卫生微生物检验技术

卫生微生物检验技术（精选11篇）

卫生微生物检验技术 篇1

我们按照由常见的病原微生物引起的突发公共卫生事件——突发性传染病, 及其常规检测技术、快速检测技术以及方法的比较做一综述。

1 鼠疫

鼠疫是一种烈性传染病, 传染性强, 病死率高, 易酿成大流行, 我国将其列入甲类传染病的首位。传统的检测方法是细菌培养, 所需时间较长。郭英等[1]用双 重PCR对24份患者 (后经血清学和分离培养确认为鼠疫) 的淋巴液进行检测, 阳性 22份, 起到了早期、快速诊断的作用。胶体金免疫渗滤试验 (GIFA) 检测鼠疫耶尔森菌也具有较好的特异性, 不与鼠疫以外的其他菌株发生交叉反应。最低检出限为214×105 CFU/ml, 等同于目前国家标准的反向间接血凝试验 (RIHA) , 而反应过程可在10 min内完成。王鹏等[2]在一次鼠疫疫区处理中利用胶体金试纸条及血凝法对49份自死鼠及10份疑似病人的血清进行检测, 2法均检出阳性脏器8份, 阳性血清3份, 试纸条与血凝法的符合率为100%;在敏感性上, 胶体金试纸条较血凝法高1个滴度。8份阳性脏器同时分离到鼠疫耶尔森菌5株。

2 霍乱

霍乱是一种烈性肠道传染病, 传统的检测方法是分离培养加血清凝集试验, 所需时间一般在24 h以上, 但急性病人水样便直接分离4号琼脂培养在6～8 h也可得到结果。PCR技术用于霍乱弧菌的检测已有不少报道, 最近黄世旺等[3]建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR技术, 检出限可达10 CFU/ml, 与副溶血性弧菌等无交叉反应, 整个过程仅需2 h。胶体金免疫技术在霍乱弧菌检验中也有一些报道, 有人将43份病人肛拭子标本经碱性胨水增菌培养6 h, 4份水样沉淀集菌后加碱性胨水增菌12～16 h, 做分离培养和胶体金免疫层析法 (GICA) 检测, 结果21份样品2种方法均阳性, 2份样品培养阳性而GICA阴性, 24份样品2种方法均阴性。经试验GICA检测霍乱弧菌的灵敏度为105 CFU/ml, 而培养法为104 CFU/ml[4]。另外, 基因芯片技术检测霍乱弧菌研究也有了一定的进展。

3 炭疽

李伟等[5]建立了检测炭疽杆菌芽孢的GICA, 检测炭疽杆菌芽孢的灵敏度为1×106 CFU/ml, 检测炭疽杆菌滋养体的灵敏度为1×107 CFU/ml, 用面粉、淀粉、奶粉等制成含炭疽杆菌芽孢的“白色粉灰”, 检测底线仍为1×106 CFU/ml。不与炭疽杆菌同属的蜡样芽孢杆菌等发生交叉反应。该法能在20 min内完成检测。但掺入腻子粉的环境样品由于腻子粉 (pH值为12) 的影响而使检测失效。李伟等[6]应用TaqMan荧光PCR定性定量检测炭疽芽孢杆菌, 用pag、cap、rpoB2基因克隆系列最低分别可检出2拷贝/μl、20拷贝/μl、2拷贝/μl, 灵敏度远高于普通PCR的106拷贝/μl、215×107拷贝/μl、107拷贝/μl。另外, 对炭疽芽孢杆菌基因芯片检测已有初步研究。

4 伤寒、副伤寒

沙门菌共有2400多个血清型, 我国已发现200多个。其中伤寒、副伤寒是严重危害人民健康的肠道传染病, 传统的培养法一般需3～5 d才能出结果, 而肥达试验早期诊断价值不高。丁华等[7]用金标免疫斑点法检测了138例早期伤寒患者血清中的抗伤寒抗体 (St-Ab) , 阳性率为81.12%, 但150例非伤寒患者的假阳性率为4%。伤寒、副伤寒LPS-PHA检测相应的IgM具有早期、快速、简便的特点, 但该方法的阳性率和假阳性率各报道差异较大。

5 痢疾

吴平芳等[8]建立了改良分子信标实时PCR快速检测该菌的方法。反应体系DNA灵敏度为93 fg/μl, 菌液灵敏度为64 CFU/ml或2 CFU/PCR反应体系。用该法对657份样品进行检测, 42份阳性, 其中41份细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h～1 d。

6 出血性肠炎

O157:H7大肠埃希菌是EHEC的一个主要菌型, 自1982年在美国首次被分离以来, 此菌在世界范围内发生过多次暴发, 并造成严重危害。郑桂丽等[9]建立了大肠埃希菌O157特异基因的PCR检测方法, 纯菌液检测灵敏度为60 CFU/PCR反应, 模拟混合菌液检测灵敏度为400 CFU/PCR反应。利用中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供的O157:H 7大肠埃希菌胶体金快速诊断试剂盒检测791份粪便标本强阳性标本, 91.18% (31/34) 可分离到O157:H7大肠埃希菌, 弱阳性标本5.47% (7/128) 可分离到157:H7大肠埃希菌, 100份阴性标本均未分离到O157:H7大肠埃希菌, 初筛阴性可基本排除O157:H7大肠埃希菌感染的可能性[10]。

7 人感染猪链球菌病

猪链球菌根据其荚膜多糖抗原不同, 可分为35个血清型 (1～34和1/2) , 最常见的致病血清型为2型。1968年, 丹麦首先报道了人感染猪链球菌病例, 以后又有许多国家报道了人感染该菌病例。我国大陆于2000年首先报道了1998年发生在江苏的25例人-猪链球菌感染性综合征。2005年6月10日—8月21日, 四川省共报告了204例, 死亡38例。张守印等[11]建立了检测患者血液标本中猪链球菌的PCR技术, 9份血培养阳性标本PCR检测全部阳性, 90份血培养阴性的疑似或临床诊断病人血标本9份阳性, 序列分析结果证实扩增片段为目的基因。该方法检测模拟标本 (细菌含量>103个/ml) 的敏感性为100%, 6种其他链球菌验证特异性为100%。

8 SARS

SARS的检测有病毒分离、IFA、ELISA、PCR等方法, 根据WHO资料, IFA法使用发病10 d后的血清所得结果比较可靠, 而ELISA法使用发病21 d后的血清所得结果比较可靠。用RT-PCR检测SARS冠状病毒基因片段已有很多报道。而赖建华等[12]研制了一张用于SARS冠状病毒诊断的基因芯片, 经35例临床诊断病例标本检测验证, 该基因芯片的粗符合率达94.9%, 检测灵敏度达到10-2/ml病毒分子。

9 人感染高致病性禽流感

1997年5月在香港发现了首例人类禽流感, 2005年10月中国大陆发现首例人感染高致病性禽流感病例, 目前已知感染人类的禽流感病毒血清亚型有H5N1、H7N7、H9N2。温乐英等[13]建立了人感染高致病性禽流感病毒H5N1的RT-PCR和real-timePCR检测方法, RT-PCR检测方法灵敏度可达1TCID 50, real-timePCR灵敏度可达0.1 TCID 50, 与人流感病毒H1、H3没有交叉反应。利用上述方法从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例。13例核酸检测阳性标本中有11例分离到病毒, 而2例病毒分离阴性者最后通过血清学方法得到了确诊。

10 病毒性肝炎

甲型和戊型病毒性肝炎是一种经粪—口途经传播的消化道传染病, 容易在一定范围内暴发流行。曲萌等[14]建立了一种可同步检测抗HAV-IgM、抗HEV-IgM的GICA, 检测灵敏度均为2 ng/ml。以EIA法为标准, 检测188份血清, 抗HAV-IgM灵敏度95.9% (47/49) , 特异性98.6% (137/139) ;抗HEV-IgM灵敏度91.2% (31/34) , 特异性100% (154/154) 。

11 流感

胡逢蛟等[15]对83份流感疑似病人含漱液用摇床吸附法微量细胞板短期培养荧光抗体染色和常规病毒分离作比较, 前者阳性34份, 后者阳性45份, 阳性符合率75%;后者38份阴性标本中前者阳性1份, 阴性符合率97%。而摇床吸附法微量细胞板短期培养荧光抗体染色法检测时间在24 h内完成, 达到了快速准确的目的。张怡明等[16]用荧光定量RT-PCR和MDCK病毒分离对12起群体性发热患者进行检测, 前者甲型流感病毒阳性6起15例, 后者5起12例。严菊英等[17]用RT-PCR对乙型流感病毒的HA基因进行检测, 灵敏度一次PCR可达1TCID50, 二次PCR可达0.1 TCID50。用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率比用MDCK细胞分离的阳性率更高。

12 诺瓦克样病毒性胃肠炎

诺瓦克样病毒 (NLVs) 是世界范围内急性流行性胃肠炎的重要病原体, 属人类杯状病毒科中诺瓦克样病毒属, 诺瓦克病毒是该属病毒的原型代表株。主要通过粪—口途径传播。我国在1995年首次从河南报道了腹泻患者中发现诺瓦克病毒。以后已有很多该病毒引起暴发事件的报道, 仅广州市2003年10—12月就发生暴发事件8起, 发病396例。在8起暴发事件中采集粪便标本76份, 用ELISA法检出阳性17份, 阳性率22.7%;RT-PCR法检出阳性36份, 阳性率47.7%[18]。靖宇等[19]对北京地区1109名门诊和体检者血样进行了诺瓦克病毒IgG检测, 发现2个月以下婴儿由于母传因素抗体阳性率达98.7%, 7～11个月的幼儿抗体阳性率最低为41.4%, 以后逐渐升高, 8、9岁时超过了98%。说明了诺瓦克样病毒在我国感染的普遍性。

13 登革热

范子凡等[20]利用美国Belmont公司生产的ELISA试剂检测183名登革热患者IgM, 其中取血时限在发病≤3 d者51例, 阳性18例, 检出率为35.9%;发病第4天者22例, 阳性18例, 检出率为81.2%;发病≥5 d者110例, 阳性99例, 检出率为90%。而最早产生抗体的时间是在发病后第1天。也有在暴发疫情中用RT-PCR检测登革热Ⅰ型病毒的报道。

近年来, 重大微生物突发公共卫生事件不断出现, 如SARS、人感染猪链球菌病、人感染高致病性禽流感等, 对社会公众健康造成了严重损害。应用快速检测技术尽快明确诊断, 是及时、有效地控制突发事件, 将损害降到最低限度的保证。在快速检测技术中, PCR技术、胶体金免疫技术发展较快。PCR技术具有灵敏度高、特异性强, 一般在几个小时内可以获得结果等优点。但该方法需价格较高的仪器设备, 限制了其在基层疾控中心的推广, 同时该方法必须在一定的实验室内完成, 无法在突发事件现场检测。胶体金免疫技术具有快速、简便, 一般在几分钟内可完成, 不需要特殊的仪器设备, 可在突发事件现场检测等优点, 但其灵敏度和特异性有待提高。基因芯片技术在微生物突发公共卫生事件检验领域仍停留在实验研究阶段, 真正用于实际工作中尚少见。

卫生微生物检验技术 篇2

A.直接涂片镜检，分离培养，生化反应和血清学试验 B.药敏试验，动物实验，生化反应和血清学试验 C.直接涂片镜检，分离培养，药敏试验，动物试验 D.直接涂片镜检，药敏试验，动物试验和血清学试验 E.染色镜检，药敏试验，动物试验和血清学试验 答案: A 解析: 医疗机构污水微生物样品应采集 A.各科室冲洗流入下水道的污水 B.患者使用后流入的污水 C.污水贮存池内的污水

D.该机构污水最终排放口的污水 E.手术室流出的污水 答案: D 解析: 能形成草绿色溶血环的细菌是 A.甲型溶血性链球菌 B.表皮葡萄球菌 C.炭疽杆菌

D.丙型溶血性链球菌 E.嗜血杆菌 答案: A 解析: 同一水源，同一时间采集多类检测指标的水样时，应先采集哪项指标的水样 A.挥发性酚 B.金属 C.有机物 D.微生物 E.放射性 答案: D 解析: 用于PCR实验的仪器称为 A.色谱仪 B.质谱仪 C.酶标仪 D.紫外透射仪 E.DNA扩增仪 答案: E 解析: 6 PCR是

A.补体结合试验 B.血凝抑制试验 C.聚合酶链反应 D.酶联免疫吸附分析 E.肥达反应 答案: C 解析: 不会使医疗机构污水中总游离余氯结果偏低的因素是 A.水样经强光照射 B.水样经过振荡 C.水样经过高温 D.水样立即检测

E.水样放置一段时间后检测 答案: D

这是2013年微生物检验技术考试原题，因为时间匆忙，刚刚整理完50道题，请考生关注我的空间或者百度“新浪博客 卫生资格考试”，另有复习指导书电子版免费赠！游泳池水细菌总数培是 A.36℃，24h B.37℃,48h C.28℃,24h D.28℃,48h E.44℃,24h 答案: B 解析: 醋酸纤维膜电泳主要用于 A.小分子多肽分离 B.抗原或抗体分离 C.免疫球蛋白分离 D.盐的分离 E.糖的分离 答案: C 解析: 生活饮用水采样后如不能立即检验，其保存温度和时间为 A.﹣2℃,4h B.﹣4℃,6h C.0℃,4h D.2℃,4h E.4℃,4h 答案: E 解析: 在做证实试验时，挑取蜡样芽胞杆菌在选择性培养基上的典型菌落的数目为 A.5个 B.10个 C.15个 D.20个 E.25个 答案: A 解析: 紫外分光光度计测量蛋白浓度采用波长是 A.190nm B.220nm C.250nm D.280nm E.300nm 答案: D 解析: 高速离心机的转速范围是 A.2000～9000转/分钟 B.5000～10000转/分钟 C.10000～40000转/分钟 D.10000～60000转/分钟 E.8000～50000转/分钟 答案: C 解析: 关于病原微生物实验活动管理，正确的是

A.从事病原微生物实验活动在单位应具有相应等级的生物安全实验室 B.生物安全三级，四级实验室应通过国家生物安全认可

C.生物安全一级，二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动

D.实验室从事与高致病性病原微生物有关的科研项目，无需生物安全实验室

E.实验结束后，非保藏机构应及时将病原微生物就地销毁或者移交保藏机构保管 答案: 解析: 分子筛层析法的原理是 A.凝胶介质形成多孔网状结构 B.介质带电荷不同 C.蛋白质的溶解度不同

D.蛋白质与介质吸附能力不同

E.蛋白质分子与其对应的配体异性结合 答案: A 解析: DNA用EB染色后，用何种光线激发观察 A.目光 B.荧光 C.可见光 D.紫外光 E.激光 答案: D 解析: 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的最佳范围为 A.10bp至50bp B.200bp至50kb C.500bp至100kb D.900bp至100kb E.1kb至100kb 答案: B 解析: 食品卫生微生物检验中，对进口食品的阳性检测样本保存期限是 A.3天 B.1个月 C.三个月 D.六个月 E.十个月 答案: D 解析: 在油性液体化妆品供检样品制备过程中，乳化条件是 A.28～32℃水浴中乳化 B.35～39℃水浴中乳化 C.40～44℃水浴中乳化 D.45～49℃水浴中乳化 E.50-54℃水浴中乳化 答案: C 解析: 对生活饮用水进行水质微生物检测时，采集样品的聚丙烯容器灭菌最常用的方法是 A.紫外线消毒 B.干热灭菌 C.巴氏消毒 D.高压蒸气灭菌 E.次氯酸灭菌 答案: D 解析: 副溶血性弧菌在三糖铁培养基中的反应不包括 A.底层变黄葡萄产酸产气 B.斜面不变色 C.不产硫化氢 D.有动力 E.不分解蔗糖 答案: A 解析: 关于化妆品微生物检验，错误的是 A.进口产品应为市售包装 B.产品应在有效期内 C.检验前样品应保存在阴凉干燥处 D.检验时从2个以上包装中取混合样品 E.检验时用样总量一般为5g或5ml 答案: E 解析: 民航飞机座舱内的臭氧主要来源是 A.大气环境 B.机内仪器 C.机内座椅 D.机内人员活动 E.乖客携带的行李 答案: B 解析: 做ELISA反应时，用酶标比色测定的指标是 A.激发光 B.透射光 C.滤光度 D.透光度 E.吸光度 答案: E 解析: 《医疗机构污水排放要求》GB18466-2001，规定经处理和消毒后的医疗机构污水需检测的指标不包括 A.总余氯 B.粪大肠菌群 C.肠道致病菌

D.结核病医疗机构增测结核杆菌 E.金黄色葡萄球菌 答案: E 解析: 在医疗工作中，对青霉素的耐药株高达90%以上的菌株是 A.链球菌 B.肺炎球菌

C.金黄色葡萄球菌 D.伤寒杆菌 E.四联球菌 答案: C 解析: 公共场所中无需进行细菌总数检测的是 A.空气

B.茶具，餐具 C.毛巾，床上卧具 D.理发用具

E.浴盆，脸（脚）盆 答案: 理发用具 解析: D 28 我国《病原微生物实验室生物安全条例》中对病原微生物的分类和危害等级的描述是 A.分为三类，第三类危险程度最高 B.分为四类，第四类危险程度最低 C.分为四类，第一类危险程度最低 D.分为四类，第四类危险程度最高 E.分为三类，第一类危险程度最高 答案: B 解析: 沙门菌检验中使用的增菌液TTB是指 A.缓冲蛋白胨水

B.亚硒酸盐胱氨酸增菌液 C.氯化镁孔雀绿增菌液 D.四硫酸钠煌绿增菌液 E.碱性蛋白胨水 答案: D 解析: 以下观察结果中，不符合志贺菌的是 A.在TSI琼脂上不发酵乳糖和蔗糖 B.在TSI琼脂上发酵葡萄产酸不产气 C.在TSI琼脂上不产H2S D.动力阳性 E.革兰阴性杆菌 答案: D 解析:

茶具及餐具微生物检测样品的测定中，错误的是 A.采用涂抹法采样

B.采样对象为清洗消毒后准备使用茶具或餐具 C.采样面积为25c㎡大小 D.口唇接触处

E.送检时间为4h以内 答案: C 解析:

采集自来水常用的中和试剂是 A.硫代硫酸钠 B.甘氨酸 C.卵磷脂 D.吐温-80 E.卵磷脂和吐温-80 答案: A 解析:

建立生物安全管理体系的主要目的不包括 A.防止病原微生物污染仪器 B.防止病原微生物污染环境 C.防止实验室发生意外事故

D.防止病原微生物实验者的自身感染 E.防止出现阴性实验结果 答案: E 解析:

关于实验室记录管理要求，错误的是 A.实验室记录可输入计算机或书面记录 B.可将记录保存于实验室供留底查询 C.输入计算机的记录应定期整理 D.书面记录保存5年后可销毁 E.相应的影像资料应长期保存 答案: D 解析:

关于食品采样的叙述，错误的是 A.用无菌刀、勺和无菌容器采样 B.每一个独立包装为一件 C.大样为一整批样品 D.中样为200g E.小样为25g 答案: B 解析:

单核细胞增生李斯特菌在哪个温度范围内易见到动力 A.37～42℃ B.35～37℃ C.20～25℃ D.10～20℃ E.0～4℃ 答案: 解析: C 37 医疗机构污水粪大肠菌群监测频率是 A.每周不少于1次 B.每月不少于1次 C.每3月不少于1次 D.每半年不少于1次 E.每年不少于1次 答案: B 解析:

在核酸电泳中，不同构象DNA泳动率通常是 A.线性＞切口环状＞超螺旋 B.超螺旋＞线性＞切口环状 C.超螺旋＞切口环状＞线性 D.线性＞超螺旋＞切口环状 E.切口环状＞超螺旋＞线性 答案: B 解析:

鉴定金黄色葡萄球菌重要的试验是 A.吲哚试验 B.嗜盐性试验 C.血浆凝固酶试验 D.链激酶试验 E.肝菌肽试验 答案: C 解析:

HEPA过滤器一般采取的消毒方式是 A.戊二醛 B.甲醛熏蒸 C.电离辐射 D.75%乙醇 E.氯己定消毒 答案: B 解析:

对流电泳试验中，常用的缓冲液是 A.巴比妥缓冲液 B.碳酸盐缓冲液 C.醋酸盐缓冲液 D.磷酸盐缓冲液 E.硫酸盐缓冲液 答案: A 解析:

微生物实验室常用的测定细菌浓度的仪器名称是 A.蛋白测序仪 B.紫外分光光度计 C.可见分光光度计 D.酶标仪 E.色谱仪 答案: C 解析:

对微生物实验室废弃物的处理，正确的做法是 A.高压蒸汽灭菌或干烤处理 B.化学消毒剂或干烤处理

C.阴性检测结果的标本不需处理可直接丢弃 D.高压蒸汽灭菌或化学消毒剂处理 E.仅化学消毒剂处理 答案: D 解析:

关于食品中粪大肠菌群检验的叙述，错误的是 A.采用多管发酵法 B.将处理好的检样接种乳糖胆盐培养基 C.将初发酵阳性培养物接种EC肉汤

D.将EC肉汤管中产气者分别转种于伊红美蓝平板 E.取典型菌落接种乳糖发酵管进行证实试验 答案: E 解析:

滤膜集菌法监测医疗污水的结合杆菌时，需要抽滤的样品量是 A.50ml B.100ml C.200ml D.300ml E.500ml 答案: C 解析:

检验食品中的志贺菌，首选的条件是 A.接种营养肉汤，36℃±1℃培养8h B.接种营养肉汤，36℃±1℃培养24h C.接种GN增菌液，36℃±1℃培养8h D.接种GN增菌液，36℃±1℃培养24h E.接种亚硒酸盐胱氨酸增菌液，36℃±1℃培养18～24h 答案: C 解析:

进行食品的小肠结肠炎试验时，所有的生化反应培养温度是 A.20℃ B.26℃ C.30℃ D.36℃ E.42℃ 答案: 解析:

下列不属于肠杆菌科的是 A.枸橼酸杆菌属 B.克雷伯菌属 C.爱德华菌属 D.鲍特菌属 E.肠杆菌属 答案: D 解析:

制备细菌外膜蛋白可用 A.SDS裂解 B.酚、氯仿作用 C.PEG6000作用 D.超声波破碎

E.SDS及氯仿作用 答案: A 解析:

关于离子交换层析法的叙述，错误的是 A.主要用于分离和纯化蛋白质 B.常用的介质是纤维素

C.原理是介质形成的筛孔网状结构 D.流动相是梯度离子缓冲液

高职食品微生物检验技术教学改革 篇3

关键词:食品微生物检验技术;高职教学;因材施教

食品微生物检验技术与食品理化检验、食品感官检验构成食品检验工的三大技能板块,是食品检验工作岗位群的职业素质基础之一。因此,食品微生物检验技术课程是高职食品类专业的职业技术核心课和专业基础课,是食品检验工国家职业资格考试中的主要内容之一。本课程具有很强的实践性、实用性和技能性,而且高职教育强调根据学生的学习特点进行教学,特别强调教学内容的实用性,以便学生走出校门就能适应工作岗位的需求。因此,在本课程的教学过程中要避免探索适合高职教育的教学方法。

高职教育是个系统工程,涉及学生的情商、智商以及习惯的改造,特别注重理论与实践的结合以及学生实践技能的培养。笔者在食品微生物检验技术这一课程的教学过程中进行了初步的探索和实践,获得了较好的教学效果,就此进行经验总结,抛砖引玉。

一、明确教学目标,模块化整合教学内容

食品微生物检验技术涉及面非常广,教学内容由多个知识点组成,这就要求教师必须非常清楚教学内容的详略点,精心把握教学内容,才能引导好学生。根据食品微生物检验的国家标准和实际工作的岗位需求,笔者认为,食品微生物检验技术是应用微生物学的理论和方法,检测食品中的菌落总数、大肠菌群及致病菌。为进一步确定这门课程的知识、技能和素质三个层次上的教学目标,具体来说,要求学生学完这门课程后,要达到的知識目标是:明白是什么(认识微生物的类群与形态)、怎么样(理解微生物营养与生长)、为什么(了解微生物对食品、食品工业及人体健康的影响)和怎么做(理解国内外食品微生物一些重要标准,理解食品微生物检验的基础知识);技能目标是能够出具一份合格的食品卫生学检验报告,能够“检得了、检得出、检得准、检得快”;素质目标是在生活、工作和职业生涯三个方面的素质有显著提高,转变日常生活中的卫生习惯,增强食品质量和安全观念,形成严谨、求实、耐心、细心的检验工作作风。

课程内容可以设置一系列案例或模块进行整合,使学生掌握微生物检验的基本原理和技术。一是让学生设计实验,判定未知菌革兰氏染色结果是否正确,引导学生灵活掌握微生物形态学知识和革兰氏染色技术,并且使学生意识到实验方案设计的严谨性;二是让学生对一种食品进行栅栏因子分析,可以使学生理解微生物生理学知识、掌握影响微生物生长的理化因素,将知识转化为能力;三是让学生判定平板上的单菌落是否纯,培养并设计实验验证,可引导学生掌握微生物培养的方法,并且理解微生物分离纯化和无菌操作的原理。

实训实验也可模块化设计:基本技能的训练及验证性等基础实验可设计为基本技能模块;综合性、设计性实验可启发学生,促其思考,由此锻炼其发现问题、研究问题、解决问题的能力,真正将所学知识融会贯通,这部分可设计为技能发展模块;研究性实验需要学生熟练掌握微生物基本知识和技能,可针对部分学有余力的学生,作为兴趣模块。

二、尊重学生差异,改进教学方法

一般认为,高职学生不大适应系统性的、理论性的学习,对较抽象的理论学习普遍有困难,而且高职学生知识积累有限,独立思考、自我学习和解决问题能力相对比较差;缺乏学习主动性和自觉性,业余活动丰富,自我约束能力不强;容易受短期目标驱动;中学阶段所养成的视考试分数为“命根”的观念较根深蒂固。高职学生存在的这些现象给我们的启示是:教师可以通过及时反馈学习效果,让学生慢慢由“不知道自己不知道”转变到“知道自己不知道”,如此可较好地满足他们追求短期目标的心理,增强学习目标性和自主性。且理论学习效果的反馈可以通过及时公布平时的作业成绩来实现,实践技能学习效果的反馈可以通过实验操作过程中的巡检点评和实验报告来反映,教师也可以利用网络平台在班级QQ群公布平时成绩、小组实验成绩等。

高职学生在写作业和实验报告中常见的问题是缺少思考,抄袭现象严重。解决这一问题可以通过量化的方法来避免,即教师要事前告诉学生判罚规则:两个同学的作业或报告,一句话中有连续七个以上的字相同,就可以判定为抄袭,作业成绩需判为最低等级。并且,要求在写作业和实验报告时,凡是在书上和网络上摘抄的文字必须简洁,鼓励学生用自己所掌握的术语、行话来准确描述、分析和解答问题,要让学生们清楚,工作岗位需要的是会思考的人。

三、采用挫折教学法,强化实验训练技能

学生在这门课程的实训实验中常见的问题就是不愿意动手,眼高手低。实际上每个操作都具有丰富的知识内涵,需要学生多动手才能深刻体会。针对学生这些问题,除了强调要进行技能考试之外,还需要合理安排实验内容。因此,我们安排了标准溶液细菌、真菌总数计数和标准溶液中大肠菌群计数这两个独立的实验,并且最后一次实验安排的是综合实训:要求学生检查一种食品产品中的细菌数、真菌数和大肠菌群数。最后一次实验是前面所有技能的综合练习,学生即使失败,也有重新再来的机会。这也是学生经历“挫折—反思—提高”的一个过程,通过“理论—实践—再理论—再实践”的循环,激发学生掌握知识的渴望,强化学生对技能的理解和掌握,让学生体会到经过自己努力后,尝到成功的乐趣,看见自己的进步。

四、开展团队合作,促进生生互助

高职院校一般是大班上课,40人一个班,就实际情况来看,高职院校教学资源基本比较紧张,每次实验都是大班开课、多人一组,一般3人一组进行实验,教师很难同时注意到实验室中每位学生的表现,也不利于培养学生的动手能力。针对这一情况,我们开展了团队活动,借助麦肯锡的“高效团队”构建方法,即:为数不多的成员、互补的技能、共同的业绩目标、相互承担责任,采取小组实验成绩代替个人成绩的方法,每次实验采取小组实验结果和业绩的方式来进行考评,促使团队成员相互提醒、协作,有效提高了团队各成员的学习效果。

(作者单位:中山市火炬职业技术学院)

参考文献:

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[2] 罗雪云, 刘宏道. 食品卫生微生物检测标准手册[M]. 北京:中国标准出版社, 1995.

[3] 朱宏飞. 微生物教学中激发学生兴趣的几点探索[J].微生物学通报,2007,(1).

卫生微生物检验技术 篇4

1 准备阶段

1.1 建立运行全面的质量控制体系

实验室应该按照“领导重视、全体干部职工积极主动参与”的要求, 依据GB/T17025-2008《检验和校准实验室能力的要求》、《实验室资质认定评审准则》 (国认实[2006]41号) 等实验室管理的标准, 建立和运行全面的质量控制体系, 并以质量体系文件的形式, 由中心

1.2 制定突发公共卫生事件检验质量控制方案

突发公共卫生事件检验要求快速反应、迅速应急, 因此, 突发公共卫生事件微生物检验质量控制方面, 应根据疾病预防控制中心突发公共卫生事件应急预案, 及微生物检验的固有特点制定质量控制方案, 在突发公共卫生事件应急处置时一并实施, 确保事件应急微生物检验既快速反应, 又保证检验质量。质量控制方案应该涵盖从样品采集到检验结果输出整个检验过程中对微生物检验结果有影响的所有环节和因素, 其中, 检验人员的能力和技术水平、仪器设备、实验室环境、样品的采集、实验耗材、实验过程等, 应成为质量控制的重点。

1.3 分析前的质量控制

分析前的质量控制是整个质量控制过程中的重要环节, 它为后面分析过程的控制打下了良好的基础, 包括:

1.3.1 人员培训和控制

突发性公共卫生事件对于检验人员的素质要求非常高, 要求所有检验人员要有扎实的专业知识和娴熟的实验技能, 还要有高度的责任感和实事求是的工作作风, 以及对工作严肃认真负责的态度, 最大限度地避免误差, 确保结果科学、准确、公正, 而且还必须有合法的资质, 因此, 除了应具备相应检验专业学历背景、掌握和了解了基本的理论知识外, 均应参加相应的专业培训, 取得《检验员证》, 平时应积极主动学习新的检验方法、新的理论, 并要灵活运用, 加强实践操作训练, 实现理论与实际工作的完美结合, 特别是要掌握突发公共卫生事件相关的应急检验技术。同时还要不断加强职业道德修养。实验室应配备足够的检验人员, 微生物检验人员的工作岗位应用研究相对固定。

1.3.2 仪器设备分析前的质量控制

在分析过程所有要用到的仪器设备应定期检修、保养和维护, 保证仪器设备、设施正常, 并处于良好的状态, 标识清楚;计量仪器应在检定/校准的有效期内使用, 做好仪器设备的期间核查和运行检查工作, 保证仪器设备的量值溯源。无检定方法的计量仪器, 应定期采用比对、校核等有效的方法进行验证, 确保仪器设备检测结果准确有效。冰箱、恒温箱、培养箱、水浴箱等温度控制以及恒温室设备, 要用经检定合格的温度计进行每天24h温度连续监控, 确保有效的温控条件;高压灭菌器、干热灭菌器、紫外线消毒灯、无菌室、洁净室、超净工作台、生物安全柜等, 也要实施有效的监测。所有的维修、维护、监控、监测均应做好记录, 确保溯源性。

1.3.3 实验器皿分析前的质量控制

微生物检验所需的各种器皿 (如试管、吸管、培养器等) 必须洗刷干净, 不得有洗衣粉等表面活性剂的残留, 否则会抑制微生物的生长繁殖。吸管、移液管等具有计量功能的玻璃仪器应定期检定/校准。实验前玻璃器皿应采取可靠的方法灭菌处理, 一般采用干热灭菌法在160℃电热干燥箱中维持2h达到灭菌目的。总之是尽量减少可能对分析中有影响的污染成分。

1.3.4 药品、试剂及染色液分析前的质量控制

微生物检验用的各种药品、试剂、染色液和干粉培养基等实验室耗材必须是有资质的专业厂家生产的产品, 质量必须符合有关的质量标准, 购买时必须从有资质的供货商购买, 必须进行索证 (资质证、本批质量合格证等) , 验收时严格按标准验收, 必要时进行实验验证, 严格把关。染色液和试剂配制应严格按GB/T4789.28—2008标准规定进行操作。配制好的备用试剂、染色液等应标识清楚, 按规定的条件保存, 在有效期内使用。并按要求做好药品、试剂、染色液等的配制记录, 保证检验数据的可朔源性。

1.3.5 定期开展实验室间比对和能力验证活动

实验室应定期参加上级或有关实验室组织的实验室间能力比对和实验室能力验证活动, 特别是参加不同类别的突发事件微生物检验的能力比对/能力验证活动, 当结果不满意时, 及时查找不满意原因, 并采取纠正措施, 及时改正, 通过开展这些活动不断提高微生物检验的能力。

1.4 样品采集的质量控制

1.4.1 制定采抽样方案

突发公共卫生事件的样品是突发公共卫生事件应急检验工作的对象, 样品质量的好坏直接关系到能否检出致病因子及其含量, 为保证样品的质量, 必须根据每一类突发公共卫生事件的性质、疾病的临床特点, 制定突发公共卫生事件微生物样品采抽样方案 (或采样计划) [2]。一般要求突发事件微生物样品的采集必须全面, 尽可能覆盖所有可疑环节、物品和因素, 防止遗漏;样品必须具有典型性, 尽可能采到反映事件 (疾病) 特征的典型性样品, 揭示出突发事件的真实情况, 否则检验结果即使再准确也会失去检验的价值;应按事件病因调查等的需要采样, 避免采样的主观性、随意性, 一方面应防止盲目扩大采样范围, 把与事件无关的样品也进行了采样, 而无畏增加检验工作量, 另一方面也应防止随意缩小采样范围而遗漏样品;样品的数量应尽可能满足检验、复验、复查的需要。

1.4.2 采抽样控制

突发公共卫生事件样品的采集一般应由取得《采样员证》的预防医学专业人员实施, 必要时检验人员参与。样品的采集对象、采样部位、数量, 由现场采样人员根据现场流行病学调查初步掌握的事件的类型、性质、影响范围和检验的目的, 依照突发公共卫生事件采抽样方案确定。如果检测目的是检测产品的质量, 一般应采取完整未开封的样品;如果是中毒事件, 一般应采患者呕吐物、腹泻物、洗胃液、灌肠液、血液、尿液、吃剩的食物、饮用水, 中毒餐次食物原辅料、砧板、刀具、未经清洗处理的食物存放容器、加工环境、加工人员体检样品等;如果是传染病疫情, 一般采患者的痰、咽拭子、血液、尿液、脑脊液、吐泻物、分泌物、皮肤、水泡、脓疱、泡囊液, 死亡患者的病变组织肺、肝等器官组织, 等。微生物样品采集必须在无菌操作下进行, 采样的用具应预先经灭菌处理。怀疑细菌感染时, 应尽量在急性发病期和使用抗生素之前采集患者标本, 作病毒分离和病原检测的标本, 应在发病初期和急性期采集。

2 检验项目和检验方法的确定

2.1 检验项目的确定

突发公共卫生事件应急检验排查的方向和侧重点及各类样品的检验项目, 一般由参加现场调查处理的预防医学专业的技术人员, 根据本次突发事件的患者的流行病学调查资料 (如患者症状、体征、特征性的表现、重点怀疑的疾病、重点怀疑致病因子等) 综合确定, 并与实验室检验人员进行良好的沟通。

2.2 检验方法的确定

突发公共卫生事件应急检验方法的确定需要检验人员在与现场调查的预防医学专业人员进行良好的沟通, 准确而充分的了解现场的情况, 了解患者的特点、了解检验的目的需求 (检验项目等) 和采集的样品的状况等基础上, 根据自身实验室的仪器设备、技术人员、检测试剂等条件确定。检验人员应高度重视, 反应敏捷, 寻找最优检测方案, 仔细排查。检验方法的选择, 必须优先考虑现行有效的国家标准规定的标准检验检测方法;对于没有国家标准方法的, 可采用行业标准、地方标准规定的方法;对既无国家标准, 也无行业标准、地方标准的, 应尽可能采用国际国内同行通用的或普遍认可的、知名的技术组织或权威期刊公布的方法, 也可采用国际国内有关科技文献的方法, 即非标方法, 如需采用非标方法, 应是经本单位事前评审、确认并经技术负责人批准的方法。

3 分析阶段的质量控制

所有实验室都会遇到的问题大概是在各种仪器处于良好的运行情况之下, 在计量标准有效期之内, 结果分析也可能会出现误差。在这所有环节中, 各个微生物检验实验室要在整个分析过程都严格按照有关操作规程要求操作, 尽量减小实际工作中可能出现的机器或人工随机变化误差。

3.1 检验环境条件的质量控制

微生物实验室一般应设有试剂室、无菌室、培养室、洗涤室、消毒室等。实验室要光线足够, 通风良好, 应设置感应自来水笼头、洗手池和固定的消毒设施。无菌室要设有套间或缓冲间, 最好设有推拉门, 以防止空气振荡, 配超净工作台、生物安全柜等。实验室清洁卫生及消毒工作应符合微生物检验室规范要求, 严格执行无菌操作, 避免环境对实验的污染、实验室之间的交叉污染和实验室感染的发生。应有严格的质量管理制度, 每天坚持做好环境卫生和相关消毒工作, 定期对环境进行检测, 以达到质量控制的要求。对污染物品及废物, 应经过消毒灭菌后才可清洗或废弃, 防止污染环境。应按要求做好个人防护, 严格进行人员控制, 非实验室人员禁止入内, 确保实验室安全。

3.2 样品管理的质量控制

突发事件采集的样品要及时送实验室检验, 越快越好, 尽量缩短从采集到开始检验的时间, 送检运输的过程要求在规定的条件进行, 防止微生物灭失、受到污染或污染环境、物品及人员。对一些有特殊要求的样品要在特殊的条件中送检, 如:脑膜炎奈瑟氏菌或淋病奈瑟氏菌等检验的标本放置在适宜温度条件下运送, 粪便标本常加入甘油缓冲盐水保存液 (弯曲菌和弧菌除外) 。若是3级或以上病原微生物样品, 应严格密封, 两人以上以最快工具专车运送。样品的受理、留样、保管、流转、制备、处理等环节也应进行控制, 所有样品应设唯一性标识, 标识清楚, 保证样品符合检测工作要求和检验保管期间不损坏、不丢失、不混淆、不发生非正常的损坏和变质。当样品送到检验室时, 每一流转交接环节都应根据要求的检验项目逐次核对, 验收样品的外观、包装状态及样品有无破损、流失、变质、污染, 是否符合检验要求等。

3.3 培养基的质量控制

培养基质量的高低直接关系到微生物的培养, 购入新批号干燥培养基时, 应用已知标准菌株作质量鉴定, 符合要求方可使用。培养基的配制应在玻璃容器内配制, 一般不得与铜、铁制器皿接触, 否则会影响培养基质量。配制时应严格按照GB/T4789.28-2008标准规定进行操作。配制好的培养基必须进p H值的调节, 适宜的p H值是微生物生长、繁殖的基本条件, 一般用1mol/L的Na OH和HCl溶液进行调节。培养基配制好以后, 应立即进行必要的灭菌处理, 一般采用湿热灭菌法, 即高压蒸汽灭菌器, 121℃灭菌20~30min, 某些含糖及特殊成份不耐热的培养基采用115℃灭菌15~20min。配制培养基应有培养基配制记录。配制好的培养基应达到一般质量要求[3]:培养基应做好明确标记与配制日期;液体培养基应清澈;含倒管者, 倒管内应液体充盈, 无气泡;固体培养基应保持适当的硬度, 接种前无菌落;不定期抽样检查p H值, 要求在规定的p H±0.2内;有指示剂的培养基要保持应出现的颜色;倾注琼脂平板的体积一般为15m L, 斜面不超过2/3;无菌分装的培养基应在培养箱 (36℃) 过夜, 无菌生长才能使用, 高压灭菌培养基应随机抽样5%~10%作无菌试验。培养基应放在适当温度下保存, 需在有效期内使用, 使用时观察培养基是否变质。

3.4 标准菌株的质量控制

检验用的微生物标准菌株的来源应来自于专门供应菌株的权威保存机构, 也可来源于溯源清晰 (有证书) 的上级业务机构, 要求所有标准菌株均可溯源, 验收、确认、传代、复活、储存、使用、废弃等严格执行菌株管理的有关规定, 每支标准菌株应有标签、标注名称、标准号、接种日期、所传代数、并做好确认实验, 做好实验记录, 以确保标准菌株符合要求, 保证检测结果准确有效。

3.5 诊断血清的质量控制

购置实验室诊断血清时, 应购买有资质的合格的厂家生产的合格产品, 从有资质的供应商处进货, 应索取有关的资质证件、本批次合格证等资料, 应记录诊断血清的名称、包装数量、批号、失效日期、生产厂家以及合格供应商联系方式、收到日期及收货人姓名, 并检查基本特性是否异常等, 必要时做验收实验, 以验证产品合格有效, 严格把关。在规定的条件保存, 在有效期内使用。

3.6 检验过程的质量控制

实验室要对检验检测全过程的所有步骤和环节进行质量控制和规范管理, 包括样品的选取、增菌、制备、接种、培养、检测、观察、实验记录等, 全过程都应严格遵守各项实验的操作规程, 严格执行无菌操作, 防止操作污染, 在方法规定的条件培养、检测。对每类检验项目每次随机抽取一定数量的样品作平行样测定。并做好阳性对照 (如同时使用标准菌株) 、阴性对照, 确保检测结果、数据的准确、可靠和有效。检测的过程要及时记录, 实时记录, 防止事后补记, 记录要清楚, 能够再现实验时过程。

4 结果处理阶段

在检测工作完成之后, 应及时对检测数据、记录进行核对, 判断我们检测的结果数据是否是可靠、可信和准确。一旦发现检测结果数据可疑, 应立即查找原因, 采取纠正预防改进措施, 防止错误的发生, 并按单位质量体系文件规定进行重复检测等。检验原始数据核对无误后, 应及时对检测数据进行统计分析和处理, 及时编制、出具检测结果报告, 有关人员复核无误、授权签字人签字批准后, 及时发出。

综上所述, 在突发公共卫生事件的处理过程中, 微生物检验质量控制意义重大, 一方面规范的质量控制体系, 能够保证所出具的检测结果准确、可靠、有效, 同时也使检验结果变得有理有据, 可以作为一个评估标准;另一方面, 准确、可靠、有效的检验数据对突发公共卫生事件的有效处置及受伤害人员的医疗救治都有着明确的指导作用。各相关微生物实验室应健立和运行全面的质量控制管理体系, 健全突发公共卫生事件应急预案和微生物应急检验的相关技术方案, 开展全方位的质量控制工作, 确保检验结果数据公正、科学、准确、有效。

参考文献

[1]李明育.实验室中食品微生物检验质量控制概述[J].中外医疗, 2012, 32 (5) :175-176.

[2]王陇德.现场流行病学理论与实践[M].北京:人民卫生出版社, 2004:209-242.

卫生微生物检验技术 篇5

[关键词] 微生物；食品；检验

文章编号：1004-7484（2014）-03-1756-02

微生物污染造成的食源性疾病仍然是世界食品安全中最突出的问题[1]。目前，已经有很多致病菌和水源致病菌。由食源性致病菌，如沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌等引起的病例越来越多。由于食品微生物污染的广泛发生，严重影响人民的健康，因此食品微生物检验工作对评价食品卫生质量，保证消费者饮食卫生有着极为重要的作用，并且研究特异性更强、灵敏度更高、简便快捷的食品安全检测技术和方法，建立和完善食品安全微生物检测技术和体系迫在眉睫。为了更好地开展食品微生物检验和调查研究工作，提高食品的卫生质量，保证消费者饮食安全，本文对微生物的检验技术在食品检验中的研究动向进行详细的介绍。

1 微生物检测技术在食品检验中的特点

1.1 食品微生物检验的范围较广包括 ①引起食品腐败变质的微生物；②经食物传播的病原微生物，是人类疾病病原微生物、畜禽疫病的病原微生物、人兽共患传染病病原微生物。这几类微生物可达数百种；③食品工业微生物，如酿造发酵工业用霉菌酵母等曲种、保健食品中双岐杆菌、乳酸菌等。在食品微生物检验中，采集样品极为重要。因此采样品必须有代表性。

1.2 食品微生物检验需要准确、快速。

1.3 食品中微生物检验具有数量观念。诊断食物中毒仅作定性试验是不够的，还需对致病菌定量检验。

1.4 因为食品中待分离的细菌较少，而杂菌有相对的比较多，所以对待检验的细菌的检验工作就有比较大的干扰。

1.5 对食品中的微生物检验有一定的法律性质。

2 微生物检测在食品检验技术的应用

2.1 电阻抗技术 ①电阻抗法：电阻抗法是近年发展起来的一项生物学技术，已经开始应用于食品微生物的检验[2]。②微量生化法。人们增加了对细菌快速检验的要求，所以高精度和高重现性试剂就有了飞速的发展。现在常用的MICRO—ID、API等。③快速酶触反应及代谢产物的检测。快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细菌快速诊断。④放射检测技术。

2.2 采用分子生物学技术 其又包括两种技术：

2.2.1 核酸探针技术 根据碱基互补的原则，用特定的方法测定标记物。其优点是①特异性；②敏感性。但探针检测技术中也存在一定的问题，如检测一种菌就需要制备一种探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；探针检测是分析基因序列，对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测。

2.2.2 聚合酶链式反应（PCR）技术 其原理为通过加热使双链DNA经裂解成两条单链，成为引物和DNA聚合酶的模板；然后降低温度，使寡聚核苷酸引物与DNA分子上的互补序列退火。一般情况下退火温度越高，扩增特异性越好。测定PCR产物的方法较多，如凝胶电泳法、比色测定法及化学发光测定法等。

2.3 采用仪器法 ①流式细胞术（FCM）。用流式细胞仪对细胞悬液进行自动快速定量分析和分选的新技术，根据FCM检测到的荧光强度强弱与DNA片段的大小成比例，根据荧光浓度的就可以知道细菌的DNA指纹图谱，从而确定细菌的种类。②全自动微生物检测法。其优点在于全自动操作，所有样品的结合、洗涤、基质读数及报告说明等都是全自动操作；快速测定，可以同时对60-480个样品进行分析，并且鉴定时间只需2-3h，这是效率非常高的一个检验系统，并且也是今后食品微生物检验技术发展的一个方向。③ATP生物发光法。ATP生物发光法快速，甚至可以将细菌计数时间缩短至几分钟[3]，操作简便、灵敏度高，具有其他微生物快速检测方法不可比拟的优势，曾被称为是检测环境中微生物最方便可靠的方法[4]。④免疫磁性微球。这种技术不仅仅只在医学领域方面得到应用，在食品微生物的检验方面也能见到。由于食品的样品检验多为固液混合体，所以采用常规方法很难将少量的微生物提取出来。⑤电阻电导检测器。这种方法的工作原理是当细菌进行繁殖时，将蛋白质、各种糖类等大分子物质分解成氨基酸、有机物等相对小一些的物质，在就培养液的电导度进行一定的改变，这样，根据电阻和电导度的变化，就可以计算出被检验样品的含菌数是多少。

总之，我们在对食品微生物检验时要遵守职业道德，严谨科学态度，注意各个环节来确保微生物检验数据的准确性，为食品卫生和安全提供可靠的依据。并且随着现代技术的发展，今后食品微生物检验技术的发展方向会是：①采用快速和大批量的检验方法，来提高检验效率；②形成标准化的实验条件；③提高和保证检验的精度和灵敏度。

参考文献

[1] 王云国，李怀燕.食品微生物检验内容及检测技术[J].粮油食品科技，2010.3.

[2] 张洁梅.食品微生物检验技术的研究进展[J].现代食品科技，2005，21（2）：221-222.

[3] 舒柏华，孙丹陵，王胜利，等.肉类食品细菌污染生物发光快速分析技术研究[J].中国公共卫生，2003，19（4）：483-484.

卫生微生物检验技术 篇6

关键词：食品卫生,微生物检验,菌落总数,方法

近年来,人们越来越重视食品安全问题,国家相关部门加大了对食品安全进行监管的力度,测定食品中微生物菌落总数是检验食品是否合格的一个重要途径,其检查结果的准确性直接关系到食品安全[1,2]。为进一步对食品微生物检验中菌落总数测定的有效方法进行探讨,本次研究将我科待检的样品120份作为研究对象,分别应用平板菌落计数法、菌落总数试片检测法、TTC培养基法进行检验,分析检验结果,以总结能够提高结果准确率的检验方法,现将研究报道如下:

1 资料及方法

1.1 研究资料

在我科待检的食品样品中选择120份作为本次研究对象,120份样本均来自于本疾控中心管理辖区内食品加工厂。平板菌落计数法应用平板计数琼脂培养基进行检验,生产厂家为北京陆桥计数有限责任公司;菌落总数试片检测法应用菌落总数测试片进行检验,应用3M petrifilmTM细菌总数测试片,由美国3M公司生产;TTC培养基法生产厂家为北京陆桥计数有限责任公司,TTC琼脂按照体积比100:1的比例在琼脂中加0.5%的氯化三苯四氮唑(TTC),浓度是0.005%。

1.2 测定方法

1.2.1 平板菌落计数法

按照国标GB4789.2-2010进行检测,应用无菌操作取出25g(液体25ml)样品,放到装有225ml生理盐水的无菌锥形瓶中,均质摇晃,使其混匀,用lml的无菌吸管吸取1:10样品匀液1ml,沿着试管壁缓慢注入到盛有生理盐水9ml无菌试管内,振荡试管,使其混匀,得到1:100的样品液,按照相同的方法分别制备比例为1:1000与1:10000的样品液。根据样品污染的程度,选择2～3个适宜稀释度的样品匀液,分别吸取1ml,将其注入到直径为9cm的无菌平皿中,同时分别吸取1ml空白稀释液于两个无菌平皿中,作为空白对照,及时将温度为46℃的计数琼脂培养基15ml注入到平皿中,对平皿进行转动,使其混匀,琼脂凝固后,对平皿进行翻转,将其放到36℃±1℃的温度中进行(48±2)小时的培养。

1.2.2 菌落总数试片检测法

把先前已经准备好的测试片放在水平的台面上,去除附着于纸片的薄膜,应用与平板菌落计数法相同的方法制备不同稀释度的样品液,各吸取1ml样品液均匀涂于测试片中央,将盖膜盖好,见培养基凝固后,将纸片压紧,让样品均匀分布于纸片上,每个稀释度样品各进行2片接种,将其放到36℃±1℃的温度中进行(48±2)小时的培养。

1.2.3 TTC培养基法

以国际测定标准为参照,将lml浓度为0.5%的TTC溶液置入100ml琼脂培养基内,制备为TTC琼脂培养基,浓度为0.005%,接种与培养方法均和平板菌落计数法一致。

1.3 数据处理

通过SPSS19.0统计学软件分析以及处理本组研究数据,通过卡方检验组间计数资料的对比,计量资料比较采用t检验,组间数据对比差异明显,具备统计学意义以P<0.05表示。

2 结果

平板菌落计数法检测合格率为90%,菌落总数试片检测法检测合格率为90.8%,TTC培养基法检测合格率为91.7%,三种方法检测合格率比较没有明显差异,不具备统计学意义(P>0.05)。详见表1。

3讨论

当前,人们生活水平日渐提高,食品安全问题得到了人们的广泛关注,但在近年来,我国食品安全问题频繁出现,对人们身体健康造成了严重威胁。在加工、储存等过程中,食品可能接触到各种微生物,致使食品变质,因此,相关部门需要注重食品中微生物的数量的检测,及时发现不合格的食品,并进行处理,为食品安全提供保障[3]。

在对食品中微生物学菌落总数检测中,常用的方法有平板菌落计数法、菌落总数试片检测法、TTC培养基法三种,三种方法的检测结果没有较大差异,各有优势[4]。本次研究也证实了这一点,本次研究结果显示,三种方法检测合格率分别为90%、90.8%、91.7%,三种方法的检测合格率比较没有明显差异,没有统计学意义(P>0.05)。综上所述,在进行食品卫生微生物菌落总数检测时,相关检测中心可根据具体的检测要求、检测技术等为依据,选择合适的检测方法,以提高检测结果的准确率。另外,为了进一步保证检测结果的准确性,检测中心还需要从以下几个方面人手,对检测质量进行有效控制:(1)注重检验人员操作水平的培养,使检验人员怀着严谨的态度与崇高的责任心进行检测工作,保证检测工作的规范性。(2)对实验室内的环境进行严格控制,尤其是培养皿湿度与温度的控制,减少环境对培养皿造成的影响,并定期对检测仪器、设备等进行校对,保证得到更为准确的检测结果[5]。(3)注重培养基与试剂质量的控制,将其储存于干燥、通风的环境中,如需冷藏,则应该控制好温度,定期对培养基与试剂的生产日期进行检查与记录,超出使用期限则不得再使用,避免因培养基与试剂过期而导致检测结果不准确的现象出现。

参考文献

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食品微生物检验技术分析以及发展 篇7

随着科技和知识水平的进步,食品微生物检验技术向着更加全面与完善的趋势进行。目前对食品微生物检验的主要内容为污染指示菌和致病菌,而检验的技术已经在传统检验方法的基础之上有所提升。食品微生物的污染是由多种原因造成的,包括出产的环境和原料中菌落的数量等。绝大多数的食品都含有一定数量的有害微生物,只要保证其在安全值以内,这些微生物就不会对食品造成负面影响。而如何检验这些微生物以及未来的发展趋势将是本文的研究重点。

食品微生物检验内容

检验污染指示菌

第一,对食品中同一菌落的细菌总数以及所有菌落的细菌总数进行检测,方法为对食品和生活饮水取样后处理,经过相应条件的培养之后,取1 cm3的样本进行检测,判断食品和生活饮水的污染程度。

第二,对食品样本进行环境培养,温度为37℃,时间为1 d,如果发酵后产生了乳糖和气泡以及兼性厌氧无芽孢菌,则证明样本中含有大肠菌群系,这种细菌主要来自于人和牲畜的排泄和排遗产物,因此常以粪便的培养指标评价食品的卫生状况。

检验致病菌

对于致病菌的含量,我国早已做出明确的要求,当超过标准时,就判定该食品的卫生状况不符合要求。在研究食品的卫生要求时,除了对指示菌进行检测之外,还要对致病菌进行检测,例如金黄色葡萄球菌和沙门菌等常见致病菌。

食品微生物检验技术

电阻抗法

当对细菌进行培养时,它们会在繁殖的过程中产生大量的碳水化合物、蛋白质和脂类物质。因此,对培养基内的这些物质进行检测,通过检测结果计算食品内细菌的含量,由此就可以判断食品是否符合卫生标准。细菌代谢所产生的上述物质均具有电活性,并且均为小分子物质。因此,通过对培养基进行导电处理,测量导电后的电阻数值,就可以基本计算出细菌代谢产物的含量,进而计算出细菌的数量。当然,此方法具有一定的局限性,只能用于对部分细菌的含量进行检测。例如霉菌或大肠杆菌等细菌。

快速酶触反应法

细菌在生长和繁殖时,往往会合成并释放较为独特的酶,例如各类抗生素的主要成分。而不同细菌所释放的酶具有不同的特性。因此,通过对菌落产生的酶进行检测就可以判断该培养基内的菌落成分和细菌种类。最常用的工具是微生物测试片,该工具具有方便、快速的优势,并且能够准确测定细菌总数。

借助仪器法

常用的仪器有两种:微型全自动荧光酶标分析仪和全自动微生物分析系统。微型全自动荧光酶标分析仪采用敏感性很强的检测设备,并运用了特异性的酶联荧光技术,所得荧光数据和抗体中的抗原含量呈正比;全自动微生物分析系统可以同时分析数十个乃至数百个样本,功能非常强大,并且,检测鉴定只需耗时3 h以内,效率极高。

食品微生物检验的发展趋势

代谢学技术

新陈代谢是生命的本质,每种生物都具有自身独特的新陈代谢特点。因此,利用代谢学技术可以非常准确地测定食品样本中的微生物种类及含量。代谢学主要研究食品中的微生物在培养基内繁殖之后的产物,该产物会对培养基的成分乃至状态、外观都产生一定的改变。现在普遍运用的电阻抗法和快速酶触反应法都是代谢学技术所涵盖的范围。因此,通过进一步提升代谢学的相关理论研究和技术水平,就能发展更多、更有效、更快速的检验方法。

抗体检测法

这是当前比较常用的检测方法,目前已经趋近于完善,因此该技术将在不久的将来发挥更重要的作用。根据检测的原理,抗体检测法分为酶联免疫吸附法和乳胶凝集反应法两种。酶联免疫技术有利于识别免疫检测法的特异性,而乳胶凝集反映的原理是吸附聚集抗原体和大颗粒的乳胶。

免疫检测技术

此技术是以免疫学理论为基础,融合抗原体特异性的理论对抗原体进行识别和结合反映。由于抗原分子的质量较高,人们就可以利用这些大分子作为载体,结合小分子合成抗原,以此测定食品微生物的含量和类型。

分子生物技术

分为核酸探针技术和聚合酶链式繁育技术。前一检验技术利用了脱氧核糖核苷酸分子中的碱基特异性,后者则利用不同细菌在遗传物质上的不同,通过基因探针技术进行检测。

结语

临床微生物快速检验技术研究进展 篇8

1免疫学在临床微生物快速检验抗原和抗体中的应用

免疫学是生物学的一个大分支, 其讨论的是生物的免疫反应, 在生物生病或健康的时候免疫系统的免疫反应。在临床微生物快速检验技术中应用免疫学技术, 可以帮助简化鉴定步骤, 加快检验速度, 提高检验准确度。这种检验方法已经逐渐成为微生物检验室最常用的快速检验微生物的方法。这种方法中应用了各种形式的免疫分析, 如放射免疫分析、荧光免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、生物发光免疫分析等, 这些技术足够检验出临床标本中的少量微生物, 省去了培养病毒和细菌培养的过程, 节省了检验时间, 提高了检验效率。像荧光抗体检测、抗血清凝集技术、酶联免疫测试技术、协同凝集试验等方法的操作都比较简单, 已经广泛被应用在细菌的鉴定和分型中, 例如隐球菌、沙门菌、流感嗜血杆菌及霍乱弧菌等都可以在短时间里鉴定出来[4,5]。全自动的免疫分析仪器的制造过程中应用了酶联免疫技术, 使微生物的检验更加准确, 更加快速。

2分子生物学技术在快速检测微生物中的应用

分子生物学技术是一门从分子水平探讨研究生物本质的新兴医疗科学, 分子生物学把生物大分子在细胞信息和遗传信息传递中的功能和生物大分子的组成结构作为研究对象。分子生物学广泛交叉渗透于其他科学技术中。分子生物学的发展研究为人类认识世界, 了解生物现象做出了很大贡献, 为人类改造生物、利用生物提供了广阔的前景[6,7]。分子生物学的发展非常迅速, 这使得临床微生物的检验不再仅仅局限于研究微生物的外部特征和生理特征, 也可以研究微生物的分子结构, 甚至是核酸结构。研究微生物的分子结构和核酸可以使临床微生物的检验从生化和免疫等方法转变为基因检测法。分子生物学应用在临床微生物的检验中, 聚合酶连反应和核酸杂交技术都具备快速、敏捷、特异等优点, 并且该技术已经开始于临床微生物的快速检验中广泛应用。基因芯片技术是一种新兴技术, 其特点是检验效率高, 样品需求量少, 这种技术的应用为临床微生物的检测灌入了新的活力。因为近几年微生物的耐药性能越来越高, 甚至有的细菌出现了多重耐药特征, 而基因芯片技术可以帮助检测出细菌的耐药基因, 这样就可以针对检验出的耐药基因, 做出抑制其生长繁殖的抗生素药物, 从而提高了检测效率, 增强了治疗效果。但是基因芯片技术仍然有许多缺点, 如成本太高, 芯片的敏感度, 芯片的特异性等, 这些缺陷都限制了基因芯片技术在临床微生物检测中的应用[8]。

3细菌专有酶和其代谢产物在临床微生物快速检验技术中的应用

快速酶触反应指依据微生物在其生长过程中可以合成、释放的特异性酶, 按照特异性酶的特点选择出适合的指示剂和底物, 并将其配制于合适的培养基中, 再根据微生物反应后发生的颜色变化, 分离出可疑菌株, 其反应后的测定结果可以帮助提高微生物的诊断速率。这种技术可以将生化反应和传统的细菌分离方法结合起来, 并且可以直观地看到检验结果[8,9]。这一技术将成为以后临床微生物快速检测研究发展的一个主要方向。

4细菌毒素在临床微生物快速检验技术中的应用

细菌的毒力大小是指细菌致病性的强弱, 而毒素则是细菌毒力的物质基础。毒素包括外毒素和内毒素, 其中外毒素是在细菌的生长过程中排出, 而内毒素是细菌细胞壁的组成部分, 所以内毒素只有在细菌破裂、死亡、菌体自容时才会被释放。检验员可以在临床标本中提取毒素, 这样会比培养细菌更可信[10,11]。梭菌可以在正常肠道中出现, 所以针对抗生素的相关性肠炎检验, 检验其毒素往往比培养细菌更有作用。现在, 英国的Unipaih公司已经研制出了可以检验VT-l和VT-2的VTEC的PRLA乳胶凝集试剂, 进行检验时可以用多粘菌素来裂解菌体, 释放出毒素VT, 再在U形板中与乳胶试剂一起温育24 h, 用肉眼来判定是否凝集。金黄色的葡萄球菌可以产生多种肠毒素, 也可以用单抗协同凝集技术快速检验出, 所以这是诊断金黄色葡萄球菌导致中毒的有效手段。

5生物分子传感器在临床微生物快速检验技术中的应用

最近几年, 生物分子传感器在临床化学、生物医学、微电子学、生命科学等领域都受到了重视。生物分子传感器是一种将新兴传感器技术与分子诊断技术结合起来的新技术, 这种技术为临床诊断开拓了一个新的发展方向。生物分子传感器广泛应用于药物筛选、诊断感染病等领域中。DNA生物传感器是生物分子传感器中最常见一种。据相关资料表明, 如今最新的生物分子传感器仅需要20 s时间就可以检测出天花病毒、SARS病毒、炭疽杆菌等[12,13]。生物分子传感器的应用, 达到了临床微生物检测的快速准确的目标。

6病原微生物的自动化系统在临床微生物快速检测技术中的应用

最近, 随着计算机科学技术的发展, 临床微生物快速检测技术也向着自动化、系列化、微量化的方向开始发展, 开辟了临床微生物快速检测的新领域。目前, 最有代表性的病原微生物的自动化系统是AMS微生物自动分析系统, 该自动化系统可以实现常规的检测和鉴定, 检测需要的时间为4～8 h[14,15]。病原微生物的自动化系统在临床微生物快速检测技术中的应用使得检验的效率大大提高, 准确度也得到了提升。

7小结

食品微生物检验技术教学改革探析 篇9

一、教学内容改革

(一) 授课内容改革

根据食品营养与检测专业的培养目标、岗位能力要求、食品微生物检验技术课程标准, 结合行业企业专家意见和对人才的需求, 围绕食品微生物检验岗位所需要的知识和能力要求进行分析, 突出岗位技能为核心, 确定课程内容以岗位技能性知识为主, 重点解决学生专业技能的掌握。在掌握传统实验方法的基础上, 有重点地让学生学习和了解新的检测方法进展, 开阔他们的视野。大肠杆菌是食品中的重要和常见致病菌。在大肠杆菌的检测方面, 不仅介绍传统的多管发酵法和滤膜法, 同时也让学生了解酶底物法、聚合酶链反应技术、免疫检测技术和化学发光法。

(二) 学生主体参与方式改革

在教学过程中, 有意识地适当延长学生主体参与的课堂时间, 相应缩短教师的时间, 让课堂成为学生的思考、讨论和岗位技能操作的主战场。应该指出的是, 缩短教师的教学时间并不代表着上课时间老师不作为, 相反, 教师应给予学生以一定的实验方法与策略的指导和辅导, 同时与学生一道成为探究的主体, 最大程度地激发学生的主动性, 使学生真正成为教与学的主体。

(三) 实验教学内容改革

传统实验教学过程中学生往往依赖思想严重, 仅按照教师的要求按部就班地执行, 不明白相关原理和关键操作步骤, 这不利于学生的综合能力的培养和创新能力的发挥。改革后, 老师对班级进行小组分组, 让每个学生在实验小组参与实验方案的商定, 并且制定不同的实验对象, 再对每个小组的实验方案进行检查和纠正错误。通过这种分组实验的改革, 不仅可避免了整个班级的实验内容重复, 相互抄袭, 而且大大提高了学生做实验的积极性。例如鼓励学生会结合日常的生活, 把辣椒酱、薯片、甜品等小食带到实验室进行微生物检验, 也有些学生把自己平时喜欢的方便面等带到了实验室进行检验。实践表明, 分组实验改革后, 学生的学习成绩明显提高。

二、教学方法改革

传统的教学方法往往侧重于教师的讲解和安排, 忽略了学生的探索和互动, 即由教师给出实验目的、实验仪器以及实验的方法, 然后由学生根据老师的指导和安排进行实验。改革后的做法是注重学生的自主、独立和创新能力的培养, 让学生参与到实验设计和方案制定中, 使学生由以往的被动听课, 变为经过质疑、分析、判断、概括等认知活动获得结论。

(一) 应用为主, 理论必须, 突出岗位能力培养

针对食品微生物检验技术课程强调应用技能和实际操作能力的特点, 在教学过程中着重应用相关理论指导学生的微生物检验技能实践, 让食品微生物检验技术的理论融入食品微生物检验的项目技能训练中。以国家食品检验职业标准为依据组合内容, 以食品微生物检验操作技能为明线, 以微生物学理论知识为暗线, 将食品微生物学的理论知识融入食品微生物检验的各项操作之中。在教师示范指导下, 通过“理论知识预习→教师讲解实验技巧和注意事项→学生动手实验→老师检查和纠错”的段螺旋式反复强化训练, 突出学生职业能力培养。

(二) 多媒体教学提高微生物检验教学质量

在微生物检验技术教学过程中适当使用多媒体, 可显著提高学生微生物检验感性认识。微生物学检验实验中, 有相当一部分内容涉及微生物形态学, 如菌落形态、显微镜下不同微生物的形态特征等。利用多媒体教学可形象、直观、高效地让学生掌握上述内容。此外, 还可以利用多媒体将关键实验步骤以及学生容易犯的检验操作错误拍成录像演示给学生看, 以便于教师在课堂上纠正学生典型错误。我们发现利用多媒体教学对杀菌锅的使用和无菌接种技术进行示范, 学生掌握相关知识更快。

(三) 案例教学法提高学生参与感和积极性

案例教学法是一种以案例分析和探讨为基础的教学法, 教师在教学过程中扮演着设计者和激励者的角色, 鼓励学生积极参与案例讨论, 不像是传统的教学方法, 教师是一位很有学问的人, 扮演着传授知识者角色。我们通过收集、整理过往教学、实际生产检验工作、互联网的微生物相关检测的实际案例和视频资料, 并组织学生对关键或错误的操作环节进行讨论, 调动了学生的参与感及积极性, 提高学生的主观能动性, 取得了良好的教学效果。

三、课程考核方案改革

在考试成绩组成比例方面, 改变传统以试卷考试和理论知识考试为主的做法, 突出以“应用为主, 理论必须”的原则, 采用实验考核+试卷考核两种方式结合, 既有利于学生引导学生提高实际技能, 又可以防止作弊蒙骗过关现象。实验考核, 主要考察学生实验的动手能力、实验过程中良好的实验习惯、实验数据的分析处理能等几个方面;试卷考核主要围绕食品微生物学基本理论知识、食品微生物检验技能、实验过程中的注意事项等为主。结果表明, 绝大多数同学的岗位技能提高, 成绩优秀。

参考文献

[1]赵广英, 励建荣, 邓少平等.食品质量与安全专业食品微生物学检验教学改革体会[J].食品科学, 2004, 25 (12) .

卫生微生物检验技术 篇10

关键词：职业教育医学检验实训教学

职业教育以培养学生的职业能力为本位[1]，同时兼顾理论知识学习，以便通过相应的资格考试，获得行业准入资格[2]。生物化学检验是一门实践性、技术性、应用性很强的学科，作为医学检验专业的主干课程。在职业教育中，不仅要培养学生的动手操作能力和创新实践能力，同是也要强化对生物化学检验中重要检验原理的认识和理解，为通过资格考试奠定基础。因此，开展生物化学检验实训教学不仅要注重学生实践动手能力的培养，同时兼顾对经典检测理论的学习和再认识[3]。本文对生物化学检验实训教学的现状进行分析，并结合职业教育的特点提出相应的对策，为优化实训教学提供思路。

1.生物化学检验实训教学现状分析及存在的问题

1.1 实训教学内容与临床实际脱节

目前，生物化学检验实训教学基本是实训老师完成实训准备，学生在两节课内完成某一个单项检测，而临床检测是组合检测。例如，在肝脏疾病的检验中，实训教学安排分3个实训：谷丙转氨酶测定、总蛋白测定、白蛋白测定，这样教学安排虽然保证实训内容可以安排在相应的理论教学后，但实训项目安排存在时间间隔，导致实训内容的连贯性性欠缺，知识的连续性和总体分析问题的能力遭到破坏，以致学生难以建立对实训结果的综合分析的能力。在医院的临床生化检测中，上述的3项均属于肝功能组合检验，标本同步操作分析，综合分析检测项目的数据，才能为临床诊断提供依据。这种差异导致学生参加工作后，无法对检查结果的合理性进行分析与审核，对在学校的学习产生怀疑。

1.2 生化实训方法与临床方法脱节

现在，生物化学实训教学中，基于成本控制的考虑，实训项目选择的实训方法以手工法为主。随着科技的进步，生化检测自动化程度越来越高，甚至某些医院已经启用生化一体机。虽然不同医院的生化检测自动化程度存在差异，但生化分析仪使用的实训方法基本是速率法。学生在实训教学中无法体验自动化的优点及无法在自动化越来越高的生化检测中的对自身的定位，难以认可自身在职业中的价值，由此导致学习积极性降低[4]。

因此，现行的实训教学培养的学生刚到医院上班时，较难适应临床工作，对自身价值认可度低，对前途和个人发展充满困惑。

2.应对措施

2.1 实训教学内容尽量与临床接轨

在原来实训教学内容安排的基础上，通过教学调节把实训课集中在一个上午或者下午，甚至一天，参照医院检验科的操作，把同类实训项目组合在一起，例如把总蛋白、白蛋白、胆红素和ALT、AST、C，.GT、ALP等组成肝功能组合，把血清钾、钠、钙、氯化物组合成电解质分析，把血清尿素、肌酐、尿酸组成肾功能组合，让学生在一个模拟检验科操作环境下对标本进行综合分析，增强他们的综合分析能力和项目测定安排次序能力，提高其工作效率，做到实训教学与医院临床接轨。在进行综合性实训教学时，如血脂分析，让2名学生设计方案，讲究效率和协作，共同完成2个标本的检测；实训操作时，讲解完实训后，利用几分钟时间分析一个实训小组在实训过程中哪些操作通过相互配合、合作可以节约时间、提高工作效率等。通过这些措施增强学生一方面和临床接轨，另一方面也是培养学生的团队合作精神。

2.2 了解自动化检测流程，强化人的价值和作用

针对学生在自动化检测面前对个人价值认同的迷失，可以安排学生到医院检验科，请检验科主任讲解工作安排和人员分配情况，实地观察医院工作中的分工与合作，通过观察临床生化检验的工作流程，了解人在自动化检测面前，人的职责和价值。例如：全自动生化检测仪在检测过程中，出现报警情况，工作人员需要如何处理。面对仪器报警，仪器本身是无法处理的，需要工作人员根据报警提示，同时结合检测原理及影响因素，对仪器的报警做出综合的判断后，才能采取最正确的处理。通过亲自观察，不仅熟悉自动化检测的流程，也让学生对自己的价值和作用得到认可，这比单纯的说更能有助于学生的成长。

2.3 开放实训室，增强对学生独立能力和绦合能力的培养

针对实际工作中毕业生独立操作能力和综合能力缺乏的情况，我们利用课余时间开放实训室，一方面，加强学生的基本操作技能训练，提高其动手能力；另一方面，让学生轮流参与实训准备过程，如试剂的配置、保存和摆放，仪器设备的摆放、调试和实训后的整理工作，以及废液、污染物的处理工作，通过定期开放实训室、实训操作基本技能训练及相关知识介绍，不断增强学生的动手能力和独立能力，开放实训室得到了学生的认可和好评。

2.4 增强对学生玩代化仪器操作技能操作训练，使其了解生化如验新还展

面对教学设备与医院生化仪器的差距，我们首先立足予学院的实训设备，让学生掌握常见仪器的基本结构、测定原理和编程、操作；然后到医院收集各种不同厂家、型号、功能有别的生化仪器的操作说明书和结构图，整理成册，作为学习资料让学生了解，使其增加见识，并进行综合分析，使学生明白各种同类型的生化仪器，无论其厂家、型号、先进程度怎样变。但其基本结构和测定原理是不变的，只是功能的增减，操作程序大同小异，测定误差大小有别而已；同时，我们安排学生到附属医院和教学医院，请检验科经验丰富的检验人员讲解现代化大型生化仪器的结构、测定原理、操作规程、参数设置、日常维护等情况，例如全自动生化分析仪、血气分析仪、急诊生化分析仪和电解质分析仪等，增长学生的见识，增强其对现代化仪器的了解，满足时代发展的需要。

通过上述应对措施，我们从各方面加强实训教学，提高学生的实训操作水平，培养其团队合作精神，增强其自我保护意识，增强其对现代化仪器的操作、学科新进展的了解，提高其综合素质。把学生培养成基础扎实、适应性强、与医院临床实践接轨的高素质实用型人才。

参考文献：

[1] 侯振江， 牟兆新， 李红岩.2013.高职医学检验专业工作过程系统化的课程开发与实践[J].国际检验医学杂志，34（18）：2485-2487.

[2] 侯振江， 李红岩， 王凤玲.2013.高职医学检验技术专业课程设置岗位需求调查分析[J].国际检验医学杂志，34（2）：243-245.

[3] 胡生梅， 张家忠， 武小樱.2012.医学检验技术专业工学结合人才培养模式研究[J].临床和实验医学杂志，11（12）：150-152.

卫生微生物检验技术 篇11

随着社会经济不断发展, 人们生活水平不断提高, 对于食品安全、质量检测等方面越来越关注。而在当前社会中, 人们对于微生物污染问题也更加重视。食品微生物指的是与食品相关的微生物, 主要包括引起人们食物中毒的微生物, 如面包、味精、饮料、酒等发酵食品中的微生物, 以及造成食物发霉变质的微生物等。而很多食品微生物都会对人体造成不良影响, 因此需要通过相应检测技术进行检测。

食品微生物的检验内容

在食品安全卫生检测中, 细菌菌落数能够提供充分依据。食品质量可以通过人畜排泄物中大肠菌数量进行判定, 因此, 在检验食品微生物污染程度指示菌时, 大肠菌的检验发挥着十分关键的作用。在粪便污染指标中, 大肠菌是一项重要指标。在食品检验内容中, 通常以每100 g或每100 m L样品中检验出的大肠菌群作为食品安全判定指标。通过检验得出的大肠菌群数和食品质量安全标准进行对比, 能够判定食品污染程度。在食品微生物学检验标准中, 明确规定了食品中微生物含量, 因此, 在检验食品微生物时, 需要对其中的微生物致病菌进行检验。在食物微生物检验中, 金色葡萄球菌、沙门氏菌等都是较为常见的微生物致病菌, 会对人体健康造成很大伤害。因此, 在食品微生物检验中, 应加以注意。在1 g样品中, 通过特定条件培育得到的细菌菌落数, 称为细菌总数。

食品微生物的检测技术

代谢学技术

在代谢学检测技术中, 包括了很多种不同的检测方法。例如在检测沙门氏菌、酵母菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌的过程中, 可以采用电阻抗法进行检验。在培养基中, 大量培育和繁殖细菌, 得到代谢物, 利用其导电性改变培养基的阻抗。通过检测阻抗的变化, 就能够掌握细菌特性、生长规律、类型等信息。在放射测量检测方法中, 细菌的生长繁殖代谢出碳水化合物, 把微量放射性的C14标记引入盐类、碳水化合物等底物分子中进行检测, 在细菌生长繁殖过程中, 就会吸收和释放含有C14标记的二氧化碳。可以采用放射仪器对其进行检测, 从而判断细菌类型、数量等。在快速酶触反应、代谢产物检测等方法中, 可以通过细菌生长繁殖对酶的合成与释放, 利用相应指示剂进行检测。

分子生物学技术

在分子生物学技术中, 主要包括聚合酶链式反应、核酸探针技术等检测方法。在受热情况下, 双链DNA会分解为两条单链, 将得到的两条单链作为DNA的引物、聚合酶等, 然后通过降温来实现DNA分子的寡聚核苷酸引物退火、互补序列等。通过升温继续合成DNA, 加热3~4 h, 能够得到100倍的DNA。在实际应用中, 具有检测结果准确、检测效率高、检测灵敏度高等特点。利用同位素的方法, 标记核苷酸序列已知DNA片段, 并将其添加到已变性DNA样本中。放置在特定条件下, 如果样品中的DNA片段、被标记的DNA片段具有相同源序列, 就会形成杂交双链, 然后检测样品中的DNA, 就可以实现对食品微生物的检验。

抗体和免疫分析技术

在当前的食品微生物检测技术中, 抗体检测、免疫分析检测等方法, 都发挥着较为重要的作用。在实际应用中, 主要包括了免疫磁珠分离、荧光抗体检测、免疫酶等检测方法。其中, 免疫磁珠分离检测方法主要利用抗体包被的免疫磁珠, 通过磁场装置收集磁珠。免疫酶检测方法是利用共价结合的方式, 融合酶中的抗体特异性反应、高效催化作用等, 从而得到酶抗体复合物, 并应用在食品微生物检测中, 在免疫学分析技术中, 具有良好效果。荧光抗体检测技术包括直接法和间接法两种。直接法是在检验样品中, 直接滴加特异性已知的荧光标记抗血清, 经过一段时间的反应, 利用显微镜进行观察和检测。间接法则是在检测样品中, 直接滴加细菌特异性已知的抗血清, 经过一段时间的反应, 再加入荧光标记抗体, 然后利用显微镜进行观察和检测。

结论