病原学检测分析

病原学检测分析（精选11篇）

病原学检测分析 篇1

呼吸道细菌感染性疾病是我国常见病和病死率较高的感染性疾病[1],了解呼吸道疾病的感染菌谱,有利于临床的诊断和治疗。为此,我们对1 125例呼吸道疾病的细菌感染菌谱进行了分析。现报道如下:

1 临床资料

1.1 一般资料

随机观察2006年1月～2007年11月,本院呼吸内科的呼吸道细菌感染性疾病患者1 125例。其中,男733例、女392例;年龄12～81岁,年龄<60岁的380例,年龄≥60岁的745例。临床诊断为肺炎144例、肺气肿245例、肺原性心脏病288例、慢性气管炎347例、肺肿瘤101例。

1.2 方法

1.2.1 痰液标本的留取

要求患者在早晨起床后反复漱口,然后深咳痰液于无菌标本容器内,2 h内送检。痰液标本合格判断标准[2]:痰液直接涂片革兰染色,要求白细胞≥25个/低倍视野,上皮细胞≤10个/低倍视野,不合格标本重新送检。

1.2.2 细菌培养方法

接到痰液标本后,立即以常规方法接种于血平皿培养基、麦康凯培养基、沙保罗培养基、巧克力培养基上。血平皿培养基、麦康凯培养基在37℃培养24～48 h;沙保罗培养基在35℃培养24～72 h;巧克力培养基在二氧化碳环境中35℃培养24～72 h。

1.2.3 细菌鉴定

以分纯的细菌菌落,利用美国德灵公司提供的Micro Scan自动细菌鉴定系统,革兰阳性菌接种于Pos 20鉴定板上,革兰阴性菌接种于Neg 31鉴定板上,37℃培养24～48 h;真菌接种于Yeast ID鉴定板上,35℃培养24～48 h,系统内读数鉴定。

1.2.4 质控菌株

由卫生部临检中心提供的ATCC25922大肠埃希菌菌株、ATCC29213金黄色葡萄球菌菌株、ATCC60193白色念珠菌菌株。

1.3 统计学处理

采用SPSS10.0统计软件,进行χ2检验,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 细菌感染分布

呼吸道感染性疾病痰液细菌培养阳性1125例,革兰阳性球菌91例,感染率为8.1%;革兰阴性杆菌731例,感染率为65.0%;真菌303例,感染率为26.9%。细菌种属之间有明显的差异(P<0.01)。其中革兰阳性球菌的金黄色葡萄球菌、革兰阴性杆菌的铜绿假单胞菌和鲍曼/醋酸钙联合不动杆菌、真菌的白色念珠菌感染率最高,明显高于其他菌种(P<0.01)。

2.2 细菌感染与年龄的相关性

呼吸道感染性疾病痰液细菌培养阳性1 125例,年龄<60岁的380例,感染者为33.8%;其中革兰阳性球菌22例,感染率为5.8%;革兰阴性杆菌276例,感染率为72.6%;真菌82例,感染率为21.6%。年龄≥60岁的745例,感染率为66.2%,其中革兰阳性球菌69例,感染率为9.1%;革兰阴性杆菌455例,感染率为61.1%;真菌221例,感染率为29.7%。年龄<60岁的不同菌种感染率,革兰阳性球菌的肺炎链球菌、真菌的热带念珠菌明显高于年龄≥60岁的感染率(P<0.01);年龄≥60岁的不同菌种感染率,革兰阳性球菌的屎肠球菌和化脓性链球菌A群、真菌的白色念珠菌明显高于年龄<60岁的感染率(P<0.01)。其他菌种与年龄无相关性(P>0.05)。见表1～3。

2.3 细菌感染与性别的相关性

呼吸道感染性疾病痰液细菌培养阳性1 125例,男733例、感染者为65.2%。其中,革兰阳性球菌67例、感染率为9.1%,革兰阴性杆菌499例,感染率为68.1%;真菌167例,感染率为22.8%。女392例,其中,革兰阳性球菌24例,感染率为6.1%;革兰阴性杆菌232例,感染率为59.2%;真菌136例,感染率为34.7%。男性不同菌种感染率,革兰阳性球菌的溶血葡萄球菌和肺炎链球菌、革兰阴性杆菌的粘质沙雷菌和产碱不动杆菌、真菌的热带念珠菌明显高于女性的感染率(P<0.05);女性的不同菌种感染率,革兰阳性球菌的化脓性链球菌A群、革兰阴性杆菌的短稳杆菌、真菌的白色念珠菌和克柔念珠菌明显高于男性的感染率(P<0.05)。其他菌种与性别无相关性(P>0.05)。见表1～3。

3 讨论

从细菌耐药性的发展史可以看出,在某种新的抗生素应用之后,就有一批新的耐药菌株出现,抗生素的不合理应用就会加快这一过程的发展。细菌培养和药敏试验是临床治疗的关键,依据细菌培养和药敏结果,选择敏感、高效抗生素进行临床治疗,可避免抗生素的滥用、延长抗生素的应用寿命、提高抗生素的治疗效果、减少抗生素对机体的不良反应。因此,了解呼吸道疾病细菌感染菌谱,是合理应用抗生素的主要手段。

本文结果显示,老年人、男性感染比例最高,主要感染菌种为铜绿假单胞菌、鲍曼/醋酸钙联合不动杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌,以革兰阴性杆菌感染为主。年龄<60岁者优于老年人的感染菌种为肺炎链球菌、热带念珠菌,老年人优于年龄<60岁的感染菌种为屎肠球菌和化脓性链球菌A群、白色念珠菌。男性优于女性的感染菌种为溶血葡萄球菌、肺炎链球菌、粘质沙雷菌、产碱不动杆菌、热带念珠菌,女性优于男性的感染菌种为化脓性链球菌A群、短稳杆菌、白色念珠菌、克柔念珠菌。因此,呼吸道疾病的细菌感染与年龄和性别具有一定的相关。

从本文结果还可以看出,真菌感染高达26.9%,以白色念珠菌感染为主,已经明显超过革兰阳性菌的感染比率,应引起临床的高度重视。真菌感染可使病情进一步加重,给临床治疗造成极大的困难,特别是白色念珠菌能抑制细胞免疫,并具有较强的致病性,可使患者病情急剧恶化甚至致命[2]。因此,细菌培养监测呼吸道感染菌谱,合理应用抗生素是预防真菌感染的关键,尤其是对年老多病、身体虚弱、慢性疾病、放化疗患者,更应慎重选择药物[3,4]。同时严格掌握糖皮质激素的使用指征,加强基础护理,注意病房和患者的个人卫生,完善消毒隔离制度,减少院内交叉感染,也是预防真菌感染的重要措施。

摘要：目的探讨呼吸道细菌感染性疾病的菌种分布,为临床有针对性地选择抗生素治疗提供依据。方法通过对呼吸道感染性疾病患者的痰液细菌培养,分析不同菌种感染分布特点。结果在1125例呼吸道细菌感染者中,年龄<60岁的占33.8%,年龄≥60岁的占66.2%;男性占65.2%,女性占34.8%。不同菌种感染率分别为革兰阳性球菌8.1%、革兰阴性杆菌65.0%、真菌26.9%。结论呼吸道疾病细菌感染不同菌种与年龄和性别具有一定的相关性。

关键词：呼吸道,细菌,感染

参考文献

[1]彭少华,李艳,李从荣,主编.细菌感染实验诊断与分析[M].北京:人民军医出版社,2006:107.[1]PENG SH,LI Y,LI CR,editor in chief.Diagnosis and Analysis of Experiment in Bacterial Infection[M].Beijing:Publisher of People's Military Doctor,2006:107.Chinese

[2]叶应妩,王毓三,主编.全国临床检验操作规程[M].南京:东南大学出版社,2006:744.[2]YE YF,WANG YS,editor in chief.National Guide to Clinical Laboratory Procedures[M].Nanjing:Publisher of Southeast Uni-versity,2006:744.Chinese

[3]蒋洪敏,韦超凡,陈利玉,等.白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡[J].中华微生物和免疫学杂志,1999,19(6):453455.[3]JIANG HM,WEI CF,CHEN LY,et al.Induction of thymocytes apoptosis in mouse infected with Candida albicans[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,1999,19(6):453455.Chinese

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病原学检测分析 篇2

本卷共分为1大题50小题，作答时间为180分钟，总分100分，60分及格。

一、单项选择题（共50题，每题2分。每题的备选项中，只有一个最符合题意）

1.甲氧苄啶的抗菌机制是

A.破坏细菌细胞壁

B.抑制二氢蝶酸合成酶

C.抑制二氢叶酸还原酶

D.抑制DNA螺旋酶

E.改变细菌细胞浆膜通透性

正确答案:C

2.社会医学的性质是(C)

A 自然科学

B 社会科学

C 交叉学科

D 基础学科

3.高山病的诊断主要依据。

A.登山史

B.临床表现

C.X线 D.实验室检查

E.以上都是

4.硝酸酯类药物主要通过产生哪种物质发挥舒张血管的药理作用

A.前列腺素

B.缓激肽

C.氢离子

D.一氧化氮

E.组胺

正确答案:D

5.维拉帕米对下列哪类心律失常疗效最好

A.房室传导阻滞

B.阵发性室上性心动过速

C.强心苷中毒所致心律失常

D.室性心动过速

E.室性期前收缩

正确答案:B

6.环境卫生监督的理论依据为()

A.国家和地方政府的相关法律法规

B.造成人群危害的严重程度 C.主管部门的行政命令

D.执法人员的相关知识

E.环境卫生学研究提供的卫生基准和技术规范

7.下列哪项属于概率抽样(B)

A 偶遇抽样 B 系统抽样 C 立意抽样 D 雪球抽样

8.根据三级预防原则，劳动卫生工作的一级预防工作应进行

A.现场劳动卫生学调查

B.现场环境监测

C.就业前健康检查

D.健康教育

E.改善劳动条件

[正确答案]：C

9.甲氧苄啶与磺胺甲噁唑合用的原因是

A.促进分布

B.促进吸收

C.双重阻断敏感菌的叶酸代谢

D.抗菌谱相似

E.减轻不良反应

正确答案:C

10.对阿昔洛韦不敏感的病毒是

A.单纯疱疹病毒

B.带状疱疹病毒

C.乙型肝炎病毒

D.牛痘病毒

E.生殖器疱疹病毒

正确答案:D

11.DNA复制时，不需要

A.DNA连接酶

B.DNA聚合酶

C.拓扑异物酶

D.引物酶

E.限制性内切酶

12.阵发性室上性心动过速急性发作的首选药是

A.普罗帕酮

B.维拉帕米

C.利多卡因

D.苯妥英钠

E.恩卡尼 正确答案:B

13.下列何药可诱发支气管哮喘

A.甲基多巴

B.利舍平

C.呱乙啶

D.普萘洛尔

E.硝苯地平

正确答案:D

14.以下哪项不是社会医学研究的特点(A)

A 研究内容的单一性

B 研究因素的复杂性

C 研究具有实践性

D 研究具有时代性

15.社会医学研究工具(问卷或量表)的效度评价不包括(B)A 表面效度 B质量效度 C 结构效度 D 内容效度

16.硝酸酯类的临床应用正确的是

A.仅对稳定型心绞痛有效

B.不宜用于变异型心绞痛

C.不宜用于不稳定型心绞痛

D.不宜用于急性心肌梗死

E.可用于治疗和预防各种类型的心绞痛

正确答案:E

17.原生环境是指()

A.受动物活动影响的天然环境

B.未受人类活动影响的天然环境

C.无动植物生存而仅有少量微生物存在的环境

D.受人为活动影响的环境

E.以人类为中心的环境

18.有关反转录，错误的论述为

A.是以RNA为模板合成DNA的过程

B.反转录酶是从致癌RNA病毒中所发现的

C.对中心法则提出了补充和修正

D.是以RNA为模板合成RNA的过程

E.反转录酶可以催化DNA指导的DNA合成反应

19.易引起血癌的有机溶剂是。

A.甲苯、二甲苯

B.苯

C.三硝基甲苯

D.苯胺、联苯胺

E.苯二胺、硝基氯苯

20.定量研究与定性研究的区别叙述正确的是(B)

A 在实际研究中，定量研究和定性研究经常结合在一起使用

B 定量研究资料可以用统计方法处理和分析，定性研究资料则不能

C 定量研究适用于大样本，定性研究适用于小样本

D 定量研究适用于任何研究，而定性研究只适用于社会科学方面的研究

21.服用磺胺类药物时加服碳酸氢钠的目的是

A.增强抗菌效果

B.加快药物吸收

C.防止过敏反应

D.防止药物排泄过快

E.碱化尿液，增加磺胺药的溶解性

正确答案:E

22.主要用于根治良性疟和阻断传播的药物是

A.伯氨喹

B.氯喹

C.奎宁

D.乙胺丁醇

E.青蒿素

正确答案:A

23.关于万古霉素，描述错误的是

A.可用于耐青霉素的金黄色葡萄球菌引起的严重感染

B.可引起伪膜性肠炎

C.作用机制是阻碍细菌细胞壁的合成

D.属于快速杀菌药

E.与其他抗生素间无交叉耐药性

正确答案:B

24.医学模式的演变经历了以下几个阶段的历史演变(A)

A、神灵主义—自然哲学—机械论—生物医学—现代医学模式

B、自然哲学—机械论—生物医学—现代医学模式

C、神灵主义—机械论—自然哲学—生物医学—现代医学模式

D、神灵主义—自然哲学—机械论—生物医学模式

25.社会医学研究工具(问卷或量表)的效度评价不包括(B)A 表面效度 B质量效度 C 结构效度 D 内容效度

26.治疗溃疡性结肠炎宜选用

A.磺胺异噁唑 B.磺胺嘧啶

C.磺胺多辛

D.柳氮磺吡啶

E.磺胺甲氧嘧啶

正确答案:D

27.有关DNA复制过程引物酶的论述，错误的是

A.引物酶是一种特殊的DNA聚合酶

B.引物酶是一种特殊的RNA聚合酶

C.催化合成的引物与DNA模板是互补的

D.催化合成一小段引物

E.核苷酸的合成方向是5’→3’

28.以下哪项不是定量研究的特点(C)

A 标准化程度较高 B 可检验性强 C 对研究问题的深层次探索性好 D 精确化较高

29.关于强心苷正性肌力作用的描述正确的是

A.对正常人和心衰病人心脏都有正性肌力作用

B.只对心衰病人有正性肌力作用，对正常人无此作用

C.只对正常人有正性肌力作用，对心衰病人无此作用

D.强心作用可被β受体阻断剂所取消

E.表现为心肌收缩最高张力降低 正确答案:A

30.对区域全市性大气进行监测时，一般常采用的指标是(b)。

A.Pb、CO、NO2

B.SO2、IP、TSP

C.SO2、NOX、CO

D.SO2、BaP、NOX

E.CI、SO2、BaP

31.下列不作为社会医学研究任务的是(D)

A 研究社会卫生状况、特征及变动趋势

B 研究高危人群的健康状况、特征

C 找出危害人群健康的主要疾病及与社会因素的关系

D 研究改善健康、防病、治病的技术措施

32.生命质量评价目前主要应用的领域不包括(D)

A、人群健康状况的测定与评价

B、慢性病患者健康评价与治疗决策

C、药效评价和卫生管理决策

D、基础病理研究

33.大多数抗癌药共有的不良反应是 A.高尿酸症

B.肾脏损害

C.骨髓抑制

D.肺纤维化

E.心肌损害

正确答案:C

34.用于抗艾滋病病毒的药物是

A.利巴韦林

B.扎那米韦

C.齐多夫定

D.阿昔洛韦

E.碘苷

正确答案:C解题思路：本题考查抗病毒药物的临床应用。齐多夫定是美国FDA第一个批准用于艾滋病病毒感染的药物，利巴韦林即病毒唑，为广谱抗病毒

药，阿昔洛韦对疱疹病毒疗效突出，扎那米韦是流感病毒神经氨酸酶抑制剂，碘苷为人工合成的抗病毒药，局部用于治疗眼部或皮肤疱疹病毒和牛痘病毒感

染故选C。

35.下列哪项不是反映疾病严重程度的指标(B)

A 两周卧床率 B 两周患病率 C 两周患病天数 D 两周休学率

36.关于随机应答技术，下列叙述不正确的是(C)A 随机应答技术通常是涉及隐私性问题常用的一种调查方法

B 通过随机化处理可以估计出所有被调查者中属于某种情况的比例

C 随机化装置中的黑白球的比例要正好等于1：1

D 它是根据概率理论进行推算的37.急性心肌梗死所致的室性心律失常宜用

A.丙吡胺

B.胺碘酮

C.维拉帕米

D.利多卡因

E.普萘洛尔

正确答案:D

38.患者自述，他工作场所条件很差，无防尘设施，此工人最可能患何种类型尘肺

A.晚发性矽肺

B.矽肺

C.煤肺

D.尘肺

E.速发性矽肺

[正确答案]：E

解题思路：由于持续吸入高浓度粉尘，而无防护条件，在接尘2年内发病，称速发性矽肺。

39.以下哪种现场调查是最为常用的方式(B)

A 面谈法 B 信函调查法 C 电话调查法 D 集中调查法

40.关于就诊率下列叙述正确的是(A)

A 两周就诊率是反映居民对医疗卫生服务利用情况的指标

B 两周就诊率是指调查前两周内就诊的人(次)数与患病人数的比率

C 两周患者就诊率是指调查前两周内就诊的人(次)数与调查人数的比率

D 两周患者未就诊率是指调查前两周内未就诊的人(次)数与调查人数的比率

41.高温车间是指车间内气温比室外夏季设计通风计算温度高2℃以上。关于随机抽样，下面哪一个正确

A.随机抽样即随意抽取个体

B.抽样时精心挑选个体，能使样本更好代表总体

C.抽样时应使总体中的所有个体有同等机会被抽取

D.抽样时样本量越大越好

E.严格执行随机抽样，可以避免抽样误差

[正确答案]：C

解题思路：随机抽样的核心是要使总体中的所有个体都有同等机会被抽取，而A、B、C、D、E选项均为干扰项。

42.对硝酸甘油药理作用描述正确的是

A.仅对小动脉有扩张作用

B.对全身小静脉和小动脉都有扩张作用 C.对冠状动脉和侧支血管无扩张作用

D.对阻力血管有明显的扩张作用

E.可引起支气管、胆道平滑肌收缩

正确答案:B

43.有关可乐定的叙述错误的是

A.中枢性α受体激动药

B.中枢性α受体阻断药

C.可用于偏头痛和开角型青光眼的治疗

D.静脉注射时可有短暂的升压

E.降压作用主要是由于心排出量和外周阻力降低

正确答案:B

44.原形从肾脏排泄率最高的喹诺酮类药物是

A.诺氧沙星

B.环丙沙星

C.氟罗沙星

D.氧氟沙星

E.依诺沙星

正确答案:D

45.进行大气样品采集时，用多孔玻板吸收管主要适用于哪种物质(e)。A.烟

B.粉尘

C.总悬浮颗粒物

D.可吸入颗粒物

E.气态、蒸气态和雾态物质

46.下面哪一个量表是目前被普遍认可的生命质量测评量表(A)

A 健康调查量表 B 健康良好状态指数 C 癌症病人生活功能指数 D 疾病影响量表

47.硝酸甘油控制心绞痛急性发作的给药方法

A.口服给药

B.肌内注射

C.舌下含服

D.静脉注射

E.皮下注射

正确答案:C

48.生命质量评价目前主要应用的领域不包括(D)

A、人群健康状况的测定与评价

B、慢性病患者健康评价与治疗决策

C、药效评价和卫生管理决策

D、基础病理研究

49.下列哪项不是定性研究的特点(A)

A 定性研究的结果可以用概率统计分析 B 定性研究需要较长时间与研究对象接触

C 定性研究注重的是事物发展的过程 D 定性研究结果一般不能外推

50.体外抗菌活性最强的喹诺酮类药物是

A.诺氟沙星

B.氧氟沙星

C.环丙沙星

D.洛美沙星

E.司帕沙星

1起猩红热疫情的病原学检测 篇3

110032辽宁沈阳市皇姑区疾病预防控制

中心



doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.02.279

猩紅热是一种能够产生红疹毒素(现在称为链球菌致热外毒素；SPE)的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。临床特征为发热、咽峡炎、全身弥漫性鲜红色皮疹和疹退后明显的脱屑，少数患者由于变态反应而出现心、肾损害。此病在幼童中多见。下面把2010年发生的1起猩红热疫情的检测过程简介如下。

病历资料

2010年5月16日某托幼机构发生1起猩红热疫情，先后有4名儿童发病，症状为起病急，发热，咽峡炎，草莓舌，发病1～2天内出现猩红热样皮疹，皮肤呈弥漫性充血潮红，其间有针尖大小猩红色红点疹，压之褪色，皮肤皱褶处有密集的红点疹，呈皮折红线，同时有杨梅舌和口周苍白，2～5天后皮疹消退，疹退后皮肤有脱屑或脱皮。

实验室检测：①采集咽拭子、伤口炎性分泌物等标本直接划线接种5%～10%羊血琼脂平板进行分离培养，36℃±1℃培养过夜，观察菌落形态及溶血现象，形成灰白色、透明或不透明、表面光滑、有乳光、直径0.5～0.75mm、圆形突起的小菌落，菌落周围形成2～4mm宽、界限分明、完全透明的溶血环。涂片染色为链状排列的革兰阳性球菌，圆形或卵圆形，链状排列，长短不一。②杆菌肽敏感试验：在血琼脂平板上用无菌棉棒将被检菌的肉汤培养物进行涂抹接种后，用无菌镊子取杆菌肽纸片黏于平板上，于36℃±1℃培养18～24小时观察结果，抑菌环>10mm，对杆菌肽敏感。③生化鉴定：本菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖和水杨素，产酸不产气，不发酵菊糖、阿拉伯糖和棉子糖。④血清学分群鉴定：采用乳胶凝集试验，挑取2～3个待检菌落转种于含有0.4ml提取酶的试管中，并使其成乳化均匀的菌悬液，置37℃水浴10～15分钟待用。在卡片的相应区域各加1滴A、B、C、D、F或G致敏乳胶，提取酶处理后的菌悬液1滴分别与乳胶液混匀，并轻摇卡片。同时在卡片相应区域加1滴任意1种致敏乳胶悬液混匀，作为阳性对照。2～10分钟内观察结果，结果为A群β溶血性链球菌。

讨 论

猩红热是由溶血性链球菌所致的急性呼吸道传染病，在我国的北方多见，又在幼童中多发，及早地检出对于本病的治疗和控制具有积极意义。在此次疫情中，患儿要卧床休息，病愈后仍应观察至病程3周，以尽早发现各种变态反应性并发症，托幼机构工作人员中的A组链球菌的带菌者，应暂时调离工作岗位，接受治疗，待病原菌连续3次培养均为阴性后方可复岗。作为疾病预防控制单位应加强对学校和托幼机构等单位的知识培训和宣传教育，同时做好消毒等卫生技术指导工作，学校和托幼机构应积极配合，加强管理，以减少本病的发生和传播。

病原学检测分析 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月~2011年6月我院妇科不孕门诊患者210例。

1.2 方法

常规消毒后用无菌棉拭子采取宫颈黏液于无菌管内, 同时采取阴道分泌物置于0.5ml生理盐水中立即送检。 (1) 念珠菌检测:采用革兰染色油镜镜检, 查到卵圆形真菌孢子或假菌丝可做出报告。 (2) 阴道毛滴虫检测:采用湿片法, 用生理盐水做分泌物涂片, 显微镜下查到活动的滴虫可做出报告。 (3) 细菌性阴道病检测:采用郑州安图生物科技有限公司试剂盒, 严格按说明书步骤操作和判断结果。 (4) 支原体检测:采用珠海益民生物工程制品厂试剂盒, 严格按说明书步骤操作和判断结果。 (5) 衣原体检测:采用上海鸿泰生物工程有限公司试剂盒, 严格按说明书步骤操作和判断结果。 (6) 革兰氏阴性双球菌 (淋球菌) 检测:采用革兰染色油镜镜检, 查到革兰氏阴性双球菌, 形似肾或咖啡豆, 凹面相对, 散在白细胞之间或被吞噬于中性粒细胞质之中。

2 结果

2.1 阳性检出率

210例标本中, 阳性检出164例, 占78.1%, 阴性检出46例, 占21.9%。

2.2 阳性标本微生物检出率及感染率

164例阳性标本中各种病原微生物的检出率, 见表1。164例阳性标本中病原微生物感染情况显示, 单一微生物感染114例 (69.5%) , 两种微生物感染39例 (23.8%) , 三种微生物感染7例 (4.3%) , 三种以上微生物感染4例 (2.4%) 。

注:★包括解脲支原体、人型支原体

3 讨论

不孕症是生殖健康研究的热点问题之一, 其原因复杂, 而女性生殖道感染是引起不孕的主要原因之一。本次对不孕症妇女阴道分泌物检测结果显示, 210例标本中阳性164例, 占78.1%, 其中, 支原体检出率达53.0%, 居于首位, 其次是衣原体占50.0%, 细菌性阴道病、念珠菌、阴道毛滴虫、淋球菌分别为9.1%、7.9%、1.8%、0.6%。可见支原体性阴道炎在不孕妇女阴道炎中占主导地位。

支原体是一种介于细菌和病毒之间, 无细胞壁, 呈高度多形性, 可塑性, 易溶解性, 并能通过滤菌器的原核微生物。目前认为其引起不孕的机制主要是支原体有粘附精子的作用, 阻碍精子的运动;支原体能产生神经氨酸酶样物质干扰精子和卵子的结合;支原体与精子膜有共同抗原, 对精子可造成免疫损伤而导致不孕。由于支原体无细胞壁, 对青霉素、头孢菌素等作用于细胞壁的抗生素不敏感, 对作用于其核糖体、抑制或影响菌体蛋白合成的抗生素敏感, 故临床上治疗支原体常选用四环素、大环内酯类和喹诺酮类药物[2]。

衣原体为专性细胞内寄生、有独特发育周期、能通过滤菌器的原核细胞微生物, 主要是通过侵犯宫颈、输卵管上皮引起宫颈炎、输卵管炎、输卵管积水、输卵管瘢痕、阻塞导致不孕症及输卵管妊娠。对于衣原体泌尿生殖道感染的治疗仍以抗菌药物为主, 以四环素类抗菌药物为首选, 某些喹诺酮类药物也具有抗沙眼衣原体的作用。

本组资料显示, 不孕妇女阴道分泌物由单一病原体感染为主, 但合并两种或两种以上病原体造成的混合感染病例正逐渐增高, 应引起临床的高度重视。有些阴道炎患者 (尤其支原体、衣原体性阴道炎) 临床过程隐匿、症状轻微或无症状, 不易引起患者的重视, 临床实验室应将阴道分泌物的检测列为常规项目, 针对病原体选择合适的抗生素进行正确治疗, 可有效减少妇女不孕的发生, 从而提高生殖健康水平。

摘要：目的 通过对210例不孕妇女阴道分泌物检测结果分析, 了解不孕妇女阴道感染的主要类型和病原微生物种类。方法 对阴道分泌物进行常规湿片查阴道毛滴虫, 革兰染色查革兰氏阴性双球菌 (淋球菌) 、真菌、支原体、衣原体、细菌性阴道病使用相应的诊断试剂盒。结果 阴道分泌物阳性检出率为78.1%;支原体87例, 占53.0%;衣原体82例, 占50.0%;细菌性阴道病15例, 占9.1%;念珠菌13例, 占7.9%;阴道毛滴虫3例, 占1.8%;革兰氏阴性双球菌 (淋球菌) 1例, 占0.6%。结论 在不孕妇女阴道炎患者中, 支原体感染最常见, 其次是衣原体。

关键词：不孕妇女,阴道分泌物,病原学检测

参考文献

[1]王维鹏, 金正江.不孕不育患者解脲脲支原体培养及耐药性研究[J].中华医院感染学杂志, 2007, 17 (1) :110-111.

病原学检测分析 篇5

随着我国动物养殖业的飞速发展，动物传染病逐渐呈现出非典型性症状和混合感染的征状日趋严重，许多病例仅靠临床和病理诊断很难进行确诊，而实验室检测已逐渐成为动物病原微生物确诊的依据。目前，动物病原微生物实验室检测经常使用的方法主要包括病原学诊断，血清学诊断、分子生物学诊断。本文对动物病原微生物的实验室诊断方法进行简要的概括，为实验室诊断的初学者提供一些参考。1 病原学检测 1.1 涂片镜检

对于送检样品首先一般要进行涂片镜检，首先将样品涂片，然后根据临床诊断疑似感染病原情况进行染色，常用的染色方法主要有革兰氏染色、美蓝染色、姬姆萨染色和抗酸性染色法等，最后在光学显微镜下观察微生物形态，得出初步的结论。对于疑似的病毒性感染需要进行电镜观察，电镜是以电子束来代替可见光束，观察物体时，分辨率就没有波长要在可见光谱之内的限制，因此其放大倍数和分辨率都比光学显微镜高得多。病毒颗粒极其微小，在17-300nm之间，光学显微镜无法观察，只有电镜才可以发现其形态。1.2 分离培养

病原分离是病原微生物检测应用较广泛的方法，细菌、真菌、螺旋体和支原体需要将样品处理后接种到其特定的培养基中进行扩增培养，然后划线或涂到固体培养基上进行分离培养，通过其生长形态、生化特性作出鉴定。立克次体、衣原体、病毒则需要将样品接种到鸡胚或特定的细胞分离病毒，通过病变情况鉴定病原。分离培养需要的时间较长，且分离的病原可能不是致病主要因素，但是它是病原微生物的基本鉴定方法，是病原学检测的基础。1.3 动物接种

将样品处理后或分离培养的病原根据其不同的特性接种对待检病原敏感的实验动物，通过观察其是否发病和发病症状来进行判断，甚至还可以对发病实验动物继续分离培养病原。分子生物学检测 2.1 PCR

多聚酶链式反应，是目前病原检测的最常用的分子生物学技术，具有高敏感性的特征，即使少量的感染也可以检出，同时该方法也是许多其它检测方法的基础。其原理是将样品的基因组DNA提出，在加热条件下，DNA双链变性分离为单链，加入合成的保守区域的特异性引物，在合适的温度下和耐热聚合酶的作用下引导DNA的合成，循环重复后即可得到大量的目的基因片段，经电泳可以检测。RNA病毒需要提取的是RNA，反转录生成DNA后再进行PCR，即为RT-PCR检测。目前，PCR技术发展已日趋完善，像实时荧光PCR、套式、多重、降落PCR已逐渐成为实验室常规检测手段。2.2 核酸杂交

核酸杂交技术是较早的应用于病原微生物的检测技术，首先从样品中提取核酸（DNA或RNA），将此核酸进行变性处理后固定在固相载体上，加入带有特殊标记物的探针，利用碱基互补原理结合并固定探针，借助探针上标记的物质可以了解到是否有探针，甚至有多少探针被固定上去，再由此推知样品中是否含有、甚至含有多少病原微生物。根据杂交核酸的不同，又可分为Southern印迹法(检测DNA)及Northern印迹法(检测RNA)。此外，斑点和原位杂交也是常用病原检测技术。2.3 基因芯片

基因芯片技术在分子病原检测领域显示出了强大的生命力，主要是因为它具有微型化、集约化、标准化高通量的的特点。它的基本原理是将大量相似病原的基因保守片段的寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品或其PCR产物进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量，特别适合数量较多的样品的鉴别诊断，在规模化养殖生产中非常具有应用前景。2.3 序列测定

序列测定耗时较长，但是比其它方法更为可靠，是确诊的依据。测序分为全序列测定和保守区域的测定，全序列测定主要是一些核酸序列较短的病毒，但有时为了对病原进行序列分析，有的细菌、支原体、衣原体等也进行全序列测定，但耗费巨大。3 血清学诊断

机体受致病病感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体，用已知的特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取动物的血清进行试验，故称为血清学诊断。

3.1 ELISA 又称酶联免疫吸附试验，是最常用的血清学诊断方法。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用于病原检验的ELISA主要有:双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体和ABS-ELISA法。3.2 补体结合反应

补体结合试验是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现溶血现象，如果与病原及相应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象，而补体不单独和抗原或抗体结合。如果出现溶菌，是补体与待检系统结合的结果，说明抗原抗体是相对应的，如果出现溶血，说明抗原抗体不相对应。该方法虽操作复杂但敏感性高、特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围也较广。3.3 间接免疫荧光

间接免疫荧光的原理与简接ELISA的原理相似，只是用荧光素替代酶标记抗体，主要是用来检测组织中的病原。首先将组织制成切片，加入能与待检病原进行反应的特异一抗，再加入荧光二抗，通过荧光显微镜就可以观察病原感染情况。以前制约免疫荧光方法使用的环节是荧光显微镜的数量太少，但随着荧光技术的发展，荧光显微镜已成为实验室里不可缺少的仪器。3.4 免疫胶体金

病原学检测分析 篇6

关键词:免疫层析;胶体金;药残

中图分类号:S852.5+5文献标识码:A

文章编号:1674-0432(2010)-05-0027-2

一、概述

免疫层析技术作为一种诊断方法最早是由Kohn在19世纪60年代提出,并在80年代初期发展起来。该技术的基本原理是以条状的纤维层析材料作为固相载体,通过毛细作用使待检样品溶液在纤维层析条上移动,同时使样品中的待检物与层析材料上针对待检物的受体(如抗体或抗原)发生高特异性、高亲和性的免疫反应,在层析反应的过程中免疫复合物被滞留或富集在层析材料上的检测区域,通过酶反应或直接运用可目测的标记物(如胶体金、乳胶颗粒等)而出现可直观观察到结果。该技术稳定性、重复性好,不需要特殊仪器与熟练操作的技术人员,非常适于一线工作人员在基层使用,可以作为一种快速的现场诊断方法使用。免疫层析技术是目前发展最快的复合型免疫层析技术,经过几十年的发展,作为一门成熟的体外诊断技术已广泛地应用于生物、医学、兽医等领域的检测,特别是以该技术为基础研发的试纸条以其便捷、快速、准确和无污染等特点越来越受到人们的重视,已被大量应用于医学检验、临床诊断及药物残留检测等。

二、免疫层析技术在病原体及药物残留检测方面的研究进展

(一)病毒检测

病毒性疾病是兽医临床最常遇到的疾病,围绕病毒性疾病开发免疫层析诊断方法具有十分重要的意义。猪轮状病毒是引起猪腹泻的三大病毒之一,严重威胁着养猪业的发展。J.H.Kang等人研发的猪轮状病毒VP6单克隆抗体免疫层析胶体金双夹心检测试纸条以猪轮状病毒VP6两种特异性抗体mAb-1和mAb-2。mAb-1作为捕获蛋白、mAb-2作为探针蛋白固定在试纸条检测区域,最小检出菌量可达103PRV,而且该胶体金试纸条的检测结果与RNA PCR检测方法一致性达100%。口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的牛、羊、猪等偶蹄类动物的高度接触性急性传染病。兰州兽医研究所蒋涛等人利用免疫层析技术研制的O型FMDV病原定型诊断胶体金试纸条可直接检测出水疱皮及水疱液中的口蹄疫病毒,灵敏度与特异性试验结果显示最高可检测到1:256倍稀释的O型标准抗原,灵敏度略高于反向间接血凝试验。对感染非O型的口蹄疫病料定型检测结果均为阴性,且与临床症状相似疾病的病原无交叉,无假阳性反应,特异性高。除此之外,目前还研制出犬细小病毒、伪狂犬病毒、新城疫病毒等免疫层析胶体金诊断试剂条用于病毒的检测。

(二)细菌检测

金黄色葡萄球菌可以产生多种肠毒素,可引起胃肠炎。蛋白A是该菌在其对数生长期分泌到细胞壁外的特殊产物。Su-Hua Huang等人研制的金黄色葡萄球菌蛋白A免疫层析胶体金试纸条将胶体金溶液与抗蛋白A抗体形成的结合物固定在试纸条的检测区域,羊抗兔的抗体作为对照线,将待检测的食品经过处理后滴加在试纸条的样品垫上,如果样品中含有金黄色葡萄球菌在试纸条的检测区域将出现红色,检测时间只需25h,敏感性强,非常适用于现场检测。沙门氏菌可感染多种人和动物,针对沙门氏菌在我国流行的特点,周东明等人建立了快速检测鼠伤寒沙门氏菌的胶体金免疫层析法,并研制出了免疫层析胶体金试纸条用于食品中的鼠伤寒沙门氏菌的检测。试验结果表明沙门氏菌引起食物中毒的菌量一般在106-107cfu·m l-1以上,而用于检测沙门菌的免疫层析试条检测灵敏度为105cfu·m l-1, 在中毒菌量的检测范围内,随时随地都可直接检测出鼠沙门氏菌病原体,整个操作过程只需要5-10min,肉眼可观察到检测结果,适合于基层单位使用。除此之外,已有检测霍乱弧菌、单增李斯特菌等免疫层析胶体金试剂条用于生产实践。

(三)寄生虫检测

牛的巴贝虫病在热带和亚热带地区严重威胁着家畜生产,可直接感染家畜的脾脏,引起家畜的溶血性贫血、黄疸、血红蛋白尿,甚至可引起家畜的急性死亡。血清学涂片显微镜检测一直是常规的检测方法,但不适合大量的样本检测。Chulmin Kim等人建立了Rrap-1/CT抗体免疫层析胶体金法检测牛巴贝虫病,具有很高的特异性,无交叉反应。人感染旋毛虫的病例在中国的西北部持续增长,疾病的发生与缺乏有效的诊断方法密切相关。免疫层析法检测肌肉活组织中旋毛虫是一个很重要的工具。崔晶等人建立了肉类旋毛虫感染的快速免疫学检测方法并研制了免疫层析胶体金试纸条。该试剂条胶体金结合垫上SPA抗原可捕获人和其他哺乳动物IgG的Fc片段,不仅可以检测出猪的肌肉活组织的旋毛虫而且还可以检测出人及其他哺乳动物肌肉组织中的旋毛虫,已用于新鲜肉、冷藏肉及冻肉中抗旋毛虫的检测。

三、免疫层析技术在药物残留检测方面的应用

盐酸克伦特罗,俗名“瘦肉精”,是一种β-兴奋剂。如果将其作为饲料添加剂可提高瘦肉率,但其残留在动物组织中会对食用者的肝、肾等内脏器官产生毒害, 出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,严重者甚至死亡。目前国内检测盐酸克伦特罗的常用方法有很多,但各自存在缺点。张慧嫦等人研制的盐酸克伦特罗免疫层析胶体金试纸条将抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的盐酸克伦特罗抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中盐酸克伦特罗竞争结合胶体金标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测结果,其灵敏度的最低值可达到0.5ng/ml。氯霉素作为一种高效广谱抗生素,常用于动物各种传染性疾病的治疗,但残留在动物肉、奶、蛋等食品中的氯霉素对人和动物机体有很大的毒副作用。我国自主研制的氯霉素免疫层析胶体金检测试纸条可用于饲料、水产品、牛奶等产品中氯霉素的检测,最低检测含量达到1ng/ml,并且只需10min就可出检测结果,费用低廉,而且不需要附加实验设备,能满足养殖场所等的检测需要。除此之外最近已有关于免疫层析胶体金试纸条检测磺胺类等药物的报道。

四、结语

免疫层析技术是体外快速诊断技术的重要的发展方向,近年来该技术发展迅速,已在多个领域得到广泛应用,如传染病、早孕、癌症等的检测以及毒素、药残留、环境监测等。免疫层析胶体金试条因其使用方便已被广泛用于小分子物质的诊断检测,具有灵敏度高,操作快捷,不需要附加设备等优点,尤为重要的是特别适合基层单位现场的检测和诊断的使用。免疫层析技术的这些特点是其他方法不可比拟的。因此,可以说该技术不仅具有巨大的发展潜力,而且还具有广阔的市场和应用前景。

参考文献

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[3]蒋韬,梁仲,陈涓等.O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立[J].畜牧兽医学报,2008,39(1):60-65.

[4]Su-Hua Huang,Hsien-Chin Wei,Yeun-Chung Lee.One-step immunochromatographic assay for the detection of Staphylococcus aureus.Food Control.2007,(18):893-897.

[5]周东名,唐雨德,郁兴明,等.快速检测鼠伤寒沙门菌的胶体金免疫层析法的建立与初步应用[J].东南国防医药.2007,9 (3):180-182.

[6]Chulmin Kim,Andy Alhassan,Rodolfo A.Development of two immunochromatographic tests forthe serodiagnosis of bovine babesiosis[J].Veterinary Parasitology.2007,148:137–143.

[7]崔晶,秦银霞,王中全.免疫层析试纸条检测感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体的研究[J].中国病原生物学杂志.2008(3):114-117.

[8]张慧嫦,张少恩,吴忠华,等.胶体金免疫层析法快速检测盐酸克伦特罗残留[J].中国国境卫生检疫杂志.2008,31(1):39-42.

作者简介:张林波(1973-),男,吉林农业大学生命科学学院副教授。研究方向:免疫学。

病原学检测分析 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年1月-2015年10月在笔者所在科室住院的CAP患儿885例为研究对象,所有患儿均符合《儿童社区获得性肺炎管理指南》的诊断标准,其中男445例,女437例,男女比例为1∶0.98,年龄6个月~14岁,平均(5.12±1.08)岁;病程3~19 d,平均(5.51±1.32)d。

1.2 方法

患儿在入院当天将一次性痰液收集器放入咽喉部刺激咳嗽后经负压吸引抽取呼吸道分泌物,立即送检行痰液涂片检查,低倍显微镜下白细胞≥10~25个,鳞状上皮细胞<10个为合格的痰液标本,否则重新采取标本。

1.3 一般细菌鉴定

检验科在接到痰液标本后30 min内将其接种到强颗粒培养皿和琼脂培养皿中,然后放置于5%CO2培养箱中孵育,观察细菌生长情况,如培养出细菌,则采用全自动微生物分析仪进行菌种鉴定。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 患儿细菌病原检测分布及构成情况

送检的885份痰液标本中,共检出细菌菌株372份,检出率为42.03%,其中革兰氏阳性菌株180份,占48.39%,革兰氏阴性菌株192份,占51.61%。革兰阳性菌主要为肺炎链球菌145株(38.98%)和金黄色葡萄球菌32株(8.60%);革兰阴性菌主要为流感嗜血杆菌81株(21.77%)、大肠埃希菌50株(13.44%)和卡他莫拉菌28例(7.53%),见表1。

2.2 主要5种病原菌与患儿年龄的关系

≤1岁的患儿感染肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和卡他莫拉菌的机会明显高于>1岁组的患儿,差异均有统计学意义(P<0.05),见表2。

3 讨论

CAP是指原本健康的儿童在医院外获得的感染性肺炎,包括感染了具有明确潜伏期的病原体而在潜伏期内发病的肺炎,临床表现为发热、咳嗽、气促、呼吸增快、呼吸困难、胸壁吸气性三凹征、肺部吸气末闻及固定的中细湿鸣,严重的出现呼吸系统以外的症状。CAP是占5岁以下小儿死亡的1/3~1/4,是发展中国家5岁以下儿童死亡的第一位原因,有研究显示,CAP的病原分布跟地域、时期、时代和社会经济水平等相关,因此了解本地区CAP的病原分布,以指导临床治疗具有重要的意义[3,4]。

本研究结果显示,送检的细菌培养标本中,有42.03%的标本明确了细菌病原体,提示细菌感染仍然是本地区CAP的主要病原菌。其中革兰氏阳性菌以肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌为主,革兰氏阴性菌以流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、卡他莫拉菌为主。肺炎链球菌仍然是小儿CAP感染的首位病原菌,此结果与文献[5,6]报道的结果一致,提示肺炎链球菌仍然是小儿CAP最常见的细菌病原。其次为流感嗜血杆菌,与国外文献[7]报道的结果一致,这是因为出生后经母体传给的保护性抗体逐渐减少,以致消失,因而是流感嗜血杆菌肺炎的高危人群。年龄与细菌病原感染有密切的关系,特别是≤1岁的婴幼儿由于免疫系统发育不成熟,在黏膜免疫中发挥抗感染作用的分泌性Ig A水平低下以及抵抗细菌入侵的Ig M、Ig G水平低下,导致≤1岁患儿对大多数细菌病原微生物普遍易感,因而容易发生细菌感染。本研究结果显示≤1岁患儿感染肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和卡他莫拉菌的机会明显高于>1岁组的患儿。在细菌培养结果出来前,临床治疗CAP的过程中一定要结合患儿的年龄选择合适的抗生素,以避免抗生素的不合理使用。

参考文献

[1]王茂娟,杨小琼,邓述恺,等.社区获得性肺炎患者血清和肺泡灌洗液基质金属蛋白酶-2、-29和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1检测[J].郑州大学学报:医学版,2010,45(6):956-959.

[2]林立,李昌崇.儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订)解读[J].中华妇幼临床医学杂志(电子版),2014,10(6):728-732.

[3]申昆玲,江载芳.肺炎[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2002:1174-1216.

[4]朱建国,谢诚,缪丽燕.2009~2010年我院呼吸内科感染致病菌分布与抗菌药物使用情况分析[J].药学与临床研究,2011,6(4):225-226.

[5]欧阳洁明,刘晶红,杨海斌.珠海市儿童社区获得性肺炎的病原学研究[J].中国现代医药杂志,2014,16(1):54-57.

[6]裴利宏,郭蕴琦,郭蕴岚.儿童社区获得性肺炎病原微生物的分布[J].实用儿科临床杂志,2011,26(22):1740-1741.

病原学检测分析 篇8

1 材料与方法

1.1 标本

2008年5月~8月, 采集哈尔滨市儿童医院123例疑似手足口病患者标本共156份。

1.2 方法

标本采用直接RT-PCR快速诊断和病毒分离法同时进行检测。快速诊断用QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit进行病毒RNA提取, 用QIAGEN公司One step RT-PCR Kit进行一步RT-PCR反应。病毒分离用RD细胞进行培养, 均传二代, 对分离的病毒株分别用EV71、CA16基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定[1]。

2 结果

2.1 直接R T-PCR快速诊断结果与病毒分离培养结果比较

156份标本, 采用RT-PCR快速检测时, 检出EV71阳性40份, 阳性率为25.64%;CA16阳性1份, 阳性率0.64%。采用病毒分离培养时, 检出EV71阳性59份, 阳性率为37.82%;CA16阳性4份, 阳性率为2.56%。手足口病病毒无论是EV71还是CA16, 病毒分离培养法阳性率高于RT-PCR法。

2.2 病毒分离及型别鉴定结果

156份标本经RD细胞培养, 分离出阳性病毒株共63份, 阳性率为40.38%, 其中EV71阳性59份 (占总阳性数的93.65%) , CA16阳性4份 (占总阳性数的6.35%) 。哈尔滨市2008年手足口病的流行株为肠道病毒EV71型。另外, 从不同类型标本病毒分离结果看出, 粪便 (包括肛拭子) 和咽拭子标本的病毒分离阳性率较高, 分别为76.19% (肛拭子为42.86%) 、32.81%。 (表1)

3 讨论

手足口病是全球性传染病, 世界大部分地区均有此病流行的报道。1957年新西兰首次报道该病。1958年分离出柯萨奇病毒, 1959年提出手足口病命名[1]。1997年以来, 中国台湾、新加坡、马来西亚、越南、澳大利亚、中国香港等地不断有暴发流行报道, 引起世界各国关注和警惕[2]。我国于1981年上海首次报道本病, 1995年武汉病毒研究所从手足口病人中分离出EV71[1]。自2008年阜阳手足口病暴发以后, 我们也主动开展了哈尔滨市的手足口病病原学监测工作。自2008年5~9月, 在哈尔滨市儿童医院, 对123例疑似手足口病患者进行各类型标本采集, 共156份。所有标本采用直接RT-PCR快速诊断和病毒分离两种方法同时进行检测, 从而得到哈尔滨市2008年手足口病的流行株为肠道病毒EV71型, 与阜阳流行株型别一致。

随着分子生物学技术的发展和检测手段的完善, 应用RT-PCR扩增技术检测标本中的肠道病毒RNA更为快捷, 但与传统的病毒分离方法相比, 其阳性检出率要低。从本次的研究结果也可以看出, 156份标本, 采用RT-PCR快速检测时, 检出EV71阳性率为25.64%, CA16阳性率0.64%;采用病毒分离培养时, 检出EV71阳性率为40.38%, CA16阳性率2.56%, 无论是EV71型还是CA16型, 病毒分离培养法阳性率均高于RT-PCR法。由此可见, 病毒分离培养方法作为金标准, 不应丢弃。

自1969年首次分离到EV71以来, 人们逐渐认识到EV71是手足口病的主要病原之一[3], 近年来EV71在亚洲地区的流行呈上升趋势, 日益受到人们的重视[4]。哈尔滨市地处中国的北方, 每年的6、7、8月份为手足口病的高发季节, 2008年的监测结果显示EV71为当年的流行株, 从而提示哈尔滨市的手足口病防控工作也要引起重视。

EV71感染的手足口病患者, 神经系统症状的发生率较高。研究结果显示, EV71在手足口病的病原学中占有越来越重要的位置, 可引发致死性脑病、脑出血, 甚至心肌炎猝死[5]。在面对传染病疫情的时候, 能够快速准确地对病原体进行诊断是当务之急, 采集适当的临床标本, 进行鉴定诊断更为重要。从本次的研究结果可以看出, 粪便 (包括肛拭子) 和咽拭子标本的病毒分离阳性率较高, 分别为76.19% (肛拭子为42.86) 、32.81%, 此结果为手足口病标本采集时选择何种类型标本, 以提高检测准确性提供了参考。

目前对EV71和CA16感染的手足口病尚无特异高效的抗病毒药物, 主要是对症治疗。手足口病的流行也无明显的地区性, 在该病流行期间, 可发生幼儿园和托儿所集体感染和家庭聚集发病现象, 短时间内可造成较大范围的流行, 疫情控制难度较大。因此, 有必要加强对手足口病的病原监测, 从而掌握其流行规律, 为防制该病毒的流行提供科学依据。

摘要：目的 研究2008年哈尔滨市手足口病的病原学情况。方法 应用RT-PCR和病毒分离两种方法对疑似手足口病患者标本进行检测。结果 RT-PCR快速检测EV71阳性率为25.64%, CA16阳性率0.64%;病毒分离培养EV71阳性率为37.82%, CA16阳性率为2.56%。156份标本分离出阳性病毒株63份, 其中EV71阳性59份 (占总阳性数的93.65%) , CA16阳性4份 (占总阳性数的6.35%) 。结论 哈尔滨市2008年手足口病的流行株为肠道病毒EV71型。手足口病病毒分离培养法阳性率高于RT-PCR法。粪便 (包括肛拭子) 和咽拭子标本手足口病病毒分离阳性率较高。

关键词：手足口病,RT-PCR,病毒分离培养,EV71

参考文献

[1]中国疾病预防控制中心.《手足口病预防控制指南》 (2008年版) [M]

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病原学检测分析 篇9

1 资料与方法

1.1 病例资料

吴某, 男, 3岁, 2013年2月11日因发热 (39.5℃) 、畏寒、咽痛、头痛等不适入院。12日患者出现神志不清, 意识模糊, 脑膜刺激征, 不能遵嘱动作, 烦躁不安, WBC 3.3×109/L, 中性粒细胞91.4%, 淋巴细胞2%。11日以常规方法于第3~4腰椎棘突间隙提取脑脊液标本, 测得压力为240 mm H2O, 同时采集患儿血液5 m L及咽拭子标本3 m L。

1.2 主要试剂与仪器

细菌培养所需培养基及生化鉴定试剂均购自广东环凯;麻疹病毒Ig M抗体诊断试剂盒 (IBL, 德国) ;风疹病毒Ig M抗体诊断试剂盒 (IBL, 德国) ;风疹病毒QIAamp viral RNA Mini kit (QIAGENE, 德国) ;Prime Script 1st Strand c DNA Synthesis Kit、LA PCR KitRVer.2.1、Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0、p MD-18T载体、T4 DNA连接酶、100 bp DNA Marker均为宝生物工程 (大连) 有限公司产品;PCR仪 (PCT-200 Thermal, 德国) 。

1.3 细菌检测

查阅文献资料, 确定临床常见引起脑炎脑膜炎的细菌, 包括脑膜炎奈瑟菌、b型流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、新型隐球菌、B族链球菌, 参照《全国临床检验操作规程》 (第2版) 进行常规培养, 脑脊液标本以2 000 r/min离心20 min, 取离心下层液体100μL接种到血平板和巧克力琼脂平板;血标本与咽拭子标本直接接种血培养皿, 于35~37℃全自动血培养仪培养, 5 d内培养仪如报警即进行细菌接种和鉴定, 对于分离到的细菌依据菌落形态、革兰染色、生化反应等进行鉴定, 鉴定方法参照《细菌培养物的鉴定标准操作程序》进行, 5 d后仍未报警视为培养结果阴性。

1.4 病毒检测

查阅文献资料, 确定常见的引起脑炎脑膜炎的病毒, 包括乙脑病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒 (柯萨奇病毒、埃可病毒以及EV71等) 、水痘-带状疱疹病毒、麻疹病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒 (Ⅰ型和Ⅱ型) , 其中麻疹病毒与风疹病毒检测采用ELISA试剂盒检测特异性Ig M抗体, 其余病毒利用DNA Star primer select软件依据各自基因的保守区域设计特异性扩增引物, 委托宝生物工程 (大连) 有限公司合成, 引物序列见表1。取140μL脑脊液、血液及咽拭子样品, 参照QIAamp viral RNA Mini kit试剂说明书提取病毒总RNA, 溶于40μL DEPC水。应用随即引物及Prime Script 1st Strand c DNA Synthesis Kit试剂盒合成c DNA, 应用LA PCR Kit试剂盒与各特异性引物进行PCR扩增R, 反应体系与反应条件参照试剂盒说明书进行操作, PCR阳性产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳进行初步确认。

1.5 基因测序及分子进化分析

PCR阳性产物琼脂糖凝胶电泳通过Agarose Gel DNA Purification Kit DNA胶回收试剂盒进行纯化回收, 取1μL产物连接到4μL p MD-18T载体, 应用蓝白斑实验及PCR鉴定后, 送上海生物工程技术有限公司进行序列测定, 测序结果进行校对与拼接后, 应用BLAST程序与Gen Bank报道的腮腺炎病毒序列进行核苷酸比较。选择Gen Bank公布的不同地区有代表意义的腮腺炎病毒基因序列用于分子进化分析, 应用Clustal W软件进行多重序列比对, Mega 5.0软件邻接法构建分子进化树, 参数选择为1000次重复构建。

2 结果

2.1 临床指标检查

患儿入院时血常规白细胞计数为3.3×109/L, C反应蛋白不高, 脑脊液外观清亮, 压力增高 (240 mm H2O) , 糖和氯化物正常, 脑脊液直接涂片未发现细菌生长。脑电图检查背景波轻-中度异常和高波幅慢波。

2.2 实验室细菌培养

患者脑脊液、血液及咽拭子标本应用常规方法进行脑膜炎奈瑟菌、b型流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、新型新型隐球菌、B族链球菌的分离培养, 培养皿均未见阳性菌落生长。

2.3 实验室病毒检测

患者脑脊液、血液及咽拭子标本麻疹病毒、风疹病毒Ig M抗体检测均为阴性;经乙脑病毒、腮腺炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒以及EV71、单纯疱疹病毒 (Ⅰ型和Ⅱ型) 病毒核酸检测, 咽拭子标本检测出腮腺炎病毒阳性, PCR反应产物大小约300 bp, 与预期结果一致, 产物琼脂糖凝胶电泳见图1、2。反应产物经基因序列测定, 应用BLAST进行序列比对, 进一步确定所扩增基因为腮腺炎病毒SH基因, 与腮腺炎病毒F型基因代表株 (Gen Bank No:Z77161) 进行比较, 核苷酸同源性为99%, 关键位点未发生变异, 存在3个位点的核苷酸改变:89位的T突变为C, 218位的C突变为A, 290位的C突变为T, 见表2。

3 讨论

脑膜炎按照感染病原体的种类分为细菌性脑膜炎、结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎、急性化脓性脑膜炎、新生儿脑膜炎、流感杆菌脑膜炎, 临床以细菌性脑膜炎和病毒性脑膜炎最常见[2]。细菌性脑膜炎通常表现为化脓性脑膜炎, 全球每年约120万左右的脑炎脑膜炎由细菌感染引起, 致残率最高可达50%, 儿童是此类疾病的高发人群[3]。病毒性脑炎指病毒感染引起的脑实质或脑膜炎症, 据估算全球每年有约20万以上的病毒性脑炎病例报告, 其中80%以上由肠道病毒感染引起, 包括柯萨奇病毒、埃可病毒、脊髓灰质炎病毒[4], 有文献报道水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型也可引起严重的脑炎脑膜炎, 并且常伴有小脑性共济失调[5]。因细菌培养是细菌性脑膜炎诊断的金标准, 本研究对该危重脑炎脑膜炎患儿血液、咽拭子及脑脊液标本进行了包括脑膜炎奈瑟菌、B型流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、新型隐球菌、B族链球菌在内的细菌谱感染筛查, 结果均为阴性, 初步排除了患儿细菌感染的可能。在进行细菌培养的同时对采集的患儿标本进行了病毒感染谱的筛查, 包括应用ELISA方法检测麻疹病毒与风疹病毒Ig M抗体及应用PCR技术检测乙脑病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒 (柯萨奇病毒, 埃可病毒以及EV71等) 、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒 (Ⅰ型和Ⅱ型) , 除咽拭子标本腮腺炎病毒PCR检测为阳性外, 其余标本的所有检测项目均为阴性, 在第一时间内初步确定了所感染病原体的种类。

腮腺炎病毒为不分节段的负链RNA病毒, 目前发现有A~L 12个基因型, 编码7种蛋白基因, 其中疏水蛋白基因 (Hydrophobin, SH) 全长316 bp, 编码57个氨基酸, 最易发生变异, 国际上一般选择SH基因作为腮腺炎病毒的分型依据[6,7], 通过对此次PCR扩增阳性的产物进行了序列测定与分析, 经过Blas序列比对确定为腮腺炎病毒SH基因, 进一步通过分子进化树分析为腮腺炎病毒F基因型, 与国际F基因型代表株比较抗原位点没有发生改变, 提示当前疫苗能有效预防腮腺炎的爆发流行, 经流行病学调查, 该病例未接种腮腺炎相关疫苗。

患儿经过有效对症治疗和腮腺炎病毒感染特殊治疗, 目前已经康复出院, 本研究建立的综合检测体系能为临床脑炎脑膜炎病例的实验室确诊提供有效手段, 不过由于引起脑炎脑膜炎的病原体种类众多, 所建立的检测体系目前仅局限于较常见的病原体, 在以后的工作中将不断扩大病原体的检测范围与检测特异性。

摘要：目的 对脑炎脑膜炎病例进行临床诊断与实验室检测, 在病原学上为临床治疗提供直接依据。方法对入院患儿进行血常规、尿常规、生化及血凝检查, 采集患儿脑脊液、血液及咽拭子标本, 进行脑膜炎奈瑟菌、B型流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、大肠杆菌等分离培养;ELISA法检测麻疹病毒、风疹病毒IgM抗体;设计特异性引物RT-PCR法检测肠道病毒、乙脑病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、腮腺炎病毒, 对核酸检测阳性的病原体进行基因测序、Blast比对及应用Mega 5.0构建分子进化树;根据病原体的种类及基因型别, 有针对性地选择药物进行临床救治。结果 脑炎脑膜炎患儿脑脊液、血液及咽拭子标本细菌培养均为阴性;咽拭子标本腮腺炎病毒PCR核酸检测阳性, 琼脂糖凝胶电泳产物大小约300 bp;阳性产物测序结果与腮腺炎病毒疫苗株比较, 存在部分核苷酸变异, 关键的抗原位点没有发生变化;所测基因序列经分子进化分析确定为腮腺炎病毒基因F型, 与目前中国流行毒株基因型别一致, 患儿经对症治疗已康复出院。结论细菌学和病毒学实验室筛查, 对引起脑炎脑膜炎的常见病原体具有积极的作用, 早期病毒核酸测序能确诊腮腺炎病毒感染类别及基因型别。

关键词：脑炎脑膜炎,临床诊断,病原学检测,腮腺炎病毒

参考文献

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病原学检测分析 篇10

关键词：饮用水,腹泻,志贺氏菌,检测

感染性腹泻是指由细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体引起的一组以腹泻为主要症状的疾病[1], 其染病途径大致相同, 主要“病从口入”即粪-口传播。2014年8月22日新宁县疾病预防控制中心接到辖区内某乡卫生院电话报告, 该卫生院8月21日、22日共接诊了19名腹泻患者, 同为该乡某村人, 主要临床症状为发热、腹痛、腹泻、脓血黏液便、水样便, 部分患者伴有头痛、恶心、里急后重等症状, 患者家庭饮用水为同一水源, 疑为饮用水污染所致。我中心接到报告后立即派员调查处置该起疫情, 根据临床症状、流行病学调查和实验室病原学检测分析, 确定此次感染性腹泻是由志贺氏菌污染饮用水引起的, 现将这起感染性腹泻病原学检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 样品采集采集就诊未用药患者大便标本或肛拭子标本8份、农村集中式供水蓄水池内水和末梢水各1份。

1.2 仪器与试剂恒温培养箱、生化培养箱、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、显微镜。 志贺氏菌增菌肉汤、麦康凯 (MAC) 琼脂、营养琼脂、半固体琼脂、缓冲蛋白胨水、四硫磺酸钠煌绿 (TTB) 增菌液、亚硫酸铋 (BS) 琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐 (XLD) 琼脂、三糖铁 (TSI) 琼脂、EC肉汤、亚硒酸盐胱氨酸 (SC) 增菌液、碱性蛋白胨水、庆大霉素琼脂、四号琼脂、伊红美蓝 (EMB) 培养基、乳糖蛋白胨培养液、EC-MUG培养基均为青岛海博生物技术有限公司生产的干粉及配套试剂, 在实验室按说明书配制使用;API20E生化鉴定试剂条由生物梅里埃公司提供;志贺氏菌属诊断血清由兰州生物制品所生产;所用试剂有效期内使用。

1.3 方法根据临床症状、流行病学调查, 对采集的所有标本进行霍乱弧菌、致泻大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌检验, 对采集的饮用水另做菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌四项生活饮用水微生物指标检测。依据WS 289-2008《霍乱诊断标准》[2]、2013年食源性致病菌监测工作手册:致泻大肠埃希氏菌检验标准操作程序[3]、GB4789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验 》[4]、GB4789.5-2012《食品微生物学检验志贺氏菌检验》[5]、GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》[6]规定的方法进行检测。

2 结果

2.1 生活饮用水微生物指标结果蓄水池水、末梢水的菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌检测值都超过了GB 5749-2006《生活饮用水卫生标准》[7]规定的限值, 结果详见表1。

2.2病原学检测结果所有采集标本经直接分离及增菌分离培养后, 未发现霍乱弧菌、致泻大肠埃希氏菌、沙门氏菌的可疑菌落, 其中5份患者大便标本和蓄水池水、末梢水样品在MAC平板、XLD平板上发现疑似志贺氏菌菌落。 (1) 可疑菌落特征:MAC平板:光滑、湿润、无色半透明的圆形较小菌落, 边缘整齐;XLD平板:光滑、湿润、粉红色半透明的圆形较小菌落, 边缘整齐。 (2) 形态观察:挑取可疑菌落经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性无芽孢、无荚膜杆菌。 (3) 生化试验:挑取可疑菌落接种到TSI、营养琼脂斜面和半固体上, 36℃培养24h后分别观察结果。TSI底层黄色, 斜面红色, 硫化氢阴性, 不产气;无动力。挑取可疑菌纯培养物接种到API20E生化鉴定试剂条, 不同样品来源的菌株得到相同的生化结果, API-Plus软件查询得出生化鉴定结果为志贺氏菌, API20E生化反应结果见表2。 (4) 可疑致病菌血清学鉴定试验结果:挑取可疑菌株纯培养物与志贺氏菌属诊断血清做玻片凝集试验, 结果为志贺氏菌四种多价血清 (+) 、福氏多价血清 (+) 、福氏Ⅱ型血清 (+) 、福氏3, 4群因子血清 (+) , 生理盐水对照 (-) , 与其他福氏型、群诊断血清均不凝集。样品经过增菌、分离培养和生化试验及血清学鉴定, 证实可疑菌株为福氏2a型志贺氏菌。

3 讨论

志贺氏菌是感染性腹泻常见的病原体之一[8], 引起的细菌性痢疾是一种高发病率的法定乙类传染病;人群普遍易感, 病后免疫力短暂且不稳定, 不同菌群及血清型无交叉免疫, 故易重复感染。菌痢通过消化道传播, 多为食物和饮用水污染引起。本次在患者大便标本和居民饮用水中都分离出福氏志贺氏菌, 由于县级疾病预防控制中心实验室不具备开展脉冲场凝胶电泳 (PFGE) 分子分型的技术和条件, 不能进行两者间分子溯源分析。但来源于患者大便标本中的菌株和来源于饮用水中菌株两者在菌落形态、生化反应、血清学凝集试验的结果是完全一致的, 根据临床症状、流行病学调查和实验室对样品的检测分析证实这起感染性腹泻是由福氏2a型志贺氏菌污染饮用水引起的。

本次调查中发现, 患者都为同一简易农村集中式供水工程用户, 居民有饮生水的习惯, 水源水为山泉水, 周围未做任何卫生防护措施, 用自来水管将水源水引流到蓄水池。蓄水池有盖, 但盖密封不完全, 打开蓄水池盖发现池内有很多泥沙、枝叶、昆虫肢体, 蓄水池水经自然沉淀后直接通过自来水管输送到用户。本次蓄水池水、末梢水的菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的检测值都超过了GB 5749-2006《生活饮用水卫生标准 》[7]规定的限值, 说明了居民饮用水受到了人和温血动物粪便的严重污染。有研究表明, 水性传染病的发生和传播与饮用水的卫生状况直接关联, 地表水源水容易受到人畜鸟禽粪便污染。据世界卫生组织调查, 人类疾病80% 与水相关[9], 因此饮用水的安全卫生应引起政府的足够重视。政府应该注重水源的保护, 采取有效措施净化水源地周围的环境卫生;加强农村安全饮水的健康教育宣传, 提升居民安全饮水认识, 提倡喝开水, 防止病从口入, 减少介水疾病的发生和流行;同时政府应该将农村安全饮水工程建设真正落实到位, 配备完善的消毒设施, 让农村饮水安全工程规范运行, 让老百姓用上卫生安全的饮用水。

参考文献

[1]林云, 沈珠明, 蒋卫平, 等.嘉兴市农村腹泻病卫生干预措施效果调查〔J〕.实用预防医学, 2013, 20 (11) :1343-1345.

[2]中华人民共和国卫生部.WS 289-2008霍乱诊断标准〔S〕.北京:人民卫生出版社, 2008.

[3]中国疾病预防控制中心营养与食品安全所.致泻大肠埃希氏菌检验标准操作程序〔M〕//2013年食源性致病菌监测工作手册, 2013:175-178.

[4]中华人民共和国卫生部.GB 4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验〔S〕.北京:中国标准出版社, 2013.

[5]中华人民共和国卫生部.GB 4789.5-2012食品微生物学检验志贺氏菌检验〔S〕.北京:中国标准出版社, 2013.

[6]中华人民共和国卫生部.GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标〔S〕.北京:中国标准出版社, 2007.

[7]中华人民共和国卫生部.GB 5749-2006生活饮用水卫生标准〔S〕.北京:中国标准出版社, 2007.

[8]朱平德, 张忠诚, 张传禄.桂阳县某学校感染性腹泻病原学检测结果分析〔J〕.实用预防医学, 2011, 18 (6) :1116-1117.

病原学检测分析 篇11

1 资料和方法

1.1 一般资料

192例住院患儿均经临床及X线确诊,其中支气管肺炎104例,毛细支气管炎39例,急性支气管炎36例,哮喘并肺部感染13例。男116例,女76例,年龄15 d~12岁。

1.2 标本来源

192例住院患儿于入院24 h内均采用低压吸引器接一次性吸痰管吸取呼吸道分泌物(6岁以上儿童用生理盐水漱口3次后用力咳出深部痰),置无菌试管内,立即送实验室进行细菌培养及药敏测定。

1.3 菌种鉴定及药物敏感试验

将标本接种于5%绵羊血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板,置35℃的孵育箱中培养18~24 h,采用法国生物梅里公司ATB Expression全自动微生物分析仪进行菌种鉴定及药物敏感试验。

2 结果

2.1 病原体种类及构成情况

192份标本共培养出细菌16种、197株,排在前4位的细菌分别为:肺炎克雷伯杆菌37株(18.8%)、大肠埃希菌29株(14.7%)、鲍氏不动杆菌22株(11.2%)、金黄色葡萄球菌19株(9.6%)。革兰氏阴性杆菌135株,占68.5%,革兰氏阳性球菌49株,占24.9%,真菌13株,占6.6%,且同一标本分离出2种细菌者5例,分别为肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌3例,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌2例。见表1。

2.2 常见细菌耐药情况

从药敏试验结果来看常见的几种革兰阴性杆菌对亚胺培南、哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、阿米卡星及喹酮类敏感性较好,耐药率低。常见的3种革兰阳性球菌对夫西地酸、万古霉素及喹酮类敏感性较好,耐药率低。见表2、3。

3 讨论

由于儿童免疫系统发育不完善,且儿科患者抗生素使用率高,故而使条件致病菌在儿童中感染率增高。本组病例均在门诊已用抗生素治疗,疗效不佳,产生耐药,重者产生菌群失调,致真菌感染。从197株病原体组成情况看,革兰氏阴性杆菌感染(68.5%)占重要地位,主要致病菌依次为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌及阴沟肠杆菌;而球菌较少,占24.9%;两者相比P<0.05,差异有显著性,与文献报道革兰氏阳性球菌感染明显增加不相符[2,3]。而支气管肺炎典型致病菌,肺炎链球菌检出率极低,占2.0%,真菌感染率占6.6%,其原因可能为儿童呼吸系统发育未成熟,正常菌群尚未很好建立,皮肤黏膜屏障功能低下,产生特异性Ig M的功能不足,免疫系统不完善和超广谱抗生素的应用杀灭了敏感细胞,破坏正常菌群,使真菌大量繁殖。

本文资料显示:位于前4种革兰氏阴性杆菌耐药率除鲍氏不动杆菌外,其他3种菌对既往耐药性低的二、三代头孢如头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟均产生了较高的耐药性,耐药率平均为58.6%,而肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对哌拉西林、头孢一代、二代、三代、四代抗菌药的耐药率>60%。文献[4]报道革兰阴性杆菌尤其是肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌可产生多种新的β内酰胺酶,导致细菌对哌拉西林、二代、三代头孢菌素产生耐药。我院肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希氏菌超广谱β内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)产生率较高(30%~40%),与马延和[1]报道珠海四家医院肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌产ESBLs率分别为25.9%和34.4%相符合。而对阿米卡星、头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林他唑巴坦及环丙沙星均有较高的敏感性(>80%);亚胺培南仍是敏感性最高的抗生素,但也有报道,肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南出现2.3%耐药率[5],值得引起重视。ESBLs是国际上研究最活跃的酶类之一。其主要特点是质粒介导,多由普通β内酰胺酶基因突变而来,主要由肠杆菌科细菌产生[6]。目前碳青霉烯类是对ESBLs最有效的药物,酶抑制剂也针对该酶,故这两类药物对大多数革兰氏阴性杆菌敏感性较好。革兰氏阳性球菌检出率24.9%,其中两种葡萄球菌对青霉素类、红霉素及复方新诺明耐药率较高,但对夫西地酸、庆大霉素及万古霉素又有较高的敏感性。肺炎链球菌对多种药物的耐药率达100%。由此提示小儿急性下呼吸道感染,青霉素不再有效,而倾向于应用三代头孢及青霉素复合剂(添加β内酰胺酶抑制剂)。氨基糖苷类及喹酮类药物虽敏感性较高,但由于其毒副作用限制了在儿科的应用。夫西地酸作为新型抗葡萄球菌感染药物,因不良反应极少近年来逐渐被应用于临床,且取得良好效果。

综上所述,临床合理使用抗生素是及时控制细菌感染、减少细菌耐药性的主要原则。对下呼吸道感染患者及时做病原学检查和药物敏感试验,根据药敏结果选择敏感抗菌药。但使用广谱抗生素时既要选择对致病菌有效,也要注意防止二重感染,避免过度使用抗生素,及时了解细菌分布及耐药情况[7],提高用药安全性与合理性,从而提高治愈率。

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