家的立法标准不一致，而报道却没法十分专业和全面，这就使得出口的企业以及市场不能对每个出口国都有比较全面的分析研究，信息也严重不对称。

2.3.5

法律因素

和西方发达国家相比较而言，我国动物福利立法起步比较迟、进展缓慢且过程坎坷。我国只有专门保护野生动物和实验动物的相关法律，对其他动物的保护的法律还十分欠缺。而现有的法律可以操作的条款也比较少，可操作性不强。所以如果不及时完善相关法律法规，也是会在很大程度上制约我国动物福利水平的提高的。

动物福利壁垒对我国动物源产品出口的影响

3.1

中外动物福利水平对比及原因分析

3.1.1

中外动物福利水平对比

日本

现代日本伴随着经济水平的日益提高以及文明程度的不断提高，尊重动物福利和权利的思想渗透到了每个日本国民的内心。思想在不断渗透，动物福利观念也渐渐进入民众的心里。越来越多的人支持动物保护立法，参与一些保护动物的活动。他们的动物福利理念成熟度非常高。

不仅日本的公民十分注重动物福利，日本的各种机构和组织也十分重视动物福利。不仅是中央还是地方都把动物福利放在比较重要的位置。而且形成了一套比较完善的动物福利体系。由此可见日本的动物福利水平较高。

英国

英国是最早提出动物福利这一观念的国家，也是较早制定动物福利法的国家。英国有专门的法律来保护动物福利。且在长期发展过程中已经越来越完善。所以英国的动物福利水平相对来说比较高。最重要的是英国在动物福利立法上还带动了其他国家，对世界的动物福利水平的提高都有重大的意义。

美国

美国虽然在立法时间上没有像英国那么早，但是美国的发展却比英国好。美国动物福利法涵盖范围比较广，且执法力度大。美国的动物福利水平甚至已经赶超英国。在美国，各行政机关分工明确，都各司其职来促进动物福利水平的提高。且互相严格监督，所以说美国对动物福利采取的措施也十分值得借鉴。

中国

3.1.2

一些国家福利水平较高的原因

相较于日本、英国和美国等国，我国的动物福利水平较低，而它们的动物福利水平较高。这是有多种原因决定的。

首先主要是因为我国动物福利开始得比较迟，而进程相对比较缓慢；而一些西方国家在很早之前就已经十分重视动物保护并开始着手于动物福利法的颁布及实施。其次，那些国家的公民的动物福利意识较强，而我国公民的动物福利意识相对来说比较薄弱，有一部分公民甚至目前都还没有动物保护的意识，这也是那些国家动物福利水平较高的原因之一。此外，十分重要的一个原因是他们经济水平明显高于我国，能承受住提高动物福利水平带来的成本压力。当然还有一点不容忽视的是他们的技术水平也远远高于我国。

3.2

动物福利对需求和供给的影响

3.2.1

影响需求

动物福利对需求有影响。在影响需求方面主要是通过宣传的方式，通过对动物福利进行宣传，从而影响消费者的偏好及其选择。例如曾有新闻报道有些餐馆从活鹅的肚子里硬生生地抠出鹅肠；还有把活鱼除去鱼鳞就直接下锅。这些行为是十分残忍的，然而目的只是为了能够让顾客吃得鲜一点。这样虐待动物的方式被媒体报道后，就必然会对消费者的心理产生影响，消费心理很大程度上会影响消费需求，所以消费者就会减少会此种产品的需求。

影响需求的有效手段是贴标签。贴标签是一种比较理想的方法。主要是通过在产品上标明一些相关的具体信息，通过哪些信息让消费者来决定是否需要实行动物福利，以及到底应该在多大程度上实行动物福利。此外，动物福利标签也会形成产品的成本，影响动物产品的成本及供给。不过贴标签给产品带来的额外成本往往比较小，对产品的供给影响也比较小。因此动物福利标签主要影响的还是动物产品需求。

3.2.2影响供给

而动物福利在影响供给方面又有所不同。不同于影响需求是通过宣传，影响供给主要是通过动物福利立法。主要是强制实施动物产品生产、运输和处理的细则从而影响产品的生产成本。而生产成本的提升最终会影响供给。

西方国家不但为动物设立了各种动物福利法案，还规定了相对应的实施细则。动物福利只有在影响供给时才会形成贸易壁垒。此时不符合相关法律、法规及其实施细则的生产者就会被排斥在市场之外。

3.3

动物福利壁垒影响我国动物源产品出口的立法依据

3.3.1

国际组织有关动物福利的条款

动物福利条款是自由贸易协定中的重要内容之一，随着自由贸易协定的推进，中国FTA动物福利条款亟需完善并与国际规则接轨。

许多国际组织的相关条款都明确规定要保护动物福利。例如在欧盟与智利FTA附件中，对晕及屠杀有关动物的标准有所规定。同时在脚注中还指出，联合管理委员会应在本协定生效起1年内制定其他动物福利标准的工作计划。据此可知，协定中有关动物福利的标准并非永久不变，缔约方可以根据实际情况不断提高动物福利的标准。除此之外，还有其他许多国际组织的相关条款都有保护动物福利的规定。

3.3.2

进口国国内有关动物福利的条款

除了国际组织有关动物福利的条款，发达进口国国家也都有自己的动物福利法，例如美国、英国等。这些国家都在各自的动物福利法中有相关的规定。

他们通过这些法律对我国动物源产品的出口都有很明确的限制，以此来限制我国的出口贸易，保护他们本国的贸易发展。而当他们在出口的时候，又可以适当放松限制，即使违反了规定，也不用承受较大的处罚。所以说进口国国内有关动物福利的条款也是我国动物产品出口的一大绊脚石。

3.4动物福利壁垒对我国动物源产品出口的积极与消极影响

3.4.1

动物福利壁垒对我国动物源产品出口的积极影响

虽然我国在出口贸易中因为动物福利壁垒而屡屡碰壁，但是不得不承认动物福利壁垒在一定程度上对我国动物源产品出口还是有积极影响的。例如中国的产品在出口时遭遇了困境，这就为我们敲响了警钟：出口产品必须要达到国际标准，才能够顺利出口。所以这就会引起相关重视。出口企业会在质量上更加严格把关，促使他们认识到动物福利的重要性。这样也就有利于促进相关产业的发展，也有利于提升我国的国际地位。

3.4.2

动物福利壁垒对我国动物源产品出口的消极影响

1.减少出口数量，增加出口成本

动物福利壁垒最直接的消极影响是减少了我国的出口数量，增加了我国的出口成本。

就畜产品而言，2016年1-5月我国畜产品出口情况如下：畜产品在1-5月进口94.4亿美元，同比增11.6%；出口21.5亿美元，同比减9.0%；贸易逆差72.9亿美元，同比增19.7%。

为了提高动物福利水平，出口企业就不得不在设备设施等地方加大资金的投入，也不得不在生产过程中改进技术和提高标准。这样一来出口成本便大大增加。成本一旦增加企业就不得不提高出口产品的出口价格以获得经济利润。然而低廉的价格一直是我国最大的竞争优势。如果出口价格提高，那么我国产品的竞争力就大大下降，所以出口数量也就大大减少。总而言之，动物福利壁垒使得出口数量的减少和生产成本的增加，严重影响了我国出口贸易的正常开展。

2.提高市场准入门槛，增加产品出口难度

动物福利壁垒还提高了市场的准入门槛，增加了产品出口的难度。

早在十年前就有不少国家对我国宣布封关，宣布不进口我国的相关产品。还有一些国家甚至提高了对我国出口的动物产品的检验标准。其实这些行为都是为了拒绝进口我国相关产品，这对我国相关产业造成了十分严重的影响。使我国大量产品滞销，大量企业破产以及大量人员失业。严重影响了我国正常贸易的开展，对我国造成巨大的经济损失。

3.国际形象受损，抑制出口贸易

此外，动物福利壁垒还严重破坏了我国的国际形象，抑制了我国的出口贸易。

近年来只要我国的产品在出口时遭遇动物福利壁垒，就会有许多来自国外民众和组织的抵制，他们都纷纷抵制进口我国相关动物源产品。再加上很多不负责的媒体夸大其词随意报道，导致我国形象一落千丈。

在动物福利标准方面，WTO虽然有对发展中国家的斜视保护，然而在实际中并没有得到落实。因此在一定程度上损害了发展中国家的权益。我国一旦遭遇该壁垒，必定会影响出口贸易。如图1所示，假设没设置动物福利壁之前，进口国A对出口国B的某动物源产品存在着对其的不变进口需求D，出口国的供给为S,均衡贸易条件下的产品价格和供给数量分别为p和q。进口国提高动物福利后,单位产品的生产成本增加市场价格上升到p’，供给曲线向左上方移动到S’，均衡条件下的供给量和需求量下降到q’。

图1

3.5

动物源生物农药研究篇3

关键词：电感耦合等离子体原子发射光谱微波消解动物源食品铅镉砷汞

中图分类号：TS272.7 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）10-0018-02动物源性食品主要包括各种家畜家禽的肉、内脏及其制品，其质量好坏关系到人们的身体健康，铅、砷、汞、镉等重金属元素是动物源性食品中主要的有毒元素，世界各国尤其是西方发达国家非常重视，包括我国在内都制定了相当严格的残留限量标准。

食品中的重金属检测方法较多，包括石墨炉原子吸收法[1-2]、比色法[3]、电感耦合等离子体原子发射光谱法[4]、荧光光谱法[5]，这些方法存在检测种类不全等问题，对动物源食品中的重金属同时检测的方法少有报道，因此，应用ICP-OES同时测定动物源食品中的铅、镉、砷、汞具有实际意义。由于ICP6300特有的CID检测器与水平置炬端视技术相结合，使仪器增加了取样信号量，分析能力得到提高。微波高压密闭消解样品，能安全快速处理样品，且样品中的成分不容易损失。本文采用微波消解-ICP-OES法同时测定各类动物源性食品中的铅、镉、砷、汞，该方法操作简单、快速、准确，能适用于动物源食品中重金属的检测。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

ICP6300电感耦合等离子体原子发射光谱仪（美国Thermo Scientific），CID检测器，石英同心雾化器； MARS-5 微波消解仪（配XP1500高压消解罐），美国CEM公司；超纯水（18.2MΩ.cm）；浓硝酸（G.R）；30%过氧化氢（G.R）；铅、砷、汞、镉标准溶液（1mg/ml），国家标准物质中心。

1.2 仪器条件

RF发射功率1150w，辅助气流量0.5L/min，雾化气压力0.18MPa，冷却气流速16L/min，样品清洗时间20s，泵稳定时间5s，短波积分时间15s，长波积分时间5s，观测方式：水平观测，蠕动泵转速为75r/min，分析谱线：Pb220.353nm；As193.759nm；Hg184.950nm；Cd214.438nm。

1.3 微波消解程序

室温～140℃，升温时间10min，恒定140℃，保持5min；140℃～180℃，升温5min，恒定180℃，保持10min。

1.4 实验方法

称取0.5000～1.0000g粉碎均匀的样品于微波消解罐中，加入5ml浓硝酸和2mL过氧化氢，放置10min，将消解罐放入微波消解仪中，依照设定的消解程序处理样品，消化完全后，转移至25ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，同时做样品空白。

将标准和样品溶液及空白分别上ICP仪器测试，在最佳仪器条件下进行分析，仪器软件自动绘制工作曲线并计算结果。

2 结果与讨论

2.1 分析谱线的选择

查阅仪器中的谱线数据库，考虑各元素的检出限、基体和光谱干扰情况，选用Pb220.353nm、As193.759nm、Hg184.950nm、Cd214.438nm为各元素的分析谱线。As193.759nm无须氩气高吹，在动物源性食品基体检测中，干扰少，也有较好的检测限，更能适应经济快速检测需要。

2.2 仪器条件的优化

2.2.1 RF发射功率

增加RF发射功率，高频电流能量将加大，使中心管道温度上升，有利于提高硼谱线强度，但功率的增加，背景干扰也加大，而且功率过大影响矩管的使用寿命，综合考虑信背比及功率增大时对仪器寿命的影响，选择RF发射功率为1150W。

2.2.2 雾化气压力

增大雾化器压力对提高信背比、改善检测能力有利，但压力过高基体影响严重，试验选用雾化器压力为0.18MPa。

2.2.3 辅助气流量

在RF功率一定的情况下，随着辅助气流量的增加，信号强度也增加，但流量过大，易熄火，有可能损坏仪器，试验选用辅助气流量为0.5L/min。

2.2.4 冷却气流速

通过对冷却气流速分析，研究表明，冷却气流速低于14L/min时，等立体焰不稳定，且容易损坏炬管；若冷却气流速大于18L/min，等离子体火焰容易熄灭并浪费气体。最终选择冷却气流速为16L/min。

2.2.5 蠕动泵转速

研究了蠕动泵转速分别为25、50、75、100、125r/min时对分析灵敏度的影响。结果表明，当泵的转速为25r/min时分析灵敏度较低，进样速度太慢，125r/min时蠕动泵转速太快，雾化效率受到影响且样品也被浪费。因此选择蠕动泵转速为75r/min。

2.3 标准曲线的制作

采用称量法配制不同元素的系列标准溶液（介质为5%HNO3），通过仪器测试混合标准溶液，测定不同元素的线性方程，如表1所示，各元素在0～25mg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.99960～0.99999。

2.4 方法的检测限、精密度及回收实验

对样品空白进行11次平行测定，按照IUPAC方法计算各元素方法检出限，铅、镉、砷、汞的方法检出限分别为0.013、0.0012、0.015、0.020mg/L。采用加标回收实验考察方法的准确度及精密度，每个样品平行测定6次，回收率及RSD%见表2。

2.5 实际样品测定结果对比

按本文实验方法，用ICP-OES对动物源食品中的铅、镉、砷、汞进行检测，并进行了方法验证实验，结果见表3。结果显示，同一样品在不同实验室之间的检测结果无显著性差异，误差小于5%。因此该方法重复性好、分析结果令人满意。

3 结语

本文采用微波消解处理样品，通过优化仪器分析条件，对鱼肉、猪肾、猪肝、鸡肾及肠衣等中的重金属元素进行同时测定，检测结果满意。该方法快速、简便、准确，可以用于各类动物源性食品中铅、砷、汞、镉重金属含量的测定。

参考文献

[1]李秀丽，李达，李洁莎.微波消解-石墨炉原子吸收光谱法快速测定食品中铁、钠、铜、铅、砷和镉[J].分析试验室，2008（27）：448-450.

[2]杨凤华.微波消解-AAS法测定食品中铅、镉、铁、锰、铜和锌及其不确定度评估[J].光谱学与光谱分析，2007（27）：1440-1443.

[3]黄华军，余裕娟，奚星林等.萃取-分光光度法快速测定酱油中硼酸含量[J].食品科学，2005（26）：176-178.

[4]戴骐，鲍晓霞，裘慧等.微波消解-端视ICP-AES测定茶叶中微量重金属元素[J].分析试验室，2008（27）：24-27.

[5]马戈，谢文兵，冯锐.氢化物原子荧光光谱法测定虾中砷和汞[J].分析化学，2006（34）：254-256.

动物源性食品检测方法的研究进展篇4

1 色谱法

色谱法又称色谱分析,是一种分离和分析的方法,在分析化学、有机化学、生物化学等领域有非常广泛的应用。目前,色谱技术主要有气相色谱、凝胶色谱、液相色谱、离子色谱,并与其他仪器的联合使用使该技术有了更大的应用范围。而且该技术具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、定量结果准确和易于自动化操作等特点,使其在食品检测中占有重要地位[1]。

采用色谱法鉴定动物源性食品中应用最广泛的是高效液相色谱,主要通过分析脂肪酸的结构或者组胺酸二肽和蛋白质峰形对动物源性食品的种类进行鉴定。J. Schonherr[2]分别利用动物种间特异性的组氨酸二肽、鲸肌肽、鹅肌肽、肌肽等短肽类物质的分布情况建立用于定性鉴别肉类成分的高效液相色谱技术,若样品是纯猪肉、羊肉等肉类,该技术便可准确识别肉的种类。国内一些专家也做过相关研究,马瑜璐[3]采用气相色谱- 质谱- 指纹图谱技术检测猪肉新鲜度,与传统猪肉新鲜度的检测方法相比,该方法简洁、快速、准确、重复性好且能批量检测。

由于各种肉类食品中脂肪酸含量的变化较大,因此利用色谱法无法准确地定量分析各种肉类成分。当色谱和质谱或电泳法联用时,能准确鉴别出单独的肉类种类,但是用来检测多种混合肉类时,样品制备的复杂性和技术的壁垒导致无法清晰分辨出肉类成分。因此,使用色谱法快速鉴定动物源性食品存在一定的局限性,同时由于图谱的复杂化、昂贵的检测仪器和繁杂的样品制备使其作为常规检测方法受到限制。

2 近红外光谱分析

近红外光谱来源于分子振动对光的吸收,其基本原理以量子力学为基础。有机物及部分无机物分子中各种含氢基团在受到近红外线照射时,被激发产生共振,同时吸收一部分光的能量,测量其对光的吸收情况,可以得到极为复杂的红外图谱,用这种图谱表示被测物质的特征。不同物质在近红外区域有丰富的吸收光谱,每种成分均有特定的吸收特征。

近年来,许多人已经将近红外光谱技术应用在物质分析、食品检测及动物真假肉的鉴别等多个领域。赵红波等[4]采用近红外漫反射光谱法,通过多元散射校正、一阶导数加Norris导数平滑点( 5,3) 处理光谱,波段范围选取5 996. 42 ~ 5 805. 84 cm,9 058. 85 ~ 8 546. 36 cm,将TQAnalyst光谱分析软件中的马氏距离设为1,建立判别分析模型,结果表明,模型能够准确地鉴别出猪肉、牛肉。而有人利用近红外光谱技术与经典化学分析相结合的方法,采用逐步多元线性回归法区分牛肉和袋鼠肉[5]。分析样品时用分光光度法区分肉末或分割肉、牛肉、袋鼠肉,总体分类准确度为83% ~ 100% ,没有袋鼠肉被错误分类。J. Mc Elhinney等[6]也进行了相关试验,以牛肉样品,羊肉与5% 、10% 、20% 羊羔肉及牛肉混合物为样品,被切碎肉的反射率在可见光、近红外和中红外光谱扫描地区。用偏最小二乘( PLS) 回归模型预测羊肉含量百分比,分别使用单独的光谱区域和所有3 个组合。结果表明,羊肉含量在0% ~ 20% 时标准预测偏差为0. 9% ,而羊肉含量为0% ~ 100% 时标准预测偏差变为4. 1% ,证明近红外光谱技术在肉品混合物筛选中的适用性。而G. Javier等[7]使用可见光和近红外光谱技术定量分析和检测了蟹肉的掺假情况。分别通过回归分析法及PLS与主成分分析法结合使用的方法进行试验。PLS和主成分分析法的最佳模式,使用一阶导数光谱数据收集到的相关图,与标准预测误差( SEP) 为0. 252,0. 244。结果表明,可见/近红外技术可以成功用于检测蟹肉样品中掺杂掺假,鱼糜仿蟹肉。

近年来,近红外光谱快速分析技术被誉为21 世纪的检测技术,已经悄然走入各领域,不断改变实验室的技术条件,通过这种技术,能够实现快速、在线、无损地对肉类进行品质检测,更好地针对实际数据确定销售价格,近红外光谱分析的应用将给肉类加工业和其他工业带来巨大的经济效益和社会效益。

3 DNA杂交技术

DNA杂交技术是PCR技术出现之前基于DNA序列特征识别动物源性鉴别技术的主要技术,其原理是应用核酸分子的变性和复性的性质,使来源不同的DNA( 或RNA) 片段按照碱基互补的关系形成杂交双链分子。杂交双链可以在DNA与DNA链之间形成,也可以在RNA与DNA链之间形成。利用标记有荧光素、生物素或放射性同位素等信号分子的特定DNA片段( 探针) 识别其互补序列DNA分子的技术,根据信号有无或强弱判断样品成分类别或含量多少。

K. F. Ebbehoj等[8]应用32P标记探针建立了检测生、熟牛肉中猪肉成分的DNA杂交技术,从而实现对掺假肉的检测。何玮玲等人以动物种属间遗传信息DNA的差异作为物种鉴别的优势,以核酸检测为基础对食品中肉类种属进行定性检测。石丰运等[9]建立了利用DNA分子杂交原理能同时检测牛、山羊、猪、鸡4 种动物成分的基因芯片法,实现一次性完成对多种动物源性成分的种类检测。

4 酶联免疫吸附分析( ELISA) 法

ELISA又称酶标法,ELISA法将酶的高效催化作用和抗原抗体免疫反应的特异性有机结合,抗原和抗体均可检测。ELISA是先用固相载体吸附抗体( 抗原) ,添加待测抗原( 抗体) ,然后与相应的酶标记抗体( 抗原) 产生抗原抗体反应,反应复合物,最后与该酶底物反应产生有色产物。由于待测抗原( 抗体) 的定量与有色产物量成正比,通过吸光度值计算抗原( 抗体) 的量,ELISA法既可以进行定性测定,又可以进行定量测定,且特异性高、敏感性强。

国内外学者通过ELISA法对肉类动物源性鉴别技术进行广泛研究。选取种属特异性强、方便获取的标志物,血清Ig G高度的种属特异性和免疫反应特性适用于鉴别肉类,且肉汁中含有Ig G,肌肉浸液可作为检测样本。骆训国等[10]通过双抗夹心ELISA方法选择猪Ig G Fc单克隆抗体,检验生肉样品灵敏度高、特异性好,只与猪肉发生反应,与牛肉、鸡肉、羊肉和兔肉等均未发生反应,能检测到1% 的掺杂比例。陆朱发等人以辣根过氧化物酶标记兔抗不同动物肌肉和血清球蛋白抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉,检出率均为95% 以上。

利用ELISA法进行检测,重复性好、快捷、方便、设备廉价、样品量少,适用于基层单位对肉种类的鉴别。但是ELISA作为一种基于可溶性抗原与抗体反应的方法,不能检测经过热处理变性凝聚的蛋白样品,而且还有一些成分,如明胶可能与抗体交叉反应使结果产生假阳性。

5 PCR技术

PCR技术是在模板DNA、引物和4 种脱氧核苷酸存在的条件下,利用DNA聚合酶催化合成反应,体外扩增特异DNA片段的技术。采用PCR方法鉴别食品、肉制品及饲料成分的动物源性,主要是根据动物如牛、羊、猪、马等的线粒体DNA片段的特异性设计合成引物,PCR扩增得到目的DNA片段,利用琼脂糖凝胶电泳进行分离,并用相关动物的DNA进行阳性对照,由于每种动物的DNA扩增片段的大小不同,从而根据DNA片段的大小得知该制品中动物源性成分。

R. Meyer等[11]利用PCR技术对加工猪肉进行鉴定,利用猪的18S核糖体基因扩增出长度为137 bp的片段,用猪生长激素基因扩增出长度为108 bp的片段,用以检测混有猪肉的牛肉样品,结果发现,可以从含2% 猪肉的牛肉样品中检测出猪肉,特异性和灵敏性均较高。F. Bellagamba等[12]利用PCR技术根据线粒体12S rRNA基因序列设计了针对反刍动物的扩增引物,结果显示,对牛、山羊和绵羊成分的检测灵敏度分别为0. 125% 、0. 125% 、0. 500% 。王建昌等人通过设计合成检测动物源性成分的通用引物,并对PCR产物测序后在NCBI数据库中进行比对,对牛、羊、鸭源性成分进行实时荧光PCR检测,结果表明:在7 份送检样品中,检测到4 份鸭源性成分,2 份牛源性成分,1 份羊源性成分。李金桩等人运用PCR扩增技术和琼脂糖凝胶电泳技术对猪肉、羊肉和牛肉进行鉴定,通过对细胞线粒体中DNA的提取、引物合成、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳,最后根据DNA片段的大小来判断肉的种类。猪肉、羊肉和牛肉扩增产物DNA片段长度分别为443 bp、314 bp、271 bp,大小相差明显,分离明确,容易识别。并且3 种动物DNA没有交叉反应,特异性较强。张国利等[13]根据牛1. 709卫星DNA序列自行设计l对引物,建立PCR鉴定生、熟牛肉的方法。应用近红外光谱分析法特异地扩增出预期的牛DNA片段( 218 bp) ,检测的敏感度: 生牛肉为33. 6 fg DNA,熟牛肉和高压牛肉为0. 32 pg DNA。运用该引物均可扩增出水牛、牦牛、奶牛、黄牛肉单一的、相同大小的DNA条带,而对马、山羊、绵羊、骆驼、鹿、猪等15 种动物肉的DNA扩增则呈阴性。扩增片段经Hae Ⅲ酶切分析确认,所得129 bp、79 bp、10 bp片段与微机分析结果一致。利用近红外光谱分析法对103 份生、熟牛肉及其制品进行鉴定,检出率为100% ,均可在6 h内完成对各种样品的检测。侯东军建立了一种鉴定牛、羊肉中掺杂猪肉的PCR检测方法,确定了1 对可在牛、羊肉中特异并灵敏地检测出所掺杂猪肉成分的引物对,以猪细胞色素b基因组为模板,特异性扩增出长度为130 bp的目的片段,而无其他扩增片段影响。在牛、羊肉中分别掺杂2% 、4% 、6% 的猪肉,均可灵敏地检测出猪肉成分,无显著性差异; 分别经120 ℃、10 min,120 ℃、30 min处理猪肉,也可灵敏地扩增出特定目的条带,且差异不显著。

PCR方法以其快速、灵敏、操作简单、节省费用等特点逐渐成为肉类检测的主要方法,PCR方法解决了传统方法由于蛋白质变性而失能的困难,使熟肉、熟肉制品的种类鉴定成为可能,开辟了鉴定肉种类的新方法。

6 多重PCR

多重PCR技术是在常规PCR基础上改进并发展起来的一种新型PCR扩增技术,在PCR反应体系中加入多对特异性引物,针对多个DNA模板或同一模板的不同区域扩增多个目的片段的PCR技术。1988 年,Chamberlain首次应用于杜氏营养不良症( Duchenne musculardystrophy) 基因外显子缺失的检测,已经在遗传病诊断、转基因鉴定、病原体检测等各领域得到应用。

由于多重PCR技术具有高效性、系统性和经济简便性的特点,主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定,以及某些遗传病及癌基因的分型鉴定。近年来,随着我国肉类食品的消费量增加,随之而来的因肉类食品所引起的食物中毒病例也不断增加,这严重地威胁了人类的身体健康。但是我国肉类食品中病原菌的检测普遍还是采用传统生物学方法,这些常规检验方法步骤繁琐耗费时间、金钱,而且检测结果不准确。因此,建立一些快速、准确检验食品的方法势在必行。有人建立了检测19 种金黄色葡萄球菌毒素基因的多重PCR方法,快速而且特异性高,灵敏度为200 fg / μL。李荣岭等[14]为了增强微卫星标记检测遗传多样性的图谱清晰度,同时增强不同引物之间扩增条件的一致性和提高工作效率,建立并优化了荧光标记多重PCR技术。同时用ABI 3100 序列分析仪分析微卫星扩增产物,并以中国黄牛的遗传多样性检测为例,比较了荧光多重PCR技术的优缺点和限制因素。曾少灵等[15]通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。与国家标准方法相比,该方法不需要电泳、酶切和测序即可在1 个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊源性成分,检测效率提高近3 倍; 灵敏度更高,与国家标准方法相比灵敏10 倍; 适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶制品、生皮和动物油脂等动物产品的牛、羊源性成分检测。

随着科学技术的发展,已经能很成熟地将多重PCR技术运用在动物源性食品快速检测中。但是由于该技术存在一些问题,在使用时也要特别注意。如污染问题,要注意外源性DNA污染,一旦发生污染就可能出现假阳性结果; 引物的设计及靶序列的选择不当等都可能降低其灵敏度和特异性。此外,对食品样品进行检测时,增菌培养基选择不当易使有的细菌生长缓慢或被抑制,导致假阴性结果。将该技术与其他技术结合,实现技术上的创新,荧光PCR、反转录PCR,提高检测敏感性和特异性,缩短检测时间。

7 末端限制性片段长度多样性( T - RFLP) 法

T - RFLP法是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法。RFLP分析,是一种利用限制性酶切片段长度差异检测生物个体间差异的分子标记技术。通过PCR扩增16S rRNA基因,再将扩增产物经限制性内切酶消化,消化后的样品进行琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,存在核酸序列差异的不同种群微生物的PCR产物,其酶切片段的数量和大小各不相同,于是电泳图谱呈现多态性。T - RFLP与RFLP相似,只是在通用引物的末端标记荧光,这样扩增后的产物末端也标记有荧光。再选择可以切4个碱基的限制性核酸内切酶对扩增产物进行酶切,酶切后的产物加入DNA基因分析仪中,其中仅有那些带有荧光标记末端的酶切片段( T - RFs) 才可以通过基因分析仪被检测识别。

田金辉等人采用T - RFLP的方法,成功检测出生、鲜肉中牛、羊肉成分。上游引物5'端用6 - FAM进行荧光标记,下游引物5'端用ROX进行荧光标记,PCR结束后选择限制性内切酶HinfⅠ、BlnⅠ进行酶切消化,在测序仪上通过毛细管电泳即可检测荧光标记的2 个末端的限制性片段。利用不同物种产生的不同峰谱达到对物种快速定性的目的。T - RFLP法能够对生、鲜肉中牛、羊肉进行定性鉴定分析,不同物种产生不同峰谱,限制性内切酶HinfⅠ酶切牛肉样品所产生的限制性末端片段长度为46 bp、373 bp,限制性内切酶BlnⅠ酶切羊肉样品所产生的限制性末端片段长度为203 bp、515 bp。汪琦等[16]也进行了相关试验,建立一种精确可靠的鉴定常见的10 种动物( 猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿) 的方法。将线粒体12S rRNA基因通过引物的5' 端用FAM荧光标记,从基因组DNA中扩增长度为450 bp的目的片段。引物对1( 下游引物用FAM标记,上游引物不标记) 扩增的PCR产物用限制性内切酶AluⅠ酶切,引物对2( 上游引物用FAM标记,下游引物不标记) 扩增的PCR产物用限制性内切酶Tru9Ⅰ酶切。得到的酶切产物分别在遗传分析仪型号为( ABI3100) 上进行毛细管电泳,利用Peak Scanner 1.0 软件分析片段大小。一般情况下,实际得到的末端片段长度与理论值非常接近,只存在2 ~ 5 bp的差异。T - RFLP法操作简单、结果精确,适用于鉴定动物种类。

T - RFLP法用于动物源食品的检测,具有分辨率高、结果准确可靠、减少人为判断误差等优点,并且由于只分析酶切产生的末端片段长度,简化了结果分析,因此成为鉴定动物源性食品的新方法。然而T -RFLP法也有局限性,对实验室的仪器要求比较高,需要用到毛细管电泳,这也在一定程度上限制该方法的推广。

8 小结

近年来,动物源性食品的检测方法越来越多,极大地丰富了这个研究领域。生物检测技术基于自身独特的优势,在食品检验领域已经取得了可观的成绩,发展前景极为广阔。而每种检验方法都有其优缺点,对已建立方法的选择需要考虑多种因素。如色谱法用于动物源性食品的检验,由于各种肉类食品中脂肪酸含量的变化较大,因此无法准确地定量分析; 而色谱和质谱或电泳法联用就能鉴别出单独的肉类种类。通过红外光谱快速分析技术,能够实现快速、在线、无损地对肉类进行品质检测,但是它对样品采集和处理的要求比较高,而且需要精密的仪器和较大的投入。T - RFLP法和ELISA法均能够快捷、方便地鉴别出动物源性食品,但是由于酶和抗体容易受到外界条件的影响,使之存在一定的局限性。DNA杂交或PCR法用于动物源性食品检测的最大挑战在于克服潜在的与其他种类或添加剂的交叉反应,要求必须对不同样品中提取蛋白质和DNA的条件进行优化和标准化,严格控制p H值、温度、盐的含量及DNA的提取方法等,而且还可能造成一些污染问题,出现假阳性结果,引物的设计及靶序列的选择不当等也可能降低其灵敏度和特异性。

随着科学的不断发展和各种新技术在动物源性成分检测的应用,未来动物源性食品检测技术的研究将致力于提高灵敏度和特异性,开发出相应的试剂盒,这样对于各种动物源性肉类及肉制品的检测会更系统、快捷,以期能作为一种推荐性方法被质检部门推广应用。作为实验室的常规检测手段,试剂盒的开发也将带来巨大的经济价值,同时为人类食品安全的检测提供更有力的保障。

摘要：为了引起人们对动物源性食品掺假问题的广泛关注,试验对国内外常用的几种检测方法的研究进展进行综述。结果表明:快速、经济、准确的检测方法是预防食品质量安全的有效途径,对食品工业的发展具有重要意义。

野生动物疫源疫病工作总结篇5

野生动物疫源疫病工作总结

2008年，海南大田国家级自然保护区管理局在省委、省政府，及省林业局的正确领导下，认真贯彻落实党中央、国务院关于加强动物防疫工作的精神和指示，把野生动物疫源疫病监测与禽流感防控工作作为全年工作的重中之重，并结合保护区工作实际，科学部署，采取了一系列行之有效的措施，确保了保护区内无疫情发生。回顾全年工作，总结如下：

一、班子重视，建立健全防控体系。

作为我省和东方市防控高致病性禽流感的重点地区之一，保护区领导班子高度重视，通过建立机构，完善制度，加强培训等，确保野生动物疫源疫病防治工作有效开展。

1、建立组织。成立了以保护区管理局局长许世英为组长，副局长张海为副组长的防治工作领导小组。小组下设“野生动物疫源疫病防治监测站”，由工会副主席张洪担任站长，并由各股抽调技术骨干担任野外4个监测点成员。

2、技术保障。组建野生动物疫源疫病监测处理预备队，由保护区科研人员、管护人员、专业技术人员及公安人员为组员；举办3期野生动物疫源疫病知识培训班，不断提高防疫队伍的专业技术水平。

3、完善制度。根据《中华人民共和国动物防疫法》、《野生动物保护法》等法律法规以及国家林业局陆生野生动物疫源疫病监测工作要求，分别制定了《野生动物疫源疫病应急预案》、《野生动物疫源疫病报告和处理程序》、《疫源疫病日报表制度》、《疫源疫病野外监测值班管理制度》等一系列规章制度，做到工作有人管，责任有人负，确保了疫源疫病工作的畅通。

二、狠抓落实，确保控制疫源疫病。

1、疫源疫病监测。我们以现有的监测站为基础，在保护区内设立4个疫源疫病监测点，联合各社区单位动物防疫组织，形成了快捷联通的疫源疫病监测网络。

此外，监测站每个野外监测点每周负责对辖区巡查2次，搜集坡鹿活动地及其他鸟类迁飞通道，停歇地集群活动区、繁殖动态和疫情信息，并及时准确地上报监测数据，认真做好疫源疫病监测工作。

2、疫源疫病报告。严格执行疫源疫病报告制度，在候鸟迁徙季节实行周报告、零报告制度，在候鸟繁殖季节实行半月报告制度和零报告制度。如发现可疑情况，各站点于半小时内报保护区疫源疫病监测站。同时，采取紧急处理措施，严格隔离，防止疫情蔓延。并根据疫情级别，由疫源疫病防治小组上报省林业局野生动物植物自然保护中心，确保对突发事件能快速、有序、安全地应对，避免意外情况发生。报告内容包括疫源疫病发生时间、地点、发病性动物种类和品种、日龄、死亡数量、临床病变、以采取的控制措施、联系方式等。

3、确认疫源疫病和分级。我们与东方市防疫站紧密合作，确定在发生疑似病例时，由该站专家现场诊断，对怀疑为感染疫情的动物，采集病料，送省兽医卫生防疫站实验室进行检测确认。最后,根据疫病传播速度、危害程度、流行范围和趋势确定辖区疫情等级。

4、疫源疫病的控制和扑灭。疫源疫病发生后，依照“早期发现、快速封锁、严格捕杀，把损失降到最小程度”的原则，做到统一指挥，及时有效，迅速控制和扑灭疫源疫病，并确保做到：

（一）划定疫点、疫区和受威胁区

1、疫点：感染动物及疫鸟类所在地。

2、疫区：以疫点为中心，以3公里为半径范围划定。

3、受威胁区：与疫点、疫区相临的村及其他生产、经营场所。

（二）对疫点采取的措施

1、隔离染疫鸟类分布区，严禁人员、牲畜进入。并对所有病死动物按国家规定的标准进行无害化处理。

2、对染疫区动物的排泄物、污染的河湖等水体进行无害化处理。

3、对污染的物品、交通工具、用具和场地进行严格彻底的消毒。

（三）对疫区采取的措施

1、由省野生动植物自然保护中心发布封锁通告，对疫区实施封锁。

2、疫区周围设置警示标志，在出入疫区的交通路口设置动物检疫消毒站，对出入的车辆和有关物品进行消毒。必要时经省林业局批准，设立临时监督检查站，执行对动物的监督检查任务。

3、建立紧急强制免疫接种易染病动物免疫档案。

4、疫源疫病区内所有感染的动物、禽类及其产品按规定处理，严格消毒，经21天以上的监测，未出现新的传染源的，经省动物防疫机构审验确认后，由保护区管理局解除封锁。

三、加强宣传，实行群防群控。

我们结合和谐社区共管体系，充分依靠群众，建立了广泛宣传网络，今年以来召集周围村庄领导干部，共组织了2期疫源疫病知识[培训班；派出宣传队15人次，张贴有关宣传标语200余幅，取得了良好效果，不仅防止了外围疫病对保护区的威胁，同时也起到了稳定群众思想，避免造成不稳定因素的作用

当前，我们存在的问题表现在几个方面：一是经费严重不足；二是专业人员的技术水平还需进一步提高，还有一部分从事野生动物疫源疫病监测工作的人员未进行系统培训；三是监控设施及物资储备还需进一步完善。目前我们是利用现有的设施设备，缺少与工作配套的应急装备和防护、防控设施；四是工作开展不平衡。建议从资金支持、技术培训、应急防控物资储备、检查督导等方面进一步加强该项工作，我们相信，在省委省政府、省林业局和有关部门的正确指导下，我保护区野生动物疫源疫工作将迈向新的台阶。

海南大田国家级自然保护区管理局

动物源生物农药研究篇6

1 前处理方法

1.1 提取溶剂

动物源食品基质复杂, 磺胺类药物因含有伯氨基和磺酸胺基而呈酸碱两性, 具有较高的极性, 可溶解于酸、碱溶液中, 一般采用有机溶剂进行提取, 常用的提取溶剂有乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯及其混合溶剂等。

1.2 提取方法

1.2.1 液液萃取法。

液液萃取法是利用化合物在两种互不相溶的溶剂中溶解度或分配系数的不同, 使化合物从一种溶剂转移到另一种溶剂中, 经过多次萃取, 将绝大部分的化合物提取出来的方法。乔坤云等 (2013) 用乙腈-氯仿混合剂提取猪肉中10种磺胺类药物残留, 方法回收率为70.1%~90.4%, 变异系数为5.1%~8.2%。但液液萃取法有机试剂用量较多, 易产生—乳化现象, 应用范围越来越小。

1.2.2 固相萃取法。

固相萃取法与液液萃取相比, 所需溶剂用量少, 回收率相对较高, 不易发生乳化, 净化效果好。常用的固相萃取柱有HLB柱、C18柱、碱性氧化铝柱、中性氧化铝柱及各种阳离子柱等。李俊锁等 (2002) 将碱性氧化铝柱用于鸡肝组织中磺胺类药物的净化, 净化效果显著, 回收率为68.8%~100.0%, 检出限低于0.05 mg/kg。刘莉治等 (2008) 利用Waters Oasis HLB固相萃取柱净化, 回收率达到80.3%~96.2%。曲斌等 (2012) 以Qu ECh ERS方法为样品前处理技术, 在10~200μg/kg范围内各磺胺类药物均呈良好的线性关系, 高中低浓度回收率在70%~115%, 精密度小于15%。

1.2.3 固相微萃取 (SPME) 。

固相微萃取可以直接从样品中富集目标化合物, 具有简单、快速、高效的特点, 易与LC联用。Lu KH等 (2007) 建立了SPME结合LC-MS技术对肉中的8种磺胺类物质痕量测定的方法, 实验采用乙腈-水作为提取溶液, 比较了不同型号的固相微萃取纤维对磺胺类药物回收率的影响。

1.2.4 免疫亲和色谱 (IAC) 。

免疫亲和色谱是以抗原抗体的特异性、可逆性免疫结合反应为原理的色谱技术。Li等 (2000) 通过合成半抗原, 在大兔体内取得免疫效果, 纯化分离抗体后制备成免疫亲和色谱柱, 利用其对磺胺类药物的特异性, 待测样品经提取后, 通过免疫亲和色谱法进行样品的净化。袁中珍等 (2013) 建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱法 (IAC/HPLC) 同时测定动物源性食品中16种磺胺类药物残留的分析方法。结果16种磺胺类药物的平均回收率为62%~104%, 相对标准偏差为0.9%~6.6%, 检出限 (S/N=3) 为4~10μg/kg。免疫亲和色谱法可有效的富集和净化目标物质, 但必须要有大量纯化的特异性抗体, 并且要保持抗体的活性。

2 检测方法

磺胺类药物残留检测技术多种, 有微生物法、免疫法、液相色谱法、液质联用技术、气质联用技术和毛细管电泳法等。

2.1 微生物法

微生物法检测的原理是通过药物抑制微生物的生长, 根据对某种抗生素敏感的微生物, 在适当条件下所产生的抑菌圈大小与抗生素浓度呈正相关而设计的。Gaudin等 (2004) 建立了一种筛选牛奶中药物残留的微生物方法, 并用筛选的菌种对磺胺类药物进行检测, 可在低于最高残留限量水平检测某些磺胺类药物残留。

2.2 免疫分析法

免疫分析法主要是利用抗体能够与相应抗原及半抗原发生自发的、高选择性的特异性结合, 通过将特定抗体 (或抗原) 作为选择性试剂来对相应待测抗原 (或抗体) 进行分析测定的方法。主要有酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法、生物传感器法与放射性免疫法等。

2.2.1 酶联免疫吸附法 (ELISA) 。

酶联免疫法的特点是操作简便、灵敏度高、可实现大量样品的通量化检测。万宇平等 (2012) 将磺胺类母核与牛血清白蛋白合成免疫抗原后免疫小鼠制得磺胺类单克隆抗体, 建立了磺胺类残留一步式化学发光酶联免疫检测方法。楚金申等 (2011) 建立了一种检测猪肉中磺胺嘧啶的直接竞争化学发光酶联免疫法。冯才伟等 (2012) 利用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行检测, 该方法的灵敏度为1μg/L, 最低检测限为1.5μg/kg, 平均回收率范围为76.1%~101.7%, 变异系数为4.6%~11.9%。

2.2.2 胶体金免疫测定法。

胶体金免疫技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子等作为探针, 对组织或细胞内的抗原进行定性、定位、定量。吴广红等用胶体金标记磺胺嘧啶多克隆抗体包被在胶体金垫上, 磺胺嘧啶与牛血清白蛋白偶联物和羊抗兔二抗抗体分别包被在硝酸纤维素膜 (NC) 上作为检测线 (T线) 和质控线 (C线) , 制成免疫层析快速检测试剂条, 用于快速检测组织等样品中的磺胺嘧啶残留量。T线与待测样品中所含磺胺嘧啶竞争结合胶体金标记的磺胺嘧啶多克隆抗体, 并通过胶体金显色直接观察检测结果。检测猪肉等组织试样时, 灵敏度最低值可达到20 ng/m L, 只需3~5 min。韩静等 (2011) 建立了一种用于快速检测动物源性食品中五种磺胺类药物残留的胶体金免疫层析方法。

2.2.3 免疫传感器。

免疫传感器的原理是传感器的生物敏感层与样品中的目标化合物之间发生抗原 (抗体) 对抗体 (抗原) 的识别作用, 产生一些物理化学变化, 这些变化通过不同原理的传感器转换成电信号或其他形式的信息输出并记录。具有选择性好、灵敏度高、响应快、易于操作、高通量及适合现场检测等优点。

2.2.4 蛋白芯片。

郭志红等 (2010) 应用蛋白芯片技术建立了动物组织 (猪肉、猪肝和鸡肉、鸡肝) 中重要兽药 (盐酸克伦特罗、链霉素、恩诺沙星、磺胺二甲基嘧啶) 的高通量筛选方法, 并与酶联免疫吸附试验、气相色谱串联质谱、高效液相色谱和微生物检定法进行了比对。

2.3 毛细管电泳法

毛细管电泳 (CE) 是以弹性石英毛细管为分离通道以高压直流电场为驱动力, 依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。具有分离模式多、分离效率高、分析速度快、试剂和样品用量少、易于调控、对环境污染小等优点。

2.4 液相色谱法 (HPLC)

液相色谱法的特点是分离效率高, 速度快, 操作自动化等。最常用的有紫外检测器 (UV) 、荧光检测器 (FLD) 、电化学检测器 (ECD) 以及二极管阵列检测器 (DAD) 等。Kao等 (2001) 建立了高效液相色谱光敏二极管检测器检测测定鸡肉与猪肉中八种磺胺类药物残留的方法, 样品经乙腈抽提、饱和乙腈正己烷浓缩分离蒸干, 经固相柱净化, C18液相色谱柱分离, 回收率达到71%以上, 检出限为20μg/kg。王建华等 (2002) 利用液相色谱电化学检测器 (ECD) 测定禽肉中多种磺胺药物残留分析方法, 磺胺类药物的回收率为75%~82%。高文惠等 (2007) 采用液相色谱-荧光检测法同时测定肠衣中八种磺胺类药物残留, 样品经1%乙酸-乙腈对肠衣进行提取, 经荧光胺衍生后测定, 该方法的最低检测限为5 ng/m L。WHela等报道采用HPLC-DAD可以同时测定动物性可食性组织的12种磺胺类药物, 样品经乙腈超声提取、正己烷除脂、OASISMCX柱进行净化后测定, 该方法的检出限为1μg/L。

2.5 液质联用技术 (LC-MS)

液质联用技术是目前研究磺胺类药物应用范围较为宽广的一种技术手段, 与液相色谱相比具有分离效率高、分析时间短、速度快、准确率高等优点。

佘永新等 (2008) 利用超高压液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱联用技术, 建立了10 min内快速分离与测定牛奶中24种磺胺类药物残留的分析方法, 样品经匀浆、超声、乙腈重复提取, 氮吹浓缩, 流动相定容, 饱和正己烷脱脂后, 进入串联质谱进行测定, 在ESI+和MRM (多反应监测) 模式下进行样品分析, 该方法检出限 (LOD) 为0.04~1.35μg/kg;在1~200μg/L范围内线性关系良好, 回收率为61%-117%。李锋格等 (2011) 建立了一种分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱测定鸡肝中12种磺胺类残留的分析方法, 样品用酸化乙腈溶液提取后, 采用NH2吸附剂净化, 正己烷脱脂测定, 正离子电离模式, 内标法定量, 其检出限为5μg/kg, 定量限为10μg/kg, 平均回收率为72%以上。吴淑秀等 (2012) 建立了高效液相色谱-串联质谱法 (HPLC/MS/MS) 同时测定猪肉及猪肝中9种磺胺类药物残留的检测方法。样品经10%的Na2SO4溶液和乙腈-氯仿 (10:1) 提取, 乙腈饱和正己烷去脂, 使用乙二胺-N-丙基硅烷 (PSA) 和十八烷基键合相硅胶 (ODS C18-N) 两种基质分散净化剂净化, 采用LC-MS/MS多反应监测 (MRM) 正离子模式测定, 内标法定量。9种磺胺检出限为0.1~0.8μg/kg, 在5, 10, 20μg/kg 3个浓度添加水平, 回收率为74.1%~115.8%, 相对标准偏差均小于6.2% (n=6) 。张志刚 (2013) 利用液相色谱-电喷雾串联质谱建立猪肉中13种磺胺类药物残留的同时、快速分析方法。猪肉样品中的残留药物用1%乙酸-乙腈均质提取, 浓缩后用0.1%甲酸-乙腈定容, 并用正己烷液-液分配除脂后, 用Kinetex C18色谱柱 (100 mm×2.1 mm, 2.6μm) 分离, 以0.1%甲酸-乙腈作为流动相梯度洗脱, 采用电喷雾正离子电离, 多反应监测模式检测, 基质匹配外标法定量。13种磺胺类药物在1~300μg/kg范围内线性关系良好, 定量限均小于10μg/kg。在1、2μg/kg和10μg/kg这3个添加水平下, 回收率在60.0%~78.1%, 相对标准偏差 (RSD) 在0.24%~8.88%。

2.6 气相-质谱联用 (GC-MS)

气相色谱-质谱联用法是将气相色谱 (GC) 和质谱 (MS) 通过接口连接起来, 将复杂化合物分析分离成单组分之后进入质谱进行成分检测的方法。赵晓凤等 (2007) 利用气相色谱-串联质谱法分析猪肉组织中的磺胺二甲嘧啶残留量。样品脱脂后, 采用二氯甲烷提取样品中的目标化合物, 经萃取、硅烷化衍生后, 用气相色谱-串联质谱法检测, 根据保留时间和质谱图谱与对照品比较进行定性与确认。所检测的磺胺二甲嘧啶的二级质谱图与标准的二级质谱图匹配良好, 方法快速准确, 干扰较少。该法测定磺胺二甲嘧啶的回收率为76%~110%, 检出限为0.01 mg/kg。

2.7 表面等离子体共振技术 (SPR)

表面等离子体共振技术是一种新型的生物芯片检测技术。夏敏等 (2010) 建立一种基于表面等离子体共振技术测定猪肉中磺胺类药物残留的新方法。采用传感芯片为共振芯片, 以0.1mol/LNa OH溶液为再生溶液, HBS-EP为缓冲溶液, 流速为80μL/min, 运用SPR技术测定猪肉中磺胺类药物残留总量。结果表明, 磺胺类药物在0.5~50 ng/m L范围内, 传感芯片表面所产生的相对共振强度与质量浓度有良好的响应关系, 平均回收率为75.7%~99.2%, 精密度实验RSD为1.3% (n=6) , 检测限为2.5μg/kg。

3 小结

随着动物性食品中的磺胺类药物残留检测研究的深入, 检测仪器和检测手段的不断更新, 检测逐渐转向现场监控和基层检测, 快速的样品前处理技术、提高检测的灵敏度和建立多残留同步检测是今后动物源性食品中磺胺类药物残留检测工作的方向。

摘要：磺胺类药物是一类使用广泛的广谱抗菌药, 价格低廉、高效、性质稳定。但不当使用会造成其在动物组织中离集, 通过食物链传递, 最终危害人的健康文章对动物源性食品中磺胺类药物残留检测前处理和检测方法进行了综述

动物源生物农药研究篇7

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

成都动物园圈养的孔雀、绿头鸭等6种初生珍禽。

1.1.2 试验疫苗

禽流感 (H5+H9) 二价灭活疫苗:哈维科生物技术公司生产;鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗 (La Sota株+M41株) :齐鲁动物保健有限公司生产;鸡新城疫弱毒活疫苗 (La Sota株) :哈维科生物技术公司生产。

1.1.3 检测试剂

H5亚型禽流感抗原、阳性血清和H9亚型禽流感抗原、阳性血清, 均购自哈尔滨维科生物技术开发公司;鸡新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清, 购自青岛易邦生物工程公司。

1.1.4 1%红细胞悬液

采集3只无禽流感、新城疫抗体的青年健康公鸡血液与等体积的阿氏液混合, 用p H值为7.2的0.01mol/L PBS液离心洗涤3次, 然后用该PBS液配成体积分数为1%的红细胞悬液。

1.2 方法

1.2.1 免疫

采用胸部肌肉或皮下注射的方法同时免疫禽流感 (H5+H9) 二价灭活疫苗、新城疫-传染性支气管炎二联灭活疫苗, 免疫剂量为0.3~0.5m L/羽;同时用2头份/羽的免疫剂量滴鼻免疫鸡新城疫弱毒活疫苗 (La Sota株) 。

1.2.2 血清采集

15日龄以下的初生珍禽在心脏采血, 其余珍禽在翅静脉采血, 待血清析出后, 8 000 r/min离心4 min, 吸出血清并编号, -20℃冰箱中保存, 备用。

1.2.3 抗体检测

参照《高致病性禽流感诊断技术》 (GB/T 18936-2003) 和《新城疫诊断技术》 (GB/T16550-2008) 标准, 采用血凝抑制试验方法检测血清中的禽流感、新城疫抗体。

1.2.4 结果判定

以完全抑制4个血凝单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI效价, 只有阴性对照孔效价不大于2log2, 阳性对照孔误差不超过1个log2, 试验结果才有效。

2 结果与分析

2.1 初生珍禽母源抗体的检测结果

在2012年雏禽的出孵季节, 采集了15日龄左右初生珍禽的9份血清进行母源抗体测定, 检测结果见表1。表1显示6种初生珍禽的禽流感、新城疫母源抗体较好, 其中白冠长尾雉、孔雀、白鹇、蓝鹇的母源抗体基本在5log2以上, 绿头鸭的禽流感母源抗体较差, 但也在4log2以上, 未免疫成年大雁所产的雏雁也检出了低效价的母源抗体。

log2

注:成年珍禽免疫禽流感、新城疫灭活疫苗的时间是2011年12月16日, 其中大雁未进行两种疫苗的免疫, 绿头鸭仅免疫了禽流感灭活疫苗。“/”表示未进行检测, 下同。

母源抗体虽然能使幼禽抵御感染获得被动性免疫保护, 但却可能干扰疫苗 (特别是弱毒苗) 对雏禽的免疫效果, 因此确定雏禽的首免日龄很关键。一般选择雏禽的母源抗体达到免疫保护临界值时对雏禽进行首免, 这样既可使雏禽获得母源抗体的保护, 又可减少母源抗体对免疫效果的干扰。分析近年来家禽及孔雀、鸵鸟等雏禽禽流感、新城疫母源抗体的消长规律, 可知雏禽的免疫抗体在10日龄内达高峰, 以后随着日龄增加母源抗体逐渐消失。母源抗体的消失时间与母源抗体的基础水平呈正相关, 即母源抗体基础水平越高, 则消失时间越长。不同品种的雏禽, 其母源抗体半衰期有差异, 但一般为4 d左右下降一个滴度。本次试验参照家禽禽流感、新城疫免疫程序, 初步建立了初生珍禽的免疫程序:15日龄首免, 首免后1个月加强免疫1次。

2.2 初生珍禽免疫后对AI、ND抗体的测定

为了检测上述免疫程序的免疫效果, 在加强免疫后1个月采集了白冠长尾雉等5种初生珍禽的25份血清, 进行了免疫抗体检测, 结果见表2。

上述初生珍禽的免疫抗体检测结果显示:初生珍禽产生了较好的免疫抗体, 白冠长尾雉、孔雀等5种珍禽群体在加免后1个月, 禽流感H5、H9亚型的HI抗体几何平均值分别为7.6log2、7.2log2, 免疫合格率分别为100%、84%, 白冠长尾雉、孔雀、白鹇3种幼禽的新城疫抗体几何平均值为7.18log2, 免疫合格率达94.12%。

3 结论及分析

由于珍禽价值昂贵, 数量较少, 采样难度大, 特别是初生珍禽的采样难度更大, 部分初生珍禽甚至在前期采血过程中即死亡, 因此本试验仅检测了9日龄左右初生珍禽的母源抗体效价, 未能测定初生珍禽母源抗体的消长规律, 而主要参照了家禽及孔雀、鸵鸟等相关禽类母源抗体的消长规律, 以此来建立初生珍禽的免疫程序。为了检测该免疫程序的免疫效果, 在雏禽加免后1个月笔者又进行了免疫抗体测定, 其结果显示:所免疫的5种珍禽的禽流感免疫抗体几何平均值都超过了5log2;免疫的3种珍禽的新城疫免疫抗体几何平均值超过了6log2, 均超过了农业部禽流感、新城疫免疫监测方案中“禽流感免疫抗体效价应≥4log2, 新城疫免疫抗体效价应≥5log2, 免疫合格率≥70%”的标准。说明所建立的初生珍禽禽流感、新城疫的免疫程序比较合理, 这对于国内动物园建立初生珍禽免疫程序具有重要的借鉴意义。

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动物源生物农药研究篇8

1 动物源性食品出口及其通报情况统计

数据来源:联合国贸易数据库整理。

1.1 我国动物源性食品出口情况

从表1及图1可以看出, 我国动物源性食品出口类别主要是禽肉及杂碎、畜肉及杂碎, 近6年来我国动物源性食品出口总额为61.47亿美元, 禽肉及杂碎、畜肉及杂碎总出口额分别为32.1亿美元和27.36亿美元, 占全部动物源性食品出口总数的66.87%。

1.2 动物源性食品标签的通报

1.2.1 WTO成员国动物源性食品标签通报情况。

根据对我国WTO/TBT-SPS国家通报咨询中心提供的TBT/SPS通报进行的统计, 2009~2014年WTO各成员国有关食品标签的通报共有2970项 (见表2) , 动物源性食品标签通报共有782条, 且占食品标签通报的比例从2010年的20.4%上升到2014年的29.6%。表现形式主要有标签标准通则和一般要求、健康声称、营养标签、原产地标签。其中标准通则365项, 一般要求221项, 其余的健康声称、营养标签和原产地标签成为动物源性食品标签通报的重点内容, 且通报内容的范围逐渐加大 (见图2) 。

1.2.2 我国动物源性食品标签通报。

一是我国动物源性食品标签主要出口国 (地区) 通报数逐年上升。欧盟、美国、日本和韩国等发达国家 (地区) 成员十分重视食品标签法规标准的制修订。近6年我国动物源性食品出口国或地区对食品标签通报数量呈现总体上升趋势, 从2009年的29起上升到2014年的49起。尤其是日本近年来对此方面的要求逐渐严格, 通报数量最多, 且不断提升。二是不同种类产品通报比例各国或地区不同。欧盟、美国、日本、韩国作为主要的通报国家 (地区) , 其通报产品种类比重不同 (见图3) 。例如日本在奶类、乳制品方面, 超过其他三地通报总数之和, 家禽类制品中的比例也占到47%;在肉制品分类下, 四地的通报比例相对均匀;家禽类制品中, 美国的通报比例达到29%, 超过欧、韩通报数量之和。

2 动物源性食品主要出口国 (地区) 食品标签管理体制

欧盟对于食品标签的立法分为欧盟层级和成员国层级, 欧盟层面上的食品标签由健康和消费者保护总司负责, 成员国层面上的食品标签由各国的主管机构负责。管理则表现为总体与个体的关系, 整个欧盟采取欧盟委员会统一管理, 各成员国分头监管的模式, 两个层级之间进行充分的信息交流, 欧盟层级和各国层级之间对于动物源性食品标签合格评定的信息共享, 因此欧盟的标签壁垒更为严格。

美国采用多级政府共同参与的管理模式, 各级政府负责其司法管辖区域内的所有食品, 并根据产品类别划分食品标签的监管职能。对于进口的产品同一行政部门可以采用连续性的包括每个产品流通环节的链式监管模式。在美国境内销售的除肉类和禽类以外进口食品 (包括带壳蛋类) 的安全、卫生和精确标识由食品药品管理局负责;而肉类、禽类和蛋类产品的安全、卫生和精确标识则由食品药品管理局负责。

“JAS法”、“食品卫生法”和“增进健康法”是日本食品标签管理模式的基础, 三部法律侧重点和角度不同, 在此基础上推出了专门的食品标签法案, 对紧扣的食品标签进行统一管理。例如食品标签中关于营养成分的内容则主要以“增进健康法”为依据。

韩国在食品标签的监管上实行官方与半官方相结合, 卫生安全厅和行业协会从结构上进行垂直管理, 部门划分明确。各部门下设具体管理局, 负责相应的质量安全管理, 例如农林部内设农产品质量管理局、畜产品质量管理局和海洋渔业部, 负责动物源性食品质量安全包括水产品及其标签方面对策的拟定、法律法规的制定、检验检疫等。

3 动物源性食品主要出口国食品标签壁垒的我国企业的对策建议

3.1 政府和行业协会层面

3.1.1 加强政府功能, 提供信息和便利条件。

要充分发挥政府职能, 国家质检总局和出入境检验检疫部门为了解企业遭受食品标签壁垒的情况, 出入境检验检疫协会、行业商会等多种社会团体应及时向政府部门反映有关情况, 建议有关部门及时跟踪了解食品标签规定, 搜集全国企业碰到的食品标签技术贸易壁垒, 并通过各种途径, 例如电子邮件的形式发送给相关企业, 使得相关企业能从别的企业的壁垒案例中吸取经验教训, 减少食品标签技术贸易壁垒案例。

3.1.2 加强对出口企业应对国外技术措施的帮助与指导。

检验检疫和商务等部门应进一步加强与企业、行业协会的联络, 通过开展联合调研、联合培训等方式, 加强了解企业实际情况和需求, 并选择出口食品贸易量大的地区适时开展食品标签培训班, 设专人专职定期搜集、通报各类标签及其他类技术贸易壁垒的信息及通报, 提前避免企业发生贸易壁垒, 并在发生贸易壁垒的时候能给予最大程度的帮助和指导。

3.1.3 建立信息网络, 实现网络资源共享。

建议建立多层次的动物源性食品标签信息获取机制, 通过官方通报、网络搜集、企业联系点等方式密切追踪国外动态和措施, 尤其对于上海市动物源性食品出口较多的欧盟、美国、日本和韩国等国家和地区的响应动态要密切关注, 通过多层次多渠道以建立统一的动物源性食品标签技术贸易壁垒的网络信息平台, 实现全市全产业信息网络资源共享。通过实施职能部门间的联席会议制度等方式, 建立国外技术性贸易措施联合应对机制。

3.2 企业层面

3.2.1 了解出口国的有关规定和规则。

动物源性食品出口企业要积极学习WTO/TBT规则, 并用有关条款和规则来保护自己, 在发货前要仔细确认, 防患于未然, 遭到壁垒的时候也要仔细对照规则, 以尽量保护自己并降低损失。同时食品出口企业也必须了解出口国的有关法律法规和要求, 要时刻警惕出口国对于标签的要求, 并引起重视, 成立专业团队来密切关注食品标签法规的修订和实施日期, 及时关注法规动态, 积极与客户沟通, 了解出口国最新的标签要求, 确保标签标示持续符合出口国相关法律法规的规定。

3.2.2 积极向政府反映标签要求的变化及通报。

在出口食品前, 企业应通过多方渠道掌握出口食品标签的管理规定, 按照相关要求制作标签, 提高食品标签的质量。同时, 企业若认为食品标签规定有不合理之处, 在一定程度上构成了技术贸易壁垒, 可以向我国WTO/TBT-SPS国家通报咨询中心等相关政府部门积极反映, 尝试通过国家政府部门之间的磋商努力解决有关问题。

摘要：食品标签壁垒成为越来越多的国家保护本国市场经济利益的重要手段, 动物源性食品标签占食品标签通报的比例逐年上升, 我国动物源性食品标签主要出口国通报数也逐年上升, 主要出口国动物源性食品标签管理体制和要求对于我国出口企业具有重要的影响。在动物源性食品出口及其通报统计的基础上, 分析我国的出口及通报情况, 并比较欧盟、美国、日本和韩国动物源性食品标签管理体制, 最后提出我国的应对策略。

关键词：动物源性食品,食品标签,管理体制

参考文献

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[3]吕青, 刘勇, 张明.出口动物源性食品新技术贸易壁垒及对策[J].安徽农业科学, 2008 (2) :761-762.

[4]宋明顺, 张霞, 朱婷婷, 方兴华.基于消费者认知的食品标签法规标准研究[J].标准科学, 2015 (1) :12-16.

[5]幸汐媛, 李江华, 郑风田, 等。欧盟动物源性食品法规体系研究进展[J], 肉类研究, 2012 (8) :43-47.

动物源生物农药研究篇9

1 材料与方法

1.1 酶及主要试剂

Taq DNA聚合酶、d NTP和DL-2 000 Marker,购自生工生物工程(上海)股份有限公司;鲍姜氏培养基,购自青岛日水生物技术有限公司;麦康凯培养基,购自Solarbio公司;胰蛋白胨大豆肉汤培养基,购自美国BD公司;支气管败血波氏杆菌标准菌株,购自中国菌种保藏中心;生化反应用培养基,根据参考文献[3]中的方法配制;K抗血清和O抗血清,均由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司制备。

1.2 病原菌的分离

病料为新疆3个规模化猪场有萎缩性鼻炎症状猪的肺脏和鼻腔拭子,共20份。将采集的病料划线接种于改良麦康凯培养基,37℃培养24~48 h观察,挑取可疑菌落接种鲜血鲍姜氏培养基,并进行生化和PCR鉴定。

1.3 生化鉴定

对纯化好的可疑菌落进行以下生化试验,包括葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、鸟氨酸、尿素酶和氧化酶试验。

1.4 PCR鉴定

1.4.1 PCR引物

试验所用的PCR引物见表1。

1.4.2 PCR扩增

参照参考文献[4]中的酚氯仿抽提基因组DNA的方法,以可疑菌株及标准菌株的基因组DNA为PCR模板。PCR反应体系(总体积为50μL):10×PCR Buffer 5μL,25 mmol/L Mg Cl24μL,10 mmol/L d NTPs 1.0μL,10μmol/L上、下游引物各2μL、2.5 mmol/L Taq E 0.5μL,模板2μL,无菌水33.5μL。PCR反应条件:94℃预变性4 min;94℃变性40 s,59℃/55℃退火30 s,72℃延伸40 s,共30个循环;72℃再延伸10 min。取10μL PCR产物,经1%琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像系统观察结果。

1.5 菌相鉴定

将待检支气管败血波氏杆菌接种于鲜血鲍姜氏培养基(凝结水已干燥),置37℃潮湿温箱中培养36~48 h,观察菌落形态及是否溶血。

进行活菌玻片凝集试验鉴定菌相。取洁净载玻片,用蜡笔分成3格,分别标注为a)无菌PBS缓冲液、b)K抗血清、c)O抗血清;取待检菌株的单个菌落于200μL无菌PBS缓冲液中制成菌悬液;在载玻片上对应的区域分别滴加50μL PBS缓冲液、50μL K抗血清、50μL O抗血清,然后分别滴加50μL待检菌株菌悬液于PBS缓冲液、K抗血清、O抗血清中,充分混匀,每次添加均更换枪头;轻轻摇动载玻片,5 min内观察有无凝集现象并判定结果。结果判断标准:Ⅰ相对K抗血清呈迅速典型凝集,对O抗血清完全不凝集;Ⅲ相对O抗血清呈明显凝集,对K抗血清完全不凝集;中间相菌落形态在Ⅰ相及Ⅲ相之间,对K抗血清及O抗血清都凝集[5]。

1.6 小鼠毒力试验

将3株支气管败血波氏杆菌接种至胰蛋白胨大豆肉汤培养基,置36~38℃恒温振荡培养箱中,以200 r/min培养12 h。取培养菌液计数,通过预试验确定感染的最高剂量和最低剂量。将对数生长期的菌悬液按照比例稀释并计数,确定接种的实际菌量。取适宜稀释度的菌液腹腔接种小鼠,0.5 m L/只,每组10只,同时设PBS(0.01 mmol/L,p H值=7.4)对照组。攻毒后连续观察7 d,统计小鼠死亡情况,采用Karber法计算小鼠半数致死量(LD50)。

2 结果与分析

2.1 病原菌的分离鉴定

经革兰氏染色,3株病原菌为呈阴性的杆菌或球杆菌。接种改良麦康凯培养基培养观察,生长菌落小,圆整、光滑、隆起、透明,略呈茶色。将分离得到的3株疑似支气管败血波氏杆菌分别接种至生化培养管,36~38℃培养24~48 h,疑似支气管败血波氏杆菌的生化反应结果见表2。

注:+表示为阳性反应,-表示为阴性反应。

由表2可知,3株菌不发酵麦芽糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、鸟氨酸,尿素酶和氧化酶试验呈阳性。由形态和生化特性的结果可知,这些特征与支气管败血波氏杆菌的特征相符,因此初步判断分离菌为支气管败血波氏杆菌。

2.2 PCR鉴定

结果见图1和图2。

由图1和图2可知,3株菌株经支气管败血波氏杆菌fla基因PCR检测均为阳性,经支气管败血波氏杆菌毒素dnt基因PCR检测均为阳性。

2.3 菌相鉴定

3株分离菌株接种鲜血鲍姜氏培养基后,其中1号和3号菌株生长菌落小,均呈珍珠状或半圆状、乳白色、光滑致密菌落,周边围绕着界限多不清楚的明显β溶血环,均与K抗血清凝集,均为Ⅰ相菌。2号菌株的生长菌落偏大,扁平,光滑呈灰白色,不溶血,对K抗血清及O抗血清都凝集,为中间相菌。

M.DL-2 000 Marker;1~3.分离菌株;4.支气管败血波氏杆菌fla基因的阳性对照;5.阴性对照。

M.DL-2 000 Marker;1.阴性对照;2.支气管败血波氏杆菌毒素dnt基因的阳性对照;3~5.分离菌株。

2.4 小鼠毒力试验

试验小鼠于接种菌液后出现精神萎靡、不食等临床症状,12 h后开始出现死亡现象。取死亡小鼠的心血、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,涂片后用瑞氏染色法染色,可见明显的蓝色且两极浓染的杆菌。肝脏和肠等脏器出血、坏死,表面多附有一层伪膜,易剥离;肺脏有明显的坏死、出血。按照Karber法计算3株支气管败血波氏杆菌的LD50,结果见表3。

由表3可知,在3株支气管败血波氏杆菌分离株中1号菌株毒力较强,小鼠LD50为3.2×107cfu/m L。

3 讨论

本试验以发病猪的肺脏和鼻腔拭子为主要病料进行支气管败血波氏杆菌的分离鉴定,在一定程度上代表了导致猪发生波氏菌病的病原情况。支气管败血波氏杆菌在菌落形态、生化鉴定上与很多细菌相似,同时由于鼻腔拭子内杂菌较多,增加了支气管败血波氏杆菌的分离难度。本试验采用改良的麦康凯培养基进行培养,减少了杂菌的数量,同时结合PCR方法对疑似菌株检测,大大缩短了分离鉴定时间。

研究表明,支气管败血波氏杆菌在培养条件不适的情况下极易发生菌相变异,从而发生抗原变异[5]。本试验在初代使用改良的麦康凯培养基分离后,立即转接到鲜血鲍姜氏培养基,保证了菌株的培养条件,防止发生菌相和抗原变异,同时结合血清学鉴定方法,鉴定是否为Ⅰ相菌。

注:分子为死亡小鼠总只数;分母为试验小鼠总只数。

波氏杆菌的致病性与菌相有关,Ⅰ相菌有不耐热的荚膜和短鞭毛,具有强坏死毒素,对小鼠和家兔有高度的致病性,而Ⅲ相菌和中间相菌的毒力较弱或无致病性[6]。因此,本试验通过小鼠致死试验比较细菌毒力的大小,其中1号菌株对小鼠的LD50为3.2×107cfu/m L,该菌毒力较其他两株强,这与菌相判定结果相符。

参考文献

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