人乳头瘤病毒亚型检测

人乳头瘤病毒亚型检测（精选8篇）

人乳头瘤病毒亚型检测 篇1

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是导致宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、宫颈癌发生的直接病因[1,2]。目前发现的HPV有100多个亚型,其中40多个亚型与人类生殖道疾病有关。根据HPV亚型致病力的大小分为高危型和低危型,高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等,主要与外生殖器癌、宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CINⅡ/Ⅲ)的发生密切相关;低危型HPV包括HPV6、11、42、43、44等,主要与尖锐湿疣和宫颈上皮内低度病变(CINⅠ)发生有关[3]。此外,不同国家和地区HPV感染及亚型分布不同,存在地域差异。本研究通过对我院门诊和住院患者宫颈细胞进行HPV分型检测,了解HPV感染率和基因亚型分布,探讨其与宫颈病变的关系,为宫颈癌的防治工作提供临床流行病学依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2011年9月至2012年8月在四川大学华西第二医院妇科门诊就诊和住院的女性患者29832例,年龄18~87岁,平均36±9岁。其中2398例具有宫颈活检组织病理诊断结果,并根据其组织病理学结果进行分组:慢性宫颈炎组599例,CINⅠ组437例,CINⅡ/Ⅲ组906例(其中CINⅡ338例,CINⅢ568例),宫颈癌组456例(其中宫颈鳞癌421例,腺鳞癌21例,腺癌14例)。

1.2 仪器与试剂

Life Pro PCR基因扩增仪TC-96/T/H购自杭州博日科技有限公司,亚能恒温杂交仪YN-H16和HPV基因分型检测试剂盒均购自深圳亚能生物技术有限公司。

1.3 研究方法

采用HPV基因分型检测试剂盒进行HPV检测,经过样本DNA的提取,反向PCR扩增,杂交,洗膜,显色,对所有宫颈脱落细胞进行23种HPV亚型检测,包括18种高危型HPV(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)和5种低危型HPV(HPV6、11、42、43、44)。判读标准:任何一种HPV亚型阳性为HPV感染,两种或以上HPV亚型阳性为HPV多重感染,高危型HPV阳性或高危型和低危型HPV同时阳性者为高危型HPV感染,仅低危型HPV阳性为低危型HPV感染。

1.4 统计方法

运用SPSS 18.0进行统计学处理,对各年龄组及不同宫颈病变HPV感染率比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染率及基因亚型分布

HPV感染率为25.20%(7518/29832),高危型HPV感染率为21.03%(6275/29832),低危型HPV感染率为4.17%(1243/29832),多重感染率为5.94%(1772/29832)。所有样本检测到23种亚型中21种,未检测到HPV MM4和HPV44。高危型HPV亚型由高到低依次为HPV16(8.15%,2431)、58(4.40%,1312)、33(2.24%,668)、52(2.11%,628)、18(1.75%,521)、56(1.50%,447)、66(0.89%,265)、31(0.86%,257)、35(0.82%,245)、68(0.73%,219)、59(0.46%,137)、53(0.46%,137)、45(0.23%,68)、83(0.19%,56)、73(0.16%,47)、51(0.15%,46)、39(0.05%,14)。低危型HPV亚型由高到低依次为HPV43(3.14%,938)、6(2.84%,846)、11(1.33%,396)、42(0.60%,178)。2.2 HPV感染的年龄分布将29832例患者按不同年龄分成5组,<25岁组HPV感染率为25.27%(867/3431),25~34岁组HPV感染率为22.05%(2402/10892),35~44岁组HPV感染率为25.42%(2697/10611),45~54岁组HPV感染率为29.12%(1153/3959),≥55岁组HPV感染率为42.49%(399/939),各年龄组别HPV感染率差异有统计学意义(P<0.001)。除<25岁组外,HPV感染率随年龄增加而增高。HPV感染率在≥55岁组呈现感染高峰,感染率为42.49%。并且各年龄组HPV感染亚型均以高危型为主,尤其以HPV16最多见。

2.3 不同宫颈病变患者HPV感染率及亚型分布

在2398例宫颈病变患者中,HPV感染率为70.39%(1688/2398),在慢性宫颈炎中为38.90%(233/599),CINⅠ为59.73%(261/437),CINⅡ/Ⅲ为83.55%(757/906),宫颈癌为95.83%(437/456)。各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。宫颈癌中HPV感染率鳞癌为95.96%(404/421),腺癌为92.86%(13/14),腺鳞癌为95.24%(20/21)。随着宫颈病变的严重程度增加,HPV感染率增高。在2398例宫颈病变中,常见的高危型HPV依次为16、58、33、18、52,感染率分别为36.41%(873)、14.26%(342)、5.96%(143)、5.21%(125)、5.09%(122)。在宫颈癌中,宫颈鳞癌中常见的高危型HPV依次为HPV16、18、58、33、52,宫颈腺癌中仅检出3种HPV型别,依次为HPV16、33和18,宫颈腺鳞癌中也仅检出3种HPV型别,依次为HPV16、18和52;在CINⅡ/Ⅲ中依次为16、58、33、52、18;在CINⅠ中依次为HPV16、58、52、56、33,在慢性宫颈炎症中则为HPV58、16、52、33、56。见表1。

2.4 HPV单一感染和多重感染与宫颈病变的关系见表2。

在所有1688例HPV阳性的宫颈病变组中,单一感染比例为74.35%(1255/1688),多重感染比例为25.65%(433/1688)。HPV阳性的不同程度宫颈病变中均以单一感染为主。除慢性宫颈炎组外,单一感染比例随宫颈病变程度增加而增加,CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和宫颈癌的单一感染所占比例分别为69.73%,70.41%和84.67%,宫颈不同病变组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。在1255例单一感染病例中,HPV为最常见的亚型,有637例,占单一感染病例的50.76%。

3 讨论

3.1 HPV感染率及亚型分布存在地区差异

本研究对29832例妇女进行了宫颈脱落细胞HPV分型检测,HPV感染率为25.20%,并且以高危型HPV感染为主,高于其他文献基于普通人群的调查报道,这可能与本研究中妇女多为门诊就医人群有关。从全世界范围内来看,最常见的HPV亚型为16,其次为18,其他亚型(如58、52、33等)分布存在地区差异。Munoz等[3]通过抽样调查研究发现,人群中HPV型别分布与导致宫颈癌的HPV型别分布类似,常见的HPV亚型是16、18、45、31、58、33、35。在本研究中,HPV16为最常见的亚型,HPV58和52同样较为常见,这与我国其他地区以往的报道相似[4,5]。而在西方国家较为常见的HPV18在本组病例中相对较少,并且不太常见的HPV33感染率也很高,这进一步说明了HPV感染型别分布存在一定的地区差异。本研究结果分析了女性感染HPV基因亚型分布和排序,为临床防治宫颈癌提供了流行病学依据,对提高宫颈癌防治水平和维护妇女健康具有重大意义。

3.2 HPV感染与年龄的关系

关于HPV感染与年龄分布是否具有相关性目前观点不一。国内外研究报道显示,HPV感染率随年龄的增长呈现“U”型分布,或者呈下降趋势[6]。本研究将所有妇女分为5个年龄组,HPV感染率在各年龄组中差异有统计学意义,除<25岁组外,HPV感染率随年龄增加呈现增高趋势,在≥55岁组中出现高峰,感染率高达42.49%。上述结果可能与≥55岁年龄段妇女样本量相对较少,多因明显异常前来就诊有关。本研究与周庆云等[7]报道结果相似,HPV感染率在>45岁组明显高于36~45岁组和<36岁组,HPV感染率随年龄增加而增高。而与Liu等[8]报道在广州地区HPV感染率在20~29岁组最高,在40~49岁组和>60岁组则相对较低,而在中国香港地区的宫颈癌人群和普通人群中HPV感染率均在20~29岁组最高,在40~49岁组最低。但无论HPV感染是否与年龄分布相关,本研究结果提示应重视对中老年妇女进行宫颈癌的筛查及防治教育。年轻女性由于机体自身免疫功能较强,HPV感染比较常见且容易清除,可积极进行定期随访,以免引起不必要的忧虑。而对于中老年妇女,随着年龄的增长,机体免疫功能减弱和雌激素水平降低,对病毒的清除功能减弱,故HPV感染几率增高,且高危型持续性感染的可能性较大;另外,可能自我保健的意识相对较弱,从而导致宫颈癌的发生。因此,加强中老年妇女宫颈癌筛查的力度及防治教育刻不容缓。

3.3 HPV感染与宫颈病变的严重程度有关

持续性高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变发生的必要条件。Munoz等[3]发现,90%以上的宫颈癌伴有HPV感染,在宫颈癌及癌前病变中,主要感染型别为16、18型。我国的宫颈癌患者最常见的HPV感染为16、18型,其他型别依次为58、52、31、33、45型[9]。本研究结果显示,随着宫颈病变严重程度的增加,HPV感染率(特别是HPV16)均呈增高趋势,说明了HPV感染与宫颈病变的发生密切相关。本研究宫颈癌组HPV感染率为95.83%,病理类型多为宫颈鳞癌,常见的高危型HPV依次为16、18、58、33、52型,符合我国大部分地区的人群分布,与Li等[10]报道四川省成都市的宫颈癌患者HPV感染常见的型别16、58、18、31、33型有所不同,提示在本地区31和52型在宫颈癌中同样较为常见。此外,因腺癌和腺鳞癌较少,不能做相关评估和分析,待今后积累更多样本做进一步分析报道。本研究CINⅡ/Ⅲ中HPV感染率为83.55%(757/906),常见的高危型HPV依次为16、58、33、52、18,相比于宫颈癌组,HPV58比HPV18更为常见。在其他组中常见的类型与宫颈癌组和CINⅡ/Ⅲ组相似。目前商业化的HPV预防性疫苗针对宫颈癌只能保护HPV16、18两型的感染,因此,明确导致宫颈病变的主要型别,可为研制适合的HPV疫苗的应用提供充分的流行病学资料。

3.4 单一感染更易导致宫颈癌的发生

由于HPV型别众多,机体可以同时单一感染或同时感染多个型别。对于多重感染是否促进宫颈病变的发展目前研究观点不一。有的学者认为HPV的多重感染出现持续性感染的危险性更大,而HPV的持续感染是宫颈病变发生的直接原因,认为多重感染易导致宫颈病变[11]。有学者认为HPV多重感染并不增加宫颈癌的发生,HPV感染的型别数与宫颈病变的级别无关[3]。本研究结果与第二种观点较为一致。在HPV阳性的不同程度宫颈病变中,除慢性宫颈炎组外,单一感染所占比例随宫颈病变严重程度的增加而增高,由CINⅠ组的69.73%上升到宫颈癌组的84.67%,宫颈不同程度病变相比差异有统计学意义(P<0.001),在一定程度上可说明单一感染可能对宫颈癌的发展起促进作用,但具体机制尚待更多深入的研究。此外,本研究中单一感染中最常见的亚型为HPV16,占单一感染病例的50.76%,提示在临床工作中应该尤其重视对感染HPV16患者的密切随访和治疗,做到早发现、早治疗,降低宫颈癌的发生。

综上所述,本研究HPV感染最常见的亚型为16、58、33、52、18。HPV感染率随年龄增加而呈增高趋势。在不同宫颈病变中,HPV的感染率随宫颈疾病严重程度的增加而增高,并且型别分布有所不同。此外单一感染可能更易导致宫颈癌的发生。

参考文献

[1]zur Hausen H.Human papillomaviruses and their possible role in squamous cell carcinomas[J].Curr Top Microbiol Imunol,1977,78:1-30.

[2]zur Hausen H.Papillomaviruses and cancer:from basic studies to clinical application[J].Nat Rev Cancer,2002,2(5):342-350.

[3]Munoz N,Bosch FX,de Sanjose S,et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

[4]Dai M,Bao YP,Li N,et al.Human papillomavirus infection in Shanxi province,people's republic of China:a population-based study[J].Br J Cancer,2006,95(1):96-101.

[5]Zhao R,Zhang WY,Wu MH,et al.Human papillomavirus infection in Beijing,people's republic of China:a population-based study[J].Br J Cancer,2009,101(9):1635-1640.

[6]Castle PE,Schiffman M,Herrero R,et al.A prospective study of age trends in cervical human papillomavirus acquisition and persistence in Guanacaste,Costa Rica[J].J Infect Dis,2005,191(11):1808-1816.

[7]周庆云,田芳,杜敏,等.甘肃地区女性宫颈HPV感染基因亚型分布状况[J].卫生职业教育,2010,28(23):124-126.

[8]Liu SS,Chan KY,Leung RC,et al.Prevalence and risk factors of Hu-man Papillomavirus(HPV)infection in southern Chinese women-a population-based study[J].PLoS One,2011,6(5):e19244.

[9]Lo WK,Wong YF,Chan MK,et al.Prevalance of human papillomavir-us in cervical cancer:a multicenter study in China[J].Int J Cancer,2002,100(3):327-331.

[10]Li J,Zhang D,Zhang Y,et al.Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus in women with cervical cancer or high-grade precancerous lesions in Chengdu,western China[J].Int J Gynaecol Obstet,2011,112(2):131-134.

[11]Ho GY,Bierman R,Beardsley L,et al.Natural history of cervicovagi-nal papillomavirus infection in young women[J].N Engl J Med,1998,338(7):423-428.

人乳头瘤病毒的真情告白 篇2

我的家族成员很多，有100多个，但实际上给宫颈造成麻烦的多半是HPV16和HPV18两个成员而已。

我非常自豪，因为我成就了一名叫豪森的德国老伯，他发现我（HPV）与宫颈癌之间存在明确因果关系，并由此获得了2008年度的诺贝尔医学奖。

其实，我只是个“小角色”而已，与其他 “大腕”，如引起肝癌的乙型肝炎病毒HBV和丙型肝炎病毒HCV，以及引起艾滋病的人类免疫缺陷病毒HIV相比，我只在女性朋友的宫颈上闹点事儿，而且只要您稍有警惕（每两年做1次宫颈癌筛查），我就难成大事。

至于我是如何缠上您的，有时是天知地知您知我知，但很多时候是真的谁也不知。不过通常是通过性行为，但接触不干净的卫生洁具和用品后也可能沾染上我。

其实，并不是一沾上我就会得宫颈癌，只有长期的、持续的、高负荷地与我亲密接触，才会引起宫颈的癌前病变和宫颈癌。

据说，40%的女性在一生中的某个时期都会与我有过接触，但我通常作为访客出现，多半会自动离开。不过如果您的状态不好（免疫力下降）、环境适宜（多个性伴侣、不洁性生活），我就会在您体内定居！

如果妇科医生发现我缠上了您，您当然会紧张和不快，但是，从另一个角度来说，对您也是一件比较幸运的事情。因为，我被暴露后，我的家族的后续破坏工作多半就做不成了。

那么，什么时候要怀疑到我并对我展开调查呢？如果做宫颈薄层液基细胞学检查（即TCT）提示有意义不明的非典型鳞状细胞（称为ASCUS）或者更高程度的病变，那就要进行HPV检测了。如果证实我不在现场（即HPV阴性），您就大可以放心，半年之后复查TCT即可;如果证实我确实在现场（即HPV阳性），您需要进一步检查，做阴道镜和活检。如果TCT发现为更高级别的病变，我就基本应该出来自首了，检查只是留底备案而已。

对我进行调查，有几个途径：一是宫颈薄层液基细胞学检查（TCT）的报告单上会提示;二是其他方法，报告HPV16、HPV18阳性;三是杂交捕获的人乳头瘤病毒检查（HC2），除了报阳性之外，还报具体数值（是半定量，和HPV的量有一定相关性，但不绝对平行），是目前最先进的检查方法。

如果准备怀孕的妇女沾染上我，我建议您还是先把我的大部队打发走了之后再怀孕（HPV 值明显降低）。因为潜伏下来的少量成员一般不会影响妊娠结局。

即使我已经给您带来了伤害（如各种类型的宫颈癌前病变），您仍然是可以搞定我的。狂轰烂炸的攻击（各种针对宫颈病变的物理治疗和锥切）能将我的部队大部消灭，即所谓“治病即治毒”，留下的残兵一般很难组织有效进攻。而且，您自身的免疫能力有可能最终将我“请出”。

基本可以负责任地说，目前还没有口服药物能对付我。在宫颈局部使用干扰素可能有一定效果。目前西方国家已经开发出了新式武器，即治疗性HPV疫苗和预防性HPV疫苗（主要针对HPV16和HPV18）。据他们官方发布的消息，效果还是不错的。

总之，我并非可怕至极，但您的确需要关注我，否则，我真的会闹出点动静来。

人乳头瘤病毒亚型检测 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2576例2013年1月-2014年12月本院门诊和体检的妇女宫颈分泌物中的脱落细胞, 年龄20~78岁, 平均年龄 (47.21±7.49) 岁, 且均有性生活史, 但无宫颈手术史、无子宫切除手术史、无细胞学检查异常史等治疗史, 其中依据年龄分为低龄组 (20~29岁) 679例、中低龄组 (30~39岁) 1056例、中龄组 (40~49岁) 496例、高龄组 (>49岁) 345例, 所有受试者均无心、肝、肾等重要脏器严重性疾病, 且签署知情同意书, 并经本院医药伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

所有妇女在门诊和体检时, 通过专用刷子置于宫颈口, 逆时针方向转3圈, 停留10 s后, 将采样刷置于专用标本储存瓶并折断采样刷多余部分, 将采样刷留于标本储存瓶并送往检验科进行HPV检测。

1.2.2 HPV检测

所有标本均通过全自动离心分离机进行上清液分离和提取, 通过由, 美国ABI公司生产的ABI2720扩增仪进行PCR扩增, 完成后采用核酸分子导流杂交系统 (凯普) 对21种常见的HPV基因型进行分型检测, 即先预杂交:将固定有探针的尼龙膜浸于2×SSC/0.1%SDS液内, 温度为45℃, 持续15 min, 然后把Biotinylated PCR产物置入95℃的2×SSC/0.1%SDS中进行变性, 持续5 min;再进行杂交, 其中杂交液为2×SSC/0.1%SDS, 温度为51℃, 持续1 h, 完毕后将尼龙膜置于2×SSC/0.1%SDS中并进行51℃洗膜, 持续10 min, 最后加入sodium citrate和TMB避光反应5 min后弃反应液, 洗膜3次后加显色剂进行显色和结果判定, 其中HPV检测试剂盒由香港凯普生物科技有限公司提供:DNA提取试剂盒, 批号为20091101, PCR扩增试剂盒, 批号为20091202, 杂交试剂盒, 批号为20091202;所有操作均在无菌条件下依据说明书和相关规定进行, 检测结果参照说明书评判标准。

1.3 观察指标和标准

统计分析所有受试者HPV的亚型分布特点及其与年龄的关系, HPV检测判定标准:杂交膜共设24个点, Biotin和IC设为对照点, 当两点均为阳性则提示检测结果可靠[4]。HPV分型标准:HPV亚型分为高危型和低危型, 16种高危型HPV分别为16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、53、66、cp8304型, 其中53、66、cp8304型为中国人群常见亚型, 5种低危型HPV分别为6、11、42、43、44型[5]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 15.0统计软件处理数据, 计数资料比较采用x2检验, 多组资料之间比较采用F检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 惠州地区HPV感染亚型分布情况

惠州地区2576例标本经HPV基因检查和分型诊断筛查出412例HPV感染阳性, 感染总阳性率为15.99%, 诊断试剂包含的16种HPV高危亚型及5种HPV低危亚型且均有检出, 其中感染单重亚型共349例, 包括感染单重高危亚型317例和感染单重低危亚型的32例, 多重感染共63例, 包括感染2种亚型的51例, 感染2种亚型以上的12例, 而在HPV亚型分布方面, 主要以HPV亚型52、58、16为主, HPV亚型52感染率最高 (2.45%) , HPV亚型2感染率最低 (0.08%) , 前者明显高于后者, 差异有统计学意义 (x2=7.72, P<0.01) ;高危型HPV感染361例, 感染率为14.01%, 低危型HPV感染51例, 感染率为1.98%, 前者明显高于后者, 差异有统计学意义 (x2=7.13, P<0.01) , 见表1。

*与高危型52比较, P<0.05;#与低危型合计比较, P<0.05

2.2 惠州地区不同年龄段HPV感染分布和所占百分比情况

惠州地区诊断筛查出412例HPV感染标本中, 低龄组HPV感染121例, 所占百分比为29.38%, 中低龄组238例, HPV感染所占百分比为57.77%, 中龄组HPV感染39例, 所占百分比为9.45%, 高龄组HPV感染14例, 所占百分比为3.40%, 中低龄组>低龄组>中龄组>高龄组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。

例 (%)

*与低龄组比较, P<0.05;#与中低龄组比较, P<0.05;△与中龄组比较, P<0.05

3 讨论

HPV是一种双链嗜上皮性DNA病毒, 属乳多空病毒科, 主要侵犯人体生殖道, 可诱发如宫颈炎、生殖器疣等生殖道病变, 其中高危型HPV持续感染是宫颈癌变的必要病因之一[6,7]。近年来, 随着社会经济的发展, 人们的生活、思考方式发生了明显的改变, HPV感染率呈现出上升的趋势, 严重降低患者的生活质量[8,9]。HPV感染已成为最常见的性传播疾病, 具有明显的异质性, 其分布也存在种族和地域差异性[10,11]。因此, 对其进行大样本分子流行病学研究以及建立地区性HPV感染流行度及优势型别基因库具有重要的临床意义[12]。

有研究结果显示, 通过HPV导流杂交基因芯片技术可一次性检测21种常见HPV基因型, 且检测通量大、结果准确, 可作为HPV基因分型和调查其分子流行病学特征的理想方法[13]。陈红舟等[14]研究结果表明, 浙江省舟山地区的感染率为22.10%, 常见HPV亚型由高至低依次为HPV52、16、58、18、33、81。而顺德地区的研究显示, 该地区感染率为16.86%, 常见HPV亚型由高至低依次为HPV16、52、58[15]。由此可见不同地区流行的HPV亚型分布存在明显的差异。本研究通过检测和分析惠州地区门诊和体检的妇女HPV感染情况及其与年龄的关系, 结果显示2576例标本经HPV基因检查和分型诊断筛查出412例HPV感染阳性, 感染总阳性率为15.99%, 在HPV亚型分布方面, 由高至低依次为52、58、16, 其中HPV亚型52感染率最高 (2.45%) , HPV亚型2感染率最低, 此结果提示惠州地区或人群具有自身的HPV感染特点;而高危型HPV感染率明显高于低危型HPV, 提升患者感染高危型HPV机会更高, 在研究HPV疫苗时, 应着重针对高危型HPV;此外, 在HPV感染所占百分比方面, 中低龄患者最高, 低龄患者第二, 中龄患者第三, 高龄患者最低, 表明本地区HPV感染率以30~39岁的人群最高, 其次为20~29岁人群, 且39岁以后随年龄增长, HPV感染率呈现出下降的趋势。研究发现, HPV导流杂交基因芯片技术是一项根据中心法则和碱基互补配对原则建立的且可对病原体核酸进行高通量快速检测的技术, 可快速、有效、准确区分HPV亚型。通过该技术加强对HPV易感人群监测、随访和定期复查, 有利于降低宫颈癌发病率;同时掌握HPV各型别在各年龄段的感染特点, 有助于在研发和应用预防性疫苗时, 有效地选择目标人群, 有利于提高HPV感染早期预防和治疗的效果, 进而改善妇女的生活质量。

综上所述, 惠州地区HPV感染几率具有显著的亚型和年龄分布异质性, 对指导HPV疫苗研究以及HPV感染早期预防和治疗具有重要的临床价值。

摘要：目的:探讨惠州地区人乳头瘤病毒 (HPV) 的亚型分布特点及其与年龄的相关性。方法:收集2576例2013年1月-2014年12月本院门诊和体检的妇女宫颈分泌物中的脱落细胞, 依据年龄分为低龄组 (2029岁) 、中低龄组 (3039岁) 、中龄组 (4049岁) 、高龄组 (>49岁) , 采用HPV导流杂交快速基因分型技术检测HPV亚型, 统计分析所有受试者HPV的亚型分布特点及其与年龄的关系。结果:惠州地区2576例标本经HPV基因检查和分型诊断筛查出412例HPV感染阳性, 感染总阳性率为15.99%, 其中HPV亚型52感染率最高 (2.45%) , HPV亚型2感染率最低 (0.08%) , 前者明显高于后者, 差异有统计学意义 (字2=7.72, P<0.01) ;高危型HPV感染率为14.01%, 低危型HPV感染率为1.98%, 前者明显高于后者, 差异有统计学意义 (字2=7.13, P<0.01) ;低龄组HPV感染所占百分比为29.38%, 中低龄组HPV感染所占百分比为57.77%, 中龄组HPV感染所占百分比为9.45%, 高龄组HPV感染所占百分比为3.40%, 中低龄组>低龄组>中龄组>高龄组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论:惠州地区HPV感染几率具有显著的亚型和年龄分布异质性, 对指导HPV疫苗研究以及HPV感染早期预防和治疗具有重要的临床价值。

人乳头瘤病毒亚型检测 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

本院于2013年12月‐2014年12月收治的104例宫颈癌及癌前病变患者进行研究, 所有患者经过影像学检查并确诊, 患者自愿并签订同意书。所有患者均有性生活史。其中, 年龄26~79岁, 平均 (36.5±20.9) 岁;孕次1~7次, 平均 (2.6±0.9) 次;产次1~4次, 平均 (2.4±0.4) 次。所有患者进行HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测。

1.2 方法

HPV-DNA亚型检测[2]:采集患者宫颈分泌物脱落细胞进行检测, 采用杂交捕获技术, 同时对13种高危型HPV-DNA进行检测。

液基细胞学检测[3]:用无菌干棉球擦去宫颈表面的分泌物, 用特制宫颈塑料软毛刷伸入宫颈管内, 旋转刷取宫颈管及宫颈外口部位的脱落细胞, 置入专用细胞保存液中, 并由病理专业人员进行制片与阅片。

阴道镜下宫颈活检:DNA检测为阳性或液基细胞学检查为非典型鳞状上皮细胞, 同时合并高危型人乳头状瘤病毒 (HPV) 感染或非典型鳞状上皮细胞感染以上的患者, 均进行阴道镜检查, 并对可疑部位进行活检。病理诊断包括:正常或炎症、宫颈上皮内瘤变 (cervical intraepithelial neoplasia, CIN) CIN I、CIN II、CIN III (原位癌) 及宫颈癌。以病理结果CIN I作为评估阳性病变阈值。

1.3 统计学方法

数据分析使用SPSS 26.0统计学软件, 计数数据采用例数和百分比 (%) 表示, 进行x2检验, P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3组检测方法的阳性率比较

HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测的阳性率 (96.2%) , 明显高于HPV-DNA亚型检测 (76.0%) 和液基细胞学检测 (84.6%) , 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

注:†与HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测比较, P<0.05。

2.2 3组检测方法的准确性比较

HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测的准确性 (95.2%) 明显高于HPV-DNA亚型检测 (83.7%) 和液基细胞学检测 (74.0%) , 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。

注:†与HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测比较, P<0.05。

3 讨论

宫颈癌具有较高的死亡率, 对女性生命健康安全危害极大。相关研究表明[4], 宫颈癌由癌前病变发展为癌症晚期, 需要大约10年时间, 如何早期诊断该病症, 以节约宝贵的治疗时间, 成为宫颈癌治疗与癌前病变防预的关键。宫颈癌诊断的金标准是阴道镜活检, 但是不能作为筛查的标准方法。因此比较常见的方法是HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测, 其中, 液基细胞学检测是将样本保存于细胞液中, 可避免标本的干燥, 又可延长标本保存时间, 可以保证检测的准确性。HPV-DNA亚型检测可以取宫颈分泌物脱落细胞直接检测, 因为部分高危型HPV病毒与宫颈癌的关系紧密, 如韩国一项研究发现, HPV16亚型在宫颈癌中检出率为62.5%, 随病变级别加重感染率明显增加。说明16亚型的感染和宫颈癌密切相关。另一项研究也发现宫颈病变中16、18、58、33在CIN1以上中宫颈病变均有一定优势, 提示上述型别易导致高级别病变。研究显示[5], 两种方法进行联合检测可以避免假阳性和假阴性, 因此临床上多采用HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测进行检测, 检测的准确性比较高。Zanella等曾用实时聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 技术定量检测癌组织和非癌组织中HPV-DNA水平, 但该技术不能区分超螺旋的共价、闭合、环状DNA分子 (covalently closed circular DNA, ccc DNA) 和双链DNA (relaxed circular DNA, rc DNA) , 无法了解HPVccc DNA水平和变化。Endermann DH等设计的嵌合引物检测方法利用HPVrc DNA和HPVccc DNA分子结构的不同, 有效地将两者分开, 实现了对ccc DNA的特异性检测。本研究通过研究也说明了HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测的阳性率和准确性均比单纯的方法高。

本研究针对当前使用比较广泛的HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测方法, 通过对比HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测阳性例数100例占比96.2%, 准确例数99例占比95.2%与单纯HPV-DNA亚型检测阳性例数88例占比84.6%, 准确例数87例占比83.7%、液基细胞学检测宫颈癌及癌前病变阳性例数79例占比76.0%, 准确例数77例占比74.0%, 通过研究发现采用HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测得到阳性率和准确性均比单纯HPV-DNA亚型检测、液基细胞学检测高, 而且液基细胞学检测的结果要比HPV-DNA亚型检测高, HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测避免假阳性和假阴性的发生, 可以用于宫颈癌及癌前病变的检测筛选。

综上所述, 相比单独PV-DNA亚型检测、单独液基细胞学检查, 采用HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测可以准确地检查宫颈癌及癌前病变, 值得推广应用。

摘要：目的 探讨宫颈癌及癌前病变应用人类乳头瘤病毒-脱氧核糖核酸 (HPV-DNA) 亚型检测联合液基细胞学检测的准确性。方法 选取该院2013年12月‐2014年12月收治的104例宫颈癌及癌前病变患者进行研究, 分别进行HPVDNA亚型检测、液基细胞学检测及HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测, 对阳性患者进行病理检查, 观察检查方法准确性。结果 HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测的阳性率 (96.2%) 明显高于HPV-DNA亚型检测 (76.0%) 和液基细胞学检测 (84.6%) , 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测的准确性 (95.2%) 明显高于HPV-DNA亚型检测 (83.7%) 和液基细胞学检测 (74.0%) , 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。结论 采用HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学检测相对于单用HPV-DNA亚型检测和液基细胞学检测可以更准确地检查宫颈癌及癌前病变, 值得推广应用。

关键词：宫颈癌及癌前病变,HPV-DNA亚型检测,液基细胞学检测,准确性

参考文献

[1]艾永生, 桂文武, 孟江萍, 等.HPV-DNA亚型检测联合液基细胞学对宫颈癌筛查的临床价值[J].现代生物医学进展, 2012, 12 (22) :4284-4287.

[2]周天兰, 赵淑丽.液基细胞学联合HPV-DNA检测在宫须癌前病变中的临床价值[J].中国现代医生, 2015, 53 (3) :1-4.

[3]陈广莉, 徐又先, 李立, 等.宫颈细胞DNA倍体分析与液基细胞学联合HPV检测宫颈癌前病变的临床应用价值[J].中国妇幼保健, 2013, 28 (7) :1179-1181.

[4]刘晶慧, 章艳霞.HC2-HPV ANA检测联合液基细胞学在宫颈癌及癌前病变中的应用[J].中国实用医药, 2012, 7 (35) :88-89.

人乳头瘤病毒亚型检测 篇5

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集2013年4月至2015年12月来我院就诊的475例女性患者,年龄15~83岁。其中31岁以下91例,31~40岁126例,41~50岁173例,51岁以上85例。患者均为初次检查,排除二次复查数据。

1.2 仪器与试剂

基因扩增仪为珠海黑马hema3200,全自动核酸分子杂交仪为中山达安的DA8000,HPV基因分型检测试剂盒为广州安必平医药科技股份有限公司产品。

1.3 检测方法

(1)标本采集:检查前不要做阴道冲洗,不要在阴道内用药。对宫颈标本采集先用窥阴器或者阴道张开器暴露宫颈,用宫颈刷置于宫颈口,顺时针旋转4~6周以获取足量的上皮细胞,然后去除宫颈刷置于2 ml 0.9%氯化钠溶液的无菌试管里。若标本黏液过多或者含有过量血液应该重新采集标本。对尿道标本首先使用无菌0.9%氯化钠注射液清洗尿道口,再用棉拭子插入尿道2 cm左右,然后转动棉拭子,最后把棉拭子放入细胞保存液中。采集尿道标本时必须在采集前2 h禁止小便。(2)标本提取,PCR扩增,标本杂交过程见说明书。(3)结果判断:每张膜条上均有PCR反应质控点和杂交显色质控点各一个,肉眼判读结果,阳性可呈现蓝色圆点,两质控点均呈蓝色说明标本的取样和PCR操作过程和杂交过程正常。在相应的探针下出现蓝色圆点则为该型HPV阳性,多个蓝色圆点出现则为多重感染。

1.4 统计学处理

采用SPSS18.0统计学软件进行数据分析,计数资料以率表示,采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

分析结果显示年龄在41~50岁女性患者HPV检出率最高,小于31岁女性患者HPV检出率最低,不同年龄组HPV检出率差异有统计学意义(P<0.05),见表1。分析结果显示475例女性患者中HPV感染者158例,阳性率为33.26%,其中单一感染、双重感染、三重感染、三重以上感染者情况见表2。本调查HPV感染率16亚型最高,其次分别为HPV52,58,51,56,6和11。

3 讨论

宫颈癌是临床上女性比较常见的恶性肿瘤之一,发病率居女性恶性肿瘤的第2位。每年有超过10万的新女性查出患有该疾病[3]。依据不同型别对宫颈癌发生危险性的高低程度可将其分为低危型和中高危型。其中低危型感染主要表现为外阴和宫颈疣状病变[4],一般不导致癌的发生;而高危型HPV的持续感染可导致宫颈癌的发生和宫颈上皮内病变的发生。

本调查对475例女性患者进行了宫颈分泌物HPV基因分型检测,HPV阳性感染率不同年龄组差异有统计学意义(P<0.05),其中41~50岁最高,31~40岁次之。这主要是因为HPV的感染主要通过性接触传播,而31~50岁年龄段女性的性生活比较活跃,导致HPV感染率也会相应增高。因此我们应该重视这个年龄段女性的宫颈癌的筛查及防治教育工作,做到定期复查,及时发现可能会引发宫颈病变的因素并尽早治疗,以免病情恶化。在158例HPV阳性的患者中,以单一感染为主,在一定程度上说明单一感染可能对宫颈癌的发生与发展起着促进作用。而另有一些观点认为多重感染(两种以上高危型HPV感染)的存在可能更容易导致宫颈癌变的发生[5],因此多重感染也要引起相应的重视。另研究显示,不同地域、不同种族所感染的HPV亚型也具有一定的差异性,本地区本调查HPV感染率HPV亚型与福建地区优势亚型相类似[6]。

宫颈癌是多种原因综合作用的结果,而感染者的治疗主要是靠其自身的免疫力发挥作用,疫苗的开发和利用可降低感染率。因此,了解并掌握本地区的HPV感染现状,为女性的健康和积极开展公众健康教育,定期进行HPV检查,及时发现宫内病变,及时进行治疗,有利于预防宫颈癌和宫颈上皮内病变的发生。

参考文献

[1]蔡斌,席晓薇,刘雪莲,等.HE4在子宫内膜癌诊断中的应用价值探讨[J].实用妇产科杂志,2012,28(5):354-356.

[2]Syrjanen S,Shabalova IP,Petroviehev N,et al.Human papillomavirus testing and conventional pap smear cytology as optional screening tools of women at different risks for cervical cancer in the countries of the former soviet union[J].J Low Genit Tract Dis,2002,6(2):97-110.

[3]赵方辉,乔友林.人乳头瘤病毒感染分子流行病学研究[J].中国实用妇科与产科杂志,2010,26(5):327-331.

[4]王文格,郑玲玲,孙铮.尖锐湿疣67例HPV分型分析[J].中国性科学,2013,22(2):53-54,65.

[5]Woodman CB,Collins SI,Young LS.The natural history of cervical HPV infection:unresolved issues[J].Nat Rev Cancer,2007,7(1):11-22.

人乳头瘤病毒亚型检测 篇6

大部分HPV感染无临床症状或为亚临床感染, 不能作为一个普通的临床疾病或通过常规筛查计划或性传播疾病调查得以发现, 只能通过HPV检测得知。由于HPV至今尚不能在体外培养, 又无合适的实验动物, 故不能用简便的血清血检测进行HPV诊断和分型, 对其检测主要依赖于形态学方法和分子生物学技术。目前, HPV 检测方法主要有细胞学法、斑点印迹法、原位杂交法、Southern 杂交法、多聚合酶链反应 (PCR) 法和杂交捕获法等。

1 传统检测方法

1.1 细胞学检查

利用宫颈刮片细胞学检查或液基薄层细胞学检查 (目前改良的自动化细胞学检查方法) , 根据细胞外观形态的转变来加以诊断。宫颈HPV阳性细胞的特征性改变是出现了挖空细胞, 其变化表现为:核增大、扭曲, 染色质固缩状, 核位于细胞中央或偏位, 常可见到双核或多核, 核周有一椭圆形宽阔区, 外围厚实胞浆。除此之外, 镜下还可见角化不良及湿疣外底层细胞。由于HPV感染所致的病变越重, 涂片中挖空细胞出现机会越少等原因, 细胞学诊断HPV感染敏感性较差。研究资料报道经细胞学诊断HPV感染的敏感性仅为30%。

1.2 病理学检查

HPV感染宿主的上皮组织从而导致形态学改变, 其病理学表现包括鳞状上皮呈疣状或乳头状增生, 常伴有上皮脚延长、增宽呈假上皮瘤样增生;表皮角化不全, 常伴角化不全层核肥大, 显示一定的非典型性;棘层不同程度增厚;基底细胞增生, 层次增加;高危HPV感染的宫颈上皮为中层挖空细胞核出现密集浓染的蓝紫色颗粒产物等。但是, 较多HPV感染患者的病理学表现并不典型, 需要联合应用其它方法 (如免疫组化或原位杂交) 进一步检测HPV。

1.3 免疫学检查

主要包括免疫组化法通过抗HPV L1蛋白抗体与外壳蛋白反应或抗HPV早期蛋白E6、E7抗体与E6、E7蛋白反应检测HPV (阳性标志为细胞核内出现棕黄色颗粒) 、采用放射免疫沉淀法测定CIN组织和血清中的高危HPV 16抗体水平、用血清免疫吸附试验 (ELISA) 检测血清中的HPV E6、E7特异性抗体蛋白等。研究表明, 抗高危HPV L1、E6、E7抗体可直接定位于宫颈癌组织, 对宫颈癌有较好定向选择性, 有可能作为人宫颈癌放射免疫显影诊断的载体。但是, HPV感染必须要在HPV-DNA复制后才有病毒蛋白的表达, 阴性者也不能否定诊断, 故该方法敏感性较低。

1.4 电镜检查

电镜技术可用于直接观察HPV的病毒颗粒。透射式电子显微镜 (透射电镜) 的分辨力可达0.1 nm, 扫描式电子显微镜 (扫描电镜) 的分辨力可达1 nm。但电镜检查诊断HPV感染的成本太高, 且敏感性较差, 仅30%~50%受HPV感染的病例可在电镜下检测到病毒颗粒。

由于以上传统方法的特异性和灵敏度均不够理想, 存在较高的假阴性率, 且不便于对HPV进行分型, 目前临床应用较少。

2 HPV核酸检测方法

随着分子生物学技术的进展, HPV核酸的检测手段也日益多元化。

2.1 HPV-DNA杂交捕获技术

杂交捕获法 (hybrid capture) 是美国Digene公司开发的基于对抗体捕获信号放大和化学发光信号检测的HPV-DNA定性及半定量检测技术, 第2代杂交捕获法 (HCⅡ) 已被美国FDA批准可用于临床。其基本原理是应用高效的液相RNA-DNA杂交方法捕获样品中的HPV-DNA, 采用碱性磷酸酶标记抗RNA:DNA抗体-化学发光信号显示系统。HC-Ⅱ可同时检测13种高危型HPV (16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68) 和5种低危型HPV (6、11、42、43、44) 。HC-Ⅱ的优势在于以基因全长为探针, 无需基因扩增;临床操作简便、效率高且标准化, 适于大量人群筛查, 具有较高的临床敏感度。其缺点在于对检测设备要求高, 试剂检测费用较贵, 且不能对HPV某一特定型别进行检测, 存在交叉杂交引起的假阳性, 使特异度降低。

2.2 聚合酶链式反应 (PCR ) 方法

PCR是基于核酸杂交的原理, 设计与HPV-DNA互补的一对特异性核苷酸引物, 以HPV-DNA为模板以指数增长的速率进行体外扩增, 提高诊断的敏感性。PCR法为HPV检测最敏感的技术, 包括常规PCR、实时荧光定量PCR (FQ-PCR) 、PCR-ELISA检测及PCR结合反向点杂交技术检测等。不仅可以对HPV阳性感染进行确诊, 还可以对HPV进行分型, 测定病毒载量, 进行基因序列分析、发现新基因型等。但其缺点为样品间易交叉污染导致假阳性, 并且各种PCR方法由于引物、反应体系及产物检测方法等不同, 其敏感性和特异性也随之变化, 缺乏一致的诊断标准。在HPV分型检测方面, 由于HPV型别太多, 而上述常规PCR必须针对各型分别操作, 因此有相对的复杂性存在;部分研究显示, 有些HPV基因的变异会导致PCR无法检出;也有少数研究指出因HPV的基因融合于肿瘤细胞DNA中, 使得PCR反应也无法顺利检出。为了克服以上局限, 以PCR技术为基础的新型HPV核酸分型检测方法逐渐开发应用, 主要包括:

CervistaTM HPV技术 (hologic) 运用了PCR扩增和荧光发光判读结果的原理, 包括两种HPV-DNA诊断方法。一种方法可同时检测14种HPV高危型别 (CervistaTM HPV HR) , 包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和66型。与HC-Ⅱ一样, 该法不能对HPV某一特定型别进行鉴定;另一方法 (CervistaTM HPV 16/18) 用于检测HPV16和18型并可以进行分型。

低密度基因芯片导流杂交技术 (flow-through hybridization technology, hybribio) 将PCR技术、导流杂交技术及传统基因芯片技术集合在一起, 结合了PCR技术的高灵敏性、导流杂交技术的高特异性以及基因芯片的高通量性。该技术可将未标记的特异性寡核苷酸探针分别固定在尼龙膜上形成斑点, 再与经PCR扩增的样品DNA 序列杂交, 可一次性检测21种HPV感染并精确分型, 这些型别包含13种高危型 (HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型) 、5种低危型 (HPV6、11、42、43、44) 和中国人常见的3种亚型 (HPV53、66、CP8304) , 并能够检测出混合型感染。

新型集成技术 (cobas 4800 HPV, Roche) 同样应用PCR的高灵敏性和导流杂交技术的高特异性, 并通过多重定性的检测方法提高了HPV检测和分型的准确性。该技术提供HPV16和18型及其他12型 (HPV 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68b) 共14种高危HPV亚型汇总的结果, 并且将HPV16和18型这两种最高危型别单列出来, 将有助于宫颈癌初筛过程中的进一步分层分析和处理。除了检测HPV之外, 该技术亦同时检测β-球蛋白, 作为内部质控并确定样本是否含有抑制扩增的因素, 进一步避免了假性结果的干扰。

2.3 核酸印迹原位杂交 (Southern杂交)

Southern杂交是传统核酸杂交方法, 利用碱基互补原理, 将电泳分离的HPV DNA的酶解片断结合到固相支持物上, 利用同位素标记的核酸探针检测HPV的核酸, 并对病毒DNA分型。该方法虽然灵敏度较高, 但需要新鲜组织标本, 操作繁琐、费时耗力, 故不适于大通量临床样品的筛查, 目前临床应用较少。

2.4 原位杂交技术

原位杂交的原理是以HPV核酸探针 (DNA 或mRNA ) 进行原位杂交反应, 检测组织标本或宫颈涂片中的HPV。原位杂交最直接的诊断是于细胞中染出HPV, 也可用于组织病理学检查, 病灶上的组织利用专一性抗体进行探针测试。该方法的优势是可以定位可疑细胞, 同时兼具半定量的功能;不足之处为敏感性不高、样本质量要求高、劳动量大、花费较大, 而且每种类型HPV都需要相应的探针, 大大降低了临床应用价值。

2.5 斑点印迹

该方法测试程序繁琐, 需要使用放射性物质, 其敏感度和特异性亦低于Southern杂交, 虽然经济实用, 但实验过程存在有放射性污染, 耗时长, 检测需要大量纯化DNA等缺点, 目前临床已很少使用。

3 HPV检测的临床应用价值

宫颈癌的筛查是降低宫颈癌发病率和死亡率的最经济有效的方法, 高危型HPV感染的检测对于预防和早期发现宫颈癌及其癌前病变有非常重要的意义。

2012年, NCCN公布的新版《宫颈癌筛查临床实践指南》中, 高危型HPV检测成为宫颈癌初筛 (与细胞学检查联合筛查) 及异常细胞学结果处理的组成部分。HPV检测在一定程度上减少重复细胞学检查, 减少阴道镜检查, 减少在随诊中高危人群的丢失。此外, 大量研究支持HPV-DNA检测可预测治疗后病变残存和复发的高危患者, 可能成为宫颈癌治疗后的病情监测的有效肿瘤标志物。因此, HPV检测的应用意义由作为宫颈癌筛查手段已逐渐向临床推广。

HPV的检测方法很多, 但因为功能定位不同, 如用于筛查、疗效评估或随访、科研等不同目的, 所采用的方法或顺序也有所区别。研究表明, 不同的HPV型别有不同的致病能力;相对于其他高危型HPV, HPV16和18型感染进展为宫颈高度病变和浸润癌的风险更高。因此, HPV分型检测将更有利于在临床上进一步分流管理高危型HPV检测阳性而细胞学检查阴性的患者, 预测宫颈病变的进展和预后, 指导HPV疫苗的开发应用和效果评估。

人乳头瘤病毒亚型检测 篇7

关键词：人乳头瘤病毒,PCR技术,宫颈癌

人乳头瘤病毒 (Human Papilloma Virus, HPV) 是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属, 是球形DNA病毒, 能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖, 表现为寻常疣、生殖器疣 (尖锐湿疣) 等症状。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等疾病的增多, HPV感染越来越引起人们的关注。现对本院993例宫颈HPV筛查情况进行分析, 拟提出其在本地区的流行特点及其在宫颈癌早期干预中的重大意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2009年12月至2013年6月在本院妇产科门诊就诊的993例女性患者为研究对象, 年龄19~65岁, 平均年龄42.4岁。在月经来潮后10~18 d进行取样;检查前3 d内不作阴道冲洗, 不用避孕药膏等阴道内用药物、检查前24 h内无性行为。

1.2标本采集

用阴道窥器暴露宫颈口, 用无菌棉拭子在宫颈管内鳞柱状上皮交界处稍用力转动2周采样, 慢慢取出棉拭子, 将其放入取样管中, 拧紧盖子, 做好标记, 标本立即送检。标本在室温保存不超过12 h, 2~8℃保存不超过7 d。

1.3 检查方法

检测仪器为安捷伦3000荧光扩增仪 (广州达安有限公司生产) , 采用上海复兴基因生物技术有限公司HPV核酸定性检测荧光PCR试剂盒。每批样品检测带有阳性对照 (Ct值≤28) 、临界阳性对照 (Ct值≤38) 、阴性对照 (Ct值≥40) 。每个检测样品根据测定的Ct值来判断结果, Ct值≤38为阳性、Ct值≥40为阴性、38≤Ct值≤40为检测灰区。荧光探针分为: (1) 高危Ⅰ管:检测类型包括16型、35型、52型、53型、58型; (2) 高危Ⅱ管:检测探针包括18型、31型、33型、45型、56型, (3) 低危型:包括6、11两型。Ⅰ管、Ⅱ管、低危 (6, 11) 、Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+ (6, 11) 、Ⅱ+ (6, 11) 分别为不同探针类型的检测组合。

1.4 统计学方法

各项数据用SPSS 13.0软件进行分析, 用χ2检验比较其差异, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 在993例受检者中, 阳性患者129例, 总阳性率为12.99%。高危型成活率明显高于低危型。见表1。

2.2 不同年龄组的HPV分型检出率见表2。

3 讨论

有研究报告显示细胞学的敏感度只有51%~66%, 其漏诊率却高达35%~50%[1]。而HPV检测敏感度>85%, 可减少单纯依据液基细胞学检查造成的宫颈病变漏诊, 从而及时发现宫颈高度病变, 并给予干预和治疗, 阻断浸润癌的发生。HPV检测不需妇科检查, 无须使用阴道窥器, 只需受检者采用阴道拭子取阴道分泌物作为标本, 取材方便, 易于临床及对高危人群的大范围普查中推广。

对宫颈高度病变手术治疗后的患者, HPV检测可作为疗效判断的指标, 预测其病变恶化或术后复发的风险。目前预防宫颈癌最有效的方法是消灭宫颈上皮内瘤样突变[2], 但其经宫颈锥切术后残留和复发率仍达到3.03%~47.3%, 治疗后HR-HPV感染持续者是术后复发的高危人群[3]。HPV的清除一般需要在宫颈病变治疗后8~10个月才能达到临床效果, 因此术后随访监测HR-HPV负荷量非常重要。如在术后6~10个月内检测HPV持续阳性且负荷量呈升高趋势, 表明病变残留或者复发, 应及早进行干预。如在术后6~10个月检测HPV呈阴性, 表明病灶切除干净, 基本不会复发。

综上所述, 宫颈癌癌前的HPV检测具有一定的临床意义。关于女性生殖道感染HPV的流行情况, 据2003-2004年来自美国的国家健康和营养研究课题的调查结果显示, 14~59岁的HPV总感染率为26.8%[4], 所以HPV感染给女性造成的负担超出之前的估计。我国每年约有13.15万新发现的宫颈癌患者, 发病率和死亡率有增加趋势, 且宫颈癌发病年龄年轻化[5], 因此早期对HPV感染的筛查可以有效预防宫颈癌的发生。

本研究采用荧光定性方法对HPV患者进行筛查, 检出率低于全国平均水平。原因可能是各地区HPV感染存在一定差异, 并与种族、遗传等因素有关, 具体原因有待继续研究。这种差异给疫苗的研究提供了很大的空间。本研究发现呼和浩特地区门诊患者HPV多以高危型为主, Ⅰ管和Ⅱ管混合感染也很多见。宫颈同时感染多种HPV病毒会缩短癌变的时间, 尤其要引起重视。人乳头瘤病毒基因分型检测技术是筛查宫颈癌的简便易行、积极有效的方法, 适宜在基层医院普遍开展。如果联合宫颈细胞学以及活检可以提高检查的敏感度及准确率。

参考文献

[1]李云, 李忠涛.荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒6/11型女性生殖道感染[J].现代预防医学, 2011, 38 (1) :50-51.

[2]周莉, 袁勇, 苏晶, 等.长春市妇女宫颈疾病流行现状及高危因素分析[J].中国妇幼保健, 2011, 26 (3) :350-351.

[3]亓晶, 李丽, 郭燕, 等.云南省丽江地区纳西族妇女宫颈感染高危型人乳头瘤病毒调查[J].中华妇幼临床医学杂志, 2013, 9 (1) :65-69.

[4]Moberg M, Gustavsson I, Wilander E, et al.High viral loads of human papilloma virus predict risk of invasive cervical carcinoma[J].Br J Cancer, 2005, 92 (5) :891-904.

人乳头瘤病毒亚型检测 篇8

1 资料与方法

1.1 一般资料

396例为2010年1月至2011年12月在本院妇科门诊就诊的液基细胞学检查 (TCT) 为ASCUS的患者, 均进行了高危型人乳头瘤病毒 (HPV) 检测和阴道镜下多点活检。

1.2 检查方法

(1) 宫颈细胞学检查:先用无菌干棉球轻擦去宫颈表面黏液, 用特制毛刷在宫颈外口及宫颈表面包括鳞柱交界部及宫颈管顺时针转5圈, 取出细胞刷头放入液基细胞保存液中送病理科检查。宫颈细胞学诊断标准根据2001年修订的美国国际癌症协会推出的TBS分类法。 (2) HPV检测:用采样刷在宫颈口及宫颈管旋转3~5圈取得脱落细胞送检验科, 采用广东潮州凯普生物科技有限公司提供的医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒, 可同时检出14种高危型病毒。 (3) 阴道镜下宫颈活检:由专职医生完成, 在阴道镜下对可疑部位进行活检, 如为正常转化区在转化区3、6、9、12点4处取标本, 病理诊断分为:慢性宫颈炎;上皮内瘤变 (CIN) , 其中有CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ;以及宫颈浸润癌。

1.3 分析方法

计算三种诊断方法的诊断率, 比较不同HPV结果病例的CIN检出率, 行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

396例A S C U S患者中, 病理检查共检出CIN 1 6 8例 (42.4%) 。396例行HPV检查, 阳性214例 (54.0%) , 其中CIN 135例 (63.1%) ;HPV阴性182例 (46.0%) , 其中C I N 33例 (1 8.1%) 。H P V阳性组C I N检出率明显高于H P V阴性组, 差异有统计学意义 (χ2=8 1.3 7, P<0.01) 。不同HPV检测结果病例的病理检查结果分布详见表1。

3 讨论

ASCUS是一种描述性诊断, 有其特定的诊断标准: (1) 核增大, 面积比正常中层细胞核达2.5~3倍; (2) N/C轻度增加; (3) 核和细胞形态有些不一致; (4) 可以看见双核细胞; (5) 细胞核轻度深染, 染色质分布均匀; (6) 核轮廓光滑, 规则, 少见不规则的核轮廓。当涂片中的细胞异常较反应性改变更明显, 但未达到鳞状上皮内病变 (SIL) 时, 可以是增生活跃的良性改变或潜在恶性改变不能对其明确分类, 这时可以报告为ASCUS。ASCUS也是一种排除性诊断, 是对病变危险的提示而不是明确诊断[1]。本次分析的396例ASCUS患者中, 宫颈上皮内瘤变发生率为42.4%, 其中CINⅡ、CINⅢ分别占6.1%、1.3%, 提示我们必须加强对宫颈细胞学检查结果为A S C U S患者的进一步诊断, 以防高级别C I N的漏诊。

目前的研究认为, 宫颈癌的发生与生殖器官感染HPV有关。本组396例进行HPV检测结果显示, HPV阳性组CIN检出率 (63.1%) 明显高于阴性组 (18.1%) , 提示高危型H P V检测对分流A S C U S有一定意义。美国阴道镜与宫颈病理协会对ASCUS的处理规范推出4种方案[2]: (1) 重复细胞学图片检查; (2) 对ASCUS作进一步更细分类; (3) 立即行阴道镜检查; (4) 高危型HPV检测。但如仅定期进行重复细胞学检查, 一方面会加重患者的心理负担;另一方面, 部分患者依从性差, 或者心存侥幸心理, 难以按时随访, 容易漏诊。因此, 采取对ASCUS患者直接行HPV检查及阴道镜下活检, 可大大提高宫颈病变的确诊率。

参考文献

[1]谢红, 杨菊芳, 谢懿, 等.宫颈细胞学图片为ASCUS的处理方法探讨[J].实用医学杂志, 2006, 22 (6) :699-700.