金银花总黄酮的提取

金银花总黄酮的提取（共9篇）

金银花总黄酮的提取 篇1

黄酮类化合物是一种存在于植物中的天然产物, 具有抗氧化、预防心血管疾病、抗衰老、降血糖、降血脂和增加机体免疫力的生理活性等作用。因此, 研究金银花中黄酮类化合物的提取测定, 具有十分重要的意义[1]。黄酮类化合物的提取方法有水提法、有机溶剂提取法、超声波法、超滤法和超临界提取法等, 它们不同程度的存在有提取不完全、耗时过长、操作费事和设备复杂等不足[2]。利用微波的高频电磁波穿透提取介质, 可以加速被提取成分向提取溶剂界面的扩散速率, 缩短提取组份分子由物料内部扩散到提取溶剂中的时间, 提高提取速率。本文利用微波压力浸提技术, 对金银花中黄酮类化合物进行微波提取, 以芦丁为对照品, 分光光度法测定黄酮化合物含量[3]。同时以料液比、提取时间和微波功率作为影响因素进行正交试验设计, 确定了微波提取金银花中黄酮类化合物的最佳条件, 与传统的回流法进行了对照试验, 该法具有操作简便、提取率高、准确、快速和环境友好等优点。

1 试验材料与方法

1.1 主要仪器

美的牌KJ23C-AN2型微波炉, 广东美的微波炉制造有限公司;FW100型高速万能粉碎机, 天津泰斯特仪器有限公司;GBC-916型紫外可见分光光度计, 澳大利GBC科学仪器公司;HH-SZ1-6电热恒温水浴锅, 北京长安科学仪器厂;聚氯乙烯密闭溶样罐, 50m L, 郑州凯特瑞仪器有限公司。

1.2 主要试剂

芦丁对照品, 南京青泽医药科技开发有限公司, 批号QZ071012;硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠和无水乙醇, 均为分析纯;所用水均为石英亚沸蒸馏的二次蒸馏水。

金银花样品, 广东同和堂中药饮片有限公司, 洗净于80℃度恒温干燥箱中烘干恒重后, 粉碎过80目筛, 备用。

1.3 试验方法

1.3.1 芦丁对照品溶液的制备

精密称取经120℃减压干燥到恒重的芦丁对照品15.3mg, 置烧杯中, 加适量30%乙醇, 充分溶解, 定量转入100m L量瓶中, 用30%乙醇稀释定容至刻度, 摇匀, 即得0.153mg/m L的芦丁对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备

精密称取金银花叶0.500 0g, 加30m L水冷浸30min, 在水浴 (100℃) 加热回流1h, 过滤, 分取滤液, 残渣再加30m L蒸馏水, 水浴 (100℃) 加热回流1h, 过滤, 合并滤液, 定量转入100m L量瓶中, 放冷, 加蒸馏水至刻度, 摇匀, 作供试品溶液, 备用。

1.3.3 吸收光谱的绘制及测定波长的选择

吸取芦丁标准溶液和供试品溶液适量, 分别置于25m L量瓶中, 各加入5%乙醇至12.5m L, 加入0.7m L Na NO2 (1∶20) , 摇匀, 放置5min后加入0.7m L Al (NO3) 3 (1∶10) , 6min后, 加入5m L 1mol/L的Na OH溶液, 混匀, 用5%乙醇稀释至刻度, 混匀10min后, 用GBC-916型紫外可见分光光度计于400~600nm范围内进行扫描, 结果显示, 两溶液的吸收光谱有较好地重叠性, 在510nm处均有最大吸收 (如图1所示) , 故选择510nm入射光作为测定波长。

1.3.4 标准曲线的绘制

准确吸取芦丁对照品溶液1.00、3.00、5.00、7.00、9.00和11.00m L, 分别置于25m L量瓶中, 各加入5%乙醇至12.5m L, 加入0.7m L Na NO2 (1∶20) , 摇匀, 放置5min后加入0.7m L Al (NO3) 3 (1∶10) , 6min后再加入5m L1mol/L的Na OH溶液, 混匀, 用5%乙醇稀释至刻度, 混匀, 10min后以相应试剂作空白, 于510nm处测定吸光度, 以浓度为横坐标, 吸收度为纵坐标, 绘制标准曲线, 如图2所示。

1.3.5 恒温水浴回流提取黄酮

称取金银花样品5.000g左右, 置于250m L的圆底烧瓶中, 加30m L去离子水冷浸30min, 在水浴 (100℃) 加热回流1h过滤, 残渣再加30m L蒸馏水, 加热回流1h过滤, 合并滤液, 冷却后定量转入100m L容量瓶中, 加水至刻度, 摇匀。准确吸取5.00m L金银花提取液于25m L量瓶中, 下同1.3.4操作。以相应试剂作空白, 于510nm处测定吸光度, 由标准曲线得其总黄酮含量。

1.3.6 微波提取法

准确称取2.000g左右的金银花样品, 置于50m L的聚四氟乙烯消解罐中, 加入一定体积的水后密封, 放入微波炉中, 设置一定的功率和时间提取后, 取出, 冷却至室温, 开罐, 过滤, 将滤液转移至100m L容量瓶中, 定容, 摇匀。精密吸取2.00m L金银花提取液置于25m L量瓶中, 下同1.3.4操作。以相应试剂作空白, 于510nm处测定吸光度, 由标准曲线得其总黄酮含量。

2 结果与讨论

2.1 正交试验

在单因素试验的基础上, 以料液比、微波功率和微波时间为影响因素, 以提取率指标, 进行正交试验。其因素—水平及正交试验结果见表1。

由表1极差分析可知:各因素影响提取率的程度大小顺序为C>A>B, 即最大影响因素是提取时间, 其次是料液比和提取功率。根据正交试验结果分析可知最佳提取条件为A2B2C2, 即料液比1∶20、提取功率440W和提取时间7min。

2.2 回流提取与微波提取结果的比较

在最佳条件下, 做微波提取试验, 并与回流提取结果对照, 见表2。

由表2可知:微波协助提取法有明显的优点, 其提取时间大大缩短, 约为回流法的1/17, 经F-检验法及t-检验法检验, 结果没有显著性差异, 置信度为0.95。

3 结论

微波提取不仅速度快, 提取时间短、操作简便, 效果好, 同时还减少对环境的污染和环境的干扰, 与常规的加热回流法相比更加适应现代科技发展对化学工艺的要求, 不失为是一种快速、高效和节能的新型提取工艺, 有着比常规方法更好的优势和前景。

摘要：本文利用微波快速提取金银花中黄酮类化合物, 采用正交试验, 优化试验条件, 考察了微波提取时间、微波功率和料液比3个因素对金银花中黄酮类化合物提取的影响, 确定了微波法提取金银花中黄酮类化合物最佳的工艺条件。与传统的回流法进行比较, 该法具有提取效率高、时间短、操作方便及便于推广普及等优点, 亦可借鉴于其他样品的提取分析。

关键词：金银花,总黄酮,微波,正交试验

参考文献

[1]郭振库, 金钦汉, 范国强, 等.微波帮助提取中药金银花中有效成分的研究[J].中国中药杂志, 2O02, 27 (3) :189-192.

[2]张睿, 徐雅琴, 时阳.黄酮类化合物提取工艺研究[J].食品与机械, 2003 (1) :21-22.

[3]李红, 张元湖.苹果果实中总黄酮的提取方法优化研究[J].山东农业大学学报:自然科学版, 2003, 34 (4) :471-474.

金银花总黄酮的提取 篇2

金花葵花中总黄酮的提取纯化及含量测定

[目的]提取金花葵花中总黄酮并测定含量.[方法]采用乙醇回流提取、聚酰胺吸附的.方法提取纯化金花葵花中总黄酮;用三氯化铝法测定总黄酮的含量.[结果]宜春市、新余市所产金花葵花的提取物中总黄酮百分含量分别为45.40%、41.96%.[结论]金花葵花提取物中含有较为丰富的黄酮类成分,三氯化铝法可作为金花葵总黄酮质量控制的方法.

作 者：吴名全 雷波  作者单位：宜春学院美容医学院,江西宜春,336000 刊 名：农技服务 英文刊名：SERVES OF AGRICULTURAL TECHNOLOGY 年，卷(期)：2009 26(10) 分类号：S567 关键词：金花葵   总黄酮   含量测定  

野菊花中总黄酮的提取 篇3

关键词：野菊花,总黄酮,提取

野菊花是菊科植物野菊的干燥头状花序, 其主要成分为总黄酮, 具有清热解毒、降血压、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能[1,2], 野菊花水剂可抑制金葡菌、大肠杆菌、痢疾杆菌等一般致病菌, 且对异烟肼、链霉素和氨基水杨酸钠耐药或敏感的结核杆菌均有明显的抑菌作用, 为了有效地开发和利用药材资源, 充分提取野菊花所含的总黄酮等成分, 我们采用正交试验的方法进行了制备工艺的研究。

1 仪器与试剂

1.1 仪器:电子万用炉 (天津泰斯特仪器有限公司) ;旋转蒸发仪 (上海亚荣生仪器厂) ;752N型紫外光谱仪 (上海广照光电科技有限公司) ;电子天平 (上海良平仪器仪表有限公司) ;高速离心喷雾干燥机 (常州市振兴干燥设备厂) ;蠕动泵 (常州科健蠕动泵厂) ;微型空气压缩机 (上海力彪机械制造有限公司) ;PHS-2酸度计 (上海第二分析厂) ;NDJ-1型黏度计 (上海天平仪器厂) ;电热恒温水浴锅 (上海医疗器械五厂) ;Olympus-CH型生物显微镜 (日本进口) ;烘箱 (LAB供应集团) ;电冰箱 (购自青岛海尔集团) ;棕色瓶、无色瓶 (购自安国义通中药材有限公司) 5000 m L圆底烧瓶, 冷凝管。

1.2 试剂与样品:芦丁对照品。野菊花 (为菊科植物野菊的干燥头状花序) ;乙醇;亚硝酸钠, 硝酸铝溶液, 氢氧化钠溶液, 蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 总黄酮的提取

2.1.1 对照品及供试品溶液的制备: (1) 对照品溶液的制备: 精密称取经120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品25 mg, 置50 m L容量瓶中, 加30%乙醇适量, 使充分溶解, 放冷, 用30%乙醇稀释至刻度, 摇匀备用[2]。 (2) 供试液的制备:精密称取野菊花5 g, 加到烧瓶中, 加水100 m L, 冷浸10 min后, 在水浴上加热回流1 h, 分取滤液, 药渣加水80 m L, 继续水浴加热回流30 min, 滤过, 合并滤液, 滤液置200 m L量瓶中, 放冷, 加水至刻度, 摇匀, 精密量取10 m L, 置50 m L量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 作供试液, 待用。

2.1.2 含量测定: (1) 标准曲线的制备:精密量取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 m L, 分别置于50 m L容量瓶中分别记号1、2、3、4、5、6, 各加水12 m L, 加5%亚硝酸钠溶液2m L, 使混匀, 放置6 min, 加10%硝酸铝溶液2 m L, 摇匀, 放置6 min, 加1%氢氧化钠溶液20 m L, 再加水至刻度, 摇匀, 放置15 min, 以相应的试剂溶液为空白。按分光光度法 (中国药典2000年版一部附录VB) , 在500 nm波长处测定3次吸收度, 以吸收度的平均值为纵坐标、浓度为横坐标, 绘制标准曲线。测定的标准液的吸光度和标准曲线如下, 得回归方程:y=20.754x-0.0039 (R2=0.9967) 。见表1。 (3) 供试液的测定:精密量取供试液10 m L, 置50 m L容量瓶中, 照标准曲线方法进行操作, 显色, 在500 nm波长处测定吸收度A1, 另精密量取供试液10 m L, 置50 m L容量瓶中, 加蒸馏水至刻度, 摇匀, 在500 nm波长处测定吸收度A2, 取二次吸收度的差值, 由回归方程计算样品中总黄酮的含量3.10%[3]。

2.1.3 提取溶剂的选择: (1) 乙醇提取:精密称取野菊花5 g, 加到烧瓶中, 加乙醇100 m L, 冷浸10 min后, 在水浴上加热回流1 h, 分取乙醇液, 药渣加乙醇80 m L, 继续在水浴加热回流30 min, 合并乙醇液, 滤过, 滤液置200 m L量瓶中, 放冷, 加乙醇至刻度, 摇匀, 精密量取10 m L, 置50 m L量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 作供试液, 待用。 (2) 水提取:精密称取野菊花5 g, 加到烧瓶中, 加水100 m L, 冷浸10 min后, 在水浴上加热回流1 h, 分取水, 药渣加水80 m L, 继续在水浴加热回流30 min, 合并提取液滤过, 滤液置200 m L量瓶中, 放冷, 加水至刻度, 摇匀, 精密量取10 m L, 置50 m L量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 作供试液, 待用。 (3) 结果比较:上述供试液通过紫外-分光光度法测定野菊花总黄酮含量, 测定结果见表2。 由表1和表2结果可知, 乙醇提取略优于水提取。但考虑到在实际生产中, 野菊花在提取过程中会吸收2~3倍的溶剂, 造成生产成本显著增加, 因此本试验选择廉价的水作为试验提取溶剂。

2.1.4 水提取工艺的考察: (1) 考察因素及水平:选择提取次数、提取温度、提取时间和用水量等4个因素, 每个因素选择3个水平, 编制因素水平表见表3。 (2) 试验与结果:准确称取野菊花5 g, 按表3正交表没计方案进行试验, 取液稀释至200 m L作供试液, 进行含量测定, 以测得野菊花总黄酮含量为指标进行分析。结果见表4。由表3可知, A、B、C、D 4个因素对野菊花总黄酮提取的影响程度不同, 各因素的影响程度依次为A>B>D>C, 其中A因素为影响野菊花总黄酮提取的主要因素, B因素为影响野菊花总黄酮提取的次要因素。同时也从结果分析中发现, 提取次数超过2次时, 提取次数为野菊花总黄酮提取的非主要因素。充分考虑C、D因素为从野菊花中提取野菊花总黄酮的非主要因素, 最终确定野菊花提取工艺A2B3C3D1, 即野菊花用水提取2次, 溶剂用量依次为8、6倍, 提取温度100℃, 提取时间为40 min、40 min。

注: A为1 h, 对应于C、D的首位值;A为2时, 对应于C、D的前2位值;A为3时, 对应于C、D的所有值

3 讨论

3.1 野菊花分别用乙醇和水提取, 测定野菊花总黄酮含量, 前者比后者要高, 说明用乙醇提取比用水提取较完全, 但考虑到生产实际中野菊花在提取过程中吸收2~3倍的溶剂, 造成生产成本显著提高, 因而选用价廉的水作为提取溶剂[4]。

3.2 本次试验通过正交试验法对野菊花的提取工艺条件进行优化, 并按最佳工艺进行了验证试验, 结果证明用该工艺提取野菊花总黄酮工艺简单、提取率高、操作控制容易、稳定性好、适合于工业化生产。

参考文献

[1]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编 (上册) [M].北京:人民卫生出版社, 1975:789-790.

[2]北京市野菊花协作组.野菊花制剂临床观察一附454例疗效分析[J].中药通报, 1983, 8 (4) :39-40.

[3]李道中, 程村贵.野菊花提取液的药理及临床应用[J].药学进展, 1999, 23 (6) :344.

金银花总黄酮的提取 篇4

采用微波辅助萃取和AB-8型大孔树脂从葛根中提取和纯化总黄酮.分别考察了乙醇浓度、固液比、微波功率和辐射时间对提取率的影响;吸附柱类型、进液浓度、进波量、进液流速和pH值对吸附的影响和洗脱剂乙醇浓度、洗脱剂流速和洗脱剂体积量对脱附的.影响,并分别确定了它们适宜的工艺条件.在适宜工艺条件下,微波辅萃总黄酮提取率为83.94%,纯化后产品总黄酮纯度迭70%.建立了AB-8型大孔树脂吸附葛根总黄酮的Freundlich等温吸附方程,模型与实验值基本相符.

作 者：李岂凡 白兰莉 胥永 张彬 蒋柏泉 作者单位：李岂凡,胥永,蒋柏泉(南昌大学环境科学与工程学院,江西南昌,330031)

白兰莉(新疆石河子大学化学化工学院,新疆石河子,83)

张彬(南昌大学食品工程中心,江西南昌,330029)

藕中总黄酮的提取工艺研究 篇5

1 材料与方法

藕,购自漯河丁湾农贸市场; 芦丁对照品,中国药品生物制品检定所; 无水乙醇; 亚硝酸钠; 氢氧化钠等所用试剂均为分析纯。

752 型紫外分光光度计,上海第三分析仪器厂; BT25S型电子天平,德国赛得利斯集团。

1. 1 标准曲线的绘制

准确量取芦丁对照品溶液( 0. 1 mg/mL) 0. 0 mL、1. 0 mL、 2. 0 mL、3. 0 mL、4. 0 mL、5. 0 mL分别置于10 mL容量瓶中, 各加入5% NaNO2溶液0. 3 mL,摇匀,放置6 min后各加入10% Al( NO3) 30. 3 mL,摇匀,放置6 min后各加入1 mol/L NaOH溶液4 mL,用30% 乙醇定容至刻度,摇匀,静置15 min后,用空白试剂作参比,在510 nm处测定其吸光度,以溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,用最小二乘法进行回归,得回归方程: A =11. 52C +0. 003,R2= 0. 9996。

1. 2 总黄酮的提取

准确称取藕粉2. 0 g置于圆底烧瓶中,加入一定量提取溶剂乙醇,在一定的温度下提取一定时间,自然冷却后过滤,将滤液转移至100 mL容量瓶中,定容,摇匀备用。

1. 3 样品总黄酮含量的测定

准确量取黄酮提取液5 mL,置于10 mL容量瓶中,按照标准曲线方法测定吸光度,并计算黄酮类化合物的含量。

2 结果

2. 1 单因素试验

分别对提取温度、提取时间、溶剂浓度、料液比4 个因素进行单因素试验,考察各因素对藕中黄酮提取率的影响程度, 确定适宜范围。

2. 1. 1 温度对黄酮提取率的影响

准确称取藕粉2. 0 g置于圆底烧瓶中,加入60% 乙醇50 mL,分别在40 ℃ 、50 ℃ 、60 ℃ 、70 ℃ 、80 ℃ 下提取60 min,考察温度对黄酮提取率的影响。试验结果表明,随着温度的升高,黄酮提取率开始不断升高,达到一定温度后,随温度升高而降低,在70 ℃时达到最高值,升高温度至80 ℃, 提取率降低。

2. 1. 2 提取时间对黄酮提取率的影响

准确称取藕粉2. 0 g置于圆底烧瓶中,加入60% 乙醇50 mL,在70 ℃ 下分别提取30 min、60 min、90 min、120 min、 150 min,考察提取时间对黄酮提取率的影响。试验结果表明, 随着提取时间的增加,黄酮提取量增加,但提取60 min后,增加量很少。

2. 1. 3 乙醇浓度对黄酮提取率的影响

准确称取藕粉2. 0 g置于圆底烧瓶中,分别加入40%、 50% 、60% 、70% 、80% 乙醇50 mL,在70 ℃ 下提取60 min, 考察乙醇浓度对黄酮提取率的影响。试验结果表明,乙醇浓度为70%时,黄酮提取率最高,低于或高于70%,提取率均降低。

2. 1. 4 料液比对黄酮提取率的影响

准确称取藕粉2. 0 g置于圆底烧瓶中,分别按料液比1∶ 15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 加入70% 乙醇,在70 ℃ 下提取60 min,考察料液比对黄酮提取率的影响。试验结果表明, 随着提取液的比例不断增大,黄酮提取率也不断升高,当料液比达到1∶25 之后,再增加提取液的量,提取率增加缓慢。

2. 2 正交试验设计与结果

用正交试验法进行试验,来确定用乙醇提取藕中总黄酮的最佳工艺,根据单因素试验结果,对影响藕中总黄酮提取的主要因素: 乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间,选用四因素三水平L9(34) 正交设计方案进行试验,见表1,正交试验结果见表2,方差分析见表3。

由表2 的试验结果和表3 的分析结果可知,四因素对黄酮提取率均无显著影响,相对而言,提取温度对黄酮提取率影响最大,料液比对黄酮提取率影响最小,四因素对黄酮提取率的影响大小依次为A > C > B > D。用乙醇提取藕中总黄酮的较优工艺组合是A2B2C2D2,即用70% 乙醇,料液比1∶25,在70 ℃ 下提取60 min。

2. 3 验证实验

根据正交试验确定的较佳工艺条件,进行藕中总黄酮的提取及含量测定,结果见表4。实验结果表明,在最佳工艺条件下,总黄酮得率稳定,而且均大于正交试验中的提取率,表明该工艺合理。

3 结论

卷柏中总黄酮提取工艺的研究 篇6

卷柏为蕨类植物门卷柏科卷柏属植物, 约有700种, 广泛分布于全世界。我国约有50种, 产于全国各地[l]。常作为药用的有6种, 被《中华人民共和国药典》2005年版中收载的两种为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Spring;垫状卷柏S.Pulvinata (Hook. etGrev.) Maxim., 具有活血通经之功效, 用于经闭痛经, 症瘕痞块, 跌扑损伤;炒炭后可化瘀止血, 用于吐血、崩漏、便血、脱肛[2]。我国南方部分地区广泛使用的石上柏, 《广西中药材标准》中收载石上柏的来源为卷柏科植物深绿卷柏S.doederleinii Hieron. (别名:大叶菜) 江南卷柏S.moellendorfii Hieron. (别名:地柏枝) , 具有清热解毒、抗癌、止血之功效, 用于癌症、肺炎、急性扁桃体炎、眼结膜炎和乳腺炎。《贵州民间药物》中将深绿卷柏称为多德卷柏S.doederleinii Hieron, 具有祛风、散寒、消肿、止咳之功效, 用于风湿病, 风寒咳嗽[3,4]。山东省有些地区使用中华卷柏S.sinensis (Desv.) Spring, 用于治疗慢性气管炎。

卷柏中含有氨基酸以及海藻糖等多糖类成分[5];从江南卷柏的氯仿提取物中分离得到异茴芹素 (isopimpinellin) 、谷甾醇及少量二萜内酯;深绿卷柏的脂溶性成分中含有:十四烷酸乙酯、7, 10, 14-三甲基十五烷酮一2、十五烷酸乙酯、十六烷酸甲酯、十六烷酸乙酯、十六烷酸异丙酯, 9-十八碳烯酸 (Z) 乙酯、15-甲基-十七烷酸乙酯;并含有谷甾醇和异茴芹素 (isopimpinellin) 。

药用卷柏均为多年生草本植物, 全国多数省份均产, 春秋两季均可采集, 药源丰富。虽为同科同属植物, 但在化学成分、功能主治等方面不尽相同, 尤其从临床应用上, 石上柏具有抗癌作用, 而其它几种均未见抗癌药效的报道;江南卷柏的临床应用和药理作用显示有良好的止血效果, 而药材石上柏的原植物来源为深绿卷柏和江南卷柏, 这在临床使用上有差异。鉴于药用卷柏丰富的资源, 有必要做进一步的更深人的研究。

1 仪器、试剂和材料

1.1 仪器

UV-757CRT型紫外可见分光光度计, 上海精密科学仪器有限公司; RE-52型旋转蒸发器, 上海亚荣生化仪器厂; SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵, 郑州长城科工贸有限公司; KQ-500DE型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司; Ⅲ型电热鼓风干燥箱, 江苏省金坛市大地自动化仪器厂; FA-2004型电子分析天平, 上海恒平科学仪器有限公司; ACTP-11B5型架盘药物天平, 北京伫武天平厂; DRT-SX型数显恒温加热套, 郑州长城科工贸有限公司; 酒精计, 武强县标准计量仪表厂。

1.2 试药

分析醇95%, 沈阳市东陵区红日化工厂; 甲醇, 天津市北方天医化学试剂厂; 固体氢氧化钠, 天津市东丽区泰兰德化学试剂厂; 浓盐酸 (36%～38%) , 哈尔滨市新达化工厂; 薄层层析硅胶, 青岛海洋化工有限公司; 无水乙醇, 沈阳市华东试剂厂; 羧甲基纤维素钠, 哈尔滨化工化学试剂厂; 亚硝酸钠, 天津市瑞金特化学品有限公司; 芦丁标准品, 中国药品生物制品检定所; 甲酸, 哈尔滨市新达化工厂; 卷柏, 购于当地药材市场。 注:所用试剂均为分析纯, 配液和提取所用水为蒸馏水。

2 实验方法

2.1 原料的预处理

卷柏药材于60℃干燥3h, 粉碎过20目筛。

2.2 卷柏中总黄酮的提取

2.2.1 浸泡提取法

卷柏药材粉碎过20目筛, 取2g, 加95%乙醇30mL, 冷浸24h, 使有效成分充分浸出, 取上清液, 压榨残液, 过滤, 滤液浓缩后得提取物待测。平行试验3次[12]。

2.2.2回流提取法

卷柏药材粉碎过20目筛, 取2g, 加95%乙醇30mL回流提取3次, 每次1h, 合并提取液, 过滤, 滤液浓缩, 浓缩后得提取物待测。平行试验3次。

2.2.3 超声波提取法

卷柏药材粉碎过20目筛, 取2g, 用滤纸包好, 放入乙醚中浸泡30min, 加95%乙醇30mL, 超声提取3次, 每次30min, 超声温度为50℃, 功率为70% (总功率为500w) , 合并提取液, 过滤, 滤液浓缩, 浓缩后得提取物待测。平行试验3次。

2.3 卷柏中总黄酮的定性实验

2.3.1 化学定性实验

卷柏生品粉末0.1g, 加95%乙醇10mL, 加热5 min, 过滤, 取滤液1mL, 加镁粉少量与盐酸2～3滴, 观察反应结果。

2.3.2 薄层色谱法定性实验

取本品粉末2g, 加甲醇50mL加热回流1h, 过滤, 滤液蒸干, 残渣加无水乙醇3mL使溶解, 作为供试品溶液。另取卷柏对照药材2g, 同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法, 进行试验。吸取上述两种溶液各3μL, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层上, 以异丙醇-浓氨水-水 (13:1:1) 为展开剂展开, 取出, 晾干, 喷以2%三氯化铝甲醇溶液, 预饱和30min, 展开, 取出, 晾干, 供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置, 显相同颜色的斑点[6]。

2.4 超声波提取法的单因素实验

2.4.1 乙醇浓度对卷柏中总黄酮提取含量的影响

实验以卷柏药材2g, 料液比1/15 (g/mL) , 超声温度为50℃, 超声功率为70% (350w) , 提取3次, 每次30min的条件下, 分别以50%, 60%, 70%, 80%, 95%的乙醇浓度提取卷柏中总黄酮。

2.4.2 超声功率对卷柏中总黄酮提取含量的影响

实验以卷柏药材2g, 料液比1/15 (g/mL) , 乙醇浓度70%, 提取3次, 每次30min的条件下, 分别以超声功率40%, 50%, 60%, 70%, 80% (总功率为500w) 提取卷柏中总黄酮。

3 实验结果

3.1 卷柏中总黄酮定性实验的结果

3.1.1 化学定性实验的结果

卷柏乙醇提取液进行盐酸镁粉反应后呈深红棕色

3.1.2 薄层色谱法定性实验的结果

可以看出, 在506nm波长处有最大吸收, 以此作为测定波长。

3.2 超声波提取法单因素实验结果

3.2.1 乙醇浓度对卷柏中总黄酮提取含量影响的结果

随着提取所用乙醇溶液中乙醇浓度的升高, 总黄酮的提取率有一个先上升后下降的趋势, 在乙醇浓度为70%时提取率达到了最大值。黄酮为极性化合物, 根据相似相溶原理, 通过调节乙醇和水的配比改变乙醇溶液的极性, 对总黄酮的提取效果有较大影响。

3.2.2 超声功率对卷柏中总黄酮提取含量影响的结果

卷柏中总黄酮提取率随着超声功率的增大而增大, 70%时达到最大值, 随后超声功率再增大提取率反而降低。一般来说, 增大超声波功率有助于目标产物的提取, 功率越大提取应越完全, 超声功率过大反而会导致总黄酮的提取率下降, 这是因为超声功率过大时会产生并聚集大量的热量, 导致总黄酮受热分解, 结构遭到破坏, 从而降低了总黄酮的提取效果。

4 讨论

4.1 提取溶剂的选择

提取黄酮类化合物, 一般常以水、乙酸乙酯、乙醇或甲醇等为溶剂, 但对于不同的原料因成分的差异, 提取效果差别很大。比较了几种常用溶剂, 水提取不完全, 而且杂质较多;乙酸乙酯虽提出的杂质少, 但黄酮提取不完全;乙醇提取完全, 但杂质很多;甲醇提取完全, 并且提出的杂质很少。但甲醇的毒性较大, 鉴于综合性考虑选乙醇为提取溶剂, 且针对乙醇提取杂质多的缺点采用了相应的除杂试剂。

4.2 除杂试剂的选择

因大多数糖类不干扰测定, 干扰卷柏测定的杂质主要为脂溶性物质, 如叶绿素等, 脂溶性物质除得越充分, 黄酮溶解的越少, 说明除杂效果越好。比较了石油醚、乙醚和氯仿三种常用除脂试剂, 试验结果石油醚除杂效果差, 氯仿对黄酮有一定的溶解性, 乙醚除杂效果最好, 并且不溶解黄铜。

5 结论

本实验考察浸泡提取法、回流提取法、超声波提取法从卷柏中提取总黄酮的能力, 并用紫外分光光度法对提的总黄酮含量进行测定, 结果显示超声波提取法比其他提取法有更好的提取率。运用单因素试验结合乙醇浓度对超声波法从卷柏中提取总黄酮的影响。结合生产成本等多方面考虑确定超声波法从卷柏中提取总黄酮的最佳条件为以70%乙醇作为溶剂, 超声功率为350w, 可以实现大规模生产。

参考文献

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金银花提取物的质量控制研究 篇7

1仪器与试剂

金银花购于河南省, 阴干、粉碎后备用。超声波仪购于昆山市超声波仪器有限责任公司;Waters 600高效液相色谱仪购于美国Waters公司。提取用乙醇为食用乙醇, 乙腈、甲酸为色谱纯, 其他试剂均为分析纯。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。

2色谱分析条件

以Kromasil-C18色谱柱 (粒径5μm, 250 mm×4.6 mm) 作为固定相, 以色谱乙睛作为A流动相, 0.1%甲酸水作为B相, 洗脱流程为:0-20min, 10%A;20-30min, 10%-50%A。色谱柱温保持在30 o C, 绿原酸检测波长设定在280nm, 流速为1 m L/min保持不变, 进样量10μL。每次样品分析结束后, 以10%乙腈平衡柱子10 min, 然后进行下一个样品的分析。

3方法与结果

3.1乙醇超声提取条件优选。

为了优化制备工艺, 根据有关报道, 以直接影响提取率的提取溶剂浓度、溶剂用量、提取时间、提取温度为实验因素, 提取三次, 进行正交试验优化, 每个实验因素分为三个水平, 见表1。精密称取金银花10 g, 按照正交设计方案, 以绿原酸收率为指标进行L9 (34) 正交试验, 合并提取液过滤, 然后按照采用HPLC的方法对不同提取条件下得到的提取物进行绿原酸含量测定。结果见表2。正交试验目的是选择最合适的提取条件, 因此对正交试验可以不考虑差异的显著性, 所以只需要进行极差分析。从表2可以看出, 所得极差依次是:RA=1.40、RB=1.31、RC=0.95、RD=0.56, 极差最大的是第1因素 (乙醇浓度) , 其次是第2因素 (乙醇用量) 、第3因素 (提取时间) 、第4因素 (提取次数) 。从图2各个值上看, 第1因素的第1水平 (乙醇浓度70%) 最好, 第2因素的第3水平 (乙醇用量20倍体积) 最好, 第3因素的第3水平 (提取45 min) 最好, 第4因素的第3水平 (3次) 最好。也就是说, 各种因素的最好搭配是A1B3C3D3 (浓度是70%的乙醇, 按照1:20的固液比, 提取3次每次30 min) , 即试验3所用条件。

3.2金银花提取物定量方法研究。

3.2.1标准溶液的配制。精密称取绿原酸对照品5.0 mg, 置于10 m L的容量瓶中, 用色谱甲醇溶解、稀释至刻度, 混匀, 作为储备液, 备用。然后分别取适量的绿原酸储备液, 加入一定量的甲醇, 得到绿原酸浓度分别为5、10、25、50、100、200、300μg/m L的一系列标准溶液。3.2.2方法验证。3.2.2.1线性、检出限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 。以制备的一系列标准溶液, 进行HPLC测定, 每个浓度测定三次。以峰面积的平均值为纵坐标, 标准溶液浓度 (μg/m L) 为横坐标, 采用最小二乘法求得的方程为Y=156010 X-5756, 相关系数R2=0.999, 表明所建立的分析方法在浓度范围5～300μg/m L内, 浓度与峰面积之间具有很好的线性相关性, 此方程可以用于样品中绿原酸的定量分析。在HPLC分析时, 分析物的信号高度为基线噪音高的3倍 (S/N=3) 时的浓度定义为检出限 (LOQ) ;信号高度为基线噪音高的10倍 (S/N=10) 时的浓度定义为定量限 (LOD) 。在实验中, 取一定量的绿原酸储备液, 逐渐稀释, HPLC-PAD分析, 直至最小检出浓度。最终测得绿原酸的LOQ和LOD分别为0.19μg/m L和0.76μg/m L, 表明该方法具有较高的灵敏度。3.2.2.2检测方法的重现性、精密度、稳定性。在建立的HPLC检测条件下, 对浓度25μg/m L、100μg/m L和200μg/m L的绿原酸对照品溶液分别重复测定5次, 计算保留时间和峰面积相对标准差 (RSD) 。结果见表3。从表3中结果可以发现, 三种浓度的保留时间RSD均小于1.9%, 并且峰面积RSD均小于2.7%。所建HPLC方法的精密度通过日间和日内两方面来衡量。日内精密度通过一天内重复进样6次, 计算其保留时间和峰面积RSD考察。日间精密度通过每天重复进样3次, 连续5天, 计算其保留时间和峰面积RSD考察。在实验中所用对照品溶液浓度为100μg/m L, 结果见表4。RSD值均不超过2.6%, 显示良好的精密度。3.2.2.3回收率实验。通过在样品溶液加入三种量的绿原酸对照品测定加样回收率。在3份金银花样品溶液中分别加入200μg、400μg、600μg绿原酸, 分别重复进样3次, 计算样品平均回收率和RSD。结果如表5, 显示加样回收率在98%～102%之间, RSD均小于2.8%, 说明该方法具有较好的回收率。

4结论

金银花提取工艺以绿原酸收率为指标, 进行L9 (34) 正交试验对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数进行了优选, 确定了最佳的超声提取工艺:浓度是70%的乙醇, 按照1:20的固液比, 提取3次每次30 min。同时, 为了有效地控制金银花提取物的质量, 对其中绿原酸的含量测定方法进行了严格的方法学验证。结果表明该分析方法重现性好、精密度高、回收率稳定、可靠性强, 可用于金银花提取物的质量控制。

参考文献

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金银花总黄酮的提取 篇8

1 仪器与试药

岛津UV-2401型紫外分光光度计，Sartorius BP-211D型电子天平，HHS-214型电热恒温水浴锅，调温电热器。蜂房购于安徽亳州药材公司;芦丁对照品(批号100080-200306)购于中国药品生物制品检定所;亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂均为分析醇。

2 正交实验优选提取工艺

2.1 提取方法

根据蜂房总黄酮化合物的性质与相关文献报道[5]，选取乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素，每个因素选取3个水平，以总黄酮化合物的提取率为评价指标，选用L9(34)正交表进行实验，因素水平见表1。取蜂房样品10.0g，按因素水平表下各工艺条件进行提取，分别测定各提取液中蜂房总黄酮化合物含量，计算蜂房总黄酮化合物的提取率。

2.2 蜂房总黄酮的测定方法

2.2.1 芦丁标准品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10.55mg,95%乙醇溶解定容至50mL，摇匀，得浓度为0.211mg/mL芦丁标准液，备用。

2.2.2 样品溶液的制备

将正交实验所得样品提取液用相应浓度的乙醇定容至500mL，作为样品溶液，备用。

2.2.3 紫外吸收光谱扫描

将芦丁标准液与蜂房样品液按2.2.4项下方法操作，在200～600nm范围内做全波长扫描，两者在511nm处均有平缓吸收峰。

2.2.4 标准曲线的制备[6]

精密吸取芦丁标准液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置25m L容量瓶中，各加水至6.0mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，混匀，放置6min，再加入4%氢氧化钠试液10mL，加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，在511nm波长处测定吸光度。以芦丁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，回归方程为A=0.0124C+0.011,r=0.9998。表明芦丁在浓度为8.44～50.64μg/m L范围内与吸光度呈良好的线性关系。

注：F0.05(2,2)=19.00。

2.2.5 精密度实验

取一份样品测定液，连续测定吸光度6次，结果RSD=0.2%。

2.2.6 稳定性实验

取一份样品测定液，分别在5、10、15、20、25、30min时测定吸光度，结果RSD=1.7%，说明样品在30min内稳定性良好。

2.2.7 加样回收率实验

在已知总黄酮含量的6份相同样品溶液中，精密加入一定量的芦丁标准液，混匀，同法测定吸光度并计算回收率。结果平均回收率为102.4%，RSD=1.0%。

2.2.8 总黄酮化合物的含量测定

在511nm波长处，分别测定样品液的紫外吸光度，由回归方程计算样品中总黄酮化合物含量。

2.3 正交实验结果

总黄酮提取率测定结果见表2，用直观分析法比较4个因素的极差，可得RD>RA>RB>RC，表明提取次数(D)对提取结果影响最大，其次是乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)，而提取时间(C)影响最小。因实验无空白列作对照，所以采用常规方法[7]，将离差平方和最小项近似作为误差的估计，即以提取时间组(C)作为误差参照组，对其它3个因素水平进行方差分析，结果见表3，可以看出提取次数(D)与乙醇浓度(A)各水平间有显著性差异(P<0.05)，而乙醇用量(B)、提取时间(C)各水平间无显著性差异(P>0.05)，可见影响蜂房总黄酮提取的主要因素是提取次数和乙醇浓度。根据实验结果，各因素均选择最好水平，最终确定蜂房总黄酮化合物提取的最佳工艺为A1B2C3D1，即用15倍量的95%的乙醇，回流3次，每次1h。

3 最佳工艺的验证

称取蜂房3份各50g，以A1B2C3D1条件进行提取，测定总黄酮化合物含量，计算总黄酮化合物提取率。结果3次实验总黄酮化合物的提取率(%)为1.21±0.09，均在正交实验的较高水平，而且结果稳定，利于扩大生产。

4 讨论

本文以芦丁为对照品，通过加入黄酮特征显色剂，定量生成络合物，在511nm处产生吸收峰，采用比色法可以测定蜂房总黄酮化合物的含量。实验结果可以看出，对于总黄酮化合物的提取率，因素D、A的影响较大，各水平间有显著性差异(P<0.05)，其它因素影响较小。蜂房总黄酮化合物的最佳提取工艺为15倍量的95%乙醇溶液，回流提取3次，每次1.0h。本法优选出的提取工艺简单、稳定性好，回收率高，可为蜂房药效的进一步研究和资源开发利用提供科学依据。

摘要：目的:优选蜂房总黄酮化合物的提取工艺。方法:以蜂房总黄酮化合物的提取率为指标,选用L9(34)正交实验考察乙醇浓度、乙醇用量、回流提取时间、回流次数等因素对蜂房总黄酮化合物的影响,并对正交实验结果进行验证。结果:影响蜂房总黄酮化合物得率的最主要因素是回流提取次数,其次为乙醇浓度;最佳提取工艺为15倍量95%的乙醇溶液,回流3次,每次1h。结论:优选工艺合理、稳定、重现性好。

关键词：蜂房,总黄酮化合物,正交实验

参考文献

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[6]马宏芳,牛雪平,李焕珠.黄金菊总黄酮提取工艺研究[J].内蒙古大学学报,2007,38(1):117.

蜈蚣草总黄酮提取工艺的优选 篇9

黄酮类化合物是一类天然产物, 广泛存在于植物界, 是许多中草药的有效成分[1]。天然来源的生物黄酮分子量小, 能被人体迅速吸收, 能通过血脑屏障, 能进入脂肪组织, 进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防治动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞[2]。

现代药理学研究证明, 黄酮类化合物抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松, 清除自由基、超氧化物和羟基自由基, 抑制脂质过氧化, 以及具有抗癌、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[3,4]。

蜈蚣草 (Pteris vittata L.) 属蕨类植物门、凤尾蕨科、凤尾蕨属, 别名蜈蚣蕨、长叶甘草蕨、舒筋草、牛肋巴, 生于山坡、路边的钙质土或石灰岩壁缝中。蜈蚣草广布于我国长江以南地区, 北到陕西、甘肃和河南南部。《全国中草药汇编》记载:蜈蚣草性味淡, 平;祛风活血, 解毒杀虫。主要用于防治流行性感冒、痢疾、风湿疼痛、跌打损伤;外用治蜈蚣咬伤、疥疮[5]。本文以提取总黄酮的得率为指标, 应用正交设计对蜈蚣草总黄酮提取工艺条件进行优化, 得到总黄酮的最佳提取工艺, 为将来进一步开发蜈蚣草资源提供参考。

2 材料与方法

2.1 材料

蜈蚣草采自重庆大学校区周围, 经天水师范学院生化学院汪之波老师鉴定为凤尾蕨科凤尾蕨属植物Pteris vittata L.。蜈蚣草全草, 室温干燥, 粉碎, 过80目筛, 备用。

2.2 主要试剂及仪器

芦丁标准品购自南京替斯艾么中药技术研究所。乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为国产分析纯试剂。主要仪器为电子天平 (北京赛多利天平有限公司) 、RE—52AA旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) 、SHZ—D循环水式真空泵 (河南开封宏兴科教仪器厂) 。

2.3 方法

2.3.1 标准曲线的绘制

准确称取120℃干燥后并恒重的芦丁标准品25mg, 加入75%的乙醇溶液80ml, 加热溶解, 冷却后用75%的乙醇定容至100ml, 摇匀备用, 配制成浓度为0.25mg/ml的芦丁标准溶液;采用NaNO2-Al (NO3) 3-NaOH光度法制作标准曲线[6]。精密吸取0、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml上述芦丁标准溶液, 分别放置在25ml的容量瓶中, 加5%亚硝酸钠1ml摇匀放置6min;加10%的硝酸铝1ml摇匀放置6min;加4%的氢氧化钠10ml, 用75%的乙醇稀释至刻度, 放置15min后测吸光度。以吸光度为纵坐标, 芦丁标准液浓度为横坐标, 绘制标准曲线 (图1) 。

2.3.2 蜈蚣草总黄酮含量的测定

准确称取蜈蚣草干粉1g, 置于100ml烧瓶内, 以一定液固比例加入乙醇水溶液, 在一定温度下回流提取一定时间后过滤。滤渣以同样条件提取、过滤, 合并滤液, 然后用乙醇水溶液定容。用制作标准曲线的同样方法测定蜈蚣草总黄酮的得率。

其计算公式为:提取液总黄酮 (以芦丁计) 含量 (mg) =样液黄酮含量 (mg) ×提取液定容体积 (ml) /样液体积 (ml) ;得率 (%) =样液中黄酮的含量 (mg) /蜈蚣草重量 (mg) ×100%。

2.3.3 蜈蚣草总黄酮最佳提取条件的确定

根据单因素预实验, 选择水浴温度、乙醇浓度、提取时间、液固比四个因素 (表1) , 固定提取次数为3次, 选用L9 (34) 正交表设计实验, 以蜈蚣草总黄酮得率作为考察指标, 并利用SPSS 11.5进行分析以确定蜈蚣草总黄酮最佳提取工艺参数[7]。

3 结果与分析

3.1 蜈蚣草总黄酮定性分析[8]

取上述提取的样品溶液滴一滴在滤纸上, 在可见光下呈灰黄色, 在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点;取样品溶液1ml, 滴加1%的氢氧化钠溶液, 溶液出现桔黄色;取样品溶液点在滤纸上, 滴加1%的三氯化铝乙醇溶液, 吹干在可见光下呈灰黄色, 在紫外光下呈黄色荧光斑点;取样品溶液点在滤纸上, 滴加1%的乙酸镁甲醇溶液, 吹干, 在紫外光下呈黄色斑点;取样品溶液1ml在试管中加镁粉, 再加入浓盐酸数滴, 在泡沫处呈紫红色;取样品溶液1ml, 滴加1%的三氯化铁溶液, 溶液产生墨绿色沉淀。综合以上颜色反应结果表明, 蜈蚣草乙醇提取物含有黄酮类化合物, 可能含有黄酮醇和二氢黄酮。

3.2 正交试验结果

从表2分析结果可知, 各因素对蜈蚣草总黄酮提取率的影响强弱顺序为:D>B>A>C, 即乙醇浓度>提取时间>提取温度>料液比。我们选定蜈蚣草总黄酮最佳提取工艺为A2B3C1D1, 即提取温度60℃、提取时间3h、料液比1∶15、乙醇浓度60%, 在此条件下蜈蚣草总黄酮得率为6.15%。

4 结论

蜈蚣草乙醇提取液经过颜色反应后初步鉴定为黄酮类化合物, 正交试验得出总黄酮的最佳提取工艺为:A2B3C1D1, 即提取温度60℃、提取时间3h、料液比1∶15、乙醇浓度60%, 在此条件下蜈蚣草总黄酮的得率为6.15%。

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