薄层色谱基础知识（精选9篇）
薄层色谱基础知识 篇1
白术薄层鉴别方法验证方案
一、试液的配制
1、重现性 取相同的供试品、对照药材溶液，由两名检验员同时做，做薄层鉴别实验，由色谱图实验结果，验证其重现性。
2、专属性 取相同的供试品、对照药材溶液，利用正己烷试剂作为空白溶液，做薄层鉴别实验，由薄层色谱图结果，验证其专属性。
3、耐用性 按1、2方法下做薄层色谱实验，分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G薄层板，由薄层色谱图结果，验证其耐用性。
白附子薄层鉴别方法验证方案
一、试液的配制
1、重现性 取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液，由两名检验员同时做，做薄层鉴别实验，由色谱图实验结果，验证其重现性。
2、专属性 取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液，利用丙酮试剂作为空白溶液，做薄层鉴别实验，由薄层色谱图结果，验证其专属性。
3、耐用性 按1、2方法下做薄层色谱实验，分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G薄层板，由薄层色谱图结果，验证其耐用性。
五味子薄层鉴别方法验证方案
一、试液的配制
1、重现性 取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液，由两名检验员同时做，做薄层鉴别实验，由色谱图实验结果，验证其重现性。
2、专属性 取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液，利用三氯甲烷试剂作为空白溶液，做薄层鉴别实验，由薄层色谱图结果，验证其专属性。
3、耐用性 按1、2方法下做薄层色谱实验，分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G薄层板，由薄层色谱图结果，验证其耐用性。
HPLC法测五味子中五味子醇甲方法验证方案
一、标准曲线的制定 利用已知纯度的对照品溶液，设计5个不同浓度，每个浓度制定一份供试品溶液，进行测定，以峰面积作为Y轴，浓度为X轴，并进行线性回归，得出回归方程，得出相关系数r。
二、方法的验证
1、准确度的测定 用已知浓度的对照品溶液，利用加样回收率实验的方法，制备不同浓度的溶液6份，计算回收率的大小，并计算出RSD的大小。
2、精密度的测定 取一批原药材，分别制成6份溶液，测定峰面积，计算平均值，并计算出RSD大小。
3、专属性 采用纯甲醇试剂作为空白样品，连续进样三针，有色谱图结果，考察是否有干扰。
4、检验结果考察 取一批原药材，分别制成3份溶液，分别进样一针，并计算出结果，确定方法的可靠性。
薄层色谱基础知识 篇2
1.1 地位和作用
教材地位:仪器分析注重应用, 实践性较强, 是一门应用广泛的工具学科, 是联系医学基础课 (医用化学、分析化学、生物化学) 和医学检验专业课的重要基础课程。
课题地位:薄层色谱是《仪器分析》教材第八章“液相色谱法”中的第三节内容[1], 是本章的重点内容之一。本节是在学习了柱色谱的基础上对色谱分离的进一步学习, 后一节还安排了纸色谱法, 薄层色谱法兼备柱色谱和纸色谱的优点, 在本章中起承前启后的作用。通过薄层色谱的学习, 能够提高学生分析、解决实际问题能力。
1.2 教学目标
(1) 知识目标:
(1) 让学生能说出薄板的制备方法;
(2) 掌握薄层色谱的基本原理、操作方法;
(3) 能应用薄层色谱法解决实际工作中常见的定性鉴别及定量分析问题。
(2) 能力目标:
(1) 通过课堂学习使学生初步学会运用概括、归纳、总结, 具备自学、独立分析和推理能力;
(2) 具备运用仪器分析理论知识解释和解决实际问题的能力。
(3) 素质培养目标:
(1) 具有认真细致、严谨的工作态度和实事求是的工作作风;
(2) 具有良好的职业素养和社会责任感;
(3) 具有创新意识和团队协作精神。
1.3 重点、难点
根据教学大纲要求, 以及本次教学内容的特点和学生的实际情况, 确定本次授课的重点、难点如下:
(1) 重点:薄层色谱的基本原理、操作方法;
(2) 难点:薄层色谱的基本原理、有关基本概念。
突破办法:采取循序渐进的方法, 在已掌握色谱知识的基础上学习薄层色谱的新知识。
2 说教法及学法
2.1 学情分析
(1) 学生情况:授课对象是检验系大专一年级学生, 文理兼招, 知识水平尤其是化学基础参差不齐, 接受知识能力存在很大差异, 但学生学习热情普遍较高。
(2) 应对措施:
(1) 循序渐进, 突出重点、突破难点;
(2) 课堂讲授与讨论、课后练习与应用相结合;
(3) 注重学生实验操作能力培养。
2.2 教法
“教无定法, 贵在得法”, 选择有效的教学方法是取得良好教学效果的保证。根据本次授课内容及学生具备较强形象思维能力和一定抽象思维能力的实际, 本次课以实验探究法、启发式精讲为主, 穿插使用提问法、归纳法、讨论法、推导法、演示法、举例法、自学法、列表法、图示法等方法, 以多媒体、板书等教学手段作为辅助。教师通过指导实验, 以丰富的感性材料, 激发学生的学习兴趣, 引导学生积极思考, 充分调动学习积极性, 真正体现“教为主导, 学为主体”[2]的教学原则。
2.3 学法
常言道“授人以鱼, 不如授人以渔[2]”。教学中主要通过启发, 引导学生通过列表比较、自学归纳、推导等方法达到最佳学习和记忆效果。
2.4 教学资源
主要包括各种化学器材、仪器分析教材及精品课程网站, 引导学生通过查阅课外资料、利用网络资源寻找问题的答案, 以此来培养他们的创新意识和创新能力, 为其将来解决实际工作中可能遇到的问题打好基础。
3 说教学环节设计
3.1 总体设计原则
体现“主导和主体性教学原则”和“以人为本、全面发展”理念, 让学生充分展示自己的才华和绽放自己的个性[3]。坚持“必需、够用、管用”原则, 深入浅出, 理论联系实际培养高素质技能型人才。
3.2 具体设计
(一) 导入新课 (提问法, 任务驱动法)
(1) 复习第八章1～2节内容, 提问:色谱法按操作形式分为哪几种类型?
(2) 采用图片展示一瓶混合染料 (甲基黄和罗丹明B的混合溶液) , 提问导入新课[1]:通过前面的学习, 知道了柱色谱的分离原理等知识, 那么今天我们要学习的是与柱色谱不同形式的平面色谱即薄层色谱, 如何利用薄层色谱分离甲基黄和罗丹明B呢?
设计意图:温故知新, 承前启后;通过提出任务驱动, 引发学生的求知欲望, 调动学生的学习积极性和主动性, 启发式引导学生进行薄层色谱的探究学习。
(二) 讲授新课
第三节:薄层色谱
导入 (实验演示法、对比法、PBL法) :教师演示一个小实验, 课前10分钟教师已完成利用薄层色谱分离混合染料的薄板画线→点样→蒸汽饱和→展开, 上课开始提问:结合柱色谱知识思考上述分离会出现怎样的结果?
提出问题:如何利用薄层色谱进行混合染料的分离?原理是什么?操作方法是什么?这种方法有哪些具体应用?
展示一个没有经过分离的样点和另一事先已展开的薄板分离的结果, 发现未经薄层色谱分离的样点是一个暗斑点, 而展开的薄板上则显示原本混合在一起的两种不同物质已完全分离成为黄色和紫色2个圆斑点。通过比较2种不同结果, 引出新课的学习:按照薄层色谱的定义→分离原理→固定相和展开剂→操作方法→定性分析→定量分析→应用思路进行教学。
设计意图:实验演示后, 学生充满好奇, 产生浓厚兴趣, 有强烈的求知欲, 带着问题展开讨论, 吸引其注意力, 自然地进入新课的学习。
(1) 薄层色谱定义 (讨论法、归纳法) 。
设计意图:根据刚才教师的实验操作, 小组讨论, 归纳总结, 并请学生代表讲出薄层色谱定义, 教师加以归纳纠正, 学生热情较高。
(2) 薄层色谱的特点 (比较法) 。
设计意图:与前面所学柱色谱和后续纸色谱法对比, 简单明了, 学生易于接受。
(3) 薄层色谱分离原理 (启发式讲授法、比较法、图示法、练习法) 。
继续上述实验, 取出已展好的薄板→画出溶剂前沿线→圈出斑点中心位置→计算比移值。
结合实物图展示的薄板分离成2种单组分染料的结果, 与前面所学柱色谱进行对比, 讲授薄层色谱分离原理, 并引出比移值的学习。
提问:如何计算组分的Rf值?共同讨论给出计算公式和结果 (见图1) 。
在黑板上展示几种不同物质展开薄板图, 要求学生自己练习计算比移值, 增强对比移值的理解。
(4) 固定相 (自学法、比较法) 。
教师在多媒体屏幕上展示不同类型的硅胶, 请学生来对应连线, 检查其自学能力。并指出薄层色谱法固定相更细, 分离效能更高, 可根据分析条件和要求选择。
多媒体展示如下:
硅胶G含荧光指示剂的硅胶
硅胶F含煅石膏的硅胶
硅胶H不含粘合剂的硅胶
硅胶GF254加羧甲基纤维素的硅胶
硅胶CMC加煅石膏和荧光剂的硅胶
设计意图:通过学生自学及连线练习, 加深对不同类型硅胶性质的理解和记忆。
(5) 展开剂 (图示法、列表法) 。
展开剂的选择原则:相似相溶。
展开剂的组成 (对正相色谱) 不同成分的含量及作用见表1。
综合考虑被分离组分、吸附剂和展开剂的关系, 可用薄层色谱条件选择图讲授吸附剂和展开剂的选择, 通过图示讲解 (见图2) , 学生较易接受。
在讲解的基础上给出被分离组分的极性, 要求学生选择合适的吸附剂和展开剂并填写表2, 这样能检验学生对三者关系的掌握情况, 加深对这一知识点的理解。
(6) 操作方法 (演示法、讨论法) 。
由于薄层色谱的操作是本次课的重点, 先用多媒体课件播放薄层色谱操作的视频, 根据实验演示的操作, 教师提问薄层色谱有哪几个步骤?每步该如何操作?在教师的引导下, 学生概括出制板 (软板和硬板) →点样→展开→显色几个步骤。教师再分步骤详细讲解。
点样:由样品的溶解 (溶剂和浓度) →点样方式→点样位置 (图示法, 见图3) →点样量 (斑点直径大小) →晾干并强调点样方法 (分次点样) 和注意事项 (距底边1.5～2.0 cm, 2个样点间距约1～1.5 cm) 。
设计意图:通过图示, 更直观形象;按照循序渐进的原则, 让学生较好地掌握点样操作。
展开 (图示法、演示法、推导法、讨论法) :利用课件展示几种展开缸及展开方式 (见图4) , 直观明了, 学生易于接受。并讨论、推导得出展开注意事项。
显色 (比较法、列表法、举例法) :通过比较讲授有荧光的物质、紫外吸收及无荧光、紫外吸收等不同物质的显色方法, 并列表举例说明 (见表3) , 增强学生记忆效果。
(7) 定性分析。
紧扣物质的Rf进行定性分析。
(8) 定量分析 (图示法) 。
定量分析法主要包括目视比色法、斑点洗脱法和薄层扫描法3种常用方法。在教学中借助图示法讲授薄层扫描法的原理 (见图5) 和仪器基本结构框架 (见图6) 。由光源照射薄板引起光的变化, 利用对应的检测器对不同光进行检测, 即能较好地理解薄层扫描法的原理, 尤其是不同薄层扫描测定方式的理解。
设计意图:结合图示, 通过教师的讲和学生的思考共同完成教学任务。
(9) 应用 (举例法) 。
利用薄层扫描进行定性和定量, 目的是引入具体应用的学习。主要采用实例讲授薄层色谱的应用。薄层色谱可广泛应用于各类药物的定性鉴别、纯度检查和药物代谢、生化及抗生素研究、尿液有机酸的检验、药物中毒者尿液的检测等。如对乙酰氨基酚中毒可用薄层色谱扫描快速检测。通过教师对多媒体展示的氨基酸及农药残留量分析等实例的讲解, 引导学生分析、思考、解决问题。
(三) 归纳总结 (归纳法、提问法)
教师运用多媒体展示重要知识点, 提出问题, 引导学生回忆并归纳小结, 教师再作适当的补充, 起画龙点睛的作用, 使学生更好地掌握本节课内容。教师再一次点拨重点、难点, 梳理知识, 一目了然:
3个基本概念 (薄层色谱、比移值、边缘效应) ;
4个操作步骤 (制板→点样→展开→显色) ;
2个应用 (定性和定量分析) 。
(四) 巩固反馈, 知识迁移
教师运用多媒体展示思考题, 其中基础题可加深和巩固学生对基础知识的理解, 提高题可让学生利用所学知识解决实际问题。
设计意图:通过安排不同层次的习题, 满足不同层次学生的需求, 检测本次学习效果, 利于培养学生的理解、分析和解决问题能力。通过启发学生运用本节课所学知识解答问题, 并对给出答案的学生给予鼓励性评价, 激发学生的学习热情。
4 说教学评价
在仪器分析教学中, 经常有学生感到要记的东西太多, 并且易忘, 因而学习兴趣不高。如何充分利用教学资源, 将难懂的化学原理和概念变为通俗易懂的知识传授给学生是每位教师应该努力探索的问题。本节课教学利用实验器材, 通过实验探究能充分调动学生学习积极性, 培养学生观察、分析、思考和归纳总结的能力, 但由于时间限制, 学生不能自己动手实验。利用多媒体教学, 增加了课堂知识容量, 教学效率提高。教师通过教学问答和讨论、课堂练习等及时了解学生的学习情况, 可及时加以纠正。
摘要：结合多年教学经验和学生实际情况, 从教材分析、教法及学法分析、教学环节设计及教学评价4个方面对薄层色谱这节课进行设计说明。通过说课设计, 旨在帮助学生对这一知识点加深理解和记忆。
关键词：薄层色谱,说课,设计
参考文献
[1]李吉学.仪器分析[M].北京:中国医药科技出版社, 2007.
[2]项君.化学说课应遵循的有效原则[J].考试周刊, 2010 (45) :172~173.
鲜汁饮薄层色谱鉴别 篇3
【关键词】鲜汁饮；薄层色谱；地黄；蒲公英
Study on Quality Standard for Xianzhiyin Mexture
Wang MengliangZhao Jiali
【Abstract】Objective:To study the methods of identification of Xianzhiyin Mexture.Method: Using TLC to identify Rehmanniae ,Taraxaci. Results:The TLC identificationo of Rehmanniae ,Taraxaci was with good results ,high resolution and without feminine sample interferation. Conclusion: This method is rapid,simple ,and with good reproducibility .
【Key Words】 Xianzhiyin Mexture; TLC; Rehmanniae;Taraxaci
【中图分类号】R286.0【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2011）04-0110-01
鲜汁饮来源于我省名老中医之一，原安阳中医院院长，河南省中医学院特邀研究员孙一民主任医师的验方，属医院制剂。由鲜地黄等6味中药组成，均选用新鲜植物药，药鲜质纯，有效成份活性强，易吸收。具有清热解毒，养阴生津，凉血止血之功效。用于：①阴虚内热型血液病所致鼻衄、齿衄、咳血、吐血、尿血、便血、紫癜。②肿瘤放疗、化疗后所致阴虚内热者。③目赤肿痛、口舌生疮、口渴咽疼、尿赤便秘。④外感发热与内伤发热等症状。为了有效控制质量，确保用药安全有效，本试验增加了地黄、蒲公英的薄层鉴别。结果表明，该方法简便快捷，专属性强，结果满意。
1实验部分
1.1仪器、试剂与样品
KQ3200B型超声波清洗器TRANSILLUMINATOR2020D紫外透射仪
试剂均为分析纯
地黄对照药材、蒲公英对照药材（中国药品生物制品检定所，批号121180-200402、121195-200401）；样品由河南省卫辉市中医血液病医院提供
1.2薄层色谱鉴别
1.2.1地黄的TLC鉴别
供试品溶液的制备：取本品20ml微沸蒸干，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
地黄对照药材溶液的制备：取地黄对照药材1g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。
鲜地黄汁的制备：取地黄鲜汁10ml，微沸蒸干，加甲醇20ml使溶解，滤过即可。
阴性样品溶液的制备：按处方比例制备缺地黄的阴性样品10ml，同法制备阴性样品溶液。
照薄层色谱法［1］试验，吸取上述四种溶液各5ul。分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，日光下观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性样品无干扰，见图1。
1、供试品 （批号101102）；2、供试品（批号101128）
3、供试品（批号101129）4、鲜地黄汁（自备）5、阴性样品（院方提供）
6、地黄对照药材
1.2.2蒲公英的TLC鉴别
供试品溶液的制备：取本品25ml, 微沸蒸干，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解作为供试品溶液。
蒲公英对照药材溶液的制备：取蒲公英对照药材1g，加水100ml煮沸20分钟，倾取上清液，微沸蒸干，同法制成对照药材溶液。
阴性样品溶液的制备：按处方比例制备缺蒲公英的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。
照薄层色谱法［1］试验，吸取上述三种溶液各5ul。分别点于同一：以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5︰3︰1︰1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性样品无干扰，见图2。
2讨论
2.1地黄中的代表性成分为梓醇、地黄素、甘露醇、多种糖类与氨基酸、维生素A样物质等。以地黄药材做对照，对处方中的地黄进行鉴别，效果良好。
2.2地黄的薄层色谱鉴别中，曾选用展开剂：用氯仿-甲醇-水（14︰6︰1）展开，样品色谱中与对照药材色谱相应位置上的斑点相一致，但斑点靠近前沿，故加入醋酸乙酯调节展开剂的极性，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下层溶液展开后，日光下观察即可显示清晰的黄色斑点，且Rf值适中，效果良好。
2.3蒲公英的薄层色谱鉴别中，曾选用展开剂：氯仿。显色剂：10%硫酸乙醇液，105℃加热，紫外光（365nm）下观察，效果不佳。故又改为本文的条件，效果良好。
参考文献
［1］中国药典2010年版一部附录Ⅵ B，P34～35。
大黄全成分薄层色谱条件研究 篇4
1 仪器与试剂
1.1 仪器设备
德国Sartorius万分之一电子天平、上海R501旋转蒸发器、郑州SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵、成都电热恒温鼓风干燥箱、宁波DL-360超声波清洗机、重庆939全自动薄层制板器。
1.2 试剂与试药
1.2.1 试药
大黄 (Radix et Rhiaoma Rhei) , 为蓼科植物药用大黄 (Rheum offiicinale Baill.) 的干燥根和根茎, 产地四川北川, 购自成都新荷花饮片有限公司, 由成都中医药大学中药鉴定教研室严铸云教授鉴定, 符合药典要求。大黄素 (Emodin 756-9003) , 大黄酚 (Chrysophanol 110796-200310) , 芦荟大黄素 (Aloe-emodin 由北京显通时代医药科技发展有限公司提供, 经面积归一化法检测, 纯度>98%) , 大黄素甲醚 (Physcion 由中药固体制剂制造技术国家工程研究中心提供, 批号为1039-050111, 经面积归一化法检测表明纯度>98%) ;大黄酸 (Rhein 0757-200206) 均购自中国药品生物制品检定所。
1.2.2 试剂
甲醇、无水乙醇、浓盐酸、冰醋酸、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、磷钼酸、羧甲基纤维素钠等, 所用试剂均为分析纯, 水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 大黄药材全成分薄层色谱条件
硅胶G按1∶3加入0.2%的CMC-Na溶液, 搅拌均匀涂布于10cm×20cm的玻璃板上, 厚度约为0.6mm, 室温晾干, 于105℃烘箱中活化1h, 置干燥器中保存备用。
2.1.1 对照品溶液制备 取芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素、大黄酚、大黄酸对照品适量 (约1mg) , 加甲醇至10mL, 即得各对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液制备 精密称定大黄粉末0.2g, 置于具塞锥形瓶中, 精密加入25mL甲醇, 称定重量, 加热回流1h, 放冷, 再称定重量, 加甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过。精密量取5mL续滤液, 置烧瓶中, 挥去溶剂, 加三氯甲烷10mL置分液漏斗中, 分取三氯甲烷层, 酸液再用三氯甲烷萃取3次, 每次10mL, 合并三氯甲烷液, 减压回收溶剂, 残渣加甲醇使溶解, 转移至10mL量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续液, 即得[2]。
2.1.3 展开系统选择 展开条件一。照薄层色谱法 (附录Ⅵ B) 试验, 吸取各对照品溶液约5μL和供试品溶液各20μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸 (9∶2∶0.5) 为展开系统, 展开, 取出, 晾干, 以氨蒸气薰至斑点清晰[3,4]。样品色谱中, 在与各对照品色谱相应的位置上, 显相同橙红色至黄色斑点, 见图1。此展开系统极性较小, 可使大黄药材中的游离蒽醌获得很好的Rf值, 并得以分离鉴定, 其中大黄酸Rf值约为0.3。为了使其中极性更大的成分能进行区分, 可进一步加大展开系统极性。
展开条件二。照薄层色谱法实验, 吸取大黄酸对照品溶液5μL和上述溶液各20μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 用氯仿-甲醇-冰醋酸 (8∶2∶0.2) 展开, 取出, 晾干, 以氨蒸气薰至斑点清晰。此时游离蒽醌苷元中极性最大的大黄酸已被展至前沿, Rf值约为0.95, 样品色谱中, 各种极性较大的成分能得到较好的分离, 见图2。
展开条件三——二次展开。照薄层色谱法实验, 吸取大黄酸对照品溶液5μL和上述溶液各20μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 用石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸 (9∶2∶0.5) 进行展开, 展距9cm, 取出, 晾干;再以氯仿-甲醇-冰醋酸 (8∶2∶0.2) 为展开系统, 展至第一次展开大黄酸之前, 约5cm, 取出, 晾干, 以氨蒸气薰至斑点清晰, 见图1~图4。用此种方式进行展开, 既可以将游离蒽醌苷元进行鉴定, 也可以同时把极性较大的成分进行区分。选用的展开系统主要有∶氯仿-甲醇 (15∶0.2) ;石油醚-丙酮 (5∶1) ;石油醚-乙酸乙酯 (9∶5) 等。经筛选发现石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸 (9∶2∶0.5) 、氯仿-甲醇-冰醋酸 (8∶2∶0.2) 条件下二次展开的色谱最优, 色谱分离度好, 且斑点相对位置的重现性最好。展开方式:上行展开;展距:第一次展开10cm, 第二次展开5cm。
2.1.4 显色方法考察 考察的显色剂有三种:10%硫酸乙醇溶液, 10%磷钼酸乙醇溶液, 氨蒸气。经筛选后发现, 10%硫酸乙醇溶液显色颜色较浅, 难于控制;10%磷钼酸乙醇溶液显色背景颜色较深;氨蒸气显色后, 颜色不稳定, 易褪色, 但若在显色后于薄层板上覆盖同样大小的玻璃板, 周围用胶布固定密封, 可保持稳定, 综合考虑, 最终选用。显色方法:氨蒸气显色。故最终确定以硅胶G板进行二次展开, 第一次以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸 (9∶2∶0.5) 为展开系统进行展开, 展距9cm, 取出, 晾干;再以氯仿-甲醇-冰醋酸 (8∶2∶0.2) 为展开系统进行二次展开, 展至第一次展开大黄酸之前, 约5cm, 取出, 晾干, 以氨蒸气薰至斑点清晰, 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板, 周围用胶布固定密封。
3 讨论
薄层色谱的影响因素较多, 在实验时应注意控制薄层板的厚度、点样量的多少、饱和时间等条件。在本实验中, 由于采用的是二次展开导致扩散比较严重, 因此在第一次展开的时候不要展距太长。在二次展开系统下供试品溶液进行展开既可以将游离蒽醌苷元进行鉴定, 也可以同时把极性较大的成分进行区分, 并且可以尝试使用薄层扫描测定其极性较大的成分的含量, 用以研究附子与大黄药材配伍前后大黄中极性较大成分的含量变化。
摘要：目的:通过对大黄药材薄层条件筛选, 找出在同一张薄层板上得到大黄药材全成分薄层色谱检识的方法。方法:通过试验选择大黄药材合理的展开系统和显色剂。结果:以硅胶G板进行二次展开可得到大黄药材全成分薄层色谱, 第一次以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸 (9∶2∶0.5) 进行展开, 展距9cm, 再以氯仿-甲醇-冰醋酸 (8∶2∶0.2) 进行二次展开, 展至第一次展开大黄酸之前, 约5cm, 以氨蒸气薰至斑点清晰。结论:采用二次展开可得到大黄药材全成分薄层色谱。
关键词：大黄,薄层色谱,蒽醌类成分,色谱条件
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社, 2005:348.
[2]李娅萍, 田颂九, 王国荣.大黄的化学成分及分析方法概况[J].中国中药杂志, 2001, 26 (11) :622.
[3]徐建东, 王洪全.大黄对附子解毒作用相关性分析[J].上海中医药杂志, 1999, 3 (6) :7-9.
瑶药紫九牛的薄层色谱研究 篇5
【摘要】 目的：建立瑶族常用药材紫九牛的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法分别对药材中的大黄素、翼核果醌进行鉴别。结果：紫九牛药材薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点。结论：建立起的两种薄层鉴别方法鉴别专属性强，操作简便，可用于瑶药紫九牛的质量控制。
【关键词】紫九牛；大黄素；翼核果醌；薄层色谱
【中图分类号】R2825【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）19-0112-02
瑶药紫九牛为鼠李科属植物翼核果（Ventilago leiocarpa Benth）的根茎，收载于《全国中草药汇编》，《中国瑶药学》等，别名红穿破石、血风藤；瑶医认为紫九牛具有养血祛风、舒筋活络、固肾益精等功效，用于治疗慢性肝炎、肝硬化、风湿筋骨疼痛、风湿性关节炎、腰肌劳损、腰肌劳损等疾病[1-2]。目前对瑶药紫九牛质量控制方法的研究文献报道较为少见[3]。为了有效控制其药材质量，实验采用大黄素、翼核果醌为指标性成分，分别建立起了相应的薄层鉴别方法，为紫九牛药材的质量控制提供了实验依据。
1仪器与材料
11仪器旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司）。
12材料紫九牛药材购自于广西金秀瑶族自治县，经广西中医药研究院饶伟源副主任药师鉴定为鼠李科属植物翼核果（Ventilago leiocarpa Benth.）的根茎。
大黄素对照品（批号：0756-200110，中国食品药品检定研究院）；翼核果醌对照品由广西中医药研究院化学所自制。硅胶G（批号：0110916，青岛海洋化工厂）；乙酸乙酯（批号：20151205，广东光华科技股份有限公司）；盐酸（批号：20120618，天津市新华化学试剂厂）；三氯甲烷（批号：20140620，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（批号：20151110，广东光华科技股份有限公司）；甲酸（批号：20100726，广东光华科技股份有限公司）；氨水（批号：20120711，国药集团化学试剂有限公司）。
2方法与结果
21大黄素的薄层鉴别取紫九牛药材1g，加乙酸乙酯20mL回流提取05h，滤过，滤液回收溶剂，残渣用5% HCl 20mL溶解，5% HCl酸液用三氯甲烷萃取三次，每次15mL，三氯甲烷萃取液合并，回收溶剂，残渣用甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。另取紫九牛对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（30∶1∶01）为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏至斑点显色清晰，自然光下检视。供试品色谱中，在与大黄素对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。薄层色谱图见图1。
22翼核果醌的薄层鉴别取紫九牛药材3g，照“21”项下供试品溶液制备方法制得供试品溶液。另取翼核果醌对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。另取紫九牛对照药材3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（8∶12∶08）为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏至斑点显色清晰，自然光下检视。供试品色谱中，在与翼核果醌对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。薄层色谱图见图2。
3讨论
笔者研究团体在前期研究时发现瑶药紫九牛中富含多种醌类成分，同时发现紫九牛中大黄素含量较高，故选择其来建立起薄层鉴别方法；另翼核果醌为紫九牛中发现的新结构的醌类化合物，目前除了紫九牛中发现该成分，尚无在其它植物中发现翼核果醌的文献报道[4-5]，故选择其来建立起薄层鉴别方法，具有较高的专属性。建立起的两种薄层鉴别方法鉴别专属性强，操作简便，可有效的控制瑶药紫九牛的质量。
参考文献
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薄层色谱基础知识 篇6
一、氨基酸薄层色谱茚三酮显色的改良
薄层色谱是将固相支持物(也叫吸附剂)均匀铺在玻璃板上使之成为薄层,将待分析的样品点到薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的扩剂中,在密闭的层析缸中展层。由于各种氨基酸的理化性质(分子极性、分子大小和形状、分子亲和力等)不同,其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时,点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂移动,使不同的氨基酸得以分离。
由于吸附剂在喷雾显色时,常见层析表面破坏,造成分析困难,经过多次实验发现,若不采用喷雾法,而直接将展开剂与喷雾剂同时使用,不但便于操作,氨基酸斑点清晰,边缘整齐,薄层面光滑完整,而且比移值也保持不变。
1.仪器
硅胶G薄层板、毛细管、层析缸、电吹风、喷雾器、烘箱。
2.试剂
硅胶G;黏合剂:0.5%的柠檬酸与1%的羧甲基纤维素钠混合,煮沸至无气泡,冷却静置分层后用;氨基酸溶液:0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸以及混合溶液;展开剂:V(正丁醇):V(冰乙酸):V(水)=4:1:2;展开显色剂:V(展开剂):V(0.1%茚三酮无水丙酮溶液)=10:1。
3.操作
(1)薄层板的制备。①调浆:称取硅胶14g,加黏合剂25 mL,置于研钵中充分研磨成均匀的膏状;②涂布:取两块洁净的干燥玻璃板(20×20)置于涂布器上均匀涂层。(请询问作者20×20的单位是否是20 cm×20 cm,没有单位的数值没有意义)③干燥:将玻璃板水平放置,室温下自然晾干。④活化:晾干的薄层板置于烘箱内,105℃活化30 min,切断电源,待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。
(2)点样。活化后的硅胶板室温冷却后,在距底边2 cm水平线上均匀确定5个点。用毛细管分别吸取氨基酸溶液,轻轻接触薄层表面,每次加样后原点扩散直径不超过3 mm,干后再点一次。
(3)展层。在层析缸中加入展开显色剂1 cm厚,加盖平衡0.5 h。将薄层板点样端浸入展开显色剂,展开显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖,上行展层。当展层显色剂前沿离薄板顶端2 cm时,停止展层,取出薄板,用铅笔描出溶剂前沿界线,用热风吹干,即可出现氨基酸显色斑点。
二、改善氨基酸薄层色谱的拖尾
拖尾现象是指展层,显色后在层析分配图上,所看到的某一种氨基酸的分子位移,不像标准图谱那样完整地显示在某一位置上,而是前端粗圆而逐渐细小下来,宛如拖着一个尾巴,其图所呈颜色也是由浓渐淡。
1.拖尾现象原因分析
氨基酸薄层色谱拖尾的出现,原认为是对影响Rf的主要因素[如物质结构、极性、层析溶剂、溶剂和样品的pH、温度、薄层的质地是否均匀、薄厚是否适当、硅胶的松紧度是否适中、展层的方式(上行、下行)等]掌握不够所致。然而多次实验证明,无论操作如何严格都仍不可避免地出现拖尾现象。经分析,样品的处理是为纯化,实现层析分配某氨基酸的清晰显色图像;展层使样品达到一个适当的位移,便于在显色后从图像上区分不同样品的氨基酸;显色剂含水量极低,不会影响洋品的斑点扩散,那么问题就集中在点样这个操作程序上了。
2.拖尾改善方法
(1)点样位置。为了对照实验结果,而分别配制的几种氨基酸的溶液,用微量点样管或毛细管,点在以硅胶为惰性支持物的层析板上设计好的多点位置中去。
(2)风干样品。点样后要自然风干,或冷风吹干。因为一旦控制不好温,势必要使样品破坏,样品点太干燥,样品物的分子牢固吸附在层析板上。所以在展层过程中,样品点的每个物质分子不能在层析板上同时起步,而是形成了有先有后,鱼贯而上行或下行的状况,致使在显色后,实验结果的图像上,观察到的不是一个完整的斑点,而是一个拖着尾巴的斑点。这就是上述所说的拖尾现象。
清热消积颗粒薄层色谱研究 篇7
关键词：清热消积颗粒,黄连,薄层色谱法
清热消积颗粒是我院的儿科协定处方, 临床应用时间久, 疗效稳定确切。主要由黄连、鸡内金、山楂、麦芽、谷芽、槟榔、芒硝、陈皮等组成, 经提取精制而成的纯中药制剂, 具有清热消积导滞的功效, 主要用于小儿食积内热、厌食口臭、大便干结、脘腹胀满等。为了保证制剂的质量和临床疗效, 采用薄层色谱法对制剂中的黄连进行定性鉴别分析, 其结果简便、快速, 为清热消积颗粒的质量标准提供了定性的检测方法。
1 实验材料与制备
1.1 清热消积颗粒
(安阳市中医院院内制剂) , 对照药材黄连 (符合中国药典质量标准) , 盐酸小檗碱标准品 (购自中国药品生物制品鉴定所) , 硅胶G (青岛海洋化工厂产品) , 所用试剂均为分析纯。
1.2 对照品及供试品
供试品溶液的制备:取清热消积颗粒10g, 加乙醇30mL回流提取30min, 滤过, 滤液水浴蒸干, 残渣加乙醇1ml使溶解, 作为供试品溶液。
阴性对照品的制备:取按相同工艺制成的未加黄连的清热消积颗粒, 用同上方法制成阴性样品溶液。
药材对照品的制备:取黄连药材1g, 加乙醇10mL, 回流提取15min, 滤过, 滤液作为对照药材溶液。
标准品溶液的制备:取盐酸小檗碱, 加乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液, 作为标准品溶液。
2 方法与结果
色谱分析:照薄层色谱法 (《中国药典》2000版一部附录ⅥB) 实验, 吸取上述四种溶液各3μL, 分别点于同一硅胶G薄层上, 以正丁醇-冰醋酸-水 (7:1:2) 为展开剂展开, 取出, 晾干, 置紫外灯 (365nm) 下检视, 供试品色谱中, 在与盐酸小檗碱标准品和对照药材色谱相应的位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点, 阴性样品对照溶液无荧光斑点 (见图1) 。
3 讨论
本实验采用供试品、阴性对照品、对照药材、标准品进行薄层色谱法鉴别中药复方制剂, 检出成分不受其他药物的干扰, 具有操作简便、重现性好、专属性强等特点, 可作为清热消积颗粒的有效成分鉴别及内在质量控制指标之一。
双三抗感颗粒薄层色谱鉴别研究 篇8
1 仪器与试药
SG8200HBT超声波清洗器, 上海冠特超声仪器有限公司;硅胶G60, 青岛海洋化工厂;ZF-2型三用紫外仪, 上海市安亭电子仪器厂;阿修罗AXLC1820超纯水机, 重庆阿修罗科技发展有限公司。三叉苦对照药材 (批号:121682-201301) 、地骨皮对照药材 (批号:121087-201306) 均购于中国食品药品检定研究院;双三抗感颗粒 (批号:141001、141002、141003) , 广西中医药大学附属瑞康医院制剂中心提供;硅胶G60, 青岛海洋化工厂;水为超纯水, 其余试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
(1) 三叉苦的薄层色谱鉴别:取本品5g, 加甲醇25ml, 超声处理20min, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇1ml使溶解, 加入中性氧化铝 (100~200目) 1g拌匀, 挥干溶剂, 加于中性氧化铝柱 (100~200目, 2g, 内径为10mm, 干法装柱) 上, 用20%甲醇40ml洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 残渣加甲醇1ml使溶解作为供试品溶液。另取缺三叉苦阴性样品5g, 同法制成缺三叉苦阴性样品溶液。另取三叉苦对照药材2g, 同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法﹙中国药典2010年版一部附录ⅥB﹚试验, 吸取供试品溶液和对照药材溶液6µl, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (20:4:0.5) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以10%硫酸乙醇溶液, 105℃加热至斑点显色清晰, 置紫外光灯 (365nm) 下检视。供试品色谱中, 在与对照药材色谱色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 见图1。
(2) 地骨皮的薄层色谱鉴别:取本品3g, 加甲醇30ml, 超声处理10min, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加水20ml使溶解, 用稀盐酸调节p H值至2~3, 用乙酸乙酯振摇提取2次, 每次20ml, 合并乙酸乙酯提取液, 蒸干, 残渣加甲醇1ml使溶解, 作为供试品溶液。另取缺地骨皮阴性样品5g, 同法制成缺地骨皮阴性样品溶液。另取地骨皮药材1g, 加甲醇10ml, 超声处理10分钟, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇1ml使溶解, 作为对照药材溶液。照薄层色谱法﹙中国药典2010年版一部附录ⅥB﹚试验, 吸取供试品溶液和对照药材溶液6µl, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸 (12:9:0.5) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以10%氢氧化钾溶液, 置紫外光灯 (365nm) 下检视。供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 见图2。
1.缺三叉苦阴性样品;2~4.双三抗感颗粒;5.三叉苦对照药材
1~3.双三抗感颗粒;4.地骨皮对照药材;5.缺地骨皮阴性样品
3 结果
上述供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点, 阴性样品无干扰斑点, 说明建立的薄层鉴别方法专属性强, 可定入质量标准鉴别该制剂中的三叉苦及地骨皮, 用于该制剂的质量控制。
4 讨论
本处方属于广西壮药临床验方, 采用的药材三叶香茶菜和三叉苦收载于《广西壮药质量标准第一卷》, 地骨皮收载于《中国药典》2010年版一部。其中三叶香茶菜在中国食品药品检定研究院无对照药材, 故无法进行薄层鉴别研究;三叉苦标准无薄层鉴别项, 本中心通过查阅文献, 经过大量研究, 建立的三叉苦薄层鉴别标准, 简单易行, 专属性强;地骨皮药材的《中国药典》2010年版一部标准的薄层色谱鉴别, 供试品溶液的提取, 仅采用甲醇超声处理的方法进行供试品溶液的制备, 不经过提纯, 在薄层色谱鉴别过程中, 背景颜色较深, 斑点也不够圆整。经本中心的试验研究, 本文采用的纯化方法, 有效减少了供试品溶液的杂质, 采用的展开剂展开效果更好, 斑点更圆整, 可作为质量标准用于该制剂的质量控制。
参考文献
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薄层色谱法检查巴洛沙星有关物质 篇9
1 薄层色谱法的研究
1.1 仪器与试药
紫外光灯254nm检测器, 硅胶GF254薄层层析预制板, 巴洛沙星对照品 (含量99.8%) 及合成中主要中间体由研制单位提供。试剂均为分析纯, 水为重蒸馏水。
1.2 主成分与主要中间体
由于不同厂家的生产工艺不同, 主要有以下几种中间体:中间体A:1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸乙酯 (环合酯) ;中间体B:1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸;中间体C:螯合物。主成分D:巴洛沙星。结构见下图1。
1.3 色谱条件
展开剂体系1:水-二乙胺-甲苯-三氯甲烷-甲醇 (4:7:10:20:20) 。
展开剂体系2:二氯甲烷-甲醇-浓氨水溶液-乙腈 (4:3:3:2) 。
1.4 方法与结果
1.4.1 展开剂体系1检测方法
取本品 (D) 适量, 加适量冰醋酸溶解并用甲醇稀释制成制成每1毫升中含10mg的溶液, 作为供试液;精密量取适量用甲醇稀释成每1毫升中含0.3mg的溶液, 作为对照液 (I) ;另精密称取1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸乙酯 (A) 、1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸 (B) 和螯合物 (C) 各适量, 分别用冰醋酸溶解并用甲醇稀释制成每1毫升中含0.10mg的溶液作为对照液 (II) 。照薄层色谱法 (中国药典2000版二部附录VB) 试验, 吸取上述三溶液各5µL, 分别点于同一硅胶GF254薄层板上, 以水-二乙胺-甲苯-三氯甲烷-甲醇 (4:7:10:20:20) 为展开剂, 展开, 晾干, 置紫外光灯 (254nm) 下检视, 供试液如显与对照液 (II) 主斑点对应的杂质斑点, 其与对照液的主斑点比较, 不得更深;如有其它杂质斑点, 斑点个数不得多于2个, 与对照液 (I) 的主斑点比较, 均不得更深 (图2) 。
(1) 巴洛沙星对照品 (10mg·mL-1) ; (2) 巴洛沙星和中间体A, B, C的混合液 (0.1mg·mL-1) ; (3) 螯合物 (C) (0.1mg·mL-1) ; (4) 喹啉羧酸 (B) (0.1mg·mL-1) ; (5) 喹啉羧酸乙酯 (A) (0.1mg·mL-1)
1.4.2 展开剂体系2检测方法
取本品, 加适量冰醋酸溶解并用甲醇稀释每1mL含30.0mg的溶液, 作为供试品溶液;精密量取适量用甲醇稀释成每1 m L中含0.3 m g的溶液, 作为对照液 (I) ;另精密称取1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸乙酯 (A) 、1-环丙基-6, 7-二氟-1, 4-二氢-8-甲氧基-4-氧-3-喹啉羧酸 (B) 和螯合物 (C) 各适量, 分别用适量冰醋酸溶解并用甲醇稀释制成每1毫升中含0.30mg的溶液作为对照液 (II) 。照薄层色谱法 (附录V B) 试验, 吸取上述两种溶液各10µL, 分别点于同一硅胶GF254薄层板上, 放入氨气中约15min, 取出, 以二氯甲烷-甲醇-浓氨水溶液-乙腈 (4:3:3:2) 为展开剂, 展开后, 晾干, 置紫外灯 (254nm) 下检视。供试液如显与对照液 (II) 主斑点对应的杂质斑点, 其与对照液的主斑点比较, 不得更深;如有其它杂质斑点, 斑点个数不得多于2个, 与对照液 (I) 的主斑点比较, 均不得更深 (图3) 。
(1) 中间体A, B, C的混合液 (0.3mg·mL-1) ; (2) 巴洛沙星对照品 (30mg·mL-1) ; (3) 螯合物 (C) (0.3mg·mL-1) ; (4) 喹啉羧酸 (B) (0.3mg·mL-1) ; (5) 喹啉羧酸乙酯 (A) (0.3mg·mL-1) ; (6) 巴洛沙星和中间体A, B, C的混合液 (0.3mg·mL-1)
2 讨论
薄层色谱法实验采用了一系列展开剂体系进行研究, 通过对固定相、流动相、点样量、展开条件以及显色条件的研究, 确定了以上两种展开剂体系, 建立了较为满意的TLC法。如以二氯甲烷-甲醇-浓氨水溶液-乙腈 (4:3:3:2) 为展开剂, 展开后, 晾干, 置碘蒸气中熏后呈色, 还可检测巴洛沙星中间体3-甲氨基哌啶。在上述色谱条件下进行测定时巴洛沙星的各中间体与主成分均能很好分离。以上TLC法最小检出量为3µg。HPLC法更适合于成品的杂质检查及含量测定, 而TLC法更适合生产过程中的半成品检测。
摘要：目的建立了巴洛沙星合成中间体检测方法检查。方法薄层色谱法:硅胶GF254薄层层析预制板, 展开剂分别为水-二乙胺-甲苯-三氯甲烷-甲醇 (4:7:10:20:20) 和二氯甲烷-甲醇-浓氨水溶液-乙腈 (4:3:3:2) 。结果在上述色谱条件下进行测定时巴洛沙星的各中间体与主成分均能很好分离, 最低检出量为3μg。结论TLC法方便, 快速可用于检查巴洛沙星合成中间体。
关键词：薄层色谱法,巴洛沙星,合成中间体
参考文献
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