神话学家的书呆子气（精选3篇）
神话学家的书呆子气 篇1
摘要：目的 经腹腔和气管建立大鼠芥子气(SM)急性肺损伤动物模型,比较两种大鼠急性肺损伤模型细胞凋亡的差异。方法 选取Sprague Dawley大鼠136只,随机分为5组,正常对照组8只,其他4个组为腹腔SM组、腹腔丙二醇对照组、气管SM组、气管丙二醇对照组,每组32只。腹腔SM组腹腔内注入稀释的SM0.1 ml(0.96 LD50=8 mg/kg),气管SM组气管内注入稀释的SM 0.1 ml(0.98 LD50=2 mg/kg),正常对照组未做任何处理。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色和免疫组织化学法及电镜观察,判断细胞凋亡情况。结果 1腹腔SM组各时间段肺泡间隔TUNEL染色阳性细胞表达率较气管SM组增多(P<0.05)。2腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达率较气管SM组升高(P<0.05);腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2阳性表达率较气管SM组降低(P<0.05)。3腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9阳性表达率较气管SM组增多(P<0.05)。4电镜显示,染毒72 h,腹腔SM组和气管SM组Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮凋亡细胞形态特征为上皮细胞膜附着的微绒毛断裂缺失,排列紊乱;线粒体嵴模糊,粗面内质网表面附着的核糖体脱离,并游离于细胞质中。结论 SM经腹腔和气管染毒致大鼠急性肺损伤,通过内源性通道引发细胞凋亡调节异常,SM经腹腔染毒大鼠各项细胞凋亡指标比经气管明显升高,推测可能与SM腹膜腔的快速吸收有关。
关键词：芥子气,肺损伤,细胞凋亡
芥子气(sulfur mustard,SM)是一种最常用的化学武器,据统计其致伤率占所有化学武器的80%[1]。SM的主要靶器官是皮肤、肺、眼睛,其死亡率主要来自肺损伤和呼吸道病变[2]。SM中毒的病理生理机制相当复杂,涉及DNA和蛋白质烷化、酶功能失调、基因表达改变、氧自由基产生过剩和能量耗竭,导致细胞周期受阻,细胞凋亡或死亡,且所有阶段均伴随炎症反应[3]。SM诱导肺损伤与细胞凋亡密切相关,且细胞凋亡是SM诱导肺损伤的重要机制之一[4]。动物实验表明,SM经口服、皮肤、皮下、静脉、腹腔、气管途径均可致急性肺损伤,并且具有时间和剂量依赖性[1]。本实验通过建立高剂量SM经腹腔和气管途径致大鼠急性肺损伤模型,探讨其细胞凋亡的细胞和分子机制,为将来的干预性治疗奠定基础。
1 材料与方法
1.1 实验试剂与仪器
1,2-丙二醇溶液由天津致远化学有限公司提供,羊血清由北京中杉金桥生物技术有限公司提供,微波缓冲液自配,试剂由北京化工厂提供,Roche细胞凋亡试剂由瑞士罗氏生物科技公司提供,Bax、Bcl-2、活化的胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9试剂盒由北京博奥森生物技术有限公司提供,H-7500型透射电镜由日本日立公司提供。
1.2 实验动物与分组
健康雄性Sprague Dawley大鼠(SPF级,中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供,合格证号:0015902)136只,体质量280~300 g,年龄15周。
将大鼠分为腹腔SM组(32只)、腹腔丙二醇组(32只)、气管SM组(32只)、气管丙二醇组(32只)、正常对照组(8只)。SM液(纯度>90%)临用前用丙二醇稀释至所需浓度。①气管途径染毒动物模型建立:实验前气管SM组和气管丙二醇组皮下注射阿托品(0.05 mg/kg),30 min后腹腔内注射盐酸氯胺酮(100 mg/kg)实施麻醉,气管内注入稀释的SM 0.1 ml(0.98 LD50=2 mg/kg),气管丙二醇组注入丙二醇0.1 ml。②腹腔途径染毒动物模型建立:同上方法实施麻醉。腹腔SM组大鼠腹腔内注入稀释的SM 0.1 ml(0.96LD50=8mg/kg),腹腔丙二醇组注入丙二醇0.1 ml。正常对照组未做任何处理。
1.3 观察指标
1.3.1 制备石蜡切片与电镜观察
收集大鼠肺组织标本共136份,10%中性福尔马林溶液固定标本24 h,常规脱水、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,光镜观察。制备超薄切片:取新鲜标本1 mm3,用3%戊二醛液固定标本,别在70%、80%、90%和100%丙酮梯度脱水15 min,环氧树脂包埋,超薄切片,铀铅染色,透射电镜观察。
1.3.2 末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)法标记凋亡细胞
4μm石蜡切片,常规二甲苯脱蜡,0.3%双氧水H202处理10 min;1∶200的Proteinase K稀释液消化10 min;标记缓冲液末端转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,Td T)和异羟基洋地黄毒苷配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(digoxigenin-deoxyuridine triphosphate,DIG-d UTP)各1μl,加入18μl标记缓冲液,每片20μl,37℃标记2 h。封闭液每片50μl,室温处理30 min。抗体稀释液1∶100稀释生物素化抗地高辛抗体,每片50μl,37℃孵育30 min。抗体稀释液l∶100稀释链霉亲和素-生物素复合物,每片50μl,37℃孵育30 min。新鲜配制二氨基联苯胺显色液显色20 min,苏木素复染,0.01 mol三羟基甲胺-盐酸缓冲盐溶液(Tris-HCl buffer saline,TBS)终止反应,甘油明胶封片。以不加TDT酶作阴性对照,已知阳性切片作阳性对照组。
1.3.3 凋亡蛋白Bax和Bcl-2检测
免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。石蜡切片,常规二甲苯脱蜡,抗原修复,滴加兔抗大鼠Bax和Bcl-2单克隆抗体20μl/片,再滴加二抗,三乙烯二胺(triethylene diamine,DABC)显色,苏木精衬染,常规树脂封片。磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)代替一抗作阴性对照,用已知阳性切片作阳性对照组。
1.3.4 Caspase-3和Caspase-9检测
免疫组织化学法检测Caspase-3和Caspase-9的表达。石蜡切片,常规二甲苯脱蜡,抗原修复,滴加兔抗大鼠Caspase-3和Caspase-9单克隆抗体20μl/片,再滴加二抗,DABC显色,苏木精衬染,常规树脂封片。PBS代替一抗作阴性对照,用已知阳性切片作阳性对照组。
1.3.5显微图像分析
采用Image-Pro Plus 6.0病理细胞图像分析系统,将各组TUNEL标记及Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9免疫组织化学法染色切片行图像分析,选取测量参数,测定阳性率和强阳性率,每间隔1个高倍视野(400倍)选取1个视野进行观察,每张切片观察≥5个高倍视野,计算其肺泡间隔阳性细胞比率,肺泡间隔阳性细胞比率=5个高倍视野的阳性细胞数/细胞总数×100%,并计算其平均值。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±平均差(±s)表示,多组间比较用重复测量的多因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠肺泡间隔细胞凋亡情况
2.1.1 TUNEL染色
腹腔SM组6和24 h肺泡间隔凋亡细胞呈带状分布,48 h肺泡间隔凋亡细胞聚集成簇,72 h肺泡间隔凋亡细胞呈团簇状;气管SM组6、24、48和72 h肺泡间隔细胞凋亡聚集成簇;丙二醇和正常对照组凋亡细胞呈零星分布(见图1)。5组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,采用重复测量数据的方差分析结果:①腹腔和气管SM组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=18.479,P=0.000)。②腹腔SM组与其他4组的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=1 318.654,P=0.000)。③腹腔SM组与气管SM组的细胞凋亡阳性表达率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=4.623,P=0.000),呈递增趋势(见图2、3)。
2.1.2 Bax免疫组织化学法
腹腔和气管SM组6 h肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达呈带状分布,24 h肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达聚集成簇,48和72 h肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达呈团簇状;丙二醇和正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达呈零星分布(见图4)。5组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,采用重复测量数据的方差分析结果:①腹腔和气管SM组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=23.202,P=0.000)。②腹腔SM组与其他4组的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=490.828,P=0.000)。③腹腔SM组与气管SM组的细胞凋亡阳性表达率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=8.031,P=0.000),呈递增趋势(见图5、6)。
2.1.3 Bcl-2免疫组织化学法
腹腔和气管SM组6 h肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2阳性表达呈团簇状,24 h肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2阳性表达聚集成簇,48和72 h肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达呈带状分布。丙二醇和正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2阳性表达呈零星分布(见图7)。5组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,采用重复测量数据的方差分析结果:①腹腔和气管SM组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=211.833,P=0.000)。②腹腔SM组与其他4组的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=617.955,P=0.000)。③腹腔SM组与气管SM组的细胞凋亡阳性表达率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=134.574,P=0.000),呈递减趋势(见图8、9)。
A~D:6、24、48和72 h腹腔SM组肺泡间隔TUNEL染色呈阳性表达;E:正常对照组肺泡间隔TUNEL染色(箭头示阳性表达,Bars,20μm);F~I:6、24、48和72h气管SM组肺泡间隔TUNEL染色呈阳性表达;J:正常对照组肺泡间隔TUNEL染色(箭头示阳性表达,Bars,20μm);K~N:6、24、48和72h气管丙二醇对照组肺泡间隔TUNEL染色;O:正常对照组肺泡间隔TUNEL染色(箭头示阳性表达,Bars,20μm)
1)与气管SM组比较,P<0.05;2)与正常对照组比较,P<0.05
2.1.4 Caspase-3免疫组织化学法
腹腔和气管SM组6 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3阳性表达呈带状分布,24 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3阳性表达聚集成簇,48和72 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3阳性表达呈团簇状。丙二醇和正常对照组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3阳性表达呈零星分布(见图10)。5组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,采用重复测量数据的方差分析结果:①腹腔和气管SM组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=34.201,P=0.000)。②腹腔SM组与其他4组的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=759.817,P=0.000)。③腹腔SM组与气管SM组的细胞凋亡阳性表达率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=18.073,P=0.000),呈递增趋势(见图11、12)。
A~D:6、24、48和72 h腹腔SM组肺泡间隔凋亡蛋白Bax呈阳性表达;E:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bax表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);F~I:6、24、48和72 h气管SM组肺泡间隔凋亡蛋白Bax呈阳性表达;J:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bax表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);K~N:6、24、48和72h气管丙二醇对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bax表达;O:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bax表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm)
1)与气管SM组比较,P<0.05;2)与正常对照组比较,P<0.05
2.1.5 Caspase-9免疫组织化学法
腹腔和气管SM组6 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9阳性表达呈带状分布,24 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9阳性表达聚集成簇,48和72 h肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9阳性表达呈团簇状。丙二醇和正常对照组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9阳性表达呈零星分布(见图13)。5组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,采用重复测量数据的方差分析结果:①腹腔和气管SM组不同时间的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=24.755,P=0.000)。②腹腔SM组与其他4组的细胞凋亡阳性表达率比较,差异有统计学意义(F=2 087.109,P=0.000)。③腹腔SM组与气管SM组的细胞凋亡阳性表达率变化趋势比较,差异有统计学意义(F=10.844,P=0.000),呈递增趋势(见图14、15)。
A~D:6、24、48和72 h腹腔SM组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2呈阳性表达;E:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);F~I:6、24、48和72 h气管SM组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2呈阳性表达;J:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);K~N:6、24、48和72 h气管丙二醇对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2表达;O:正常对照组肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm)
1)与气管SM组比较,P<0.05;2)与正常对照组比较,P<0.05
A~D:6、24、48和72 h腹腔SM组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3呈阳性表达;E:正常对照组肺泡间隔Caspase-3表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);F~I:6、24、48和72 h气管SM组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-3呈阳性表达;J:正常对照组肺泡间隔Caspase-3表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);K~N:6、24、48和72 h气管丙二醇对照组肺泡间隔Caspase-3表达;O:正常对照组肺泡间隔Caspase-3表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm)
1)与气管SM组比较,P<0.05;2)与正常对照组比较,P<0.05
2.2 大鼠肺泡上皮细胞的超微结构变化
染毒72 h,腹腔和气管SM组大鼠Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮凋亡细胞形态特征:上皮细胞膜附着的微绒毛断裂缺失,排列紊乱;线粒体嵴模糊,粗面内质网表面附着的核糖体脱离,并游离于细胞质中,细胞核染色质正常。丙二醇和正常对照组肺泡上皮形态:细胞膜、线粒体、粗面内质网、细胞核染色质正常。见图16。
A~D:6、24、48和72 h腹腔SM组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9呈阳性表达;E:正常对照组肺泡间隔Caspase-9表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);F~I:6、24、48和72 h气管SM组肺泡间隔凋亡细胞Caspase-9呈阳性表达;J:正常对照组肺泡间隔Caspase-9表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm);K~N:6、24、48和72 h气管丙二醇对照组肺泡间隔Caspase-9表达;O:正常对照组肺泡间隔Caspase-9表达(箭头示阳性表达,Bars,20μm)
1)与气管SM组比较,P<0.05;2)与正常对照组比较,P<0.05
A:腹腔和气管SM组,Ⅰ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×20 000,Bars,1.0μm);B:腹腔和气管SM组,Ⅰ型肺泡上皮细胞(铅铀双染×10000,Bar,20μm);C:腹腔和气管丙二醇组,Ⅰ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×15 000,Bars,1.5μm);D:正常对照组,Ⅰ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×15 000,Bar,1.5μm);E:腹腔和气管SM组,Ⅱ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×10 000,Bar,2.5μm);F:腹腔和气管SM组,Ⅱ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×10 000,Bar,2.5μm);G:腹腔和气管丙二醇组,Ⅱ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×30 000,Bar,901nm);H:正常对照组,Ⅱ型肺泡上皮细胞(铅铀双染,×15 000,Bar,1.5μm);N:细胞核(nucleus);M:线粒体(mitochondrion);Ery:红细胞(erythrocyte);LB:板状小体(lamellar body);箭头示粗面内质网
3 讨论
细胞凋亡包括内源性(线粒体)和外源性(死亡受体)两种通路[5]。内源性通路启动经促凋亡分子(细胞色素C)从线粒体释放到胞浆内,导致Caspase-9激活,最后激活Caspase-3;外源性通路经细胞表面死亡受体诱导,刺激死亡结构域相关蛋白(adaptor Fas-associated protein with death domain,FPDD)和死亡结构域相关肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor 1A-associated via death domain,TRADD),依次激活启动因子胱天蛋白酶原-8、-10。FPDD/TRADD和Procaspaese-8,Procaspaese-10组合成诱导死亡信号复合体(death-inducing signaling complex,DISC),DISC能促进自身程序,启动Procaspase活化,激活胱天蛋白酶原-8、-10并从蛋白复合体中游离。Caspaese-8、Caspaese-10可直接激活下游Caspaese-3、Caspaese-7导致细胞凋亡[6,7]。Caspaese是一种关键的蛋白酶,在两种细胞凋亡通路中发挥重要作用[8]。内源性通路和外源性通路均需激活Caspaese-3,其是细胞凋亡中的效应因子[9]。在许多生物过程中,细胞的生存与死亡取决于线粒体表面的Bcl-2家族成员。Bcl-2家族蛋白由促凋亡(Bax、Bak、Bok)和抗凋亡(Bcl-2、Bcl-xl)蛋白组成,主要在线粒体水平调控Caspase活性[10,11]。Bcl-2和Bcl-xl可稳定线粒体的完整性,Bax和Bak则可使小细胞器丧失稳定性。当Bax激活时,可嵌入线粒体外膜内,引发细胞色素C释放和细胞凋亡。反之,Bcl-2表达过剩可抑制Bax激活,阻止DNA损伤和细胞色素C释放[12]。细胞凋亡还包括细胞核形态改变、凋亡小体形成、胞质凝聚、线粒体膜电位降低、细胞内酸化、丝氨酸磷脂酰基裸露于细胞表面、细胞皱缩、膜出泡[3]。SM可触发多种分子通路致肺损伤,包括氧化应激、细胞凋亡、补给失调、蛋白水解酶与抗蛋白水解酶失调、炎症、气道重塑、基因失调,导致细胞的完整性和功能丧失[13,14,15,16,17]。体内外实验研究表明,SM主要通过线粒体通路和死亡受体通路诱导细胞凋亡[2,4,8,18]。SM诱导的细胞反应相当复杂,还涉及3种丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路和核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路、P53和胱天蛋白酶-多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP,Caspase-PARP)通路、钙调蛋白通路[19,20,21,22]。许多学者研究发现,SM诱导细胞凋亡常与氧化应激、炎症反应、DNA损伤伴随,并与其伴随的反应程度呈正相关[23,24,25,26]。由此可见,在SM诱导肺损伤中,细胞凋亡是重要的分子和细胞损伤机制之一。
本研究通过TUNEL染色检测发现,腹腔和气管SM组肺泡间隔凋亡细胞数随时间延长呈递增趋势。腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡细胞阳性表达率较气管SM组明显增多(P<0.05)。免疫组织化学法显示,腹腔和气管SM组肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达随时间延长呈递增趋势,而凋亡蛋白Bcl-2则呈递减趋势。腹腔和气管SM组肺泡间隔凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9阳性表达随时间延长呈递增趋势。电镜显示,染毒72h,腹腔SM组和气管SM组Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮凋亡细胞形态特征为上皮细胞膜附着的微绒毛断裂缺失,排列紊乱;线粒体嵴模糊,粗面内质网表面附着的核糖体脱离,并游离于细胞质中。本研究结果提示,经两种途径致大鼠急性肺损伤中细胞凋亡是SM损伤机制之一,像炎症反应一样,与SM的暴露剂量和时间呈正相关[27]。同时证实,导致细胞凋亡的分子机制是经线粒体通路。体外实验发现,SM诱导细胞凋亡可通过线粒体通路和死亡受体通路,且两种通路之间存在着相互关联性[28,29]。笔者检测的凋亡蛋白指标显示,促凋亡蛋白Bax表达增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值增加,该比值的变化与TUNEL染色凋亡细胞逐渐增加趋势相符合。检测的凋亡蛋白酶指标提示,启动因子Caspase-9和效应因子Caspase-3均呈阳性表达,表明线粒体通路中Caspase裂解和触发作用被激活[30,31]。该凋亡蛋白酶的变化与RAY[8]和SOURDEVAL等[32]报道结果相同。电镜显示,SM诱导肺上皮细胞形态学变化主要在细胞膜、线粒体、粗面内质网。学者推测该损伤现象可能与线粒体膜通透性改变和线粒体膜电位降低及钙离子失衡有关[33,34]。由此表明,线粒体是细胞易损伤的微小器官和生物程序的主要调控点[11]。一旦线粒体损伤,则会激活多种促凋亡分子信号通路,有助于加速细胞的自我毁灭[35,36]。笔者认为,SM诱导细胞凋亡是多种因素作用的结果,其分子和细胞机制相当复杂,这种网络式调节通路尚未完全阐明。本研究结果显示,SM经腹腔和气管致大鼠急性肺损伤通过内源性通道引发细胞凋亡调节异常,SM经腹腔染毒大鼠各项细胞凋亡指标比气管明显升高,推测可能与SM腹膜腔的快速吸收有关。在经腹腔和气管造模剂量的选择方面,研究发现,SM腹腔注射引起的肺损伤较经皮下注射或口服途径染毒更严重[37]。当大鼠经腹腔注射SM剂量>10 mg/kg时,就会出现大鼠死亡[38]。显然笔者选择经腹腔和气管SM LD50相近的剂量建立急性肺损伤模型,SM肺损伤细胞凋亡的反应程度出现差异性,说明血液对SM的吸收可能占主导作用。本研究提示,在SM LD50相同剂量下,并非是经气管致肺损伤诱导细胞凋亡最重,为SM肺损伤的靶向干预提供有价值的参数。
神话学家的书呆子气 篇2
2、我可能不太适合做妈妈，总是被孩子气到失控，控制不住的愤怒的情绪，控制不住的眼泪。
3、时常觉得失败，没能把孩子带好，被孩子气到哭，气到崩溃，气到抑郁，想到对她们的付出让人沮丧，无奈。
4、教育这漫长之路太难了，每天被气得发疯，崩溃，无助，没被生活打败，却败给身上掉下来的一块肉。
5、被孩子气到疯，气到头炸，气到抑郁，但是在孩子眼里你就像个神经病一样，一点都不理解你。
6、被孩子气到想哭，气到崩溃，气到抑郁，气到想死，如果可以做个不用负责的母亲，真想一走了之。
7、时常觉得自己好失败，失败到连孩子都教育不好，被孩子气到哭。
8、有时的崩溃就在一瞬间，被孩子气到发疯，崩溃，最后还得自愈，太难了，快坚持不住了，好累，好累，真的好累。
9、深深体会到被孩子气疯，分分钟原地爆炸，气到脑壳疼，嗓子喊得咙沙哑，血压飙升。
10、被孩子气得想哭，气到崩溃，气到忧郁气到血压高，想出去走走，什么都不用管，瞬间感觉好累好累。
11、被孩子气到想哭，气到崩溃，气到抑郁，气到想逃离，如果可以做一个不负责任母亲，真想一走了之。
12、以为自己可以无比坚强，可终究还是败了，一拖二的生活让我疲惫不堪，痛苦不已。
13、时常觉得自己很失败，失败到连孩子都教育不好，被孩子气到哭，气到疯，气到炸，可能他们还会觉得你是一头发疯的野兽。
14、被娃气到哭，气到崩溃，气到抑郁，气到想死，但是在孩子眼里你就像个神经病像疯子一样，最后还得自愈。
15、带孩子久了，真的会发疯。成了孩子心中脾气暴躁的妈妈，老公心中的神经病。想出去走走又不知道去哪，更没地方可去。
16、生命在于折腾，美好的一天都是从被熊孩子气疯开始的，分分钟想原地爆炸，总是在奔溃的边缘不断试探。
17、被孩子气到发疯，气到抑郁，气到崩溃，控制不住自己的脾气，觉得孩子不打死，我也被气死。
18、被孩子气到疯，气到头炸，气到抑郁，但是在孩子眼里你就像个神经病一样，一点都不理解你！
19、有多少把气撒到孩子身上，然后又狠狠自责的，太多的无奈，只有自己知道，总之道不尽的心酸。
20、被孩子气到疯，气到抑郁，气到崩溃，控制不住自己的脾气，觉得孩子不打死，我也被气死。
21、有时崩溃就在一瞬间，被孩子气到发疯，无助，没被生活打败却败给身上掉下来的那块肉，教育孩子真的让我精疲力尽。
22、生命在于折腾，美好的一天都是从被熊孩子气疯开始的，分分钟想原地爆炸，气的胸闷。
23、作为妈妈感觉好失败，被孩子气到想哭，气到崩溃，气到抑郁，气到想死，如果可以做一个不负责任的母亲，真想一走了之！
孩子气的母亲作文 篇3
虽然我的母亲经常告诉我社会利益的决定，因为她的经验，我会叹息和悲伤。这位母亲有两面。
一方面，她在她的下属面前果断行事。职业女性的势头总是伴随着她们的势头。另一方面，家里的懒惰和孩子气。就像一个小孩子，他想出去散步，在沙发上看他的朋友圈。总是让我教她发图和游戏。在母亲节的下午，她就像一个没有礼物的孩子，愤愤不平地指着电视上的母亲的歌。你为什么不给我一份礼物呢?
陆先生的女儿给了她礼物。我微笑着说，我们是个好孩子，但假期。她很沮丧，我不再注意折纸花了。百度检查了许多花和丑陋。只有小白花才能看到。所以我用彩色折叠了六张白纸的餐巾纸。静静地站在沙发的角落里。我有一朵霸道的花。休想。休想。她似乎很生气，有点委屈。我把背后的大花拿出来，但她像看宝藏一样美丽。如果我不能说什么，她会拍花，并发送一些我小时候的照片。
过了一会儿，他骄傲地对我说，听着，有那么多人在评论。我很高兴看到她举起手机，拿着花。我也经常看着这样一个母亲，认为如果我妈妈像其他母亲一样努力工作，那就不仅仅是我妈妈。她是我母亲，她生气，被宠坏，但果断，独特。妈妈，谢谢你的工作，给了我一个独立和自由的空间。