中期筛选自我鉴定

中期筛选自我鉴定（通用11篇）

中期筛选自我鉴定 篇1

为加强我校研究生培养过程的管理，确保研究生的培养质量，特制订本规定。

一、筛选时间

研究生中期筛选一般安排在研究生入学后第三学期十二～十三周进行。

二、筛选内容

1、思想品德

考核研究生学习马克思主义基本理论、遵守国家政策法令和学校各项规章制度、治学态度及参加社会公益活动情况等。

2、业务学习

重点考核研究生的学习态度和学习成绩、文献阅读和实践能力、创新精神等。

3、科研能力

考核研究生在参加学术活动、科研实际工作以及论文选题和开题报告等项工作中表现出的自学能力、科研能力、独立工作能力以及责任心。

4、身体素质情况

考核身体健康状况。

三、筛选分流的流向及条件

(一)进入论文的条件

1、思想品德与操行合格。努力提高政治思想觉悟和道德品质修养，坚持四项基本原则，努力学习业务知识，团结同学，尊敬师长，道德品质良好。

2、在导师的指导下，制订并落实培养计划，学完规定的课程(包括教学、社会实践)且成绩合格。

3、已完成论文开题报告。

4、已通过外语水平统测。

5、身体健康。

(二)分流

凡属下列情况之一者，不能进入学位论文工作，应终止学习。

1、思想品德较差、组织和学习纪律松弛、表现不好，经教育仍无悔改表现，已不宜继续培养为高级专门人才者。

2、学位课程成绩有两门不合格;或学位课程成绩一门不合格，重修后仍不合格者。

3、中期筛选结果为“不合格”者。

4、不能进行正常的学习和完成学位论文。

5、明显缺乏科研能力，不适于继续培养。

四、筛选实施办法

1、各学院组成中期筛选考核小组(一般由5人组成，小组成员应由主管研究生工作的院长、主管学生工作的党总支书记、有关学科负责人及导师代表组成)，组织安排本单位的研究生中期筛选工作。

2、研究生按思想品德、课程考试成绩、科研能力和身体状况等方面进行自我鉴定。并填写《淮北师范大学研究生中期筛选表》，送指导教师。

3、指导教师根据研究生个人总结，结合平时对研究生的了解、综合考试成绩以及筛选分流条件，对自己指导的研究生的筛选分流提出具体意见。

4、思想政治表现考评以研究生学年评定情况及筛选时的鉴定为依据，由研究生所在党、团支部或所在学院负责进行。

5、课程学习考评以研究生在校学习期间的学位课程与非学位课程考核成绩和实际完成的学分数、参加教学实践实习的效果为依据，由研究生所在学院负责完成。

6、科学研究能力考评以研究生参加学术活动的实际表现、生产实践中的动手能力、调研能力、开题报告中选题得当与否，方案是否可行，以及组织实施协调科研工作的能力为依据，并结合研究生的文字写作、口述表达能力和科研道德进行评定。科研能力的考评由研究生的指导教师及其所在学院负责进行。

7、考核小组根据研究生的思想政治表现、课程学习和科研能力三方面的考核结果，写出评定意见及分流建议。各学院于第十五周将筛选结果统一上报研究生处。

研究生处将拟终止学习的研究生名单报主管校长批准，并报上级有关部门备案。

五、筛选结果的分档处理

1、经批准可以进入硕士学位论文阶段的研究生继续攻读硕士学位。

2、经批准终止学习的研究生，根据其修业情况，按《淮北师范大学研究生学籍管理条例》处理。

本规定自文件下发之日起执行，由研究生处负责解释。

中期筛选自我鉴定 篇2

通过对引进的西瓜品种进行筛选试验, 进行丰产性、稳产性、适应性、抗逆性、真实性和品质鉴定, 筛选出适宜襄阳市及周边种植的西瓜品种, 为大面积推广提供科学依据。

2 试验设计和气象数据

2.1 田间设计

参试品种10个, 对照品种鄂西瓜13, 采用随机排列, 3次重复。小区长7.4m, 宽3m, 净面积22.2m2。小区定植平均株距0.4m, 行距3m, 每小区定植20株, 密度600株/667m2。

2.2 气象数据 (见表1)

3 田间栽培管理

试验地为粘壤土, 前作为水稻, 于2013年9月25日收获。

试验地耕整 (时间、方法) :入冬前机耕耙各一次, 3月10日机旋耕一次, 3月30日、4月7日机旋耕各一次。4月8日开挖厢沟及围沟, 4月10日做厢起垄, 厢宽3m, (其中厢沟宽0.3m) , 厢中垄畦, 畦宽0.7m。

种籽处理方法:用55℃温水浸种6小时, 置32℃恒温箱催芽。

播种期:3月21日, 定植期:4月16日。

育苗方法:大棚套小拱棚营养钵育苗。

施肥:4月9日施基肥, 在定植畦内施腐熟农家肥2500kg/667m2;定植畦内开沟施复合肥50kg/667m2、过磷酸钙20kg/667m2、硫酸钾10kg/667m2。

灌溉情况 (时间、次数、方法) :6月9日浇水一次。

病虫害防治 (时间、种类、药剂、用药量和方法) :出苗后, 4月4日喷雾75%百菌清600倍液一次;4月7日, 发现黄莺危害, 喷雾氯氰菊酯乳油一次;4月15日, 预防定植大田后蚜虫为害, 喷雾5%啶虫脒可湿性粉剂一次。定植后, 发现蚜虫的为害, 于4月28日、5月12日喷雾5%啶虫脒可湿性粉剂, 每667m2用量70ml;发现黄莺危害, 于5月3日喷雾氯氰菊酯乳油, 每667m2用量50ml。5月23日, 喷雾40%氰戊菊酯4000倍液喷雾一次 (杀蚜虫) 。

其他田间管理 (整枝、压蔓、中耕、除草等) :5月20日、5月29日整枝、压蔓;5月18日、5月28日除草各一次。

4 调查记载表

(表2~表8)

5 结果与分析

5.1 物候期结果与分析

从表2可以看出, 各品种均在3月24~26日之间出苗;成熟最早的是美玉王为6月25日, 比对照提前1天, 成熟最迟的是圣鹰, 比对照晚9天, 其它品种均在6月27~30日之间;全生育期最短的是美玉王为96天, 比对照早1天, 最长的是圣鹰为106天, 比对照晚9天, 其它品种均在97~102天之间;果实发育天数对照最短为32天, 最长的是圣鹰为42天。

从表3可以看出, 种子纯度除圣鹰外, 其它品种均为100%;生长势强的有荆杂30、弘丰8号、瑞丰、美玉王、小富, 最弱的是鸿利黑超人3号, 其它均为中等;坐果节位最高的是澳美8号为25.5节, 最低节位是圣鹰为20.6节;坐果率最高的是鸿利黑超人3号和美玉王均为190%, 最少的是瑞丰为115%。

5.2 果实性状、田间抗逆性的结果与分析

从表4、5可以看出, 单果最重的是圣鹰为5.42kg, 比对照重1.46kg, 最轻的是美玉王为2.15kg, 比对照轻1.71kg;畸形果率除圣鹰、澳美8号、小富外, 其它品种均无畸形果;除美玉王和对照有裂果外, 其它品种均无裂果;除鸿利黑超人3号是黑花皮外, 其它品种均为花皮;中心糖最高的是小富, 比对照高0.88个糖度, 最低的是圣鹰, 比对照低3.93个糖度;空心率只有瑞丰为23.33%, 其它品种均无空心;可食率最高的是美玉王为74.61%, 最低的是圣鹰为59.87%;除病毒病有发病外, 其它病害均无发生;耐湿性除中科6号和对照最弱外, 其它均为中等;耐旱性最强的是荆杂30、弘丰8号、中科6号、澳美8号, 最弱的是鸿利黑超人3号、美玉王和对照。

5.3 产量结果与分析

从表6可以看出, 每667m2产量最高的是弘丰8号为3881.63kg, 比对照重462.11kg, 最低的是美玉王为2033.03kg, 比对照轻1386.49kg;增产率最高的是弘丰8号, 比对照增产13.52%, 减产率最高的是美玉王, 比对照减产40.55%;商品率最高的是鸿利黑超人3号为92.61%, 最低的是圣鹰为86.59%。

不同来源石油降解细菌的筛选鉴定 篇3

【摘 要】从江苏油田的原油和四种不同来源的土壤中，用三种不同的培养液筛选得到41株细菌。对具有较强降解能力细菌的其中8株菌进行测序鉴定，初步确定属于芽孢杆菌属、短波单胞菌属、假单胞菌属、食碱杆菌属及无色杆菌属。

【关键词】石油；降解；细菌

石油及其加工品进入土壤，造成土壤的石油污染。微生物修复具有处理效果好，污染物残留量低，不产生二次污染，对环境影响很小，能够保持或改善植物生长的土壤环境等优点[1]。向污染土壤中投加环境适应性强、降解效能高的菌种或菌群是提高石油类污染物降解效率的重要手段[2]。

1.材料与方法

1.1菌种来源

（1）土样：江苏真武石油基地。①132#磕头机（久置未用）旁表层土；②185#磕头机（长期使用）旁表层土；③磕头机附近草地草根土；④计量站旁表层油污土。

（2）原油：江苏真武石油基地。

1.2富集培养基

（1）无机盐培养液（g/L）：NaNO32，K2HPO41，K2HPO4·3H2O0.5，NaCl0.5，MgSO4·7H2O0.1，CaCl20.01，FeSO4·7H2O0.01PH=7，石油烃（原油：柴油体积比1：4）1%

（2）牛肉膏蛋白胨培养液（g/L）：牛肉膏3，蛋白胨10，NaCl5，PH=7，石油烃0.5%

（3）牛肉膏蛋白胨培养液，石油烃0.5%，表面活性剂50mg/L

1.3石油中细菌的培养分离

牛肉膏蛋白胨培养基冷却后，加入1%的原油混匀，倒平板。恒温培养箱中30℃静置培养。待平板长出菌落后选择不同颜色及形态的单菌落，划线纯化，将纯化菌株于试管斜面培养后于冰箱4℃保存。三个重复。

1.4土壤中石油烃降解菌的筛选

称取10g土样加入到装有100mL富集培养液的三角瓶中。30℃振荡培养7天。静置30min，取10mL上清夜转接入新鲜培养液中。重复上述步骤连续富集培养5次。

富集培养后，取菌液1mL梯度稀释成10-6、10-7、10-8，取三种不同稀释度菌液0.1mL涂布于分离培养基平板上，28℃恒温培养；待平板长出菌落后选择不同颜色及形态的单菌落，划线纯化，将纯化菌株于试管斜面培养后于冰箱4℃保存。三个重复。

1.5分离菌株的石油烃降解率测定

将所得菌株制成菌悬液（1.1～1.4×108个/ml），取1ml转接入10ml加了1%石油烃的无机盐培养液中，28℃摇床培养7d后，用重量法[3，4]测定降解率。以不接菌的培养基作对照。

1.6高效石油降解菌鉴定

1.6.1菌株DNA提取

选取降解率较高（大于40%）的纯菌株，30℃振荡培养过夜。取1ml培养液到Eppendorf管中，离心，8000r/min，5min，弃去上清液，倒扣Eppendorf管在干滤纸上，空干溶液。将菌体重新悬浮于50μL 超纯水，置旋涡混合器上旋转混匀3s。将Eppendorf管放在沸水浴中煮10min。取出Eppendorf管冰浴10min。如此反复冻融三次，冷却后迅速离心，12000r/min 8min。取上清液，-20℃保存备用 。

1.6.2菌株16SrDNA的PCR扩增

以DNA为模板，引物27F：5`-AGAGTTTGATC CTGGCTCAG-3`和1492R：5`-GGTTACCTTGTTACGACTT-3`；TACGACTT-3；总反应体系为50μL，10×Buffer 5μL，25mmol/L MgCl24μL，2.5mmol/LdNTP 4μL，反向引物与正向引物各1μL，Taq酶0.25μL （5U/μL），模板DNA 2.5μL，ddH2O补足至50μL；PCR反应条件为：94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环，最后72℃继续延伸10min，4℃保存。

1.6.3菌株测序

扩增成功后，产物送上海生物工程有限公司进行测序。测序后，用Sequence Scanner v1.0软件进行序列分析，将有效序列到NCBI用Blast进行对比。

2.结果与分析

2.1细菌分离结果

从原油和不同培养时间土壤样品中总筛选到41株细菌，其中石油中筛选出2株，土壤中39株。

2.2降解率测定结果

对筛选得到的41株细菌，测定其对石油烃的降解率，降解率最低1%，降解率高于40%的有12株，菌株编号为5、10、13、14、17、21、23、28、47、48、49、51，降解率分别为54.4%、61.8%、63.2%、69.5%、57.4%、47.9%、44.1%、45.6%、77.9%、63.2%、76.5%，其中5#菌来源于原油。

2.3石油降解菌株的鉴定

将降解率大于40%的12株细菌送上海生物工程公司测序，其中21、47、48、49这4株菌扩增失败未测序。其余8株16SrDNA序列测定结果用SequenceScannerv1.0软件进行序列分析与GenBank中已发表的16SrDNA序列进行同源性比较，初步鉴定5#属于芽孢杆菌属（Lysinibacillussp.），10#属于短波单胞菌属（Brevundimonassp.），13#、17#、23#、28#属于假单胞菌属（Pseudomonassp.），14#属于食碱杆菌属（Alcanivoraxsp.），51#属于无色杆菌属（Achromobactersp.）。

3.结论

目前研究报道，能以烃类为唯一碳源和能源生长的微生物在自然界分布广泛，约有70个属（其中细菌28个属，真菌30个属），200多个种[5]。本研究从江苏扬州真武石油污染土壤中分离得到41株能利用石油的细菌，为石油污染土壤的微生物修复提供了新菌种资源；同时对其中降解率较高菌株进行了初步鉴定，确定菌属。

【参考文献】

[1]Aatry AR，Euis GM.Bioremediation：An effective remedied alternative for petroleum hydrocarbon contaminated soil[J].Environ.Prog，1992，11：312-318.

[2]袁红莉，杨金水，王占生.降解石油微生物菌种的筛选及降解特性[J].中国环境科学，2003，23（2）：157-161.

[3]谢丹平，尹华，彭辉，等.混合菌对石油的降解[J].应用与环境生物学报，2004，10（2）：210-214.

[4]污染源统一检测分析方法编写组.污染源统一检测分析方法（废水部分）[M].技术标准出版社，1983，135-136.

中期考核自我鉴定 篇4

1、本人性格沉稳、细致，发挥所长。在工作上，细致入微，认真负责。具有很好的团队合作精神，注重团体的利益，集体意识强。能够与人充分合作，充分听取他人的意见和建议，并能对察力强、上进心强而且为人随和，易于沟通，能够快速地融入工作群团队及成员给出良好的意见。

2、大学四年中，我参加了不少的校内活动和做过一些社会实践。参加校内的活动可以认识到更多的同学，也就增加了与其他同学交流和向其学习的机会，锻炼了自己的交际能力，学到别人的长处，认清自己的短处。

3、本人思想端正，能吃苦耐劳，有崇高的理想和伟大的目标，注重个人道德修养，养成良好的生活作风，乐于助人，关心国家大事。

研究生中期考核自我鉴定 篇5

学生是学习科学文化知识的学生，也更应该是理论联系实际的学生，我们只有把自己所学的知识融入到社会实践中去才能真正为祖国、为人类、为社会贡献自己的力量;学生应始终坚持与人民群众站在一起，要始终做到一切为了群众，一切依靠群众，从群众中来，到群众中

去的基本要求;学生也是人民众中普通的一员，难免会犯错误，但正如列宁同志所说：犯的错误并不可怕，而最怕的是犯了错误不去改正，由此我们每一位学生更应该坚持批评与自我批评的优良作风;最重要的、也是最现实的是：我们学生吃的、穿的、用的均来自我们的父母，由此我们不应与周围同学比吃、比穿、比用，我们更应该做的是发扬中华民族的优良传统艰苦奋斗。

仔细回想如团的几年来，可以毫不客气的说我与模范团员还有一段差距。为了在以后的团员生涯中更好地履行团员义务，近阶段我也在不断的努力，试图来纠正自己以往与模范团员不相符的行为，效果当然是明显的。这次我们班团支部的保持团员先进性活动也正如一场及时雨，相信我在这次活动中一定会收获到我想要的东西。

最后，我们每一位共青团员都应该做自己力所能及的.事情，争取早日向党组织靠拢。

想想光荣的加入中国共产主义青年团已经7年多了，在这期间团部对我的成长起了不可估量的作用。通过马列主义基本原理和党的路线、方针、政策正确理解和掌握党的路线、方针、政策的基本内容，明确了前的形势和任务，认清自己肩负的历史责任。

在本职工作中发挥模范作用。学习团的基本知识和团的光荣传统，了解团的性质、任务，团员的权利、义务和团内各项规章制度，增强做一个共青团员的光荣感和责任感，在实践中按照团章的规定严格要求自己，做一名真正合格的共青团员。

在团组织生活中，团员应发扬当家作主的精神，研究和讨论团的各项工作，从分发表自己的意见和建议，使团的工作在集中集体智慧的基础上不断得到改进。同时，团的组织还要检查和总结每个团员执行团的决议，完成团组织交给的工作任务的情况，鼓励先进，督促后进。

开展批评和自我批评。团的组织生活要针对团内存在的问题展开讨论，通过思想交锋分清是非，助团员自觉抵制不健康的思想的侵蚀和影响。对于犯了错误的团员，要坚持惩前毖后、治病救人的方针，对其所犯错误进行实事求是的分析，有针对性地进行批评助，并根据团章规定进行必要的组织处理，以保持团组织在思想上、组织上的纯洁性。

中期鉴定表（最终版） 篇6

一、思想政治和纪律作风方面

通过阅读《毛泽东思想、邓小平理论、三个代表重要思想》、《邓小平文选》（三卷）等5部教材和经典文献，进而增强了自己在政治、思想、组织上与党中央保持高度一致的自觉性。平时注意作风纪律养成，能够自觉遵守条令条例和研究生队的各项管理规定，尊重师长，团结同学，与人为善，力求做到待人接物谦和有序，礼节礼貌周到得体。

二、在专业学术方面

中期筛选自我鉴定 篇7

菊粉 (Inulin) 是由果糖经过β-2, 1果聚糖苷键连接的多聚果糖, 菊粉酶 (Inulinase) 是一种能水解β-2, 1-D-果聚糖糖苷键的一类水解酶, 能生产菊粉酶的微生物包括霉菌、酵母菌、细菌等[1]。微生物产生的菊粉酶能水解大量存在于菊芋等植物块茎中的菊粉, 用于生产果糖浆、低聚果糖、燃料酒精等, 具有十分重要的生产价值和广阔的利用前景[2]。国外从20世纪70年代就开始对菊粉酶的研究, 我国起步较晚[3]。本文报道了产菊粉酶细菌的筛选, 并对高酶活菌株做了菌种鉴定, 为进一步研究奠定了基础。

2 材料与方法

2.1 材料

分离样品:山东威海滨海盐碱地生长菊芋的根际土壤;市售水果。

培养基: (1) 初筛培养基主要是:菊粉10.0g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、NaN O31.5g/L、NH4H2PO4 2.0 g/L、KCl 0.5g/L、FeS O4·7H2O4 0.1g/L、K2HPO4 1.0g/L、琼脂20.0g/L, 初始pH 6.0。 (2) 发酵培养基是菊粉30.0g/L、蛋白胨7.0g/L、NaC l 5.0g/L、K2HPO4·3H2O 3.0g/L, 初始pH 6.0。

2.2 方法

菌种筛选: (1) 透明圈初筛法。取菊芋的根际土壤加入捣碎的菊芋, 常温透气一周左右使其长菌;称取10g分离样品置于内含100m L无菌水和玻璃珠的三角瓶内, 180 r/min, 30℃振荡30 min, 使细胞分散;将土壤悬液稀释为10-1、10-2、10-3三个浓度, 然后每个稀释梯度取0.2m L在以菊粉为唯一碳源的平板上进行涂布分离, 每个稀释度涂布两个平板, 置于30℃的恒温培养箱中培养2—4天, 挑取菌落周围透明圈稍大者进行划线分离, 直至分离到单菌落。 (2) 复筛。将筛选到的菌株由斜面接种到50m L (250m L三角瓶) 液体发酵培养基中, 在30℃、180 r/min培养24小时, 制成种子液;然后按3%的接种量将种子液添加到50m L (250m L三角瓶) 相应液体培养基中, 在30℃、180 r/min条件下进行产酶试验, 定时取样, 4000 r/min离心10min后测定发酵液中的酶活, 从中筛选酶活较高的菌株即可。

菊粉酶活的测定:将发酵液在4000 r/min, 20 min离心去除细菌菌体, 取1m L上清液加入到4m L的2%菊粉溶液 (p H5.0、0.lmol/L醋酸缓冲液配制) 中, 55℃水浴中保温10min;取反应液0.5m L加入1.5m L DNS混匀, 沸水浴中反应5min, 迅速冷却并稀释至25m L, 在540nm下测定其吸光度, 根据葡萄糖标准曲线计算样品中的还原糖含量[4]。定义每分钟产生1μmol还原糖需要的酶量为一个酶活单位 (U/m L) 。

选育细菌的鉴定: (1) 常规鉴定。将试验菌株活化3—4代, 镜检合格后根据细菌分类学研究标准的方法对供试菌株进行形态学观察, 包括细胞形态、有无鞭毛及细胞大小特征, 用光学显微镜观察, 并从平板上挑取单菌落按标准的方法进行革兰氏染色。 (2) 分子鉴定。采用16S r DNA序列分析法。按照SK1201-UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒的说明书提取基因组。扩增16S r DNA的正向引物为7f (5′-CA-GAGTTTGATCCTGGCT-3′) , 反向引物1540r (5′-AG-GAGGTGATCCAGCCGCA-3′) 在25μL的PCR反应体系中含有:Template (基因组) 1μL、Primer up (10u M) 0.5μL、Primer down (10u M) 0.5μL、d NTP mix (10Mm each) 0.5μL、10×Taq reaction Buffer 2.5μL、Taq (5u/μL) 0.2μL。PCR反应参数为预变性94℃5min, 循环94℃30s、55℃35s、72℃1min, 35个循环, 延伸8min。PCR扩增产物由UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒进行琼脂糖切胶纯化后, 由上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定。 (3) 生理生化特征测定。以发酵液液体培养基为基础培养基, 分别配置成不同的盐度 (Na Cl, w/v) 及p H值梯度的培养基, 接种后振荡培养7天, 取培养液用分光光度计在600 nm波长下检测菌株的生长密度。实验设置的温度梯度为10℃、20℃、30℃、40℃、42℃、50℃。当实验温度为30℃时, 绝对盐度 (Na Cl) 梯度为1%、3%、5%、7%、0, p H值梯度为1.0、2.0、3.0、4.0、9.0、10.0。

16S r DNA序列比对及系统发育树构建:将测定的基因序列输入Genbank并运用Blast程序与数据库中已存在的细菌16S r DNA序列进行相似性比较分析;利用MEGA5.0软件绘制系统发育树, 确定其系统发生学地位。

3 结果与分析

3.1 菌株的分离、筛选

本试验以菊粉为惟一碳源, 筛选得产菊粉酶的菌株20株, 其中分离到三株产菊粉酶酶活较高的细菌F1、F2、F3, 将3株菌株分别转接入发酵培养基中, 在30℃、180 r/min的条件下培养2天, 发酵液经离心后获得菌株的粗酶液, 测定其菊粉酶酶活力, 其中F1产菊粉酶酶活力最高, 达1.73 U/m L, 然后选取该菌株进行研究。

3.2 F1菌株的鉴定

常规鉴定:形态观察发现, F1菌株在培养基上的菌落为圆形, 乳白色不透明, 菌落湿润、光滑, 边缘锯齿状。随着培养时间的延长, 菌落上有褶皱状突起, 颜色变为浅黄色;菌体直杆状, 革兰氏染色阳性, 符合芽孢杆菌属形态特征, 表明该菌株为芽孢杆菌 (Bacillus sp.) 。

分子鉴定: (1) PCR产物的检测。PCR实验以后进行琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明, 在1500 bp处有DNA条带, 证明PCR扩增成功, 见图1。 (2) 16S r DNA序列比对和结果分析。经克隆和测序分析后, 得到F1菌株的一段长度为1455bp的16S r DNA序列, 将序列提交到NCBI的Genbank进行Blast比对 (图2) 。序列分析表明, 该菌与Bacillus megaterium、Bacillus aryabhattai、Bacillus horikoshii的序列同源性都高达99%。

3.3 细菌生理生化实验结果

通过生理生化特征的研究表明, 菌株F1最佳绝对盐度 (NaC l) 为7.0%, 生长温度范围20—50℃, 最佳pH值为4.0, 这与芽孢杆菌属中菌株Bacillusmegaterium相符 (表1) , 初步鉴定为Bacillus megaterium。

注:+为阳性;-为阴性;ND为无数据。

4 讨论

在产菊粉酶菌种筛选方面, 国内外有关酵母菌和真菌的报道居多, 有关细菌的研究甚少[8,9,10]。本试验采用以菊粉为唯一碳源的平板划线分离法, 筛选得到产菊粉酶酶活较高的细菌菌株F1。通过对F1的形态观察、16SrD NA序列分析及生理生化实验的研究, 鉴定该菌为Bacillus megaterium;进一步优化Bacillus megaterium的产酶发酵条件、研究其酶学性质、酶的固定化条件并探讨其在工业上的实际应用具有重要意义。

摘要：从山东威海沿海滩涂菊芋生长的根际土壤中分离得到能产菊粉酶的菌株20株, 经过进一步摇瓶复筛, 获得了产菊粉酶活力较高的一株细菌F1, 其发酵液酶活达到1.73U/mL。通过形态学观察、16SrDNA序列分析及生理生化研究, 鉴定该菌为芽孢杆菌属的巨大芽孢杆菌 (bacillus megaterium) 。

关键词：菊粉酶,筛选,菌种鉴定

参考文献

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[2]Fang Gong, Jun Sheng, ZhenmingChi, et al.Inulinase Production by aMarine Yeast Pichia Guilliermondii and Inulin Hydrolysisby the Crude inulinase[J].Jind Microbiolo Biotechnol, 2007, (34) ∶179-185.

[3]Allais J J, Hoyos-Lopez G, Kammoun S, et al.Isolation and Characterization of the Rmophilic Bacterial Strains with Inulinase Activity[J].Appl Environ Microbiol 1987, 53 (5) ∶942-945.

[4]仝瑛, 倪士峰, 刘建利, 等.DNS法测定菊芋中还原糖含量的研究[J].陕西中医, 2009, 30 (11) ∶1535-1537.

[5]刘波.芽孢杆菌文献研究[M].广州:广东旅游出版社, 2006∶1-1679.

[6]Shivaji S, Preeti Chaturvedi, Zareena Begum.JanibacterHoyleispNov Bacillus Isronensis Sp Nov and Bacillus Aryabhattaisp Nov Isolated from Cryotubes Used for Collecting Air from the Upper Atmosphere[J].International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2009, (59) ∶2977-2986.

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[8]王光远, 宋爱荣, 陈冠军.产菊粉酶酵母菌株的筛选及菌种鉴定[J].微生物学杂志, 2006, 26 (4) ∶39-41.

[9]王琳, 刘兆普, 赵耕毛, 等.产菊粉酶菌株的筛选及其产酶条件的优化[J].南京农业大学学报, 2007, 30 (2) ∶73-77.

中期筛选自我鉴定 篇8

关键词 腊肉；乳酸菌；分离；戊糖片球菌；清酒乳杆菌

中图分类号：TS251.1 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2014）11--2

1 试验材料

1.1 试验材料

腊肉：湖南张家界永定食品厂（传统发酵4个月）

1.2 试验试剂

乳酸菌分离培养基：MRS乳酸菌培养基、固体MRS分离培养基。乳酸菌特性鉴定培养基：葡萄糖产气试验用培养基、PY培养基、明胶基础培养基、硝酸盐还原试验培养基、碳水化合物发酵产酸试验用培养基。主要试剂：乳酸菌常规糖醇发酵特性试剂，如七叶灵、半乳糖、甘露糖、山梨糖、松三糖、鼠李糖、等糖（醇）类试剂均为分析纯。购自天津市化学试剂有限公司。

1.3 仪器与设备

高压灭菌锅-SDK-5-6（施都凯仪器设备（上海）有限公司）、超净工作台净化工作台-BJ-2CD （苏州惠尔仪器有限公司）、电热恒温培养箱HK-3HK（上海恒科技有限公司）、722分光光度计（无锡天牧分光光度计有限公司）、pH计（上海兆福科技有限公司）。

2 试验方法

2.1 常规乳酸菌的分离方法

将从湖南张家界购买的腊肉在无菌操作台中准确称量25 g，用消毒后的剪刀将腊肉切碎（越碎越好），放入225 mL的无菌生理盐水（已经灭菌）的三角瓶中，在旋转振荡器（温度为37 ℃）中摇匀，经过4 h之后，即完成稀释为10-1的初样品液，继续吸取1 mL初样品液，加入到经过灭菌的9 mL无菌水中，完成稀释到10-2，按照同样的方法依次稀释到10-3，10-4，10-5，这样就完成了样品的稀释。此后分别依次吸取10-1，10-2，10-3，10-4，10-5样品

稀释液1 mL，放在无菌平板中，（此平板为倒入含碳酸钙的MRS固体培养基37 ℃培养箱中，静置培养24 h。然后从平板中选取单个独立的有透明圈的菌落，然后（在选取菌落时，尽量选择与其它菌落距离较远，彼此没有任何接触的菌落）进行革兰氏染色试验，以此判断所得到的菌种是革兰氏阳性菌还是阴性菌，革兰氏阴性菌则灭菌后废弃，如果是革兰氏阳性菌，则继续试验。将分离得到的革兰氏阳性菌在MRS琼脂平板上划线培养，在37 ℃条件下静置培养24 h，为得到纯菌种需要反复重复以上操作，直到得到满意的纯菌落为止[1]。

2.2 所得菌种的生理生化特性鉴定试验

将上述得到的菌种，在经过了增菌培养后，制备成供试菌液。然后分别对其进行发酵产物pH试验、最适生长温度试验、菌种的耐盐性试验、菌种的接触酶测定试验、菌种明胶液化测验、菌种硝酸盐还原能力试验、菌种淀粉水解能力试验、菌种的碳水化合物水解和发酵特性试验[2]。

2.3 菌种的生化特性鉴定试验采用文献的方法[3]

主要参考资料为东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版）作为主要参考依据。

3 结果与分析

3.1 分离得到的乳酸菌鉴定结果

从湖南张家界产的腊肉中分离得到了四种乳酸菌，其菌种的形态特征见表1，生化试验鉴定结果见表2，糖醇发酵特性试验结果见表3

3.2 发酵产物乳酸的定性检测（纸层析法）

由表2可知，菌株MRS培养基发酵液与标准的乳酸纸层析具有近似的纸层析Rf值，这说明菌株LR17 、菌株 LR28、 菌株 LR65、菌株LR89发酵产物都是乳酸。

3.3 分离得到乳酸菌的生化鉴定试验结果

根据四株乳酸菌的表型特征和生化鉴定结果，并参考东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版），初步认定LR17和LR65为戊糖片球菌，LR28和LR89是清酒乳杆菌。

4 结论

通过对湖南张家界地产腊肉进行分离后得到了4株乳酸菌，对其进行的发酵产酸试验确定为乳酸。对其进行的发酵特性试验后确定它们都符合发酵肉制品发酵剂的特性，可以作为发酵肉制品的发酵剂来使用。最终通过糖醇发酵特性，初步判断菌株LR17菌株LR65为戊糖片球菌，菌株LR28菌株LR89为清酒乳杆菌。

参考文献

[1]凌代文，东修珠.乳酸细菌分类鉴定及实验方法[J].北京农业，2013（6）.

[2]东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001.

[3]Buchanan R E.伯杰氏系统细菌学手册[M].北京：中国科学出版社，1984.

（责任编辑：刘昀）endprint

摘 要 从湖南省张家界传统腊肉中分离到的4株乳酸菌，发酵产物均为乳酸，通过发酵特性试验，发现4株菌都具有较好的发酵特性，通过基本上符合发酵肉制品生产的要求。4株乳酸菌的生化鉴定结果表明，菌株LR17菌株LR65为戊糖片球菌，菌株LR28菌株LR89为清酒乳杆菌。

关键词 腊肉；乳酸菌；分离；戊糖片球菌；清酒乳杆菌

中图分类号：TS251.1 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2014）11--2

1 试验材料

1.1 试验材料

腊肉：湖南张家界永定食品厂（传统发酵4个月）

1.2 试验试剂

乳酸菌分离培养基：MRS乳酸菌培养基、固体MRS分离培养基。乳酸菌特性鉴定培养基：葡萄糖产气试验用培养基、PY培养基、明胶基础培养基、硝酸盐还原试验培养基、碳水化合物发酵产酸试验用培养基。主要试剂：乳酸菌常规糖醇发酵特性试剂，如七叶灵、半乳糖、甘露糖、山梨糖、松三糖、鼠李糖、等糖（醇）类试剂均为分析纯。购自天津市化学试剂有限公司。

1.3 仪器与设备

高压灭菌锅-SDK-5-6（施都凯仪器设备（上海）有限公司）、超净工作台净化工作台-BJ-2CD （苏州惠尔仪器有限公司）、电热恒温培养箱HK-3HK（上海恒科技有限公司）、722分光光度计（无锡天牧分光光度计有限公司）、pH计（上海兆福科技有限公司）。

2 试验方法

2.1 常规乳酸菌的分离方法

将从湖南张家界购买的腊肉在无菌操作台中准确称量25 g，用消毒后的剪刀将腊肉切碎（越碎越好），放入225 mL的无菌生理盐水（已经灭菌）的三角瓶中，在旋转振荡器（温度为37 ℃）中摇匀，经过4 h之后，即完成稀释为10-1的初样品液，继续吸取1 mL初样品液，加入到经过灭菌的9 mL无菌水中，完成稀释到10-2，按照同样的方法依次稀释到10-3，10-4，10-5，这样就完成了样品的稀释。此后分别依次吸取10-1，10-2，10-3，10-4，10-5样品

稀释液1 mL，放在无菌平板中，（此平板为倒入含碳酸钙的MRS固体培养基37 ℃培养箱中，静置培养24 h。然后从平板中选取单个独立的有透明圈的菌落，然后（在选取菌落时，尽量选择与其它菌落距离较远，彼此没有任何接触的菌落）进行革兰氏染色试验，以此判断所得到的菌种是革兰氏阳性菌还是阴性菌，革兰氏阴性菌则灭菌后废弃，如果是革兰氏阳性菌，则继续试验。将分离得到的革兰氏阳性菌在MRS琼脂平板上划线培养，在37 ℃条件下静置培养24 h，为得到纯菌种需要反复重复以上操作，直到得到满意的纯菌落为止[1]。

2.2 所得菌种的生理生化特性鉴定试验

将上述得到的菌种，在经过了增菌培养后，制备成供试菌液。然后分别对其进行发酵产物pH试验、最适生长温度试验、菌种的耐盐性试验、菌种的接触酶测定试验、菌种明胶液化测验、菌种硝酸盐还原能力试验、菌种淀粉水解能力试验、菌种的碳水化合物水解和发酵特性试验[2]。

2.3 菌种的生化特性鉴定试验采用文献的方法[3]

主要参考资料为东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版）作为主要参考依据。

3 结果与分析

3.1 分离得到的乳酸菌鉴定结果

从湖南张家界产的腊肉中分离得到了四种乳酸菌，其菌种的形态特征见表1，生化试验鉴定结果见表2，糖醇发酵特性试验结果见表3

3.2 发酵产物乳酸的定性检测（纸层析法）

由表2可知，菌株MRS培养基发酵液与标准的乳酸纸层析具有近似的纸层析Rf值，这说明菌株LR17 、菌株 LR28、 菌株 LR65、菌株LR89发酵产物都是乳酸。

3.3 分离得到乳酸菌的生化鉴定试验结果

根据四株乳酸菌的表型特征和生化鉴定结果，并参考东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版），初步认定LR17和LR65为戊糖片球菌，LR28和LR89是清酒乳杆菌。

4 结论

通过对湖南张家界地产腊肉进行分离后得到了4株乳酸菌，对其进行的发酵产酸试验确定为乳酸。对其进行的发酵特性试验后确定它们都符合发酵肉制品发酵剂的特性，可以作为发酵肉制品的发酵剂来使用。最终通过糖醇发酵特性，初步判断菌株LR17菌株LR65为戊糖片球菌，菌株LR28菌株LR89为清酒乳杆菌。

参考文献

[1]凌代文，东修珠.乳酸细菌分类鉴定及实验方法[J].北京农业，2013（6）.

[2]东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001.

[3]Buchanan R E.伯杰氏系统细菌学手册[M].北京：中国科学出版社，1984.

（责任编辑：刘昀）endprint

摘 要 从湖南省张家界传统腊肉中分离到的4株乳酸菌，发酵产物均为乳酸，通过发酵特性试验，发现4株菌都具有较好的发酵特性，通过基本上符合发酵肉制品生产的要求。4株乳酸菌的生化鉴定结果表明，菌株LR17菌株LR65为戊糖片球菌，菌株LR28菌株LR89为清酒乳杆菌。

关键词 腊肉；乳酸菌；分离；戊糖片球菌；清酒乳杆菌

中图分类号：TS251.1 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2014）11--2

1 试验材料

1.1 试验材料

腊肉：湖南张家界永定食品厂（传统发酵4个月）

1.2 试验试剂

乳酸菌分离培养基：MRS乳酸菌培养基、固体MRS分离培养基。乳酸菌特性鉴定培养基：葡萄糖产气试验用培养基、PY培养基、明胶基础培养基、硝酸盐还原试验培养基、碳水化合物发酵产酸试验用培养基。主要试剂：乳酸菌常规糖醇发酵特性试剂，如七叶灵、半乳糖、甘露糖、山梨糖、松三糖、鼠李糖、等糖（醇）类试剂均为分析纯。购自天津市化学试剂有限公司。

1.3 仪器与设备

高压灭菌锅-SDK-5-6（施都凯仪器设备（上海）有限公司）、超净工作台净化工作台-BJ-2CD （苏州惠尔仪器有限公司）、电热恒温培养箱HK-3HK（上海恒科技有限公司）、722分光光度计（无锡天牧分光光度计有限公司）、pH计（上海兆福科技有限公司）。

2 试验方法

2.1 常规乳酸菌的分离方法

将从湖南张家界购买的腊肉在无菌操作台中准确称量25 g，用消毒后的剪刀将腊肉切碎（越碎越好），放入225 mL的无菌生理盐水（已经灭菌）的三角瓶中，在旋转振荡器（温度为37 ℃）中摇匀，经过4 h之后，即完成稀释为10-1的初样品液，继续吸取1 mL初样品液，加入到经过灭菌的9 mL无菌水中，完成稀释到10-2，按照同样的方法依次稀释到10-3，10-4，10-5，这样就完成了样品的稀释。此后分别依次吸取10-1，10-2，10-3，10-4，10-5样品

稀释液1 mL，放在无菌平板中，（此平板为倒入含碳酸钙的MRS固体培养基37 ℃培养箱中，静置培养24 h。然后从平板中选取单个独立的有透明圈的菌落，然后（在选取菌落时，尽量选择与其它菌落距离较远，彼此没有任何接触的菌落）进行革兰氏染色试验，以此判断所得到的菌种是革兰氏阳性菌还是阴性菌，革兰氏阴性菌则灭菌后废弃，如果是革兰氏阳性菌，则继续试验。将分离得到的革兰氏阳性菌在MRS琼脂平板上划线培养，在37 ℃条件下静置培养24 h，为得到纯菌种需要反复重复以上操作，直到得到满意的纯菌落为止[1]。

2.2 所得菌种的生理生化特性鉴定试验

将上述得到的菌种，在经过了增菌培养后，制备成供试菌液。然后分别对其进行发酵产物pH试验、最适生长温度试验、菌种的耐盐性试验、菌种的接触酶测定试验、菌种明胶液化测验、菌种硝酸盐还原能力试验、菌种淀粉水解能力试验、菌种的碳水化合物水解和发酵特性试验[2]。

2.3 菌种的生化特性鉴定试验采用文献的方法[3]

主要参考资料为东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版）作为主要参考依据。

3 结果与分析

3.1 分离得到的乳酸菌鉴定结果

从湖南张家界产的腊肉中分离得到了四种乳酸菌，其菌种的形态特征见表1，生化试验鉴定结果见表2，糖醇发酵特性试验结果见表3

3.2 发酵产物乳酸的定性检测（纸层析法）

由表2可知，菌株MRS培养基发酵液与标准的乳酸纸层析具有近似的纸层析Rf值，这说明菌株LR17 、菌株 LR28、 菌株 LR65、菌株LR89发酵产物都是乳酸。

3.3 分离得到乳酸菌的生化鉴定试验结果

根据四株乳酸菌的表型特征和生化鉴定结果，并参考东秀珠主编的《常见细菌系统鉴定手册》、凌代文主编的《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰氏细菌手册》（第九版），初步认定LR17和LR65为戊糖片球菌，LR28和LR89是清酒乳杆菌。

4 结论

通过对湖南张家界地产腊肉进行分离后得到了4株乳酸菌，对其进行的发酵产酸试验确定为乳酸。对其进行的发酵特性试验后确定它们都符合发酵肉制品发酵剂的特性，可以作为发酵肉制品的发酵剂来使用。最终通过糖醇发酵特性，初步判断菌株LR17菌株LR65为戊糖片球菌，菌株LR28菌株LR89为清酒乳杆菌。

参考文献

[1]凌代文，东修珠.乳酸细菌分类鉴定及实验方法[J].北京农业，2013（6）.

[2]东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001.

[3]Buchanan R E.伯杰氏系统细菌学手册[M].北京：中国科学出版社，1984.

抗镉细菌的筛选鉴定及其抗性研究 篇9

抗镉细菌的筛选鉴定及其抗性研究

摘要：采用含CdC12的选择性培养基从16株抗汞细菌中筛选到1株具有较强抗重金属能力的菌株(CDB34),该菌在含Hg2+浓度为600mg/L和含Cd2+浓度为1200mg/L的.固体培养基中都能正常生长,在液体培养基中对Cd2+的最大耐受浓度为700mg/L.在Cd2+浓度为50mg/L的溶液中,菌株对Cd2+的吸附率为74.23%,吸附量为61.86mg/g.根据形态特征、生理生化特性及1 6S rDNA序列分析,鉴定菌株CDB34为Aeromonas hydrophila.作 者：郑晓丹 周金福 许旭萍 作者单位：教育部工业微生物工程研究中心,福建师范大学生命科学学院,福建,福州,350108期 刊：安徽农学通报 Journal：ANHUI AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN年，卷(期)：2010,16(4)分类号：X835关键词：抗镉菌株 Aoromonas hydrophila 生物吸附

中期筛选自我鉴定 篇10

从热带太平洋的生物、海水、沉积物样品中分离到细菌、酵母和霉菌共475株.选择8个指示菌并采用圆形纸片法对分离菌株的发酵液进行抗菌和抗肿瘤活性筛选,获得20个具有抗菌和/或抗肿瘤活性的微生物菌株.细菌、酵母和霉菌活性菌株的筛选得率都比较低,分别为5.4%、2.2%和3.4%,其原因可能与纸片的发酵液的添加量较少和菌株发酵条件的.控制有关.同时采用分子生物学方法鉴定了活性菌株,除4株未有结果外,其余菌株分归为9个属,其中芽孢杆菌属7株、占活性菌株的35%,盐单胞菌属2株、占10%,其它菌属各1株、占5%.抑菌谱分析表明,大多数活性菌株对革兰氏阳性细菌具有抑制作用,而来源于鱼体的菌株抑菌谱较广,对细菌、真菌均有拮抗作用,另外还发现一株酵母(Rhodosporidium toruloides)可抑制金黄色葡萄球菌.作者提出“活性指示(activity index)”参数,对活性菌株的抗菌谱和活性强度进行综合评估,也表明源于鱼体的菌株的活性指示值较高.这4株芽孢杆菌尤其是DY-Y-11A1A菌株,具有潜在的后续开发价值.

作 者：王祥敏 李明 骆祝华 孙佳 黄翔玲 叶德赞 WANG Xiang-min LI Ming LUO Zhu-hua SUN Jia HUANG Xiang-ling YE De-zan 作者单位：王祥敏,WANG Xiang-min(厦门大学生命科学学院,福建,厦门,361005;国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室,福建,厦门,361005;国家海洋局第三海洋研究所,福建,厦门,361005)

李明,骆祝华,孙佳,黄翔玲,叶德赞,LI Ming,LUO Zhu-hua,SUN Jia,HUANG Xiang-ling,YE De-zan(国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室,福建,厦门,361005;国家海洋局第三海洋研究所,福建,厦门,361005)

中期筛选自我鉴定 篇11

关键词：纤维素降解菌；分离；纤维素酶活；鉴定

中图分类号：Q939.9文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0393-02

随着我国养牛行业的发展，牛存栏量也逐年增加。根据调查显示，2009年我国奶牛存栏量达1260万头，2010年的存栏量达1420.1万头。存栏量为200～2000头的肉奶牛基地，每天可产生的牛粪在5～50t[1]。未经处理的牛粪随意堆放，不仅造成了人们的视觉污染，而且对大气、土壤、水造成了很大污染。相较于其他畜禽粪便，牛粪含纤维素、半纤维素等有机难降解物质比较多，自然降解时间长[1-2]。

针对牛粪中含纤维素较多且自然降解时间长的特点，本试验将降解纤维素能力强的菌株分离筛选出来，以期用于后续的牛粪堆肥试验缩短牛粪堆肥发酵时间。

1材料与方法

1.1样品采集

土壤样品采自沈阳建筑大学树林落叶堆积处；牛粪样品采自本溪木兰花牛场的鲜牛粪、腐熟牛粪、堆积1年的牛粪。落叶堆积处取样时，在土层5～10cm处进行采样，平面采样用“之”字形取样，剖面取样采用定点取土[3]。

1.2培养基

培养基为：牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基、高氏合成一号、刚果红纤维素钠筛选培养基、滤纸条液体培养基、羧甲基纤维素钠培养基、牛肉膏蛋白胨酪素培养基、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）液体发酵培养基[3]、豆饼粉液体发酵培养基。

1.3试验方法

1.3.1纤维素降解菌的富集分别称取5g不同的采集样品，置于45mL装有玻璃珠无菌水的三角瓶中，放入30℃、120r/min的摇床，培养1d。

1.3.2纤维素降解菌的筛选（1）初筛：用稀释涂布平板法，将10-7～10-4浓度的菌液涂于刚果红纤维素钠筛选培养基上，将平板分别放入30、50℃恒温箱培养4d，挑取明显的单菌落在PDA培养基上进行划线纯化，将纯化好的菌种接入PDA培养基斜面保存。（2）复筛：将纯化好的菌株点接到羧甲基纤维素钠培养基上，放入30、50℃培养4d，用刚果红染液进行染色，量取菌圈直径（d）和透明圈直径（D），并计算透明圈直径与菌圈直径比值D/d，选取D/d值与D值大的菌接入滤纸条液体培养基中，进行滤纸条崩溃试验，观察滤纸条崩溃的快慢和程度。选取使滤纸条崩溃程度大的菌，分别接种于CMC-Na液体发酵培养基、豆饼粉液体发酵培养基上，培养64h，测定纤维素酶活性。

1.3.3粗酶液的制备取发酵液倒入离心管中，3000r/min下离心10min，上清液即为粗酶液。

1.3.4纤维素酶活性测定[4-5]（1）羧甲基纤维素酶（CMCase）活性测定：根据GB20287—2006《农用微生物菌剂》进行羧甲基纤维素酶活测定；（2）滤纸酶（FPA）活性测定：根据NY/T1847—2010《微生物肥料生产菌株质量评价通用技术要求》进行滤纸酶活性测定。

1.3.5纤维素降解菌的初步鉴定[6-7]对筛选出的菌株菌落形态及显微镜下的形态进行观察，并进行生理生化试验。通过对照伯杰氏手册完成对菌株的初步鉴定。

2结果与分析

2.1菌种初筛

通过刚果红纤维素钠筛选培养基的筛选，共获得21株菌，其中从土壤中分离出来的菌有9株，都为常温菌；从牛粪中共分离出来12株菌，其中常温菌6株，高温菌6株。将分离出来的菌在PDA培养基划线纯化后接种到PDA斜面保存，待用。

2.2菌种复筛

用刚果红染色羧甲基纤维素钠与滤纸条崩溃试验进行菌种复筛，测试菌株的纤维素降解能力，详见表1。王志超等认为D/d值超过2.5的菌株纤维素酶活性高[8]。也有人认为，D>2cm时，酶活较高。从表1可以看出，菌株P1、HN1的D/d值超过了2.5，且透明圈直径D大于2cm；菌株P3、HP2、TG1、TG4的D/d值接近2.5，且透明圈直径D大于或接近2cm，纤维素酶活性也相对比较高。

选用P1、HN1、TG1、HP2、P3做滤纸条崩溃试验，试验结果见表2。由表2可以看出，接种TG1滤纸条崩溃得最快最明显，P1最不明显。

综合刚果红染色羧甲基纤维素钠与滤纸条崩溃试验，筛选出HN1、TG1、HP2、P34株菌进行后续纤维素酶活性的定量测定与菌株的初步鉴定。

2.3纤维素酶活性的测定结果

将筛选得到的4株菌分别接入CMC-Na液体发酵培养基、豆饼粉液体发酵培养基中，培养64h，对其进行CMCase酶活性和FPA酶活性的測定，结果见表3。

由表3可以看出，TG1在CMC-Na液体发酵培养基中产生的酶活性要高于其在豆饼粉液体发酵培养基中的；HN1、HP2、P3这3株菌在豆饼粉液体发酵培养基中的酶活性要高些，可以在后续的发酵优化试验中作为参考菌株。

2.4纤维素降解菌的初步鉴定结果

2.4.1TG1鉴定结果（1）菌落特征：在高氏合成一号培养基上长的比较快，菌落为圆形，中间凸起，初期为白色，之后菌落出现灰色粉末物质，易被挑取，有强烈的土腥味。（2）显微观察结果：革兰氏染色为阳性，可看到孢子丝呈直形。根据以上试验结果初步鉴定TG1为放线菌。

2.4.2P3鉴定结果（1）菌落特征：菌落在牛肉膏蛋白胨培养基上干燥，呈半透明、边缘不规则状，培养基背面微发黄，有一定黏度，不易挑取。（2）显微观察结果：菌株P3呈短杆状，有芽孢生成。（3）生理生化试验结果：菌株P3为好氧菌，革兰氏染色为阳性，生长最适温度为25～30℃，可使明胶液化，V-P反应与甲基红试验呈阳性，可降解淀粉，产过氧化氢酶，能还原硝酸盐，可在0～7%盐浓度中生长，能利用柠檬酸盐，不可利用丙酸盐，在初始pH值为9的培养基中生长良好。根据以上试验结果初步鉴定P3为枯草芽孢杆菌。

nlc202309032137

2.4.3HN1鉴定结果（1）菌落特征：菌落在牛肉膏蛋白胨培养基上呈乳白色，圆形，不透明，边缘为波浪状，有褶皱，有黏度，不易挑取。（2）显微观察结果：菌株HN1呈短杆状，芽孢中生。（3）生理生化试验结果：菌株HN1为好氧菌，革兰氏染色为阳性，生长最适温度为45～50℃，可使明胶液化，V-P反应呈阳性，甲基红试验呈阴性，可降解淀粉，产过氧化氢酶，能还原硝酸盐，可在0～7%盐浓度中生长，能利用柠檬酸盐，不可利用丙酸盐，不能在厌氧环境中生长，在初始pH值为8～9的培养基中生长良好。根据以上试验结果，初步鉴定HN1为枯草芽孢杆菌。

2.4.4HP2鉴定结果（1）菌落特征：菌落在牛肉膏蛋白胨培养基上长势良好，菌落呈大片状，向外扩张，不透明，背面呈现红色，易挑取。（2）显微观察结果：菌株HP2呈短杆状，芽孢端生。（3）生理生化试验结果：菌株HP2可在有氧环境中生长，也可在厌氧条件下生长，在厌氧环境中生长产生红色色素，革兰氏染色为阳性，生长最适温度为45～50℃，可使明胶液化，V-P反应与甲基红试验呈阳性，产过氧化氢酶，能还原硝酸盐，可在0～7%盐浓度中生长，能利用柠檬酸盐与丙酸盐，在初始pH值为8～9的培养基中生长良好。根据以上试验结果，初步鉴定HP2为地衣芽孢杆菌。

3结论与讨论

本试验从腐熟的牛粪与土壤中共分离出21株对纤维素有分解能力的菌株，土壤中分离出的9株菌均为常温菌，牛粪中分离出6株高温菌和6株常温菌。通过刚果红染色羧甲基纖维素钠与滤纸条崩溃试验进行复筛，筛选出4株对纤维素降解能力强的菌株。

用2种基础发酵培养基对筛选出的4株菌进行纤维素酶活性的定量测定，发现菌株P3、HN1、HP2在豆饼粉发酵培养基中的酶活性较高，TG1在CMC-Na发酵培养基中的酶活性较高，在下一步进行发酵培养基优化中可做参考。FPA酶活与CMCase活性高低不一致，说明降解纤维素的酶是一种纤维素复合酶。经初步鉴定，HP2为地衣芽孢杆菌；P3、HN1为枯草芽孢杆菌；TG1为放线菌。在牛粪降解菌中的细菌多为芽孢杆菌[9]，这与本试验结果一致。

参考文献：

[1]任平，赵文娟，张强，等.不同微生物酶对牛粪堆肥腐熟的影响[J].安徽农业科学，2010，38（5）：2525-2526，2592.

[2]方华舟，王培清.牛粪堆肥各阶段主要纤维素降解菌分离与作用规律分析[J].中国土壤与肥料，2012（6）：88-92.

[3]孙一博.高效纤维素降解菌的筛选鉴定及特性研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2013：1-53.

[4]GB20287—2006农用微生物菌剂[S].

[5]NY/T1847—2010微生物肥料生产菌株质量评价通用技术要求[S].

[6]中国科学院微生物研究所细菌分类组.一般细菌常用鉴定方法[M].北京：科学出版社，1978.

[7]布坎南RE，吉布斯NE.伯杰细菌鉴定手册[M].8版.北京：科学出版社，1984

[8]王志超，陆文静，王洪涛.好氧堆肥中高温纤维素分解菌的筛选及性状研究[J].北京大学学报：自然科学版，2006，42（2）：259-264.

[9]刘佳，李婉，许修宏，等.接种纤维素降解菌对牛粪堆肥微生物群落的影响[J].环境科学，2011，32（10）：3073-3081.