人博卡病毒

人博卡病毒（共3篇）

人博卡病毒 篇1

呼吸道感染是儿童时期最常见的疾病,亦是引起儿童死亡的常见原因, 病毒又是儿童呼吸道感染的最常见病原体,其中近年来发现的人博卡病毒(human bocavirus,HBOV)是儿科临床上较为多见的一种病原体[1]。 人博卡病毒于2005年首次在下呼吸道感染的瑞典儿童的鼻咽分泌物中分离[2]。 随后,世界各地纷纷证实有该病毒流行,提示人博卡病毒呈全球分布。 本文将从以下几个方面进行综述,以加深临床医生对该病毒的认识。

1人博卡病毒的发现及命名

2005年9月6日,Allander等[2]从17例下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物 中分离出一种过去未被检出 的病原体 ,基于该病 毒的氨基 酸序列特 征与牛 (bovine) 博卡病毒和犬 (canine) 细小病毒相似 , 因此被命名为人博卡病毒,源于bovine中的bo和canine中的ca字母的组合[3], 后因其他分型的出现 , 而被称为人博卡病毒。 基于其核酸序列特征将其归属于细小病毒科,细小病毒亚科,博卡病毒属。 2005年9月22日澳大利亚学者再次从急性呼吸道感染的患儿中检测出同一种病毒[4],随后很多国家或地区相继证实有人博卡病毒流行。 2005年12月,刘巧突等[5]采用聚合酶链反应(PCR)技术从湖南急性肺炎患儿的标本中首次检出人博卡病毒。 目前人博卡病毒分4型:人博卡病毒1、人博卡病毒2、人博卡病毒3、人博卡病毒4[2,6,7], 人博卡病毒1~4型在胃肠道标本中均有检出,而人博卡病毒1~3型除在胃肠道标本中检出外,在呼吸道分泌物中也都有检出[8]。

2人博卡病毒的基因特征分析

人博卡病毒病毒颗粒呈直径21~28 nm的球形, 二十面体立体对称结构,是一种线性单链DNA、无包膜病毒,长约5.2 kb,有3个开放读码框,2个主要的开放式阅读框,分别编码两个主要结构蛋白(VP1和VP2), 1个非结构蛋白(NS1)和1个次要开放阅读框编码非结构蛋白(NP1)[9,10,11]。 NS1能够启动病毒DNA的复制, 最早被转录、翻译,NP1的功能尚不明确。VP1、VP2极其相似,是病毒衣壳的重要结构蛋白,二者含有一个相同的C端,所不同的是VP1的N端有其特有磷脂酶A片段[12],与病毒的感染有关 。 人博卡病毒基因组中编码非结构蛋白(NS1、NP1)的区域比较保守,而编码核衣壳蛋白(VPl和VP2)的区域较易发生突变[13]。 人博卡病毒基因组不编码聚合酶,其DNA复制完全依赖宿主细胞DNA的聚合酶进行复制。

3人博卡病毒的流行病学特征

目前国内外对人博卡病毒流行病学方面的研究已取得一定进展。 自2005年瑞典首次报道人博卡病毒后,各个国家和地区相继在患者的呼吸道分泌物、 粪便、血液及脑脊液等样本中发现此病毒,但目前临床流行病学报道的人博卡病毒的阳性检出率相差较大,这可能与样本类型、采样时间、样本处理程序、患者年龄、检测方法敏感性和病情等有关。 人博卡病毒多在呼吸道分泌物标本中被检出,因此通过呼吸道传播的可能性很高,但亦不能排除粪-口传播及血液传播的可能性。 人博卡病毒可以感染不同年龄组人群, 而儿童为主要感染人群。 人博卡病毒没有明显季节性,全年均可感染,但相关文献报道感染多集中在冬春季节[13,14]。

3.1国外人博卡病毒的流行状况

人博卡病毒感染在不同国家和地区的发病率为1.5%~24.6%[14,15]。 韩国的Jong等[16]收集2010~2011年1528例呼吸道感染的儿童检测示187例人博卡病毒阳性,阳性率为12.2%,以12~24个月的患儿居多, 感染高峰为6月份。 越南的Tran等[17]收集了2010年4月~2011年5月急性呼吸道感染的患儿标本1082份, 阳性率为7.2%,其中12~23个月患儿感染率高,从10月份至来年4月的旱季的感染率高于5月份到10月份的雨季。 希腊的Katerina等[18]对1年内收集的370例呼吸道感染患儿标本进行检测 , 人博卡病毒的感染率为3.2%,患儿平均年龄1.8岁,仅在寒冷的季节有检出。 沙特阿拉伯的Abdel-Moneim等[19]对80例收集于2012年1~5月的呼吸道感染患儿的鼻咽拭子进行反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测,人博卡病毒的感染率是22.5%,阳性率远高于其他国家和地区,其中以2岁以下的的患儿居多。 日本学者Endo等[20]对204份血清样本进行特异性抗体的检测,发现6岁以上呼吸道感染患儿中血清抗人博卡病毒抗体阳性率为94%~100%,这可能于患儿感染人博卡病毒后机体产生的保护免疫有关。 在消化道感染方面,伊朗学者Monavari等[21]对200例年龄1~5岁因急性胃肠炎住院的患儿的粪便标本进行RT-PCR检测,有16例人博卡病毒阳性,阳性率为8%。

3.2我国的流行情况

Chen等[22]对2009年1月~2011年3月长庚儿童医院113例2岁以下毛细支气管炎的患儿做病毒检测,查出人博卡病毒阳性率为19.5%,为第二常见病原体。 利蓓荃等[23]于2009年1月~2010年12月收集急性呼吸道感染的3826例患儿的痰标本,人博卡病毒的阳性率为7.13%,感染年龄多为1~12个月的患儿, 发病季节以秋冬为主。 肖霓光等[24]对2007年9月~ 2008年3月长沙的773例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物检测,得到87例感染人博卡病毒,阳性率为11.4%,感染年龄为18 d~64个月,冬春季流行。 张琴等[25]选取2009年11月~2010年6月南京呼吸道感染患儿鼻咽吸取物标本100份,检测出5例感染人博卡病毒 ,阳性率为5% 。 李晓燕等[26]收集2008年9月~2009年5月天津急性下呼吸道感染住院儿童的鼻咽吸取物标本202份,其中感染人博卡病毒14例, 阳性率为6.9%,所有阳性患儿的年龄均≤6岁,6月~ 12月龄患儿感染率最高 , 为14.3% 。 杨晶艳等[27]于2010年5月~2011年8月收集四川大学华西第二医院呼吸道感染儿童的787例呼吸道分泌物标本,其中65例人博卡病毒阳性 ,检出率为8.26%,其中33例混合感染其它呼吸道病毒,感染对象以<3岁儿童为主,季节分布不明显,以2010年5、7、8、12月检出率较高。

4人博卡病毒感染的临床特征

人博卡病毒首先在有呼吸道症状的患者的分泌物中检出,人博卡病毒与呼吸道感染的关系有较多、 较深的文献支持。 长沙地区87例感染人博卡病毒的患儿大部分出现阵发性干咳,其次是发热(71.2%)、喘息(31.0%)、腹泻(8.0%)及呼吸困难(5.7%),临床诊断以支气管肺炎、肺炎为主,分别占60.9%和23.0%, 其次是毛细支气管炎占10.3%,另外还有少数诊断为急性支气管炎、支气管哮喘和喉炎[24]。 利蓓荃等[23]报道苏州地区89例单纯人博卡病毒感染呼吸道感染患儿中诊断为上呼吸道感染4例(4.49%),大叶性肺炎5例(5.62%),重症肺炎4例(4.49%),支气管肺炎76例(85.39%)。 主要临床症状有咳嗽86例(96.63%), 发热50例(56.18%),喘息41例(46.07%),胃肠道症状12例(13.48%),肺部啰音75例(84.27%)。 人博卡病毒还可引起病毒血症[28,29,30],还有报道称其与婴幼儿喘息性疾病存在相关性[31,32]。 人博卡病毒也可引起重症感染,表现为缺氧、呼吸窘迫、喘息、咳嗽和发热[33], 可并发气胸、纵隔气肿、皮下气肿和急性呼吸衰竭,甚至危及生命[34]。 另外 ,人博卡病毒在急性胃肠炎患儿的大便及脑炎患儿的脑脊液中也被检出。 前者主要是腹泻和呕吐等急性胃肠炎症状。Mitui等[35]报道2例严重脑炎死亡患儿的脑脊液及血液检出人博卡病毒,提示人博卡病毒是导致此次严重脑炎的主要病原体。

5实验室检查

目前,国际上对人博卡病毒感染的诊断没有统一的标准,电镜、病毒分离培养法、分子生物学及免疫学方法均可检测人博卡病毒,电镜检测比较直观可靠, 可对人博卡病毒的形态结构进行观察,但其具有设备昂贵、操作技术要求高,检测时间长且阳性率低等缺点,故不适用于临床[36]。 人博卡病毒体外细胞培养增殖不易,Dijkman等[9]通过立体培养的呼吸道上皮实现了人博卡病毒的体外增殖,人博卡病毒体外的成功培养对其致病性等研究有所帮助。PCR法是目前临床诊断人博卡病毒感染最常用的方法,具有快速、敏感等优点, 常规PCR可以对病毒DNA进行定性,定量PCR可以检测病毒载量[37]。 免疫学方法可以对人体血清中的特异性抗体进行检测,人博卡病毒感染早期血清中出现的Ig M抗体2~3 d便可消失,不利于早期诊断, 而随后出现的Ig G抗体在血清中存在时间较长,因此多根据Ig G抗体滴度的变化来诊断是否存在既往人博卡病毒感染[32]。

6治疗及展望

目前,尚无人博卡病毒感染的抗病毒药物相关研究。 西医对于人博卡病毒感染的治疗主要以抗病毒、 对症治疗及预防并发症为主,其疗效也存在争议。 Schenck等[38]回顾性分析1例造血干细胞移植后的患儿,该患儿住院期间的鼻咽分泌物、血液、粪便标本内均检测到人博卡病毒-1 DNA,然而在更昔洛韦、膦甲酸钠治疗后,人博卡病毒-1 DNA在血清、鼻咽部抽吸物、粪便标本中均未检测到。 而Kupfer等[39]对1份呼吸道标本中检测到人博卡病毒-1 DNA的B细胞淋巴瘤患者注射更昔洛韦后临床症状无明显改善。

近年来中医药治疗小儿病毒性肺炎进展较快,研究内容广泛。 但对人博卡病毒肺炎的研究近乎空白, 我们查阅了国内外文献,未见到一篇中医药关于人博卡病毒的报道。 近年中医药对病毒性肺炎的研究已取得一定的进展,汪受传等[40]研究表明,金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)引起的病毒性肺炎有很好的疗效。 杜丽娜等[41]研究表明,槲皮素、虎杖苷、黄芩素、 汉黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚对RSV具有直接灭活作用,是金欣口服液抗RSV的物质基础。 除去以汪受传等[40]及杜丽娜等[41]对RSV较为系统的临床及实验室研究报告外,其余研究主要以散在的临床经验总结为主,较系统的证治标准研究相对较少。 临床多以症状体征诊断为主,经病原学诊断确诊者仍较少,治疗上多以个人经验为主,尚缺乏统一的治疗标准。 人博卡病毒作为新近发现病原体,在治疗方面的研究目前近乎空白,中医药在抗病毒方面具有明显优势,发挥中医药特色治疗小儿病毒性肺炎,采用专方专药治疗单种病毒感染,在提高治愈率,降低病死率方面,发挥着重要的作用。

目前,关于人博卡病毒的西医临床研究资料较少且不完整,中医药对此病毒的临床研究也近乎空白,因此值得我们深入研究。 我们应在前人对小儿病毒性肺炎多年临床和科学研究的基础上,建立合适的动物模型,研究人博卡病毒感染的致病机制,进一步对小儿博卡病毒性肺炎的证治规律进行深入研究,运用辨证论治的方法,在现代病原学检测技术的指导帮助下, 研究专方专药对该病毒的治疗效果及机制,充分发挥中医中药的优势,提高小儿博卡病毒性肺炎的临床疗效,减少治疗后的不良反应及副作用,降低其发病率及病死率,并对其进行系统、规范、多中心的临床研究,总结出小儿博卡毒性肺炎的病症诊断标准及有效的治疗方法,进而研发出有效的治疗药物,为儿童的健康成长服务,这是近年来研究的重点。

摘要：人博卡病毒是近年来一种在呼吸道和消化道新发现的病原体,目前其发病情况、发病机制及治疗尚不十分明确,但其在临床的检出率并不低,且常可引起较为严重的急性下呼吸道感染,极大地危害患儿的生命健康。目前,尚未研究出针对此类病毒的特效西药,对小儿博卡病毒肺炎的中医药报道也是极少,因此值得进行深入研究。

关键词：人博卡病毒,儿童,研究进展

人博卡病毒 篇2

“冠状病毒”是一个让无数人谈之色变的词语。它让中国万街空巷，使武汉封城，更是有多人因此命丧黄泉。

数天来，冠状病毒肆虐神州大地，成为笼罩在全中国头顶上的阴影。当人们还沉浸于新春佳节之际，冠状病毒已狞笑着降临于人间。刚换上盛装的武汉，数日间便被病毒的风暴所席卷;刚从睡梦中醒来的人们，还没从梦的美好中醒来，便在病毒的淫威下胆战心惊。医院病房外的家属在哭泣流泪中，期盼地看向病房，希望那熟悉的身影能如往日般谈笑间走出。大街上，昔日的喧嚣与繁华已不再，那空荡荡的店面与随处可见的“口罩”在提醒我们这一切并非梦境。每日疫情网上一个个浮动的数字，让每个人的心渐渐纠紧。

但严峻的形势并不能击倒中国人民抗击病毒的决心，党中央发出抗击冠状病毒的号召，无数志愿者争先恐后地赶往前线。每日每夜都有成千上万的物资送往武汉，制药厂整日灯火通明。最可歌可泣的就是战斗在第一线的白衣天使们。平日里，她们平凡地上班下班，未曾留意。但在疫情爆发时，却是她们冲在第一线。她们难道没有家人吗?她们难道没有牵挂吗?他(她)们难道没有自己家庭责任吗?有!但她们却仍坚持在第一线，义无反顾，忍耐着防护服内的闷热，忍耐着没日没夜的工作。她们并非钢铁之身，而是与我们一般的血肉之躯。但是她们却以血肉之躯完成钢铁之身所无法完成的事情。他们把欢乐与乐观留给病人，把风险与泪水留给自己。你可以悠然自得，是有人在替你负重前行。刷着视频，目睹84岁老人含泪的承诺。你们无愧于白衣天使这一称号!

尽管病魔凶残，但我们中国人民意志组成的长城是不可催垮的。纵观历史长河，比这次病毒更恐怖的不在少数。天花、鼠疫便是，但在医学家的不懈努力下终使天花根绝。这不可否认的事实证明“人定胜天”。

人博卡病毒 篇3

1 材料与方法

1.1 主要研究材料

草地夜蛾9 (spodoptera frugiperda 9, SF9) 细胞、含有HBo V1或HBo V2 VP2全长基因的重组杆状病毒毒株、Western blotting (WB) 中使用的小鼠抗HBo V1或HBo V2 VP2的多克隆抗体均由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性腹泻室馈赠;一次性细胞培养瓶及无菌吸管均购于美国Corning公司;SF900Ⅱ细胞培养液、胎牛血清 (FBS) 购于美国Gibco公司;WB中使用的辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的山羊抗小鼠Ig G抗体购于北京康为世纪生物技术公司;氯化铯 (Cs Cl) 购于天津阿尔法公司;聚乙二醇8000 (PEG8000) 、碳酸氢钠以及配置无菌磷酸盐缓冲液 (PBS) 的试剂均购于北京化工厂;BCA蛋白检测试剂盒购于德国Thermo Pierce公司;考马斯亮蓝购于美国Sigma公司;DBA显色试剂盒购于加拿大Vector公司;0.45μm PVDF膜购于德国Millipore公司;Chemi Doc XRS凝胶成像系统为美国Bio-rad公司产品;Tecnai 12透射电子显微镜为FEI公司产品;CS120GXⅡ低温超速离心机为日本日立公司产品;分光光度计为德国Thermo公司产品。

1.2 研究方法

1.2.1 HBo V VP2 VLPs的表达

在细胞培养瓶中用含有10%FBS的培养基培养SF9细胞, 待细胞状态良好时逐渐更换为无血清SF900Ⅱ细胞培养液培养, 待细胞充分贴壁后用含有HBo V VP2全长基因的重组杆状病毒感染SF9细胞, 轻轻晃动使病毒在培养基中均匀分布, 置于27℃培养。收集感染8 d后的细胞及上清于50 m L离心管中, 900 g离心20 min, 分别收集上清和沉淀。沉淀加入25 mmol/L的碳酸氢钠溶液重悬, 约2×107个/m L, 反复冻融2、3次后2 600 g离心45 min, 收集上清。将细胞裂解上清和细胞培养上清混合, 加入终浓度为3%的聚乙二醇8000 (PEG8000) , 混匀后置于4℃沉淀3 h, 2 600 g离心45 min, 弃去上清, 用无菌磷酸盐缓冲液 (PBS) 重悬沉淀, 4℃保存备用。

1.2.2 氯化铯 (Cs Cl) 不连续密度梯度离心纯化VLPs

分别配制浓度为1.50、1.35和1.25 g/m L的Cs Cl溶液, 分别往离心管中从下至上加入不同浓度Cs Cl溶液 (1.50 g/m L 0.50 m L, 1.35 g/m L 1.00 m L, 1.25 g/m L 1.50 m L) , 然后在上面加上PBS重悬的蛋白沉淀, 仔细平衡后置于超速离心机中, 151 000 g, 4℃离心8 h。用一次性无菌注射器插入离心管中吸取VLPs, 用0.45μm PVDF膜PBS透析除去VLPs中的Cs Cl, 得到纯化的VLPs。

1.2.3 HBo V VLPs的鉴定

纯化的VLPs经SDS-PAGE电泳后, 一部分采用考马斯亮蓝染色, 观察纯度;另一部分采用半干法转膜, 进行Wertern blotting试验, 经5%的脱脂牛奶封闭后, 用小鼠抗HBo V VP2多克隆抗体 (一抗) 识别蛋白质, 然后用HRP标记的山羊抗小鼠多克隆抗体 (二抗) 结合一抗, DBA显色观察其抗原性。SDS-PAGE与Wertern blotting结果均采用Chemi Doc XRS凝胶成像系统进行图像分析, 纯化后的VLPs经乌磷酸负染后透射电子显微镜观察其结构 (本过程由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所洪涛院士实验室帮助完成) 。鉴定完成的纯HBo V VLPs采用BCA法测定其蛋白质浓度。

1.2.4 HBo V VLPs蛋白浓度测定

用BSA标准溶液配制浓度为0、25、125.00、250.00、500.00、750.00、1 000.00、1 500.00和2 000.00μg/m L的蛋白标准溶液, 将HBo V VP2 VLPs按一定比例稀释后与标准品同时使用BCA蛋白检测试剂盒进行检测。分光光度计测定540 nm处吸光度值 (OD值) , 根据标准品的蛋白浓度和OD值建立标准曲线, 将待测HBo V VP2VLPs的OD值代入标准曲线计算蛋白浓度。

2 结果

2.1 杆状病毒感染前后SF9细胞的改变

杆状病毒感染前状态良好的正常SF9细胞为圆形或椭圆形, 大小一致, 细胞轮廓清晰, 细胞核居中, 背景干净;杆状病毒感染8 d后, SF9细胞形态不规则, 大小不一, 细胞轮廓不清, 核不清晰, 背景杂乱。见图1。

2.2 SDS-PAGE和Western blotting鉴定

纯化后的VLPs样品经SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定, 纯化后的VLPs经SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色, 观察到条带清晰, 未见明显的杂带, 表明所获HBo V-VLPs蛋白纯度较高, VLPs分子量大约为60 k D, 与相关文献报道结果一致[4]。经Western blotting鉴定, 表达的蛋白为HBo V1和HBo V2VP2蛋白。见图2。

2.3 透射电子显微镜观察VLPs

纯化后的VLPs经乌磷酸负染后以透射电镜观察其结构, 结果见图3, HBo V-VLPs与其他细小病毒结构相似, 为对称正二十面体, 直径为21~24 nm, 与相关文献报道结果一致[4]。

SDS-PAGE结果图中M为中分子量蛋白Marker

2.4 HBo V VLPs蛋白定量

根据蛋白标准液的OD值, 绘制标准曲线, 见图4。计算蛋白浓度的公式为Y=1 932.5X-169.01, 相关系数为0.997 6。将待测样本1︰1稀释后, HBo V1VP2 VLPs的OD540为0.557, HBo V2 VP2 VLPs的OD540为0.854, 代入公式算出样品浓度, HBo V1-VLPs的浓度为1 816μg/m L, HBo V2-VLPs的浓度为2 964μg/m L。

3 讨论

人博卡病毒是2005年新发现的一种新病毒[1], 迄今为止共有4种基因型:HBo V1~4[5]。HBo V1主要存在于呼吸道分泌物中, 研究证实, HBo V1是引起人类呼吸道感染的主要病毒之一, 与婴幼儿喘息密切相关[6,7,8,9,10,11]。在呼吸道感染患者的呼吸道分泌物中, HBo V1的聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 检出率大约是2%~19%。HBo V2~4主要存在于粪便标本中, 尤以HBo V2的检出率最高, 在儿童中检出率达26%, 而HBo V3和HBo V4分别是5%和2%, 而在成年人中检出率分别为4%、1%和1%, 远远低于儿童。流行病学调查显示HBo V2以及HBo V3与婴幼儿胃肠炎的发生密切相关[12,13,14,15], 最新研究显示, HBo V感染可能与间质性肺炎甚至肺癌和结肠癌有关[5,16]。HBo V病毒颗粒由核酸和2个主要的结构蛋白病毒蛋白1 (viral protein1, VP1) 及病毒蛋白2 (viral protein1, VP2) , 以及非结构蛋白1 (non-structural protein, NS1) 和博卡病毒特异性的核磷酸化蛋白1 (nuclear phosphoprotein1, NP1) 组成[17,18,19]。有研究报道, VP2是HBo V病毒颗粒外部结构的主要成分, 在血清学检测中, 抗体主要和HBo V VP2结合[8]。

杆状病毒表达体系是目前为止应用最广泛、功能最全面的真核细胞蛋白表达系统, 其表达的外源基因来源广泛, 遍及病毒、细菌、真菌、动物和植物的等多个生物种群, 其应用范围也涉及很多研究领域。杆状病毒作为外源基因表达载体时, 通常是通过同源重组的方法, 表达的蛋白具有完整的生物学功能。它不仅能进行蛋白质的翻译, 还能在细胞内完成蛋白的翻译修饰, 使得重组蛋白更接近于天然蛋白。HBo V自2005年被发现以后, HBo V病毒样颗粒已通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系成功地表达出来。HBo V病毒样颗粒的表达是通过VP2蛋白在昆虫细胞中借助昆虫细胞的蛋白装配体系, 包装形成具有天然结构的HBo V病毒样颗粒。相对于大肠杆菌表达体系来说, 杆状病毒-昆虫细胞表达的HBo V-VLPs具有更好的生物学活性, 特别是作为免疫原用于实验动物免疫的时候, 其空间结构使得HBo V-VLPs不需要添加免疫佐剂就能诱导强烈的免疫应答反应。此外, 氯化铯不连续密度梯度离心纯化的方法使得病毒样颗粒可以得到充分的提纯, 并且在纯化过程中较其他纯化方法蛋白回收率更高。

目前, 检测病毒感染的主要方法有核酸检测和血清抗体检测, 核酸检测主要采用PCR的方法检测病毒核酸, 该方法灵敏度高, 特异性好, 但需要专门的仪器设备, 实验环境和实验条件要求较高。血清抗体检测主要采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测血清中的病毒特异性抗体, 它灵敏度和特异性均较高, 且不需要特定的仪器, 实验环境和实验条件相对要求较低, 易于推广应用。因此, 血清学诊断是病毒感染诊断过程中常用的手段。在ELISA检测特异性抗体过程中, 用于包被的抗原是关键物质。采用ELISA检测HBo V感染, 获得高纯度的的HBo V病毒样颗粒是关键。

本研究成功利用杆状病毒表达体系表达了HBo V1-VLPs和HBo V2-VLPs, 通过氯化铯不连续密度梯度离心很好地将VLPs分离出来。经SDS-PAGE和Western blotting结果证实了纯化所得的蛋白质为目的蛋白质, 其分子量约为60 k D, 与文献报道的结果相一致[3,20]。同时透射电镜观察结果证实, 目的蛋白形成的病毒样颗粒结构, 形态为对称正二十面体, 颗粒直径为20~25 nm, 其形态与文献[4]报道一致。通过BCA蛋白浓度测定计算出本研究获得的HBo V1-VLPs浓度为1 816μg/m L, HBo V2-VLPs浓度为2 964μg/m L。