高危人乳头状瘤病毒

高危人乳头状瘤病毒（共7篇）

高危人乳头状瘤病毒 篇1

人乳头状瘤病毒 (HPV) 是一种双链DNA病毒, 高危型HPV感染与宫颈癌密切相关。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一, 为了妇女高危型人乳头瘤病毒感染状况, 对1255例妇女采用荧光定量PCR检测妇女宫颈分泌物, 检测高危型人乳头瘤病毒感染检测结果总结如下。

1资料与方法

1.1 一般资料

2011年2月-2012年12月在南宁市妇幼保健院就诊的患者和体检查妇女, 年龄18～62岁。

1.2 方法

采用荧光定量PCR检测妇女宫颈分泌物, 检测高危型人乳头瘤病毒感染状况, 随机收录统计1255例标本检测结果。

2结果

采用荧光定量PCR检测妇女宫颈分泌物, 共检测高危型人乳头瘤病毒HR-HPV-DNAⅧ型 (16、18、31、33、45、52、56、58亚型) 1255例, 检出高危型人乳头瘤病毒感染75例, 检出阳性率5.98%。

3讨论

本调查表明, 采用荧光定量PCR检测妇女宫颈分泌物, 高危型人乳头瘤病毒感检出阳性率5.98%, 在妇女中HPV的感染状况, 文献报道各有特点, 根据罗宇迪等[1]报道, 玉林市862例女性宫颈人类乳头状瘤病毒检测, 高危亚型检出12个亚型157例次, 高危亚型HPV检出率18.21%, 高危亚型HPV首位是HPV16, 占高危亚型的27.39%, 依次为HPV52占26.11%, HPV58占14.01%, HPV18占10.83%, HPV31占3.18%。根据张春蕾等[2]报道, 采用聚合酶链反应 (PCR) 和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术对670例女职工进行HPV感染检测, 感染率为12.39% (83/670) , 其中单纯高危型感染占78.31% (65/83) 。根据冯淑燕等[3]报道, 厦门市思明区已婚育龄期1026例育龄妇女的宫颈细胞进行DNA定量分析及宫颈细胞TCT检查, HPV感染人数119例, HPV感染率11.6%, 其中高危型HPV感染105例, 感染率10.2%。本调查表明, 高危型人乳头瘤病毒感检出阳性率相对较低。

人乳头状瘤病毒是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒, 属双链闭环的小DNA病毒, 包含约8000个碱基对。人乳头瘤病毒感染与宫颈癌关系的研究成为肿瘤病毒病因研究的热门课题, HPV感染引起癌变与HPV病毒DNA整合入宿主染色体密切相关, HPV的DNA链通常在E1或E2开放读码框内断裂, 使HPV DNA整合入染色体脆弱区, 改变了细胞生长周期的调控机制, 使细胞永生化和对恶性变的防御进一步受到影响[4]。HPV16感染是引发宫颈癌最常见原因, 而与HPV16致癌密切相关的基因为DNA分子上的E2、E6蛋白, E6是病毒癌基因, 它不仅可直接转化细胞, 还可干扰正常细胞的周期调控, 导致细胞无限增殖;E2蛋白是一种特异性DNA束缚蛋白, 可以调节病毒mRNA和其它癌基因的转录及DNA的复制[5]。值得注意的是, 并非所有感染HPV的妇女都会发展为宫颈癌, HPV感染上皮细胞后, 可以呈游离状态持续存在于染色体外, 不引起任何病变, 或引起良性病变[6]。

HPV感染与宫颈癌的发生密切相关, 因此有学者认为, 宫颈癌是一种感染性疾病, 采用抗感染治疗可达到预防宫颈癌发生, HPV感染检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一。防治HPV感染是预防宫颈癌的有效方法, 荧光定量PCR检测妇女高危型人乳头瘤病毒方法简单、准确, 为高危型人乳头瘤病毒感染者治疗提供可靠实验依据, 是降低宫颈癌发生的有效措施。

参考文献

[1]罗宇迪, 邓国生.玉林市862例女性宫颈人类乳头状瘤病毒感染状况分析[J].中国临床新医学, 2009, 2 (12) :1270-1272.

[2]张春蕾, 张青, 袁小林, 等.某院女职工人乳头瘤病毒感染及基因分型检测结果分析[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (6) :689-690, 692.

[3]冯淑燕, 冯淑玲.1026例育龄妇女HPV感染情况调查及分析[J].中国妇幼保健, 2011, 26 (9) :1374-1377.

[4]姚岚.宫颈细胞学检查结合高危型人乳头瘤病毒检测2221例结果分析[D].导师:金仙玉.大连医科大学, 2011.

[5]王金桃.雌孕激素与HPV在宫颈癌发生中的交互作用及相关因素研究[D].导师:高尔生.复旦大学, 2004.

[6]石一复, 李娟清.重视子宫颈疾病的防治[J].中国实用妇科与产科杂志, 2004, 20 (7) :5-6.

高危人乳头状瘤病毒 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011年3月~2012年3月在我院进行产检的孕4~34周1 682例孕妇及产后42 d到门诊复查的539例产妇为研究对象,平均年龄(28.6±6.7)岁,83%为初产妇,将2 221例孕妇及产后妇女以30岁为界分为19~30岁组和31~40岁,以5岁为一年龄阶段分为<25岁组、25~30岁组、31~35岁组、36~40岁组及>40岁组,以同期1 067例非孕期宫颈癌筛查妇女作为对照组,至少有2年的性生活史。所有研究对象排除血液系统疾病病史及孕妇无习惯性流产病史,B超未发现胎盘异常情况。

1.2 方法

用专用试管采集宫颈管口标本,检测13种高危型HPV:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,采用美国Digene公司最新的HR-HPV检测技术———第2代杂交捕获试验(hybrid capture,HC)进行检测。当检测出HR-HPV DNA≥10 ng/L时即可以判定HR-HPV阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析,计数资料比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组HPV感染率比较分析

妊娠后、产后及对照组HPV感染率分别是14.92%、10.20%及11.34%,妊娠组与产后组相比差异有统计学意义(χ2=7.650 7,P=0.005 7),妊娠组与对照组相比差异有统计学意义(χ2=7.160 8,P=0.007 5),产后组与对照组相比(χ2=0.473 7,P=0.491 3),见表1。

2.2 妊娠及产后妇女两个年龄阶段的感染情况比较

以30岁为界线,40岁前两个年龄阶段的孕产妇感染率相比,19~30岁与31~40岁相比,31~40岁感染率明显升高,但差异无统计学意义(χ2=2.820 9,P=0.093 0)。见表2。

2.3 妊娠及产后妇女不同年龄阶段的感染情况比较

以5岁为一个年龄阶段分成5组,感染率以<25岁阶段、36~40岁阶段及>40岁阶段相对较高,而25~30岁及31~35岁阶段相对平稳,整体呈现先高后低再度升高的趋势。<25岁组与25~30岁及31~35岁相比感染率明显升高,但差异无统计学意义(χ2=1.610 9,P=0.204 4;χ2=0.506 2,P=0.476 8),36~40岁组与25~30岁及31~35岁相比感染率明显升高,差异有统计学意义(χ2=11.701 2,P=0.000 6;χ2=5.7911,P=0.016 1)。见表3。

3 讨论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,国内外专家认为宫颈癌的发病与性活跃、性生活早、早年分娩、多产高危型HPV感染等有关[2,3]。目前众多研究者认为HPV-DNA的检测是宫颈癌筛查的必不可少的检测项目,HPV是导致宫颈癌及其癌前病变的必要因素[4],Sherman等[5]认为如果不存在持续不断的HPV感染,女性几乎不可能罹患宫颈癌。

HPV是一种嗜上皮性病毒,在人和动物中分布广泛,有高度的特异性,HPV主要通过性接触传播给他人,另外也可以通过接吻、皮肤破损及产道传播等。国内外学者认为年龄、性生活的频次及早晚、怀孕及机体免疫状态等是影响HPV感染的主要因素[6,7,8]。

本研究结果也表明妊娠期HPV感染率与产后及对照组相比相对较高,差异有统计学意义(P<0.05)。以5岁为一个年龄阶段分成5个组,感染率以<25岁阶段、35~40岁阶段及>40岁阶段相对较高,而25~30岁及31~35岁阶段相对平稳,整体呈现先高后低再度升高的趋势。<25岁组与25~30岁及31~35岁相比感染率明显升高,但差异无统计学意义(P>0.05),36~40岁组与25~30岁及31~35岁相比感染率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),孕期感染率高于产后和非孕期,产后与非孕期无差异。妇女在怀孕期间由于全身雌激素及孕激素的升高,抗病能力相对下降,细胞免疫功能低下,导致孕妇较容易感染HPV,若感染该病毒,病程进展较快不易治愈。另有学者认为妊娠不是加速宫颈病变进展的危险因素[9],妊娠期在未经治疗的情况下低度鳞状上皮内瘤变产后恢复正常的概率高达65%,高度鳞状上皮内瘤变产后病变恢复正常的概率达20.00%~25.00%;CINⅡ65.00%~74.00%,CINⅢ20.00%~70.00%。因此产后常规进行检查HPV。本研究HPV感染先高后低再度升高的趋势与流行病学调查结果一致[10,11,12]。

总之,妊娠期进行HPV感染的检测是必要的、安全的,对于评估和预防宫颈病变有一定的临床意义。

摘要：目的 分析孕期及产后妇女高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染的状况及其临床意义。方法 以2011年3月2012年3月于我院产检的孕434周1 682例孕妇及产后42 d的539例产妇为观察组,以同期1 067例非孕期宫颈癌筛查妇女作为对照组,取其宫颈标本,采用HR-HPV DNA检测技术进行HR-HPV DNA检测。以30岁为界分为19～30岁组和31～40岁组,以5岁为一个年龄阶段将孕期及产后妇女分成5组,即:<25岁、25～30岁、31～35岁、36～40岁及>40岁5个年龄阶段,分析HPV感染情况。结果 妊娠后、产后及对照组HPV感染率分别是14.92%、10.20%及11.34%,妊娠组与产后组和对照组相比,感染率相对较高,差异有统计学意义(P<0.05),产后组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5个年龄阶段感染率分别为16.13%、11.67%、13.44%、19.43%和47.83%,呈现先高后低再度升高的感染趋势。结论 妊娠期进行HPV感染的检测是必要的、安全的,对于评估和预防宫颈病变有一定的临床意义。

高危人乳头状瘤病毒 篇3

资料与方法

2014年6月-2015年10月筛选在我院进行常规体检的健康妇女800例作为研究对象, 年龄22~80岁, 平均48.2岁。

方法:结合安捷伦Mx3000P实时定量荧光聚合酶链反应检测仪和HP-HPV分型核酸测定试剂盒对宫颈高危型乳头状瘤病毒的感染情况进行检测, 同时分析其基因亚型分布状况, 并结合妇女的年龄分组分析其感染率[2]。首先取得组织样本后, 在样本管中加入1 m L生理盐水, 吸取液体后将其转移至1.5 m L EP管中进行离心5 min, 离心力设置为6 000 g, 弃上清后再加无菌生理盐水1 m L进行同离心力离心5 min, 进行样本洗涤[3], 将得到的沉淀加入提取液50μL, 混匀后在100℃下裂解10 min后进行离心5 min、离心力6 000 g, 然后取上清4μL作为反应模板, 然后在PCR检测仪上进行扩增, 得到相应的Ct值后进行数据统计分析[4]。

统计学方法:采用SPSS 21.0软件包对数据进行分析统计, 计量资料采用 (±s) 表示, 组间对比则采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。

结果

800例妇女中, 88例妇女有HPV病毒感染, 其感染率11.0%, 在亚型分布中居于前5位的分别是HPV 52、HPV39、HPV 58、HPV 68、HPV 56, 见表1。

年龄分段分析中显示, 50~59岁的年龄检出率明显高于20~29岁年龄段, 差异具有统计意义 (P<0.05) , 见表2。

讨论

HPV是一种具有约8 000个碱基对的双链闭环的小DNA病毒, 是具有外壳蛋白质抗原的嗜上细胞病毒的总称, 其主要分为高危型和低危型HPV, HPV病毒包含八个早期的开放读码框以及两个晚期读码框和一个非编码长链区。早期的不同亚型编码区对细胞的生长刺激、蛋白抑制以及抑癌基因的促进结合等作用导致细胞增殖失调, 同时DNA损伤修复功能受到损伤, 从而引发患者出现癌前病变并进一步转变为癌症病症。晚期编码区则是主要形成衣壳蛋白而组装成病毒的衣壳。目前HPV的亚型较为众多, 同时由于其生物学功能的差异, 将其分为高危型和低危型, 高危型病症与患者的癌前病变密切相关, 在宫颈癌的发生发展过程中, 高危型HPV感染在宫颈癌的诱发中起着重要作用[5], 而低危型则主要与生殖系统和泌尿系统的病变相关, 主要是引起女性外生殖器部位的湿疣类病变[6]。在宫颈癌病症的早期筛查和诊断中加强HPV的检测非常关键, 是防控宫颈癌发生的重要监测指标。HPV感染是一种全球卫生健康问题, 在女性宫颈癌的防治中起着重要作用, 目前HPV疫苗已经在美国认证上市, 主要在预防亚型16和18感染中有较好的作用, 对宫颈癌前病变和宫颈癌有较好的预防作用, 同时HPV的基因分布在不同的国家也不同, 其流行病学调查资料目前还没有统一数据, 因此建立HPV感染的完整的基因分布数据库非常关键。根据分布差异实施有针对性的病症防控, 对女性生殖健康有更重要的意义。

本研究中, 800例妇女中有88例妇女检测到HPV病毒感染, 其感染率11.0%, 在亚型分布中居于前五位的分别是HPV 52、HPV 39、HPV 58、HPV68、HPV 56, 同时在年龄分段分析中显示50~59岁的年龄检出率明显高于20~29岁年龄段, 差异具有统计意义 (P<0.05) 。因此, 在妇女健康体检中对高危型人乳头状瘤病毒的筛查显示随着年龄的增加, 其发病率有所增加, 在20~30岁阶段的女性感染率较高与其频繁的性生活有关, 免疫系统受到刺激而出现HPV感染, 而在60岁以上的女性中, 其感染率增高与其机体内的免疫力消失和激素水平的紊乱导致很多处于病毒感染潜伏期的女性出现复活状态, 而在同时, 本研究也显示出感染比率最高的亚型HPV 52, 在临床宫颈癌的筛查和诊断中具有一定的参考意义。

参考文献

[1]岑尧, 张翠英, 张雅丽, 等.中国女性人乳头瘤病毒感染状况及高危型别分布的Meta分析[J].癌症进展, 2013, 11 (1) :75-81.

[2]陈颖, 蓝海鹰, 黄紫艳, 等.健康体检妇女宫颈高危型人乳头状瘤病毒感染情况及基因亚型分析[J].检验医学, 2013, 28 (5) :434-435.

[3]郑鲤榕.治糜灵栓联合LEEP术治疗宫颈上皮内瘤变伴高危型人乳头状瘤病毒感染的临床研究[D].福建中医药大学, 2013.

[4]刘玉萍, 沈太敏, 帅平, 等.成都市健康体检妇女人乳头状瘤病毒感染及基因亚型分析[J].实用医院临床杂志, 2015, 12 (6) :52-54.

[5]韩英.荧光原位杂交技术检测h TERC基因扩增在新疆部分地区宫颈癌早期筛查中的临床意义研究[D].新疆医科大学, 2010.

高危人乳头状瘤病毒 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2013年4月‐2015年1月于本院经病理分析确诊为宫颈癌前病变患者84例,按照随机分组原则将患者分为观察组与对照组。两组患者年龄、产次等基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性,见表1。

1.2 方法

对照组:患者运用液基薄层细胞学(TCT)进行检查。先运用无菌棉签对宫颈表面进行擦拭以擦除分泌物,然后运用专门的毛刷于患者宫颈外口鳞状上皮与柱状上皮交接处以及宫颈管处进行脱落细胞收集,将收集的脱落细胞放置于Thinprep的保存瓶中。对薄层支撑细胞进行涂片,而后使用95%酒精进行细胞固定以及HE染色。最后于光镜下阅片诊断。

观察组:患者运用液基薄层细胞学(TCT)联合高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA进行检测。液基薄层细胞学(TCT)检测步骤同对照组。高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测时,置入无菌棉拭子于患者宫颈口中,轻柔缓慢旋转6周左右,而后将棉拭子置于无菌试管中保存以待检测。在二代杂交捕获试验法基础上对标本中所含有的16、18型等13种高危人乳头状瘤病毒(HPV)进行检测。比较分析两种检测方法检测符合率。

1.3 评估标准

高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测:依据标本相对发光单位标准,标本中人乳头状瘤病毒DNA负荷量≥1 pg/ml为检验结果阳性;标本中人乳头状瘤病毒DNA负荷量<1 pg/ml为检验结果阴性。

液基薄层细胞学(TCT)检测:低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、无上皮内病变的不典型鳞状细胞(atipical squamous cells of undetermined significance,ASCUS)和不典型腺细胞(atypical glandular cells of undetermined significance,AGUS)病变、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两种检测方式检测结果经比较,观察组检验符合率(95.2%)显著高于对照组检测符合率(78.6%),差异有统计学意义(χ2=5.126,P=0.025),见表2。

3 讨论

宫颈癌作为仅次于乳腺癌的妇科恶性肿瘤疾病,虽然恶性程度较高,但具有较长的疾病发展期,部分患者宫颈癌瘤样上皮病变历经十年之久方才发展为宫颈癌。因此,及早进行诊断、干预治疗对于避免宫颈癌发生以及降低患者患病风险具有重要意义[2]。

液基薄层细胞学(TCT)为临床广泛运用的检测方法,可去除宫颈黏液、炎性细胞的检测干扰以采集宫颈管细胞,能够提高检出率。相关报道指出,液基薄层细胞学(TCT)检测相对于人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测在宫颈病变中拥有更高的敏感性、特异性,但由于绝经妇女子宫宫颈管细胞萎缩因而存在一定误诊或漏诊[3]。目前,高危人乳头状瘤病毒(HPV)是子宫颈癌前病变以及发展为浸润宫颈癌的高危致病因素,病毒感染几率越高,则相应的细胞学及病理学诊断级别越高。感染人乳头状瘤病毒(HPV))并非一定发生显著癌前病变,多数患者感染症状可于感染后9个月左右一过性消失[4]。临床上可将人乳头状瘤病毒(HPV)列入细胞学重要的补充检测以提高宫颈病变诊断率。该检测运用液相杂交和信号放大检测技术,操作简单、灵敏度、特异度较高,也可定量分析以弥补TCT检测不足之处[5]。

本研究中,观察组患者应用液基薄层细胞学(TCT)联合高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测技术进行检测,其检验符合率显著高于仅运用液基薄层细胞学(TCT)检测的对照组患者,表明液基薄层细胞学(TCT)联合高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测技术具有更高的灵敏度与准确性,可为宫颈癌前病变的诊断提供更加可靠的依据。与王云霞[6]报道结论一致。

综上所述,宫颈癌前病变运用液基薄层细胞学(TCT)联合高危人乳头状瘤病毒(HPV)DNA进行检测,检测符合率较高,可为临床诊断提供有效依据,值得推广应用。

摘要：目的 研究分析宫颈癌前病变应用TCT(液基薄层细胞学)联合高危HPV(人乳头状瘤病毒)DNA检测的诊断价值。方法 回顾性分析2013年4月‐2015年1月于该院经病理分析确诊为宫颈癌前病变患者84例,按照随机分组原则将患者分为观察组与对照组,观察组应用TCT联合高危HPV-DNA进行检测,对照组仅运用TCT进行检测。比较分析两种检测方法检测符合率。结果 观察组检测符合率显著高于对照组,差异有统计学意义(χ2=5.126,P=0.025)。结论宫颈癌前病变运用TCT(液基薄层细胞学)联合高危HPV(人乳头状瘤病毒)DNA进行检测,检测符合率较高,可为临床诊断提供有效依据,值得推广应用。

关键词：液基薄层细胞学,HPV,癌前病变,子宫

参考文献

[1]徐永君,蔡少妃,张云云.人乳头瘤病毒定性检测与液基薄层细胞学检查在绝经后宫颈癌前病变中的诊断价值分析[J].中国妇幼保健,2014,3(16):2586-2588.

[2]陈昕华,虞永麟.宫颈HPV感染、CIN及宫颈癌3年发生情况分析[J].中国妇幼保健,2011,9(13):1945-1946.

[3]刘丽燕,刘丽丽,赵正云,等.液基细胞学检查与阴道镜对宫颈癌前病变的诊断价值[J].检验医学与临床,2014,4(15):2041-2042+2046.

[4]李琴艳,付雯,邹鹏.宫颈液基细胞学检测与组织病理学检测在宫颈病变诊断中的价值[J].中国实验诊断学,2011,8(5):879-881.

[5]黄川英.液基细胞学与人乳头瘤状病毒联合检测分析对宫颈癌筛查的临床价值[J].中外医学研究,2011,1(35):6-8.

高危人乳头状瘤病毒 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取梅州市人民医院2012年12月-2013年12月门诊及住院病人送检的宫颈分泌物。以阴道张开器暴露宫颈，将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈，慢慢取出宫颈刷，将其放入标有对应患者编号的取样管中，取样管内已加有专用细胞保存液，拧紧瓶盖，马上送检标本。不能马上送检者于4℃保存，2周内进行检测。

1.2 主要仪器及试剂

PCR扩增仪、凯普医用核酸分子快速杂交仪、潮州凯普生物化学有限公司人乳头状瘤病毒分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法)。

1.3 研究方法

1.3.1 HPV-DNA的提取

取500μL临床样本，14000 rmp离心1 min，去上清液，沉淀中加入400μL溶液Ⅰ(事先在45℃水浴中预热)，振荡混匀，100℃加热15 min；点动离心，加入400μL溶液Ⅱ，振荡混匀后，室温下放置2min,14000 rmp离心5 min，去上清；室温放置2 min，加入60μL溶液Ⅲ充分溶解，静置10 min,14000 rmp离心1min，得待测HPV-DNA悬液。

1.3.2 HPV-DNA的扩增及杂交

取PCR反应管若干，分别加入23.25μL PCRMix、0.75μL Taq酶和1μL HPV-DNA悬液，混匀后6000 r/min瞬间(3～5 s)离心，将各反应管放入PCR仪，按下列条件扩增：95℃9 min预变性，然后按95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s扩增，共40个循环，最后72℃延伸5 min。杂交前试剂先配置，然后采用凯普杂交仪杂交，显色反应结束后，用吸水纸吸去膜条表面多余水分，根据显色情况判断HPV感染情况及其亚型。

1.4 质量控制

每张膜条含Biotin对照点和内对照点(IC),Biotin点反映酶与显色液反应，在检测中为阳性，IC点为质控模板DNA探针，若扩增反应体系中没有抑制因素，IC点出现。

1.5 统计学分析

应用SPSS 17.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV基因型感染分布情况

8387例标本共检出20种亚型(35型未检出)，总感染率为13.85%(1162/8387)，高危型检出率为12.56%(1053/8387)，低危型检出率为1.30%(109/8387)。检出率较高者分别为:低危型6型5.82%，高危型16型4.30%、58型2.22%、52型2.49%、18型0.98%、53型0.95%。其中，46～55岁的16型发病率达10.63%,>55岁的16型发病率为9.06%。

2.2 HPV高危型主要型别的年龄分布情况，见附表。

注：*与该型其他年龄段感染率相比，P<0.05

16型，18型，53型36～45岁的发病率均较其他年龄组低，呈现两边高，中间低趋势；18型，52型，53型，58型的≤25岁的发病率均较其他年龄组高。将不同年龄分组比较，发现16型、53型、58型的总分组比较，P<0.05，差异具有统计学意义。其中，16型中的36～45岁的发病率与其他年龄组比较，P<0.05，差异具有统计学意义，可以认为36～45岁的发病率与其他年龄组的发病率不同；53型、58型中的≤25岁的发病率与其他年龄组比较，P﹤0.05，差异具有统计学意义。另外，16型中的≤25岁和26～35岁分别于其他年龄组比较，P<0.05，差异也具有统计学意义，但两组之间比较P=0.513，差异没有统计学意义。表明36～45岁的妇女是HPV16型感染的高危人群，≤25岁的妇女是HPV53型、58型感染的高危人群，人群中应加强两个年龄组的HPV感染的筛查。

2.3 HPV基因型多重感染情况

HPV感染阳性的1162例中以单基因型感染为主(988例，占85.03%)，双重感染(同时感染两种基因型)146例，占12.56%，三重感染21例，占1.81%，四重感染5例，占0.43%，六重感染2例，占0.17%。未检测到五重感染的。

3 讨论

近年来，HPV病毒感染的患者在不断增加，严重危害社会的健康。HPV病毒能引起细胞变异，并可导致皮肤产生寻常疣、生殖器官产生尖锐湿疣。HPV病毒高危型(16型、18型)感染是导致宫颈癌的高危因素。而宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌，在全球女性恶性肿瘤中占第二位[1]。梅州地处偏远山区，医疗条件相对落后，探讨HPV感染基因型与年龄分布的关系，有助于发现高危感染人群，有针对地筛查易感人群，预防宫颈癌等难治性疾病的发生。

HPV总感染率为13.85%，高危型检出率为12.56%，低危型检出率为1.30%，与国内报道的基本一致，但有一定的区域特征[2,3,4]。说明本研究采用的基因扩增及反向点导流杂交技术能准确检测出HPV并分型，是HPV-DNA分析较理想的一种方法。有文献报道HPV亚型分布具有地域性，HPV16型在国内外较多见[5]。本研究探讨的梅州地区HPV16型的占4.30%，仅次于6型的5.82%，但6型属于低危型，在高危型中，除16型检出率最高外，58型、52型、18型、53型的检出率也较高。均符合亚洲地区高HPV流行状况。综上，基因扩增及导流杂交法可准确进行HPV基因分型，且快速、敏感，是较理想的宫颈癌筛查方法。

HPV感染率高低主要取决于人群的年龄和性行为习惯。生殖道HPV在有性活动的人群中普遍存在，在有性生活的女性中,至少有75%将在人生中的某个时间感染HPV，染HPV后绝大多数人可以自然消退[6]。本研究HPV感染具有的年龄分布特征，可能因为≤25岁的年轻人思想较为开放，婚前性行为活跃，导致HPV感染概率上升。>55岁的妇女，虽然性生活减少，年轻时感染的HPV可能已经被机体消除，但机体抵抗力下降可能是导致HPV感染概率上升较主要的因素。所以应加强≤25岁和>55岁的妇女的筛查，并对HPV感染的女性进行随访，以便及早发现高危型HPV的感染，及早进行治疗，防止病情向宫颈癌等方向恶化。

本研究人群为医院门诊体检患者及部分妇科住院患者，HPV是导致官颈癌及癌前病变的主要原因之一。对宫颈疾病患者进行HPV亚型检测及流行病学调查，对本地区宫颈癌的早期预防、治疗及治疗效果监测都有重要意义。

参考文献

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[5]郑英,王春萍,刘玉玲,等.宫颈/阴道液基细胞学[J].郑州:河南科学技术出版社,2009:43.

高危人乳头状瘤病毒 篇6

1 材料

1.1 标本来源

收集2007年12月—2009年12月厦门及周边地区18～65岁妇女752例宫颈细胞标本。

1.2 仪器

MastereyelegadientPCR仪(德国Eppendorf公司),荧光定量PCR分析仪(AB 17500)(美国应用生物系统公司)。

1.3 试剂

人乳头瘤状病毒(16/18型)核酸扩增荧光检测试剂盒(深圳匹基生物工程股份有限公司),HPV 16、18型引物序列[6]分别为:上游引物:5'-TACAGGTTCTAAAACGAAAGT-3';5'-TGCATGTTTTAAAACGAAAGT-3'。下游引物:5'-TTCCACTTCAGTATTGCCATA-3';5'-TTCCACTTCAGAACAGCCATA-3'。荧光探针序列为:FAM-5'-ATAATCTCCTTTTTGCAGCTCTACTTTGTTTTT-3'TAMRA;TET-5'-CCGCCTTTTTGCCTTTTTCTGCCCACTATT-3'TAMRA。

2 方法

2.1 标本采集及细胞DNA的提取

细胞学检查采用传统涂片方法,用刮棒刮取宫颈细胞直接涂片。细胞学检查按照The Bethesda System(TBS)分类,对细胞学检查异常病例,用体积约1.5 cm×0.8 cm×0.8 cm无菌棉签插入宫颈口,均匀用力旋转3周将棉签放入装有生理盐水的无菌试管内震荡洗涤,弃棉签,离心沉淀,用沉淀的细胞提取DNA。随后在阴道镜指引下行活检。

2.2 检测与诊断标准

宫颈组织病理学诊断分为:正常或慢性炎症;CIN按轻、中、重分为3级:CINⅠ(相当于宫颈轻度不典型增生)、CINⅡ(相当于宫颈中度不典型增生)和CINⅢ(相当于宫颈重度不典型增生和原位癌)。

2.3 FQ-PCRHPV-16、18DNA定量检测

2.3.1 取试剂盒中HPV 16、HPV 18阳性标准品(浓度为1×107copies/ml),按梯度稀释成1×107、1×106、1×105、1×104copies/ml。20 μl反应体系包括:17.8 μ1 HPV 16、HPV 18反应混合液(含羧基荧光素(FAM)标记的引物及三磷酸脱氧核糖核苷(dNTP)、MgCl2等),0.2 μl TaqDNA聚合酶,0.06 μl尿嘧啶糖苷酶(UCG)(作用:消除反应体系中可能混有的污染),2 μl DNA模板。反应条件为:37 ℃5 min,94 ℃ 1 min;95 ℃ 5 s,60 ℃ 40 s,40次反应循环。每批标本均设阴性对照,阴性对照品为试剂盒提供。

2.3.2 测定各原发灶病毒载量,按照上述反应体系和反映条件测定各标本中的病毒载量。各标本重复测定3次得到平均Ct值,并根据标准曲线推算出各标本的病毒平均拷贝数。

2.3.3 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件,采用χ2检验和Spearman秩相关统计分析结果。

3 结果

3.1 各组感染HPV16及病毒载量检测结果

健康检查者及宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者感染HPV 16阳性率分别为0.63%、25.8%、30.6%、60.7%、71%;χ2检验和Spearman秩相关统计分析随着宫颈病情的进展HPV 16型阳性率逐渐升高(P<0.01),感染率和病毒载量之间有正相关关系(rs=1,P<0.01)(表1) 。

3.2 各组感染HPV18及病毒载量检测结果

健康检查者以及宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者感染HPV 18阳性率分别为0.41%、7.8%、14.6%、10.7%、7.7%。经χ2检验和Spearman秩相关统计分析显示,宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者HPV 18阳性率均比健康体检患者明显增加(P<0.01),宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者HPV 18阳性率差别无统计学意义(P>0.05),感染率和病毒载量之间无正相

4 讨论

目前人乳头状瘤病毒的感染有3个方面:临床感染(有明显湿疣皮损可经肉眼判断的感染,容易识别),亚临床人乳头状瘤病毒感染(需借助醋酸白试验与放大技术相结合可以识别,如阴道镜检查),潜伏性人乳头状瘤病毒。由于潜伏性HPV感染缺乏形态学变化,只有DNA检测是惟一的诊断方法,目前对于HPVDNA的检测主要是通过FQ-PCR技术[7],它不仅从根本上解决了PCR扩增产物污染和不能定量的问题,而且通过探针杂交进一步提高了检测人乳头状瘤病毒特异性,是灵敏、快速、准确的检测方法,常用于检测HPV 16、18型感染,特别是对高危人群的筛查,是目前临床上常用的宫颈病变检查方法。

本实验采用FQ-PCR技术对752例标本HPV 16、18型DNA进行检测,结果显示,健康检查者以及宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者感染HPV 16、18阳性率均比健康检查者明显增加(P<0.01,P<0.05),并且随着宫颈病变的进展HPV 16DNA病毒拷贝数逐渐增加,经过秩和检验二者呈显著正相关关系(rs=1,P<0.01)。这说明宫颈病变患者比正常健康检查者感染HPV 16、18型的概率明显增加,提示HPV 16、18与宫颈病变的发生密切相关,是宫颈癌变的高危因素;其中HPV 16型DNA在宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级细胞内高拷贝数逐渐增加,说明HPV 16型可能是导致宫颈不典型增生向宫颈癌转化的一个至关重要的因素。

由于宫颈癌是子宫颈不典型增生(轻、中、重)—原位癌—早期浸润癌—浸润癌的连续发展过程,且目前分子生物学已证实大部分HPV感染是一过性的,约90%的HPV阳性者在4～6个月会自动转阴,只有高危型HPV持续感染后病毒DNA整合到宿主细胞DNA中,使其基因表达和蛋白功能发生改变,进而才会导致宫颈肿瘤的发生。因此对健康人群用FQ-PCR的方法对HPV 16、18进行普查,对于宫颈癌的筛查、癌前病变的预防和转归,病情进展的评价方面都具有重要的意义。

摘要：目的 探讨人乳头状瘤病毒(humanpa pillomavirus,HPV)16、18型在宫颈病变进展中表达意义。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real timefluorescence qaantitativePCR,PQ-PCR)分别对健康检查妇女480例、宫颈炎116例、宫颈上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelial aeoplasia,CIN)Ⅰ级(轻度宫颈不典型增生)48例、CINⅡ级(中度宫颈不典型增生)56例、CINⅢ级(重度宫颈不典型增生及宫颈原位癌)52例进行HPV16、18型的定性、定量检测。结果 健康检查者以及宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者感染HPV16阳性率分别为0.63%、25.8%、30.6%、60.7%、71%,HPV16型阳性标本平均拷贝数分别为6.3×102、4.1×104、8.9×105、5.6×106、3.8×107;随着宫颈病情的进展HPV16型阳性率逐渐升高(P<0.01),感染率和病毒载量之间有正相关关系(rs=1,P<0.01);HPV18阳性率分别为0.41%、7.8%、14.6%、10.7%、7.7%,HPV18型阳性标本平均拷贝数分别为1.2×103、4.6×104、5.4×104、3.6×103、6.9×104,宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者HPV18阳性率均比健康检查者明显增加(P<0.01),宫颈炎、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级患者HPV18阳性率差别无统计学意义(P>0.05),感染率和病毒载量之间无正相关关系(rs=0,P>0.05)。结论 宫颈病变程度与HPV16、18型感染密切相关,且宫颈病情进展和HPV16型病毒DNA负荷呈正相关。

关键词：宫颈病变,人乳头状瘤病毒,病毒载量

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高危人乳头状瘤病毒 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

自2006年1月至2008年12月, 遂川县人民医院共有163例患者经病理组织学诊断为CIN并HPV感染。其中CINⅠ91例、CINⅡ56例、CINⅢ16例。年龄21～68岁 (其中21～30岁41例、31～40岁91例、41～50岁26例、50岁以上5例) , 平均36.5岁。产次0～7次, 平均1.8次。

1.2 方法

对随机前来遂川县人民医院门诊妇科或皮肤性病科就诊的有性生活史的妇女, 进行常规妇检, 对宫颈涂片细胞异常或有临床可疑症状者, 进行阴道镜检查, 经阴道镜在宫颈出现异常转化区或有可疑病变处进行多点活检, 将取出的病理组织固定于10%多聚甲醛溶液中送检, 由专职病理学医师将固定的标本用石蜡包埋, 制成4μm厚的切片进行病理组织学诊断。根据细胞异型程度和上皮累及范围, 病理学将CIN分级为CINⅠ (轻度不典型增生) 、CINⅡ (中度不典型增生) 、CINⅢ (重度不典型增生和原位癌) [3]。然后采用原位杂交检测法对CIN阳性病例进行HPV6/11、16/18 DNA分型, 以半定量判定结果。所有阳性病例均经江西省妇幼保健院的资深病理学专家证实。

1.3 统计学方法

两样本率的比较, 采用u检验, P<0.05有显著差异。

2 结果

163例阳性患者中, HPV6/11 (+) 、16/18 (-) 者58例, 占35.6%;HPV16/18 (+) 、6/11 (-) 者24例, 占14.72%;HPV6/11 (+) 、16/18 (+) 同时存在的75例, 占46%;HPV6/11 (-) 、16/18 (-) 的其他亚型感染6例, 占3.68%。HPV6/11、16/18亚型在各年龄段的分布情况和在CIN各级中的检出率详见列表1、表2。

3 讨论

3.1 HPV在人群中普遍存在, 每个妇女一生中都有可能暴露于一种或多种HPV亚型, 文献报道正常育龄妇女HPV感染率为5%～50%, 宫颈HPV感染的高峰年龄为15～20岁, >30岁的妇女HPV感染率下降[4]。而本组资料的发病高峰年龄为30～40岁, 说明从初次感染HPV到上皮发生改变要经过10～25年漫长过程。而宫颈癌的发病高峰年龄为45～50岁, 相差5～15年。若在此时间内及时诊断, 正确处理, 可以阻断癌变发生, 有效降低宫颈癌的发病率。从表1中看出, HPV6/11感染致CIN在每个年龄段均有发生, 但主要集中在21～40岁的妇女, 占86.21%。

3.2 HPV是一种无包膜的小DNA病毒, 具有强烈嗜上皮性, 高度组织和宿主特异性, 可致人类皮肤和黏膜异常增生。HPV6/11属低危型, 感染后常引起尖锐湿疣等性传播疾病, 但反复持续感染可导致CIN的发生。表2中数据表明, HPV6/11在CIN每个级别中都存在。在CINⅠ中, HPV6/11的检出率明显高于HPV16/18, 二者比较差异显著 (P<0.05) ;而在CINⅡ中, HPV6/11与HPV16/18两者检出率无显著差异 (P>0.05) ;在CINⅢ中, 75%是由HPV6/11、16/18混合感染导致, 单一HPV16/18感染, 只占18.75%, 单一HPV6/11也有1例存在, 占6.25%。HPV6/11、16/18混合感染与单一HPV16/18感染在CIN各级中检出率比较, 经u检验 (u分别为2.106、2.781、6.82;P<0.05) 均有显著差异, 且级别越高, 差异越显著。上述统计结果与以往定义的高、中、低危HPV亚型感染所致病变类型有所差异。HPV6/11虽为低危型, 但感染后可导致多数CINⅠ、部分CINⅡ和个别CINⅢ, 当HPV6/11与HPV16/18混合感染时, 其致癌风险较单一HPV16/18感染增加3～4倍。这反映出无论哪类HPV感染只要是高病毒负荷或持续反复感染或交叉感染, 都有可能是CIN或宫颈癌的致病因素, 混合感染更为主要致癌因素。

总之, 由HPV6/11感染导致CIN的发病风险不容忽视, 尤其是长期反复发作的年龄在21～40岁的持续感染者, 应积极治疗, 定期复查。主张凡患过外生殖器尖锐湿疣等良性病变的妇女, 每半年进行一次宫颈涂片细胞学检查, 有条件的采用免疫组织化学 (PCR技术) 、杂交捕获二代 (HC-Ⅱ) 等手段检测HPV DNA, 细胞异常或HPV阳性者阴道镜下多点病理活检, 以早发现、早诊断、早治疗CIN, 阻断宫颈癌变的发生。

参考文献

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