人乳头瘤病毒疫苗

人乳头瘤病毒疫苗（共8篇）

人乳头瘤病毒疫苗 篇1

宫颈癌是全球女性最常见恶性肿瘤之一[1], 人乳头瘤病毒 (human papillomavirus, HPV) 是宫颈癌发生的必需因子。HPV在正常人群, 未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞 ( ASCUS) 、低度鳞状上皮病变 (LSIL) 、高度鳞状上皮病变 (HSIL) 和宫颈癌这5类人群中都有不同程度的感染, 另外HPV感染还可能诱发其他疾病, 如尖锐湿疣、外阴肿瘤及男性生殖肿瘤等。HPV感染率和各种HPV型别的分布在不同国家及地区之间存在着较大差异, 在正常人群中, HPV的感染率为5%～15%, 其中地中海地区和东南亚国家感染率最低, 约为5%;在非洲和拉丁美洲HPV的感染率最高, 达到15%。总的来说, HPV在人群中有较高的感染率, 而且随着宫颈癌病程进展, HPV阳性率更高。欧美等发达国家有关HPV研究资料表明, HPV 16和18型在HPV阳性人群中占有较大比重, 尤其是16型[2]。而我国的最常见HPV型别可能是16、58和52型。目前针对HPV的疫苗研究较多, 已有两种疫苗成功上市。

1 目前HPV疫苗情况

HPV属小DNA病毒, 它的基因组为双链闭环, 近8000个碱基对。HPV基因组主要编码3个基因:①3个癌基因E5、E6和E7, 它们与癌细胞转化过程有关;②两个调节基因E1和E2, 与调节转录和病毒基因组的复制有关;③两个结构蛋白L1和L2, 组成病毒颗粒。针对HPV的不同编码基因研制相关的疫苗。

1.1 预防性疫苗

默克 (Merck) 公司和葛兰素史克 (GSK) 公司分别在2006年和2007年将HPV预防性疫苗推上市, 目前这两家公司的疫苗比较成熟, 已进入市场。在疫苗生产方面, Merck公司采用酵母发酵和胞内提取技术, GSK公司采用甜菜夜蛾的细胞系昆虫表达系统, Merck公司的Gardasil疫苗为四价疫苗, 含HPV16、18、6和11 4个型别;GSK公司的Cervarix疫苗为二价疫苗, 含HPV16和18两个型别。Gardasil疫苗的使用时间为0个月、2个月后、6个月后;Cervarix疫苗的使用时间为0个月、1个月后、6个月后。两种疫苗都是肌内注射, 共3次, 每次0.5 ml, 接种对象为9～26岁女性。最新的Merck临床试验结果表明, 预防性疫苗只需注射两次, 也可以达到3次注射的效果, 数据表明免疫持续时间为4到5年[3,4,5,6,7,8]。

目前, 除Merck和GSK两家公司外, Novavax/NCI公司也正进入临床2期试验, BTG International、Berna Bio和GSK/Powerjet公司也在开展预防性疫苗的

研发。

1.2 其他疫苗情况

1.2.1 治疗性疫苗

虽然有关于用L1来治疗宫颈癌的研究, 但其前景并不被多数学者看好。而使用HPV的L1以外基因作为治疗性疫苗的研发正成为热点。有关HPV早期的研究表明, 对于LSIL和HSIL疫苗设计需要采用不同的策略。这是因为首先LSIL是同质性的, 它在损伤中发生HPV的复制, 其损伤部位的细胞的遗传背景比较稳定, LSIL患者的HPV和宿主细胞的免疫状态非常相似。而HSIL是异质性的, HPV的复制处于较低的水平, 细胞因子及人类白细胞抗原 (HLA) 的表达紊乱, 在HSIL患者中甚至同一患者的不同部位, HPV和宿主细胞的免疫状态差距都很大。

1.2.2 L2疫苗

近年来的研究显示, 次要衣壳蛋白L2具有与其他HPV型别交叉反应的中和抗原。来源于某一特定HPV型别的L2的一个表位可以作为对多个HPV型别中和保护。然而, 与L1疫苗相比, L2疫苗具有较低的中和保护作用, L2疫苗是否能作为预防性疫苗还需要更深入的研究。

1.2.3 E1、E2疫苗

在家犬的感染实验模型中, 除了在很高水平的E7的表达情况下, E7免疫并不能保护对应型别HPV的感染, 因而E7应该不是理想的抗原。LSIL和良性疣的治疗性疫苗主要选取E1和E2, 改造型的E1和E2在LSIL和良性疣的预防和治疗上都有效, 因而, 近年来有学者使用E1和E2与细胞因子或咪唑喹啉 (IQ) 的组合来进行治疗性疫苗的研究。

1.2.4 E6、E7疫苗

由于HSIL患者的共同点是致癌基因E6和E7的表达, 因而这两个基因是治疗的关键。我们知道即使是宫颈上皮内瘤变Ⅲ级 (CIN Ⅲ) 患者也可能发生HPV的转归, 因而此推测:CIN Ⅲ患者是由于HPV致癌基因的刺激所引起的自身免疫进而促进了HPV的消退。E6、E7及E6-E7融合基因的相关疫苗的临床试验结果表明, 使用上述两个基因免疫, 在CIN和外阴上皮内瘤变 (VIN) 患者中有一定成效, 但有关这两个基因的致癌机制还不是很清楚, 部分学者对于使用这两个基因进行免疫还持谨慎态度。到目前为止, 罗氏公司的几个E7疫苗已经进入临床2期和3期的试验, 这一进展也鼓舞了我们更深入地去探讨HPV感染 (特别是肿瘤进展) 的免疫机制, 我们相信随着研究的不断深入, 治疗性疫苗将会得到更大突破。

此外, 多肽疫苗可以覆盖更多型别的HPV, 也作为新型疫苗成为关注点。我国虽然还没有正式引入疫苗, 但有关疫苗的研制和开发也在逐步开展, 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所正在研制HPV L2多肽疫苗。

虽然已有两种疫苗成功上市, 但是疫苗本身还存在很多亟待解决的问题, 一方面疫苗还不能覆盖所有型别, 另一方面目前市场上疫苗价格较高, 尤其是发展中国家未必能承受得起全民注射疫苗。

2 疫苗的成本效益分析

HPV疫苗的研制成功和推广使用使预防宫颈癌及相关疾病成为可能, 欧美等发达国家已经逐步为适龄女性注射HPV疫苗, 并取得了良好效果。为了探讨HPV疫苗在人群免疫接种后的效益, 也为制定和完善HPV疫苗免疫策略及宫颈癌防治规划提供依据, 我们根据现有资料, 对HPV疫苗的成本效益进行初步分析。

疫苗成本效益分析的原理是根据疫苗所预防的疾病的直接费用、间接费用以及疫苗接种费用等数据计算疫苗效益-成本比值 (benefit-cost ratio, BCR) 、净效益 (net benefit, NB) 等作为评价指标, 以BCR为例, 疫苗效益/疫苗成本=BCR, 如果BCR>1, 表示效益大于成本, 如果BCR<1, 表示效益小于成本。

迄今为止全球研制成功并上市的疫苗是HPV16和18型, 现在我们以这两种疫苗来分析疫苗的成本效益分析。首先统计HPV 16和18型在人群中的感染情况, 由Gary Clifford等[9,10,11,12,13,14]对HPV感染情况的meta分析发现, HPV 16型在ASCUS、LSIL、HSIL、宫颈癌这4类人群中所占比率分别6.5%～13%、16%～29%、34%～52%和40%～60%, 18型所占的比例是1.7%～6%、5%～12%、6%～12%、13%。我国还没有全面系统的HPV分子流行病学调查, 仅有少部分地区做了相关调查, 孙小蓉等[15]对20000例武汉郊区农民进行了细胞学和HPV检测, 人群HPV阳性率为9.25%, ASCUS、LSIL、HSIL和宫颈癌等组占总人群的百分率分别为是5.59%、3.21%、0.41%和0.04%。

目前市场使用的HPV疫苗全程免疫需要注射3组针剂, 疫苗成本每人约需要4000元。HPV感染较为常见, 在普通人群中HPV总的感染率约10%, 而90%的HPV感染者都会转归, 只有约10%的人会持续感染并朝疾病方向发展, 继续发展成ASCUS、LSIL、HSIL, 甚至宫颈癌。关于宫颈疾病的治疗费用我们做了简单的调查, 在北京三级甲等医院治疗宫颈癌, 每位患者直接医疗费用约10万元;ASCUS和LSIL患者需要每年做2次门诊随访, 每次检查费用约为450元;HSIL患者一般需要做宫颈环形电切除术, 花费约1万元。另外, 还需计算一些间接费用, 例如误工费、劳动力损失、为社会创造价值损失等。

从上文我们得知, 这4种疾病的发病率和HPV 16/18型在这4种疾病中所占的比率, 我们取比率的平均估计值来计算疫苗的效益。在这里, 我们按照孙小蓉等的数据, 将ASCUS、LSIL、HSIL和宫颈癌的发病率的平均估计值为4%、3%、0.4%和0.04%;根据Clifford等的数据, HPV 16型在这4类人群中感染率平均估计值是10%、20%、40%和50%, HPV 18型所占的比例是4%、8%、9%、13%。假设有1000万名女性, HPV 16、18型疫苗所能保护的人群及所获得的效益见表1 (比例取平均估计值计算) 。

注:间接费用的计算参考了《中华人民共和国劳动法》等相关法律、法规 (条例) , 其中:①ASCUS、LSIL的间接费用:每例每次检查的误工损失费为50元, 每年检查2次, 检查2年;②HSIL的间接费用:误工损失费, 劳动力损失费约每例2万元;③宫颈癌的间接费用:未死亡病例计算误工损失费、劳动力损失费等约每例估算为30万, 死亡病例每例为社会创造价值损失费每例30万。

从上表合计数据可知, 假设以1000万名女性为基数, ASCUS、LSIL、HSIL和宫颈癌患者共同花费合计17.46亿元 (5.7+11.76亿元) , 即HPV疫苗能够创造的效益是17.46亿元 (A) , 疫苗免疫成本是400亿元 (B) , BCR=A/B=0.04365, 计算得出BCR远小于1, 表示成本远高于HPV疫苗所创造的经济效益, 对于发展中国家而言, 该疫苗的推广使用还要从经济学的角度进行衡量和评估。但是另一方面, 人们对HPV疫苗的应用除了关心其经济效益外, 还要从整个社会发展文明程度、人道主义精神的角度出发, 考虑保护妇女的健康、减少疾病负担等因素。从疫苗研究领域而言, 还有待于研制出能覆盖更多HPV型别、更经济实惠的多价疫苗。

3 HPV疫苗免疫策略及早期筛查

疫苗免疫虽然能够有效地预防HPV感染, 从我们上述的成本效益分析的结果可以看出, 这样的成本对于发展中国家无疑需要考虑它的巨大成本。因而, 根据WHO有关文件的精神实施HPV的早期筛查, 特别是连续的HPV检测的筛查, 能够维持一个较低成本的疾病控制效果。

在中国, 宫颈癌是严重危害女性健康的疾病之一。孙小蓉等调查的宫颈癌年发病率为40/10万, 另有资料显示, 北京市宫颈癌的年发病率接近20/10万, 2005年12月31日人口普查结果显示, 农村人口比例为57.01%, 城市人口比例为42.99%, 全国女性人口总数为63319万, 如果以40/10万代表我国农村女性宫颈癌的年发病率, 以20/10万代表我国城市女性宫颈癌的年发病率, 可以推测我国每年女性宫颈癌患者约为19.9万。在这里特别指出, 前述对武汉郊区农民的研究对于我国农村的代表性稍显缺陷, 存在着低估农村人口发病率的可能性;另一方面, 由于北京市的公共卫生状况, 也存在着低估城市人口发病率的可能性, 因而有理由相信我国实际的每年宫颈癌发病人数可能比我们这里的数字还要高。

早期筛查是预防宫颈癌等疾病的重要环节, 通过早发现、早诊断、早治疗可将疾病控制在早期, 早期筛查可有效降低宫颈癌的发病率。目前推荐最佳筛查方案 (医生取材HPV检测+液基细胞学检查) 和一般筛查方案 (医生取材HPV检测+传统巴氏涂片) , 并可结合阴道镜检查和宫颈多点活组织检查取得更好效果, 早期筛查可以诊断出ASCUS、LSIL和HSIL等, 可使疾病早期发现, 早期治疗, 其预后都较宫颈癌好很多, 可以为患者减轻痛苦, 提高生命质量。

目前宫颈癌已越来越受到我国重视, 由卫生部妇幼保健与社区卫生司批准, 为期10年 (2007～2016年) 的中国宫颈癌防治工程, 已于2007年7月正式启动, 可以预计在不久的将来, 随着我们的不懈努力, 我们终将会完全控制我国宫颈癌的发生。

人乳头瘤病毒疫苗 篇2

1.首先，我的家族成员很多，有100多个，但实际上给宫颈造成麻烦的多半是HPV16和HPV18两个而已。

2.我非常自豪，因为我成就了一名叫豪森的德国老伯，他居然发现我（HPV）与宫颈癌之间存在明确的因果关系，并由此获得2008年度诺贝尔医学奖。

3.我有点自卑，因为我其实是个“山贼”而已，与其他大腕（乙型肝炎病毒HBV和丙型肝炎病毒HCV，均引起肝癌;人类免疫缺陷病毒HIV，引起艾滋病）相比，我只在宫颈上闹点事儿，而且只要您稍有警惕（每两年一次宫颈癌筛查），我就难成大事。

4.至于我是如何缠上您的，有时是天知地知您知我知，但很多时候是真的不知道。通常是通过性行为，但接触不干净的卫生洁具和用品后也可能沾染上我。

5.其实，并不是一沾上我，就会得宫颈癌！ 只有长期的、持续的、高负荷的与我亲密接触，才会引起宫颈的癌前病变和宫颈癌。

6.据说，40%的女性在一生中的某个时期都会与我有过接触，但我通常作为访客出现，多半自动离开。但如果您的状态不好（免疫能力下降）、环境适宜（多个性伴、不洁性生活），我就会克服一下，定居了！

7.如果妇科医生发现我缠上了您，您当然会紧张和不快，但是，从另一个角度来说，也是一件比较幸运的事情（绝非站着说话不腰痛！）。因为，我被暴露后，我的家族的后续破坏工作多半做不成了。

8.那么，什么时候要怀疑到我并对我展开调查呢？如果宫颈薄层液基细胞学检查（即TCT）提示有意义不明的非典型鳞状细胞（称为ASCUS）或者更高程度的病变，那就要进行HPV检测了。如果证实我不在现场（即HPV阴性），您大可以放心了，半年之后复查TCT即可;如果证实我确实在现场（即HPV阳性），您就需要进一步检查，做阴道镜和活检了。如果TCT报告的是更高级的病变，那我基本应该自首了，检查只是为了备案而已。

9.至于如何对我进行调查，有几条途径：一是宫颈薄层液基细胞学检查（TCT）报告单上会提示;二是其他方法，报告HPV16、HPV18阳性;三是杂交捕获的人乳头瘤病毒检查（HC2），除了报阳性之外，还报具体数值，是目前最先进的检查方法。

10.如果准备怀孕的妇女沾染上我，我建议您还是先把我的大部队打发走了之后再怀孕（HPV值明显降低）。潜伏下来的少量人员一般不会影响妊娠结局。

11.即使我已经给您带来了伤害（如各种类型的宫颈癌前病变），您仍然是可以搞定我的。狂轰滥炸的攻击（各种针对宫颈病变的物理治疗和锥切）能消灭我的大部分部队，即所谓“治病即治毒”，留下的残兵一般很难组织有效进攻，而且，您自身的免疫能力有可能最终将我“请出”。

12.基本可以负责任地说，目前还没有口服药物能对付我。在宫颈局部使用干扰素可能有一定效果。西方国家已经开发了新式武器，即治疗性HPV疫苗和预防性HPV疫苗（主要针对HPV16和HPV18）。据他们官方发布的消息，效果还是不错的。

总之，我并非可怕至极，但您的确需要关注。否则，我真的会闹出点动静的！

人乳头瘤病毒疫苗 篇3

关键词：宫颈癌,人乳头瘤病毒疫苗,临床调查

宫颈癌是临床妇科常见疾病, 属于恶性肿瘤, 危害女性身心健康。目前, 宫颈癌疾病的筛查已在大多数发达国家开展, 通过高质量的临床筛查, 该疾病发病率持续降低。人乳头瘤病毒与宫颈癌密切相关, 不仅可以作为宫颈癌筛查的手段, 也可用于预防宫颈癌[1]。为了更好地探讨人乳头瘤病毒在宫颈癌筛查中的应用效果, 本文将门诊患者作为研究对象, 现报告如下。

资料与方法

2010年1月-2015年4月门诊收治宫颈癌患者200例, 将其分成A、B两组。A组100例, 年龄28~46岁, 平均 (35.1±0.1) 岁。B组100例, 年龄29~47岁, 平均 (35.2±0.2) 岁。两组患者临床资料比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

方法:所有患者填写调查问卷, 主要内容包括临床信息、婚育史、人乳头瘤病毒了解度等。

统计学方法:本研究采用SPSS18.0软件进行相关数据的研究和分析, 计数资料组间比较采用χ2检验, P<0.05表示差异具有统计学意义。

结果

临床人乳头瘤病毒认知度评定:两组患者对感染人乳头瘤病毒的认知度比较, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 两组患者其余认知度比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。

临床人乳头瘤病毒疫苗的认知度评定:A组愿意接受疫苗66例 (66.0%) , B组愿意接受疫苗93例 (93.0%) , 两组比较, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。200例患者调查问卷结果显示, 92.0%的患者表示听说过宫颈癌疾病, 70.0%的患者曾接受过宫颈癌筛查。

讨论

宫颈癌筛查认知情况:本研究结果显示, 40岁以下人群宫颈癌发病率较高, 大学以上学历为宫颈癌主要发病人群, 表明宫颈癌筛查的主要影响对象是高收入、高学历女性。结果显示, 患者对宫颈癌了解度较高, 接受过筛查的患者中57.0%为个人体检, 表明患者对自身保健意识较强, 可主动进行宫颈癌的筛查。但1/4的筛查人群再次检查时不了解前次筛查结果, 说明其不够重视宫颈癌筛查[2]。

人乳头瘤病毒认知情况:本研究中200例患者学历均相对较高, 但仍有50%以上的患者未听说过人乳头瘤病毒, 对人乳头瘤病毒相关性疾病与感染后的风险认知比例与其相符合。发达国家调查结果表明, 65.0%的人群了解人乳头瘤病毒, 本研究结果和发达国家结果相符[3]。经济不发达地区、学历低的女性对此疾病的认知度相对较低, 需要疾病宣传人员强化健康教育工作。本研究中B组患者对疾病治疗了解度高于A组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 这可能和对人乳头瘤病毒的了解度不足相关[4]。

人乳头瘤病毒疫苗认知情况:虽然大多数患者不了解此疾病, 但仍有72.0%的患者愿意接受病毒疫苗, 和国外相关报告基本相似。本研究结果显示, B组患者愿意接受疫苗率93.0%, 和A组的66.0%相比, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 这可能和对疾病危险度了解不足相关, 表明大多数患者不愿意盲目接种自身不了解的疫苗, 需提高此类患者对人乳头瘤病毒的了解度, 以提高疫苗接受率。愿意接受疫苗的患者考虑最多的是接受该疫苗后可能对自身健康有益, 说明大多数患者注重自身健康。而不原因接受此疫苗的患者中, 最常见的原因是患者不认为自己具有此疾病的危险因素, 提示其未充分了解人乳头瘤病毒传播途径。周莉霞的调查报告显示, 告知接受人乳头瘤病毒疫苗可有效预防宫颈癌疾病, 85.0%的母亲愿意让女儿接受该疫苗[5]。本研究结果显示, 患者对疾病有一定的了解后, 愿意让女儿接受该疫苗的母亲达到78.0%, 和上述调查结果基本相似。而母亲不愿意让女儿接受疫苗的原因为担心其安全性, 需要在新型疫苗用于青少年前进一步试验、研究, 以明确其安全性。此外本研究发现, 医护人员推荐、医院教育是促进患者接受疫苗的主要原因, 说明医院对疾病预防的宣传力度远高于媒体, 因而宫颈癌疾病筛查、人乳头瘤病毒疫苗的推广过程中需医疗机构的大力宣传。

筛查的临床意义:临床疾病筛查均采用机会筛查法, 是指将医疗服务和患者相互结合, 在患者就医的过程中进行筛查。本研究通过对200例宫颈癌疾病患者进行筛查发现, 低度鳞状上皮内病变、高度鳞状上皮内病变发生率分别为2.5%、1.0%, 和国外报告结果相似。且本研究中对宫颈癌疾病的检出率亦等同于国外结果。因此, 临床疾病筛查需适当增加受检人数量, 为人们提供更多的保健机会。目前我国对宫颈癌疾病的筛查范围相对较小, 受检人年龄均>35岁, 而随着宫颈癌发病的逐渐年轻化, 机会性筛查成为宫颈癌检查的主要措施。

综上所述, 人们对宫颈癌、人乳头瘤病毒疫苗的认知度相对较低, 需要加强疾病宣传教育力度, 确保每位患者均得到相对正确的内容, 以提高对疾病知识的掌握度, 进而正确了解上述疾病。人乳头瘤病毒疫苗在我国应用较少, 还需大量的临床实验进行推广。且宫颈癌疾病的筛查、人乳头瘤病毒疫苗的推广还需社会各界及医疗机构的大力支持, 以预防疾病的发生, 延长人类生存期限。

参考文献

[1]李冬莉, 孔静, 尚晓娜, 等.聚焦解决模式在乳腺癌患者心理护理中的应用[J].临床合理用药杂志, 2013, 6 (1) :148-149.

[2]张贵玲, 郭素辰, 王志芹, 等.心理干预对乳腺癌患者术后康复的影响[J].华北国防医药, 2010, 22 (5) :502-503.

[3]孙红, 王浩, 马瑾璐, 等.乳腺癌患者的心理健康状况及应对对策[J].中国医学伦理学, 2006, 19 (2) :99-100.

人乳头瘤病毒疫苗 篇4

1 对象与方法

1.1 调查对象

选取2013年5月~2014年9月于深圳一所三级综合医院进行健康体检的女性以及医务人员各300例, 共600名女例。

1.2 方法

关于公众对HPV感染和HPV疫苗认知情况的调查表, 先根据前期课题组的研究基础制作[1], 关于公众对宫颈癌、HPV和HPV疫苗的认知态度等内容是此次调查问卷的核心。研究对象在问卷调查现场有关人员的统一指导下, 根据自身对以上内容的认知程度, 利用10~15min的时间独立填写问卷, 体检人群先必须问卷调查才能行妇科体检项目。共发放了600份问卷, 全部合格, 无作废问卷。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.00对数据进行分析, 计数资料用χ2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 妇产科与其他科医务人员对HPV及HPV疫苗的认知

妇产科医务人员对HPV及HPV疫苗的认知度为91.1%和85.5%较其他科室医务人员高。

2.2 深圳地区女性和医务人员对HPV的认知情况

在教育程度、经济收入及年龄方面, 地区女性和医务人员对HPV的知晓度差异显著, 地区女性教育程度、经济收入、年龄比较差异显著;医务人员教育程度、经济收入、年龄, 教育程度、经济收入越高, 地区女性和医务人员对HPV的认知度也越高, 年龄为31~40岁的认知率较其他年龄段高, 但医务人员的认知度较地区女性高。见表1。

2.3 深圳地区女性和医务人员对HPV疫苗的认知情况

在教育程度、经济收入及年龄方面, 地区女性和医务人员对HPV疫苗的知晓度差异显著, 地区女性教育程度、经济收入、年龄比较具有差异 (P<0.05) ;医务人员教育程度、经济收入、年龄比较具有明显差异 (P<0.05) , 教育程度、经济收入越高, 地区女性和医务人员对HPV疫苗的认知度也越高, 年龄为31~40岁的认知率较其他年龄段高, 但同年龄段内医务人员的认知度较地区女性高。见表2。

3 讨论

近年来, 宫颈癌的发病已呈现地区增长趋势, 发病年龄段呈现年轻化的趋势[2]。子宫颈癌的发病率正在逐年快速增长, 已经接近于每年2%~3%的速度[3]。近年来相关文献表明, HPV重复感染率在年轻女性中高达82%。

妇产科医务人员对HPV及HPV疫苗的认知度均较其他科室高, 因此, 应该在立足于本地区的实际情况下, 加强对其他科室医务人员及妇产科才毕业0~3年医护人员对HPV及HPV疫苗知识健康教育宣传培训并建立相关知识网站, 通过医务人员对广大女性人群进行HPV及HPV疫苗知识普及宣教, 让更多的人群知晓HPV及HPV疫苗知识。

总之, 深圳地区女性以及医务人员对HPV感染和疫苗认知水平较低, 应在该人群中强化HPV感染和疫苗基本知识和宫颈癌防治的宣传教育。

参考文献

[1]Tang SY, Liu ZH, Li L, et al.Awareness and knowledge about human papillomavirus among high school students in China[J].J Reprod Med, 2014 Jan-Feb;59 (1-2) :44-50.

[2]万磊, 万建平, 张燕玲, 等.子宫颈癌年轻化趋势的临床分析[J].中国肿瘤临床, 2004, 31 (10) :547.

人乳头瘤病毒疫苗 篇5

关键词：宫颈,人乳头瘤病毒,普查

人乳头瘤病毒是一种具有种属特性的嗜上皮病毒。流行病学调查显示,宫颈人乳头瘤与宫颈癌之间存在显著的相关性,因此早期筛查和处理宫颈人乳头瘤对降低宫颈癌的发病率、改善患者预后具有重要意义[1]。我院接受治疗的妇科疾病患者开展宫颈人乳头瘤病毒筛查,回顾性分析普查结果,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月～2014年10月我院收治的妇科疾病患者435例作为研究对象,按年龄分为20～30岁组109例,未婚86例,已婚23例;30～40岁组242例,未婚87例,已婚155例;40～50岁组60例,未婚9例,已婚51例;>50岁组24例,未婚2例,已婚22例。所有受试者有性生活史,且认知能力良好,自愿接受临床研究并签署知情同意书;排除子宫切除史、盆腔放射治疗史者,月经期、妊娠期妇女。

1.2 方法

采取第二代杂交捕获试验对宫颈人乳头瘤病毒DNA进行检测,经宫颈人乳头瘤病毒专用拭子入到宫颈内,停留30s后顺时针旋转2～3次,而后取出,立即装入放有细胞保存液的专用试管内送检,对比分析不同年龄组受试者检测结果,并开展问卷调查,了解患者对宫颈人乳头瘤病毒的知晓程度。

1.3 统计方法

所有计数资料以频数(f)和率值或构成比(P)表示,无序分类资料采用Pearsonχ2检验,四格表资料用Fisher确切概率法,采用SPSS18.0进行统计分析。α=0.05。

2 结果

2.1 病毒感染率

不同年龄段组宫颈人乳头瘤检出率存在明显差异(P<0.05),20～30岁组检出率最高。见表1。

注:与20～30岁组相比,①P<0.05

2.2 宫颈人乳头瘤病毒的知晓情况

不同年龄组受试者愿意接种宫颈人乳头瘤病毒疫苗率存在明显差异(P<0.05),30～50岁组疫苗接种率最高。见表2。

注:与20～30岁组、>50岁组相比,①P<0.05

3 讨论

流行病学调查显示[2],宫颈癌为妇女死亡的第二大原因。近几年宫颈癌病因学的研究逐渐深入,宫颈癌的发生因素被确认为高危型宫颈人乳头瘤病毒持续性或反复性感染。研究证实[3],宫颈人乳头瘤病毒感染生殖道会经历一个较长的过程,尖锐湿疣通过相应治疗后,若机体免疫功能较强,1～2年后病毒会自然消失;若机体免疫功能较弱,病毒会在细胞内潜伏若干年,机体免疫能力降低后潜伏的病毒可恢复活动。宫颈人乳头瘤病毒感染包括潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期以及宫颈人乳头瘤病毒相关肿瘤期[4]。在一些自然或者是实验条件下,宫颈人乳头瘤病毒所引起的乳头状瘤具有向鳞状上皮细胞癌转化的倾向,但并非所有宫颈人乳头瘤病毒感染者均会发展成癌症,大多数乳头状瘤患者向鳞状上皮细胞癌转化需要辅助因子,譬如宿主因素、化学物质、吸烟以及环境协同等因素均可以对乳头状瘤向恶性肿瘤转变产生启动作用,应引起重视。

调查显示[5],宫颈人乳头瘤病毒感染发生率与年龄、性行为习惯等因素有关。诸多研究发现,性活跃的年轻女性宫颈人乳头瘤病毒感染率最高,且随年龄的增加逐渐降低。本研究对我院收治的妇科患者采取第二代杂交捕获试验开展宫颈人乳头瘤病毒DNA检测,对比分析不同年龄组受试者的检出率,结果发现不同年龄段组宫颈人乳头瘤的检出率存在明显差异,20～30岁组检出率最高(P<0.05);证实了宫颈人乳头瘤病毒感染与年龄有关,随着年龄增加,感染率逐渐降低[6]。通过调查受试者对宫颈人乳头瘤病毒感染的知晓情况发现,30～50岁组疫苗接种率最高(P<0.05),与相关报道一致[7];可见,不同年龄段受试者对宫颈人乳头瘤病毒的认知程度不同。因此,加大宫颈人乳头瘤病毒的宣教力度对于提高患者知晓率、疫苗接种率,降低宫颈人乳头瘤病毒感染率、宫颈癌发病率,改善患者预后等均具有重要意义,值得临床给予足够重视。

参考文献

[1]杨君,周德平,陈凤娴,等.重庆地区2497例妇科就诊患者HPV感染状况分析[J].重庆医科大学学报,2012,15(4):1109-1112.

[2]胡宏,刘晓丽,蔡军.河南地区女性宫颈病变患者人乳头状瘤病毒基因型分子流行病学特征[J].中华实用诊断与治疗杂志,201021(8):229-231.

[3]谢芳,李微微,李朝辉,等.福建闽东地区畲族妇女宫颈HPV感染的检测[J].中国妇产科临床杂志,2010,17(2):1765-1767.

[4]席维岳,周伟.妇女人乳头瘤病毒感染状况调查分析[J].中国社区医师(医学专业),2011,18(04):276-278.

[5]李博,黄河,赵瑛.人乳头瘤病毒16E6蛋白与人端粒酶逆转录酶在乳腺癌中的表达及意义[J].中国医药导报,2011,22(17):1103-1105.

[6]郑敏亚,董梅娇,王军荣.宫颈上皮内瘤样病变患者高危型HPV感染基因分型分析[J].中国优生与遗传杂志,2010,11(2):214-218.

人乳头瘤病毒疫苗 篇6

1 资料与方法

1.1一般资料

2008年6月至2011年12月在我院健康检查的789例妇女, 纳入标准:年龄30~60岁, 未妊娠或计划于1年后妊娠, 在过去6个月内无宫颈疾病, 无宫颈手术史, 无其他疾病。排除标准:末次月经不详, 随访期间处于月经期, 随访期间妊娠, 产后月经未复潮, 绝经后妇女, 月经期<5天或>31天, 口服避孕药。

1.2主要仪器、设备和试剂

凯普公司:HHM-2型医用核酸分子快速杂交仪、HPV-DNA提取试剂盒、PCR反应试剂盒、HPV基因分型检测试剂盒、13种高危型HPV核酸扩增 (PCR) 荧光检测试剂盒;Sigma:蛋白酶K;上海博彩:Taq酶;Eppendorf公司:PCR仪。

1. 3 方法

1.3.1分组

根据不同取样时间分为4组:A组在卵泡期 (对照组, 月经周期5~9天) 取样, B组在月经中期 (月经周期10~15天) 取样, C组在黄体期 (月经周期16~22天) 取样, D组在黄体后期 (月经周期23~31天) 取样。

1.3.2取样

用棉拭子深入宫颈外口鳞柱交界部及宫颈阴道部取材, 轻轻旋转5周, 停留10秒, 收集宫颈脱落细胞后按无菌操作放入专用试管中。若不能立即检测, 将标本置于4℃保存, 2周内完成检测。

1.3.3 HPV检测

① DNA提取: 于放有拭子的试管中加入1 ml无菌0. 9% 氯化钠液, 漩涡震荡片刻, 拭子贴管壁挤干后取分泌物悬液200 μl置于离心管中, 13000 r / min离心10 分钟, 弃上清液, 加入细胞裂解液; ②PCR扩增: PCRMix 23. 25 μl、Taq酶0. 75 μl、DNA模板1 μl混合成25 μl反应体系。PCR仪扩增:95℃ 9 分钟, 95℃ 20 秒, 55℃ 30 秒, 72℃ 30 秒, 72℃5 分钟, 40 个循环; ③导流杂交: 采用杂交试剂盒和医用核酸分子快速杂交仪进行杂交分型, 具体操作步骤见杂交试剂盒说明书。

1.3.4 HPV病毒载量测定

用13 种高危型HPV核酸扩增荧光检测试剂盒进行实时荧光定量聚合酶链反应 ( FQ-PCR) 检测13 种高危型HPV ( HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68) 病毒载量, 严格按照试剂盒说明操作。根据CT值客观测定病毒载量的相对数值。

1.4随访

所有参与研究对象每4 个月随访1 次 ( 0月, 4 月, 8 月, 12 月) , 随访满1 年, 每次随访均进行HPV取样检查, 并收集月经周期信息。

1.5统计学分析

应用SPSS13. 0 软件进行分析, 采用Logistic回归分析和广义估计方程 ( generalised estimating equations, GEE ) 用于评估HPV感染 ( 任何亚型、单一、多重、高危HPV及HPV16、18 感染) 的比值比 ( OR) 值、95% 可信区间 ( CI) 及同一妇女多次检测结果之间的联系, P<0. 05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1纳入和排除

在第1 年的随访中, 满足所有纳入排除标准后, 最终纳入研究对象703 例 ( 其中A组177 例, B组176 例, C组175 例, D组175 例) , 每个研究对象均提供了4 份样本, 共收集了2812 份供HPV检测的样本。排除86 例: ①HPV-DNA亚型不详 ( n =11) ; ②患者末次月经时间不详 ( n = 22 ) ; ③处于月经期 ( 月经周期1 ~ 4 天) 、产后月经未复潮、绝经期者 ( n= 36) ; ④随访期间意外妊娠者 ( n = 3) ; ⑤月经期<5 天 ( n =4) 及月经周期>31 天者 ( n =10) 。

2.2纳入研究人群基线比较

4 组人群年龄、体重指数、月经周期比较, 差异均无统计学意义 ( P>0. 05) , 具有可比性。

2.3不同月经周期HPV检测阳性率比较

见表1。

注: ref为设定的参照值

A组、B组、C组、D组的HPV阳性率分别为16. 7% 、18. 2% 、16. 1% 、16. 7% 。B组、C组、D组与A组 ( 对照组) 比较, 阳性率差异均无统计学意义 ( P >0. 05) 。同时在单一、多重、高危型HPV感染, 不同基因型别感染 ( HPV16、18) , B组、C组、D组与A组 ( 对照组) 比较, 差异亦均无统计学意义 ( P>0. 05) 。

2.4整个月经周期中HPV-DNA检测阳性率对比

比较整个月经周期 ( 月经第5 ~ 31 天) 中HPV-DNA检测阳性率, 差异均无统计学意义 ( P>0. 05) 。

2. 5整个月经周期中HPV阳性病例病毒载量对比

比较整个月经周期中HPV阳性病例的病毒载量, 差异无统计学意义 ( P>0. 05) 。

3 讨论

已有大量分子生物学和流行病学研究证明, HPV感染是宫颈癌发生最主要的致病因素。感染HPV的宫颈细胞是否恶性转化主要取决于HPV的型别、病毒负荷、持续感染的时间、HPV病毒基因组在宿主染色体的整合状态及协同因子的存在等因素。目前发现可能存在的协同因子主要有: 免疫抑制、雌激素等, 特别是雌激素与宫颈癌的关系是目前存在争议的热门话题。因此, 国内外学者开始探讨自然周期中的雌孕激素是否对HPV检测产生影响。国外已有研究[1,2]报道了月经周期对HPV检测的影响, 他们均认为在不同月经周期内进行HPV检测无任何差别。而Van Ham等[3]却认为, 在卵泡期和黄体期进行HPV检测具有更高阳性率。Schmeink等[4]对比了在口服避孕药周期及自然月经周期中进行HPV检测取样的结果, 结果认为两者具有显著差别, 连续口服避孕药妇女在后半周期HPV阳性率更高。仅有一个研究[5]评估月经周期对HPV病毒载量测定的影响, 认为在月经中期测得的HPV病毒载量稍高, 但其原因尚不明确, 可能是与排卵前后黏膜免疫功能下降有关; 也可能是月经中期出现的雌激素高峰导致HPV病毒复制增加或由于降低细胞的黏附作用从而导致检测到更多的病毒量。但目前没有证据证实这些。

为了了解月经周期对HPV检测结果的影响, 我们应用低密度基因芯片导流杂交技术和实时荧光定量PCR技术在不同月经周期时段分别对HPV基因型和病毒载量进行了评估, 结果表明, 与在卵泡期取样病例相比, 在月经中期 ( OR 0. 900, 95% CI 0. 613 ~1. 322) 、黄体期 ( OR 1. 039, 95% CI 0. 703 ~ 1. 536 ) 、黄体后期 ( OR 0. 997, 95% CI 0. 674 ~ 1. 472) 进行HPV检测, 阳性率差异无统计学意义 ( P > 0. 05 ) 。单独分析各组内高危型HPV及单一HPV16、18 感染与月经周期也并无显著关系 ( P>0. 05) , 且月经周期对于HPV检测阳性病例的病毒载量亦无影响 ( P >0. 05) 。由于我们需要依赖研究对象回忆末次月经, 因其具有一定不确定性, 因此, 我们的分类可能因此存在误差, 给研究带来局限性。考虑到在月经期取样可能会影响样本质量, 可能导致假阴性, 因此, 我们不选择在月经期进行取样。

我们的研究结果认为, 内源性的雌孕激素改变对于HPV检测的阳性率、病毒载量均无显著影响, 即自然月经周期对HPV检测无明显影响, 这与部分国外研究的结果是一致的。因此, 如果为了提高HPV检测的精确度而设定特别的取样时间是不必要的, 但这还需要更大样本量的研究加以证实。了解自然月经周期对HPV检测的影响, 不仅有助于指导临床规范HPV检测取样时间, 提高宫颈癌及癌前病变的筛查、防治水平, 而且对于其他与HPV感染的相关妇科疾病如外阴阴道尖锐湿疣、外阴癌、卵巢上皮性癌等诊治过程中的HPV检测也具有一定的参考价值。

参考文献

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[2]Harper DM, Longacre MR, Noll WW, et al.Factors affecting the detection rate of human papillomavirus[J].Ann Fam Med, 2003, 1 (4) :221-227.

[3]Van Ham MA, Melchers WJ, Hanselaar AJ, et al.Fluctuations in prevalence of cervical human papillomavirus in women frequently sampled during a single menstrual cycle[J].Br J Cancer, 2002, 87 (4) :373-376.

[4]Schmeink CE, Massuger LF, Lenselink CH, et al.Effect of the menstrual cycle and hormonal contraceptives on human papillomavirus detection in young, unscreened women[J].Obstet Gynecol, 2010, 116 (1) :67-75.

某地区人乳头瘤病毒的基因型分布 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012年1月至12月松江妇幼保健医院宫颈门诊就诊患者接受HPV基因型分型检测1042例, 年龄21~68岁, 平均年龄 (37.8±2.5) 岁, 来自上海松江地区或常住该地区妇女。

1.2 方法HPV DNA基因分型决策

由广东凯普生物有限公司运用膜芯片导流杂交基因分型技术, 进行21种HPV分型检测 (6、42、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304) HPV分型检测采用专用的HPV采样刷, 置于宫颈口逆时针方向旋转3~5圈, 并停留10秒以上, 立即浸入专用的标本储存管, 及时送检。检出16中高危亚型 (HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68及CP8304) , 另有HPV6、11、42、43和44等5中低危亚型。有2型或2型以上者为多重感染。实验步骤如下:①样本DNA提取。采用凯普生物化学科技公司的基因组抽屉试剂盒。②PCR扩增。

每一批同时扩增HPV18型阳性对照和阴性对照各1份。反应条件为95℃, 9 min, 95℃, 20 s, 55℃, 30 s, 72℃, 30 s扩增40个循环, 72℃延伸5 min。③导流杂交 (采用医用核酸分子快速杂交仪及配套试剂盒, 具体步骤参见杂交试剂盒说明书。④结果判断 (根据芯片上HPV基因型分布的相应位点判断为何种基因型)

2 结果

2.1 HPV DNA基因型检测

共检测到20种基因型, 未发现低危型亚种43型。

2.2 HPV DNA基因型分布

各亚型感染率分布从高到低依次为16型170例、58型110例、52型111例、33型58例、53型51例、31型49例、CP8304型47例、68型42例、66型34例、18型32例、6型23例、56型17例、39型17例、45型16例、11型16例、51型11例、35型10例、42型7例、59型5例、44型4例。

2.3 HPV的单一和多重感染

单一感染370例、二重感染133例、三重感染39例、四重感染15例、五重感染3例。

3 讨论

宫颈癌是较常见的妇科恶性肿瘤之一, 据统计全球每年的宫颈癌新发病例约46万, 每年宫颈癌的死亡病例约25万。在我国, 每年宫颈癌的新发病例数超过13万, 约占全球的1/4~1/3, 发病率仅次于乳腺癌而位居第二, 并呈年轻化及上升趋势。高危型别HPV感染的妇女中有相当一部分可发展成子宫颈癌前病变, 因此定期检查高危型HPV感染能有效地判断子宫颈癌的发病风险。

我们采用的凯普核酸分子快速杂交基因分型技术, 既能确定感染的HPV亚型, 又能判断多重感染, 可以对CIN治疗后进行预后判断和治疗监测。该技术建立在基因芯片和导流杂交技术基础之上, 其特点就是灵敏、特异、简便快速等[4,5]。我们对1042例标本的HPV分型检测, 有如下发现:

3.1 常见的HPV基因型存在地理差异

高危型HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件, HPV基因型分布有地区差异, 与宫颈癌相关的型别也不尽相同。除16型居首位以外, 其余型别不同的地区略有差异[6]。在全球范围内, 前10位分别是HPV16、18、58、52、51、31、56、33、45、53。廖京平[7]对北京大学第一医院报道门诊人群中HPV16、58和52是这一人群中最常见的HPV型别, 本组调查与其相一致。毕蕙等[8]对CIN患者HPV亚型检测居前5位的依次为16、58、52、33和31。彭永排等[9]对广州市1285例志愿者宫颈人乳头瘤病毒感染调查显示前5位的HPV亚型是52、31、16、58和53型。蒋卫平等[10]对浙江丽水地区288例HPV感染检出居前5位的依次是16、58、52、33、53, 其余的感染率均低于10%。周杨杨[11]对江苏淮安门诊患者HPV感染调查为:HPV感染总阳性率55.6%, 亚型高低依次为16、58、52、53、33。我们的研究中, 病例均来源于上海松江地区, 检出率居前5位的依次是16、58、52、33、53, 其余的亚型感染率均低于10%。16型感染率最高, 没有明显的地区差异, 而其他型别的感染率存在较大的地理差异, 尤其是18和45型, 在国内的报道中感染率均不是很高, HPV18在欧美比较常见, 而HPV45在非洲常见, 除16型外我们得出58、52、33和53的感染率较高, 与毕蕙等[8]报道的基本一致, 尤其与蒋卫平等[10]报道的数据非常接近, 而其他研究者的结果相差较大, 可能与接诊患者不同有关。而上海松江地区与浙江地区较为临近, 从而进一步表明常见的HPV感染的基因型存在明显的人群和地域特点。

3.2 HPV多重感染

本研究HPV多重感染的比例为33.93%。根据美国已经公布的数据, 这些女性中约有1%将患有CIN2、3。多重HPV感染以HPV16/18亚型为主。不同地区的差异:亚洲国家HPV多重感染组合中16, 52, 58是最常见的亚型中以HPV16、45、58、18、31、33和52为主[12]。

人乳头瘤病毒疫苗 篇8

大部分HPV感染无临床症状或为亚临床感染, 不能作为一个普通的临床疾病或通过常规筛查计划或性传播疾病调查得以发现, 只能通过HPV检测得知。由于HPV至今尚不能在体外培养, 又无合适的实验动物, 故不能用简便的血清血检测进行HPV诊断和分型, 对其检测主要依赖于形态学方法和分子生物学技术。目前, HPV 检测方法主要有细胞学法、斑点印迹法、原位杂交法、Southern 杂交法、多聚合酶链反应 (PCR) 法和杂交捕获法等。

1 传统检测方法

1.1 细胞学检查

利用宫颈刮片细胞学检查或液基薄层细胞学检查 (目前改良的自动化细胞学检查方法) , 根据细胞外观形态的转变来加以诊断。宫颈HPV阳性细胞的特征性改变是出现了挖空细胞, 其变化表现为:核增大、扭曲, 染色质固缩状, 核位于细胞中央或偏位, 常可见到双核或多核, 核周有一椭圆形宽阔区, 外围厚实胞浆。除此之外, 镜下还可见角化不良及湿疣外底层细胞。由于HPV感染所致的病变越重, 涂片中挖空细胞出现机会越少等原因, 细胞学诊断HPV感染敏感性较差。研究资料报道经细胞学诊断HPV感染的敏感性仅为30%。

1.2 病理学检查

HPV感染宿主的上皮组织从而导致形态学改变, 其病理学表现包括鳞状上皮呈疣状或乳头状增生, 常伴有上皮脚延长、增宽呈假上皮瘤样增生;表皮角化不全, 常伴角化不全层核肥大, 显示一定的非典型性;棘层不同程度增厚;基底细胞增生, 层次增加;高危HPV感染的宫颈上皮为中层挖空细胞核出现密集浓染的蓝紫色颗粒产物等。但是, 较多HPV感染患者的病理学表现并不典型, 需要联合应用其它方法 (如免疫组化或原位杂交) 进一步检测HPV。

1.3 免疫学检查

主要包括免疫组化法通过抗HPV L1蛋白抗体与外壳蛋白反应或抗HPV早期蛋白E6、E7抗体与E6、E7蛋白反应检测HPV (阳性标志为细胞核内出现棕黄色颗粒) 、采用放射免疫沉淀法测定CIN组织和血清中的高危HPV 16抗体水平、用血清免疫吸附试验 (ELISA) 检测血清中的HPV E6、E7特异性抗体蛋白等。研究表明, 抗高危HPV L1、E6、E7抗体可直接定位于宫颈癌组织, 对宫颈癌有较好定向选择性, 有可能作为人宫颈癌放射免疫显影诊断的载体。但是, HPV感染必须要在HPV-DNA复制后才有病毒蛋白的表达, 阴性者也不能否定诊断, 故该方法敏感性较低。

1.4 电镜检查

电镜技术可用于直接观察HPV的病毒颗粒。透射式电子显微镜 (透射电镜) 的分辨力可达0.1 nm, 扫描式电子显微镜 (扫描电镜) 的分辨力可达1 nm。但电镜检查诊断HPV感染的成本太高, 且敏感性较差, 仅30%~50%受HPV感染的病例可在电镜下检测到病毒颗粒。

由于以上传统方法的特异性和灵敏度均不够理想, 存在较高的假阴性率, 且不便于对HPV进行分型, 目前临床应用较少。

2 HPV核酸检测方法

随着分子生物学技术的进展, HPV核酸的检测手段也日益多元化。

2.1 HPV-DNA杂交捕获技术

杂交捕获法 (hybrid capture) 是美国Digene公司开发的基于对抗体捕获信号放大和化学发光信号检测的HPV-DNA定性及半定量检测技术, 第2代杂交捕获法 (HCⅡ) 已被美国FDA批准可用于临床。其基本原理是应用高效的液相RNA-DNA杂交方法捕获样品中的HPV-DNA, 采用碱性磷酸酶标记抗RNA:DNA抗体-化学发光信号显示系统。HC-Ⅱ可同时检测13种高危型HPV (16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68) 和5种低危型HPV (6、11、42、43、44) 。HC-Ⅱ的优势在于以基因全长为探针, 无需基因扩增;临床操作简便、效率高且标准化, 适于大量人群筛查, 具有较高的临床敏感度。其缺点在于对检测设备要求高, 试剂检测费用较贵, 且不能对HPV某一特定型别进行检测, 存在交叉杂交引起的假阳性, 使特异度降低。

2.2 聚合酶链式反应 (PCR ) 方法

PCR是基于核酸杂交的原理, 设计与HPV-DNA互补的一对特异性核苷酸引物, 以HPV-DNA为模板以指数增长的速率进行体外扩增, 提高诊断的敏感性。PCR法为HPV检测最敏感的技术, 包括常规PCR、实时荧光定量PCR (FQ-PCR) 、PCR-ELISA检测及PCR结合反向点杂交技术检测等。不仅可以对HPV阳性感染进行确诊, 还可以对HPV进行分型, 测定病毒载量, 进行基因序列分析、发现新基因型等。但其缺点为样品间易交叉污染导致假阳性, 并且各种PCR方法由于引物、反应体系及产物检测方法等不同, 其敏感性和特异性也随之变化, 缺乏一致的诊断标准。在HPV分型检测方面, 由于HPV型别太多, 而上述常规PCR必须针对各型分别操作, 因此有相对的复杂性存在;部分研究显示, 有些HPV基因的变异会导致PCR无法检出;也有少数研究指出因HPV的基因融合于肿瘤细胞DNA中, 使得PCR反应也无法顺利检出。为了克服以上局限, 以PCR技术为基础的新型HPV核酸分型检测方法逐渐开发应用, 主要包括:

CervistaTM HPV技术 (hologic) 运用了PCR扩增和荧光发光判读结果的原理, 包括两种HPV-DNA诊断方法。一种方法可同时检测14种HPV高危型别 (CervistaTM HPV HR) , 包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和66型。与HC-Ⅱ一样, 该法不能对HPV某一特定型别进行鉴定;另一方法 (CervistaTM HPV 16/18) 用于检测HPV16和18型并可以进行分型。

低密度基因芯片导流杂交技术 (flow-through hybridization technology, hybribio) 将PCR技术、导流杂交技术及传统基因芯片技术集合在一起, 结合了PCR技术的高灵敏性、导流杂交技术的高特异性以及基因芯片的高通量性。该技术可将未标记的特异性寡核苷酸探针分别固定在尼龙膜上形成斑点, 再与经PCR扩增的样品DNA 序列杂交, 可一次性检测21种HPV感染并精确分型, 这些型别包含13种高危型 (HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型) 、5种低危型 (HPV6、11、42、43、44) 和中国人常见的3种亚型 (HPV53、66、CP8304) , 并能够检测出混合型感染。

新型集成技术 (cobas 4800 HPV, Roche) 同样应用PCR的高灵敏性和导流杂交技术的高特异性, 并通过多重定性的检测方法提高了HPV检测和分型的准确性。该技术提供HPV16和18型及其他12型 (HPV 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68b) 共14种高危HPV亚型汇总的结果, 并且将HPV16和18型这两种最高危型别单列出来, 将有助于宫颈癌初筛过程中的进一步分层分析和处理。除了检测HPV之外, 该技术亦同时检测β-球蛋白, 作为内部质控并确定样本是否含有抑制扩增的因素, 进一步避免了假性结果的干扰。

2.3 核酸印迹原位杂交 (Southern杂交)

Southern杂交是传统核酸杂交方法, 利用碱基互补原理, 将电泳分离的HPV DNA的酶解片断结合到固相支持物上, 利用同位素标记的核酸探针检测HPV的核酸, 并对病毒DNA分型。该方法虽然灵敏度较高, 但需要新鲜组织标本, 操作繁琐、费时耗力, 故不适于大通量临床样品的筛查, 目前临床应用较少。

2.4 原位杂交技术

原位杂交的原理是以HPV核酸探针 (DNA 或mRNA ) 进行原位杂交反应, 检测组织标本或宫颈涂片中的HPV。原位杂交最直接的诊断是于细胞中染出HPV, 也可用于组织病理学检查, 病灶上的组织利用专一性抗体进行探针测试。该方法的优势是可以定位可疑细胞, 同时兼具半定量的功能;不足之处为敏感性不高、样本质量要求高、劳动量大、花费较大, 而且每种类型HPV都需要相应的探针, 大大降低了临床应用价值。

2.5 斑点印迹

该方法测试程序繁琐, 需要使用放射性物质, 其敏感度和特异性亦低于Southern杂交, 虽然经济实用, 但实验过程存在有放射性污染, 耗时长, 检测需要大量纯化DNA等缺点, 目前临床已很少使用。

3 HPV检测的临床应用价值

宫颈癌的筛查是降低宫颈癌发病率和死亡率的最经济有效的方法, 高危型HPV感染的检测对于预防和早期发现宫颈癌及其癌前病变有非常重要的意义。

2012年, NCCN公布的新版《宫颈癌筛查临床实践指南》中, 高危型HPV检测成为宫颈癌初筛 (与细胞学检查联合筛查) 及异常细胞学结果处理的组成部分。HPV检测在一定程度上减少重复细胞学检查, 减少阴道镜检查, 减少在随诊中高危人群的丢失。此外, 大量研究支持HPV-DNA检测可预测治疗后病变残存和复发的高危患者, 可能成为宫颈癌治疗后的病情监测的有效肿瘤标志物。因此, HPV检测的应用意义由作为宫颈癌筛查手段已逐渐向临床推广。

HPV的检测方法很多, 但因为功能定位不同, 如用于筛查、疗效评估或随访、科研等不同目的, 所采用的方法或顺序也有所区别。研究表明, 不同的HPV型别有不同的致病能力;相对于其他高危型HPV, HPV16和18型感染进展为宫颈高度病变和浸润癌的风险更高。因此, HPV分型检测将更有利于在临床上进一步分流管理高危型HPV检测阳性而细胞学检查阴性的患者, 预测宫颈病变的进展和预后, 指导HPV疫苗的开发应用和效果评估。