凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究

凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究（通用3篇）

凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究 篇1

凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究

目的:防治凝固酶阴性葡萄球菌医院内感染.方法:用经典生理生化鉴定方法,对各种临床标本分离到的96株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)进行种的`鉴定、药敏试验和葡萄球菌粘质的检测.结果:分离到7种CNS,其中表皮葡萄球菌占55.2%,溶血葡萄球菌占29.2%.青霉素耐药率为69.8%,甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌占CNS的58.3%,产葡萄球菌粘质菌株占84.4%.结论:临床感染CNS中表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌占绝大多数.CNS对多种抗生素耐药,治疗其感染应以药敏结果为依据.可选用万古霉素、利福平、丁胺卡那霉素、环丙沙星等药物治疗.

作 者：许景云 黄世生 XU Jing-yun HUANG Shi-sheng 作者单位：许景云,XU Jing-yun(郧阳医学院免疫学教研室,湖北,十堰,442000)

黄世生,HUANG Shi-sheng(湖北省十堰市人民医院)

刊 名：郧阳医学院学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF YUNYANG MEDICAL COLLEGE年，卷(期)：200019(2)分类号：B378.11关键词：葡萄球菌属 凝固酶 感染 微生物敏感性试验 抗生素类 抗药性,微生物

凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究 篇2

关键词：MRCNS感染,多重耐药性,院内感染,护理

本文以2007～2008年胸外科收治的2例男性患者在治疗过程中检出MRCNS感染为例, 说明我院对该菌感染者的护理措施。

1 临床资料

1.1 实验室资料

本文统计了2007～2008年1年期间住院病人的各种标本中对MRCNS的检出率分别是78.4%和86.3%。其耐药情况:青霉素G90.4%, 红霉素88.5%, 克林霉素68%, 头孢西丁61.2%, 左氧氟沙星45.1%, 庆大霉素52.9%, 利福平17.3%, 万古霉素0。从以上耐药情况可以看出, 该菌显示出多重耐药性。

1.2 一般资料

其中1例男性57岁, 以左肺上叶占位入院, 入院后行左肺上叶切除术, 术后置胸腔闭式引流管32d, 术后第21天从胸水中检出MRCNS。另1例男性79岁, 以冠心病入院, 入院后行冠状动脉搭桥术, 术后置纵隔引流管17d, 术后第22天从伤口分泌物中检出MRCNS。2位患者术前分别应用克林霉素1.8和头孢曲松钠1.0qd静脉输入3～4d。术后均用泰能1.0g, q8h, 静脉输入6～7d, 头孢哌酮他唑巴坦钠2.0g, qd, 静脉输入10～12d, 头孢曲松钠2.0g, bid, 静脉输入5～6d, 左氧氟沙星0.4g, qd, 静脉输入4～5d, 检出MRCNS后, 均用去甲万古霉素0.4g, q8h, 静脉输入8～10d。在胸水和伤口分泌物中无该菌生长而停药, 且连续2次细菌培养阴性即对患者解除隔离。

2 护理措施

(1) 患者一经查出被MRCNS感染, 立即给予隔离。单人住一病室, 并指导陪护人注意个人卫生, 不得随意出入其它病室。因MRCNS易在病区内播散, 应采取严格的接触隔离措施。

(2) 病室每日紫外线照射, 照射时为患者遮盖身体及眼睛。嘱陪人离开病室。每次照射1h, 每日2次进行空气消毒。

(3) 病室地面、床旁桌、椅每日用1∶200“84”消毒液擦拭2次。

(4) 使用后的注射器、输液管、更换下的胸腔闭式引流瓶、引流袋, 换药用物等均使用一次性物品。用后用1∶200“84”消毒液浸泡2h后集中回收焚烧处理。

(5) 给予静脉输液, 换药、更换引流瓶等应严格执行无菌操作规程。

(6) 医护人员出入其病室均带一次性口罩、帽子、手套。用后置于固定污物袋中回收处理。处置后的手用醋酸氯乙定0.45%～0.5.%、乙醇70%～75%配制的皮肤消毒液喷雾消毒后用流水冲洗, 避免MRCNS通过医护人员进行播散, 发生院内感染。

(7) 正确及时采集标本, 做好药敏试验, 以供医生选择敏感药物给予正确用药治疗。一旦检出MRCNS, 应首选万古霉素。

3 讨论

3.1 合理使用抗菌素

我国住院患者的抗菌素使用率高达80%, 远远高于30%的国际水平[1]。不合理的预防性使用抗菌素使耐药菌株越来越多。机体内到处都存在着微生物, 但绝大多数微生物对机体是有益的, 它们在体内会起到“警察”的作用, 及时消灭有害菌。如果过量或长期使用抗菌素, 抗菌素就像一名滥杀无辜的杀手, 杀灭敏感的致病菌的同时也杀死了有益菌群, 引起了正常菌群失调, 于是耐药菌疯狂的滋生, 形成二次感染的发生。这种感染往往治疗困难, 死亡率高。所以建议, 有条件的情况下, 应在药敏试验指导下合理使用抗菌素。

3.2 由于侵入性操作, 破坏了皮肤的保护屏障, 增加了感染的机会

本文2例患者分别留置了胸腔闭式引流管和纵隔引流管。有研究表明, 高分子器械如受到微生物的污染或消毒不严格则微生物在器械表面形成菌膜, 菌膜形成后会不断地释放游离细菌成为污染源或致病源。导致导管相关型感染[2]。侵入性操作使用的器械如胸腔闭式引流管、静脉插管、血液透析管等等, 一旦消毒不严格被MRCNS污染, 如使用则会引起院内感染。本文2例病人分别留置了胸腔闭式引流管和纵隔引流管。他们的感染应不除外导管相关型感染。

3.3 加强病房的清洁工作, 尤其是ICU病房、新生儿病房、血液病房、烧伤病房等

应加强病房的空气、地面、桌椅的消毒工作。严格执行无菌操作规程, 因这些病房的患者病情危重, 免疫力低下, 住院时间长, 容易产生院内感染。

3.4 对医护人员的要求

检查病人后都要严格洗手、消毒, 应使用一次性口罩、帽子、手套, 医疗物品固定使用, 避免交叉感染。

3.5 对医院的要求

医院应加强MRCNS的检测工作, 查出带菌者应及时报告, 以便对患者尽早隔离, 选择合理药物尽快治疗, 控制感染。

参考文献

[1]李红梅, 季君晖, 崔德健, 等.抗菌塑料对其表面菌膜形成的抑制作用研究[J].中华医院感染学杂志, 2006, 16 (6) :615～618.

凝固酶阴性葡萄球菌医院感染的研究 篇3

1 材料与方法

1.1 菌株和主要仪器、试剂

1.1.1 菌株来源

96株MRCNS均由2011年9月～2012年5月我院收治的病人临床标本分离而来,包括:1株华纳葡萄球菌(Warner Aureum),2株科氏葡萄球菌(Staphylococcus coriolis),2株里昂葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis),2株松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri),2株模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans),7株耳葡萄球菌(Staphylococcus auricularis),12株人葡萄球菌(Staphylococcus hominis),29株溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)以及39株表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。

1.1.2 主要仪器

PCR仪(美国Bio-Rad,BS97MyCycler),凝胶成像系统(上海欧翔科学仪器有限公司,SHFC-Tocan240),电泳仪(北京市六一,DYCP-31DN),全自动微生物分析仪(法国biosMerieumx,VITEK-60)。

1.1.3 主要试剂

溶菌酶、M-H琼脂以及LB培养基均来自北京白浩生物科技有限公司;庆大霉素纸片、头孢西丁纸片、莫匹罗星纸片、氨苄西林纸片、万古霉素纸片、红霉素纸片以及四环素纸片均来源于法国biosMerieumx公司;DNA Marker以及PCR反应试剂盒来自北京天根生化科技有限公司;细菌总DNA提取试剂盒来自天津金思德生物技术有限公司;引物由上海生工合成。

1.2 方法

1.2.1 细菌总DNA的提取

选择单个菌落接种于3 mL LB液体培养基,35℃振荡培养至生长对数期,收集菌体,经溶菌酶对菌体进行处理后,用Omega细菌总DNA提取试剂盒提取细菌总DNA。

1.2.2 药敏实验

选择K-B纸片扩散法对6种抗生素开展药敏实验。挑取3～4个单克隆调成0.5麦氏单位浓度的菌悬液涂布于M-H琼脂平板上,待液体稍干后贴上含有定量抗生素的纸片。孵育18～24 h后量取抑菌环的直径,以2009年版临床实验室标准研究所(CLSI)制定的标准为判定结果。

1.2.3 耐药基因的检测

① PCR扩增参数

PCR检测所用的引物、退火温度及产物长度如表1所示。PCR反应条件设置为:95℃ 3 min;94℃ 30 s,退火30 s,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸2 min。

② PCR扩增体系

以细菌总DNA提取试剂盒提取的细菌总DNA为模版,按如下体系扩增: 21.5 μL去离子水,1 μL细菌DNA 模板,1 μL上游引物,1 μL下游引物,0.5 μL Golden DNA聚合酶以及25 μL 2×Reaction Mix,反应体积合计50 μL。

③ PCR产物的检测

将5 μL PCR 产物在有溴化乙锭成分且2%浓度的琼脂糖凝胶孔中点样进行电泳,置凝胶成像系统成像。

2 结果

2.1 药敏实验结果

96株MRCNS对红霉素、庆大霉素、莫匹罗星以及四环素的耐药性各有差异,具有耐药性的菌株比例分别为85.42%、60.42%、27.08%和30.21%,见表2;对氨苄西林的耐药性达到100%,未发现对万古霉素具有耐药性的菌株。

2.2 耐药基因检测结果

96株MRCNS都检测出mecA基因,如图1所示。mecA基因与青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药性有关[2]。药敏实验结果表明,96株MRCNS均对氨苄西林具有耐药性,与mecA耐药基因的检测结果一致。

对万古霉素耐药性基因vanA和vanB的检测结果表明,96株MRCNS均不携带这两个基因,这也与药敏实验中无万古霉素耐药性菌株的结论一致。

对红霉素耐药性基因ermA、ermB、merC和msrA进行检测,96株MRCNS中未检测出ermA,但是ermB的检出率为10.42%(10/96),ermC的检出率为77.08%(74/96),msrA的检出率为46.86%(45/96),说明96株MRCNS大部分具有红霉素耐药性,但是其耐药性与ermA基因无关,是由ermB、ermC和msrA基因导致的。

对庆大霉素耐药性基因ant(6’)-I、aac(6’)-aph(2”)和aph(3’)-III为进行检测,发现96株MRCNS均不携带ant(6’)-I基因,75.00%(72/96)的菌株携带aac(6’)-aph(2”)基因,39.58% (38/96)的菌株携带aph(3’)-III基因,合计共有75株(78.13%)MRCNS携带有aac(6’)-aph(2”)或(和)aph(3’)-III基因。此结果表明,本实验所检测的MRCNS的庆大霉素耐药性主要是由aac(6’)-aph(2”)和aph(3’)-III基因导致的。药敏实验显示仅有60.42%的MRCNS具有庆大霉素耐药性,推测这一差异可能是由于这些耐药基因在不同的菌株中表达程度不一,部分MRCNS携带的耐药性基因未能有效表达从而未能产生耐药性。

莫匹罗星耐药性基因mupA的检测结果表明,25% (24/96) 的MRCNS携带此基因。但药敏实验表明,27.08%(26/96)的MRCNS具有耐药性,说明还有2株MRCNS具有其他的耐药性基质。

对四环素耐药性基因tetM和tetK的检测结果表明,仅有2.08%(2/96)和5.21%(5/96)的菌株分别携带tetM和tetK基因,而药敏实验结果表明,30.21%(29/96)的MRCNS具有四环素耐药性。由于目前已经发现了众多与四环素耐药性相关的基因,本次检测的耐药性MRCNS应该还携带了其他四环素耐药性的基因。

M:Marker;N:阴性对照;1~9分别为:mecA、ermB、ermC、msrA、tetM、tetK、aac(6’)-aph(2”)、aph(3’)-III、mupA阳性标本

综合PCR检测结果,发现某些MRCNS携带多个耐药基因,携2种、3种、4种、5种、6种以及7种带耐药基因的MRCNS分别为13株(13.54%)、28株(29.17%)、18株(18.75%)、21株(21.88%)、10株(10.42%)以及2株(2.08%),说明MRCNS是一种多重耐药菌。

3 讨论

3.1 β-内酰胺类药物耐药性相关基因

mecA基因可编码形成青霉素结合蛋白异构体蛋白(PBP2),此蛋白改变了菌体与β-内酰胺类药物的亲和力,从而对此类抗生素产生耐药性[2,3]。本研究显示,96株MRCNS均携带mecA基因,这和药敏实验得出的结论相符。

3.2 红霉素耐药性相关基因

erm类基因主要有ermA、ermB以及ermC。erm基因编码细菌23S rRNA甲基化酶,对细菌核糖体23S rRNA进行甲基化,从而削弱大环内脂类药物与细菌核糖体之间的结合,导致菌体对红霉素高水平耐药[4]。外排基因msrA也与红霉素耐药性有关,其编码的主动转运蛋白体可以将药物从菌体内排出,最终形成耐药性[5]。在本研究中,有84株(87.50%)可以扩增出基因msrA、ermB以及ermC,这和药敏实验得出的结论基本一致。

3.3 四环素耐药性相关基因

四环素通常结合在核糖体上,阻止氨酰-tRNA与核糖体结合,从而抑制蛋白质的合成,属于广谱抗生素。核糖体保护蛋白可以把细菌30S亚基内的四环素释放出来,而外排泵蛋白可以将四环素排出菌体。目前已经发现了多个核糖体保护蛋白基因如tetM、tetO、tetS、tetW、tetQ、tetT,以及众多与药物排出泵机制相关的耐药基因如tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH等[6]。由PCR结果可知仅7株(占到7.29%)携带tetM或tetK基因,但药敏实验结果表明,有29株(30.21%)具有四环素耐药性,说明被检测的MRCNS还携带了其他四环素耐药基因。

3.4 庆大霉素耐药性相关基因

氨基糖苷类修饰酶可作用于氨基糖苷类药物的氨基或羟基,降低或使抗生素丧失对16s RNA的亲和力,使细菌在抗生素存在的情况下也能存活,进而形成耐药性[7]。氨基糖苷类修饰酶的编码基因有ant(6’)-I、aac(6’)-aph(2”)以及aph(3’)-III。PCR结果显示,共有75株(78.13%)MRCNS携带aph(3’)-III或(和)aac(6’)-aph(2”)基因,但药敏实验结果显示仅有58株(60.42%)具有庆大霉素耐药性,5株(5.21%)对于庆大霉素耐药性属于中介。药敏试验得出的耐药率比耐药基因检出率低,这可能是因为质粒表面上的耐药基因在不同菌种中表现出不同的耐药程度。

3.5 莫匹罗星耐药性相关基因

莫匹罗星可作用于细菌体内的异亮氨酸tRNA合成酶的异亮氨酸结合位点,选择性抑制异亮氨酸tRNA合成酶,阻碍氨基酸的合成,导致蛋白质合成受影响,进而发挥抗菌功能。mupA基因可以编码一种新型异亮氨酸tRNA合成酶,它不与莫匹罗星结合,使细菌产生耐药性;此外,细菌体内的异亮氨酸tRNA合成酶发生点突变导致空间构想变化,降低与莫匹罗星的结合力,也可导致耐药性[8]。

通过PCR检测可知,mupA基因有24株(25.00%)属于阳性株,但药敏实验发现有26株(27.08%) MRCNS具有莫匹罗星耐药性。2株没有携带基因mupA却具有耐药性MRCNS,推测可能是由异亮氨酸tRNA合成酶发生点突变而产生了耐药性。

3.6 万古霉素耐药性相关基因

糖肽类抗生素如万古霉素常被用于其他抗生素耐药的感染,被认为是抗感染的最后防线,在临床治疗中被广泛使用。万古霉素的耐药机制目前尚未完全研究清楚,已知的研究表明,其耐药性可能与携带耐药基因、细胞壁增厚、染色体突变及糖聚肽交联减少有关[9]。与万古霉素耐药性相关的基因有vanA、vanB、vanC、vanD、vanE和vanE6种,其中以vanA和vanB最为常见[10]。本研究中,未发现具有万古霉素耐药性的MRCNS,PCR检测也表明它们均未携带vanA或vanB基因,二者结果一致。

4 结论

终上所述,对于氨苄西林、红霉素、庆大霉素、四环素和莫匹罗星5种抗生素,MRCNS可携带以上一种或多种药物的耐性基因,产生多重耐药性。96株MRCNS中未检测到对万古霉素具有耐药性的MRCNS。

参考文献

[1]林镯,陈永平,叶海油,等.6类抗生素耐药基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中的分布及分析[J].中国微生态学杂志,2008,26(3):325-326.

[2]邵亚娟,乔惠平,吴玉莲.医院感染常见细菌分布与耐药性分析[J].中国感染控制杂志,2006,5(2):153-156.

[3]黄辉,周建党,聂新民,等.MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用[J].中南大学学报(医学版),2012,36(7):567-571.

[4]宁立芬,汪玉珍,张家芳,等.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及erm基因的检测与分析[J].中华医院感染学杂志,2009,5:484-486

[5]罗润齐,叶晓光.耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药谱动态分析[J].医学信息,2009,22(4):512-514.

[6]Chopra I,Robert M.Tetracycline antibiotics:mode ofaction,applications,molecular biology,and epidemiolo-gy of bacterial resistance[J].Microbiol Biol Rev,2001,65(2):232-260.

[7]吴蓉,张蓉,戴俊华,等.产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与修饰基因研究[J].现代检验医学杂志,2010,25(3):31-33.

[8]刘媚娜,刘庆中,陆红,等.金黄色葡萄球菌对莫匹罗星的耐药性研究[J].中华临床感染病杂志,2008,1(3):533-536.

[9]赵晓东,刘爱玲.耐万古霉素金黄色葡萄球菌作用机制及治疗药物研究进展[J].医学军事科学院院刊,2009,33(3):285-287.