pcr实验室操作规程

pcr实验室操作规程（精选8篇）

pcr实验室操作规程 篇1

PCR检测实验室操作规范

一、PCR 实验室的设置及管理

1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。3．负责人： 4．细则：

4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。标本的接收则在检验科标本接收处进行。

4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。

4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。

4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。

二、PCR 实验室工作制度

1．目的 ：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。

2．适用范围：所有本实验室人员。3．负责人： 4．细则： 4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。4．2 各区的用品不得混用。

4．3 在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件）。

4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。

4．6 扩增分析区只能进行DNA 或cDNA 的扩增、实时荧光PCR 扩增产物的分析（见相关SOP 文件）。

4．7 进行实验时严格执行本实验室的各项操作规程，及时做好各种操作记录，力求准确、可靠。实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。

4．8 室内仪器由专人负责，未经许可，不得随意使用或挪用；爱护使用仪器，定期进行保养与维修。

4．9 爱护科室财产，注意安全；离开实验室前应关好门窗，检查水、电等。

三、PCR 实验室内务管理制度

1．目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。2．适用范围：实验室相关人员及相关清洁工人。3．负责人： 4．细则：

4．1 非本室工作人员未经允许不得进入实验室。4．2 各区的用品不得混用。

4．3 实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。

4．4 进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。

4．5 所有仪器（如PCR 扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。

4．6 所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。4．7 每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，确保仪器整洁安全，试剂合格使用。4．8 各区的各种清洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。4．9 注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。4.10下班前检查门、窗、水、电，节假日应指定人员负责检查实验室的仪器、设备。

四、PCR 实验室人员的配置及管理

1．目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。2．适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。3．负责人： 4．细则： 4．1 人员要求

4．1．1 本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有中级以上技术职称或专科以上学历。

4．1．2 实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR 技术培训，并取得合格证。4．1．3 对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR 技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。4．2 人员配置

4．2．1 实验室应根据工作需要配备足够的工作人员。4．2．2 各级技术人员履行相应的工作职责。4．3 人员培训及考核

4．3．1 实验室负责人或负责人指定人员参加每年卫生部PCR 室间质评总结会。

4．3．2 实验室工作人员每1～2 年至少参加1 次PCR 技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。

4．3．3 安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。

4．3．4 科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。一些科室的送检标本由该科室的人员送到标本接收区，对这些临床医护人员也要定期进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。

4．3．5 本实验室工作人员每年进行考核一次,考核内容: a)日常工作质量 b)室内质控测评 c)室间质控测评 d)在抱怨处理中的表现

4．3．6 本实验室工作人员实行严格奖惩制度,有下列表现者可受奖: a)工作质量高, 质控测评成绩优秀者

b)有科研能力,并有一定数量和质量的论文发表 c)有独创性工作成果,经鉴定认可者 d)受到有关部门或群众嘉奖者 有下列情况者将受到惩处: a)工作质量问题较多，质控测评成绩不合格； b)不遵守规章制度并造成一定影响； c)不求上进。

4．3．7 本实验室工作人员奖惩方法分精神及物质两类,经实验室上报及有关部门批准后执行。

4．3．8 本实验室工作人员均建立业绩档案,实行能进能出制度,不断吸收高质量人员,加强培训和提高,对于不适合本室工作的人员要及时调离。4．4 人员管理

4．4．1 实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。

4．4．2 技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1 次，电子档案随时更新。

五、PCR 实验室清洁程序

1．目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。

2．适用范围：适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。3．负责人： 操作人： 4．细则：

4．1 实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。

4．2 合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。

4．3 抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。4．4 实验结束后用2%戊二醛对台面进行清洁，并用移动紫外灯进行消毒。

4．5 每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。每周1 次对移液器咀进行75%酒精浸泡15 分钟左右，若使用过程中发生污染应随时浸泡处理。

4．6 实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。

4．7 每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、移动紫外灯（对实验台面消毒）、天花板紫外灯消毒实验室，每次开启 30～60 分钟。4．8 待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。

4．9 依次清洁三个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。4．10 处理好各区废弃物。

4．11 每周将工作服洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。

六、PCR 标本唯一标识编号规则

1．目的：保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。

2．适用范围：使用核酸扩增荧光检测实验室所开展的病毒以及基因检测项目： 3．负责人： 操作人： 4．程序：

4．1 按检测日期分类标记

根据标本送检的日期，每天的标本对应标记一种唯一的代号。4．2 按检测类型分类标记

根据检测项目的不同，每种检测项目对应标记一种唯一的代号。4．3 按验单接收顺序编号

在同种检测类型的验单中，按验单顺序编号。4．4 特殊标本的编号

如有特殊情况，应在标记前面增加特异字母区别开。4．5 编号步骤 a）对当天送来的标本，根据编号的基本原则编号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号。

b）用笔在每张检验申请单和对应的样品管上作好相同的标记。

c）做好标本的接收记录，每个样本的记录都应包括以下信息：接收时间、医院、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、检验单号、标本唯一统编号等。

d）处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。

f）扩增得到结果后，先在统计簿上填入结果，作好记录，再一一把实验结果填入相应申请单。

g）发放检验报告单。

七、PCR 基因扩增实验室的要求

1．目的：规定在各区内所进行的工作及其操作。2．适用范围：所有在本区内进行的工作。3．负责人： 操作人： 4．程序：

一、临床基因扩增检验实验室的设计

（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：

1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。

3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。

4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。

（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。

（三）工作区域仪器设备配置标准。

1.试剂储存和准备区。

（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。

（2）混匀器。

（3）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。

（4）可移动紫外灯（近工作台面）。

（5）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头。

（6）专用工作服和工作鞋(套)。

（7）专用办公用品。

2.标本制备区。

（1）2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。

（2）高速离心机。

（3）混匀器。

（4）水浴箱或加热模块。

（5）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。

（6）可移动紫外灯（近工作台面）。

（7）生物安全柜。

（8）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。

（9）专用工作服和工作鞋(套)。

（10）专用办公用品。

（11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波水浴仪。

3.扩增区。

（1）核酸扩增仪。

（2）微量加样器（覆盖0.2-1000µl），（视情况定）。

（3）可移动紫外灯（近工作台面）。

（4）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。

（5）专用工作服和工作鞋。

（6）专用办公用品。

4.扩增产物分析区。

视检验方法不同而定，基本配置如下：

（1）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。

（2）可移动紫外灯（近工作台面）。

（3）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。

（4）专用工作服和工作鞋。

（5）专用办公用品。

上述各区域仪器设备配备为基本配备，实验室应当根据自己使用的扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进行必要的增减。

二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则

(一)进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区。

(二)各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不得混用。

(三)不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。

(四)实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。

(五)工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。

(六)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项

(一)试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过扩增检测区，试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区，应当保存在标本处理区。

(二)标本制备区。由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染，可通过在本区内设立正压条件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活程序。

(三)扩增区。为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少在本区内的走动。必须注意的是，所有经过检测的反应管不得在此区域打开。

(四)扩增产物分析区。核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1 mol/L HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。

由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故应当注意实验人员的安全防护。

八、PCR 废弃物的处理程序

1．目的：保证实验室、实验人员和外部环境的安全。

2．适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂（NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物的处理； 3．负责人： 操作人： 4．细则：

4.1 科室职责应对本室工作人员讲明本程序在预防交叉、实验室污染及切断传播途径中的重 要性，并要求严格执行。

4.2 实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾 袋（黄色）。使用过的一次性消耗品(如试管、吸头、离心管、等)，先放入10%次氯酸钠溶 液中浸泡2～4 小时后，再放入黄色垃圾袋内，使用过的手套、鞋套等直接放入黄色垃圾袋 内集中处理。

4.3 夹取标本的工具，如钳、镊、接种环、吸管等，用后均应消毒清洁，进行微生物检验时，应重新灭菌，金属工具可烧灼灭菌或消毒液浸泡；玻璃制品干热或压力蒸汽灭菌。4.4 一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4小时后，放入黄色垃圾袋内集中处理。4.5 废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等用10%的84 液浸泡2～4小时后，集中处理。

4.6 盛标本的容器，若为一次性使用的纸质容器及其外面包被的废纸，放入污物袋里 处理；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15 分钟或加入10%次氯酸钠溶液浸泡2～4 小时，消毒液每日更换，消毒后用洗涤剂及流水刷洗，沥干，用于微生物培养采样者，用压力蒸汽灭菌后备用。

4.7 废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，污物处理中心处理。

九、基因扩增检测实验及结果分析

1、目的：保证扩增及结果分析的标准化、规范化。2．适用范围：适用于本室使用的普通离心机。3．负责人： 操作人：

4、标准程序：

4.2.8 发放报告：及时登记检测结果记录，发放临床报告。

4.3 实验结果无效的判断标准：出现下述四种情况中的任何一种或多种，当次实验结果不可 发，查找原因，重做实验。4.3.1 阴性对照出现扩增。4.3.2 阳性对照无扩增。

4.3.3 大批甚至所有的标本都扩增了。4.3.4 室内质控血清检测结果出现失控情况，实验失控的具体标准详见室内质控标准操作程 序。

4.4 实验结果有效的判断标准：达到下列要求后，当次实验有效，可以发放结果。4.4.1 阴性对照没有扩增，阳性对照扩增。

4.4.2 阳性标准品梯度曲线平滑均匀，斜率、截距和相关系数三个参数的数值均在范围内。4.4.3 室内质控血清检测结果处于在控状态，具体标准详见

十、临床标本的保存操作程序

1．目的：临床标本正确保存，以便必要时复查。2．适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。3．负责人： 操作人： 4．程序：

4．1 处理前的标本保存

a）全血标本可4℃下短期（24h 内）保存，长期保存则需分离出血清（血浆），保存于-20℃下。

b）咽拭子、痰或胸腹水、脑脊液、脓液标本短保存于-70℃下。4．2 报告发出后的标本保存：

a）提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20℃保存。报告发出后第二天丢弃。

b）原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20℃保存1 个星期，以备复查。超过1 个星期保存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品统一处理。

c）血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录，按编号顺序存放，并由专人负责管理。4．3 特殊标本的处理：

对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。对特殊样本或特殊病人的样本，实行“首接”负责制，所谓特殊样本是指难于采集的样本，以及特殊病人的样本一律实行“首接”负责制，无论那位工作人员，一旦收到样本后，均须负其责任，不得以任何借口推托，及时和正确保管和转送样本到有关实验室或有关人员，同时作交班记录和双签名。

十一、临床标本的采集、运送、接收程序

1．目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。2．适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。3．负责人： 操作人： 4．程序： 4．1 标本的采集

4．1．1 标本由临床各科室接受过临床基因扩增检测有关标本采集、保存、运输知识培训的医护人员采集并送至实验室。4．1．2 标本采集要求

a）血液标本：用2ml 真空采集管或1.5ml 高压灭菌离心管采集血液标本，血标本采集后在2 小时内送达实验室。离心（检验单与标本一道）后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒的1.5ml 的离心管中，编号。

b）痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。（对于无痰或少痰的患者，可用45℃加温的100g/L NaCl 水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。）标本在室温下保存不能超过24 小时。4．2 标本的运送

标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2 小时以上，必须用冰盒送至实验室。4．5 接收

4．5．1 严格对各类样本的查对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。

十二、PCR 生物安全防护措施

1．目的：预防工作人员在实验过程中被感染或污染。2．适用范围：适用于本室所有工作人员。3．负责人： 操作人： 4．细则： 4．1 实验人员在实施生物防护措施时，应严格遵守各项相应的规章制度，建立起强烈的生物防护意识。

4．2 每天更换废液缸的2%戊二醛溶液，并保证2%戊二醛溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。

配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂（用量杯，保证浓度），水的用量也要正确，缸体密封性良好。

4．3 实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。

4．4 每区每次实验后紫外灯照射30～60 分钟，如有需要可延长照射时间。

4．5 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本容器应完好无泄漏。

4．6 处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以及试剂，应立即冲洗干净。有下列情况之一者，需另外消毒：手接触有传染性的微生物，水龙头、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量细菌污染。消毒剂可用“84”消毒液。4．7 在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。4．8 实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。4．9 在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸或纱布盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用紫外灯消毒。

4．10 实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。4．11 实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。

4．12 遇有意外事故应立即报告科室负责人，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告技术负责人。

十三、PCR 实验室化学试剂配制程序

1．目的：保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。

2．适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用溶液：4%NaOH 溶液、75%酒精、消毒剂（三氯异氰尿酸或 二氯异氰尿酸钠）、2%戊二醛溶液等。3．负责人： 操作人： 4．程序： 4．4 化学试剂的配制：

4．4．1 用具：干燥洁净的250ml 量桶一只，1000ml 量桶一只，1000ml 烧杯一只，三角烧瓶两只，天平一架，100ml 塑料试剂瓶、2000ml 广口瓶各一只。4．4．2 配制步骤：

4．4．2．1 配制4%NaOH 溶液: a）用天平称取4 克分析纯的NaOH 固体，置于一只三角烧瓶中。

b）用250ml 量桶准确取100ml 水，缓缓注入盛放NaOH 固体的三角烧瓶中。c）摇荡三角烧瓶使NaOH 固体充分溶解。

d）然后缓缓倾倒入100ml 塑料试剂瓶中密封保存备用。4．4．2．2 配制消毒剂: a）一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯达到500mg/L，即可达到消毒作用。

b）消毒剂为粉状（20 克/袋），如配制一升的消毒剂溶液，则取500g，倒入烧杯中，缓缓加入1000ml水充分溶解，备用。

c）如需加大消毒力度，则有效氯浓度加大。4．4．2．3 配制2%戊二醛溶液: a）准确量取戊二醛原液20ml 倒入1000ml 烧杯中。

b）量取980ml 水，缓缓倒入1000ml 烧杯中，混匀，加至2000ml 广口瓶中备用。注意事项：每份配制好的溶液保质期为14 天

十四、PCR 应急处理程序

1．目的：在实际工作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题时，为保证检验结果的准确性、及时，应正确采取应急措施，最大程度上避免或减轻不利影响。

2．适用范围：适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备和试剂盒。3．负责人： 4．细则： 4．1 核酸扩增荧光检测实验室工作人员在职责范围内均有责任熟悉各种仪器和相关设备的性能、要求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。

4．2 工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪器设备和试剂盒的异常情况。

4．3 作为应急处理，潜在着一定的可能影响检测质量的不确定因素。室负责人负责在第一时间检查核实应急措施的有效性。4．4 仪器设备故障

4．4．1 室负责人接到异常情况报警后，立即现场确认异常情况的性质：观察有误、误操作、偶发现象或确属不能立即排除的故障。

4．4．2 用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。

4．4．3 有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器）。借用其他部门仪器设备时，及时联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。

4．4．4 不能解决的问题，应及时与供应方会同解决。根据双方合同约定，及时通知供应方。供应方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。

4．4．5 仪器维修后，必须经验收合格并供需双方签字，调试实验通过后才能重新启用。取下红色故障标示（暂停使用），换上蓝色正常标示（正常使用）。4．4．6 科室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。

4．4．7 对未能及时排除故障时，必须及时上报科室，在科主任批准下，应积极联系附近的其他已得到卫生部临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足病人和临床或科研需求。

4．5 试剂盒质量发生问题，经核实后，及时通知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作质量检测，合格后方可使用。

4．6 仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标本送至其它已得到卫生部临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检。4．7 影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。

十五、试剂的质检标准操作程序 1．目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合要求。2．适用范围：各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂。3．负责人： 操作人： 4．程序：

4．1 收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。

4．2 核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、、批准文号、批号和有效期等）；内包装（试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等）。4．3 及时将试剂转入－20℃冰箱保存。将上述检测核对情况在记录本上登记。

4．4 最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验。

4．5 效验实验：

4．5．1 要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一，阳性标准品梯度（104、105、106、108）。

4．5．2 出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测： a）空白对照出现扩增。如扩增曲线CT 值大于25，需重复实验确证试剂污染。

b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。

4．5．3 阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。

4．5．4 空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。

4．5．5 阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT 值偏大5 个循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。

4．5．6 空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（－2.9～－3.9）、截距（26～34）、相关性（﹤－0.99）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。4．6 将实验结果归入记录。

十六、离心机操作维护程序

1．目的：保证离心机的正常使用。

2．适用范围：适用于本室使用的普通离心机。3．负责人： 操作人： 4.性能参数:见说明书。5．程序：

5．1 离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使仪器处于水平位置以免离心时造成仪器振荡。

5．2 打开电源开关，将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上，关闭机盖。5．3 旋动定时旋钮设定离心时间，缓慢旋转转速调节旋钮使仪器转速达到预定要求。5．4 离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关。

5．5 待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，再次关闭机盖结束离心。5．6 离心室的清洁：为了避免样本等残留物的污染，应经常对离心机外壳和离心室进行清洁处理。对离心室清洁，应先打开离心机盖，拨掉电源线，用专用设备将离心机转子旋下，再用中性去污剂（70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后，用水冲洗，再用甘油润滑。

5．7 转子的清洁：转子会被样本残留物污染，也可能会被某些化学试剂腐蚀，因此应对转子每月进行清洁维护。每月用中性的清洁剂清洁转子一次，并在仪器维护记录本上作好记录，以延长转子的寿命。6.仪器维护

(1)为确保安全和离心效果,仪器必须放置在坚固水平的台面上,塑料盖门上不得放置任何物品,样品必须对称放置,并在开机前确保已拧紧螺母。

(2)应经常检查转头及试验用的离心管是否有裂纹,老化等现象,如有须及时更换.(3)试验完毕后,需将仪器擦拭干净,以防腐蚀.(4)如样品比重超过1.2g/cm3,最高转速n 按下式计算:n=nmax*√--1.2/样吕比重.(5)当电机碳刷长度小于6mm 时,必须及时更换.(6)在离心机未停稳时不得开盖.(7)仪器必须有可靠接地.(8)实验结束后,请关闭后面的电源开关,拨掉电源插头时,请不要忘了打开后面的电源开关.(9)该仪器在日常使用中请注意符合“5.6,5.7”要求。(10)严格按照仪器的开关机程序关机。7.期间核查

(1)本仪器不需要特别的周期间隔。

(2)校准物均为与ICSH 之标准相符合的校准物，测定值偏差均不超过其规定值。

十七、冰箱操作维护规程

1．目的：对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。2．适用范围：本实验室使用的各种品牌、型号的冰箱。3．负责人： 操作人： 4.性能参数:见说明书。5．程序：

4．1 开、关机：冰箱按说明书要求放好后，插上电源线，冷藏室温度开关置于4℃，冷冻室温度开关置于-20℃，2 小时后用温度计确认。系统进入正常运行状态后即可使用。4．2 外冰箱应放置于水平地面并留有一定的散热空间。外接电源电压必须匹配，并要求有良好的接地线。

4．3 冰箱内禁止存放与本实验室无关的物品。

4．4 放入冰箱内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。

4．5 保持冰箱出水口通畅；非自动除霜冰箱应在每月底除霜；月底清洁冰箱，清洁时切断电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。4．6 每日观察冰箱内温度并记录于冰箱的质控图上。

4．7 若温度超出规定范围，调节温控使其回到正常范围，并进行记录。

4．8 若温控调节无效，报请设备科维修，修理后须验收合格并签字后方能正常使用。6.仪器维护

(1)使用注意。该仪器在日常使用中请注意符合“4.注意事项”要求

(2)废液瓶满要及时倒掉废液，切勿强行扯动红黄两根管来打开瓶盖，检查废液瓶是否漏气，防止低真空出现。

(3)当出现堵孔时，按自动冲洗键冲洗管道。(4)严格按照仪器的关机程序关机。7.期间核查

(1 冰箱不需要特别的周期间隔。

(2)校准物均为与ICSH 之标准相符合的校准物，测定值偏差均不超过其规定值。

十八、生物安全柜操作维护规程

1．目的：正确使用生物安全柜。

2．适用范围：本SOP 适用于本实验室使用的生物安全柜。3．负责人： 操作人： 4.性能参数:见说明书。5．程序：

5．1 新安装或长期未使用的生物安全柜，使用前必须用超净真空吸尘器或不产生纤维的物品认真进行清洁工作。

5．2 接通电源，使用前应提前15～30 分钟同时开启紫外灯和风机组工作。

5．3 当需要调节风机风速时，用生物安全柜操作面板上的风速调节钮进行调节。风机、照明均由指示灯指示其工作状态。

5．4 工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。

5．5 禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显扰动气流的动作；禁止在预过滤进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。

5．6 使用结束后，用消毒液清理工作台面后打开紫外灯，15～30 分钟后关闭紫外灯，关闭生物安全柜电源。每次使用生物安全柜后，均需对其进行清洁。

5．7 根据环境洁净程度，定期将预过滤器中的滤料拆下清洗，一般间隔时间为3～6 个月。5．8 定期（一般每半年1 次）计测工作区风速，如发现不符合技术参数要求，则可调大风机供电电压。当风机组电压调到最大时，工作区风速仍达不到0.3m/s，则必须更换高效空气过滤器（由厂家或院仪器维修人员进行）。

4．9 有相应的维护记录，长期不使用的生物安全柜拨下电源插头。6.仪器维护

(1)使用注意。该仪器在日常使用中请注意符合“4.注意事项”要求(2)废液瓶满要及时倒掉废液，切勿强行扯动红黄两根管来打开瓶盖，检查废液瓶是否漏气，防止低真空出现。

(3)当出现堵孔时，按自动冲洗键冲洗管道。(4)严格按照仪器的关机程序关机。7.期间核查

(1)PE-5700 基因扩增仪的定标不需要特别的周期间隔，本实验室PE-5700 基因扩增仪执行卫生部临床检验中心的指定校准。

(2)校准物均为与ICSH 之标准相符合的校准物，测定值偏差均不超过其规定值。

十九、移液器操作维护规程

1．目的：确保移液的精确性，正确使用移液器。2．适用范围：本实验室使用的可调式移液器。3．负责人： 操作人： 4．程序： 4．1 移液器的使用

4．1．1 转动旋钮设定移液量，设定的移液量不可超出该移液器规定的范围。4．1．2 装上配套的Tip。4．1．3 前进移液法

a）将按钮压至第一停点位置；

b）将移液管管嘴浸入液面下2~3mm 深处，然后慢慢松开按钮吸入液体。待移入管嘴吸满液体后，将管嘴撤出液面，擦掉管嘴外侧的所有液滴。

c）轻轻压下操作按钮至第一停点位置，放出液体。约1 秒钟后，继续将操作按钮向下压至第二停点位置。待管嘴液体放干净后，将管嘴贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管嘴。

d）松开按钮使之回到起点位置。需要时，可更换管嘴继续移液操作。4．1．4 倒退移液法：适用于高粘度液体及/或易起泡沫液体的移液。a）将操作按钮向下压至第二停点位置。

b）将移液管管嘴浸入试剂瓶液面下2~3mm 深处，然后慢慢松开钮吸入液体。待移入管嘴吸满液体后，将管嘴撤出液面，擦掉管嘴外侧的所有液滴。c）轻轻压下操作按钮至第一停点位置，放出液体。

d）遗留在管嘴时的液体或者随管嘴一起扔掉，或者放回原来的容器中。4．1．5 重复操作法：重复操作移液法可以快速、简便地重复转移同体积的同种液体。a）将操作按钮向下压至第二停点位置。

b）将移液管管嘴浸入液面下2~3mm 深处，然后慢慢松开按钮吸入液体。待移入管嘴吸满液体后，将管嘴贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。

c）轻轻压下操作按钮至第一停点位置，放出液体。待放完所需体积液体后，把按钮停在第一停点位置，不包括在移液量之内的少量液体仍留在管嘴内，管嘴外的液滴则需包括在移液量之内。

d）将管嘴浸入试剂液面下不远处，然后慢慢松开按钮使管嘴重新吸入液体。(3)e）重复步序c）和d）继续移液操作，就可重复转移相同体积液体。4．2 移液器的维护

每天对使用过的移液器用75%酒精进行擦拭。每周1 次对移液器咀进行75%酒精浸泡15 分钟左右，若使用过程中发生污染应随时浸泡处理。4．3 移液器的校准

为确保移液器加样的精确性和准确性，正确使用移液器，需定期（一年）对移液器进行校准 4．3．1 校准环境和用具要求室温：20～25℃，测定中波动范围不大于±0.5℃。

电子天平：放置于无尘和震动影响的台面上，房间尽可能有空调。称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60～90%），天平内应放置一装有10mL 蒸馏水的小烧杯。

小烧杯：5～10mL 体积。测定液体：温度为20～25℃的去气双蒸水。选定校准体积： a）拟校准体积；

b）移液器标定体积的中间体积。

c）最小可调体积（不小于拟定体积的10%）。如为固定体积移液器，则只有一种校准体积。4．3．2 校准步骤

a）将移液器调至拟校准体积，选择合适的吸头； b）调节好天平；

c）来回吸吹蒸馏水3 次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头；

d）垂直握住移液器，将吸头浸入液面2～3mm，缓慢（1～3 秒）一致地吸取蒸馏水 e）将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体；

f）将移液器以30℃角放入称量烧杯中，缓慢一致地将移液器压至第一档，等待1～3 秒，再压至第二档，使吸头里的液体完全排出； g）记录称量值； h）擦干吸头外面； i）按上步骤称量10 次； j）取10 次测量值的均值作为最后移液器吸取的蒸馏水重量，按表1 所列蒸馏水Z 因子计算体积；

k）按校准结果调节移液器。4．3．3 比较校准法

利用经计量局校准并颁发校准报告之同型号移液器，在移液器量程范围的高低两个档各选择一个校准点

(4)用电子天平称量结果与已校准移液器称量结果进行比较，完成校准。

参考文件：

1.卫生部办公厅关于印发《医疗机构临床基因扩增管理办法》的通知 2.卫生部检验中心《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 3.《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

4.ISO15189 质量管理体系范本文件（第六册）

pcr实验室操作规程 篇2

实验室要求整洁、卫生, 每周要彻底清洁一次。

实验室要求与采精室相邻, 实验室应分成干燥区和潮湿区, 干燥区用于稀释液的配制和精液的检查、稀释、分装, 潮湿区安放水槽, 用于清洗器械等。实验室内最好安装紫外线灯, 每周至少对实验室彻底消毒一次, 下班时开启, 通宵照射。

2猪人工授精实验室设备要求

2.1显微镜其放大倍数可为100、400和1 000倍 (油镜) , 最好自带光源、配备恒温加热板。

2.2精子密度测定仪或血细胞计数器能比较准确地分析出原精密度, 确定稀释倍数。

2.3电子台称用于称量精液质量。

2.4电子天平称量药品配溶液用 (精度达到0.01 g) 。

2.5数显恒温水浴锅加热精液稀释液以及用于控制精液稀释液的温度。

2.6 17℃数显恒温精液保存箱波动范围在±1℃, 用于精液的存放。

2.7数显恒温干燥箱和高温灭菌锅用于实验器皿的预热和消毒。

2.8双重蒸馏水器用于制备双蒸水, 稀释液用水最好为3 d内制的新鲜蒸馏水。

2.9量筒、烧杯1 000 mL、2000 mL各两个, 用于准备稀释液、稀释精液以及将精液分装到输精瓶。

2.10保温瓶各种不同的容器可用于采精, 但重要的是要能保温隔热、能被消毒。

2.11 pH试纸或pH计测量精液的pH值。

2.12玻璃棒稀释精液搅拌用。

2.13温度计2支分别用于测量精液和稀释液的温度。

2.14其他稀释液配置和精液检查必备的试剂及药品、100～500μL微量移液器及其配套吸头、采精杯、消毒外科用纱布、输精瓶 (装100 mL) 、浴巾 (保温用) 、市售成品稀释粉或一些配制精液稀释液所用的药品。

3实验室的准备工作

3.1器械的清洗和消毒 (最好采精前一天进行)

3.1.1洗涤将采精杯, 烧杯, 量筒等玻璃器皿用洗衣粉或洗洁精清洗干净, 再用蒸馏水冲洗2次。

3.1.2消毒用锡纸包扎玻璃器皿的开口和金属器械, 放恒温干燥箱中180℃干燥1h, 也可和非耐热器皿一起, 用牛皮纸包好放高压灭菌器中121℃, 20 min湿热灭菌;温度计采用酒精棉球消毒;消毒过的器械使用前用稀释液冲洗一遍。

3.2采精前准备工作

3.2.1采精前2 h, 工作人员穿上实验服, 擦净所有工作台, 保持室内清洁。

3.2.2用消毒外科纱布套好集精杯, 将集精杯、载玻片、盖玻片及稀释用的玻棒、温度计、烧杯等放入37℃恒温干燥箱中预热。

3.2.3采精前1 h, 配制好稀释液。

如用市场上出售的成品精液稀释粉, 则应在采精前的1 h将稀释精液和双蒸馏水按说明比例混匀。

3.2.4打开水浴锅, 将温度调至37℃, 将配置好的稀释液放入其中预热。

3.2.5准备好显微镜, 并将恒温载物台设定到37℃, 将载玻片放在上面预热。

3.2.6准备好电子台秤、精液密度仪或血细胞计数器、微量移液器及其配套吸头、签字笔、记号笔、记录本、盖玻片等, 称量盛放精液的烧杯的质量并记录。

3.2.7将预热好的采精杯放入保温瓶中, 到采精室采精。

4精液的品质检查

4.1将采集的精液 (用采精杯采集) 从保温瓶中取出, 将用橡皮筋套住的过滤用纱布拿开, 而后将精液轻轻地导人预热好的烧杯中。

4.2精液量 (体积) 测定以电子台秤称量精液, 按每克1 mL计, 精液量 (g) = (精子的质量+盛放精液的烧杯的质量) 一盛放精液的杯子的质量。避免以量筒等转移精液盛放容器的方法测量精液的体积。

4.3颜色正常的精液是乳白色, 呈云雾状。精子密度越高。颜色越白, 其透明度愈低。如呈灰白色或浅灰色, 则表示精液密度低, 且质量不好。如带有绿色或黄色是混有脓液或尿液, 若带有淡红色或红褐色是含有血液, 表明精液中有炎症物, 这样的精液应舍弃不用。

4.4气味一般正常精液无味或略带有腥味。如果精液带有恶臭味, 应废弃不用。

4.5pH值 (酸碱度) 以pH计或pH试纸测量。正常精液的pH值为6.8～7.8, 呈中性或弱碱性。

4.6精子活力检查检查时, 用微量移液器取精液一滴于显微镜载物台恒温加热板上已预热好的载玻片上, 盖上盖玻片, 由下至上调节显微镜物镜, 直至出现看到清晰精液。然后计算直线运动的精子占总精子的比例。4.7精子密度检查指每毫升所含的精子数的多少, 是确定精液稀释倍数、评定精液品质的重要指标。要求用血细胞计数板或精液密度仪进行测定。血细胞计数板计数方法:以微量加样器取具有代表性原精液100μL, 3%NaCl900μL, 混匀, 稀释10倍;血细胞记数室上放一盖玻片, 取1滴上述精液放入计数板槽中, 靠虹吸将精液吸入计数室内;在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数, 将该数乘以50万, 即得原精液每毫升的精子数 (即精液密度) 。精液密度仪使用参照其使用说明书。

精子密度也可采用估测法在显微镜下观察, 将精子分布情况分为密、中、稀三种。密:精子密集, 精子间距离小于一个精子距离 (每1 mL 3亿以上) ;中:精子间能容纳1～2个精子;稀:精子间距离很大, 精子间能容纳2个以上精子 (每1 mL约1亿) 。4.8精子畸形率检查畸形率即畸形精子占精子总数的百分率, 一般要求畸形率不超过15%, 要求每头公猪每两周检查一次畸形率。畸形精子种类很多, 包括巨型精子、短小精子、双头或双尾精子、顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部弯曲等。

4.9认真填写精液品质检查登记表。

5精液的稀释

5.1精液采集后应尽快稀释, 原精液放置不能超过30 min。

5.2稀释倍数的确定:活力≥0.7的精液, 一般按每个输精剂量含40亿个有效精子, 输精量为80 m L确定稀释倍数。

5.3品质检查不合格 (活力0.7以下) 的精液不能稀释。稀释时稀释液要求与精液等温, 两者温度相差不能超过1℃, 即稀释液应加热至33～37℃, 以精液温度为标准, 来调节稀释液的温度, 不能反过来操作。

5.4稀释时, 将稀释液沿温度计, 玻璃棒或盛精液的杯 (瓶) 壁缓慢加入到精液中, 然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌, 使其混合均匀。

5.5高倍稀释时, 应先进行低倍稀释 (1∶1～2) , 稍待片刻后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入。

5.6稀释后要求静置片刻再作精子活力检查。如果稀释前后精子活力一样, 即可进行分装与保存;如果活力下降, 说明稀释液的配置或稀释操作有问题, 不宜使用, 应查明原因并重新配置。

6精液的常温保存

6.1精液稀释后检查精液活力, 若无明显下降, 立刻按每头份80 mL分装入瓶, 尽量减少精液暴露于环境中的污染时间。6.2加盖密封, 在标签上写清楚公猪的品种、耳号、采精日期 (月、日、时) , 精液量、稀释倍数、储存温度, 良种补贴专用等。

6.3放置22～25℃的室温下1 h后或用多层毛巾被包好后放置17℃冰箱中, 让其温度缓慢下降, 以免因温度下降过快造成死精子数增多。

6.4保存过程中要求每12 h将精液混匀1次, 每次摇动时, 动作要轻缓均匀, 同时观察精液的色泽状态, 做好记录, 发现异常及时处理。

6.5每天检查精液保温箱的温度, 若出现停电应全面检查贮存精液质量。

注意:要尽量减少精液保存箱关开次数, 以免造成对精子的打击而导致精子死亡;

6.6每次使用前应对保存的精液进行活力检查, 活力低于0.6的精液应弃之不用。

pcr实验室操作规程 篇3

关键词：物理实验；操作规程；操作规范

中图分类号：G633.7 文献标识码：A文章编号：1003-6148(2008)1(X)-0053-3

物理是一门以观察、实验为基础的科学。实验教学既是物理知识教学的基础，也是物理课堂教学中实施素质教育的一种主要渠道和有效手段。物理实验的操作规程是从实验操作中总结出来的，是以科学理论为基础的。在实验教学中，教师只有严格按实验操作规程进行实验，才能保证实验安全顺利进行，提高实验的精确度，同时也可以防止仪器设备的损坏，从而更好的完成实验教学任务。作为一个物理教师，也只有对实验操作规程有了深刻的认识，才能熟练地运用实验技能，成功进行物理实验教学，全面落实实验教学的各项要求，并能在自己的实验操作中起到更好的示范作用。中学物理实验操作规程具体有哪些方面的要求？什么样的操作动作才符合实验规范？本文结合一些具体实例，谈谈物理实验的操作规程和动作规范。

实验操作规范包括的范围很广，既包括单项实验的操作规范或针对某种具体要求的规范，也包括实验工作的总规范和实验操作的一般规程，下面谈谈实验操作的一般规程和动作规范。

1 实验操作的一般规程

实验过程中一定要注意操作程序，实验的操作程序一般分为如下几步。

1.1 装配仪器

装配仪器是实验操作的第一步，实验前必须把仪器的各个部件装配起来。装配仪器必须做到正确、合理、完善。例如，在装配天平时，不仅要使各类部件的位置正确，而且要"对号入座"。又如，在连接电路元件时，不仅要求按一定的顺序正确连接，而且要求布局合理，以便于观察和操作。

1.2 仪器的预备性调节

仪器装配好以后，一般要进行预备性调节。例如，仪器底座的位置调节，滑动变阻器滑动臂初始位置的调节，仪表上档位选择及各种旋钮初始状态的调节，热电子仪器的预热，光具共轴的调节和各种测量仪表的零点调节等。

1.3 按照规则进行实验

当预备工作妥善完成并检查无误后，即可转入正式操作阶段，要严格按照实验的要求和仪器的使用规则进行，尤其要注意遵守防止割伤、烧伤、触电、爆炸、中毒等操作规范。

1.3.1 使用加热设备时，如乙醚、酒精、苯的加热，必须在水浴锅内进行。

1.3.2 使用电烙铁、电炉等电热器时，不能直接放在可燃物（如木板）上。

1.3.3 使用水银的实验，应防止水银蒸汽中毒。水银洒在地面上时，应立即清除处理。

1.3.4 做电路实验时，应先试通电路，眼观仪表，做好随时切断电源的准备。更换元件，必须切断电源。如果更换低压电源的保险丝，必须把接电源的插头拔去，不可因低压电源的指示灯不亮而麻痹大意。

操作中一旦出现故障，应当冷静地进行分析，有序地排除故障。尤其是电学实验，出现故障后更不可慌乱和盲目乱动。

出现故障一般可按三种思路来寻找原因：一是从分析现象入手，推测产生现象的原因。二是从假设某一部分出现故障入手，分析它可能出现的现象。三是边探索边分析缩小探寻的范围。至于如何排除故障，还得具体问题具体分析。

1.4 整理仪器

实验结束后，应按照一定的顺序拆除和整理仪器。如将变阻器等调至接入时的状态，将可调电源的输出电压调至输出最低，再断开电源。一定要养成整理好仪器再离位的良好习惯。

2 实验操作动作的规范

实验过程中要注意动作的规范。教师的动作不规范将导致学生操作的随意性，不利于对学生实验技能的培养。

2.1 使用物理天平

用左手握住止动旋纽，调节底座、横梁、放卸待测物、砝码和拨动游码都必须在止动状态下进行。需要观察天平是否平衡时，再轻轻地顺时针旋转止动旋纽。当横梁处于升起状态时，左手不可脱离止动旋纽，这样做，一方面是为了防止横梁自动落下，一方面提醒使用者在观察天平平衡之后立即把横梁放下。待测物和砝码都应当放在砝码盘的中央。

如果需要把物理天平在室内作短距离的搬动，应当把横梁放在止动架上，双手各托底座一侧，同时用大拇指压住砝码盘中央，以保证衡梁、砝码盘架不至于跌落。

2.2 使用光学元件（透镜、棱镜等）

各个光学元件都是利用其表面使光发生反射、折射的，要特别注意维护它们的表面光滑，使用时，手不可直接触及镜面，应当用手指卡住透镜的边缘和棱镜两端的毛玻璃面。镜面有灰尘等污物时，不可用普通纸和棉布擦拭，不可用嘴吹，应该用打气球去吹，也可用软毛刷试掉，若吹试不掉时，可用镜头纸和脱脂棉蘸镜头水或无水酒精作一次性清除，不可来回抹擦。实验时各个光学元件必须牢固的挂在光屏上，用后装入盒内，以防脱落或碰撞损坏。

2.3 使用温度计

使用温度计测量液体温度时，应该使温度计的玻璃泡跟被测液体充分接触，读数应在温度计液柱停止升降时进行。读数时不能使玻璃泡离开待测液体，且视线要与刻度线垂直，与液面平齐。千万别用温度计当搅棒，以免测温泡破裂。

2.4 使用酒精灯

给酒精灯加酒精时，应该在酒精灯熄灭的状态下进行。熄灭酒精灯时，不要用嘴吹，必须用灯盖盖灭。

2.5 使用静电仪器

做静电实验时，需要摩擦绝缘棒时，不要用手掌全握毛皮和丝绸，只用拇指、食指、中指适当抓住即可，起电棒要固定抓一端，摩擦时稍用力，单方向摩擦，最好带橡皮手套。不做实验时应将胶木棒用毛皮裹着放在干净的桌面上。在应用感应起电机和感应圈做实验时，要保持手干燥，不要用手触摸它们的导体部分。静电仪器不用时，应存放于干燥、密闭的橱柜中，以防灰尘落入，保持仪器表面的干燥清洁。

2.6 使用滑动变阻器

使用滑动变阻器控制电流时，应事先根据电源的电压和用电器的工作电流，估计一下所需变阻器的规格，在接通电路前，要先把滑动触头移到高阻值端，接通电源后再逐渐向低阻端移到到适当位置，以防开始时电流过大而损坏用电器和电表。

2.7 做电路实验

在连接电路时，一定要将接线连接在用电器和仪表的接线柱上，不可将导线夹在变阻器的滑杆或开关的闸刀上；也不可把若干根导线的一端，脱离用电器的接线柱而连在一起作为一个节点。电学实验完毕，应将仪器调整到最安全的状态，拆线时要先断开关，再拆电源线，以免短路。然后仪器整理、复原。

2.8 常规操作

在旋转旋纽、滑动滑臂、启动开关时，应一手扶住仪器，另一只手进行操作，以保证仪器的稳定，防止事故的发生。

总之，物理实验的基本技术和技能是实验教学中的一个重要组成部分，实验操作的动作规范是从实验操作中积累起来的宝贵经验和好习惯，对此，要引起物理教师的充分重视，在实验教学中要自觉地养成良好的习惯，用严谨的科学作风和熟练的操作技能潜移默化的影响学生，从而提高实验的精度和确保实验的成功。

参考文献：

［1］魏日升，张宪魁.中学物理教材教法与实验.北京：北京师范大学出版社，1994

［2］张璞杨.中学物理教学法.上海：华东师范大学出版社，1988

［3］王棣生.中学物理教师创新教法.北京：学苑出版社，1999

安全操作规程电力电子实验室 篇4

由于实验室设备大多为用电设备，因而由于操作不慎可能导致人身安全与设备安全受到损害。为了保证实验工作的顺利展开，为师生创造一个良好的、安全的实验环境，在本实验室操作者都必须遵守以下的安全操作规程：

一、不准穿拖鞋进入实验室，注意保持实验室的清洁卫生；

二、严格的按照仪器操作规程，正确操作仪器；

三、仪器不准频繁开、关电源开关，一次关机后应等3分钟才能再开机；

四、实验室内不准使用明火，就座后不得随意来回走动，以免触碰电源、电缆等；

五、禁止带电安装实验线路，实验电路接线完成后，需要通电时，必须告知实验指导老师，只有得到允许后，方能通电；实验通电调试时，若发现仪器设备出现故障或异常情况（如：有异味、冒烟等）时，应立即关闭电源开关，拨掉电源插头，并及时向实验指导教师报告。遇到此类情况，实验者不得擅自处理、禁止擅自更换仪器，否则后果自负；

六、实验完毕，必须关闭设备的电源、关好门窗、整理好仪器设备，并打扫卫生，得到指导老师的同意后，方能离开；

七、实验者还必须服从实验室工作人员的管理和安排及《实验室管理制度》中有关安全操作的规定；

化验室安全操作规程 篇5

1、化验室内保持地面、墙壁、窗台、衣柜等清洁干净；不准有垃圾和破旧物品；不准有卫生死角，查有一项不符，罚责任人100元。

2、化验室内物品摆放有序，不准乱堆乱放；桌面、工作台不准摆放无用的报表资料（只允许放置电脑一台，文件筐一个，电话机一部）不准存放与岗位工作无关的物品或私人用品（包括暖壶，水杯等）。查有一项不符，罚当班人100元。

3、化验室分析室、配药室、高温室、仪器室各工具使用完毕后必须放置在指定区域，如有不符考核责任人100元。

4、化验室门窗玻璃要保持清洁、完整，已损坏的要及时协调进行补装；不准有积灰、污垢；不准乱涂乱画；查有一项不符，罚责任人50元。

5、实验前后，滴定管调零时的试剂不得直接滴到实验台及地面上，每发现一次罚款50元，滴定管及各药品发现一次漏液考核责任人50元，实验完毕后及时清理实验台面，不得残留试剂、药品，否则罚责任人50元。

6、下班前，务必将本岗位所负责的环境卫生进行彻底清扫，包括实验台面、抽屉、门柜、地面、窗台、水池等，不得留有垃圾或其他杂物，否则罚交班人50元；物理组、分析组必须在实验完毕后及时对所辖的卫生进行彻底清扫，否则罚责任人员50元。

7、只允许在卫生间、水桶内淘洗墩布，不准在实验水池淘洗，不准将墩布的水滴在走廊内，否则罚责任人50元。

8、本岗位范围内的照明设施保证完好，不得损坏、丢失；不准出现长明灯、“有灯不亮，有灯口无灯泡”的现象。查有一项不符，罚责任人50元。

9、在公共使用的环境卫生区内，称样和做样完毕后，做样人必须及时清理所用的仪器设备（包括撒落在天平内的试样）及室内卫生，否则处罚50元，称样完毕后及时清理工作台面样品，不准将留样瓶，存样托盘放置在工作台面上，如有不符考核责任人50元。

10、各岗位的垃圾必须及时倒至水房垃圾桶，不准随意放在化验室角落，楼道内或其他地方，否则罚责任人50元。

11、化验室各抽屉柜子由专门责任人负责，柜子内保持清洁整齐，不准放置与工作无关的物件，抽屉内物品保持摆放整齐，抽屉外标明放置物品，不准放置与标识牌不符的物品，以上如有不符考核责任人100元。

12、化验室各科室严禁吸烟，如有违反考核责任人500元，发现烟头无人认领考核所有吸烟者500元。

13、化验室文件筐标识必须清晰明确，如有模糊不清或放置文件与标识不符考核责任人100元。

14、化验室各室花卉由专人管理负责，如有管理不善考核责任人50元。

16、化验室各科室需要现场取样，必须佩带劳动防护用品，如有违反考核责任人50元。

17、各组人员做样期间必须按照作业指导书正确操作，接触酸碱或其它有害物质时必须佩带橡胶手套，如有违反考核责任人50元。

18电气或其它特种作业时必须联系电气当班人员进行操作，擅自处理着考核50元。

化验室安全生产职责

制定岗位安全生产责任制是确保安全生产的重要措施。岗位安全生产责任制主要阐述岗位员工负有的主要安全生产职责和应承担的相应责任，在生产过程中，做好三不伤害（即：不伤害自己、不伤害他人、不被他人伤害）。

1、岗位工安全生产职责

1.1牢记“安全第一，预防为主”的思想，自觉遵守公司各项规章制度和操作规程，不违章作业，并随时制止他人违章作业。

1.2积极参加各种安全生产活动，主动提出改进安全工作的意见，认真检查本岗位的机器、设备、工具及其它安全防护装置，确保安全可靠。

1.3正确使用和维护个人的劳保用品，发生事故时保护好现场，并及时报告上级。

1.4值班人员每日进行消防安全巡查，并做好班组在交接班时的记录。1.5值班人员每日检查劳保用品的使用情况，生产过程中安全隐患整改情况，各种设备的安全装置、防护设施配备情况，消防设施、设备完好情况。

1.6对于用火用电、易燃易爆品、消防器材等管理必须严格按照《消防安全管理制度》所规定的进行操作。

1.7兼职安全消防员定期或不定期进行消防安全检查，并做好记录。

2、对违反消防安全操作的处罚办法

2.1岗位工在交接班时，接班员工必须穿戴好必需的安全防护用品，没有安全防护用品的不允许上岗，未按规定执行，对当事人罚款100元，所在班组负责人罚款50元。

2.2所有人员进入车间、到生产现场必须戴安全帽及必须的劳动保护用品，不准穿高跟鞋、凉鞋、裙子，长发必须盘起放入帽中，不准围围脖、穿大衣上岗，工作服必须系好扣子，不得穿破损工作服，未按规定执行，对当事人罚款100元，对负责人罚款50元。

2.3任何岗位人员不得酒后上岗，发现酒后上岗者，除对当事人罚款100元外，所在班组负责人罚款50元；累计两次酒后上岗者，除了兑现罚款外，并立即退回质技部。

2.4严禁挪用、破坏安全防护设施及灭火器材，对当事人罚款100元，所在班组负责人罚款50元。

2.5对于仪器、设备的操作，未按《化验室岗位作业指导书》和《化验室安全操作规程》上所规定的要求进行操作，每发现一次罚款100元，所在班组负责人罚款50元；凡累计两次违规操作，除了加倍罚款外，并立即退回质技部。

2.6化验室发生一起轻伤事故或火灾事故，撤销班组长职务或降级使用，将事故直接责任人退回质技部。

2.7完成化验室全年安全目标，按《安全生产责任状》的相关规定予以奖励。

化验室安全操作规程

1、安全规程总则：各岗位员工必须经过岗前安全培训并经考试合格后方可上岗，各岗位员工必须熟悉本岗位各设备性能及操作规程等技术性要求，不得违反作业指导书进行操作。非专业人员严禁操作和修理仪器设备；非电气岗位人员不得从事电气作业。对于新上岗员工的培训将以师带徒或公司集中培训的两种培训方式进行培训，培训时必须有详细的培训记录，新员工必须经公司或化验室考核合格后方可单独上岗。无论什么情况下，岗位员工都应树立“安全第一”思想。

2、安全规程细则

2.1化验室各个岗位必须保持整齐、清洁、所用的仪器必须洁净不得有残留物，在清洗玻璃仪器时，必须做好保护工作以免被割伤。

2.2化验室内禁止吸烟及吃东西，不准用试验器皿做茶具和餐具，不得用嘴尝味道的方法来鉴别未知物，离开化学分析室后应立即洗手。

2.3进入生产现场的人员，必须注意各种危险警示牌，并懂得安全色和安全标志所表达安全信息的含义，不得有轻视和忽视危险警示牌所表达的指示。

2.4在岗员工必须穿戴好必需的安全防护用品，不准穿高跟鞋、凉鞋、裙子，不准穿戴丝巾等装饰服饰，有长发者必须盘起放入帽中。

2.5在岗员工在取样和制样的过程中，必须严格按照相关的操作规程进行操作，不允许有任何违反操作规程的行为；对于取样场所的照明和安全设施的完好情况必须及时通报各班组长，以便对于存在的问题，班组长能够及时联系相关工段人员进行维修处理。

2.6在岗员工在操作仪器设备时必须严格按照作业指导书和相应的操作规程所规定的要求进行操作，不得违反作业指导书和操作规程进行操作。

2.7禁止任何与检验无关的人员靠近和接触仪器设备，不经过允许不得进入各检验岗位进行学习等其他的行为活动。

2.8任何岗位人员不得酒后上岗，不得有睡岗行为，任何人不得在工作场所打闹、嬉戏，若违反此项规定将按公司的相应规定进行处罚。2.9日常检验工作中，除必须的检验工具外，操作平台、地面不得乱堆乱放杂物，地面保持清洁无积水、无残留药品，做到随时使用随时清理，以防将人员绊倒、滑倒以及被药品烧伤。

2.10使用手推车、三轮车、自行车时，必须慢行并注意来往人员、车辆及障碍物。

2.11严禁挪用、破坏安全防护设施及消防器材，对安全防护设施及消防设施要定期检查，发现问题及时处理，若有挪用、破坏安全防护设施及消防器材的人员和行为将按照公司的消防安全的相关规定进行处罚。

2.12各个岗位的门、窗、用水及用电等设施必须保持完好，发现有损坏的，必须在损坏的当天及时联系相关人员进行修复，不得拖延。

2.13对于高温设备在使用时不得与易燃、易爆、精密仪器等物品在同室操作，对于具有腐蚀性的物质不得直接放到高温设备以及由金属制成的设备内，使用时必须做到人在时方可起用高温设备，无人时应停用高温设备。

2.14从高温设备内取出的高温物体，必须先放在石棉网或瓷盘等耐火材料上冷却，不得与易燃、易爆的物体接触，需称量的坩埚待稍冷后方可移到干燥器中冷却，而后才可以进行称量工作。

2.15校验仪器设备时必须严格按照相关的仪器设备的校定规程进行操作，不得违反仪器设备的校定规程。

2.16各在岗员工对于本岗所使用的仪器设备发生故障后，必须及时联系相关人员进行处理，不得擅自进行处理。

2.17化学试剂的选用和使用必须根据化验室具体的使用情况进行选用和使用，药品的使用必须做到现用现领的原则，使用时必须有详细的记录。

3、急救与事故处理

3.1身上或手上沾有氢氟酸时，应立即用水或碳酸氢钠溶液冲洗，再用甘油和氧化镁混合药剂2:1涂抹后包扎好；若疼痛时应立即用饱和硼砂溶液或水与乙醇的混合溶液浸泡，并去医务室进一步处理，以免其腐蚀皮肤，造成严重灼伤，并引起溃烂。

3.2如果中毒是由于吸入毒性蒸汽或气体，应立即将中毒者移开现场，移至通风良好的环境，使中毒者呼吸新鲜空气，或给予氧气，或令其喝兴奋剂，如浓茶、咖啡等。如果中毒是由于食入毒物，首先要立即饮大量温水洗胃，采用舌根刺激的方法，直至呕吐物中基本无毒物存在，再服解毒剂（生蛋清液、牛奶、淀粉糊、桔子汁）。

3.3当眼睛里溅入大量的腐蚀性药品时，应立即用大量流水冲洗，但注意水压不要太大，以免眼球受伤，待药物充分洗净后再到医务室就医。

3.4当眼睛里进入碎玻璃或其他固体异物时应闭上眼睛不要转动，立即到医务室就医，绝对不要用手揉眼睛，以免引起更严重的擦伤。

3.5浓酸或浓碱洒在衣服或皮肤上时应立即用大量水冲洗，并将烧伤的衣服尽快脱下，继续用大量水冲洗，再分别用碳酸氢钠溶液（2g/100ml）或乙酸溶液（3%—4% v/v）轻轻擦洗，必要时去医务室就医。

3.6火烫伤使皮肤发红时，要用酒精棉花涂擦或浸在冷水里，至不觉疼痛为止，起泡时应用红汞或4%高锰酸钾涂抹，不要弄破水泡。

3.7在高温环境下，大量出汗、口渴、头晕、耳鸣、胸闷、恶心、四肢无力、注意力不集中，体温略有升高等都是中暑现象。抢救措施：对于先兆及轻度中暑人员，应立即离开高温作业现场，到阴凉通风处休息，并饮用清凉饮料；对于重度中暑人员应迅速采取降低体温措施，尽快送医院抢救。

3.8人体触电时应立即切断电源，或用非导体将电线从触电者身上移开，如有休克现象，应将触电者移到空气新鲜处立即进行人工呼吸，并请医务人员到现场抢救。

3.9对于用火用电、易燃易爆品、消防器材等管理必须严格按照《消防安全管理制度》所规定的进行操作。

3.10对已发生事故(含未遂事故)的检查和处理必须严格按照《消防安全管理制度》所规定的进行操作。

检验复验制度

1、各检验岗位人员负责异常数据和质量控制临界指标值的通报和复验工作。

2、组长负责复验数据的整理工作，同时向质量管理人员进行汇报。

3、物检组长师负责与上级质检机构进行出厂水泥复验的联系工作。

4、质量控制中检验异常数据和临界指标值的复验

4.1控制组简分人员在试验中出现异常数据或临界指标值时，及时把情况汇报给当班质量调度，并立即进行复验，复验结果记录在当班原始检验记录的备注一栏中。

4.2分析、物理检验人员在检验过程中出现异常数据或质量指标临界值时，及时汇报组长，由组长安排进行复验，并把情况汇报给质量管理人员,复验结果分别记录在相关的内部试验台帐上。

4.3质量管理人员发现异常数据，及时与质量调度或组长联系，安排岗位人员进行复验。

4.4复验结果如不超出允许误差值，以第一次试验数据为主，否则进行再次复验，取两次相近试验数据平均值报出。

4.5对同一样品两次检验结果超出重复性试验允许误差值，按奖金考核条例进行扣罚。

4.6对同一样品两次制备检验结果超出原结果的10%，按试验超差处理。

5、出厂水泥质量指标复验

5.1某编号水泥出厂后，用户对质量提出异议时，为了进一步核准该编号的质量指标，用该编号水泥的封存样品进行复验。

5.2当用户要求现场取样时，化验室派人与用户共同在现场取样三份，其中两份由用户和化验室带回各自实验室进行检验，第三份封存后共同送省级以上水泥质量监督检验机构进行复验。5.3复验结果以一次为准。

水泥抗压、抗折夹具管理规定

1、物理组组长负责向物资供应部提供水泥抗压、抗折夹具的采购计划，组织夹具的检定和试验对比工作。负责水泥强度标准样品的制备工作。

2、物理组长负责新购入夹具的检定，定期组织物检人员进行夹具的强度对比试验。

3、物理组每年初根据夹具使用情况，向物资供应部提供水泥抗压、抗折夹具的自购计划，在自购计划中要注明夹具生产厂家，主要技术指标。从而保证夹具使用的统一性，以及检验数据的一致性。

4、新购入的夹具，由物理组按编号进行新夹具与标准夹具的28天强度对比试验，样品采用“水泥强度对比标准样品（P.I52.5水泥）”，每个夹具强度对比数据不能少于4组，样品对比结果填写在《水泥抗压、抗折夹具强度对比台帐》中。

5、使用中的抗压、抗折夹具，每六个月进行一次与标准夹具的强度对比试验，成型时间安排在第五个月1—3日进行，样品采用“水泥强度对比标准样品（P.I52.5水泥）”，每次对比数据不能少于8组，并与当日完成成型。当28天抗压强度对比相对误差达到2%时，由物理组长选择更换新夹具的编号，并负责填写《更换新夹具的申请报告》，在报告中要对新旧夹具的强度值进行说明，经化验室主任批准后方可使用新夹具。

6、物理组长建立夹具管理档案，内容包括：夹具出厂检定合格证、《更换新夹具的申请报告》，夹具管理档案要长期保存。

中小学实验室安全要求及操作规程 篇6

教学目标

知识目标：了解实验室安全知识及注意事项。能力目标：掌握实验室安全知识及防护应对措施。

情感、态度、价值观：加强学生对实验室安全的重视，保证自身在实验过程中的安全。培养良好的实验习惯。教学重点:实验室安全注意事项。

教学难点：掌握实验室安全知识及防护应对措施。教学方法：讲授法、提问法、归纳法 教学过程：

一、例举案例，提出警示

南方某学校的实验室发生了一次气爆事故。

南方某学校发生了一起在上实验课时，一名女生因触到浓硫酸导致手部被严重烧伤的事故。

情景案例：误服甲醇事故

二、引入新课

提问 ：实验室安全应注意哪些方面？ 学生回答后师明确。

三、讲授新课

中小学实验室是保证实施教学大纲，培养学生初步的科学实验能力、生产试验技能和开展科技活动的场所，也就是说实验室是培养人的场所。同时，学校实验室又是再现各种自然现象，探索自然规律的场所，在仪器室中或在师生做实验时存在着各种各样不安全因素，因此，教学仪器无论在存放或使用过程中，都要十分重视安全防护工作，确保受教育者人身和国家财产安全。实验室可能发生的事故有：触电、着火、爆炸、中毒、割伤和烧伤、失窃等。我们要对可能发生的事故有高度警惕，加强学生对实验室安全的重视，保证自身在实验过程中的安全。

1．以防护为主，确保实验安全

确保实验室安全是为了育人，育人必须安全。在实验室管理过程中时时、处处、事事都要把安全放在首位。以预防为主，要把握实验室管理过程中的各个环节，做好预防工作，把故事的隐患消除在过程进行之前。实验室要配齐安全用品，要加强在实验过程中的安全教育，使参与实验的师生，人人都能提高警惕。准备实验时要准备防护及保险措施，实验装置要牢固，放稳妥；实验时要严格遵守操作规程，学生实验必须在教师指导下进行，在化学实验中严禁学生随意混合化学药品，以免发生意外，并仔细审察不安全因素，消除隐患。

2、注意防火

实验室为什么要注意防火？ 防火有哪些应对措施？

3、防中毒

实验室存放有部分由腐蚀性和毒性的药品，实验室防毒的方法有哪些？

4、防触电

（1）怎样安全做好电学实验？（2）确保用电安全

实验室教学仪器的存放和使用过程中离不开电，确保用电安全是实验室安全管理的重要任务之一。实验室要设总配电盘。装设漏电保安器，离开实验室时要将总电曾断开。任课教师要严格控制学生实验用电，尽量使用36伏以下的安全电压。实验室供电线路的布设电线截面积和保险丝的选用，要符合安全供电标准，供电线要定期检修和更换。安装电器设备要做到电流、电压、安六与用电器的标称值匹配。一般情况下（除有特殊注记者外）用电器都应接地，并经常检查接地是否良好。清洁大扫除时，不能弄湿电源线，不能用潮湿的手触摸正在工作的电器设备。电线或电器盒盖破损要及时修复，以免高压导线裸露伤人。检修电源线和用电器时必须切断电源，切忌带电操作，所有电工工具应有绝缘良好的手柄等等。

5、防烧烫伤

实验室中大量浓酸、浓碱试剂都有腐蚀性，浓酸、浓碱溶液一旦不小心沾到衣服和皮肤上，对人的损害很大，那么在实验室进行这些实验操作时该注意些什么？

6．定期检查实验室消防设施

实验室的消防设施，如沙箱、沙代、灭火器、消防水管、桶等都要定点布设，做到使用方便。开学时要全面检查所有消防设施，发现问题，及时处理。泡沫灭火器的药液要定期（一般一年一次）更换，以免失效。

四、师生共同总结

实验室应做好防火、防爆、防触电、防中毒、防创伤等工作，要配备灭火机、砂箱等消防设施及化学实验防护和急救器材。

防火、防中毒、防触电应对措施及防烧烫伤注意事项。

实验室是进行实验教学和学生实验操作的场所，必须保持安静、整洁。学生进入实验室后应按指定位置就座，不得大声喧哗及自行摆弄仪器装置。

学生在实验课前，应认真预习实验内容，上课时认真听教师讲解实验目的、要求、步骤及注意事项。

实验前，学生应对实验所需的仪器、药品、器材进行认真清点，发现问题及时报告教师。各组仪器未经教师许可，不得随意移动。共用仪器，用后立即放回原处。

实验时，学生应以严谨的科学态度，在教师的指导下规范操作，细心观察实验现象，如实做好实验记录。积极思考，认真分析实验结果，按要求写好实验报告。

严格遵循实验安全操作规程，爱护仪器设备，爱惜药品和实验材料。学生在实验中出现意外事故或损坏仪器应及时向教师报告。凡因不按操作规程进行实验而造成仪器损坏和药品浪费，均应照价赔偿。

增强环保意识，废液、废纸、火柴梗等杂物不得倒入水槽中或随地乱抛，应分别倒入指定的废液缸或垃圾箱内，保持实验场所的清洁卫生。

实验完毕，学生应整理仪器装置，关闭电源、水源。玻璃器皿清洗后放回原位。填写好《学生分组实验记录》，并经教师检查无误后方可离开实验室。

五、本课小结： 牢记实验室安全口诀。

六、作业

今天你收获了什么知识？在以后的实验中你知道如何正确操作了吗？ 板书设计：

注意防火 防中毒

防触电 防烧烫伤

实验室安全

牢记安全知识

pcr实验室操作规程 篇7

近年来分子生物学的发展突飞猛进,特别是聚合酶链式反应(PCR)技术的问世,推动分子生物学的各个领域向纵深发展[1]。基于PCR技术的现代分子生物学操作在中药鉴定中得到应用,以其独具的准确性和可靠性,弥补了传统中药鉴定中的许多不足,展现出其他方法难以比拟的优势。

本文以PCR技术为切入点,着重介绍目前在中药鉴定中运用较多的几种分子生物学操作技术,希望能够抛砖引玉,合众人之力增加中药鉴定中的现代元素,推动中药鉴定方法的改进与革新。

1 PCR技术概述

PCR技术由美国Karray等学者于1985年首创,并由美国Cetus公司开发研制。PCR技术原理是根据已知DNA片段序列,人工合成与该DNA两条链末端互补的寡核苷酸引物,在酶促作用下将待检DNA序列进行体外扩增。

PCR反应体系基本成分包括模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的体内复制过程,PCR反应的特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:(1)变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,双链DNA解离为单链;(2)退火:模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;(3)延伸:DNA模板与引物的结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对原则,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复上述反应步骤,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。如此循环往复,在短短的几个小时的时间里,模版DNA链便可被扩增几百万倍。

PCR技术使人们能够在体外进行DNA的复制,它的意义在于DNA是遗传密码的载体,具有相对的遗传稳定性,每种生物都有其固定的遗传密码。只要得到某种物质的微量细胞并将其细胞内的遗传物质提取出来,再通过PCR技术将其扩增,就会准确无误地判断该物质,进而判断该物种。PCR技术以其独具的可靠性和准确性,在中药材基原鉴定和真伪鉴别方面拥有广阔的应用空间。

2 基于PCR技术的现代分子生物学技术

PCR技术是现代分子生物学的基石,该项技术的问世具有划时代的意义。以PCR技术为基础,分子生物学领域衍生出多种新的实验操作技术,在生命科学的各个领域均得到广泛的应用。本文仅对应用于中药鉴定过程的几种操作技术进行介绍。

2.1 RAPD技术

RAPD即随机扩增多态性DNA,该技术建立在PCR技术基础之上,可对整个未知序列的基因进行多态性分析操作。RAPD技术以基因组DNA为模板,以单个人工合成的随机多态核苷酸序列为引物,在热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)作用下,进行PCR扩增。扩增产物经电泳、染色后,在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。

目前,RAPD技术已应用于中药材的种质鉴定及伪品鉴别等方面。徐鹏等[2]运用RAPD技术对广西钩藤属药用植物进行遗传多态性分析,获得多态性条带231条,多态率达到88.9%。结果表明,3种广西钩藤属药用植物的聚类结果与其地理分布一致,所得RAPD标记可用于钩藤属药用植物的多态性研究;李雄英等[3]运用RAPD技术对绞股蓝及其伪品进行DNA指纹图谱的鉴别研究,实验结果证实该技术可有效地鉴别绞股蓝及其伪品乌蔹莓。

2.2 ISSR-PCR技术

简单序列重复区间(inter-simple sequence repeats,IS-SR)是近年来发展起来的一类新型的分子标记技术,具有多态性高和重复性好等优点,已广泛用于药用植物的鉴定和遗传多样性研究[4]。柴素芬等[5]以象头山芸香科植物为研究对象,从DNA提取、退火温度、循环次数、引物筛选等方面研究ISSR反应及优化条件,建立和优化芸香科药用植物的ISSR反应体系。结果表明,ISSR技术适合于芸香科药用植物的品种鉴定,同时可为芸香科药用植物的资源评价提供依据。

2.3 PCR扩增的特定片段的限制性位点分析

限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)利用放射性标记的探针,通过杂交显示特定的基因组DNA酶切片段,从而构建多态性的DNA图谱。它代表的是基因组DNA在限制性内切酶消化后产生的片段在长度上的差异。

PCR-RFLP技术综合RFLP技术与PCR技术二者的优势,用特异性的引物先对模板DNA进行扩增,获得特异性的扩增产物,之后利用多种不同的限制性内切酶对扩增产物进行酶解,构建物理图谱,分析限制性位点在分类群中的差异。该方法准确可靠,重复性好,在中药鉴定研究中有一定的应用报道。吴平等[6]从5种海马干标本中提取DNA,利用PCR技术扩增12SrRNA和细胞色素b基因片段,对扩增产物进行RFLP分析。实验结果证实,采用PCR-RFLP技术可鉴别出其中的两种海马。

2.4 mRNA差异显示技术

mRNA差异显示技术通过将总RNA反转录成单链cDNA,然后进行PCR扩增,由此分离出不同分子大小的DNA,选择有差异表达的基因进行序列分析。该技术具有快速、多功能、所需RNA量少和重复性高等优点而被广泛用于分离克隆真核生物差异表达的基因[7]。目前,该技术在药学领域中的应用仅处于起步状态,借助该技术可以将栽培品种与野生种、道地药材与普通药材之间的差异鉴别出来。因此,mRNA差异显示技术在中药材的质量鉴定方面将拥有广阔的应用空间。

2.5 基因测序

基因测序是对药材特定的基因片段进行精确的DNA序列分析,并加以比较,从而达到鉴别药材的目的。常用的基因片段包括线粒体细胞色素基因和rRNA基因等。用于基因测序的基因在种内高度保守,而在种间序列的差异较大,适用于中药材种间的鉴定。

徐丽等[8]从冬虫夏草与其他品系虫草及其混淆品虫草中提取DNA,对核糖体基因(rDNA)进行测序,设计18S基因特异性引物进行扩增,扩增产物经纯化后,直接测序。结果表明,冬虫夏草与西藏白草、西藏黑草、无头草、默勒草的18 S序列相似度为100%;与亚香棒、北虫草的18S序列相似度分别为91.37%和91.74%。由此可见,18S序列可有效地鉴别冬虫夏草及其混淆品北虫草和亚香棒虫草。此外,基因测序技术也被报道应用于三七[9]及其伪品的遗传背景差异分析、巴戟天[10]道地性研究及半夏[11]的基原鉴别。

2.6 基因芯片

基因芯片又称DNA芯片,是专门用于核酸检测的生物芯片。基因芯片的主要技术流程为:芯片的制备→样品的制备→杂交反应→芯片信号的检测与分析→芯片数据的统计分析和生物学分析。即在固相载体上按照特定的排列方式固定大量序列已知的DNA片段,将样品基因组DNA或RNA经过PCR或RT-PCR扩增等技术掺入标记分子后,与已知序列杂交,通过荧光检测系统对芯片进行扫描,检测杂交信号强度,利用计算机软件进行数据分析后,即可获得样品中大量的基因序列特征或基因表达特征信息。基因芯片技术可为植物种属的验证与质量控制提供一种快速、高质量的检测工具。杨忠等[12]利用基因芯片技术对多种贝母根茎的基因组DNA进行操作,结果显示不同贝母种属可在芯片不同位置检测到荧光信号,从而提供了一种快速高效的集基因分型与中药鉴别于一体的方法。

3 展望

与传统的中药鉴别方法相比,基于PCR技术的分子生物学鉴定技术具有准确性高、重现性好、稳定、可靠的优点。利用现代化分析技术可准确鉴别中药的真伪,从而完善中药质量评价体系,保证中药安全、有效、可控。目前,最重要的是要充分了解各项技术的优势,以便取长补短、综合利用,满足市场对药材准确鉴定的需求。

摘要：全文着重介绍了以聚合酶链式反应(PCR)技术为支撑的现代分子生物学技术,包括随机扩增多态性DNA(RAPD)技术、ISSR-PCR技术、PCR-RFLP技术、mRNA差异显示技术、基因测序技术及基因芯片技术在中药鉴定中的应用,指出现代分子生物学技术的蓬勃兴起将极大地推动中药鉴定的发展。

绿色食品平菇生产技术操作规程 篇8

一、生产环境条件

1.产地环境条件

应符合绿色食品环境NY/T391的要求

2.生产条件

根据平菇生长期和对温湿度的要求，选择春季栽培。

3.原料使用条件

平菇生产使用的原料应符合绿色食品原料NY/T393、NY/T394的要求，在原料中不应检出违禁物质和残留超标。

二、平菇棚的建造

根据平菇正常生长发育的基本条件，我县多选择建造棚室作菇房，采用一场两用，即是菌丝培养室又是子实体生长发育的出菇室。

菇房采用百叶窗式，棚高3.0m，棚内培养架可用木杆、竹杆分.层搭设，一般架高18m～2.0m，宽0.6m，底层距地面0.2m，层架间.距03m～0.4m，以设七层为宜，中间留0.8m走道。

三、平菇生产工艺流程

平菇生产采用发酵料栽培、生产工艺流程如下：

发酵料的配制→建堆发酵→装袋→接种→培养→出菇管理→采收

1.发酵料配制

发酵料要求新鲜、无虫、无毒和无杂质。发酵料配方：木屑50％、玉米芯(粉碎)47％、石膏2％、过磷酸钙1％。

2.建堆发酵

将要发酵的原料按配方配制，加水拌匀，堆积在水泥地面上，堆高1m～1.5m，堆宽lm。用温度计插入料堆内40cm处测料温。当料温上升到60～65℃时，保持12～24h，立即打开翻堆，下倒上，里倒外，再堆积发酵，达到上述温度后，再翻两次料堆。当培养料呈棕色，颜色一致，有浓香酒糟味，料内有一定量的“白线菌”时，说明发酵完毕，即可散堆降温，调节料内含水量达到60％～65％，pH值为7.5～8.5，即可装袋。

3.菇房消毒

菇房消毒要求在接种法菌前7d进行，菇房外环境主要做好场地清洁消毒工作，清除垃圾杂物，清理水沟，并保持环境清洁，以减少污染源。菇房内每立方米用40％甲醛17mL和98％高锰酸钾晶体14g混合产生气体消毒，密闭8h。地面抛撒石灰，改变地表酸碱度，抑制杂菌生长。

4.装袋，播种

(1)菇袋的规格

采用20em宽聚乙烯或聚丙烯筒料装袋，将筒料裁40cm～45cm长，一端扎紧。

(2)装袋、播种

当培养料发酵完毕，料温降至30℃以下时即可进行装袋、接种。先将菇袋底部放一层菌种，厚约2cm，然后装入发酵料，最后用菌种封住，扎口。摆放在床架上。床架南北排列，床床架之间留60era宽的走道。上下层床面相距50cm，下层距地面20cm，床面宽不超过60ca。

5.发菌期的管理

菌丝体生长发育阶段的管理，主要是调温、保湿和防止杂菌污染。为了防止杂菌污染，播种后10d之内，棚温要控制在15℃以下。播种后两天，菌种开始萌发并逐渐向四周生长，培养温度控制在20～24％，空气相对湿度65％～70％，通风避光。为使菌丝生长旺盛，加大通气，可在菌袋菌种层扎眼通气。播种20～30d后菌丝就长满整个培养料。

6.出菇管理

当菌丝全部长满菌袋后，每天在气温最低时放风1h后盖好，这样可加大料面温差，促使子实体形成。根据湿度进行喷水，使棚内湿度调至80％以上。达到生理成熟的菌丝体，遇到事宜的温度、湿度、空气和光线，就扭结成很多灰白色小米粒状的菌霍堆。这时可向空间喷雾，将室内空气相对湿度保持在85％左右，一般每天喷水2～3次，切勿向料面上喷水，以免影響菌蕾发育，造成幼菇死亡。温度控制在18～22℃，加强通风，增加菇棚内的散射光。待菇蕾长大后方可直接向菇体喷水。

7.采收

(1)采收标准

当平菇菌盖基本展开，颜色由深灰色变为淡灰色或灰白色，孢子即将弹射时，是平菇的最适收获期。这时采收的平菇，菇体肥厚，产量高且味道美。采收方法，用刀子在菌柄基部紧贴料面处割下。采大朵留小朵，一般情况下，播种一次可采收4～5潮菇。

(2)采收后处理

平菇采收后，先处理料面，将菇根、残菇及死菇、烂菇去净，室内停水1～2d，相对湿度达80％，温度20～24℃，以利菌丝恢复，按前述方法管理，可采4～5潮菇。

8.贮存